CN104955443A

CN104955443A - 含瑞戈非尼的局部眼科药物组合物

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Publication number: CN104955443A
Application number: CN201380067534.XA
Authority: CN
Inventors: M.伯特格; G.冯德根费尔德; J.弗伦德利布; C.希尔特-迪特里希; J.克尔德尼希; J.克拉尔; U.明斯特; A.奥姆; A.里希特; B.里德尔
Original assignee: Bayer Corp
Current assignee: Bayer Healthcare LLC; Bayer Corp
Priority date: 2012-12-21
Filing date: 2013-12-21
Publication date: 2015-09-30
Also published as: AR094104A1; PE20151784A1; US20140179745A1; KR20150100670A; DOP2015000155A; CU20150063A7; CR20150327A; MA38215A1; ZA201505196B; AU2013364004A1; ECSP15026386A; TN2015000280A1; TW201431568A; BR112015014078A2; JP2016507505A; CA2895804A1; MX2015007488A; EA201500669A1; AP2015008493A0; IL238791A0

Abstract

本发明涉及局部眼科药物组合物，其包含瑞戈非尼、其水合物、溶剂化物或药物可接受的盐或其多晶形物，但不含疏水性二氧化硅，和其制备方法和其用于制备眼科疾病的用途。

Description

含瑞戈非尼的局部眼科药物组合物

本发明涉及局部眼科药物组合物，其包含瑞戈非尼、其水合物、溶剂化物或药物可接受的盐或其多晶形物但不含疏水性二氧化硅，和其制备方法和其用于治疗眼科疾病的用途。

瑞戈非尼，其为4{4-[3-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-脲基]-3-氟苯氧基}-吡啶-2-甲酸甲酰胺，式(I)化合物

(I)

为有效的抗癌剂和抗血管生成剂，其具有各种活性，包括对VEGFR, PDGFR, raf, p38, 和/或 flt-3激酶信号传导分子的抑制活性，并且其可以用于治疗各种疾病和病症，如增生过多疾病例如癌症、肿瘤、淋巴瘤、肉瘤和白血病，如WO 2005/009961中记载的。在WO 05/009961中提及式(I)化合物的其他的盐，例如其盐酸盐、甲磺酸盐和苯基磺酸盐。在WO 08/043446中提及式(I)化合物的单水合物。

年龄相关性黄斑变性 (AMD)是老年人失明的诱因并且被认为是干性和湿性AMD (Expert Opin. Ther. Patents (2010), 20(1), 103 – 11)。所述干性或非渗出性形式包括视网膜色素上皮细胞(RPE)的萎缩性和肥厚性病变两者。干性形式的特征在于黄斑玻璃疣，其为包含死细胞和代谢产物的有色区域，其扭曲视网膜并最终导致急性失明。含有非渗出性AMD (干性形式)的患者可以发展成湿性或渗出性或新生血管性AMD，其中病理学脉络膜新生血管膜 (CNVM)在视网膜下形成、漏液和漏血，并最终在相对短时间内导致中心致盲盘状瘢痕（如果未治疗的话）。脉络膜新生血管 (CNV)，跨越布鲁赫膜的脉络膜毛细管网的新血管/进入神经视网膜的RPE界面的生长，导致视网膜脱落、视网膜下和视网膜内水肿、和瘢痕。

并非通过血液进入在巩膜和视网膜之间的脉络膜中是很难的。眼睛由三个主要的组织隔室，前房、后房和玻璃体腔构成，它们彼此具有有限的生理学相互作用。所述视网膜位于玻璃体腔后部，并通过巩膜从外部进行保护，所述巩膜为眼睛的白色的、坚韧的、不可渗透的壁。脉络膜血液流动为输送物质到脉络膜的通常方法并需要例如药物的口服或静脉内给予。大多数药物不能通过滴眼液或眼睛附近的储存(depot)递送到脉络膜。一些药物已经通过注射到眼睛的玻璃体腔递送到视网膜并因此到脉络膜。通过容易地可施用局部眼部制剂例如滴眼液治疗眼后疾病（眼后部）仍然是未解决的问题。

