CN104971299B - 抗肿瘤中药组合物、其制备和应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种抗肿瘤中药组合物、其制备方法和药物应用。本发明的中药组合物所采用的中药成分包括：丹参、丹皮、牛七、川弓、刺五加、黄芩、莪术、人工牛黄、藏红花、桃仁、薏米仁、柠果、元参、龟板、海马、鸡内金、紫河车、蛇床子。本发明中药组合物的制备方法可以是通过水、乙醇在pH3‑7、温度5‑100℃的条件下分别提取上述中药成分，再经过浓缩法制备成浓缩药液或干药粉。本发明中药组合物具有显著的抗肿瘤活性，对人无显著毒副作用，可以应用于制备预防或抗肿瘤的药物。

Description

抗肿瘤中药组合物、其制备和应用

技术领域

本发明涉及一种高效、低副作用的抗肿瘤中药组合物、其制备方法和其在抗肿瘤方面的用途。

背景技术

肿瘤是机体在各种致癌因素作用下，局部组织的某一个细胞在基因水平上失去对其生长的正常调控，导致其克隆性异常增生而形成的异常病变。医学界一般将肿瘤分为良性和恶性两大类，其中恶性肿瘤又称为癌症，可发生在身体的大多数组织器官，其主要临床特征是生长迅速，对组织的浸润性强，可转移到身体其他部位，还会产生有害物质，破坏正常器官组织结构，使机体功能失调，严重地威胁患者生命。

世卫组织最新数据显示，到2020年前，全球癌症发病率将增加50%，即每年将新增1500万癌症患者。不仅如此，癌症的死亡人数也在全球迅猛上升，2007年全球共有760万人死于癌症，2030年这个数字可能会增至1320万。而且，全球20%的新发癌症病人在中国，24%的癌症死亡病人在中国。目前我国每死亡5人，即有1人死于癌症，而在0～64岁人口中，每死亡4人，即有1人死于癌症。在《2012中国肿瘤登记年报》中显示，我国每分钟就有6人被确诊为癌症患者，依此计算，我国每天就有8000多人被确诊为癌症，因而每年多达三百多万新增癌症病人。

目前尚未有特别有效的抗癌药物，能有效改善癌症患者症状的抗肿瘤药物数量太少，而且需要长期使用，相对于庞大的癌症患者数量，目前可选的抗癌药物不多，并且价格昂贵，使大量癌症患者无法得到有效治疗。

西医治疗癌症进展

近年来西医西药对癌症的治疗出现靶向药物和免疫细胞治疗法。“靶向药物”的意思是指这种药物可以分清“敌”、“我”，只针对癌细胞，不损害健康细胞。正是因为靶向杀伤或抑制癌细胞而极少伤害正常细胞的靶向治疗，该技术已经成为研究癌症治疗新技术的重要方向。

