CN104955454A - 趋化因子受体拮抗剂 - Google Patents

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Abstract

本发明提供化合物作为CCR1的有效拮抗剂，具有体内抗炎活性。化合物通常为芳基哌嗪衍生物，可用于治疗CCR1介导疾病的药物组合物和方法中，且在识别竞争性CCR1拮抗剂的试验中用作对照。

Description

趋化因子受体拮抗剂
相关申请的交叉引用
本申请要求2012年08月27日提交的美国申请序列号为61/693,758和2013年06月06日提交的序列号为61/831,694的优先权，其公开的内容通过引用全部并入本文。
联邦政府资助研发作出的发明的权利声明
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关于光盘递交的“序列表”、表格或计算机程序清单附件
不适用
发明背景
本发明提供化合物，包含一种或多种这些化合物或它们的药学上可接受的盐的药物组合物，它们有效抑制各种不同的趋化因子如MIP-1α、白细胞诱素(leukotactin)、MPIF-1和RANTES与CCR1受体的结合。作为CCR1受体的拮抗剂或调节剂，化合物或组合物在治疗炎性和免疫性紊乱、症状和疾病中具有效用。
人类健康取决于人体检测和破坏外来病原体的能力，否则可能从个体消耗宝贵资源和/或诱发疾病。免疫系统是人体的防御系统，其包括白细胞(白血细胞(WBC)：T和B淋巴细胞，单核细胞，巨噬细胞粒细胞，NK细胞，肥大细胞，树突状细胞，以及衍生免疫细胞(例如，破骨细胞))，淋巴组织和淋巴血管。为抵抗感染，白血细胞在身体各部分循环以检测病原体。一旦检测到病原体，天生免疫细胞和细胞毒素T细胞特别聚集到感染部位从而消灭病原体。趋化因子作为分子信标用于募集和活化免疫细胞，如淋巴细胞，单核细胞和粒细胞，确定病原体存在位置。
尽管免疫系统有病原体调节作用，但某种不合适的趋化因子信号传导仍可以发生且认为会触发或维持炎性疾病，如类风湿关节炎，多发性硬化症等。例如，在类风湿关节炎中，骨关节内不受调控的趋化因子积累引起和激活浸润的巨噬细胞和T细胞。这些细胞的活化导致滑膜细胞增殖，至少部分导致炎症和最终的骨和软骨损失(参见DeVries、M.E.等,Semin Immunol 11(2):95-104(1999))。某些脱髓鞘疾病，如多发性硬化症的特点是趋化因子介导的单核细胞/巨噬细胞和T细胞募集至中枢神经系统(参见Kennedy等,J.Clin.Immunol.19(5):273-279(1999))。破坏性WBC的趋化因子募集到移植物参与它们的后续排异反应。参见DeVries、M.E.等,同上。因为趋化因子在炎症和淋巴细胞发育中发挥关键作用，特异操控它们活性的能力对目前没有满意治疗方法的疾病的改善和终止有很大影响。此外，可以尽可能降低移植物排异反应，而无需昂贵的免疫抑制药物的全身和复杂影响。
趋化因子是一组多于40种的小肽(7-10kD)，其结合主要在WBC或免疫来源细胞上表达的受体，并经G-蛋白偶联信号传导级联反应进行信号传导从而介导它们的化学引诱和化学刺激功能。受体可能结合不止一种配体，例如，受体CCR1结合RANTES(正常T细胞表达的活化调节)、MIP-1α(巨噬细胞炎性蛋白)、MPIF-1/CKβ8和白细胞诱素趋化因子(及较低亲合力的其它)。至今已知24种趋化因子。趋化因子的绝对数量，多种配体结合受体，以及免疫细胞上不同的受体分布能够进行严格受控的和特异性的免疫反应。参见Rossi等,Ann.Rev.Immunol.18(1):217-242(2000)。趋化因子活性可以通过调节它们相应的受体进行得到控制，治疗相关炎症和免疫疾病并能进行组织和器官移植。
受体CCR1和它的趋化因子配体，包括，例如MIP-1α、MPIF-1/CKβ8、白细胞诱素和RANTES代表有效的治疗靶点(参见Saeki等,Current Pharmaceutical Design9:1201-1208(2003))，因为它们参与类风湿性关节炎、移植物排异反应(参见DeVries、M.E.等,ibid.)以及多发性硬化症(参见Fischer等,J Neuroimmunol.110(1-2):195-208(2000)；Izikson等,J.Exp.Med.192(7):1075-1080(2000)；和Rottman等,Eur.J.Immunol.30(8):2372-2377(2000))。事实上，已经发现了功能阻断抗体，改性趋化因子受体配体和小的有机化合物，其中一些已成功证明能预防或治疗某些趋化因子介导的疾病(在Rossi等,同上中综述)。值得注意的是，在类风湿性关节炎的实验模型中，当施用信号传导阻断、改性RANTES配体时，疾病发展减弱(参见Plater-Zyberk等,Immunol Lett.57(1-3):117-120(1997))。虽然功能阻断抗体和小肽治疗是有希望的，但它们有降解的风险，一旦施用半衰期极短，高昂的费用阻碍了开发和制造，这些是大多数蛋白的特征。小的有机化合物是优选的，因为它们常常在体内具有较长的寿命，需要较小的剂量获得效果，通常可以口服，且因此比较便宜。先前已描述CCR1的某些有机拮抗剂(参见Hesselgesser等,J.Biol.Chem.273(25):15687-15692(1998)；Ng等,J.Med.Chem.42(22):4680-4694(1999)；Liang等,J.Biol.Chem.275(25):19000-19008(2000)和Liang等,Eur.J.Pharmacol.389(1):41-49(2000))。鉴于在动物模型中证明的治疗疾病的有效性(参见Liang等,J.Biol.Chem.275(25):19000-19008(2000))，已经继续研究从而识别可以用于治疗CCR1信号传导介导的疾病的其他化合物。
发明概要
本文描述具有下式的化合物：
和其盐、旋转异构体以及光学异构体，其中，下标n和取代基R1a、R1b、R2a、R2b、Ar1和Ar2具有说明书和权利要求书中提供的含义。
选择的多组化合物是式Ia、Ia1、Ia2、II、III和IV所示那些：
除了本文提供的化合物，本发明还提供包含一种或多种这些化合物的药物组合物，以及这些化合物在治疗方法中的使用方法，主要治疗与CCR1信号传导活性相关的疾病。
附图简述
无
发明详述
I.缩写和定义
除非另作说明，术语"烷基"本身或作为另一取代基的部分是指具有指定碳原子数(即C1-8指1-8个碳)的直链或支链烃基。烷基的实例包括甲基、乙基、n-丙基、异丙基、n-丁基、t-丁基、异丁基、仲丁基、n-戊基、n-己基、n-庚基、n-辛基等。术语"烯基"指具有一个或多个双键的不饱和烷基。同样，术语"炔基"指具有一个或多个三键的不饱和烷基。该不饱和烷基的实例包括乙烯基、2-丙烯基、巴豆基、2-异戊烯基、2-(丁二烯基)、2,4-戊二烯基、3-(1,4-戊二烯基)、乙炔基、1-和3-丙炔基、3-丁炔基和更高级同系物和同分异构体。术语"环烷基"指具有指定环原子数的烃环(例如C3-6环烷基)，是完全饱和或在环顶点之间具有不多于一个双键。"环烷基"也指双环和多环烃环，例如，二环[2.2.1]庚烷、二环[2.2.2]辛烷等。术语"杂环烷基"指包含选自N、O或S的一至五个杂原子的环烷基，其中，氮和硫原子任选被氧化，并且氮原子任选地被季铵化。杂环烷基可以是单环、双环或多环环系统。杂环烷基非限制实例包括吡咯烷、哌啶基、咪唑烷、吡唑烷、丁内酰胺、戊内酰胺、咪唑烷酮、乙内酰脲、二氧戊环、苯邻二甲酰亚胺、哌啶、1,4-二氧六环、吗啉、硫代吗啉、硫代吗啉-S-氧化物、硫代吗啉-S,S-氧化物、哌嗪、吡喃、吡啶酮、3-吡咯啉、噻喃、吡喃酮、四氢呋喃、四氢噻吩、奎宁环等。杂环烷基可以通过环碳或杂原子连接到分子的其余部分。
术语"亚烷基"本身或作为另一取代基的部分，指衍生自链烷的二价基团，例如-CH2CH2CH2CH2-。通常，烷基(或亚烷基)具有1-24个碳原子，本发明优选具有10个或更少碳原子的这些基团。"低级烷基"或"低级亚烷基"是较短链烷基或亚烷基，通常具有4个或更少碳原子。同样地，"亚烯基"和"亚炔基"分别指具有双键或三键的不饱和形式的"亚烷基"。
术语"烷氧基"、"烷基氨基"和"烷硫基"(或硫代烷氧基)以它们常规含义使用，分别指通过氧原子、氨基或硫原子连接到分子的其余部分的那些烷基。另外，对于二烷基氨基，烷基部分可以相同或不同，也可以与各自连接的氮原子结合从而形成3-7元环。因此，-NRaRb所示的基团是包括哌啶基、吡咯烷基、吗啉基、氮杂环丁基等。
除非另作说明，术语"卤代"或"卤素"本身或作为另一取代基的部分是指氟、氯、溴或碘原子。此外，术语如"卤代烷基"是指包括单卤代烷基和多卤代烷基。例如，术语"C1-4卤代烷基"是指包括三氟甲基、2,2,2-三氟乙基、4-氯丁基、3-溴丙基等。
除非另作说明，术语"芳基"是指多不饱和的，通常是芳香的烃基，可以是单环或稠合在一起或共价连接的多环(至多三环)。术语"杂芳基"是指包含选自N、O或S的1-5个杂原子的芳基(或环)，其中氮和硫原子任选被氧化，并且氮原子任选地被季铵化。杂芳基可以通过杂原子连接到分子的其余部分。芳基非限制实例包括苯基、萘基和联苯基，而杂芳基非限制实例包括吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基、三嗪基、喹啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、2,3-二氮杂萘基、苯并三嗪基、嘌呤基、苯并咪唑基、苯并吡唑基、苯并三唑基、苯并异噁唑基、异苯并呋喃基、异吲哚基、中氮茚基、苯并三嗪基、噻吩并吡啶基、噻吩并嘧啶基、吡唑并嘧啶基、咪唑并吡啶、苯并噻唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、喹啉基、异喹啉基、异噻唑基、吡唑基、吲唑基、蝶啶基、咪唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噻二唑基、吡咯基、噻唑基、呋喃基、噻吩基等。上述各芳基和杂芳基环系统各自的取代基选自下述的可接受取代基的组。
为简便，术语"芳基"与其他术语(如芳氧基、芳基硫基、芳烷基)结合使用时，包括如上所述的芳基和杂芳基环。因此，术语"芳烷基"是指包括其中的芳基连接到烷基的那些基团(如苄基、苯乙基、吡啶甲基等)。
在一些实施方式中，以上术语(如"烷基"、"芳基"和"杂芳基")将包括所指基团的取代和未取代形式。以下提供各类型基团的优选取代基。为简便，术语芳基和杂芳基将指以下提供的取代或未取代形式，而术语"烷基"和相关脂肪族基团是指未取代形式，除非指定是取代的。
用在烷基(包括通常称为亚烷基、烯基、炔基和环烷基的那些基团)上的取代基可以是选自下组的各种不同的基团：-卤素、-OR’、-NR’R”、-SR’、-SiR’R”R”’、-OC(O)R’、-C(O)R’、-CO2R’、-CONR’R”、-OC(O)NR’R”、-NR”C(O)R’、-NR’-C(O)NR”R”’、-NR”C(O)2R’、-NH-C(NH2)＝NH、-NR’C(NH2)＝NH、-NH-C(NH2)＝NR’、-S(O)R’、-S(O)2R’、-S(O)2NR’R”、-NR’S(O)2R”、-CN和-NO2，数量从0到(2m’+1)，其中m’是该基团内碳原子总数。R’、R”和R”’各自独立为氢、未取代的C1-8烷基、未取代的杂烷基、未取代的芳基、1-3个卤素取代的芳基、未取代的C1-8烷基、C1-8烷氧基或C1-8硫代烷氧基或未取代的芳基-C1-4烷基。当R’和R”连接到同一氮原子时，它们可以与氮原子结合从而形成3-、4-、5-、6-或7-元环。例如，-NR’R”是指包括1-吡咯烷基和4-吗啉基。
类似地，用在芳基和杂芳基上的取代基是各种各样的，通常选自下组：-卤素、-OR’、-OC(O)R’、-NR’R”、-SR’、-R’、-CN、-NO2、-CO2R’、-CONR’R”、-C(O)R’、-OC(O)NR’R”、-NR”C(O)R’、-NR”C(O)2R’、-NR’-C(O)NR”R”’、-NH-C(NH2)＝NH、-NR’C(NH2)＝NH、-NH-C(NH2)＝NR’、-S(O)R’、-S(O)2R’、-S(O)2NR’R”、-NR’S(O)2R”、-N3、全氟(C1-C4)烷氧基和全氟(C1-C4)烷基，数量从0到芳香环系统上开放化学价的总数，其中，R’、R”和R”’独立选自氢、C1-8烷基、C3-6环烷基、C2-8烯基、C2-8炔基、未取代的芳基和杂芳基、(未取代的芳基)-C1-4烷基和未取代的芳氧基-C1-4烷基。其他合适的取代基包括每个通过1-4个碳原子的亚烷基链连接到环原子的以上各芳基取代基。
芳基或杂芳基环相邻原子上的取代基中的两个可以任选被式-T-C(O)-(CH2)q-U-取代基替代，其中T和U独立为-NH-、-O-、-CH2-或单键，且q是0-2的整数。或者，芳基或杂芳基环相邻原子上的取代基中的两个可以任选被式-A-(CH2)r-B-取代基替代，其中A和B独立为-CH2-、-O-、-NH-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2NR’-或单键，且r是1-3的整数。这样形成的新环的单键之一可以任选被双键替代。或者，芳基或杂芳基环相邻原子上的取代基中的两个可以任选被式-(CH2)s-X-(CH2)t-取代基替代，其中s和t独立为0-3的整数，且X是-O-、-NR’-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-或-S(O)2NR’-。-NR’-和-S(O)2NR’-中的取代基R’选自氢或未取代的C1-6烷基。
如本文所用，术语"杂原子"是指包括氧(O)、氮(N)、硫(S)和硅(Si)。
术语"药学上可接受的盐"是指包括活性化合物的盐，根据本文描述的化合物上特定的取代基，采用相对无毒的酸或碱制备。当本发明的化合物包含相对酸性的官能团，可以通过将中性形式的该化合物与足量的所需碱或直接或在合适的惰性溶剂中接触获得碱加成盐。衍生自药学上可接受的无机碱的盐的实例包括铝，铵，钙，铜，铁，亚铁，锂，镁，锰，亚锰，钾，钠，锌等。衍生自药学上可接受的有机碱的盐包括伯、仲和叔胺的盐，包括取代的胺、环胺、天然存在的胺等，如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N,N’-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、氨基葡萄糖、组氨酸、羟基胺(hydrabamine)、异丙胺、赖氨酸、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇等。当本发明的化合物包含相对碱性官能团，可以通过将中性形式的该化合物与足量所需酸或直接或在合适的惰性溶剂中接触获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括衍生自无机酸的那些，如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、单氢碳酸、磷酸、单氢磷酸、二氢磷酸、硫酸、单氢硫酸、氢碘酸或亚磷酸等，和衍生自相对无毒的有机酸的盐，像乙酸、丙酸、异丁酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、富马酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对-甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸、甲基磺酸等。还包括氨基酸如精氨酸等的盐，和有机酸像葡萄醛酸或半乳糖醛酸等的盐(参见例如,Berge、S.M.等,“药用盐”,Journal of Pharmaceutical Science,1977,66,1-19)。本发明的某些特定化合物同时包含碱性和酸性官能团，使得化合物能够转化成碱或酸加成盐。
通过盐与碱或酸接触并以常规方法分离母体化合物可以再生中性形式的化合物。化合物的母体形式在某些物理性质上不同于各种盐形式，如在极性溶剂中的溶解度，但对于本发明的目的，盐等同于母体形式的化合物。
除了盐形式，本发明提供前药形式的化合物。本文描述的化合物的前药是在生理条件下易经历化学变化以提供本发明化合物的那些。此外，前药在离体环境中可通过化学或生化方法转化为本发明化合物。例如，当与合适的酶或化学试剂一起放置在透皮贴剂内时，前药可以缓慢转化为本发明化合物。
本发明的某些化合物可以以非溶剂化形式和包括水合形式在内的溶剂化形式存在。通常，溶剂化形式等同于非溶剂化形式，且包含在本发明范围内。本发明的某些化合物可以存在多晶型或无定形形式。通常，对于本发明预期的应用来说，所有的物理形式是等同的，且包含在本发明范围内。
本发明的某些化合物具有不对称碳原子(光学中心)或双键；外消旋体，非对映体，几何异构体，区域异构体和单个异构体(例如，不同的对映体)都包含在本发明范围内。本发明的化合物还可以在构成该化合物的一个或多个原子处含有非天然比例的原子同位素。例如，化合物可以用放射性同位素，例如氚(3H)、碘-125(125I)或碳-14(14C)作放射性标记。本发明化合物的全部同位素变体，无论是否是放射性的，都包含在本发明范围内。
II.通用
本发明源于发现式I(以及亚式Ia、Ia1、Ia2、II、III和IV)化合物作为CCR1受体的强效拮抗剂。化合物具有体内抗炎活性。因此，本文提供的化合物可用于治疗CCR1介导疾病的药物组合物和方法，且在识别竞争性CCR1拮抗剂试验中用作对照。
III.化合物
在一个方面，本发明提供具有下式的化合物：
和其盐、旋转异构体和光学异构体。
在式I中，下标n是0-3的整数，各R1a和R1b独立选自下组：H、C1-8烷基、C1-8卤代烷基、C3-6环烷基、-CORa、-CO2Ra、-CONRaRb、-NRaRb、-NRaCORb、-ORa、-X1CORa、-X1CO2Ra、-X1CONRaRb、-X1NRaCORb、-X1NRaRb和-X1ORa，其中X1为C1-4亚烷基，且各Ra和Rb独立选自下组：氢、C1-8烷基、C1-8卤代烷基和C3-6环烷基，任选地，相邻碳原子上的两R1a基团连接从而形成5-、6-或7-元碳环或杂环；各R2a和R2b独立选自下组：H、羟基、C1-8烷基、C1-8卤代烷基、C1-8烷氧基、C1-4烷氧基-C1-4烷基、C1-8羟基烷基、C1-4烷氧基-C1-4烷氧基、C3-6环烷基、C3-6环烷基-C1-4烷基、3-到7-元杂环烷基、3-到7-元杂环烷基-C1-4烷基、-X1CO2Ra、-X1CONRaRb、-X1NRaCORb、-X1NRaRb，其中X1、Ra和Rb如上定义。
符号Ar1表示6或10元单环或稠合的双环芳环，或5到10元单环或稠合的双环杂芳环，各个被独立选自下组的R3、R3a、R3b、R4和R4a中1-5个取代基取代：H、卤素、-ORc、-OC(O)Rc、-NRcRd、-SRc、-Re、-CN、-NO2、-CO2Rc、-CONRcRd、-C(O)Rc、-OC(O)NRcRd、-NRdC(O)Rc、-NRdC(O)2Re、-NRc-C(O)NRcRd、-NH-C(NH2)＝NH、-NReC(NH2)＝NH、-NH-C(NH2)＝NRe、-NH-C(NHRe)＝NH、-S(O)Re、-S(O)2Re、-NRcS(O)2Re、-S(O)2NRcRd、-N3、-X2ORc、-O-X2ORc、-X2OC(O)Rc、-X2NRcRd、-O-X2NRcRd、-X2SRc、-X2CN、-X2NO2、-X2CO2Rc、-O-X2CO2Rc、-X2CONRcRd、-O-X2CONRcRd、-X2C(O)Rc、-X2OC(O)NRcRd、-X2NRdC(O)Rc、-X2NRdC(O)2Re、-X2NRcC(O)NRcRd、-X2NH-C(NH2)＝NH、-X2NReC(NH2)＝NH、-X2NH-C(NH2)＝NRe、-X2NH-C(NHRe)＝NH、-X2S(O)Re、-X2S(O)2Re、-X2NRcS(O)2Re、-X2S(O)2NRcRd、-X2N3、-NRd-X2ORc、-NRd-X2NRcRd、-NRd-X2CO2Rc和-NRd-X2CONRcRd，其中，各X2独立选自下组：C1-4亚烷基；且各Rc和Rd独立选自氢、C1-8烷基、C1-8羟基烷基、C1-8卤代烷基和C3-6环烷基；或任选地，当连接到同一氮原子时，Rc和Rd可以与氮原子结合从而形成具有0-2个其他杂原子作为环成员的5或6-元环；各Re独立选自下组：C1-8烷基、C1-8羟基烷基、C1-8卤代烷基和C3-6环烷基。
符号Ar2表示6-或10-元单环或稠合的双环芳环，或5-到10-元单环或稠合的双环杂芳环，各个被独立选自下组的R5、R6、R7、R8和R9中1-5个取代基取代：H、卤素、-ORf、-OC(O)Rf、-NRfRg、-SRf、-Rh、-CN、-NO2、-CO2Rf、-CONRfRg、-C(O)Rf、-OC(O)NRfRg、-NRgC(O)Rf、-NRgC(O)2Rh、-NRf-C(O)NRfRg、-NH-C(NH2)＝NH、-NRhC(NH2)＝NH、-NH-C(NH2)＝NRh、-NH-C(NHRh)＝NH、-S(O)Rh、-S(O)2Rh、-NRfS(O)2Rh、-S(O)2NRfRg、-NRfS(O)2NRfRg、-N3、-X3ORf、-X3OC(O)Rf、-X3NRfRg、-X3SRf、-X3CN、-X3NO2、-X3CO2Rf、-X3CONRfRg、-X3C(O)Rf、-X3OC(O)NRfRg、-X3NRgC(O)Rf、-X3NRgC(O)2Rh、-X3NRf-C(O)NRfRg、-X3NH-C(NH2)＝NH、-X3NRhC(NH2)＝NH、-X3NH-C(NH2)＝NRh、-X3NH-C(NHRh)＝NH、-X3S(O)Rh、-X3S(O)2Rh、-X3NRfS(O)2Rh、-X3S(O)2NRfRg、-Y、-X3Y、-S(O)2Y、-C(O)Y、-X3N3、-O-X3ORf、-O-X3NRfRg、-O-X3CO2Rf、-O-X3CONRfRg、-NRg-X3ORf、-NRg-X3NRfRg、-NRg-X3CO2Rf和-NRg-X3CONRfRg，其中，Y是5或6-元芳环、杂芳环或杂环，任选地被选自下组的1-3个取代基取代：卤素、-ORf、-OC(O)Rf、-NRfRg、-Rh、-SRf、-CN、-NO2、-CO2Rf、-CONRfRg、-C(O)Rf、-NRgC(O)Rf、-NRgC(O)2Rh、-S(O)Rh、-S(O)2Rh、-NRfS(O)2Rh、-S(O)2NRfRg、-X3ORf、X3SRf、-X3CN、-X3NO2、-X3CO2Rf、-X3CONRfRg、-X3C(O)Rf、-X3OC(O)NRfRg、-X3NRgC(O)Rf、-X3NRgC(O)2Rh、-X3NRf-C(O)NRfRg、-X3OC(O)Rf、-X3S(O)Rh、-X3S(O)2Rh、-X3NRfRg、-X3NRfS(O)2Rh、-X3S(O)2NRfRg、-O-X3ORf、-O-X3NRfRg、-O-X3CO2Rf、-O-X3CONRfRg、-NRg-X3ORf、-NRg-X3NRfRg、-NRg-X3CO2Rf和-NRg-X3CONRfRg，且其中，各X3独立选自下组：C1-4亚烷基，且各Rf和Rg独立选自氢、C1-8烷基、C1-8羟基烷基、C1-8卤代烷基和C3-6环烷基，或当连接到同一氮原子，Rf和Rg可以与氮原子结合从而形成具有0-2个其他杂原子作为环成员的5或6-元环；各Rh独立选自下组：C1-8烷基、C2-8烯基、C2-8炔基、C1-8羟基烷基、C1-8卤代烷基和C3-6环烷基；或者当R5、R6、R7、R8和R9中的两个连接到Ar2的相邻环顶点，它们任选结合从而形成具有0、1或2个选自O或N的杂原子作为环成员的5或6元环。
在一些实施方式中，式I化合物是其中的Ar1选自下组的那些：苯基、萘基、吡啶基、吡嗪基、哒嗪基、嘧啶基、三嗪基、喹啉基、喹喔啉基和嘌呤基，各个任选地被R3、R3a、R3b、R4和R4a取代。
在其他实施方式中，式I化合物是其中的Ar1选自下组的那些：苯基、萘基和吡啶基，各个任选地被R3、R3a、R3b、R4和R4a取代。
在还有的其他实施方式中，式I化合物是其中的Ar2选自下组的那些：苯基、吡唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、氧杂噻二唑基(oxathiadiazolyl)、吡咯基、噻唑基、异噻唑基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并吡唑基、苯并三唑基、吡唑并[3,4-b]吡啶、吡唑并[3,4-d]嘧啶、咪唑并[4,5-b]吡啶、咪唑并[1,5-a]吡啶和吡咯并[2,3-b]吡啶，各个任选地被R5、R6和R7取代。
在还有的其他实施方式中，式I化合物是其中的Ar2选自下组的那些：吡唑基、咪唑基和三唑基，各个被R5、R6和R7取代。
在某些实施方式中，式I化合物是那些化合物，其中Ar1选自下组：苯基、萘基和吡啶基，各个被R3、R3a、R3b、R4和R4a中的1-5个取代基取代；和Ar2选自下组：吡唑基、咪唑基和三唑基，各个被R5、R6和R7取代。
在选择的实施方式中，式I化合物是那些化合物，其中Ar1为苯基，被R3、R3a、R3b、R4和R4a中的1-5个取代基取代；和Ar2选自下组：吡唑基、咪唑基、苯并咪唑基、苯并吡唑基、吡唑并[3,4-b]吡啶、吡唑并[3,4-d]嘧啶、咪唑并[4,5-b]吡啶、咪唑并[1,5-a]吡啶和吡咯并[2,3-b]吡啶，各个任选地被R5、R6和R7取代。
本发明还有的其他实施方式是式Ia、Ia1、Ia2、II、III和IV化合物。
因此，在一些实施方式中，化合物是式Ia所示的那些：
或其药学上可接受的盐、旋转异构体或光学异构体，其中，R3和R4独立选自下组：H、卤素、-Re、-CN和-SO2Re；且基团R1a、R2a和Ar2具有以上式I或提供的其他实施方式中提供的含义。
在还有的式I或Ia的其他实施方式中，Ar2是杂芳基；在其他实施方式中，Ar2是杂芳基，任选被取代和通过氮原子环顶点连接到分子的其余部分；和在还有的其他实施方式中，Ar2具有式：
其中，R5、R6和R7独立选自下组：H、卤素、-Rh、-CN、-SO2Rh、-CO2Rf、-CONRfRg和Y，其中，-Rh、Rf、Rg和Y具有以上式I中提供的含义。
在一组选择的实施方式中，化合物具有式：
或其药学上可接受的盐、旋转异构体或光学异构体，其中，R4选自下组：F和Cl；且基团R1a、R2a、R3和Ar2具有以上式I或Ia、或提供的其他实施方式中提供的含义。
在另一组选择的实施方式中，化合物具有式：
或其药学上可接受的盐、旋转异构体或光学异构体，其中，R3选自下组：H、卤素、C1-8烷基、C1-8卤代烷基和C1-8烷氧基；R1a和R2a独立选自下组：H、C1-8烷基、C1-8卤代烷基、C1-8烷氧基和C1-8羟基烷基；且Ar2具有以上式I或Ia、或提供的实施方式中提供的含义。
在还有的另一组选择的实施方式中，化合物具有式：
或其药学上可接受的盐、旋转异构体或光学异构体，其中，R1a和R2a独立选自下组：H、C1-8烷基、C1-8卤代烷基、C1-8烷氧基和C1-8羟基烷基；且R5、R6和R7独立选自下组：H、卤素、-Rh、-CN、-SO2Rh、-CO2Rf、-CONRfRg和Y；其中，-Rh、Rf、Rg和Y具有以上式I中提供的含义。
在还有的另一组选择的实施方式中，化合物具有式：
或其药学上可接受的盐、旋转异构体或光学异构体，其中，R1a和R2a独立选自下组：H、C1-8烷基、C1-8卤代烷基、C1-8烷氧基和C1-8羟基烷基；和R5、R6和R7独立选自下组：H、卤素、-Rh、-CN、-SO2Rh、-CO2Rf、-CONRfRg和Y；其中，-Rh、Rf、Rg和Y具有以上式I中提供的含义。
在还有的另一组选择的实施方式中，化合物具有式：
或其药学上可接受的盐、旋转异构体或光学异构体，其中，R1a和R2a各自独立选自下组：H、C1-8烷基、C1-8卤代烷基、C1-8烷氧基和C1-8羟基烷基；且R5和R7各自独立选自下组：H、卤素、-Rh、-CN、-SO2Rh、-CO2Rf、-CONRfRg和Y；其中，-Rh、Rf、Rg和Y具有以上式I中提供的含义。
对于以上任一实施方式来说，当Y存在时，选择的实施方式是其中的Y选自下组的那些：吡啶基、嘧啶基、咪唑基、噁唑基、噁二唑基、三唑基、噻唑基、咪唑啉基和吡唑基。
特别感兴趣的特定化合物是表1中提供的那些，和它们的药学上可接受的盐、水合物或N-氧化物、旋转异构体和其立体同分异构体。
化合物的制备
如在以下实施例中所提供的，本领域技术人员可采用组分组装的方式制备本发明的化合物和中间体。
IV.药物组合物
除了以上提供的化合物，用于调节人类和动物CCR1活性的组合物通常包含药用载体或稀释剂。
如本文所用，术语"组合物"意在包括包含特定含量的特定成分的产品，和直接或间接由特定含量的特定成分的组合构成的任何产品。“药学上可接受”是指载体、稀释剂或赋形剂必须与制剂的其他组分相容并且对其接受者无害。
为施用本发明化合物药物组合物可以方便地以单位剂型存在，并可以通过药剂学和药物传递领域任何已知方法制备。所有方法包括使活性成分与构成一种或多种辅助成分的载体结合的步骤。通常，通过均匀地和紧密地将活性成分与液体载体或细碎的固体载体或两者结合制备药物组合物，然后，如果需要的话，使产物成形为所需制剂。活性目标化合物以根据疾病的进展或病症获得所需效果的足够的量包含在药物组合物内。
含有活性成分的药物组合物可以是适于口服使用的形式，例如作为片剂，糖锭剂，锭剂，水性或油性悬浮液，可分散粉末或颗粒，美国专利申请2002-0012680中所描述的乳剂和自乳化剂，硬或软胶囊，糖浆剂，酏剂，溶液，口腔贴剂，口服凝胶剂，口香糖，咀嚼片剂，泡腾粉末和泡腾片剂。可以根据本领域已知的制备药物组合物的任何方法制备用于口服使用的组合物，为提供药学上美观和可口的制剂，该组合物可以包含一种或多种选自下组的药剂：甜味剂，调味剂，着色剂，抗氧化剂和防腐剂。片剂包含活性成分，与适合片剂制备的无毒药学上可接受的赋形剂混合。这些赋形剂可以是，例如，惰性稀释剂，如纤维素，二氧化硅，氧化铝，碳酸钙，碳酸钠，葡萄糖，甘露醇，山梨醇，乳糖，磷酸钙或磷酸钠；造粒剂和崩解剂，例如，玉米淀粉或海藻酸；结合剂，例如PVP，纤维素，PEG，淀粉，明胶或阿拉伯胶；和润滑剂，例如硬脂酸镁，硬脂酸或滑石。片剂可以是未包衣或它们可以通过已知技术被包衣，肠溶或以其它方式，以延迟在胃肠道中崩解和吸收，从而提供较长时期的持续作用。例如，可以使用时间延迟材料如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。它们也可以通过美国专利号为4,256,108、4,166,452和4,265,874中描述的方法进行包衣从而形成用于控制释放的渗透治疗片剂。