VEGF (血管内皮生长因子)是形成正常血管和在肿瘤和遭遇异常血管生成的其他组织中形成血管的关键生长因素并在CNV形成的发病机理中起到关键作用 (Expert Opin. Ther. Patents (2010), 20(1), 103-118, Expert Opin. Ther. Patents (2009), 18(10), 1573-1580, J. Clin. Invest. (2010), 120(9), 3033-3041, J. Cell. Physiol. (2008), 216, 29-37, New Engl. J. Med. 2006, 355, 1474-1485, WO 2010/127029, WO 2007/064752)。记载阻断VEGF 效应的药物用于治疗湿性AMD例如适配子如哌加他尼钠 (New Engl. J. Med. 2004, 351, 2805-2816), 或VEGF抗体如兰尼单抗 (New Engl. J. Med. 2006, 355, 1419-1431)或贝伐单抗 (Ophthalmology, 2006, 113, 363-372)。然而，所述药物必须通过注入眼睛中而玻璃体内给予。索拉非尼，也是 VEGF抑制剂，被描述用于通过口服给药治疗CNV (Clinical and Experimental Ophthalmology, 2010, 38, 718-726)。帕唑帕尼，也是VEGF抑制剂，被记载用于通过局部给予包含帕唑帕尼水溶液的滴眼液治疗AMD (WO 2011/009016)。WO 2006/133411记载了用于通过脂质体制剂的局部给予治疗CNV的化合物。WO 2007/076358, US2006257487记载了用于局部给药的水性眼科制剂。WO 2008/27341记载了用于局部给予眼睛的乳液。

局部滴眼液通常不递送治疗水平的药物分子至眼后部目标组织从而治疗眼后疾病是一般性专门知识(U.B. Kompella and H.F. Edelhauser, “Drug Product Development for the Back of the Eye”, aapspress Springer, 2011, 第449页)。

即使本领域中记载了进展，但一直需要用于治疗眼科疾病例如AMD的改进药物。具体地，一直需要局部眼科药物组合物如滴眼液，其能够容易地给药并因此会提高患者依从性。此外，仍然需要具有例如低溶解度的化合物（其不能配制在简单溶液、乳液中作为复合物或配制在脂质体制剂中）的可施用的局部眼科药物组合物。所述局部眼科药物组合物必须在眼睛中提供足以获得有效治疗的活性剂浓度。这取决于活性剂的溶解度和释放性能。在液体制剂的情况下，活性剂的溶解性和化学稳定性是重要的。为了支持高依从性，所述局部眼科药物组合物不应该必须以每天多于5次施加，越少越好。赋形剂的类型和量以及所述药物组合物的制备方法对于眼睛中，特别是眼后部中（例如视网膜、布鲁赫膜和脉络膜区域）活性剂的释放性能、生物利用度、稳定性、相容性、功效和所述局部眼科药物组合物制备过程中的工业适用性是至关重要的。

本发明要解决的问题是提供包含瑞戈非尼作为活性剂的局部眼科药物组合物，所述瑞戈非尼具有足够的稳定性和相容性并且其在眼睛中特别是在眼后部中实现有效的瑞戈非尼浓度，通过避免静脉内或口服或注射到眼睛中或靠近眼睛（例如玻璃体内或其他注射）治疗眼科疾病，具有足够的功效。

本发明解决的另一问题是提供用于治疗眼后疾病的局部眼科药物组合物。

瑞戈非尼单水合物具有有限的溶解度曲线。不同溶剂中的瑞戈非尼单水合物的热力学溶解度示于表1中：

表1:

溶剂	溶解度(mg/ml)
		水	< 0.1
轻质液体链烷烃	< 0.1
		乙醇	6.4
聚乙二醇(PEG) 400	67.3
		HPß-环糊精/水 (10:90)	< 0.1
PEG 400/水 (30:70)	0.27
		油酰聚乙二醇甘油酯	3.6

令人惊讶地，根据本发明的药物组合物通过局部给药提供足够量的活性剂到眼睛中，其有效治疗眼科疾病。具体地，根据本发明的药物组合物提供足够量的活性剂到眼后部中，即根据本发明的药物组合物起到将所述活性剂从眼前部传输到眼后部的作用。此外，根据本发明的药物组合物具有足够的稳定性，而没有活性剂的任何有意义的降解并与眼睛相容。

本发明涉及包含瑞戈非尼，式(I)化合物的局部药科药物组合物，

(I)