“靶向药物”按其作用的标靶不同又可分为以下几种：（1）基因治疗和病毒治疗：早在2004年，全世界就有1020多个方案进入临床，63.4％用于癌症的治疗。主要是用复制缺陷型载体转运抗血管生成因子、抑癌基因、前药活化基因以及免疫刺激基因。其中以腺病毒携带P53临床进展最为迅速，全球至少有5个方案进入Ⅲ期临床试验。但是，肿瘤基因治疗仍存在很多障碍，主要问题是载体不能特异性靶向肿瘤细胞，治疗基因在肿瘤细胞中高效表达低不足以消灭肿瘤，以及病毒载体外壳的改变等。（2）抗体治疗：近年，治疗肿瘤的抗体药物研究取得了突破性进展。目前国际上已有500多种抗体用于诊断与治疗，美国FDA已批准18个抗体上市，其中8个用于肿瘤治疗的靶向抗体，例如，治疗淋巴瘤的抗体Rituxan已治疗了30多万病人，用于一线治疗总反应率为60％～75％，其疗效与化疗相同；联合化疗有效率高达80％以上，完全缓解率达40％～63％；针对血管内皮生长因子的抗体Avastin使晚期结肠癌患者的生存期平均延长了5个月，目前美国95％结肠癌病人使用该药。但是，目前抗体治疗实体瘤仍存在着3个难题：抗体难以穿透实体肿瘤的细胞，因此治疗大体积实体肿瘤的疗效仍不理想；生产成本及价格均非常昂贵；只能针对肿瘤细胞某个特异性受体，治疗中需要为抗体标上同位素或毒素，但副作用也随之增加。（3）信号传导途径治疗：肿瘤的发生、发展与细胞增殖、凋亡等信号传导通路中某一个环节密切相关。信号传导最重要的分子之一是蛋白质酪氨酸激酶，针对后者开发靶向药物成了抗癌药物的研究热点之一。目前已被美国FDA批准的小分子STI－571（Gleevec或Glivec）可特异性杀死肿瘤细胞。在过去的15年中，人们发现了多个可以穿入活细胞的小肽，用这些小肽携带外源物质进入细胞，效率非常之高。但是，目前这些方法还处于初步实验，还有很多问题需要解决，如穿膜肽并非可以穿入所有细胞，其穿入机制也不明确，诱发免疫反应会干扰它在体内的疗效等。（4）RNA干扰技术：RNA干扰（RNAinterference，RNAi）是一种由短的双链RNA诱发的mRNA降解。这种现象发生在转录后水平，又称为转录后基因沉默。RNAi只降解与之序列相应的单个内源基因的mRNA，具有很高的特异性与效率。接受了小干扰RNA基因药物治疗的移植瘤模型，可同时提高对化疗药物的敏感性。但是，RNAi的治疗技术迄今没有获得广泛应用，主要问题是RNAi不容易导入肿瘤组织，在体内的半衰期也比较短。（5）小分子靶向药物：以蛋白酪氨酸激酶为靶点的新药研发进展迅速。此激酶可催化ATP中γ-磷酸基转移到多种蛋白质的酪氨酸残基上，这在细胞生长、增殖和分化进程中具有重要作用。Herceptin^TM（Genentech与Roche公司）是以酪氨酸激酶受体HER2/neu为靶点的人源化单克隆抗体,与多种化疗药物有相加或协同效应。Gleevec^TM（瑞士Novatis公司）是针对酪氨酸激酶BcrAbl的一种特异性抑制剂。对治疗慢性髓样白血病具有非常好的疗效，已被ＦＤＡ批准提前上市，用于治疗费城染色体呈阳性的慢性髓样白血病患者。Iressa（AstraZeneca公司）是针对EGFR酪氨酸激酶的可口服的小分子抑制剂。2003年5月ＦＤＡ批准用于经含铂类或紫杉类方案化疗失败的晚期非小细胞肺癌，是第1个用于实体瘤治疗的针对特定靶点的小分子酪氨酸激酶抑制剂。但是，小分子靶向药物通常具有较大的毒副作用，而且存在明显的个体差异，因而大部分小分子靶向药物均在试验性治疗阶段。（6）病毒载体靶向治疗：近年研究发现，有几种细胞可以携带病毒载体进行系统给药治疗。这些细胞包括巨噬细胞、T细胞、NK细胞、异体肿瘤细胞以及目前研究最热的干细胞等。这些肿瘤趋化细胞可以感应肿瘤微环境发出的信号，具有追踪肿瘤、传递基因的作用，但仍需要更深入地研究。与传统方法相比，应用干细胞治疗疾病具有毒性低、一次用药有效、不需要完全了解疾病发病的确切机理等优点。但是，由于间充质干细胞主要来源于骨髓，在放化疗后的病人难以大量扩增这类细胞。

免疫细胞疗法是向肿瘤患者输入具有抗肿瘤活性的免疫细胞，直接杀伤肿瘤或激发机体抗肿瘤免疫反应，从而达到治疗效果的生物疗法。其操作包括细胞在体外的传代、扩增、修饰、筛选及经药物或其他能改变细胞生物学行为的处理；经体外操作后的体细胞可用于肿瘤治疗，也可用于肿瘤预防。体细胞免疫治疗已成为肿瘤患者放、化疗后辅助治疗的重要手段之一，其对于促进患者免疫系统的重建、消除残留病灶及骨髓净化都具有良好效果。但是，免疫细胞疗法目前处于初级阶段，主要用于辅助治疗，而患者反应不一，部分病人对此疗法不敏感。

中医治疗癌症进展

中医治疗癌症主要以扶正祛邪、标本兼治为原则，但目前中医治癌技术的发展也不尽人意。全国目前抗肿瘤中药产品虽多，却无法进入抗肿瘤主流药物行列。下列简述我国目前常见的几类抗肿瘤中药产品现状。

抑制癌细胞中药：包括康莱特注射液（主要成分：薏苡仁油）、消癌平注射液（主要成分：乌骨藤等）、鸦胆子油乳注射液（主要成分：鸦胆子提取物）、艾迪注射液（主要成分：黄芪、刺五加、人参、斑蝥提取物）、安尔欣注射液（主要成分：人参多糖）、华蟾素注射液（主要成分：中华大蟾蜍提取物）、金龙胶囊（主要成分：鲜守宫、鲜金钱白花蛇草）、抗肿瘤胶囊（主要成分：人参、斑蝥、半枝莲、甘草、熊胆粉、女贞子等）、安替可胶囊（主要成分：蟾皮等）、博生癌宁透皮贴（主要成分：布鲁生（Brucine）蟾蜍皮、番水鳖碱、藤黄素、大戟二烯醇、大黄素等）。这些中药产品主要通过抑制或直接杀灭肿瘤细胞而达到抗癌作用。