口服使用的制剂还可以呈现为硬明胶胶囊，其中活性成分与惰性固体稀释剂混合，例如，碳酸钙，磷酸钙或高岭土，或者呈现为软明胶胶囊，其中活性成分与水混合或油介质，例如花生油，液体石蜡或橄榄油。另外，乳剂可以用非水可混溶的成分如油来制备，并采用表面活性剂如单-二甘油酯，聚乙二醇酯等进行稳定。
水性悬浮液含有活性物质，混合有适于制备水性悬浮液的赋形剂。这样的赋形剂是悬浮剂，例如羧甲基纤维素钠，甲基纤维素，羟丙基纤维素，海藻酸钠，聚乙烯吡咯烷酮，黄蓍树胶和阿拉伯树胶：分散剂或湿润剂可以是天然存在的磷脂，例如卵磷脂，或环氧烷与脂肪酸的缩合产物，例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或环氧乙烷与长链脂族醇的缩合产物，例如十七乙烯氧基十六醇，或环氧乙烷与由脂肪酸和己糖醇衍生的偏酯的缩合产物，如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯，或环氧乙烷与由脂肪酸和己糖醇酐衍生的偏酯的缩合产物，例如聚乙烯山梨糖醇酐单油酸酯。水性悬浮液也可含有一种或多种防腐剂，例如对羟基苯甲酸乙酯或正丙酯，一种或多种着色剂，一种或多种调味剂，和一种或多种甜味剂，如蔗糖或糖精。
油性悬浮液可通过将活性成分悬浮在植物油，例如花生油，橄榄油，芝麻油或椰子油，或在矿物油如液体石蜡来配制。油性悬浮液可含有增稠剂，例如蜂蜡，硬石蜡或鲸蜡醇。可加入甜味剂，如上面列出的那些，和调味剂以提供可口的口服制剂。这些组合物可以通过加入抗氧化剂，例如抗坏血酸来保存。
适合通过加入水制备水性悬浮液的分散粉末和颗粒提供活性成分与分散剂或润湿剂，悬浮剂和一种或多种防腐剂的混合。合适的分散或润湿剂和悬浮剂由上文已提及的举例说明。也可以存在另外的赋形剂，例如甜味剂，调味剂和着色剂。
本发明的药物组合物也可以是水包油乳剂形式。油相可以是植物油，例如橄榄油或花生油，或矿物油，例如液体石蜡或这些的混合物。合适的乳化剂可以是天然存在的树胶，例如阿拉伯树胶或黄蓍树胶，天然存在的磷脂，例如大豆，卵磷脂和由脂肪酸和己糖醇酐衍生的酯或偏酯，例如一油酸山梨糖醇酐酯，所述偏酯与环氧乙烷的缩合产物，例如聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯。乳剂也可含有甜味剂和调味剂。
糖浆剂和酏剂可以用甜味剂配制，例如甘油，丙二醇，山梨醇或蔗糖。这样的制剂还可以含有缓和剂，防腐剂和调味剂和着色剂。口服溶液可与例如，环糊精，PEG和表面活性剂组合来制备。
药物组合物可以是无菌可注射水性或油性悬浮液的形式。这种悬浮液可以根据已知技术使用那些适宜的如上所述的分散剂或润湿剂和悬浮剂剂来配制。无菌注射制剂还可以是在无毒的胃肠外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如在1,3-丁二醇中的溶液。可以使用的可接受的媒介物和溶剂是水，林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。此外，无菌不挥发性油通常用作溶剂或悬浮介质。为此目的，任何温和的固定油都可以使用，包括合成的单-或双酐酯。此外，脂肪酸如油酸也可用于注射剂的制备。
本发明的化合物也可以栓剂形式用于直肠给药。这些组合物可以通过将药物与合适的无刺激性的赋形剂混合进行制备，该赋形剂在常温下是固体，但在直肠温度下是液体，因此将在直肠中融化以释放药物。这样的材料包括可可脂和聚乙二醇。此外，该化合物可以溶液或软膏方式通过眼递送给药。更进一步地，可通过离子电渗贴剂等来实现本发明化合物的经皮递送。对于局部使用，使用含有本发明的化合物的霜剂，软膏剂，凝胶剂，溶液或悬浮液等。如本文所使用的，局部应用还意在包括使用漱口剂和含漱剂。
本发明的化合物还可以连接至载体，其是作为靶向药物载体的合适聚合物。这类聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮，吡喃共聚物，聚羟丙基-甲基丙烯酰胺-苯酚，聚羟乙基-天冬酰胺-苯酚或棕榈酰残基取代的聚环氧乙烷-聚赖氨酸。此外，本发明的化合物可连接到载体，其是一类可生物降解的聚合物，在实现药物的控制释放中是有用的，例如聚乳酸，聚乙醇酸，聚乳酸和聚乙醇酸的共聚物，聚ε-己内酯，聚羟基丁酸，聚正酯，聚缩醛，聚二氢吡喃，聚氰基丙烯酸酯和水凝胶的交联或两亲嵌段共聚物。聚合物和半渗透聚合物基质可以加工成成型制品，如瓣膜，支架，导管，假体等，在本发明的一个实施方式中，本发明的化合物连接到加工成为支架或支架-移植物装置的聚合物或半渗透聚合物基质。
V.治疗CCR1调节的疾病的方法
在还有的另一方面，本发明提供治疗CCR1介导的病症或疾病的治疗方法，所述方法将治疗有效量的上述式I化合物施用给患有该疾病或病症的对象。本文定义的“对象”包括动物，如哺乳动物，包括但不限于，灵长类(例如，人)、牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、大鼠、小鼠等。
CCR1提供干扰或促进免疫细胞功能特定方面的靶标，或更一般地，干扰与哺乳动物如人的多种细胞类型中与CCR1表达相关的功能。抑制CCR1的化合物特别用于为治疗目的调节单核细胞，巨噬细胞，淋巴细胞，粒细胞，NK细胞，肥大细胞，树突细胞，嗜中性粒细胞，和某些免疫衍生细胞(例如，破骨细胞)功能。因此，本发明涉及可用于预防和/或治疗各种炎性和免疫调节病症和疾病的化合物(参见Saeki等,CurrentPharmaceutical Design 9:1201-1208(2003))。
例如，可以施用抑制CCR1的一个或多个功能的所述化合物从而抑制(即减轻或预防)免疫病症相关的炎症或细胞浸润。结果是，可以抑制一个或多个炎性过程，如白细胞渗出或浸润，趋化性，胞吐作用(例如，酶，组胺的)或炎症介质的释放。例如，可以按照本发明方法抑制单核细胞浸润到炎症部位(例如，关节炎中受影响的关节，或进入MS中的CNS)。
类似地，施用促进CCR1的一个或多个功能的所述化合物从而刺激(诱导或增强)炎症反应，如白细胞渗出，趋化性，胞吐作用(例如，酶，组胺的)或炎症介质的释放，从而导致炎症过程的有利刺激。例如，可以募集单核细胞以对抗细菌感染。
可以采用本发明方法治疗与炎症，免疫疾病和感染相关的疾病和病症。在一个优选的实施方式中，疾病或病症是为了调节炎症或自体免疫反应，需要抑制或促进免疫细胞，例如单核细胞，巨噬细胞，淋巴细胞，粒细胞，NK细胞，肥大细胞，树突细胞，或某些免疫衍生细胞(例如，破骨细胞)的作用的疾病或病症。
在一组实施方式中，人或其他物种的疾病或病症，包括慢性疾病，可以采用CCR1功能调节剂治疗。这些疾病或病症包括：(1)过敏性疾病，如全身性过敏反应或超敏反应，药物过敏，昆虫叮咬过敏和食物过敏；(2)炎性肠疾病，如节段性回肠炎，溃疡性结肠炎，回肠炎和肠炎；(3)阴道炎；(4)银屑病和炎性皮肤病如皮炎，湿疹，过敏性皮炎，过敏性接触性皮炎，荨麻疹和瘙痒；(5)血管炎；(6)脊椎关节病；(7)硬皮病；(8)哮喘和呼吸道过敏性疾病如过敏性哮喘，过敏性鼻炎，超敏反应肺病等；(9)自体免疫疾病，如纤维组织肌痛，硬皮病，强直性脊柱炎，幼年型类风湿性关节炎，斯蒂尔病，多关节幼年类风湿性关节炎，少关节幼年类风湿性关节炎，风湿性多肌痛，类风湿性关节炎，牛皮癣关节炎，骨关节炎，多发性关节炎，多发性硬化症，系统性红斑狼疮，I型糖尿病，II型糖尿病，肾小球性肾炎等；(10)移植排斥反应(包括同种异体移植排斥和移植物抗宿主疾病)；和(11)其他疾病，其中不期望的炎性反应或免疫病症将得到抑制，如心血管疾病，包括动脉粥样硬化和再狭窄，肌炎，神经变性疾病(例如，阿尔茨海默病)，脑炎，脑膜炎，肝炎，肾炎，脓毒症，肉样瘤病，变应性结膜炎，耳炎，慢性阻塞性肺疾病，窦炎，白塞氏综合征和痛风；(12)骨质疏松症和骨的其他病症；(13)免疫介导的食物过敏，如腹腔疾病和(14)辐射诱导的肺疾病(RIPD)。参见例如Yang等,Am J Respir Cell Mol Biol.45(1):127-35(2011)。
在另一组实施方式中，疾病或病症可以用CCR1功能调节剂治疗。待用CCR1功能调节剂治疗的疾病的实例包括癌症，如多发性骨髓瘤和相关溶骨性骨疾病，心血管疾病，血管生成或新血管形成中发挥作用的疾病(肿瘤性疾病，视网膜病变和黄斑变性)，感染性疾病(病毒感染，例如，HIV和RSV感染和细菌感染)和免疫抑制疾病如器官移植症和皮肤移植症。术语“器官移植症”是指包括骨髓移植症和实体器官(例如，肾，肝，肺，心脏，胰腺或它们的组合)移植症。
因此本发明的化合物可用于各种炎性和免疫调节病症和疾病的预防和治疗。
根据待治疗的疾病和对象的状况，本发明的化合物可通过口服，肠胃外(例如，肌肉内，腹膜内，静脉内，ICV，脑池内注射或输注，皮下注射，或植入)给药，通过移植(例如，当化合物连接到支架装置时)，通过吸入喷雾，鼻，阴道，直肠，舌下或局部途径给药，且可以单独或一起配制在含有适合于各种给药途径的常规无毒的药学上可接受的载体、辅剂和媒介物的合适剂量单位制剂内。
在治疗或预防需要趋化因子受体调节的病症中，适当的剂量水平通常为约0.001至100毫克每千克患者体重每天，其可以以单剂量或多剂量给药。优选地，剂量水平将是每天约0.01到约25mg/kg；更优选地，每天约0.05到约10mg/kg。合适的剂量水平可以为每天约0.01到约25mg/kg，每天约0.05到约10mg/kg，每天约0.1到约5mg/kg。在该范围内，剂量可是是每天0.005-0.05、0.05-0.5或0.5-50mg/kg。对于口服给药，优选以包含1.0-1000毫克活性成分的片剂形式提供组合物给待治疗的患者，特别对于症状调节剂量包含1.0、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0、50.0、75.0、100.0、150.0、200.0、250.0、300.0、400.0、500.0、600.0、750.0、800.0、900.0和1000.0毫克的活性成分。化合物可以每天1至4次的方案给药，优选每天一次或两次。
然而，应该理解的是，对于任何特定患者具体的剂量水平和剂量频率可以改变，并将取决于多种因素，包括使用的具体化合物的活性，该化合物的代谢稳定性和起作用的时长，对象的年龄，体重，遗传特性，总体健康状况，性别和饮食，以及给药方式和时间，排泄速率，药物联用，以及正接受治疗的对象的特定疾病的严重程度。
可以采用本发明化合物、组合物和方法治疗或预防与炎症、免疫疾病、感染和癌症相关的疾病和病症。
本发明的化合物和组合物可以与具有相关用途的化合物和组合物联用从而预防和治疗目的病症或疾病，如炎性或自身免疫性疾病，病症和疾病，包括炎性肠病，类风湿性关节炎，骨关节炎，牛皮癣关节炎，多发性关节炎，多发性硬化症，过敏性疾病，银屑病，过敏性皮炎和哮喘，以及如上所述那些病状。
例如，在治疗或预防炎症或自体免疫或例如关节炎有关的骨损失中，本发明化合物和组合物可与抗炎或止痛剂联用，诸如阿片激动剂、脂氧合酶抑制剂，如5-脂氧合酶、环氧酶抑制剂，如环氧合酶-2抑制剂、白细胞介素抑制剂，如白介素-1抑制剂，NMDA拮抗剂、一氧化氮抑制剂或一氧化氮合成抑制剂、非载体抗炎剂或细胞因子抑制抗炎剂，例如与诸如对乙酰氨基酚，阿司匹林，可待因，芬太尼，布洛芬，吲哚美辛，酮咯酸，吗啡，萘普生，非那西丁，吡罗昔康，甾族镇痛剂，舒芬太尼，苏林酸，替尼达普等的化合物联用。同样地，本发明的化合物和组合物可以与上面列出的镇痛剂；增效剂如咖啡因，H2拮抗剂(例如，雷尼替丁)，二甲硅油，氢氧化铝或镁；减充血剂，如苯肾上腺素，苯丙醇胺，伪麻黄碱，羟甲唑啉，肾上腺素，萘甲唑啉，丁苄唑啉，六氢脱氧麻黄硷，或左旋脱氧麻黄碱；镇咳药剂如可待因，二氢可待因酮，咳美芬，咳必清，或右美沙芬；利尿剂；和镇静或非镇静抗组胺剂一起施用。
同样地，本发明的化合物和组合物可以与用于疾病或病症的治疗，预防，抑制或改善的其他药物联用，对于上述疾病或病症，本发明的化合物和组合物是有用的。这些其他药物可以以常规使用量通过某种途径，与本发明的化合物或组合物同时或顺序地施用。当本发明的化合物或组合物与一种或多种其它药物同时使用时，除了本发明的化合物或组合物外还包含该其他药物的药物组合物是优选的。因此，本发明的药物组合物包括除了本发明的化合物或组合物，还包含一种或多种其他活性成分或治疗剂的那些。可以与本发明的化合物或组合物或分别给药或在同一药物组合物内联用的其他治疗剂的实例包括，但不限于：(a)VLA-4拮抗剂；(b)皮质类固醇，诸如倍氯米松，甲基强的松龙，倍他米松，强的松，强的松龙(prenisolone)，地塞米松，氟替卡松，氢化可的松，布地奈德，曲安西龙，沙美特罗，沙美特罗，沙丁胺醇，福美雷司；(c)免疫抑制剂如环孢素(环孢素A，)，他克莫司(FK-506，)，雷帕霉素(西罗莫司，)和其他FK-506型免疫抑制剂，和霉酚酸酯，例如，霉酚酸酯(d)抗组胺药(H1-组胺拮抗剂)，如溴苯吡胺，扑尔敏，二氯苯吡胺，曲普利啶，氯马斯汀，苯海拉明，二苯拉林，曲吡那敏，羟嗪，甲地嗪，异丙嗪，异丁嗪，阿扎他定，赛庚啶，安他唑啉，非尼拉敏，嘧啶胺，阿司咪唑，特非那定，氯雷他定，西替利嗪，非索非那定，脱羧氯雷他定等；(e)非甾体抗哮喘药(例如，特布他林，奥西那林，非诺特罗，异他林，沙丁胺醇，比托特罗和吡布特罗)，茶碱，色甘酸钠，阿托品，异丙托溴铵，白三烯拮抗剂(例如，扎鲁司特，孟鲁司特，普仑司特，伊拉司特，泊比司特和SKB-106,203)，白三烯生物合成抑制剂(齐留通，Bay-1005)；(f)非甾体抗炎药(NSAIDS)，诸如丙酸衍生物(例如阿明洛芬，苯恶洛芬，布氯酸，卡洛芬，芬布芬，非诺洛芬，氟洛芬，氟比洛芬，布洛芬，吲哚洛芬，酮洛芬，咪洛芬，萘普生，奥沙普秦，吡洛芬，普拉洛芬，舒洛芬，噻洛芬酸和硫恶洛芬)，乙酸衍生物(例如，吲哚美辛，阿西美辛，阿氯芬酸，环氯茚酸，双氯芬酸，芬氯酸，芬克洛酸，芬替酸，呋罗芬酸，异丁芬酸，伊索克酸，奥品酸(oxpinac)，舒林酸，硫平酸，甲苯酰吡啶乙酸，齐多美辛和佐美酸)，芬那酸衍生物(如氟灭酸，甲氯芬那酸，甲芬那酸，尼氟酸和托芬那酸)，联苯羧酸衍生物(例如，二氟尼柳和氟苯柳)，昔康类(例如，异恶噻酰胺，吡罗昔康，舒多昔康和替诺昔康)，水杨酸酯(例如，乙酰水杨酸和柳氮磺吡啶)和吡唑啉酮(例如，阿扎丙宗，苯派龙(bezpiperylon)，非普拉宗，莫非保松，羟布宗和保泰松)；(g)环氧合酶-2(COX-2)抑制剂如塞来考昔和罗非昔布(h)磷酸二酯酶IV型(PDE IV)抑制剂；(i)金化合物如金诺芬和金硫葡萄糖；(j)肽和免疫调节分子的抗体调节剂，如依那西普英夫利昔单抗阿达木单抗妥珠单抗阿巴西普和高利单抗(k)抗体疗法，如奥索科龙(orthoclone)(OKT3)，达利珠单抗巴利昔单抗和英夫利昔单抗(l)趋化因子受体，尤其是CCR5，CXCR2，CXCR3，CCR2，CCR3，CCR4，CCR7，CX 3CRI和CXCR6的其它拮抗剂；(m)润滑剂或软化剂，如凡士林和羊毛脂；(n)角质层分离剂(例如，他扎罗汀)；(o)维生素D3衍生物，如：卡泊三烯或卡泊三醇(p)PUVA；(q)地蒽酚(r)阿维A酯和异维A酸和(s)多发性硬化症治疗剂，如干扰素β-1β干扰素硫唑嘌呤醋酸格拉替雷糖皮质激素(例如，泼尼松龙)和环磷酰胺；(t)DMARDS如甲氨蝶呤；(u)其它化合物，例如5-氨基水杨酸及其前药；羟氯喹；D-青霉胺；抗代谢物，如硫唑嘌呤，6-巯基嘌呤和甲氨蝶呤；DNA合成抑制剂，如羟基脲和微管干扰物如秋水仙碱。本发明化合物与第二活性成分的重量比可以变化，取决于各成分的有效剂量。通常，采用各自的有效剂量。因此，例如，当本发明的化合物与NSAID联用时，本发明的化合物与NSAID的重量比通常为约1000:1到约1:1000，优选约200:1到约1:200。本发明的化合物与其他活性成分的组合通常也在上述范围内，但在每种情况下，应使用有效剂量的各活性成分。
VI.实施例
提供实施例为举例说明，但不用于限制要求保护的发明。
下面所用的试剂和溶剂可从商业来源例如奥德里奇化学公司(密尔沃基，威斯康星州，美国)获得。采用瓦里安Mercury 400MHz核磁共振波谱仪记录1H-NMR光谱。提供相对于TMS的显著峰并按顺序制成表：多重性(s，单峰；d，双重峰；t，三重峰；q，四重峰；m，多重峰)和质子数。质谱结果报告为质量比电荷的比率，接着各离子的相对丰度(括号内)。在实施例中，为包含最常见原子同位素的M+H(或如所指出的，M-H)离子报告单一的m/e值。在所有情况下同位素模式对应于预期结构式。在惠普MSD电喷雾质谱上实施电喷雾电离(ESI)质谱分析，采用HP1100HPLC用于样品传递。通常分析物以0.1毫克/毫升溶解于甲醇中，1微升连同输送溶剂注入质谱仪，从100到1500道尔顿进行扫描。全部化合物采用正ESI模式进行分析，使用含1％甲酸的乙腈/水作为输送溶剂。以下提供的化合物也可以采用负ESI模式进行分析，使用2nM的NH4OAc的乙腈/水溶液作为输送系统。
本发明范围内的化合物可以如下所述，利用本领域技术人员已知的各种反应来合成。以下或在本申请的其他地方提供本发明的氮杂吲唑衍生物和某些化合物的有用路线的例子。在以下合成描述中，某些芳基哌嗪和杂芳亚基前体从商业来源获得。这些商业来源包括奥德里奇化学公司，安可乐斯有机物公司，瑞安科技股份有限公司，奥克伍德产品公司，兰开斯特化工，西格玛化工有限公司，兰开斯特化工有限公司，TCI-美国，阿法埃莎，达沃斯化学品和GFS化学品公司。某些相关芳基哌嗪化合物可以商购获得。其它可如美国专利申请号为11/008,774所描述的制备，其内容全部并入本文用于所有目的。此外，已采用标准化学利用合适的优化连接体，如本发明正文中描述的乙酰单元连接芳基哌嗪和杂芳亚基(不论市售获得或通过以下方法制备)。
本领域的技术人员也将理解可以采用替代方法合成本发明的目标化合物，文件正文内描述的方法不是穷举的，但为感兴趣的化合物提供广泛适用的和实际的路线。
本专利中要求保护的某些化合物可以以不同的对映异构体和非对映形式存在，这些化合物的全部该类变体都被要求保护。
区域同分异构是有机化学中常见性质，并且对于本文提供的某些结构类型是特别常见的。本领域技术人员将理解，对于本文所述的化合物，与杂芳环系统的偶联反应可导致可检测的区域同分异构体的任一或混合物。
在该文本中的用于合成关键化合物的实验步骤的详细描述导致获得由识别它们的物理数据和与它们相关的结构叙述所描述的分子。
本领域的技术人员也将理解，在有机化学中的标准后处理程序中，频繁使用酸和碱。如果母体化合物具有必要的固有酸度或碱度，在该专利中描述的实验程序中有时产生它们的盐。
实施例
通用方法A：HATU偶合.在室温下，所需胺(1.2当量)和羧酸与Et3N(1-2当量)在THF(0.2M)中混合，随后加入HATU(1.3当量)。反应完成后，采用EtOAc稀释混合物，用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤并减压浓缩。
通用方法B：酰氯形成和偶合.所需羧酸和在含2滴DMF的CHCl3(0.25M)中稀释。在室温下加入草酰氯(1.2当量)，从混合物逸出气体。20-30分钟后，加入所需胺(1.2当量)，然后加入Et3N(2.5当量)或等量(相对CHCl3)饱和NaHCO3溶液。反应完成后，采用EtOAc稀释混合物，用NaHCO3和盐水洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤并减压浓缩。
实施例1：2-[4-氨基-3-(1H-咪唑基-2-基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]乙酮的合成
a)向500毫升圆底烧瓶中加入4-氟苯基肼盐酸盐(18.9克，116毫摩尔)、3-氟-2-甲酰基吡啶(14.2克，113毫摩尔)、K2CO3(47.0克，340毫摩尔)和DMF(150毫升)。在油浴中加热浆液至120℃，41小时，冷却反应混合物并倒入1.2升水。通过真空过滤收集棕黄色沉淀并用3x H2O洗涤。固体溶解于CH2Cl2，采用盐水洗涤得到的溶液，在Na2SO4上干燥、过滤并减压浓缩得到棕色固体。采用200毫升9:1己烷:EtOAc研磨固体并干燥从而得到1-(4-氟苯基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶(16.3克，68％)为棕黄色粉末。MS:(ES)m/z计算C12H9FN3[M+H]+214.1，实测214.1。
b)在2-L帕尔瓶内将以上获得的杂环(16.3克，77毫摩尔)溶解于380甲醇并用20％Pd(OH)2/C(10.7克)处理。用氢气吹扫并填充系统(3x)，然后在56psi氢气下振荡。1天后加入额外的8克催化剂。一旦原料耗尽，采用氮气冲瓶，通过硅藻土垫过滤反应混合物，采用几份甲醇洗涤。减压浓缩滤液从而得到1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶(13.7克，82％)为亮棕黄色固体。MS:(ES)m/z计算C12H13FN3[M+H]+218.1，实测218.1。
c)采用通用方法A由以上2-(4-氨基-3-(1H-咪唑基-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙酸和1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶制备化合物。通过反相HPLC(C18柱，含0.1％TFA的乙腈-H2O作为洗脱液)纯化产物从而得到所需产物为白色固体(6.4毫克)。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ8.35(s,1H),8.15(s,1H),7.54(m,2H),7.27(m,4H),5.70(s,2H),4.00(m,2H),2.91(t,J＝6.2Hz,2H),2.18(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C22H20FN10O[M+H]+459.18，实测459.1。
2-(4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)乙酸的合成
a)向4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑(15克，81.3毫摩尔)的DMF溶液中加入2-溴乙酸乙酯(13.6克，81.3毫摩尔)和碳酸钾(12.4克，89.4毫摩尔)。在搅拌下于55℃加热混合物10小时。冷却到室温后，采用水(100毫升)稀释反应混合物，并采用乙酸乙酯(3×150毫升)萃取。合并的有机层用盐水洗涤后干燥(Na2SO4)、过滤并真空浓缩。通过快速色谱(SiO2,0-30％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化粗残留物，从而获得所需产物(18.5克，68.4毫摩尔，84％)。
b)向2-(4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)乙酸乙酯(7.5克，27.7毫摩尔)在THF(100毫升)和水(50毫升)中的溶液内加入LiOH·H2O(2.33克，55.4毫摩尔)。在60℃搅拌混合物5小时。冷却到室温后，采用1N HCl(80毫升)酸化混合物并用1:2IPA/CHCl3(2x 150毫升)萃取，合并的有机层用盐水洗涤后干燥(Na2SO4)、过滤并真空浓缩，从而得到所需化合物(6克，24.7毫摩尔，89％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ4.98(s,2H),2.21(s,3H)；MS:(ES)m/z计算C7H6Cl F3N2O2[M+H]+243.0，实测243.0。
实施例2：2-[4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]乙酮的合成
采用通用方法B由2-(4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)乙酸和1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶制备化合物。采用2x 1M NaHSO4和2x 1.5MKOH洗涤产物混合物，通过硅塞洗脱有机物。浓缩获得的浆液从而得到白色固体，采用1:1己烷:EtOAc研磨，从而得到标题化合物，为结晶白色固体(75.9毫克)。1H NMR(400MHz,CDCl3,旋转异构体混合物)δ8.34(s,0.7H),7.57(s,0.3H),7.44(m,2H),7.15(m,2H),5.24(s,0.4H),5.13(s,1.6H),3.92(m,0.5H),3.84(m,1.5H),2.87(m,2H),2.33(s,2.3H),2.32(s,0.7H),2.12(m,1.5H),2.05(m,0.5H)；MS:(ES)m/z计算C19H17ClF4N5O[M+H]+442.1，实测442.0。
实施例3：2-(4-氯苯基)-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]乙酮的合成
采用通用方法A由4-氯苯基乙酸和1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶制备化合物。采用4:1CH3CN:H2O结晶产物混合物从而获得标题化合物，为白色结晶固体(37.6毫克)。1H NMR(400MHz,MeOD-d4,旋转异构体混合物)δ8.18(s,0.9H),7.84(s,0.1H),7.56(m,2H),7.25-7.37(m,6H),4.02(s,0.2H),3.92(s,1.8H),2.81(t,J＝6.2Hz,2H),2.49(m,2H),1.90(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C20H18ClFN3O[M+H]+370.1，实测370.1。
实施例4：1-[1-(4-氯-3-甲氧基-苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-[4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]乙酮和1-(2-(4-氯-3-甲氧基苯基)-6,7-二氢-2H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4(5H)-基)-2-(4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)乙酮的合成
a)在5毫升CHCl3和2滴DMF中稀释2-(4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)乙酸(255毫克，1.05毫摩尔)。缓慢加入草酰氯(105微升，1.2毫摩尔)获得气体释放。30分钟后，加入160毫克(1毫摩尔)4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-b]吡啶·HCl，随后加入0.75毫升3M K2CO3。30分钟后，加入1毫升3M KOH和1毫升MeOH到反应浆液并搅拌混合物90分钟。采用盐水洗涤反应浆液，有机层在MgSO4上干燥、过滤并浓缩得到酰胺，为棕黄色固体(184毫克，53％)，不需进一步纯化被使用。MS:(ES)m/z计算C13H14ClF3N5O[M+H]+348.1，实测348.0。
b)以上形成的酰胺(104毫克，0.3毫摩尔)与5-溴-2-氯苯甲醚(199毫克，0.9毫摩尔)、0.3毫升二氧六环、Cu(I)I(11.4毫克，0.06毫摩尔，20％)、(±)-反式-N,N’-二甲基环己烷-1,2-二胺(21.3毫克，0.15毫摩尔，50％)和K2CO3(82.9毫克，0.6毫摩尔)混合。加热浆液到120℃，直到反应完成。通过反相HPLC(C18柱，含0.1％TFA的乙腈-H2O作为洗脱液)纯化产物，从而提供区域同分异构体。第一洗脱，化合物A：分离1-[1-(4-氯-3-甲氧基-苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-[4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]乙酮，为白色泡沫(8.1毫克)。1H NMR(400MHz,CDCl3,旋转异构体混合物)δ8.37(s,0.7H),7.60(s,0.3H),7.41(d,J＝8.4Hz,1H),7.19(d,J＝2.6Hz,1H),6.92(dd,J＝2.2,8.4Hz,1H),5.24(s,0.5H),5.14(s,1.5H),3.97(s,0.6H),3.95(s,2.4H),3.85(m,2H),2.92(m,2H),2.34(s,2.6H),2.33(s,0.4H),2.13(m,1.4H),2.05(m,0.6H)；MS:(ES)m/z计算C20H19F3N5O2[M+H]+488.1，实测488.1。第二洗脱，化合物B：分离1-(2-(4-氯-3-甲氧基苯基)-6,7-二氢-2H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4(5H)-基)-2-(4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)乙酮，为白色固体(26.8毫克).1H NMR(400MHz,CDCl3,旋转异构体混合物)δ8.57(s,1H),7.35(d,J＝8.4Hz,1H),7.26(d,J＝2.2Hz,1H),7.11(dd,J＝2.2,8.4Hz,1H),5.22(s,0.2H),5.16(s,1.8H),3.95(s,2.5H),3.86(s,0.5H)3.84(m,2H),2.93(t,J＝6.6Hz,2H),2.32(s,3H),2.19(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C20H19F3N5O2[M+H]+488.1，实测488.0。