提高免疫抗肿瘤中药：包括莪术油注射液（主要成分：莪术油）、白花蛇舌草注射液（主要成分：白花蛇舌草提取物）、博尔宁胶囊（主要成分：黄芪、光慈菇、重楼、龙葵、紫苏子、僵蚕、大黄等）、复方红豆杉胶囊（主要成分：紫杉醇、人参皂甙、甘草甜素等）、楼莲胶囊（主要成分：重楼、半边莲、半枝莲、白花蛇舌草、蓬莪术、水蛭、水红花子、新开河红参、制何首乌、缩砂仁），等。这些中药产品主要通过提高或激活患者体内免疫力而达到抑制肿瘤细胞增殖的作用。

止痛类抗肿瘤中药：包括乌头注射液（主要成分：生川乌、生草乌提取物）、吗特灵注射液（主要成分：天然药物苦参提取物）、抗癌平丸（主要成分：珍珠菜、兰香草、百草霜、藤梨根、蛇莓、蟾酥、白花蛇舌草、石上柏、半枝莲、肿节风、合成蛋白等）、科博肽（主要成分：眼镜蛇神经毒素等），等。这些中药产品主要通过消肿作用而减轻肿瘤导致的疼痛症状，有的还具有抑制肿瘤细胞增殖的作用。

扶正类抗肿瘤中药：包括香菇多糖注射液（主要成分：香菇多糖）、云芝糖肽胶囊（主要成分：云芝多糖等）、天康宁胶囊（主要成分：桑蚕蛹和桑蚕卵）、贞芪扶正冲剂（主要成分：黄芪、女贞子）、参芪片（主要成分：人参、黄芪、当归、鹿角胶等）、龟鳖丸（主要成分：全龟、全鳖）、龟甲养阴片（主要成分：龟甲、鳖甲、地黄、珍珠等）、峰龄胶囊（主要成分：野生峰龄孢子发酵提取物），等。这些中药产品主要功能类似免疫增强剂的作用，通过增强机体抵抗力而达到抗肿瘤效果。

中国专利申请200710019154公开了一种具有抗肿瘤活性的中药复方制剂，其包括：斑蝥、人参、黄芪、刺五加、三棱、半支莲、莪术、山茱萸、女贞子、熊胆粉、甘草；中国专利申请200910019337也公开了一种抗肿瘤的中药组合物，其包括：柴胡、郁金、香附、川芎、当归、丹参、牡丹皮、赤芍、人参、白术、黄芪、生地黄、半枝莲、白花蛇舌草、蒲公英；而中国专利申请201110360471所公开的抗肿瘤的中药组合物则包括：黄芪、人参、毛喉鞘蕊花、灵芝、半枝莲、白花蛇草、陈皮。这三种抗肿瘤中药组合物均含有人参、黄芪、半枝莲三种中药。抗肿瘤中药的专利技术项目很多，但迄今未见有中药产品可以取代西医西药的抗肿瘤治疗。虽然当今中西医对癌症的治疗虽有较大发展，但是尚无特别有效的方法可以解决癌症的治疗问题。

发明内容

针对癌症治疗现有技术中的不足，本发明提供了一种既具有高效抗肿瘤活性又无显著毒副作用的中药组合物、其制备方法以及在肿瘤防治方面的药物应用。

一方面，为实现本发明的目的，本发明提供了一种抗肿瘤的中药组合物，该中药组合物基本由如下的中药组分组成：丹参3-20重量份、丹皮3-20重量份、牛膝3-20重量份、川芎3-15重量份、刺五加3-15重量份、黄芩3-20重量份、莪术3-20重量份、藏红花1-15重量份、桃仁3-20重量份、薏米仁3-20重量份、柠果3-20重量份、元参5-20重量份、蛇床子3-15重量份、人工牛黄0.005-0.100重量份、龟板5-25重量份、海马3-15重量份、鸡内金3-25重量份、紫河车（干粉）3-25重量份。

优选地，本发明的中药组合物基本由如下的中药组分组成：丹参3-15重量份、丹皮3-15重量份、牛膝3-15重量份、川芎3-15重量份、刺五加3-15重量份、黄芩3-12重量份、莪术3-15重量份、藏红花1-10重量份、桃仁3-15重量份、薏米仁3-15重量份、柠果3-10重量份、元参5-15重量份、蛇床子3-15重量份、人工牛黄0.005-0.100重量份、龟板5-25重量份、海马3-10重量份、鸡内金3-15重量份、紫河车3-15重量份。