实施例5a：1-[1-(4-氯苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-[4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]乙酮和1-(2-(4-氯苯基)-6,7-二氢-2H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4(5H)-基)-2-(4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)乙酮的合成
a)4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-b]吡啶·HCl(319毫克，2毫摩尔)与Boc2O(480毫克，2.2毫摩尔)和CH2Cl2(10毫升)中的K2CO3(1.3毫升,3M水性的，2当量)混合。15小时后，起始胺耗尽(LCMS)。采用盐水洗涤反应浆液，有机层在MgSO4上干燥、过滤并浓缩从而得到粘稠黄色的油(446毫克，96％)，无需进一步纯化被使用。MS:(ES)m/z计算C11H18N3O2[M+H]+224.1，实测224.2。
b)以上形成的Boc-胺(112毫克，0.5毫摩尔)与4-氯碘苯(239毫克，1毫摩尔)、6毫升二氧六环、Cu(I)I(12毫克，0.06毫摩尔,10％)、(±)-反式-N,N’-二甲基环己烷-1,2-二胺(18.5毫克，0.13毫摩尔,25％)和K2CO3(138毫克，1毫摩尔)混合。加热浆液至110℃过夜。获得大致相同量的两区域同分异构体。采用20毫升EtOAc稀释反应浆液并用盐水和2x 1M NaHSO4洗涤。有机层在MgSO4上干燥、过滤和浓缩得到橙色油，无需进一步纯化被使用。
c)以上获得的区域异构体混合物(66毫克，总共约0.25毫摩尔)与2-(4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)乙酸(67毫克，0.275毫摩尔)、HATU(114毫克，0.3毫摩尔)和含Et3N(52微升，0.38毫摩尔)的THF(1毫升)混合。90分钟后，采用EtOAc稀释反应浆液、采用水洗涤并凝缩。通过反相HPLC(C18柱，含0.1％TFA的乙腈-H2O作为洗脱液)纯化残留物，从而得到两区域同分异构体。第一洗脱，化合物A：分离1-[1-(4-氯苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-[4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]乙酮，为白色固体(1.7毫克)。1H NMR(400MHz,CDCl3,旋转异构体混合物)δ8.36(s,0.8H),7.59(s,0.2H),7.43(s,4H),5.24(s,0.4H),5.13(s,1.6H),3.92(m,0.4H),3.85(m,1.6H),2.90(m,1.8H),2.77(m,0.2H),2.34(s,2.4H),2.32(s,0.6H),2.13(m,1.5H),2.05(m,0.5H)；MS:(ES)m/z计算C19H17Cl2F3N5O[M+H]+458.1，实测458.0。第二洗脱，化合物B：分离1-(2-(4-氯苯基)-6,7-二氢-2H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4(5H)-基)-2-(4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)乙酮，为白色固体(31.0毫克)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.56(s,1H),7.56(m,2H),7.36(m,2H),5.16(s,2H),3.84(s,2H),2.93(t,J＝6.6Hz,2H),2.32(s,3H),2.19(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C19H17Cl2F3N5O[M+H]+458.1，实测458.0。
实施例5b：1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基-乙酮的合成
a)向包含1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶(0.869克，4毫摩尔)和10毫升CH2Cl2中的3M K2CO3(aq)(2.6毫升,8毫摩尔)的烧瓶内滴加氯乙酰氯(0.35毫升,4.4毫摩尔)。20分钟后，采用5毫升水稀释浆液并分层。采用盐水和2x 1M NaHSO4洗涤有机层，在MgSO4上干燥、过滤并浓缩得到棕黄色泡沫状固体(1.05克，89％)。MS:(ES)m/z计算C14H14ClFN3O[M+H]+294.1，实测294.1。
b)在1.5毫升THF中稀释以上获得的α-氯乙酰胺(147毫克，0.5毫摩尔)，并采用K2CO3(138毫克，1毫摩尔)和3-碘-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(130毫克，0.53毫摩尔)处理。浆液加热到75℃。完成后，加入4毫升甲醇和50毫克10％Pd/C到容器。然后在帕尔仪器上，在50psi H2下摇动反应混合物过夜。通过硅藻土过滤反应混合物，采用甲醇洗涤并浓缩。通过(C18柱，含0.1％TFA的乙腈-H2O作为洗脱液)纯化残留物，从而提供30.9毫克产物，为白色结晶固体。1H NMR(400MHz,CDCl3,旋转异构体混合物)δ8.54(dd,J＝1.5,4.4Hz,1H),8.35(s,0.8H),8.14(s,1H),8.11(m,1H),7.75(s,0.2H),7.43-7.51(m,2H),7.12-7.21(m,3H),5.70(s,0.4H),5.59(s,1.6H),3.91(m,2H),2.87(m,2H),2.15(m,1.6H),2.05(m,0.4H)；MS:(ES)m/z计算C20H18FN6O[M+H]+377.1，实测377.1。
实施例6：1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基-乙酮的合成
a)采用干燥THF洗涤具有搅拌子的垫片封盖瓶，并充入4-氯-5-甲基-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(94毫克，0.5毫摩尔)和1毫升干燥THF。在氮气下，在冰浴中冷却反应容器，之后滴加520微升MeMgBr(1.55毫摩尔，3M，在Et2O中)。40分钟后，加入额外的150微升MeMgBr(0.45毫摩尔)。完成后，3毫升1M NaHSO4处理反应混合物并用3x EtOAc萃取。合并有机层，在MgSO4上干燥、过滤并浓缩从而得到黄色-棕黄色固体(69毫克，79％)，无需进一步纯化被使用。MS:(ES)m/z计算C7H12ClN2O[M+H]+175.1，实测175.1。
b)在1.2毫升THF和500微升DMF中稀释以上获得的甲醇(carbinol，69毫克，0.4毫摩尔)，并用K2CO3(111毫克，0.8毫摩尔)和2-氯-1-(1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4(5H)-基)乙酮(118毫克，0.4毫摩尔)处理。加热浆液到75℃。采用EtOAc稀释反应浆液并用盐水洗涤、在MgSO4上干燥、过滤并浓缩。通过反相HPLC(C18柱，含0.1％TFA的乙腈-H2O作为洗脱液)纯化残留物，从而获得69mg所需产物(43％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3,旋转异构体混合物)δ8.37(s,0.8H),7.63(s,0.2H),7.42-7.46(m,2H),7.13-7.19(m,2H),5.14(s,0.4H),5.03(s,1.6H),3.90(m,0.4H),3.87(m,1.6H),2.86(m,2H),2.28(s,2.4H),2.25(s,0.6H),2.05-2.13(m,2H),1.62(s,6H)；MS:(ES)m/z计算C21H24ClFN5O2[M+H]+432.2，实测432.1。
实施例7：2-(4-氯-5-甲基-3-嘧啶-2-基-吡唑-1-基)-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]乙酮三氟乙酸盐和2-(4-氯-3-甲基-5-嘧啶-2-基-吡唑-1-基)-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]乙酮三氟乙酸盐的合成
在1.2毫升2:1THF:DMF中稀释2-氯-1-(1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4(5H)-基)乙酮(118毫克，0.4毫摩尔)，并用K2CO3(111毫克，0.8毫摩尔)和2-(4-氯-5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶(78毫克，0.4毫摩尔)处理。加热浆液到75℃并搅拌过夜。如LCMS所评估，存在具有相同MW的两种同分异构体。采用EtOAc稀释反应浆液并用盐水洗涤、在MgSO4上干燥、过滤并浓缩。通过反相HPLC(C18柱，含0.1％TFA的乙腈-H2O作为洗脱液)纯化残留物，从而得到两种区域-同分异构体。第一洗脱同分异构体：获得2-(4-氯-5-甲基-3-嘧啶-2-基-吡唑-1-基)-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]乙酮三氟乙酸盐：25毫克，为白色针状晶体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.86(d,J＝5.1Hz,2H),8.13(s,1H),7.59(m,2H),7.44(t,J＝4.8Hz,1H),7.34(m,2H),5.50(s,2H),3.84(m,2H),2.87(t,J＝6.2Hz,2H),2.24(s,3H),2.02(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C22H20ClFN7O[M+H]+452.1，实测452.1。第二洗脱同分异构体：获得2-(4-氯-3-甲基-5-嘧啶-2-基-吡唑-1-基)-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]乙酮三氟乙酸盐：8.8毫克，为浅橙色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,旋转异构体混合物)δ8.87(d,J＝5.1,1.6H),8.81(d,J＝5.1Hz,0.4H),7.96(s,1H),7.66(m,0.4H),7.56(m,1.6H),7.42(t,J＝4.8,1H),7.33(m,2H),5.72(s,2H),3.84(m,2H),2.85(t,J＝6.2Hz,2H),2.23(s,3H),1.99(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C22H20ClFN7O[M+H]+452.1，实测452.1。
实施例8：1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-[5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]乙酮的合成
在1.2毫升2:1THF:DMF中稀释2-氯-1-(1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4(5H)-基)乙酮(118毫克，0.4毫摩尔)，并用K2CO3(111毫克，0.8毫摩尔)和5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑(60毫克，0.4毫摩尔)处理。加热浆液到75℃ 2小时。通过正向快速色谱(24g柱，采用10-80％EtOAc的己烷溶液洗脱)纯化反应浆液，从而得到109毫克(67％)标题化合物，为白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.36(s,0.8H),7.59(s,0.2H),7.42-7.47(m,2H),7.12-7.25(m,2H),5.25(s,0.4H),5.14(s,1.6H),3.92(m,0.4H),3.86(m,1.6H),2.86(t,J＝6.2Hz,2H),2.37(s,2.4H),2.36(m,0.6H),2.11(m,1.6H),2.04(m,0.4H)；MS:(ES)m/z计算C19H18F4N5O[M+H]+408.1，实测408.1。
实施例9：2-[4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]丙-1-酮的合成
a)在75℃，将溴丙酸乙酯(1.448克，8毫摩尔)、4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑(1.476克，8毫摩尔)和K2CO3(2.211克，16毫摩尔)在24毫升2:1THF:DMF中混合3小时。蒸发挥发成分，残留物置于20毫升4:1己烷:EtOAc内成浆并用3x H2O和2x盐水洗涤。干燥有机层并通过快速色谱(SiO2,80g柱,采用5-80％EtOAc的己烷溶液洗脱)纯化，从而得到1.859克(82％)标题化合物，为无色油。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.95(q,J＝7.3Hz,1H),4.21(q,J＝7.3Hz,2H),2.27(s,3H),1.83(d,J＝7.3Hz,3H),1.81(t,J＝7.3Hz,1H)；MS:(ES)m/z计算C10H13ClF3N2O2[M+H]+285.1，实测285.0。
b)以上获得的酯在13毫升THF和6.5毫升2M的LiOH内成浆。反应结束后，蒸发挥发成分并加入9毫升2M HCl从而沉淀产物。采用水(3x 5毫升)洗涤沉淀并真空干燥至恒重。获得标题化合物为白色固体(1.53克，82％)。MS:(ES)m/z计算C8H9ClF3N2O2[M+H]+257.0，实测257.0。
c)采用通用方法B由2-(4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)丙酸和1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶制备标题化合物。采用2x 1M NaHSO4洗涤产物混合物。通过快速色谱(SiO2，24g柱，采用5-50％EtOAc的己烷溶液洗脱)纯化反应浆液，从而获得137毫克(75％)目标化合物，为白色泡沫。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.41(s,1H),7.43(m,2H),7.15(m,2H),5.52(q,J＝7.0Hz,1H),3.75(m,1H),3.41(m,1H),2.81(m,2H),2.28(s,3H),1.85-1.99(m,2H),1.81(d,J＝7Hz,1H)；MS:(ES)m/z计算C20H19ClF4N5O[M+H]+456.1，实测456.1。
实施例10：2-(4-氯苯基)-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]乙酮的合成
采用通用方法B由3-三氟甲基苯基乙酸和1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶制备化合物。采用2x 1M NaHSO4洗涤产物混合物。通过快速色谱(SiO2,24g柱，采用5-50％EtOAc的己烷溶液洗脱)纯化反应浆液，从而获得83毫克(69％)标题化合物，为白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3,旋转异构体混合物)δ8.45(s,1H),7.42-7.55(m,6H),7.14(m,2H),4.08(s,0.3H),3.95(s,1.7H),3.77(m,2H),2.83(t,J＝6.6Hz,2H),2.01(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C21H18F4N3O[M+H]+404.1，实测404.1。
实施例11：2-[4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]-1-[1-(4-氟苯基)-3-甲基-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]乙酮的合成
a)向100毫升圆底烧瓶内加入4-氟苯基肼盐酸盐(3.33克，20.5毫摩尔)、K2CO3(8.29克，60毫摩尔)和DMF(27毫升)。向浆液中加入2.78g(20毫摩尔)1-(3-氟吡啶-2-基)乙酮，产生黄色悬浮液。加热混合物到120℃，在24小时原料耗尽。浆液冷却至室温并加入70毫升H2O从而沉淀出产物。在玻璃介质上收集固体并用3x H2O洗涤。在60℃干燥固体从而获得产物，为棕黄色固体(3.82克，84％)。MS:(ES)m/z计算C13H11FN3[M+H]+228.1，实测228.1。
b)在帕尔烧瓶内将甲醇(80毫升)、20％Pd(OH)2/C(472毫克，约0.33毫摩尔)和1-(4-氟苯基)-3-甲基-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶(3.82克，16.8毫摩尔)混合并用H2吹扫。烧瓶内充入55psi H2然后摇动浆液过夜。通过硅藻土过滤混合物，采用数份甲醇洗涤。然后浓缩滤液从而得到3.73g(96％粗产率)橙油，静置固化。MS:(ES)m/z计算C13H15FN3[M+H]+232.1，实测232.1。
c)采用通用方法B由2-(4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)乙酸和1-(4-氟苯基)-3-甲基-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶制备标题化合物。采用1M NaHSO4洗涤产物混合物。通过快速色谱(SiO2，24g柱，用5-50％EtOAc的己烷溶液洗脱)纯化反应浆液，从而得到75毫克(41％)标题化合物，为白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3,旋转异构体混合物)δ7.47(m,0.8H),7.40(m,1.2H),7.14(m,2H),5.11(s,1.2H),5.01(s,0.8H),3.81(m,2H),2.85(m,2H),2.29-2.40(m,6H),2.07(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C20H19ClF4N5O[M+H]+456.1，实测456.1。
实施例12：1-(1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4(5H)-基)-2-(2-(三氟甲基)苯基)乙酮的合成
采用通用方法B由2-三氟甲基苯基乙酸和1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶制备化合物。采用1M NaHSO4洗涤产物混合物。通过快速色谱(SiO2,24g柱，采用5-50％EtOAc的己烷溶液洗脱)纯化反应浆液，从而获得72毫克(59％)标题化合物，为白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3,旋转异构体混合物)δ8.46(s,0.8H),7.70(m,1H),7.55(m,1.2H),7.41-7.50(m,4H),7.15(m,2H),4.19(s,0.3H),4.06(s,1.7H),3.95(m,0.3H),3.76(m,1.7H),2.82-2.88(m,2H),2.03(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C21H18F4N3O[M+H]+404.1，实测404.1。
实施例13：1-(1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4(5H)-基)-2-(4-(三氟甲基)苯基)乙酮的合成
采用通用方法B由4-三氟甲基苯基乙酸和1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶制备化合物。采用1M NaHSO4洗涤产物混合物。通过快速色谱(SiO2,24g柱，采用5-50％EtOAc的己烷溶液洗脱)纯化反应浆液，从而获得77毫克(64％)标题化合物，为白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3,旋转异构体混合物)δ8.45(s,0.8H),7.62(d,J＝7.8Hz,2H),7.55(s,0.2H),7.40-7.49(m,4H),7.15(m,2H),4.08(s,0.3H),3.96(m,2H),3.75(m,1.7H),2.80-2.86(m,2H),2.00(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C21H18F4N3O[M+H]+404.1，实测404.1。
实施例14：2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)-1-(1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4(5H)-基)乙酮的合成
采用通用方法B由4-氯-3-三氟甲基苯基乙酸和1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶制备化合物。采用盐水和2x 1M NaHSO4洗涤产物混合物。通过快速色谱(SiO2，24g柱，采用5-50％EtOAc的己烷溶液洗脱)纯化反应浆液，从而获得54毫克(41％)标题化合物，为白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3,旋转异构体混合物)δ8.44(s,0.8H),7.59(m,1H),7.57(s,0.2H),7.41-7.51(m,4H),7.17(m,2H),4.03(s,0.3H),3.95(m,0.3H),3.91(s,1.7H),3.78(m,1.7H),2.82-2.85(m,2H),2.05(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C21H17ClF4N3O[M+H]+438.1，实测438.1。
实施例15：2-(3-氯-4-(三氟甲基)苯基)-1-(1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4(5H)-基)乙酮的合成
采用通用方法B由3-氯-4-三氟甲基苯基乙酸和1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶制备化合物。采用盐水和2x 1M NaHSO4洗涤反应混合物。通过快速色谱(SiO2，24g柱，采用5-60％EtOAc的己烷溶液洗脱)纯化反应浆液，从而获得68毫克(52％)标题化合物，为白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3,旋转异构体混合物)δ8.45(s,0.8H),7.67(m,1H),7.55(s,0.2H),7.44-7.49(m,3H),7.30(m,1H),7.14-7.21(m,2H),4.04(s,0.4H),3.94(m,0.4H),3.92(s,1.6H),3.77(m,1.6H),2.82-2.87(m,2H),2.04(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C21H17ClF4N3O[M+H]+438.1，实测438.1。
实施例16：2-[4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]-1-[1-(4-氟苯基)-3-甲基-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]乙酮的合成
a)2,6-二甲基吡啶-α-2,3-二醇(4.17克，30毫摩尔)溶解于60毫升CHCl3并用MnO2(15.65克，180毫摩尔)处理。加热浆液至62℃，在90分钟时反应完成。通过一薄层硅藻土过滤反应混合物，并采用数份CHCl3洗涤。浓缩滤液从而获得产物，为棕黄色结晶固体(3.24克，79％)。MS:(ES)m/z计算C7H8NO2[M+H]+138.0，实测138.0。
b)以上获得的醛溶解于CH2Cl2(20毫升)和Et3N(2.3毫升，16.5毫摩尔)。经5分钟滴加三氟甲基磺酸酐(Tf2O，2.78毫升，16.5毫摩尔)。30分钟后加入另一部分Et3N(500微升)和Tf2O(200微升)。75分钟后，采用2x H2O和2x饱和NaHCO3洗涤反应混合物。有机层在MgSO4上干燥、过滤并浓缩从而获得3.02克(75％)橙油，直接用于下一步骤。
c)以上的三氟甲烷磺酸酯(1.08克，4毫摩尔)在垫片封盖的瓶内溶于5毫升DMF。加入碳酸钾(1.66克，12毫摩尔)和4-氟苯基肼盐酸盐(678毫克，4.17毫摩尔)，并在室温搅拌浆液，变成深橘红色。3小时内，LCMS表明原料耗尽，提供肼中间体(含和不含三氟甲烷磺酸酯)。向反应混合物中加入400毫克(0.55毫摩尔)PdCl2(dppf)和5毫升PhCH3。将烧瓶置入100℃加热器过夜。将反应混合物倾入100毫升H2O和80毫升EtOAc。通过硅藻土垫过滤混合物并分层。浓缩有机层，通过正相快速色谱(40g柱，采用15-70％EtOAc的己烷溶液洗脱)纯化残留物，从而获得160毫克(18％)标题化合物，为橙色油状固体。MS:(ES)m/z计算C13H11FN3[M+H]+228.1，实测228.1。
d)在帕尔烧瓶内，甲醇(3.5毫升)、20％Pd(OH)2/C(200毫克，约0.14毫摩尔)和1-(4-氟苯基)-5-甲基-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶(160毫克，0.7毫摩尔)结合并用2x H2吹扫。烧瓶内充入55psi H2接着摇动浆液2天。通过硅藻土过滤混合物，用数份甲醇洗涤。浓缩滤液得到103毫克(64％粗产率)橙色油状固体。MS:(ES)m/z计算C13H15FN3[M+H]+232.1，实测232.1。
e)采用通用方法B由2-(4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)乙酸和1-(4-氟苯基)-5-甲基-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶制备化合物。采用2x 1M NaHSO4洗涤产物混合物。通过快速色谱(SiO2,24g柱，采用5-50％EtOAc的己烷溶液洗脱)纯化反应浆液，从而获得37毫克(37％)标题化合物，为白色泡沫。1H NMR(400MHz,CDCl3,旋转异构体混合物)δ8.37(s,0.8H),7.58(s,0.2H),7.49(m,2H),7.17(m,2H),5.08-5.31(m,2H),4.51(m,1H),2.78-2.99(m,2H),2.34(s,2.3H),2.31(s,0.7H),1.97-2.09(m,2H),1.36(d,J＝6.7Hz,2.4H),1.15(d,J＝6.6Hz,0.6H)；MS:(ES)m/z计算C20H19ClF4N5O[M+H]+456.1，实测456.1。
实施例17-20的总体方案
实施例17：1-(1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4(5H)-基)-2-(4-(三氟甲基)-1H-咪唑基-1-基)乙酮三氟乙酸盐的合成
a)在瓶内加入4-三氟甲基-1H-咪唑(953毫克，7毫摩尔)、7毫升乙醇和乙醇钠(524毫克，7.7毫摩尔)。向该混合物中缓慢加入溴乙酸乙酯(1.29克，7.7毫摩尔)。18小时后，加入额外的100微升溴乙酸乙酯和约100-200毫克NaOEt。90分钟后，采用NaHCO3淬灭反应并用3x EtOAc萃取。浓缩有机层并通过快速色谱(SiO2,80g柱，采用15-90％EtOAc的己烷溶液洗脱)纯化残留物，从而获得746毫克(48％)标题化合物，为结晶固体。MS:(ES)m/z计算C8H10F3N2O2[M+H]+223.1，实测223.1。
b)以上获得的酯(746毫克，3.35毫摩尔)溶解于10毫升THF并用3.5毫升2MLiOH(aq)处理。在50℃浴中加热混合物5小时。蒸发挥发物并加入1毫升6N HCl(aq)和1毫升1M NaHSO4。收集得到的沉淀物并用水洗涤，溶解于EtOAc并浓缩从而得到白色固体(200毫克)。浓缩水性洗涤物至一半体积，收集第二茬(141毫克)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.80(s,1H),7.64(s,1H),4.94(s,2H)；MS:(ES)m/z计算C6H6F3N2O2[M+H]+195.0，实测195.1。通过α-亚甲基和两个咪唑环质子间的nOe确定系统的区域选择性。
c)采用通用方法B由2-(4-(三氟甲基)-1H-咪唑基-1-基)乙酸和1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶制备标题化合物。采用2x盐水洗涤产物混合物。通过反相HPLC(C18柱，含0.1％TFA的乙腈-H2O作为洗脱液)纯化反应浆液，从而获得29毫克标题化合物，为白色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD,旋转异构体混合物)δ8.25(s,0.9H),7.85(s,0.1H),7.82(s,1H),7.65(s,1H),7.55(m,2H),7.27(m,2H),5.45(s,0.2H),5.33(s,1.8H),3.90(m,0.2H),3.87(m,1.8H),2.88(t,J＝6.6Hz,2H),2.13(m,1.8H),2.03(m,0.2H)；MS:(ES)m/z计算C18H16F4N5O[M+H]+394.1，实测394.1。
实施例18：1-(1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4(5H)-基)-2-(2-甲基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑基-1-基)乙酮三氟乙酸盐的合成
a)在瓶内加入2-甲基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑(750毫克，5毫摩尔)、5毫升THF、2.5毫升DMF和K2CO3(2.07克，15毫摩尔)。向该混合物中缓慢加入溴乙酸乙酯(1.00克，6毫摩尔)。2小时后，采用EtOAc稀释浆液，用硅藻土过滤并浓缩。通过快速色谱(SiO2,80g柱，采用15-100％EtOAc的己烷溶液洗脱)纯化残留物，从而获得476毫克(40％)标题化合物，为无色油。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.20(s,1H),4.61(s,2H),4.28(q,J＝7.0Hz,2H),1.63(s,3H),1.31(t,J＝7.0Hz,3H)；MS:(ES)m/z计算C9H12F3N2O2[M+H]+237.1，实测237.1。通过α-亚甲基与咪唑环和甲基两者质子间的nOe确定系统的区域选择性。
b)以上获得的酯(476毫克，2毫摩尔)溶于6毫升THF并用2毫升2M LiOH处理。在室温搅拌获得的混合物过夜。然后蒸发挥发成分，加入670微升6N HCl(aq)。收集获得沉淀物，用水洗涤并真空干燥到恒重，从而获得标题化合物，为白色粉末(284毫克，68％)。MS:(ES)m/z计算C6H6F3N2O2[M+H]+209.0，实测209.0。
c)采用通用方法B由2-(2-甲基-4-(三氟甲基)-1H-咪唑基-1-基)乙酸和1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶制备标题化合物。采用1毫升CHCl3稀释产物混合物，用H2O洗涤。浓缩有机层，通过反相HPLC(C18柱，含0.1％TFA的乙腈-H2O作为洗脱液)纯化残留物，从而获得31毫克标题化合物，为白色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD,旋转异构体混合物)δ8.24(s,0.9H),7.88(s,0.1H),7.52-7.60(m,3H),7.24-7.32(m,2H),5.36(s,0.2H),5.26(s,1.8H),3.89(m,2H),2.89(t,J＝6.2Hz,2H),2.38(s,2.7H),2.36(m,0.3H),2.14(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C19H18F4N5O[M+H]+408.1，实测408.1。
实施例19：1-(1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4(5H)-基)-2-(3-(三氟甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)乙酮的合成
a)在瓶内加入3-(三氟甲基)-1H-1,2,4-三唑(358毫克，2.6毫摩尔)、2.6毫升乙醇和乙醇钠(354毫克，5.2毫摩尔)。向该混合物中缓慢加入溴乙酸乙酯(320微升，2.9毫摩尔)。18小时后，浓缩反应混合物并用1毫升6N HCl(aq)酸化。在EtOAc和H2O中稀释浆液并分层。浓缩有机层，并通过快速色谱(SiO2,40g柱，用2-80％EtOAc的己烷溶液洗脱)纯化残留物，从而获得423毫克(73％)标题化合物，为结晶固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.30(s,1H),5.05(s,2H),4.29(q,J＝7.3Hz,2H),1.32(t,J＝7.1Hz,3H)；MS:(ES)m/z计算C8H10F3N2O2[M+H]+224.1，实测224.1。通过α-亚甲基和三唑环质子之间的nOe确定系统区域选择性。
b)以上获得的酯(142毫克，0.64毫摩尔)溶于2毫升THF并用650微升2M LiOH(aq)处理。在50℃搅拌混合物75分钟。蒸发挥发成分，加入500微升6N HCl(aq)。采用2x EtOAc萃取溶液，在MgSO4上干燥、过滤并浓缩，从而获得标题化合物，为无色油(108毫克，76％)。MS:(ES)m/z计算C5H3F3N3O2[M-H]-194.1，实测194.1。
c)采用通用方法B由2-(3-(三氟甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)乙酸和1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶制备标题化合物。采用2x盐水洗涤产物混合物。通过反相HPLC(C18柱，含0.1％TFA的乙腈-H2O作为洗脱液)纯化反应浆液，从而获得33毫克标题化合物，为白色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD,旋转异构体混合物)δ8.41(s,1H),8.35(s,0.75H),7.60(s,0.25H),7.43-7.50(m,2H),7.15-7.23(m,2H),5.41(s,0.5H),5.30(s,1.5H),3.94(m,0.5H),3.84(m,1.5H),2.89(m,2H),2.15(m,1.5H),2.07(m,0.5H)；MS:(ES)m/z计算C17H15F4N6O[M+H]+395.1，实测395.1。
实施例20：1-(1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4(5H)-基)-2-(5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)乙酮的合成
a)向烧瓶内加入5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-1,2,4-三唑(2.27克，15毫摩尔)、15毫升EtOH和乙醇钠(2.04克，30毫摩尔)。向该混合物中缓慢加入溴乙酸乙酯(2.76克，16.5毫摩尔)。5小时后，采用3毫升6N HCl(aq)淬灭反应，并采用饱和NaHCO3调节pH为7。体积缩减至半，采用30毫升EtOAc稀释浆液。层分离，采用水洗涤有机层。浓缩有机层，通过快速色谱(SiO2，80g柱，用5-60％EtOAc的己烷溶液洗脱)纯化残留物，从而获得2.00克(56％)标题化合物，为淡黄色油。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.91(s,2H),4.28(q,J＝7.0Hz,2H),2.50(s,3H),1.31(t,J＝7.3Hz,3H)；MS:(ES)m/z计算C8H11F3N3O2[M+H]+238.1，实测238.1。通过α-亚甲基与三唑甲基两质子间的nOe确定系统的区域选择性。
b)以上获得的酯(2.00克，8.4毫摩尔)溶于10毫升THF并用8毫升2M LiOH(aq)处理。在50℃搅拌混合物2小时。蒸发挥发成分，加入2.5毫升6N HCl(aq)。采用20毫升EtOAc萃取浆液，在MgSO4上干燥、过滤并浓缩，从而获得标题化合物(1.59克，90％)，为黄色油，静置固化。MS:(ES)m/z计算C6H5F3N3O2[M-H]-208.0，实测208.1。
c)采用通用方法B由2-(5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)乙酸和1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶制备标题化合物。用1毫升CHCl3稀释产物混合物，并用水洗涤。浓缩有机层并通过反相HPLC(C18柱，含0.1％TFA的乙腈-H2O作为洗脱液)纯化残留物，从而获得37毫克标题化合物，为白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3,旋转异构体混合物)δ8.34(s,0.8H),7.59(s,0.2H),7.44-7.50(m,2H),7.14-7.27(m,2H),5.29(s,0.4H),5.18(s,1.6H),3.93(m,0.4H),3.86(m,1.6H),2.88(m,2H),2.56(s,2.4H),2.55(m,0.6H),2.14(m,1.6H),2.06(m,0.4H)；MS:(ES)m/z计算C18H17F4N6O[M+H]+409.1，实测409.1。
实施例21：2-(4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)-1-(1-(5-氟吡啶-2-基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4(5H)-基)乙酮的合成
2-(4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)-1-(6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4(5H)-基)乙酮(104毫克，0.3毫摩尔)与5-氟-2-溴吡啶(106毫克，0.6毫摩尔)、0.3毫升二氧六环、Cu(I)I(11.4毫克，0.06毫摩尔，20％)、(±)-反式-N,N’-二甲基环己烷-1,2-二胺(21.3毫克，0.15毫摩尔，50％)和K2CO3(83毫克，0.6毫摩尔)混合。加热浆液至120℃直到完成(约3小时)。在4毫升EtOAc内稀释反应混合物并采用2x H2O洗涤。浓缩有机层并通过反相HPLC(C18柱，含0.1％TFA的乙腈-H2O作为洗脱液)纯化残留物，从而获得标题化合物，为白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3,旋转异构体混合物)δ8.91(s,0.8H),8.33(d,J＝2.7Hz,0.2H),8.28(d,J＝2.9Hz,0.8H),7.87-7.94(m,1H),7.68-7.77(m,1H),5.42(s,1.6H),5.41(s,0.4H),3.93(s,1.6H),3.88(s,0.4H),2.88(t,J＝6.4Hz,2H),2.29(s,0.6H),2.28(s,2.4H),2.18(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C18H16ClF4N6O[M+H]+443.1，实测443.0。
实施例22：2-(4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙酸乙酯和3-(4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙酸乙酯的合成
向4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑(1.846克，2.22毫升，10毫摩尔)和碳酸铯(6.516克，20毫摩尔)在DMF(20毫升)的浆液中一次加入α-溴异丁酸乙酯(2.926克，15毫摩尔)。将烧瓶置入油浴，加热系统至50℃。2小时后，加入另一部分α-溴异丁酸乙酯(1毫升)并继续加热。吡唑耗尽确定反应完成后，采用EtOAc稀释浆液，通过硅藻土过滤，用另150毫升EtOAc洗涤。采用3x盐水(半饱和的)洗涤滤液，在MgSO4上干燥，过滤并浓缩得到黄色油。通过快速色谱(SiO2，150g柱，采用5-60％EtOAc的己烷溶液洗脱)纯化产物，从而获得1.24克(42％)偕二甲基化合物和434毫克(15％)α-甲基化合物，为无色油。2-(4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙酸乙酯。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.25(q,J＝7.1Hz,2H),2.19(s,3H),1.81(s,6H),1.27(t,J＝7.1Hz,3H)；MS:(ES)m/z计算C11H15ClF3N2O2[M+H]+299.1，实测299.0。通过α-甲基和吡唑甲基质子之间的nOe确定系统区域选择性。3-(4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙酸乙酯。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.35(dd,J＝8.2,13.8Hz,1H),4.11(q,J＝7.1Hz,2H),4.02(dd,J＝6.5,13.8Hz,1H),3.18(m,1H),2.30(s,3H),1.21(t,J＝7.0Hz,3H),1.21(d,J＝7.1Hz,3H)；MS:(ES)m/z计算C11H15ClF3N2O2[M+H]+299.1，实测299.0。通过吡唑甲基和相邻质子之间的nOe确定系统区域选择性。
实施例23：2-[4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-甲基-丙-1-酮的合成
a)向2-(4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙酸乙酯(1.24克，4.2毫摩尔)中加入12毫升THF和4.2毫升2M LiOH(aq)。在50℃加热浆液80分钟，然后体积缩减至半。用HCl酸化溶液，从而获得白色沉淀物。用1M NaHSO4和2x H2O洗涤沉淀物。干燥后获得1.06克(94％)标题化合物。MS:(ES)m/z计算C9H11ClF3N2O2[M+H]+271.0，实测271.0。
b)采用通用方法B由2-(4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙酸和1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶制备标题化合物。采用2x 1M NaHSO4洗涤产物混合物。浓缩有机层并通过快速色谱(SiO2，24g柱，用5-50％EtOAc的己烷溶液洗脱)纯化残留物，从而获得80毫克(68％)标题化合物，为白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.44(s,1H),7.44(m,2H),7.16(m,2H),3.08(m,2H),2.74(t,J＝6.6Hz,2H),2.21(s,3H),1.91(s,6H),1.76(ddd,J＝5.8,6.2,10.5Hz,2H)；MS:(ES)m/z计算C21H21ClF4N5O[M+H]+470.1，实测470.1。
实施例24和25的总体方案:
实施例24：2-(4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)-1-(1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4(5H)-基)丁-1-酮的合成
a)在50℃于15毫升2:1THF:DMF中，将溴丁酸甲酯(996毫克，5.5毫摩尔)、4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑(923毫克，5毫摩尔)和K2CO3(1.382克，10毫摩尔)混合过夜。过滤掉固体采用EtOAc洗涤并蒸发挥发成分。在EtOAc中稀释残留物并用3x H2O和2x盐水洗涤。浓缩有机层，并通过快速色谱(SiO2，40g柱，用2-50％EtOAc的己烷溶液洗脱)纯化残留物，从而获得1.06克(74％)产物，为无色油。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.27(dd,J＝6.7,9.0Hz,1H),3.74(s,3H),2.34(m,2H),2.27(s,3H),0.89(t,J＝6.5Hz,3H)；MS:(ES)m/z计算C10H13ClF3N2O2[M+H]+285.1，实测285.0。通过α-次甲基质子和吡唑甲基质子(和乙基的那些)之间的nOe确定系统区域选择性。
b)在50℃，以上获得的酯(1.06克，3.72毫摩尔)在10毫升THF和3.7毫升2MLiOH(aq)中成浆。70分钟后，蒸发挥发成分，加入1.25毫升6M HCl(aq)。采用2xCH2Cl2萃取浆液，在MgSO4上干燥有机层，过滤并浓缩得到淡黄色固体(0.844毫克，84％)。MS:(ES)m/z计算C9H11ClF3N2O2[M+H]+270.0，实测270.0。
c)采用通用方法B由2-(4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)丁酸和1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶制备标题化合物。采用2x 1M NaHSO4洗涤产物混合物。通过快速色谱(SiO2，24g柱，用5-50％EtOAc的己烷溶液洗脱)纯化反应浆液，从而获得81毫克(69％)标题化合物，为白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.43(s,1H),7.44(m,2H),7.16(m,2H),5.30(dd,J＝6.7,8.6Hz,1H),3.81(ddd,J＝3.2,8.6,11.5Hz,1H),3.50(ddd,J＝3.1,7.4,10.2Hz,1H),2.79(dt,J＝2.8,6.3Hz,2H),2.33(m,1H),2.30(s,3H),2.22(m,1H),1.96(m,1H),1.86(m,1H),0.98(t,J＝7.0Hz,3H)；MS:(ES)m/z计算C20H19ClF4N5O[M+H]+470.1，实测470.1。
实施例25：2-[4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-3-甲基-丁-1-酮的合成
a)在50℃于12毫升2:1THF:DMF内将2-溴-3-甲基丁酸乙酯(836毫克，4毫摩尔)、4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑(738毫克，4毫摩尔)和K2CO3(1.106克，8毫摩尔)混合过夜。加入额外的400微升烷基化物(alkylator)并继续搅拌过夜。过滤掉固体采用EtOAc洗涤并蒸发挥发成分。在EtOAc中稀释残留物，并采用2x盐水(半饱和的)洗涤。浓缩有机层，通过正相快速色谱(40g柱，用5％EtOAc的己烷溶液洗脱)纯化残留物，从而获得870毫克(70％)标题化合物，为无色油。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.42(d,J＝10.2Hz,1H),4.20(q,J＝7.4Hz,2H),2.83(m,1H),2.31(s,3H),1.24(t,J＝7.4Hz,3H),1.09(d,J＝6.7Hz,3H),0.82(d,J＝6.6Hz,3H)；MS:(ES)m/z计算C12H17ClF3N2O2[M+H]+313.1，实测313.1。通过α-次甲基质子和吡唑甲基质子(和异丙基的那些)之间的nOe确定系统区域选择性。
b)在50℃，以上获得的酯(870毫克，2.8毫摩尔)在8.3毫升THF和2.8毫升2M LiOH(aq)中成浆。80分钟后，蒸发挥发成分，加入1毫升6M HCl(aq)。收集得到的沉淀物，用3x H2O洗涤并干燥从而得到标题化合物，为白色固体(844毫克，94％)。MS:(ES)m/z计算C10H13ClF3N2O2[M+H]+285.1，实测285.0。
c)采用通用方法B由2-(4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)-3-甲基丁酸和1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶制备标题化合物。采用2x 1M NaHSO4洗涤产物混合物。通过快速色谱(SiO2，24g柱，用5-50％EtOAc的己烷溶液洗脱)纯化反应浆液，从而获得89毫克(74％)标题化合物，为玻质白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.44(s,1H),7.44(m,2H),7.16(m,2H),5.03(d,J＝10.9Hz,1H),3.89(ddd,J＝2.7,8.2,10.9Hz,1H),3.78(ddd,J＝2.7,7.8,10.9Hz,1H),2.96(m,1H),2.79(m,2H),2.37(s,3H),1.99(m,1H),1.82(m,1H),1.12(d,J＝6.3Hz,3H),0.79(d,J＝7.1Hz,3H)；MS:(ES)m/z计算C22H23ClF4N5O[M+H]+484.1，实测484.1。
实施例26：1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-[3-(三氟甲基)吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基]乙酮的合成
a)在60℃，将溴乙酸乙酯(1.336克，8毫摩尔)、3-碘-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(1.953毫克，8毫摩尔)和K2CO3(2.211克，16毫摩尔)在32毫升2:1THF:DMF中混合。4小时后，去除挥发成分，采用50毫升EtOAc稀释残留物，采用3x盐水(半饱和的)洗涤浆液。浓缩有机层，通过快速色谱(SiO2,80g柱，用5-20％EtOAc的己烷溶液洗脱)纯化残留物，从而获得2.172克(82％)产物，为颗粒状白色固体。MS:(ES)m/z计算C10H11IN3O2[M+H]+332.0，实测332.0。
b)将氟磺酰二氟乙酸甲酯(MFSDA,1.25毫升,10.5毫摩尔)滴加到2-(3-碘-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)乙酸乙酯(994毫克，3毫摩尔)、CuI(571毫克，3毫摩尔)和DMF(30毫升)的浆液中。加热混合物至100℃一小时，在50毫升EtOAc内进行稀释。通过硅藻土垫过滤反应混合物，用额外的EtOAc洗涤。浓缩滤液至一半体积，加入等体积盐水，导致沉淀物形成。收集固体并用水洗涤，在60℃干燥，从而获得标题化合物，为大量结晶固体(1.366克，87％)。
c)在50℃，以上获得的酯(546毫克，2毫摩尔)在6毫升THF和1.5毫升2MLiOH(aq)中成浆。完成后，蒸发挥发成分，加入3毫升1M NaHSO4(aq)。收集获得的沉淀物，采用3x H2O洗涤并干燥，从而获得标题化合物，为白色粉末(415毫克，85％)。MS:(ES)m/z计算C9H7F3N3O2[M+H]+246.0，实测246.0。
d)采用通用方法B由2-(3-(三氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)乙酸和1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶制备标题化合物。通过快速色谱(SiO2，24g柱，用5-70％EtOAc的己烷溶液洗脱)纯化反应浆液，从而获得58毫克标题化合物，为白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3,旋转异构体混合物)δ8.65(dd,J＝2.6,4.7Hz,1H),8.32(s,0.8H),8.24(d,J＝8.2Hz,1H),7.72(s,0.2H),7.44-7.52(m,2H),7.33(dd,J＝4.3,8.2Hz,1H),7.13-7.23(m,2H),5.76(s,0.4H),5.65(s,1.6H),3.93(m,2H),2.89(t,J＝6.3Hz,2H),2.17(m,1.6H),2.06(m,0.4H)；MS:(ES)m/z计算C21H17F4N6O[M+H]+445.1，实测445.1。
实施例27：1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-[3-(三氟甲基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基]乙酮的合成
在垫片封盖的瓶内，以上制备的1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-[3-(三氟甲基)吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基]乙酮(22.2毫克，0.05毫摩尔)溶于1毫升甲醇并用～20毫克PtO2处理。用氢气吹扫并填充瓶两次，然后将其置于氢气气氛(气球)并搅拌过夜。过滤浆液，并通过反相HPLC(C18柱，含0.1％TFA的乙腈-H2O作为洗脱液)纯化滤液，从而获得标题化合物(中和并提取溶液，从而获得游离碱)，为白色固体(13毫克，60％)。1H NMR(400MHz,CDCl3,旋转异构体混合物)δ8.36(s,0.85H),7.71(s,0.15H),7.43-7.49(m,2H),7.14-7.19(m,2H),5.15(s,0.3H),5.00(s,1.7H),4.29(br s,1H),3.88-3.93(m,2H),3.29(m,2H),2.85(t,J＝6.3Hz,2H),2.63(t,J＝6.2Hz,2H),2.09(m,2H),1.85(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C21H21F4N6O[M+H]+449.1，实测449.1。
实施例28：1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-[3-(三氟甲基)-5,6-二氢-4H-吡喃并[2,3-c]吡唑-1-基]乙酮的合成
a)3-(三氟甲基)-1,4,5,6-四氢吡喃并[2,3-c]吡唑(96毫克，0.5毫摩尔)、K2CO3(885毫克，6.4毫摩尔)和8毫升3:1THF:DMF混合并用71微升(0.64毫摩尔)溴乙酸乙酯处理。在50℃搅拌浆液过夜，蒸发挥发成分。在EtOAc和H2O中稀释残留物并分层。采用盐水洗涤有机层并浓缩。通过快速色谱(SiO2，40g柱，用5-20％EtOAc的己烷溶液洗脱)纯化残留物，从而获得70毫克(39％)化合物，为清油。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.73(s,2H),4.31(dd,J＝5.1,6.1Hz,2H),4.23(q,J＝7.0Hz,2H),2.65(t,J＝6.7Hz,2H),2.00(m,2H),1.28(t,J＝7.0Hz,3H)；MS:(ES)m/z计算C11H14F3N2O3[M+H]+279.1，实测279.1。
b)在50℃，以上获得的酯(70毫克，0.25毫摩尔)在1毫升THF和0.5毫升2MLiOH(aq)中成浆。90分钟后，蒸发挥发成分，加入2毫升1M NaHSO4(aq)。采用2xEtOAc萃取混合物。在Na2SO4上干燥有机层，过滤并浓缩得到泡沫状白色固体(45毫克，71％)。MS:(ES)m/z计算C9H10F3N2O3[M+H]+251.1，实测251.1。
c)采用通用方法B由2-(3-(三氟甲基)-5,6-二氢吡喃并[2,3-c]吡唑-1(4H)-基)乙酸和1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶制备标题化合物。通过反相HPLC(C18柱，含0.1％TFA的乙腈-H2O作为洗脱液)纯化反应浆液，从而获得32毫克(70％)标题化合物，为白色泡沫。1H NMR(400MHz,CDCl3,旋转异构体混合物)δ8.40(s,0.8H),7.56(s,0.2H),7.43-7.48(m,2H),7.13-7.21(m,2H),5.12(s,0.4H),5.00(s,1.6H),4.34(dd,J＝5.1,5.1Hz,2H),3.91(m,0.4H),3.80(m,1.6H),2.86(t,J＝6.2Hz,1.6H),2.83(t,J＝6.2Hz,0.4H),2.67(t,J＝6.2Hz,2H),2.09(m,1.6H),2.00-2.05(m,2.4H)；MS:(ES)m/z计算C21H20F4N5O2[M+H]+450.1，实测450.1。
实施例29：2-[4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]-1-[1-(2,4-二氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]乙酮的合成
a)向100毫升圆底烧瓶中加入2,4-二氟苯基肼盐酸盐(1.48克，8.2毫摩尔)、3-氟-2-甲酰基吡啶(1.00g,8毫摩尔)、K2CO3(3.32克，24毫摩尔)和DMF(10毫升)。在油浴中加热浆液至120℃，到16小时，冷却反应混合物并将其倒入25毫升H2O。通过过滤收集棕色沉淀物并采用3x H2O洗涤。固体溶于CH2Cl2，采用盐水洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩从而得到棕色固体。该固体溶于EtOAc，通过硅塞洗脱并浓缩从而得到棕色固体(1.58克，85％)。MS:(ES)m/z计算C12H8F2N3[M+H]+232.1，实测232.1。