在本发明的中药组合物中，各中药组分（中药成分）的常用别名和拉丁名如下：丹参，又名赤参、紫丹参等，拉丁名：Radix Salviae Miltiorrhiae；

丹皮，又名牡丹皮、粉丹皮等，拉丁名：Cortex Moutan；

牛膝，又名土牛膝、怀牛膝等，拉丁名：Radix Achyranthis Bidentatae；

川芎，又名芎穷，拉丁名：Rhizoma Chuanxiong；

刺五加，又名刺拐棒、坎拐棒子等，拉丁名：Acanthopanax senticosus；

黄芩，又名山茶根、土金茶根等，拉丁名：Scutellaria baicalensis；

莪术，又名蓬莪茂、山姜黄等，拉丁名：Rhizoma Curcumae Aeruginosae；

人工牛黄，拉丁名：Calculus Bovis Artifactus；

藏红花，又名番红花、西红花等，拉丁名：Crocus sativus；

桃仁，又名桃核仁，拉丁名：Semenpersicae；

薏米仁，又名薏苡仁、六谷米等，拉丁名：Semen Coicis；

柠果，又名柠檬、益母果等，拉丁名：Lemon；

元参，又名浙玄参、乌元参等，拉丁名：Scrophularia ningpoensis Hemsl；

龟板，又名乌龟壳、下甲等，拉丁名：Carapax Testudinis；

海马，又名克氏海马、斑海马等，拉丁名：Hippocampus；

鸡内金，又名鸡肶胵、鸡黄皮等，Endothelium Corneum Gigeriae Galli；

紫河车，又名胞衣、混沌皮等，拉丁名：Placenta Hominis；

蛇床子，又名蛇米、蛇珠等，拉丁名：Fructus Cnidii

在本发明中药组合物中，可以含有其它不影响本发明中药组合物药性的成分；其中，紫河车可以由其它动物胎盘所取代，用量可为3-15重量份（干粉）。

本发明中药组合物的抗肿瘤原理基于所采用的中药活性，包括温肾壮阳（牛七、川弓、莪术、海马、蛇床子、紫河车）、活血化瘀（藏红花、桃仁、丹参、丹皮）、清热利湿（人工牛黄、黄芩、薏米仁）、软坚散结（元参，龟板、刺五加）、消积健脾（鸡内金、柠果）。

本发明所述“肾阳”即“元阳”，与身体的免疫力有密切关系，是身体抵抗和消除病邪（即病因）的重要力量。本发明中药组合物中的温肾壮阳中药成分能增强身体的免疫力，是消除或抑制肿瘤细胞的重要因素。

本发明所述“活血化瘀”是流畅血行的一种治法，与治疗疼痛相关，即所谓气血“不通则痛”，活血化瘀中药通过疏通血脉而减轻疼痛，这是肿瘤患者常见的症状。此外，“血行流畅”亦能促进药物达到肿瘤组织，增加抗肿留药物的效果。本发明中药组合物中的活血化瘀中药成分能改善血流通畅，是抗肿瘤中药中的重要成分。

本发明所述“清热利湿”是中医利湿的重要方法之一，就是通利水道、渗泄水湿，利于体内的湿热下泄。肿瘤的形成和发展常有湿热内储，属于湿热毒邪郁结之症。本发明中药组合物中的清热利湿中药成分能改善湿热内储之症，是本抗肿瘤中药中的重要辅助成分。

本发明所述“软坚散结”是中医的“消结”方法之一。中药学中凡能使肿块软化、消散的药物统称为软坚散结药。肿瘤的形成常是体内肿块的表现，属于毒邪郁结所致。本发明中药组合物中的软坚散结中药成分有助于肿块软化消散，是重要的抗肿瘤成分。

本发明所述“消积健脾”是指健脾助运、消食化积之功效。肿瘤患者常表现脾胃虚弱、水谷运化无力、身体营养不良甚至恶病质。本发明中药组合物中的消积健脾中药成分通过增强消化系统的能力，改善营养不良症状，有助于患者恢复免疫力，是重要的抗肿瘤辅助中药。

本发明的中药组合物可通过常规的中药工艺，制备成口服液、洗剂、散剂、片剂、或胶囊等。例如，本发明的中药组合物可采用常用的中药煎煮方法如水煎、酒泡、或入丸等中药制备方法制成药剂。

优选地，本发明的中药组合物是一种中药提取物。

例如，本发明的中药组合物可包括如下的植物性中药组分的提取物：丹参3-15重量份、丹皮3-15重量份、牛七3-15重量份、川弓3-15重量份、刺五加3-15重量份、黄芩3-12重量份、莪术3-15重量份、藏红花1-10重量份、桃仁3-15重量份、薏米仁3-15重量份、柠果3-10重量份、元参5-15重量份、蛇床子3-15重量份。

其中，上述的植物性中药组分的提取物可按如下过程制备的：首先机械粉碎，然后进行水浸泡和热抽提，再用乙醇处理，得到最终的抽提液。

进一步地，本发明的中药组合物还可包括如下的非植物性中药组分的提取物：人工牛黄0.005-0.100重量份、龟板5-25重量份、海马3-10重量份、鸡内金3-15重量份、紫河车（干粉）3-15重量份。

其中，上述的非植物性中药组分的提取物是按如下过程制备的：首先机械粉碎，然后进行乙醇浸泡，再升温、回流提取，得到最终的抽提液。

另一方面，为了实现本发明的发明目的，本发明还提供了一种制备抗肿瘤中药组合物的方法，该方法包括如下步骤：

（1）将植物性中药组分进行水浸泡，然后升温煎熬，所得煎液用乙醇进行处理，静置，过滤，得到抽提液1；其中，植物性中药组分为丹参3-20重量份、丹皮3-20重量份、牛膝3-20重量份、川芎3-15重量份、刺五加3-15重量份、黄芩3-20重量份、莪术3-20重量份、藏红花1-15重量份、桃仁3-20重量份、薏米仁3-20重量份、柠果3-20重量份、元参5-20重量份、蛇床子3-15重量份；

（2）将非植物性中药组分机械粉碎，然后用乙醇浸泡，再升高温度并回流提取，过滤，得到抽提液2；其中，非植物性中药组分为人工牛黄0.005-0.100重量份、龟板5-25重量份、海马3-15重量份、鸡内金3-25重量份、紫河车3-25重量份；

（3）将抽提液1和抽提液2混合静置。

在上述本发明方法中，步骤（1）中的水浸泡可在常温的水中进行，例如10-40℃、pH3-7的条件下进行；再升高温度到70-100℃，煎熬若干小时，例如1-8小时，取煎液；按乙醇：煎液=1：2（v/v）比例加入无水乙醇，摇匀，于低温下例如2-10℃下过夜静置，过滤，得抽提液1；

在上述本发明方法中，步骤（2）中的非植物中药可先经过烘培干燥，碾磨成粉末，再以20-100%乙醇浸泡，然后热抽提，例如升高温度到40-80℃，回流提取若干小时，例如1-6小时，过滤，得到抽提液2；

在上述本发明方法的步骤（3）中，可将所得植物和非植物中药提取液充分混合，过滤，浓缩成浓缩液或干粉。其中，粗提液的浓缩可以是冷冻真空干燥法、热蒸发法、化学吸附法、喷雾干燥法等。

当然，本发明的中药组合物可通过本领域公知的中成药生产工艺技术，或者通过公知的传统的中药熬制技术来制备。

再一方面，为实现本发明的发明目的，本发明还提供了本发明之中药组合物在原发性和继发性肿瘤的预防与治疗中的应用。

通过对本发明中药组合物（以下简称DL571）进行体内和体外的抗肿瘤活性实验，证明其具有显著的抗肿瘤活性，对S180肉瘤的抑制率在52.8%，完全可以应用于制备抗肿瘤的药物。

相比于现有抗肿瘤技术，本发明的抗肿瘤中药提取物DL571具有以下有益效果：

1、具有显著的抗肿瘤活性。本发明的抗肿瘤中药提取物DL571对肿瘤细胞K562的50%抑制浓度（IC50）只有60μL/mL；对小鼠S180肉瘤的抑制率可达52.8%，这与目前大多数抗肿瘤中药相比具有明显的优势。

2、无明显毒副作用。本发明的抗肿瘤中药提取物DL571对小鼠S180肉瘤的抑制率相当于常规化疗药物环磷酰胺，但环磷酰胺的毒副作用远远大于DL571，因为据目前的急性毒性动物试验结果，DL571经口LD50大于20ml/kg，或1000ml/50kg，比DL571常用口服用量10ml/50kg大100倍。

3、与其它抗肿瘤药物相容性好。根据动物实验结果，DL571可以与其它抗肿瘤中西药同时使用而不发生拮抗作用，尤其对标靶药物Nexavar（多吉美）和化疗药物环磷酰胺所引起的副作用具有改善作用。

4、DL571的制备工艺先进。将组方中的植物和非植物中药分别以不同的溶剂、不同温度和不同pH条件处理，充分提取其中抗肿瘤的相关成分，同时最大限度减少与抗肿瘤无关的成分，达到减少其毒副作用的效果，因此，本发明技术较传统的中药提取方法更具有益的效果。

附图说明

图1为本发明中药组合物的一种制备方法的流程示意图；

图2为本发明DL571对肿瘤细胞K562生长的抑制曲线，显示其具有高效的抗肿瘤活性（IC₅₀=60μL/mL）；

图3为本发明DL571对小鼠S180肿瘤的抑制效果（抑瘤率=52.8%）。

具体实施方式

实施例1

本发明DL571的制备方法1：按照图1的流程设计，将组方中的植物和非植物中药分别以不同的溶剂、不同温度和不同pH条件处理，充分提取其中的抗肿瘤相关成分。

具体制备步骤如下：

1、将组方中的植物性中药，包括：丹参3-15克、丹皮3-15克、牛七3-15克、川弓3-15克、刺五加3-15克、黄芩3-12克、莪术3-15克、藏红花1-10克、桃仁3-15克、薏米仁3-15克、柠果3-10克、元参5-15克、蛇床子3-15克，机械粉碎，按100克中药：200毫升水的比例，在30℃pH6.5条件下浸泡24小时，再升高温度到70-100℃，煎熬3小时，取煎液。按乙醇：煎液=1：2（v/v）比例加入无水乙醇，摇匀，于5℃过夜，过滤，得抽提液1。