b)在500毫升帕尔瓶内，以上获得的杂环(1.58克，6.8毫摩尔)溶于34毫升甲醇并用20％Pd(OH)2/C(1.00克)处理。用氢气吹扫并填充系统(3x)，然后在55psi氢气下摇动直到原料耗尽。采用氮气冲扫瓶，通过硅藻土垫过滤反应混合物，用数份甲醇洗涤。浓缩滤液，从而获得产物(1.10克)，为淡橙-棕色油。MS:(ES)m/z计算C12H12F2N3[M+H]+236.1，实测236.1。
c)采用通用方法B由2-(4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)乙酸和1-(2,4-二氟苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶制备化合物。采用2x 1M NaHSO4洗涤产物混合物。浓缩有机层并通过反相HPLC(C18柱，含0.1％TFA的乙腈-H2O作为洗脱液)纯化残留物，从而获得标题化合物，为白色泡沫状固体(47毫克，70％)。1H NMR(400MHz,CDCl3,旋转异构体混合物)δ8.39(s,0.8H),7.64(s,0.2H),7.48(m,2H),7.00(m,2H),5.25(s,0.4H),5.14(s,1.6H),3.92(m,0.4H),3.85(m,1.6H),2.70(m,2H),2.33(s,2.4H),2.32(s,0.6H),2.11(m,1.6H),2.03(m,0.4H)；MS:(ES)m/z计算C19H16ClF5N5O[M+H]+460.1，实测460.1。
实施例30和31：(2R)-和(2S)-2-[4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]丁-1-酮的合成
a)在10毫升CHCl3和3滴DMF内溶解2-(4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)丁酸(677毫克，2.5毫摩尔)。滴加草酰氯(262微升，3毫摩尔)，导致气体逸出。30分钟后，加入(R)-苯基乙醇胺(377毫克，2.75毫摩尔)，随后加入8毫升饱和NaHCO3。45分钟后，用盐水洗涤反应混合物并通过快速色谱(SiO2，40g柱，用10-70％EtOAc的己烷溶液洗脱)进行纯化。第一洗脱非对映异构体：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.62(d,J＝7.8Hz,1H),7.23-7.39(m,3H),7.08-7.11(m,2H),5.00-5.04(m,1H),4.66(t,J＝7.4Hz,1H),3.84(m,2H),2.31(t,J＝7.4Hz,3H),2.26(s,3H),0.91(t,J＝7.0Hz,3H)；MS:(ES)m/z计算C17H20ClF3N3O2[M+H]+390.1，实测390.1。第二洗脱非对映异构体：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.58(d,J＝7.0Hz,1H),7.38(m,2H),7.32(m,1H),7.23-7.25(m,2H),5.00(dt,J＝5.1,7.0Hz,1H),4.69(t,J＝7.8Hz,1H),3.75(t,J＝5.5Hz,2H),2.32(s,3H),2.10-2.27(m,3H),0.84(t,J＝7.4Hz,3H)；MS:(ES)m/z计算C17H20ClF3N3O2[M+H]+390.1，实测390.1。
b)在含有15当量6M H2SO4的0.25M二氧六环中分别加热以上获得的非对映体至80℃。浓缩反应浆液至约一半体积并用3x EtOAc萃取。在Na2SO4上干燥有机层，过滤并浓缩，从而获得所需酸产物，产率为82-89％。
c)(2R)-2-[4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]丁-1-酮和(2S)-2-[4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]丁-1-酮：采用通用方法A将在步骤a中由第一洗脱非对映异构体获得的酸与1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶偶合。通过反相HPLC(C18柱，含0.1％TFA的乙腈-H2O作为洗脱液)纯化反应浆液，从而获得73毫克(62％)标题化合物，为白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.43(s,1H),7.44(m,2H),7.16(m,2H),5.29(dd,J＝6.7,8.6Hz,1H),3.81(ddd,J＝2.7,7.4,10.6Hz,1H),3.50(ddd,J＝2.8,8.6,11.8Hz,1H),2.79(dt,J＝2.7,6.3Hz,2H),2.33(m,1H),2.30(s,3H),2.22(m,1H),1.96(m,1H),1.86(m,1H),0.98(t,J＝7.0Hz,3H)；MS:(ES)m/z计算C21H21ClF4N5O[M+H]+470.1，实测470.1。采用通用方法A将在步骤a中由第二洗脱非对映异构体获得的酸与1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶偶合。通过反相HPLC(C18柱，含0.1％TFA的乙腈-H2O作为洗脱液)纯化反应浆液，从而获得71毫克(60％)标题化合物，为白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.43(s,1H),7.44(m,2H),7.16(m,2H),5.29(dd,J＝6.7,8.6Hz,1H),3.81(ddd,J＝2.7,7.4,10.6Hz,1H),3.50(ddd,J＝2.8,8.6,11.8Hz,1H),2.79(dt,J＝2.7,6.3Hz,2H),2.33(m,1H),2.30(s,3H),2.22(m,1H),1.96(m,1H),1.86(m,1H),0.98(t,J＝7.0Hz,3H)；MS:(ES)m/z计算C21H21ClF4N5O[M+H]+470.1，实测470.1。
实施例32：1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-[1-(三氟甲基)咪唑并[1,5-a]吡啶-3-基]乙酮的合成
a)向2-(咪唑并[1,5-a]吡啶-3-基)乙酸乙酯(131毫克，0.64毫摩尔)的CH3CN溶液中加入3,3-二甲基-1-(三氟甲基)-1,2-苯并碘氧杂戊环(212毫克，0.64毫摩尔)。加热浆液至80℃95分钟然后冷却到室温。通过快速色谱(SiO2，40g柱，用15-75％EtOAc的己烷溶液洗脱)纯化反应混合物，从而获得产物(46毫克，26％)，为橙油，静止固化。MS:(ES)m/z计算C12H12F3N2O2[M+H]+273.1，实测273.0。
b)在50℃，以上获得的酯(36毫克，0.13毫摩尔)在1毫升THF和0.125毫升2MLiOH(aq)中成浆。完成后，蒸发挥发成分，加入500微升1M NaHSO4(aq)和4毫升EtOAc。层分离，采用盐水洗涤有机层。在Na2SO4上干燥有机层，过滤并浓缩从而得到棕黄色固体(29毫克，90％)。MS:(ES)m/z计算C10H8F3N2O2[M+H]+245.1，实测245.0。
c)采用通用方法A由2-(1-(三氟甲基)咪唑并[1,5-a]吡啶-3-基)乙酸和1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶制备标题化合物。通过反相HPLC(C18柱，含0.1％TFA的乙腈-H2O作为洗脱液)纯化反应浆液，从而获得32毫克(72％)标题化合物，为白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3,旋转异构体混合物)δ8.36(d,J＝6.6Hz,1H),8.35(s,0.9H),8.06(s,0.1H),7.63(d,J＝9.0Hz,1H),7.50(m,0.3H),7.42(m,1.7H),7.12-7.22(m,2H),7.01(m,1H),6.79(t,J＝6.6Hz,1H),4.51(s,0.2H),4.38(s,1.8H),4.08(m,1.7H),3.90(m,0.3H),2.86(t,J＝6.6Hz,0.3H),2.80(t,J＝6.6Hz,1.7H),2.02(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C22H18F4N5O[M+H]+444.1，实测444.1。
实施例33：1-[1-(4-氟苯基)-5-甲基-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-[5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]丁-1-酮的合成
采用通用方法A由2-(5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)丁酸和1-(4-氟苯基)-5-甲基-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶制备标题化合物。通过反相HPLC(C18柱，含0.1％TFA的乙腈-H2O作为洗脱液)纯化反应浆液，从而获得13毫克(46％)标题化合物，为白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.40(s,1H),7.47(m,2H),7.16(m,2H),6.35(s,1H),5.37(dd,J＝6.7,8.6Hz,1H),4.63(m,1H),2.86(m,1H),2.73(ddd,J＝1.9,5.1,11.3Hz,1H),2.37(s,3H),2.27(m,2H),1.92-1.97(m,2H),0.93(t,J＝6.5Hz,3H),0.57(t,J＝6.7Hz,3H)；MS:(ES)m/z计算C22H24F4N5O[M+H]+450.2，实测450.2。
实施例34：1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-[3-(1-羟基-1-甲基-乙基)-5-甲基-吡唑-1-基]丁-1-酮的合成
a)向THF-冲洗的250毫升圆底烧瓶内加入80毫升THF和6.17g(40毫摩尔)5-甲基-1H-吡唑-3-羧酸乙酯。在烧瓶上安装加料漏斗，在N2于冰浴中冷却。滴加甲基溴化镁(3M，在Et2O中，41毫升，124毫摩尔)。70分钟后，加入额外的4毫升格氏试剂。在2小时，通过缓慢加入2毫升1M NaHSO4淬灭反应。通过缓慢加入6M HCl(aq)酸化反应浆液。蒸发挥发成分，并采用3×EtOAc萃取混合物。有机层在MgSO4上干燥、过滤并浓缩从而提供粘稠的黄橙色油(6.0克，定量)，静置固化。MS:(ES)m/z计算C7H13N2O[M+H]+141.1，实测141.1。
b)在70℃，溴丁酸甲酯(1.068克，5.9毫摩尔)、2-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)丙-2-醇(752毫克，5.36毫摩尔)和K2CO3(1.520克，11毫摩尔)在16毫升2:1THF:DMF中混合过夜。冷却反应混合物，过滤掉固体采用EtOAc洗涤。采用2×H2O和盐水洗涤滤液。浓缩有机层，通过快速色谱(SiO2，80g柱，采用10-65％EtOAc的己烷溶液洗脱)纯化残留物，从而获得114毫克(9％)标题化合物，为无色油。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.93(s,1H),4.62(dd,J＝5.8,9.8Hz,1H),3.72(s,3H),2.95(br s,1H),2.29(m,2H),2.24(s,3H),1.52(s,6H),0.85(t,J＝7.4,3H)；MS:(ES)m/z计算C12H21N2O3[M+H]+241.2，实测241.2。
c)在50℃，以上获得的酯(113毫克，0.47毫摩尔)在1毫升THF和310微升2M LiOH中成浆。30分钟后，蒸发挥发成分，加入1毫升1M NaHSO4。采用3×EtOAc萃取浆液，在Na2SO4上干燥有机层，过滤并浓缩从而得到清油(95毫克，89％)。
d)采用通用方法A由2-(3-(2-羟基丙-2-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)丁酸和1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶制备标题化合物。通过反相HPLC(C18柱，含0.1％TFA的乙腈-H2O作为洗脱液)纯化反应浆液，从而获得3.7毫克标题化合物，为米白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.46(s,1H),7.44(m,2H),7.15(t,J＝8.6Hz,2H),5.92(s,1H),5.17(dd,J＝7.4,7.4Hz,1H),3.73(m,1H),3.48(m,1H),2.75(m,2H),2.33(m,1H),2.23(s,3H),2.17(s,1H),2.14(m,1H),1.87(m,1H),1.73(m,1H),1.52(s,6H),0.96(t,J＝7.4Hz,3H)；MS:(ES)m/z计算C23H29FN5O2[M+H]+426.2，实测426.2。
实施例35：1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-(3-异丙烯基-5-甲基-吡唑-1-基)丁-1-酮的合成
采用6M HCl处理一部分1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-[3-(1-羟基-1-甲基-乙基)-5-甲基-吡唑-1-基]丁-1-酮直到完成。通过反相HPLC(C18柱，含0.1％TFA的乙腈-H2O作为洗脱液)纯化反应浆液，从而获得12毫克标题化合物，为米白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.47(s,1H),7.44(m,2H),7.14(t,J＝8.6Hz,2H),6.14(s,1H),5.42(br s,1H),5.22(dd,J＝7.1,8.2Hz,1H),5.02(br s,1H),3.80(ddd,J＝3.1,7.8,10.1Hz,1H),3.47(ddd,J＝2.8,9.0,12.1Hz,1H),2.74(m,2H),2.33(m,1H),2.23(s,3H),2.15(m,1H),2.10(s,3H)1.87(m,1H),1.78(m,1H),0.98(t,J＝7.4Hz,3H)；MS:(ES)m/z计算C23H27FN5O[M+H]+408.2，实测408.2。
实施例36：1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-[5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]丙-1-酮的合成
a)在60℃，在搅拌下加热碳酸钾(922毫克，6.67毫摩尔)、2-甲基-5-(三氟甲基)-1H-吡唑(500毫克，3.33毫摩尔)和2-溴丙酸乙酯(0.48毫升，3.7毫摩尔)在二甲基甲酰胺:四氢呋喃(3毫升:6毫升)中的混合物5小时。冷却到室温后，通过在反应混合物上轻吹氮气去除大多数四氢呋喃。加入乙酸乙酯和水，层分离。采用乙酸乙酯萃取水层两次以上。干燥合并的有机层(Na2SO4)，过滤并真空浓缩。通过快速色谱(SiO2，10-20％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化粗残留物从而得到所需产物(735毫克，2.94毫摩尔，88％)。
b)2-[5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]丙酸乙酯(734毫克，2.94毫摩尔)在室温溶于四氢呋喃(4毫升)。加入水性氢氧化锂溶液(1.5N，2毫升，3.0毫摩尔)，之后加入甲醇(～2毫升)从而制成均匀溶液。2小时后，通过在反应混合物上轻吹氮气除去大多数四氢呋喃和甲醇。加入盐酸水溶液(5N，0.6毫升，3.0毫摩尔)到反应混合物，采用二氯甲烷萃取产物三次。在无水硫酸钠上干燥合并的有机层，减压浓缩从而得到粗产物(625毫克，2.82毫摩尔，96％)，为白色固体，不需进一步纯化被使用。
c)将二甲基甲酰胺(1毫升)加入到包含2-[5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]丙酸(49.6毫克，0.223毫摩尔)和HATU(89.1毫克，0.234毫摩尔)的混合物。在室温加入二异丙基乙胺(98微升，0.56毫摩尔)，并搅拌反应混合物1分钟。一次性加入1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[4,3-b]吡啶(49.5毫克，0.228毫摩尔)，在室温搅拌反应混合物过夜。然后加入乙酸乙酯和水，层分离。采用乙酸乙酯萃取水层两次。干燥合并的有机层(Na2SO4)，过滤并真空浓缩。通过快速色谱(SiO2,20-38％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化粗残留物，从而提供所需产物，为白色固体(83.5毫克，0.198毫摩尔,89％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.45(s,1H),7.44(ddd,J＝9.2,5.2,2.0Hz,2H),7.15(dt,J＝8.8,2.0Hz,2H),6.31(s,1H),5.55(q,J＝7.2Hz,1H),3.73(ddd,J＝13,7.6,3.2Hz,1H),3.37(ddd,J＝12,8.8,3.2Hz,1H),2.72–2.79(m,2H),2.29(s,3H),1.86–1.97(m,1H),1.76–1.85(m,1H),1.80(d,J＝7.2Hz,3H)；MS:(ES)m/z计算C20H19N5OF4[M+H]+422，实测422。
实施例37：1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-[5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]丁-1-酮的合成
a)在60℃，在搅拌下加热碳酸钾(924毫克，6.69毫摩尔)、2-甲基-5-(三氟甲基)-1H-吡唑(501毫克，3.34毫摩尔)和2-溴丁酸甲酯(0.42毫升,3.7毫摩尔)在二甲基甲酰胺:四氢呋喃(3毫升:6毫升)中的混合物5小时。冷却到室温后，通过在反应混合物上轻吹氮气去除大多数四氢呋喃。加入乙酸乙酯和水，层分离，采用乙酸乙酯萃取水层两次以上。干燥合并的有机层(Na2SO4)，过滤并真空浓缩。通过快速色谱(SiO2,12-17％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化粗残留物，从而提供所需产物(704毫克，2.81毫摩尔,84％)。
b)2-[5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]丁酸甲酯(703毫克，2.81毫摩尔)在室温溶于四氢呋喃(4毫升)。加入氢氧化锂水溶液(1.5N,2毫升,3.0毫摩尔)，之后加入甲醇(～2毫升)，从而制成均匀溶液。2小时后，通过在反应混合物上轻吹氮气去除大多数四氢呋喃和甲醇。加入盐酸水溶液(5N,0.6毫升,3.0毫摩尔)到反应混合物，采用二氯甲烷萃取混合物三次。在无水硫酸钠上干燥合并的有机层，减压浓缩，获得粗产物(661毫克，2.80毫摩尔,100％)，为白色固体，不需进一步纯化被使用。
c)将二甲基甲酰胺(0.7毫升)加入包含2-[5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]丁酸(50.5毫克，0.214毫摩尔)和HATU(84.1毫克，0.221毫摩尔)的混合物。在室温加入二异丙基乙胺(92微升，0.53毫摩尔)，搅拌反应混合物1分钟。然后一次性加入1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[4,3-b]吡啶(44.1毫克，0.203毫摩尔)，在室温搅拌反应混合物过夜。加入乙酸乙酯和水，层分离。采用乙酸乙酯萃取水层两次以上。干燥合并的有机层(Na2SO4)，过滤并真空浓缩。通过快速色谱(SiO2,17-33％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化粗残留物，从而提供所需产物，为白色固体(80.9毫克，0.186毫摩尔，92％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.44(s,1H),7.44(ddd,J＝8.8,5.2,2.0Hz,2H),7.15(ddd,J＝8.4,8.4,2.0Hz,2H),6.30(s,1H),5.32(dd,J＝8.4,6.8Hz,1H),3.78(ddd,J＝12,7.2,2.8Hz,1H),3.47(ddd,J＝12,8.8,3.2Hz,1H),2.69–2.81(m,2H),2.31(s,3H),2.18–2.38(m,2H),1.88–1.97(m,1H),1.74–1.83(m,1H),0.98(t,J＝7.2Hz,3H)；MS:(ES)m/z计算C21H21N5OF4[M+H]+436，实测436。
实施例38：1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-[2-甲基-4-(三氟甲基)咪唑-1-基]丙-1-酮的合成
a)在50℃，在搅拌下加热碳酸钾(832毫克，6.02毫摩尔)、2-甲基-5-(三氟甲基)-1H-咪唑(450毫克，3.00毫摩尔)和2-溴丙酸乙酯(0.43毫升，3.3毫摩尔)在二甲基甲酰胺:四氢呋喃(2毫升:4毫升)中的混合物7h，然后在室温下过夜。通过在反应混合物上轻吹氮气去除大多数四氢呋喃。然后加入乙酸乙酯和水，层分离。采用乙酸乙酯萃取水层两次以上。干燥合并的有机层(Na2SO4)，过滤并真空浓缩。通过快速色谱(SiO2，17-50％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化粗残留物，从而提供所需产物(697毫克，2.79毫摩尔，93％)。
b)2-[2-甲基-4-(三氟甲基)咪唑基-1-基]丙酸乙酯(697毫克，2.79毫摩尔)在室温溶于四氢呋喃(5毫升)。加入氢氧化锂水溶液(1.5N，2.5毫升，3.8毫摩尔)，之后加入甲醇(～2毫升)，从而制成均匀溶液。2小时后，通过在反应混合物上轻吹氮气去除大多数四氢呋喃和甲醇。加入盐酸水溶液(5N，0.75毫升，3.8毫摩尔)到反应混合物，采用二氯甲烷萃取产物三次。在无水硫酸钠上干燥合并的有机层，减压浓缩，获得粗产物(562毫克，2.52毫摩尔,91％)，为白色泡沫，不需进一步纯化被使用。
c)2-[2-甲基-4-(三氟甲基)咪唑基-1-基]丙酸(151毫克，0.679毫摩尔)在室温溶于二氯甲烷(2毫升)。加入草酰氯(120微升，1.38毫摩尔)和催化量的二甲基甲酰胺(1微升)，在室温搅拌反应2h。减压去除溶剂并真空干燥酰基氯。粗酰基氯溶于二氯甲烷(2.1毫升)。在室温下，向部分该溶液(0.7毫升，0.22毫摩尔)中加入1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[4,3-b]吡啶(41.5毫克，0.191毫摩尔)和吡啶(55微升，0.68毫摩尔)，搅拌反应混合物2小时。加入水，层分离。采用二氯甲烷萃取水层两次以上。干燥合并的有机层(Na2SO4)，过滤并真空浓缩。通过快速色谱(SiO2，包含0.1％水性氢氧化铵的40-100％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化粗残留物，从而提供所需产物，为白色固体(70.1毫克，0.166毫摩尔，87％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.44(s,1H),7.45(ddd,J＝9.2,4.8,2.0Hz,2H),7.17(dt,J＝9.2,2.0Hz,2H),5.21(q,J＝6.8Hz,1H),3.75(ddd,J＝12,7.2,3.2Hz,1H),3.51(ddd,J＝12,8.0,3.2Hz,1H),2.84(t,J＝6.6Hz,2H),2.47(s,3H),1.96–2.09(m,2H),1.72(d,J＝6.4Hz,3H)；MS:(ES)m/z计算C20H19N5OF4[M+H]+422，实测422。
实施例39：1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-[2-甲基-4-(三氟甲基)咪唑-1-基]丁-1-酮的合成
a)在50℃，在搅拌下加热碳酸钾(834毫克，6.04毫摩尔)、2-甲基-5-(三氟甲基)-1H-咪唑(449毫克，2.99毫摩尔)和2-溴丁酸甲酯(0.38毫升，3.3毫摩尔)在二甲基甲酰胺:四氢呋喃(2毫升:4毫升)中的混合物7h，然后在室温下过夜。然后通过在反应混合物上轻吹氮气去除大多数四氢呋喃。加入乙酸乙酯和水，层分离。采用乙酸乙酯萃取水层两次以上。干燥合并的有机层(Na2SO4)，过滤并真空浓缩。通过快速色谱(SiO2，20-50％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化粗残留物，从而提供所需产物(641毫克，2.56毫摩尔,86％)。
b)2-[2-甲基-4-(三氟甲基)咪唑基-1-基]丁酸甲酯(641毫克，2.56毫摩尔)在室温溶于四氢呋喃(5毫升)。加入氢氧化锂水溶液(1.5N，2.2毫升，3.3毫摩尔)，之后加入甲醇(～2毫升)，从而制成均匀溶液。2小时后通过在反应混合物上轻吹氮气去除大多数四氢呋喃和甲醇。加入盐酸水溶液(5N，0.66毫升，3.3毫摩尔)到反应混合物，采用二氯甲烷萃取产物三次。在无水硫酸钠上干燥合并的有机层，减压浓缩，获得粗产物(497毫克，2.11毫摩尔，82％)，为白色泡沫，不需进一步纯化被使用。
c)2-[2-甲基-4-(三氟甲基)咪唑-1-基]丁酸(149毫克，0.632毫摩尔)在室温溶于二氯甲烷(2毫升)。加入草酰氯(110微升，1.26毫摩尔)和催化量的二甲基甲酰胺(1微升)，在室温搅拌反应2h。减压去除溶剂并真空干燥酰氯。粗酰氯溶于乙腈(1.5毫升)。在室温下，向部分该溶液(0.5毫升,0.21毫摩尔)中加入1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[4,3-b]吡啶(38.7毫克，0.178毫摩尔)和吡啶(55微升，0.68毫摩尔)，搅拌反应混合物2h。然后加入水和乙酸乙酯，层分离。采用乙酸乙酯萃取水层两次以上。干燥合并的有机层(Na2SO4)，过滤并真空浓缩。通过快速色谱(SiO2，含0.1％水性氢氧化铵的50～80％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化粗残留物，从而提供所需产物，受一些2-[2-甲基-4-(三氟甲基)咪唑-1-基]丁酸污染。产物溶于乙酸乙酯，采用1N氢氧化钠水溶液洗涤一次。在无水硫酸钠上干燥，之后过滤，减压去除溶剂，真空干燥得到所需产物，为白色固体(60.4毫克，0.139毫摩尔，78％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.20(s,1H),7.84(d,J＝1.2Hz,1H),7.58(ddd,J＝9.2,5.2,2.0Hz,2H),7.35(ddd,J＝9.2,8.4,0.8Hz,2H),5.47(dd,J＝9.2,5.6Hz,1H),3.81–3.98(m,2H),2.84(t,J＝6.2Hz,2H),2.34(s,3H),2.03–2.11(m,2H),1.96–2.01(m,2H),0.85(t,J＝7.2Hz,3H)；MS:(ES)m/z计算C21H21N5OF4[M+H]+436，实测436。
实施例40：1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-[4-(三氟甲氧基)苯基]乙酮的合成
向1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶(0.023克，0.10毫摩尔)、4-(三氟甲氧基)苯基乙酸(0.025克，0.11毫摩尔)和Et3N(0.060毫升,0.43毫摩尔)在DMF(0.6毫升)的混合物中加入HATU(0.060克，0.15毫摩尔)。在室温搅拌混合物30分钟。然后用水淬灭它。在EtOAc(50毫升)和饱和NaHCO3(30毫升)间分配混合物。分离有机层，在Na2SO4上干燥，真空浓缩并通过反相HPLC纯化，从而提供所需产物(0.040克，95％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.51(s,1H),7.43(m,2H),7.30(m,2H),7.18(m,4H),3.91(s,2H),3.76(m,2H),2.79(t,J＝6.4Hz,2H),2.00(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C21H17F4N3O2[M+H]+420.1，实测420.1。
实施例41：2-[4-氯-3-(三氟甲氧基)苯基]-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]乙酮的合成