2、将组方中的非植物性中药，包括：人工牛黄0.005-0.100克、龟板5-25克、海马3-10克、鸡内金3-15克、紫河车（干粉）3-15克，机械粉碎，按100克中药：150毫升75%乙醇的比例，在30℃pH6.5条件下浸泡24小时，再升高温度到40-80℃，回流提取3小时，过滤，得抽提液2。

3、将抽提液1和抽提液2混合，在5-10℃放置过夜，过滤或离心除去固体成分，得混合液以真空干燥、或热蒸发、或喷雾干燥法制备DL571浓缩液，或制备成DL571干粉。

实施例2

本发明DL571的制备方法2：

将组方中的中药，包括：丹参3-15克、丹皮3-15克、牛七3-15克、川弓3-15克、刺五加3-15克、黄芩3-12克、莪术3-15克、藏红花1-10克、桃仁3-15克、薏米仁3-15克、柠果3-10克、元参5-15克、蛇床子3-15克、人工牛黄0.005-0.100克、龟板5-25克、海马3-10克、鸡内金3-15克、紫河车（干粉）3-15克，加适量水，以传统的煎熬、蒸煮，或加适量的食用酒密封浸泡1月至3年，制备成中药煎煮液或药酒。

实施例3

本发明DL571的制备方法3：

将组方中的中药，包括：丹参3-15克、丹皮3-15克、牛七3-15克、川弓3-15克、刺五加3-15克、黄芩3-12克、莪术3-15克、藏红花1-10克、桃仁3-15克、薏米仁3-15克、柠果3-10克、元参5-15克、蛇床子3-15克、人工牛黄0.005-0.100克、龟板5-25克、海马3-10克、鸡内金3-15克、紫河车（干粉）3-15克，按照公知的中药成药制备方法，制备成中成药，包括药丸、片剂、胶囊、冲剂、口服液、洗液、外用药膏等剂型。

实施例4

抗肿瘤活性实验部分：

1、抗肿瘤细胞试验：按照《细胞毒类抗肿瘤药物非临床研究技术指导原则》（中国新药与临床杂志，27（6）：462，2008），进行体外抗肿瘤细胞试验，测定DL571的抗肿瘤活性：将对数生长期的K562细胞接种于96孔板，180μl/孔，细胞浓度为5×10⁵/ml，培养基为DMEM，含10%小牛血清，加入DL571溶液，使最终浓度分别为0，20，40，80，160μl/ml，设3复孔。在CO₂培养箱培养48小时，培养条件为：5%CO₂、95%湿度、37℃，再按MTT试剂操作说明书测定各孔的吸光值（OD₅₉₀），以OD₅₉₀对DL571浓度作图，求出IC₅₀；见图2。

2、抗肿瘤动物试验：按照《细胞毒类抗肿瘤药物非临床研究技术指导原则》（中国新药与临床杂志，27（6）：462，2008），进行体内抗肿瘤动物试验，经口给药，测定DL571的抗肿瘤疗效。具体试验步骤如下：

采用小鼠S180肉瘤细胞株，以PBS配成1x10⁷/ml的S180细胞悬液，按0.1mL/只注射于小鼠皮下，制备成S180肿瘤小鼠模型，待肿瘤直径达到5mm大小，取肿瘤大小相对一致的小鼠，随机分为3组：空白对照组：不作任何处理；阴性对照组：采用生理盐水灌胃，每天1次，0.1mL/10g体重；DL571给药组：每天灌胃1次，0.1mL/10g体重（相当于每kg体重给药由12500mg中药所提取）。给药时间从分组当天开始，持续给药2周，然后处死动物，剥离实体肿瘤组织，称重，按下式计算药物的抑瘤率：抑瘤率（%）=100x(对照组瘤重-药物组瘤重)/对照组瘤重。结果见图3。

表1体内法鉴定DL571的抗肿瘤活性

*DL571组：折合每kg体重给药含12.5g中药的提取物。

实施例5

安全性实验部分：

1、急性毒性试验：按照《细胞毒类抗肿瘤药物非临床研究技术指导原则》（中国新药与临床杂志，27（6）：462，2008），采用啮齿类和非啮齿类动物作为测试模型，测定DL571的急性毒性作用。

2、长期毒性试验：按照《细胞毒类抗肿瘤药物非临床研究技术指导原则》（中国新药与临床杂志，27（6）：462，2008），采用啮齿类和非啮齿类动物作为测试模型，测定DL571的长期毒性作用。

实施例6

DL571的药物应用部分：

1、DL571的中药成分含量为：丹参15克、丹皮15克、牛七15克、川弓15克、刺五加15克、黄芩15克、莪术15克、人工牛黄0.05克、藏红花7克、桃仁15克、薏米仁15克、柠果10克、元参15克、龟板15克、海马10克、鸡内金15克、紫河车（干粉）10克、蛇床子15克。按图1工艺流程提取抗肿瘤有效成分，用于实质性肿瘤（例如肝细胞肝癌、肺癌、肉瘤、鳞状上皮癌等）、或血液系统肿瘤（例如白血病、淋巴瘤等）的预防与治疗药物。

2、DL571的中药成分含量为：丹参15克、丹皮15克、牛七15克、川弓15克、刺五加15克、黄芩15克、莪术15克、人工牛黄0.05克、藏红花7克、桃仁15克、薏米仁15克、柠果10克、元参15克、龟板15克、海马10克、鸡内金15克、动物胎盘（干粉）10克、蛇床子15克。按图1工艺流程提取抗肿瘤有效成分，用于实质性肿瘤（例如肝细胞肝癌、肺癌、肉瘤、鳞状上皮癌等）、或血液系统肿瘤（例如白血病、淋巴瘤等）的预防与治疗药物。

3、DL571的中药成分含量为：丹参10克、丹皮10克、牛七10克、川弓10克、刺五加10克、黄芩10克、莪术10克、人工牛黄0.03克、藏红花5克、桃仁10克、薏米仁10克、柠果5克、元参10克、龟板10克、海马5克、鸡内金10克、紫河车（干粉）5克、蛇床子10克。按图1工艺流程提取抗肿瘤有效成分，用于实质性肿瘤（例如肝细胞肝癌、肺癌、肉瘤、鳞状上皮癌等）、或血液系统肿瘤（例如白血病、淋巴瘤等）的预防与治疗药物。

4、DL571的中药成分含量为：丹参10克、丹皮10克、牛七10克、川弓10克、刺五加10克、黄芩10克、莪术10克、人工牛黄0.03克、藏红花5克、桃仁10克、薏米仁10克、柠果5克、元参10克、龟板10克、海马5克、鸡内金10克、动物胎盘（干粉）5克、蛇床子10克。按图1工艺流程提取抗肿瘤有效成分，用于实质性肿瘤（例如肝细胞肝癌、肺癌、肉瘤、鳞状上皮癌等）、或血液系统肿瘤（例如白血病、淋巴瘤等）的预防与治疗药物。

5、DL571的中药成分含量为：丹参5克、丹皮5克、牛七5克、川弓5克、刺五加5克、黄芩5克、莪术5克、人工牛黄0.01克、藏红花2.5克、桃仁5克、薏米仁5克、柠果5克、元参5克、龟板5克、海马3克、鸡内金5克、紫河车（干粉）3克、蛇床子5克。按传统的煎、蒸、煮，或用酒密封浸泡1月至3年，制备成中药煎煮液或药酒；或按照公知的中药成药制备方法制备成中成药，包括药丸、片剂、胶囊、冲剂、口服液、洗液、外用药膏等剂型，用于实质性肿瘤（例如肝细胞肝癌、肺癌、肉瘤、鳞状上皮癌等）、或血液系统肿瘤（例如白血病、淋巴瘤等）的预防与治疗药物。

6、DL571的中药成分含量为：丹参5克、丹皮5克、牛七5克、川弓5克、刺五加5克、黄芩5克、莪术5克、人工牛黄0.01克、藏红花2.5克、桃仁5克、薏米仁5克、柠果5克、元参5克、龟板5克、海马3克、鸡内金5克、动物胎盘（干粉）3克、蛇床子5克。按传统的煎、蒸、煮，或用酒密封浸泡1月至3年，制备成中药煎煮液或药酒；或按照公知的中药成药制备方法制备成中成药，包括药丸、片剂、胶囊、冲剂、口服液、洗液、外用药膏等剂型，用于实质性肿瘤（例如肝细胞肝癌、肺癌、肉瘤、鳞状上皮癌等）、或血液系统肿瘤（例如白血病、淋巴瘤等）的预防与治疗药物。

7、DL571的中药成分含量为：丹参2.5克、丹皮2.5克、牛七2.5克、川弓2.5克、刺五加2.5克、黄芩2.5克、莪术2.5克、人工牛黄0.005克、藏红花1.5克、桃仁2.5克、薏米仁2.5克、柠果2.5克、元参2.5克、龟板2.5克、海马1.5克、鸡内金2.5克、紫河车（干粉）1.5克、蛇床子2.5克。按传统的煎、蒸、煮，或用酒密封浸泡1月至3年，制备成中药煎煮液或药酒；或按照公知的中药成药制备方法制备成中成药，包括药丸、片剂、胶囊、冲剂、口服液、洗液、外用药膏等剂型，用于实质性肿瘤（例如肝细胞肝癌、肺癌、肉瘤、鳞状上皮癌等）、或血液系统肿瘤（例如白血病、淋巴瘤等）的预防与治疗药物。