向1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶(0.023克，0.10毫摩尔)、4-氯-3-(三氟甲氧基)苯基乙酸(0.025克，0.10毫摩尔)和Et3N(0.060毫升,0.43毫摩尔)在DMF(0.6毫升)的混合物中加入HATU(0.060克，0.15毫摩尔)。在室温搅拌混合物30分钟。然后用水淬灭它，并在EtOAc(50毫升)和饱和的NaHCO3(30毫升)间分配。分离有机层，在Na2SO4上干燥，真空浓缩并通过反相HPLC纯化，从而提供所需产物(0.039克，85％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.47(s,1H),7.44(m,3H),7.12～7.22(m,4H),3.90(s,2H),3.76(m,2H),2.80(t,J＝6.2Hz,2H),2.02(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C21H16ClF4N3O2[M+H]+454.1，实测454.1。
实施例42：2-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-甲基-丙-1-酮的合成
向1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶(0.030克，0.11毫摩尔)、2-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-2-甲基-丙酸(0.030克，0.11毫摩尔)和NEt3(0.070毫升,0.50毫摩尔)在DMF(0.6毫升)的混合物中加入HATU(0.060克，0.15毫摩尔)。在室温搅拌混合物30分钟。然后用水淬灭它，并在EtOAc(50毫升)和饱和的NaHCO3(30毫升)间分配。分离有机层，在Na2SO4上干燥，真空浓缩并通过反相HPLC纯化，从而提供所需产物(0.005克，10％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.50(s,1H),7.60(d,J＝2.0Hz,1H),7.30～7.51(m,4H),7.14(dd,J＝8.8,8.4Hz,2H),3.22(m,2H),2.69(t,J＝6.4Hz,2H),1.64(s,6H)；1.62(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C23H20ClF4N3O[M+H]+466.1，实测466.1。
实施例43：2-(4-氯吡唑-1-基)-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]乙酮的合成
2-[(4-氯-吡唑-1-基)]乙酸(0.050克，0.31毫摩尔)、(COCl)2(0.060毫升,0.70毫摩尔)和DMF(1滴)在CH2Cl2(1毫升)中的混合物在室温搅拌30分钟。然后用高真空泵将其蒸发至干燥。加入获得的油到CH2Cl2(1毫升)配制的包含1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶(0.020克，0.092毫摩尔)和NEt3(0.070毫升,0.50毫摩尔)的混合物。接着在室温搅拌得到的混合物30分钟。然后用水淬灭它，并在EtOAc(50毫升)和饱和的NaHCO3(30毫升)间分配。分离有机层，在Na2SO4上干燥，真空浓缩并通过反相HPLC纯化，从而提供所需产物(0.012克，36％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.41(s,1H),7.60(s,1H),7.51(s,1H),7.44(dd,J＝8.8,4.6Hz,2H),7.17(dd,J＝9.2,8.8Hz,2H),5.16(s,2H),3.82(m,2H),2.85(t,J＝6.2Hz,2H),2.09(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C17H15ClFN5O[M+H]+360.1，实测360.1。
实施例44：2-[4-氯-3-(二氟甲基)-5-甲基-吡唑-1-基]-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]乙酮的合成
向1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶(0.023克，0.10毫摩尔)、2-(4-氯-3-二氟甲基-5-甲基-吡唑-1-基)乙酸(0.023克，0.10毫摩尔)和NEt3(0.065毫升,0.46毫摩尔)在DMF(0.6毫升)的混合物中加入HATU(0.060克，0.15毫摩尔)。在室温搅拌混合物30分钟。然后用水淬灭它，并在EtOAc(50毫升)和饱和的NaHCO3(30毫升)间分配。分离有机层，在Na2SO4上干燥，真空浓缩并通过反相HPLC纯化，从而提供所需产物(0.032克，75％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.36(s,1H),7.44(m,2H),7.16(dd,J＝8.8,8.4Hz,2H),6.67(d,J＝54Hz,1H),5.11(s,2H),3.83(m,2H),2.85(t,J＝6.2Hz,2H),2.30(s,3H),2.10(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C19H17ClF3N5O[M+H]+424.1，实测424.1。
实施例45：2-[4-氯-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]乙酮的合成
a)在80℃加热3-(三氟甲基)吡唑(1.58克，11.6毫摩尔)和NCS(1.55克，11.6毫摩尔)在CH3CN(20毫升)中的混合物3小时。然后将它冷却到室温，真空蒸发并通过快速色谱(SiO2)纯化，采用0-15％EtOAc/CH2Cl2梯度洗脱，从而提供4-氯-3-(三氟甲基)吡唑(1.52克，77％)。
b)在60℃，加热4-氯-3-(三氟甲基)吡唑(0.026克，0.15毫摩尔)、2-氯-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]乙酮(0.045克，0.15毫摩尔)和K2CO3(0.043克，0.31毫摩尔)在THF(0.6毫升)和DMF(0.3毫升)中的混合物1小时。然后将它冷却到室温。在EtOAc(50毫升)和饱和的NaHCO3(30毫升)间分配混合物。分离有机层，在Na2SO4上干燥，真空浓缩并通过快速色谱在SiO2上纯化，采用0～60％EtOAc/己烷梯度洗脱，从而提供所需产物(0.056克，87％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.37(s,1H),7.70(s,1H),7.45(m,2H),7.16(dd,J＝8.4,8.4Hz,2H),5.17(s,2H),3.81(m,2H),2.87(t,J＝6.2Hz,2H),2.12(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C18H14ClF4N5O[M+H]+428.1，实测428.1。
实施例46：1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-[3-(三氟甲基)吡唑-1-基]乙酮的合成
向1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶(0.026克，0.12毫摩尔)、2-(3-(三氟甲基)-吡唑-1-基)乙酸(0.024克，0.12毫摩尔)和NEt3(0.060毫升,0.43毫摩尔)在DMF(0.5毫升)的混合物中加入HATU(0.060克，0.15毫摩尔)。在室温搅拌混合物30分钟。然后用水淬灭它。在EtOAc(50毫升)和饱和的NaHCO3(30毫升)间分配混合物。分离有机层，在Na2SO4上干燥，真空浓缩并通过反相HPLC纯化，从而提供所需产物(0.035克，74％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.38(s,1H),7.64(m,1H),7.43(m,2H),7.15(dd,J＝8.8,8.4Hz,2H),6.62(d,J＝2.4Hz,1H),5.23(s,2H),3.82(m,2H),2.84(t,J＝6.4Hz,2H),2.08(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C18H15F4N5O[M+H]+394.1，实测394.1。
实施例47：2-(4-氯-5-甲基-吡唑-1-基)-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]乙酮的合成
a)在80℃，加热2-(5-甲基吡唑-1-基)乙酸(0.700克，5毫摩尔)和NCS(0.668克，5毫摩尔)在CH3CN(10毫升)中的混合物1.5小时。然后将其冷却到室温，真空蒸发并通过快速色谱(SiO2，用0～20％MeOH/CH2Cl2梯度洗脱)纯化，从而得到2-(4-氯-5-甲基吡唑-1-基)乙酸(0.870克，100％)。
b)向1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶(0.026克，0.12毫摩尔)、3-(三氟甲基)-吡唑-1-基)乙酸(0.024克，0.12毫摩尔)和NEt3(0.060毫升，0.43毫摩尔)在DMF(0.5毫升)中的混合物中加入HATU(0.060克，0.15毫摩尔)。在室温搅拌混合物30分钟。然后用水淬灭它。在EtOAc(50毫升)和饱和的NaHCO3(30毫升)间分配混合物。分离有机层，在Na2SO4上干燥，真空浓缩并通过反相HPLC纯化，从而提供所需产物(0.025克，55％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.40(s,1H),7.48(s,1H),7.44(dd,J＝8.8,4.6Hz,2H),7.16(dd,J＝8.4,8.4Hz,2H),5.16(s,2H),3.84(m,2H),2.84(t,J＝6.4Hz,2H),2.29(s,3H),2.10(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C18H17ClFN5O[M+H]+374.1，实测374.1。
实施例48：1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-[4-(三氟甲基)吡唑-1-基]乙酮的合成
在65℃，加热4-(三氟甲基)-1H-吡唑(0.030克，0.22毫摩尔)、2-氯-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]乙酮(0.025克，0.085毫摩尔)和K2CO3(0.060克，0.43毫摩尔)在THF(0.8毫升)和DMF(0.4毫升)中的混合物1小时。然后将它冷却到室温。在EtOAc(50毫升)和饱和的NaHCO3(30毫升)间分配混合物。分离有机层，在Na2SO4上干燥，真空浓缩并通过反相HPLC纯化，从而提供所需产物(0.038克，100％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.40(s,1H),7.89(s,1H),7.77(s,1H),7.44(dd,J＝8.8,4.6Hz,2H),7.16(dd,J＝8.8,8.4Hz,2H),5.20(s,2H),3.83(m,2H),2.85(t,J＝6.2Hz,2H),2.10(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C18H15F4N5O[M+H]+394.1，实测394.1。
实施例49：1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-[3-(三氟甲基)-6,7-二氢-4H-吡喃并[4,3-c]吡唑-1-基]乙酮的合成
在55℃，加热3-(三氟甲基)-1,4,6,7-四氢吡喃并[4,3-c]吡唑(0.050克，0.26毫摩尔)、2-氯-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]乙酮(0.050克，0.17毫摩尔)和K2CO3(0.130克，0.94毫摩尔)在THF(0.8毫升)和DMF(0.4毫升)中的混合物1小时。然后将它冷却到室温。在EtOAc(50毫升)和饱和的NaHCO3(30毫升)间分配混合物。分离有机层，在Na2SO4上干燥，真空浓缩并通过反相HPLC纯化，从而提供所需产物(0.035克，55％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.38(s,1H),7.44(dd,J＝8.8,4.6Hz,2H),7.17(dd,J＝8.8,8.0Hz,2H),5.13(s,2H),4.75(s,2H),3.98(t,J＝5.4Hz,2H),3.87(m,2H),2.85(t,J＝6.2Hz,2H),2.79(t,J＝5.6Hz,2H),2.10(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C21H19F4N5O2[M+H]+450.1，实测450.1。
实施例50：1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-[4-(1,2,4-噁二唑-3-基)吡唑-1-基]乙酮的合成
a)向DMF(5毫升)中的1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶(0.400克，1.83毫摩尔),2-(4-碘-吡唑-1-基)乙酸(0.554克，2.2毫摩尔)和NEt3(0.642毫升,4.59毫摩尔)的混合物加入HATU(0.836克，2.2毫摩尔)。在室温搅拌混合物40分钟。然后用水淬灭它。在EtOAc(100毫升)和饱和的NaHCO3(50毫升)间分配混合物。分离有机层，在Na2SO4上干燥，真空浓缩并通过快速色谱(SiO2，用0～30％EtOAc/CH2Cl2梯度洗脱)纯化，从而得到1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-(4-碘吡唑-1-基)乙酮(0.82克，100％)。
b)在90℃，加热1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-(4-碘吡唑-1-基)乙酮(0.388克，0.86毫摩尔)、Zn(CN)2(0.151克，1.29毫摩尔)、Pd2(dba)3(0.079克，0.086毫摩尔)和dppf(0.072克，0.13毫摩尔)在DMF(10毫升)中的混合物1小时。然后将它冷却到室温。在EtOAc(10毫升)和饱和的NaHCO3(50毫升)间分配混合物。分离有机层，在Na2SO4上干燥，真空浓缩并通过快速色谱纯化，采用0-100％EtOAc/CH2Cl2梯度洗脱，从而得到2-(4-氰基吡唑-1-基)-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]乙酮(0.205克，68％)。
c)在90℃，加热2-(4-氰基吡唑-1-基)-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]乙酮(0.175克，0.50毫摩尔)、NH2OH-HCl(0.500克，7.2毫摩尔)和NEt3(1.00毫升，7.1毫摩尔)在EtOH(3毫升)中的混合物5小时。然后将它冷却到室温。在IPA/CHCl3(1:2,50毫升)和饱和的NaHCO3(30毫升)间分配混合物。分离有机层，在Na2SO4上干燥并真空浓缩，从而获得1-[2-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-氧-乙基]-N’-羟基-吡唑-4-甲脒(carboxamidine)(0.115克，60％)。
d)在100℃，加热1-[2-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-氧-乙基]-N’-羟基-吡唑-4-甲脒(0.115克，0.30毫摩尔)和p-TsOH.H2O(0.030克，0.15毫摩尔)在HC(OMe)3(3毫升)中的混合物1.5小时。然后将它冷却到室温。在IPA/CHCl3(1:2,50毫升)和饱和的NaHCO3(30毫升)间分配混合物。分离有机层，在Na2SO4上干燥，真空浓缩并通过反相HPLC纯化，从而提供所需产物(0.055克，21％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.71(s,1H),7.65-8.50(m,3H),7.44(dd,J＝8.4,4.6Hz,2H),7.17(dd,J＝9.2,7.6Hz,2H),5.27(m,2H),3.85(m,2H),2.85(m,2H),2.14(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C19H16FN7O2[M+H]+394.1，实测394.1。
实施例51：1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基]乙酮的合成
向DMF(0.7毫升)中的1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶(0.050克，0.23毫摩尔)、2-[3-(1H-咪唑-2-基)吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基]乙酸(0.050克，0.21毫摩尔)和Et3N(0.15毫升，1.07毫摩尔)的混合物加入HATU(0.130克，0.33毫摩尔)。在室温搅拌混合物30分钟。然后用水淬灭它。在IPA/CHCl3(1:2，100毫升)和饱和的NaHCO3(40毫升)间分配混合物。分离有机层，在Na2SO4上干燥，真空浓缩并通过反相HPLC纯化，从而提供所需产物(0.090克，96％)。1H NMR(TFA salt)(400MHz,CD3OD)δ8.73(dd,J＝4.8,1.6Hz,1H),8.69(dd,J＝8.0,1.6Hz,1H),8.14(s,1H),7.72(s,2H),7.55(m,3H),7.28(dd,J＝9.2,8.4Hz,2H),5.89(s,2H),4.06(m,2H),2.92(t,J＝6.2Hz,2H),2.20(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C23H19FN8O[M+H]+443.1，实测443.1。
实施例52：1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-[3-(三氟甲基)-4,5,6,7-四氢吲唑-1-基]乙酮的合成
将HATU(0.050克，0.13毫摩尔)加入1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶(0.023克，0.11毫摩尔)、2-[3-(三氟甲基)-4,5,6,7-四氢吲唑-1-基]乙酸(0.027克，0.11毫摩尔)和NEt3(0.050毫升，0.36毫摩尔)在DMF(0.6毫升)中的混合物。在室温搅拌混合物30分钟。然后用水淬灭它。在IPA/CHCl3(1:2,50毫升)和饱和的NaHCO3(30毫升)间分配混合物。分离有机层，在Na2SO4上干燥，真空浓缩并通过反相HPLC纯化，从而提供所需产物(0.027克，55％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.43(s,1H),7.42(dd,J＝8.8,4.4Hz,2H),7.17(dd,J＝9.2,8.0Hz,2H),5.15(s,2H),3.87(m,2H),2.82(t,J＝6.2Hz,2H),2.61(m,4H),2.11(m,2H),1.87(m,2H),1.79(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C22H21F4N5O[M+H]+448.1，实测448.1。
实施例53：2-(1,3-苯并噁唑-2-基)-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]乙酮的合成
将HATU(0.050克，0.13毫摩尔)加入1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶(0.023克，0.11毫摩尔)、苯并噁唑-2-基-乙酸(0.023克，0.13毫摩尔)和NEt3(0.060毫升，0.43毫摩尔)在DMF(0.6毫升)中的混合物。在室温搅拌混合物30分钟。然后用水淬灭它。在IPA/CHCl3(1:2，50毫升)和饱和的NaHCO3(30毫升)间分配混合物。分离有机层，在Na2SO4上干燥，真空浓缩并通过反相HPLC纯化，从而提供所需产物(0.022克，53％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.46(s,1H),7.71(m,1H),7.53(m,1H),7.45(dd,J＝8.8,4.8Hz,2H),7.34(m,2H),7.15(dd,J＝8.8,8.4Hz,2H),4.25(s,2H),3.88(m,2H),2.83(t,J＝6.4Hz,2H),2.08(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C21H17FN4O2[M+H]+377.1，实测377.1。
实施例54：2-[4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-3-甲氧基-丙-1-酮的合成
将干燥多聚甲醛(0.015克，0.50毫摩尔)加入2-[4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]乙酮(0.045克，0.10毫摩尔)和NaH(0.030克，0.75毫摩尔，60％，在矿物油中)在DMF(0.8毫升)中的混合物。在室温搅拌混合物30分钟。然后用水淬灭它。在EtOAc(50毫升)和盐水(30毫升)间分配混合物。分离有机层，在Na2SO4上干燥，真空浓缩并通过反相HPLC纯化，从而提供所需产物(0.006克，12％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.44(s,1H),7.44(dd,J＝8.8,4.6Hz,2H),7.16(dd,J＝8.4,8.4Hz,2H),5.51(dd,J＝8.0,7.2Hz,1H),4.18(m,1H),4.08(m,1H),3.75(m,1H),3.37(s,3H),3.35(m,1H),2.78(m,2H),2.33(s,3H),2.09(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C21H20ClF4N5O2[M+H]+486.1，实测486.1。
实施例55：2-[4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-3-羟基-丙-1-酮的合成
向-78℃的THF(3毫升)中的2-[4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]乙酮(0.100克，0.23毫摩尔)加入LDA(0.15毫升，0.3毫摩尔，2M，THF中)。在-78℃搅拌10分钟后，加入干燥的多聚甲醛(0.020克，0.66毫摩尔,悬浮在THF中)。然后将混合物升温至室温8分钟，采用饱和NH4Cl淬灭。在EtOAc(50毫升)和盐水(30毫升)间分配混合物。分离有机层，在Na2SO4上干燥，真空浓缩并通过反相HPLC纯化从而获得所需产物(0.060克，56％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.45(s,1H),7.43(dd,J＝8.4,4.6Hz,2H),7.17(dd,J＝8.8,8.4Hz,2H),5.40(t,J＝5.4Hz,1H),4.90(s,1H),4.30(m,1H),4.20(m,1H),3.71(m,1H),3.29(m,1H),2.79(m,2H),2.28(s,3H),1.95(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C20H18ClF4N5O2[M+H]+472.1，实测472.1。
实施例56：1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-3-羟基-2-[5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]丙-1-酮的合成
将LDA(0.15毫升，0.3毫摩尔，2M，THF中)加入-78℃的THF(3毫升)中的1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-[5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]乙酮(0.100克，0.25毫摩尔)的混合物。在-78℃搅拌10分钟后，加入干燥的多聚甲醛(0.025克，0.82毫摩尔，悬浮在THF中)。然后将混合物升温至室温8分钟，随后加入饱和NH4Cl。在EtOAc(50毫升)和盐水(30毫升)间分配混合物。分离有机层，在Na2SO4上干燥，真空浓缩并通过反相HPLC纯化，从而获得所需产物(0.056克，55％).1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.50(s,1H),7.42(m,2H),7.18(dd,J＝8.4,8.4Hz,2H),6.36(s,1H),5.41(t,J＝5.6Hz,1H),4.36(m,1H),4.20(m,1H),3.69(m,1H),3.26(m,1H),2.76(m,2H),2.31(s,3H),1.92(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C20H19F4N5O2[M+H]+438.1，实测438.1。
实施例57：1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-4-羟基-4-甲基-2-[5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]戊-1-酮的合成
a)向-78℃的1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-[5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]乙酮(0.150克，0.37毫摩尔)在THF(4毫升)的混合物中加入LDA(0.247毫升，0.50毫摩尔，2M，THF中)。在-78℃搅拌10分钟后，加入溴乙酸乙酯(0.061毫升，0.55毫摩尔)。然后将混合物升温至室温10分钟，采用饱和NH4Cl淬灭。在EtOAc(50毫升)和盐水(30毫升)间分配混合物。分离有机层，在Na2SO4上干燥，真空浓缩并通过快速色谱(SiO2，用0-60％EtOAc/己烷梯度洗脱)纯化从而得到4-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-3-[5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]-4-氧-丁酸乙酯(0.120克，83％)。
b)在室温下搅拌4-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-3-[5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]-4-氧-丁酸乙酯(0.028克，0.10毫摩尔)和MeMgCl(0.100毫升，0.30毫摩尔，3M，THF中)在THF(1毫升)中的混合物10分钟。然后采用饱和NH4Cl淬灭它并在EtOAc(50毫升)和盐水(30毫升)间分配。分离有机层，在Na2SO4上干燥，真空浓缩并通过反相HPLC纯化，从而获得所需产物(0.005克，17％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.45(s,1H),7.43(m,2H),7.16(dd,J＝8.8,8.4Hz,2H),6.31(s,1H),5.72(t,J＝6.4Hz,1H),3.88(m,1H),3.52(m,1H),2.75(m,3H),2.32(s,3H),2.25(m,2H),1.96(m,1H),1.85(m,1H),1.34(s,3H),1.18(s,3H)；MS:(ES)m/z计算C23H25F4N5O2[M+H]+480.1，实测480.1。
实施例58：1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-[5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]-3-四氢吡喃-4-基-丙-1-酮的合成
在室温下搅拌1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-[5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]乙酮(0.100克，0.25毫摩尔)、4-(碘甲基)四氢-2H-吡喃(0.165克，0.75毫摩尔)和NaH(0.030克，0.75毫摩尔,60％，在矿物油中)在DMF(0.8毫升)中的混合物1.5小时。然后采用饱和NH4Cl淬灭它。在EtOAc(50毫升)和盐水(30毫升)间分配混合物。分离有机层，在Na2SO4上干燥，真空浓缩并通过反相HPLC纯化，从而提供所需产物(0.007克，6％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.44(s,1H),7.43(dd,J＝8.8,4.8Hz,2H),7.16(dd,J＝8.8,8.4Hz,2H),6.31(s,1H),5.54(m,1H),3.95(m,2H),3.78(m,1H),3.47(m,1H),3.34(m,2H),2.75(m,2H),2.30(s,3H),2.20(m,3H),1.88(m,3H),1.40(m,3H)；MS:(ES)m/z计算C25H27F4N5O2[M+H]+506.2，实测506.2。
实施例59：4-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-3-[5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]-4-氧-丁酰胺的合成
a)在室温搅拌4-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-3-[5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]-4-氧-丁酸乙酯(0.030克，0.060毫摩尔)、LiOH●H2O(0.020克，0.47毫摩尔)、THF(0.4毫升)、MeOH(0.4毫升)和H2O(0.2毫升)的混合物30分钟。然后用1M aq.HCl(2毫升)酸化并用IPA/CHCl3(1:2,50毫升)萃取。分离有机层，在Na2SO4上干燥并真空浓缩从而获得4-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-3-[5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]-4-氧-丁酸(0.029克，100％)。
b)将HATU(0.040克，0.10毫摩尔)加入4-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-3-[5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]-4-氧-丁酸(0.029克，0.08毫摩尔)和NH3(0.3毫升，在CH2Cl2中饱和)在DMF(0.6毫升)中的混合物。在室温搅拌混合物30分钟。然后用水淬灭它。在IPA/CHCl3(1:2,50毫升)和饱和的NaHCO3(30毫升)间分配混合物。分离有机层，在Na2SO4上干燥，真空浓缩并通过反相HPLC纯化，从而提供所需产物(0.014克，37％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.44(s,1H),7.42(dd,J＝9.2,4.6Hz,2H),7.16(dd,J＝8.4,8.0Hz,2H),6.53(s,1H),6.34(s,1H),6.32(s,1H),5.92(m,1H),3.80(m,1H),3.41(m,1H),3.33(m,1H),3.00(m,1H),2.76(m,2H),2.37(s,3H),1.98(m,1H),1.88(m,1H)；MS:(ES)m/z计算C21H20F4N6O2[M+H]+465.1，实测465.1。
实施例60：4-[2-[4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]乙酰基]-1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-5-羧酸甲酯的合成
a)在氮气气氛下，向冷却的1-(4-氟苯基)吡唑并[4,3-b]吡啶(1克，4.67毫摩尔)的CH2Cl2(50毫升)溶液中一次加入mCPBA(75％,1.2克，5.14毫摩尔)。将得到的溶液升温至室温并搅拌12小时。然后采用CH2Cl2(100毫升)稀释反应混合物，采用饱和NaHCO3溶液(100毫升)洗涤。采用CH2Cl2(50毫升)萃取水层。干燥合并的有机层(MgSO4)，过滤并真空浓缩。通过快速色谱(SiO2，20％MeOH的CH2Cl2溶液)纯化粗残留物，从而提供所需产物(1.1克，4.7毫摩尔,定量产量)。
b)向1-(4-氟苯基)-4-氧-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-鎓(916毫克，4毫摩尔)的CH3CN(10毫升)溶液中加入TMSCN(800微升，6毫摩尔)和Et3N(556微升，4毫摩尔)，在80℃搅拌过夜。然后冷却反应混合物到室温并真空浓缩。通过快速色谱(SiO2,80％EtOAc的己烷溶液)纯化粗残留物，从而得到所需产物(857毫克，3.6毫摩尔,90％)。
c)将水(10毫升)加入1-(4-氟苯基)吡唑并[4,3-b]吡啶-5-腈(600毫克，2.52毫摩尔)，将混合物冷却到0℃，随后缓慢滴加浓H2SO4(10毫升)。然后在110℃搅拌获得的淡黄色澄清溶液12小时。冷却反应混合物至0℃，之后在搅拌下缓慢滴加10N NaOH直到pH为5–6。过滤得到的白色固体，并用水(30毫升)和庚烷(50毫升)洗涤，接着在高真空下干燥，从而获得所需产物(700毫克)，不需进一步纯化用于下一步骤。
d)向1-(4-氟苯基)吡唑并[4,3-b]吡啶-5-羧酸(650毫克，2.5毫摩尔)中加入CH2Cl2(40毫升)和MeOH(5毫升)，之后滴加TMSCHN2(2M，Et2O中，10毫升，过量)。在室温搅拌得到的黄色悬浮液一小时。然后采用CH2Cl2(40毫升)稀释反应混合物，采用饱和NaHCO3溶液(50毫升)洗涤，干燥(MgSO4)并真空浓缩从而获得所需粗产物(750毫克)，不需进一步纯化直接用于下一步骤。
e)将MeOH(6毫升)和12N HCl(1毫升)加入1-(4-氟苯基)吡唑并[4,3-b]吡啶-5-羧酸甲酯(100毫克，0.37毫摩尔)，之后加入20％Pd(OH)2/碳(100毫克，过量)，在帕尔振荡器上于室温在氢气(55psi)下搅拌得到的混合物36小时。然后通过小硅藻土垫过滤反应混合物，采用MeOH(20毫升)洗涤并真空浓缩。获得的残留物溶于EtOAc(50毫升)并采用饱和NaHCO3溶液(20毫升)洗涤，干燥(MgSO4)并真空浓缩，从而获得所需粗产物(30毫克)，不需进一步纯化用于下一步骤。
f)在室温下，向2-[4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]乙酸(20毫克，0.073毫摩尔)的DMF(2毫升)溶液中加入Et3N(50微升，0.219毫摩尔)和HATU(55毫克，0.145毫摩尔)，之后加入1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[4,3-b]吡啶-5-羧酸甲酯(20毫克，0.073毫摩尔)。然后在80℃搅拌得到的溶液5h。接着将反应混合物冷却到室温，加入H2O(10毫升)，并采用EtOAc(2×15毫升)萃取混合物。干燥(MgSO4)合并的EtOAc层，过滤，真空浓缩，并通过反相HPLC纯化(C18柱，含0.1％TFA的乙腈-H2O作为洗脱液)得到的粗产物，从而得到所需产物，为白色粉末(0.004克，0.008毫摩尔,7％).1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.28(s,1H),7.52(2H,dd,J＝5,9Hz),7.26(2H,t,8.6,J＝17.2Hz),5.3(2H,dd,J＝17.2,69.2Hz),3.83(s,3H),2.80-2.82(m,2H),2.29(s,3H),2.15-2.17(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C21H18ClF4N5O3[M+H]+500.1，实测500.1。
实施例61：1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-[3-(三氟甲基)-5,6-二氢-4H-环戊[c]吡唑-1-基]乙酮的合成
在室温下，向2-[3-(三氟甲基)-5,6-二氢-4H-环戊[c]吡唑-1-基]乙酸(83毫克，0.35毫摩尔)的DMF(2毫升)溶液中加入Et3N(75微升，0.525毫摩尔)和HATU(160毫克，0.42毫摩尔)，之后加入1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[4,3-b]吡啶(77毫克，0.35毫摩尔)。然后在50℃搅拌得到的溶液30分钟。接着将反应混合物冷却到室温，加入H2O(10毫升)并采用EtOAc(2×20毫升)萃取混合物。干燥(MgSO4)合并的EtOAc层，过滤并真空浓缩。通过反相HPLC(C18柱，含0.1％TFA的乙腈-H2O作为洗脱液)纯化，从而得到所需产物，为白色粉末(0.011克，0.025毫摩尔,7％).1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.15(s,1H),7.6(m,2H),7.35(t,2H,J＝8.6,17.6Hz),5.38(s,2H),3.77(m,2H),2.85(t,2H,J＝6.3,12.5Hz),2.66(m,4H),2.53(m,2H),1.97(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C21H19F4N5O[M+H]+434.2，实测434.1。
实施例62：2-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]丙-1-酮的合成
a)向4-(溴甲基)-1-氯-2-(三氟甲基)苯(3.94克，14.4毫摩尔)的DMSO(29毫升)溶液中加入NaCN(1.06克，21.6毫摩尔)。在50℃边搅拌边加热混合物1小时。冷却到室温后，将反应混合物倾入100毫升包含冰水(25毫升)的烧杯内。采用二氯甲烷(4×10毫升)萃取水层，采用盐水洗涤合并的有机层，干燥(Na2SO4)，过滤并真空浓缩，从而得到所需产物(2.5克，79％)。
b)向80℃2-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]乙腈(2.0克，9.1毫摩尔)和碘甲烷(1.29克，9.1毫摩尔)在甲苯(20毫升)中的混合物中缓慢加入NaNH2(428毫克，11毫摩尔)。在80℃搅拌混合物1小时。冷却到室温后，加入水(10毫升)。采用乙酸乙酯(2×15毫升)萃取混合物。采用盐水洗涤合并的有机层，干燥(Na2SO4)，过滤并真空浓缩。通过快速色谱(SiO2，0-15％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化粗残留物，从而提供所需产物(500毫克，24％)。
c)向2-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]丙腈(450毫克，1.93毫摩尔)的二氧六环(6毫升)溶液中加入硫酸(60％，6毫升)。在110℃加热混合物14小时。冷却到室温后，在水和二氯甲烷间分配反应混合物。采用二氯甲烷(2×10毫升)萃取水层，采用盐水洗涤合并的有机层，干燥(Na2SO4)，过滤并真空浓缩，从而得到所需产物(350毫克，72％)。
d)向2-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]丙酸(47毫克，0.184毫摩尔)和1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶(40毫克，0.184毫摩尔)在DMF(1毫升)中的混合物中加入Hunig碱(59毫克，0.46毫摩尔)和2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)(77毫克，0.2毫摩尔)。在室温搅拌混合物1小时，然后在水(4毫升)和乙酸乙酯(6毫升)间分配。采用盐水洗涤有机层，干燥(Na2SO4)，过滤，真空浓缩并通过反相HPLC(C18柱，含0.1％TFA的乙腈-H2O作为洗脱液)纯化，从而得到所需产物，为白色固体(24毫克，29％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.51(s,1H),7.62(d,J＝2.0Hz,1H),7.48-7.42(m,4H),7.16-7.11(m,2H),4.11(m,1H),3.76(m,1H),3.52(m,1H),2.77(m,2H),1.96(m,1H),1.80(m,1H),1.55(d,J＝7.2Hz,3H)；MS:(ES)m/z计算C22H18ClF4N3O[M+H]+452.1，实测452.1。
实施例63：2-[2-氯-4-(三氟甲基)苯基]-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]乙酮的合成
向2-[2-氯-4-(三氟甲基)苯基]乙酸(59毫克，0.23毫摩尔)和1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶(50毫克，0.23毫摩尔)在DMF(1毫升)中的混合物中加入Hunig碱(59毫克，0.46毫摩尔)和2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)(96毫克，0.2毫摩尔)。在室温搅拌混合物1小时，然后在水(4毫升)和乙酸乙酯(6毫升)间分配。采用盐水洗涤有机层，干燥(Na2SO4)，过滤，真空浓缩并通过反相HPLC(C18柱，含0.1％TFA的乙腈-H2O作为洗脱液)纯化，从而得到所需产物，为白色固体(25毫克，25％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.44(s,0.8H),7.70(s,1H),7.56-7.44(m,4H),7.38(s,0.2H),7.18-7-14(m,2H),4.14(s,2H),3.82(m,2H),2.85(m,2H),2.08(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C21H16ClF4N3O[M+H]+438.1，实测438.1。
实施例64：2-[1H-苯并咪唑-2-基)-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]乙酮的合成
向(1H-苯并咪唑-2-基)乙酸(41mg,0.23毫摩尔)和1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶(50毫克，0.23毫摩尔)在DMF(1毫升)中的混合物中加入Hunig碱(59毫克，0.46毫摩尔)和2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU，96毫克，0.2毫摩尔)。在室温搅拌混合物1小时，然后在水(4毫升)和乙酸乙酯(6毫升)间分配。采用盐水洗涤有机层，干燥(Na2SO4)，过滤，真空浓缩并通过反相HPLC(C18柱，含0.1％TFA的乙腈-H2O作为洗脱液)纯化，从而得到所需产物，为白色固体(0.020克，23％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.38(s,0.8H),8.00(s,1H),7.85(m,1H),7.61(s,0.2H),7.52-7.43(m,2H),7.36-7-29(m,3H),7.23-7.14(m,2H),5.18(s,2H),3.84(m,2H),2.88(m,2H),2.13(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C21H16ClF4N3O[M+H]+376.1，实测376.1。
实施例65：1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基-乙酮的合成
a)在60℃，在搅拌下加热1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(471.2毫克，4.0毫摩尔)、2-溴乙酸乙酯(530微升，4.8毫摩尔)和碳酸钾(667.9毫克，4.8毫摩尔)在DMF(5毫升)中的混合物2小时。冷却到室温后，采用20毫升水稀释反应混合物，采用EtOAc(2×30毫升)萃取。然后采用水(2×20毫升)洗涤合并的有机层，干燥(Na2SO4)，过滤并真空浓缩。通过快速色谱(SiO2，40％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化粗残留物，从而提供所需产物(371.5毫克，1.8毫摩尔，45％)。
b)在室温下搅拌2-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基乙酸乙酯(371.5毫克，1.8毫摩尔)和氢氧化锂(87.9毫克，3.6毫摩尔)在THF(4毫升)和H2O(1毫升)混合物中的混合物过夜。真空浓缩反应混合物，采用3N盐酸水溶液酸化至pH为5。过滤得到的固体，用水(2×10毫升)洗涤，真空干燥，从而提供所需产物(200.2毫克，1.1毫摩尔，62％)。
c)在室温下搅拌2-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基乙酸(51.2毫克，0.24毫摩尔)、1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[4,3-b]吡啶(50.3毫克，0.29毫摩尔)、三乙胺(200微升，1.4毫摩尔)和HATU(110.7毫克，0.29毫摩尔)在DMF(1毫升)中的混合物2小时。然后采用10毫升饱和碳酸氢钠水溶液稀释反应混合物，采用EtOAc(2×15毫升)萃取。然后用水(2×20毫升)洗涤合并的有机层，干燥(Na2SO4)，过滤并真空浓缩。通过快速色谱(SiO2,70％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化粗残留物，从而提供所需产物(25.9毫克，0.07毫摩尔,28％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.40(s,0.8H),8.30(dd,J＝4.8,1.6Hz,1H),7.94(dd,J＝7.2,1.6Hz,1H),7.81(s,0.2H),7.45(m,2H),7.36(d,J＝3.6Hz,0.8H),7.31(d,J＝3.6Hz,0.2H),7.18(m,2H),7.09(dd,J＝7.6,4.8Hz,1H),6.58(d,J＝3.6Hz,1H),5.44(s,0.2H),5.32(s,0.8H),3.91(m,2H),2.84(m,2H),2.07(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C21H18FN5O[M+H]+376.1，实测376.1。
实施例66：1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基-乙酮的合成
a)在60℃，在搅拌下加热3H-咪唑并[4,5-b]吡啶(952.7毫克，8.0毫摩尔)、2-溴乙酸乙酯(1.0mL,9.6毫摩尔)和碳酸钾(1.37克，9.6毫摩尔)在DMF(10毫升)中的混合物2小时。冷却到室温后，采用20毫升水稀释反应混合物，采用EtOAc(2×30毫升)萃取。然后用水(2×20毫升)洗涤合并的有机层，干燥(Na2SO4)，过滤并真空浓缩。通过快速色谱(SiO2，100％乙酸乙酯到10％MeOH的EtOAc溶液)纯化粗残留物，从而提供所需产物(489.3毫克，2.4毫摩尔，30％)。
b)在室温下搅拌2-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基乙酸乙酯(400.3毫克，1.9毫摩尔)和氢氧化锂(96.7毫克，4.0毫摩尔)在THF(4毫升)和H2O(1毫升)混合物中的混合物过夜。真空浓缩反应混合物，采用3N盐酸水溶液酸化至pH为5。然后真空干燥水溶液从而获得粗产物，直接用于下一步骤。
c)在室温下搅拌2-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基乙酸(251.7毫克，过量)、1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[4,3-b]吡啶(42.7毫克，0.23毫摩尔)、三乙胺(200微升，1.4毫摩尔)和HATU(87.9毫克，0.23毫摩尔)在DMF(1毫升)中的混合物2小时。采用10毫升饱和碳酸氢钠水溶液稀释反应混合物，采用EtOAc(2×15毫升)萃取。然后采用水(2×20毫升)洗涤合并的有机层，干燥(Na2SO4)，过滤并真空浓缩。通过快速色谱(SiO2，10％MeOH的EtOAc溶液)纯化粗残留物，从而提供所需产物(26.1毫克，0.07毫摩尔，30％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.38(d,J＝7.2Hz 1H),8.50(s,0.8H),8.25(s,0.2H),8.12(d,J＝5.6Hz,1H),7.45(m,2H),7.28(m,1H),7.15(m,2H),),5.46(s,0.2H),5.33(s,0.8H),3.95(m,2H),2.88(m,2H),2.15(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C20H17FN6O[M+H]+377.1，实测377.1。
实施例67：2-[4-氯-5-甲基-3-(甲磺酰基)吡唑-1-基]-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]乙酮的合成
a)向1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶(303毫克，1.40毫摩尔)、2-[4-氯-5-甲基-3-(三氟甲基)吡唑-1-基]乙酸(420毫克，1.40毫摩尔)和i-Pr2NEt(1毫升，7.0毫摩尔)在DMF(5毫升)中的混合物中加入HATU(583毫克，1.54毫摩尔)。接着在室温下搅拌得到的溶液过夜。然后采用EtOAc(50毫升)稀释反应混合物，采用水(3×10毫升)洗涤。干燥EtOAc层(Na2SO4)，过滤并真空浓缩。粗产物(480毫克，70％)直接用于下一步骤。
b)在110℃加热2-(4-氯-5-甲基-3-碘吡唑-1-基)-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]乙酮(85毫克，0.17毫摩尔)、NaSO2Me(52毫克，0.51毫摩尔)和CuI(98毫克，0.51毫摩尔)在DMSO(3毫升)中的混合物过夜。冷却到室温后，采用EtOAc(50毫升)稀释反应混合物并用水(3×10毫升)洗涤。干燥EtOAc层(Na2SO4)，过滤，真空浓缩并通过反相HPLC(C18柱，含0.1％TFA的乙腈-H2O作为洗脱液)纯化，从而得到所需产物，为白色粉末(42毫克，55％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.15(s,1H),7.60(m,2H),7.38(dd,J＝8.9,8.1Hz,2H),5.58(s,2H),3.80(m,2H),3.28(s,3H),2.83(t,J＝5.7Hz,2H),2.22(s,3H),2.00(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C19H20ClFN5O3S[M+H]+452.1，实测452.0。
实施例68：2-(4-氯-5-甲基-3-氰基吡唑-1-基)-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]乙酮的合成
在90℃，加热2-(4-氯-5-甲基-3-碘吡唑-1-基)-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]乙酮(430毫克，0.86毫摩尔)、Zn(CN)2(151毫克，1.3毫摩尔)、dppf(72毫克，0.14毫摩尔)和Pd2(dba)3(79毫克，0.09毫摩尔)在DMF(10毫升)和水(0.5毫升)中的混合物过夜。冷却到室温后，采用EtOAc(30毫升)稀释反应混合物并用水(3×5毫升)洗涤。干燥EtOAc层(Na2SO4)，过滤并真空浓缩。采用1:1CH2Cl2/MeOH(3x 5毫升)研磨残留物，从而得到所需产物，为白色粉末(250毫克，72％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.15(s,1H),7.58(m,2H),7.35(dd,J＝8.7,8.1Hz,2H),5.58(s,2H),3.80(m,2H),2.84(t,J＝5.4Hz,2H),2.25(s,3H),2.00(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C19H17ClF4N5O[M+H]+399.1，实测399.1。
实施例69：2-[4-氯-3-(4,5-二氢-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-吡唑-1-基]-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]乙酮三氟乙酸盐的合成
在100℃加热2-(4-氯-5-甲基-3-氰基吡唑-1-基)-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]乙酮(150毫克，0.38毫摩尔)、乙二胺(2毫升)和乙酸(0.3毫升)在乙醇(5毫升)中的混合物2小时。冷却到室温后，采用CH2Cl2(50毫升)稀释反应混合物并用水(3×10毫升)洗涤。干燥有机层(Na2SO4)，过滤并真空浓缩。通过反相HPLC(C18柱，含0.1％TFA的乙腈-H2O作为洗脱液)纯化，得到2-[4-氯-3-(4,5-二氢-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-吡唑-1-基]-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]乙酮三氟乙酸盐，为白色粉末(84毫克，51％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.21(s,2H),8.15(s,1H),7.58(m,2H),7.37(dd,J＝8.7,8.1Hz,2H),5.60(s,2H),3.92(s,4H),3.82(m,2H),2.89(t,J＝4.9Hz,2H),2.29(s,3H),2.01(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C21H22ClFN7O[M+H]+442.2，实测442.1。
实施例70：2-[4-氯-3-(1H-咪唑-2-基)-5-甲基-吡唑-1-基]-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]乙酮的合成
在80℃，将2-[4-氯-3-(4,5-二氢-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-吡唑-1-基]-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]乙酮(45毫克，0.1毫摩尔)和戴斯马丁氧化剂(80毫克，0.2毫摩尔)在DMSO(1毫升)中的混合物加热1小时。冷却到室温后，采用CH2Cl2(20毫升)稀释反应混合物并采用水(3×5毫升)洗涤。干燥(Na2SO4)有机层，过滤，真空浓缩并通过反相HPLC(C18柱，含0.1％TFA的乙腈-H2O作为洗脱液)纯化，从而得到2-[4-氯-3-(1H-咪唑-2-基)-5-甲基-吡唑-1-基]-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]乙酮，为白色粉末(32毫克，73％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.09(s,1H),7.60(s,2H),7.52(m,2H),7.30(dd,J＝8.8,8.3Hz,2H),5.49(s,2H),3.90(m,2H),2.82(t,J＝5.1Hz,2H),2.22(s,3H),1.95(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C21H20ClFN7O[M+H]+440.1，实测440.1。
实施例71：(2S)-1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-[2-甲基-4-(三氟甲基)咪唑-1-基]丙-1-酮的合成
向(2S)-2-[2-甲基-4-(三氟甲基)咪唑-1-基]丙酸(0.020克，0.09毫摩尔)的CH2Cl2(3毫升)溶液中加入草酰氯(0.040毫升，0.46毫摩尔)和DMF(1滴)。室温20分钟后，真空浓缩混合物，将残留物加入包含CH2Cl2(3毫升)中的1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[4,3-b]吡啶(0.028克，0.13毫摩尔)和NEt3(0.060毫升，0.43毫摩尔)的另一烧瓶内。在室温下搅拌得到的混合物20分钟，采用饱和NaHCO3水溶液(30毫升)淬灭，采用乙酸乙酯(50毫升)萃取。在无水硫酸钠上干燥有机层，真空浓缩并通过快速色谱(SiO2，0-8％MeOH/EtOAc)纯化，从而得到标题化合物(0.030克，44％，TFA盐)，为白色固体。1H NMR(TFA盐)(400MHz,CDCl3)δ9.70(s,1H),8.43(s,1H),7.78(d,J＝0.8Hz,1H),7.42(dd,J＝9.2,8.8Hz,2H),7.20(dd,J＝8.8,8.4Hz,2H),5.61(q,J＝7.2Hz,1H),3.89(m,2H),2.84(dd,J＝6.2,6.2Hz,2H),2.65(s,3H),2.15(m,2H),1.84(d,J＝7.2Hz,3H).MS:(ES)m/z计算C20H19F4N5O[M+H]+(游离形式)422.1，实测422.1；通过手性正相色谱(RegisPack,25cm x 4.6mm,5微米,cat#793104,0.1％DEA/IPA,0.7mL/min)分析标题化合物。(S)-对映异构体(主峰)的保留时间为7.2分钟，(R)-对映异构体(次峰)的保留时间为6.2分钟(以19:1分离)。