8、DL571的中药成分含量为：丹参2.5克、丹皮2.5克、牛七2.5克、川弓2.5克、刺五加2.5克、黄芩2.5克、莪术2.5克、人工牛黄0.005克、藏红花1.5克、桃仁2.5克、薏米仁2.5克、柠果2.5克、元参2.5克、龟板2.5克、海马1.5克、鸡内金2.5克、动物胎盘（干粉）1.5克、蛇床子2.5克。按传统的煎、蒸、煮，或用酒密封浸泡1月至3年，制备成中药煎煮液或药酒；或按照公知的中药成药制备方法制备成中成药，包括药丸、片剂、胶囊、冲剂、口服液、洗液、外用药膏等剂型，用于实质性肿瘤（例如肝细胞肝癌、肺癌、肉瘤、鳞状上皮癌等）、或血液系统肿瘤（例如白血病、淋巴瘤等）的预防与治疗药物。

Claims (10)

1.一种抗肿瘤的中药组合物，该中药组合物由植物性中药组分的提取物和非植物性中药组分的提取物组成，其中，所述的植物性中药组分和非植物性中药组分的重量配比为：丹参15克、丹皮15克、牛膝15克、川芎15克、刺五加15克、黄芩15克、莪术15克、藏红花7克、桃仁15克、薏米仁15克、柠果10克、元参15克、蛇床子15克、人工牛黄0.05克、龟板15克、海马10克、鸡内金15克、紫河车10克，所述的紫河车为干粉。

2.一种抗肿瘤的中药组合物，该中药组合物由植物性中药组分的提取物和非植物性中药组分的提取物组成，其中，所述的植物性中药组分和非植物性中药组分的重量配比为：丹参10克、丹皮10克、牛膝10克、川芎10克、刺五加10克、黄芩10克、莪术10克、藏红花5克、桃仁10克、薏米仁10克、柠果5克、元参10克、蛇床子10克、人工牛黄0.03克、龟板10克、海马5克、鸡内金10克、紫河车5克，所述的紫河车为干粉。

3.一种抗肿瘤的中药组合物，该中药组合物由植物性中药组分的提取物和非植物性中药组分的提取物组成，其中，所述的植物性中药组分和非植物性中药组分的重量配比为：丹参5克、丹皮5克、牛膝5克、川芎5克、刺五加5克、黄芩5克、莪术5克、藏红花2.5克、桃仁5克、薏米仁5克、柠果5克、元参5克、蛇床子5克、人工牛黄0.01克、龟板5克、海马3克、鸡内金5克、紫河车3克，所述的紫河车为干粉。

4.一种抗肿瘤的中药组合物，该中药组合物由植物性中药组分的提取物和非植物性中药组分的提取物组成，其中，所述的植物性中药组分和非植物性中药组分的重量配比为：丹参2.5克、丹皮2.5克、牛膝2.5克、川芎2.5克、刺五加2.5克、黄芩2.5克、莪术2.5克、藏红花1.5克、桃仁2.5克、薏米仁2.5克、柠果2.5克、元参2.5克、蛇床子2.5克、人工牛黄0.005克、龟板2.5克、海马1.5克、鸡内金2.5克、紫河车1.5克，所述的紫河车为干粉。

5.如权利要求1-4之一所述的中药组合物，其中，所述的中药组合物通过常规中药工艺，制备成口服液、洗剂、散剂、片剂、或胶囊。

6.如权利要求1-4之一所述的中药组合物，其中，所述的植物性中药组分为：丹参、丹皮、牛膝、川芎、刺五加、黄芩、莪术、藏红花、桃仁、薏米仁、柠果、元参、蛇床子。

7.如权利要求6所述的中药组合物，其中，所述的植物性中药组分的提取物是按如下过程制备的：首先机械粉碎，然后进行水浸泡和热抽提，再用乙醇处理，得到最终的抽提液。

8.如权利要求1-4之一所述的中药组合物，其中，所述的非植物性中药组分为：人工牛黄、龟板、海马、鸡内金、紫河车。

9.如权利要求8所述的中药组合物，其中，所述的非植物性中药组分的提取物是按如下过程制备的：首先机械粉碎，然后进行乙醇浸泡，再升温、回流提取，得到最终的抽提液。

10.如权利要求1-4之一所述的中药组合物，其中，所述的中药组合物采用水煎、酒泡、或入丸的中药制备方法制成药剂。