实施例72：(2S)-1-[1-(4-氯苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-[2-甲基-4-(三氟甲基)咪唑-1-基]丙-1-酮的合成
向(2S)-2-[2-甲基-4-(三氟甲基)咪唑-1-基]丙酸(0.020克，0.09毫摩尔)的CH2Cl2(1.5毫升)溶液中加入草酰氯(0.050毫升，0.58毫摩尔)和DMF(1滴)。室温20分钟后，真空浓缩混合物并将残留物加入到包含CH2Cl2(1毫升)中的1-(4-氯苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[4,3-b]吡啶(0.028克，0.13毫摩尔)和NEt3(0.050毫升，0.35毫摩尔)的另一烧瓶内。在室温下搅拌得到的混合物20分钟，采用饱和NaHCO3水溶液(30毫升)淬灭，并采用乙酸乙酯(50毫升)萃取。在无水硫酸钠上干燥有机层，真空浓缩通过快速色谱(SiO2，0-6％MeOH/EtOAc)纯化，从而得到标题化合物(0.022克，32％,TFA盐)，为白色固体。1H NMR(游离形式)(400MHz,CDCl3).8.46(s,1H),7.44(m,4H),7.42(dd,J＝9.2,8.8Hz,2H),7.37(d,J＝1.2Hz,1H),5.21(q,J＝7.2Hz,1H),3.75(m,1H),3.53(m,1H),2.86(dd,J＝6.4,6.4Hz,2H),2.46(s,3H),1.72(d,J＝6.8Hz,3H)。MS:(ES)m/z计算C20H19ClF3N5O[M+H]+(游离形式)438.1，实测438.1；通过手性正相色谱(RegisPack,25cm x 4.6mm,5微米,cat#793104,0.1％DEA/IPA,0.7mL/min)分析标题化合物。(S)-对映异构体(主峰)的保留时间为8.4分钟，(R)-对映异构体(次锋)的保留时间为6.4分钟(以18:1分离)。
实施例73：1-[1-(4-氟苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-[5-甲基-3-(三氟甲基)-1,2,4-三唑-1-基]丙-1-酮的合成
a)在室温下，搅拌2-溴丙酸乙酯(3.16克，17.5毫摩尔)、5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-1,2,4-三唑(2.20克，14.6毫摩尔)和K2CO3(4.00克，29.1毫摩尔)的THF/H2O(2:1,30毫升)溶液5h。采用EtOAc(50毫升)稀释混合物。采用水和盐水洗涤有机层，干燥(MgSO4)，过滤并真空浓缩，从而得到所需产物(4.0克)，为无色油，不需纯化用于以下步骤。
b)在45℃，采用2N LiOH(15mL,30毫摩尔)处理THF(40毫升)中的步骤a的粗材料1小时并浓缩。采用水(20毫升)稀释残留物，采用1M H2SO4调节pH为2，并采用EtOAc(50毫升)萃取。干燥(MgSO4)有机层，过滤并真空浓缩，从而得到所需酸(2.56克，10.2毫摩尔，70％，两步)，为无色固体。
c)向2-[5-甲基-3-(三氟甲基)-1,2,4-三唑-1-基]丙酸(0.051克，0.23毫摩尔)和1-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶(0.050克，0.23毫摩尔)在DMF(1毫升)中的混合物中加入Hunig碱(0.059克，0.46毫摩尔)和2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟膦酸酯(HATU)(0.096克，0.25毫摩尔)。在室温搅拌混合物1小时，然后在水(4毫升)和乙酸乙酯(6毫升)间分配。采用盐水洗涤有机层，干燥(Na2SO4)，过滤，真空浓缩并通过反相HPLC纯化(C18柱，含0.1％TFA的乙腈-H2O作为洗脱液)，从而得到所需产物，为白色固体(0.029克，0.069毫摩尔，30％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.42(s,1H),7.44(ddd,J＝10.4,5.2,2.8Hz,2H),7.21–7.10(m,2H),5.61(q,J＝7.1Hz,1H)；3.77(ddd,J＝12.6,7.5,3.0Hz,1H),3.52(ddd,J＝12.5,8.4,3.0Hz,1H),2.82(td,J＝6.4,2.4Hz,2H),2.52(s,3H),2.10-1.80(m,5H)；MS:(ES)m/z计算C19H18ClF3N6O[M+H]+423.1，实测422.9。
实施例74：1-[1-(4-氯苯基)-6,7-二氢-5H-吡唑并[4,3-b]吡啶-4-基]-2-[5-甲基-3-(三氟甲基)-1,2,4-三唑-1-基]丙-1-酮的合成
向2-[5-甲基-3-(三氟甲基)-1,2,4-三唑-1-基]丙酸(0.048克，0.21毫摩尔)和1-(4-氯苯基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶(0.050克，0.21毫摩尔)在DMF(1毫升)中的混合物中加入Hunig碱(0.055克，0.42毫摩尔)和2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟膦酸酯(HATU)(0.090克，0.23毫摩尔)。在室温搅拌混合物1小时，然后在水(4毫升)和乙酸乙酯(6毫升)间分配。采用盐水洗涤有机层，干燥(Na2SO4)过滤，真空浓缩并通过反相HPLC纯化(C18柱，含0.1％TFA的乙腈-H2O作为洗脱液)，从而得到所需产物，为白色固体(0.028克，0.063毫摩尔，30％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.44(s,1H),7.43(s,4H),5.60(q,J＝7.1Hz,1H),3.77(ddd,J＝12.6,7.5,3.0Hz,1H),3.52(ddd,J＝12.3,8.3,3.0Hz,1H),2.84(tt,J＝6.9,3.3Hz,2H),2.52(s,3H),2.09-1.81(m,5H)；MS:(ES)m/z计算C19H18ClF3N6O[M+H]+439.1，实测438.9。
实施例75
本实施例举例说明与本发明感兴趣的化合物(代表性化合物)相关的生物活性的评价。
材料和方法
A.细胞
1.CCR1表达细胞
a)THP-1细胞
THP-1细胞获自ATCC(TIB-202)，悬浮培养在RPMI-1640培养液中，其添加2mM L-谷氨酰胺、1.5g/L碳酸氢钠、4.5g/L葡萄糖、10mM HEPES、1mM丙酮酸钠、0.05％2-巯基乙醇和10％FBS。细胞在5％CO2/95％空气、100％湿度和37℃条件下生长，以1:5每周传代培养两次(以密度为2x 105-2x 106细胞/毫升培养细胞)，并在1x 106细胞/毫升时收集细胞。THP-1细胞表达CCR1，可以用于CCR1结合和功能试验。
b)分离的人单核细胞
使用Miltenyi珠隔离系统(美天旎公司-Miltenyi,Auburn,CA)从人血沉棕黄层分离单核细胞。简单地，为分离外周血单核细胞进行Ficoll梯度分离后，采用PBS洗涤细胞，使用标准程序裂解红血球。采用偶联到磁珠的抗-CD14抗体(美天旎公司,Auburn,CA)标记剩余细胞。标记的细胞通过全自动磁性细胞分选器AutoMACS(美天旎公司,Auburn,CA)并收集阳性部分。单核细胞表达CCR1，可以用于CCR1结合和功能试验。
B.试验
1.抑制CCR1配体结合
离心CCR1表达细胞并在试验缓冲液中重悬(20mM HEPES pH 7.1,140mMNaCl,1mM CaCl2,5mM MgCl2,且含0.2％牛血清白蛋白)，浓度为5x 106细胞/毫升(对于THP-1细胞)和5x 105(对于单核细胞)。如下进行结合试验。将0.1毫升细胞(5x 105THP-1细胞/孔或5x 104单核细胞)加入到包含化合物的试验板中，得到终浓度为～2-10μM的各化合物以供筛选(或剂量响应部分以供化合物IC50测定)。然后加入0.1毫升125I标记的MIP-1α(获自珀金埃尔默生命科学，波士顿，马萨诸塞州)或0.1毫升125I标记的CCL15/白细胞诱素(作为定制的放射性标记获自珀金埃尔默生命科学，波士顿，马萨诸塞州)，其在试验缓冲液中稀释到终浓度为～50pM，获得～30,000cpm/孔(使用125I标记的MIP-1α和THP-1细胞以及125I标记的CCL15/白细胞诱素和单核细胞)，密封板，在振荡器中于4℃孵育约3小时。利用真空细胞收集器(PK仪器公司-Packard Instruments；梅里登,康涅狄格州)上，反应抽吸到预先浸泡在0.3％聚乙烯亚胺(PEI)溶液中的GF/B玻璃滤器上。在各孔中加入闪烁液(40微升；Microscint 20,PK仪器公司)，密封板，利用Topcount闪烁记数器(PK仪器公司)检测放射性。仅包含稀释液(为总计数)或包含过量MIP-1α或MIP-1β(1μg/mL，为非特异结合)的对照孔用于计算化合物总抑制百分比。GP公司(GraphPad,Inc.,圣地亚哥,加利福尼亚州)的计算机程序Prism用于计算IC50值。IC50值是将标记的MIP-1α与受体结合降低50％所需的那些浓度。(为进一步描述配体结合和其他功能试验，参见Dairaghi等,J.Biol.Chem.274:21569-21574(1999),Penfold等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.96:9839-9844(1999)和Dairaghi等,J.Biol.Chem.272:28206-28209(1997))。
2.钙动员
为检测胞内储存钙的释放，在室温下将将细胞(THP-1或单核细胞)与3μMINDO-1AM染料(分子探针公司；尤金,俄勒冈州)在细胞培养液中一起孵育45分钟，并用磷酸缓冲盐(PBS)洗涤。负载INDO-1AM后，细胞重悬在流通缓冲液(Hank’s平衡盐溶液(HBSS)和1％FBS)内。采用光子技术国际分光光度计(光子技术国际公司；新泽西州)检测钙动员，在350nm激发，在400nm和490nm同时记录两荧光发射。以400nm/490nm发射率表示相对胞内钙水平。实验在37℃进行，在各含2毫升流通缓冲液中的106细胞的比色皿中恒定混合。可以利用1-100nM范围的趋化因子配体。绘制反射率与时间(通常2-3分钟)的图。在10秒，加入候选的配体阻断化合物(至多10μM)，之后在60秒加入趋化因子(即MIP-1α；R&D系统公司-R&D Systems；明尼阿波利斯,明尼苏达州)和在150秒加入对照趋化因子(即SDF-1α；R&D系统公司；明尼阿波利斯,明尼苏达州)。
3.趋化性试验
在96孔趋化室(神经探针公司-Neuroprobe；盖瑟斯堡,马里兰州)内，使用5微米孔聚碳酸酯、聚乙烯吡咯烷酮涂覆的过滤器，使用趋化缓冲液(Hank’s平衡盐溶液(HBSS)和1％FBS)实施趋化性试验。使用CCR1趋化因子配体(即MIP-1α,CCL15/白细胞诱素；R&D系统公司；明尼阿波利斯,明尼苏达州)评价化合物介导抑制CCR1介导的迁移。其他趋化因子(即SDF-1α；R&D系统公司；明尼阿波利斯,明尼苏达州)用作特异性对照。下室载有29微升趋化因子(即0.1nM CCL15/白细胞诱素)和不同量的化合物，上室在20微升内包含100,000THP-1或单核细胞。在37℃孵育室1-2小时，采用以每孔5个高倍视野中的直接细胞计数或通过检测核酸含量的CyQuant试验(分子探针公司)-一种荧光染色方法，以及通过用Spectrafluor Plus(Tecan)检测对下室的细胞数量进行定量。GP公司(圣地亚哥,加利福尼亚州)的计算机程序Prism用于计算IC50值。IC50值是将响应CCR1激动剂的细胞数量抑制50％所需的那些化合物浓度。
4.体内效果
a)破坏性关节炎的兔模型
基本上如Podolin等J.Immunol.169(11):6435-6444(2002)中描述的进行兔LPS研究。在两膝盖处采用LPS(10纳克)关节内注射处理雌性新西兰兔(约2千克)。感兴趣的化合物，如1.016(在1％甲基纤维素中配制)或载体(1％甲基纤维素)以5ml/kg剂量体积口服两次(关节内LPS注射前2小时和关节内LPS注射后4小时)。注射LPS 16小时后，灌洗膝盖，进行细胞计数。通过募集到膝关节的发炎滑液的炎症细胞数量的减少确定治疗的有效效果。采用感兴趣的化合物进行治疗导致募集的细胞显著减少。
b)在胶原蛋白诱导关节炎大鼠模型中评价感兴趣的化合物
为评价感兴趣的化合物在关节炎诱导临床踝肿胀中的效果，进行为期17天II型胶原蛋白关节炎研究。大鼠胶原蛋白关节炎是多发性关节炎的实验模型，已经广泛用于很多抗关节炎试剂的临床前测试(参见Trentham等,J.Exp.Med.146(3):857-868(1977),Bendele等,Toxicologic Pathol.27:134-142(1999),Bendele等,Arthritis Rheum.42:498-506(1999))。这种模式的特点是发病可靠和发展强劲，易于检测多关节炎症的进展，与血管翳形成相关的显著软骨破坏，以及轻度至中度的骨吸收和骨膜骨增生。
采用异氟烷麻醉雌性Lewis大鼠(约0.2千克)，并在该17天研究的第0天和第6天采用包含2mg/mL牛II型胶原蛋白的弗氏不完全佐剂在尾巴底部和背部两处进行注射。从第0天直到第17天以皮下方式每日以有效剂量施用感兴趣的化合物。采用卡尺测量踝关节直径，减少关节肿胀作为功效的量度。
皮肤疾病的鼠模型
可在噁唑酮诱导的皮肤迟发型过敏反应鼠模型中评估本发明的化合物。简单地，在第0天，采用溶于乙醇的1％噁唑酮溶液在8-10周龄BALB/c小鼠的剃毛腹部局部敏化。敏化后第6天，恰在右耳局部施用0.5％噁唑酮的乙醇溶液之前以及4小时后，口服给予小鼠载体或剂量渐增的本发明化合物。翌日(第7天)，使用卡尺检测耳厚度。与载体处理的对照相比，采用化合物处理的动物的耳肿胀显著减小，表明化合物减轻噁唑酮诱导的皮肤过敏。
哮喘的鼠模型
可以在变应性哮喘的鼠模型中评价本发明化合物。通过在第0天和第10天采用明矾佐剂配制的OVA敏化8-10周龄BALB/c小鼠以诱导鼠哮喘。在第20天，小鼠鼻内施用PBS配制的OVA，从而引起气道炎症。从第20天开始持续到第23天，采用载体或剂量渐增的本发明化合物处理各组小鼠。在鼻内施用OVA后的第23天分析动物的支气管肺泡灌洗(BAL)中的细胞浸润物。相对于载体处理的小鼠，BAL白细胞数量显著降低表明化合物在该模型中是有效的。
癌症的鼠模型
本实施例描述评价CCR1拮抗剂对治疗恶性肿瘤效力的过程。正常小鼠品系可以移植良好表征的各种不同的小鼠肿瘤系，包括小鼠胸腺瘤EL4，其已转染有OVA从而能够容易评价接种OVA后肿瘤特异抗原响应。如下测试任何这些肿瘤模型的三个系列的小鼠组的CCR1拮抗剂效力：在肿瘤移植后对一个系列的小鼠立刻腹膜内注射额外的PBS和吐温0.5％，然后以不同给药时间表给药。第二系列由在肿瘤移植后立即经腹膜内、静脉内、皮下、肌内、口服或通过任何其他给药模式施用不同剂量的CCR1拮抗剂，然后以不同给药时间表给药的小鼠组构成。第三系列的小鼠，作为阳性对照，由在肿瘤移植后立即腹膜内施用抗IL4抗体，抗IFNg抗体，IL4或TNF，然后以不同给药时间表给药的组构成。通过肿瘤生长与消退监控效力。在OVA转染EL4胸腺瘤模型中，可以通过体外用OVA刺激引流淋巴结细胞并在72小时检测抗原特异细胞毒性来检测溶细胞OVA特异性应答。
炎性肠病的鼠模型
缺乏P-糖蛋白基因的MDR1a-敲除小鼠在无特异病原体条件下自发形成结肠炎。在这些动物中病理学特征已被表征为Th1型T细胞介导炎症，与人溃疡性结肠炎类似。疾病通常在出生后大约8-10周开始产生。但是在疾病出现的年龄和最终的渗透率水平(penetrance level)往往在不同动物设施之间差异很大。在使用MDR1a-敲除小鼠的研究中，可以根据给药时间对CCRL拮抗剂作预防性或治疗性评价。将感兴趣的化合物以对化合物合适的方式施用给雌性小鼠(n＝34)，例如每日以皮下方式施用有效剂量。这项研究评估IBD相关生长迟缓，并为肛门排出物和刺激进行评分。减少肛门排出物和刺激或抑制IBD相关生长迟缓的化合物表明化合物在该症状中的效力。
实体肿瘤的鼠模型
小鼠RENCA肿瘤模型精确模拟成人肾细胞癌的进展(尤其是自发转移到肺的)并作为实体瘤模型。Balb/c 6-8周龄雌性小鼠在肾囊下接种约5e5RENCA细胞(小鼠肾腺癌；ATCC cat#CRL-2947)，经22天观察肾肿瘤生长，早在第15天观察肺转移。从肿瘤植入时给予动物载体或本发明化合物，例如每日皮下施用，从而监测对原发性生长的影响，或在稍后的时间(例如7天)施用，以监测化合物对转移的效果。用机械卡尺每周两次测量原发性肿瘤区域。通过式v＝pab2/6计算肿瘤体积，其中a是最长直径，b是与a垂直的次最长直径。肿瘤体积或转移发病率的降低表明化合物在该病症中的效力。
辐射诱导肺病(RIPD)的鼠模型
各种模型可以用于评价本发明化合物在恢复RIPD中的效力。例如Tokuda等描述的博来霉素诱导肺纤维化模型(Tokuda等,J Immunol.164(5):2745-51(2000))。或者Yang等描述的直接辐射引起的疾病模型(Yang等,Am J Respir Cell Mol Biol.45(1):127-35(2011))。简单地，固定10-12周龄的、化合物治疗或非治疗的麻醉小鼠，除胸腔外均被铅屏蔽，采用14.5Gy单剂量由铯源以1.65Gy/min辐照动物。在该剂量下，存活率足够，从而能获得用于长期分析的充足动物数量。通过本领域已知的很多方法评价化合物的效力，包括肺力学评估，肺羟脯氨酸水平等。
在下表中，给出本文描述的代表性化合物的结构和活性。对于上述的趋化性试验或结合试验，提供如下所示的活性：+，IC50>12.5uM；++，2500nM<IC50<12.5uM；+++，1000nM<IC50<2500nM和++++，IC50<1000nM。
表1
具体实施例

Claims (27)

1.一种具有下式的化合物，或其盐、旋转异构体或光学异构体：
其中，
下标n是0-3的整数；
各R1a和R1b独立选自下组：H、C1-8烷基、C1-8卤代烷基、C3-6环烷基、-CORa、-CO2Ra、-CONRaRb、-NRaRb、-NRaCORb、-ORa、-X1CORa、-X1CO2Ra、-X1CONRaRb、-X1NRaCORb、-X1NRaRb和-X1ORa，其中，X1为C1-4亚烷基，且各Ra和Rb独立选自下组：氢、C1-8烷基、C1-8卤代烷基和C3-6环烷基；任选地，相邻碳原子上两R1a连接形成5-、6-或7-元碳环或杂环；
各R2a和R2b独立选自下组：H、羟基、C1-8烷基、C1-8卤代烷基、C1-8烷氧基、C1-4烷氧基-C1-4烷基、C1-8羟基烷基、C1-4烷氧基-C1-4烷氧基、C3-6环烷基、C3-6环烷基-C1-4烷基、3-到7-元杂环烷基、3-到7-元杂环烷基-C1-4烷基、-X1CO2Ra、-X1CONRaRb、-X1NRaCORb、-X1NRaRb，其中，X1、Ra和Rb如上定义；
Ar1选自下组：6-或10-元单环或稠合的双环芳环，和5-到10-元单环或稠合的双环杂芳环，各个被独立选自下组的R3、R3a、R3b、R4和R4a中1-5个取代基取代：H、卤素、-ORc、-OC(O)Rc、-NRcRd、-SRc、-Re、-CN、-NO2、-CO2Rc、-CONRcRd、-C(O)Rc、-OC(O)NRcRd、-NRdC(O)Rc、-NRdC(O)2Re、-NRc-C(O)NRcRd、-NH-C(NH2)＝NH、-NReC(NH2)＝NH、-NH-C(NH2)＝NRe、-NH-C(NHRe)＝NH、-S(O)Re、-S(O)2Re、-NRcS(O)2Re、-S(O)2NRcRd、-N3、-X2ORc、-O-X2ORc、-X2OC(O)Rc、-X2NRcRd、-O-X2NRcRd、-X2SRc、-X2CN、-X2NO2、-X2CO2Rc、-O-X2CO2Rc、-X2CONRcRd、-O-X2CONRcRd、-X2C(O)Rc、-X2OC(O)NRcRd、-X2NRdC(O)Rc、-X2NRdC(O)2Re、-X2NRcC(O)NRcRd、-X2NH-C(NH2)＝NH、-X2NReC(NH2)＝NH、-X2NH-C(NH2)＝NRe、-X2NH-C(NHRe)＝NH、-X2S(O)Re、-X2S(O)2Re、-X2NRcS(O)2Re、-X2S(O)2NRcRd、-X2N3、-NRd-X2ORc、-NRd-X2NRcRd、-NRd-X2CO2Rc和-NRd-X2CONRcRd，其中，各X2独立选自下组：C1-4亚烷基；且各Rc和Rd独立选自氢、C1-8烷基、C1-8羟基烷基、C1-8卤代烷基和C3-6环烷基；或任选地，当连接到同一氮原子时，Rc和Rd可以与该氮原子结合从而形成具有0-2个其他杂原子作为环成员的5或6-元环；各Re独立选自下组：C1-8烷基、C1-8羟基烷基、C1-8卤代烷基和C3-6环烷基；
Ar2选自下组：6-或10-元单环或稠合的双环芳环，和5-到10-元单环或稠合的双环杂芳环，各个被独立选自下组的R5、R6、R7、R8和R9中1-5个取代基取代：H、卤素、-ORf、-OC(O)Rf、-NRfRg、-SRf、-Rh、-CN、-NO2、-CO2Rf、-CONRfRg、-C(O)Rf、-OC(O)NRfRg、-NRgC(O)Rf、-NRgC(O)2Rh、-NRf-C(O)NRfRg、-NH-C(NH2)＝NH、-NRhC(NH2)＝NH、-NH-C(NH2)＝NRh、-NH-C(NHRh)＝NH、-S(O)Rh、-S(O)2Rh、-NRfS(O)2Rh、-S(O)2NRfRg、-NRfS(O)2NRfRg、-N3、-X3ORf、-X3OC(O)Rf、-X3NRfRg、-X3SRf、-X3CN、-X3NO2、-X3CO2Rf、-X3CONRfRg、-X3C(O)Rf、-X3OC(O)NRfRg、-X3NRgC(O)Rf、-X3NRgC(O)2Rh、-X3NRf-C(O)NRfRg、-X3NH-C(NH2)＝NH、-X3NRhC(NH2)＝NH、-X3NH-C(NH2)＝NRh、-X3NH-C(NHRh)＝NH、-X3S(O)Rh、-X3S(O)2Rh、-X3NRfS(O)2Rh、-X3S(O)2NRfRg、-Y、-X3Y、-S(O)2Y、-C(O)Y、-X3N3、-O-X3ORf、-O-X3NRfRg、-O-X3CO2Rf、-O-X3CONRfRg、-NRg-X3ORf、-NRg-X3NRfRg、-NRg-X3CO2Rf和-NRg-X3CONRfRg，其中，Y是5或6-元芳环、杂芳环或杂环，任选地被选自下组的1-3个取代基取代：卤素、-ORf、-OC(O)Rf、-NRfRg、-Rh、-SRf、-CN、-NO2、-CO2Rf、-CONRfRg、-C(O)Rf、-NRgC(O)Rf、-NRgC(O)2Rh、-S(O)Rh、-S(O)2Rh、-NRfS(O)2Rh、-S(O)2NRfRg、-X3ORf、X3SRf、-X3CN、-X3NO2、-X3CO2Rf、-X3CONRfRg、-X3C(O)Rf、-X3OC(O)NRfRg、-X3NRgC(O)Rf、-X3NRgC(O)2Rh、-X3NRf-C(O)NRfRg、-X3OC(O)Rf、-X3S(O)Rh、-X3S(O)2Rh、-X3NRfRg、-X3NRfS(O)2Rh、-X3S(O)2NRfRg、-O-X3ORf、-O-X3NRfRg、-O-X3CO2Rf、-O-X3CONRfRg、-NRg-X3ORf、-NRg-X3NRfRg、-NRg-X3CO2Rf和-NRg-X3CONRfRg，其中，各X3独立选自下组：C1-4亚烷基，且各Rf和Rg独立选自氢、C1-8烷基、C1-8羟基烷基、C1-8卤代烷基和C3-6环烷基，或当连接到同一氮原子时，Rf和Rg可以与氮该原子结合从而形成具有0-2个其他杂原子作为环成员的5或6-元环；各Rh独立选自下组：C1-8烷基、C2-8烯基、C2-8炔基、C1-8羟基烷基、C1-8卤代烷基和C3-6环烷基；或者当R5、R6、R7、R8和R9中的两个连接到Ar2的相邻环顶点时，它们任选结合从而形成具有0、1或2个选自O和N的杂原子作为环成员的5或6元环。
2.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，Ar1选自下组：苯基、萘基、吡啶基、吡嗪基、哒嗪基、嘧啶基、三嗪基、喹啉基、喹喔啉基和嘌呤基，各个任选地被R3、R3a、R3b、R4和R4a取代。
3.如权利要求1或2所述的化合物，其特征在于，Ar2选自下组：苯基、吡唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、氧杂噻二唑基、吡咯基、噻唑基、异噻唑基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并吡唑基、苯并三唑基、吡唑并[3,4-b]吡啶、吡唑并[3,4-d]嘧啶、咪唑并[4,5-b]吡啶、咪唑并[1,5-a]吡啶和吡咯并[2,3-b]吡啶，各个任选地被R5、R6和R7取代。
4.如权利要求1-3任一项所述的化合物，其特征在于，Ar1选自下组：苯基、萘基和吡啶基，各个被R3、R3a、R3b、R4和R4a中的1-5个取代基取代。
5.如权利要求1-4一项所述的化合物，其特征在于，Ar2选自下组：吡唑基、咪唑基和三唑基，各个被R5、R6和R7取代。
6.如权利要求1-3任一项所述的化合物，其特征在于，Ar1选自下组：苯基、萘基和吡啶基，各个被R3、R3a、R3b、R4和R4a中的1-5个取代基取代；和Ar2选自下组：吡唑基、咪唑基和三唑基，各个被R5、R6和R7取代。
7.如权利要求1-4任一项所述的化合物，其特征在于，Ar1为苯基，被R3、R3a、R3b、R4和R4a中的1-5个取代基取代；和Ar2选自下组：吡唑基、咪唑基、苯并咪唑基、苯并吡唑基、吡唑并[3,4-b]吡啶、吡唑并[3,4-d]嘧啶、咪唑并[4,5-b]吡啶、咪唑并[1,5-a]吡啶和吡咯并[2,3-b]吡啶，各个任选地被R5、R6和R7取代。
8.如前述权利要求中任一项的化合物，其中所述化合物具有下式：
或其药学上可接受的盐、旋转异构体或光学异构体，其特征在于，R3和R4独立选自下组：H、卤素、-Re、-CN和-SO2Re。
9.如前述权利要求中任一项的化合物，其特征在于，Ar2为杂芳基。
10.如前述权利要求中任一项的化合物，其特征在于，Ar2为杂芳基，任选被取代和通过氮原子环顶点连接到分子的其余部分。
11.如前述权利要求中任一项的化合物，其中Ar2具有式
或其药学上可接受的盐、旋转异构体或光学异构体，其特征在于，R5、R6和R7独立选自下组：H、卤素、-Rh、-CN、-SO2Rh、-CO2Rf、-CONRfRg和Y。
12.如前述权利要求中任一项的化合物，具有式：
或其药学上可接受的盐、旋转异构体或光学异构体，其特征在于，R4为F或Cl。
13.如前述权利要求中任一项的化合物，其特征在于，Y选自下组：吡啶基、嘧啶基、咪唑基、噁唑基、噁二唑基、三唑基、噻唑基、咪唑啉基和吡唑基。
14.如前述权利要求中任一项的化合物，具有式：
或其药学上可接受的盐、旋转异构体或光学异构体，其特征在于，R3选自下组：H、卤素、C1-8烷基、C1-8卤代烷基和C1-8烷氧基；R1a和R2a独立选自下组：H、C1-8烷基、C1-8卤代烷基、C1-8烷氧基和C1-8羟基烷基。
15.如权利要求1的化合物，具有式：
或其药学上可接受的盐、旋转异构体或光学异构体，其特征在于，R1a和R2a独立选自下组：H、C1-8烷基、C1-8卤代烷基、C1-8烷氧基和C1-8羟基烷基；且R5、R6和R7独立选自下组：H、卤素、-Rh、-CN、-SO2Rh、-CO2Rf、-CONRfRg和Y。
16.如权利要求1的化合物，具有式：
或其药学上可接受的盐、旋转异构体或光学异构体，其特征在于，R1a和R2a独立选自下组：H、C1-8烷基、C1-8卤代烷基、C1-8烷氧基和C1-8羟基烷基；和R5、R6和R7独立选自下组：H、卤素、-Rh、-CN、-SO2Rh、-CO2Rf、-CONRfRg和Y。
17.如权利要求1的化合物，具有式：
或其药学上可接受的盐、旋转异构体或光学异构体，其特征在于，R1a和R2a各自独立选自下组：H、C1-8烷基、C1-8卤代烷基、C1-8烷氧基和C1-8羟基烷基；且R5和R7各自独立选自下组：H、卤素、-Rh、-CN、-SO2Rh、-CO2Rf、-CONRfRg和Y。
18.如权利要求1的化合物，选自下组：
19.如权利要求1的化合物，或其药学上可接受的盐或N-氧化物，其特征在于，所述化合物选自列于表1中的那些。
20.一种药物组合物，包括药学上可接受的赋形剂或载体和权利要求1的化合物。
21.如权利要求20的药物组合物，其特征在于，所述组合物成型为支架或支架-移植物装置。
22.一种治疗CCR1介导的疾病或病症的方法，包括将治疗有效量的权利要求1-21任一项的化合物或组合物施用给有需要的对象。
23.如权利要求22的方法，其特征在于，所述CCR1介导的疾病或病症是炎性病症。
24.如权利要求22的方法，其特征在于，所述CCR1介导的疾病或病症是免疫调节性疾病。
25.如权利要求22的方法，其特征在于，所述CCR1介导的疾病或病症选自下组：类风湿性关节炎、多发性硬化症、移植排斥反应、皮炎、湿疹、荨麻疹、血管炎、炎性肠病、食物过敏、哮喘、早老性痴呆、帕金森病、银屑病、红斑狼疮、骨关节炎、中风、再狭窄、辐射诱导的肺疾病和脑脊髓炎。
26.如权利要求22的方法，其特征在于，所述施用是经口、胃肠外、直肠、透皮、舌下、鼻或局部的。
27.如权利要求22的方法，其特征在于，所述化合物与消炎剂，镇痛剂，抗增殖剂，代谢抑制剂，白细胞迁移抑制剂或免疫调节剂联合施用。
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