瑞戈非尼的水合物、溶剂化物或药物可接受的盐，或其多晶形物，和至少一种药物可接受的媒介物和任选地至少一种药物可接受的赋形剂，其中所述组合物不含疏水性二氧化硅。

优选方案是提供一种局部眼科药物组合物，其包含瑞戈非尼、瑞戈非尼的水合物、溶剂化物或药物可接受的盐、或其多晶形物作为活性剂，和至少一种药物可接受的媒介物和任选地至少一种药物可接受的赋形剂，其中所述组合物为包含悬浮在所述可施用的药物可接受的媒介物中的活性剂的悬浮液，并且其中所述组合物不含疏水性二氧化硅。

药物可接受的媒介物或赋形剂为在与所述活性剂的有效活性相一致的浓度下对患者相对无毒和无害从而可归因于媒介物或赋形剂的任何副作用没有损害所述活性剂的有益效果的任何媒介物或赋形剂。

术语“式(I)化合物”或“瑞戈非尼”是指如式(I)所示的4-{4-[({[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]氨基}羰基)氨基]-3-氟苯氧基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺。

术语“本发明化合物”或“活性剂” 是指瑞戈非尼、瑞戈非尼的水合物、溶剂化物或药物可接受的盐，或其多晶形物。

出于本发明目的的溶剂化物为其中溶剂分子以固态形成化学计量复合物的化合物或它们的盐的那些形式，并且包括但不限于例如乙醇和甲醇。

水合物为特定形式的溶剂化物，其中溶剂分子为水。本发明化合物的水合物或它们的盐为所述化合物或盐与水的化学计量组合物，例如半水合物、单水合物或二水合物。优选的是提供瑞戈非尼单水合物。

出于本发明目的的盐为优选根据本发明的化合物的药物可接受的盐。合适的药物可接受的盐也是本领域那些技术人员熟知的，并包括无机和有机酸的盐，所述酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、三氟甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸（甲苯磺酸盐）、1-萘磺酸、2-萘磺酸、乙酸、三氟乙酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、乳酸、草酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、苯甲酸、水杨酸、苯基乙酸、和扁桃酸。另外，药物可接受的盐包括无机碱的盐，例如包含碱阳离子(例如Li⁺ Na⁺或K⁺)、碱土阳离子(例如Mg⁺² , Ca⁺²或Ba⁺²)、铵阳离子的盐，以及有机碱的酸盐，包括脂族和芳族取代的铵，和季铵阳离子，例如源自三乙胺、N,N-二乙胺、N,N-二环己基胺、赖氨酸、吡啶、N,N-二甲基氨基吡啶(DMAP), 1,4-二氮杂二环[2.2.2]辛烷(DABCO), 1,5-二氮杂二环[4.3.0]壬-5-烯(DBN)和1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU) 的质子化或过烷基化的那些。优选的是提供瑞戈非尼的盐酸盐、甲苯磺酸盐或苯基磺酸盐。

优选的是瑞戈非尼和瑞戈非尼单水合物，最优选的是作为本发明化合物的瑞戈非尼单水合物。

由于瑞戈非尼，特别是瑞戈非尼单水合物（见表1）的低溶解度，标准溶液不适用。包含可容许量乳化剂、增溶剂、复合物形成赋形剂等的溶液不能提供例如瑞戈非尼的足够稳定性。

根据本发明的局部眼科药物组合物包含本发明化合物，优选瑞戈非尼，更优选瑞戈非尼单水合物，其为固体形式，优选结晶形式，更优选微晶形式。

通过技术人员已知的标准研磨方法，优选通过喷气研磨可以实现微粉化。微晶形式的平均粒度可以为0.5至10 µm，优选1至6 µm，更优选1 至3 µm。指出的粒度为通过技术人员已知的激光衍射测量的粒度分布的平均值(测量装置: HELOS, Sympatec)。

本发明的化合物优选瑞戈非尼，更优选瑞戈非尼单水合物在局部眼科药物组合物中的最低浓度为所述组合物总量的0.01重量%，优选0.2重量%。本发明化合物，优选瑞戈非尼，更优选瑞戈非尼单水合物在局部眼科药物组合物中的最大浓度为所述组合物总量的10重量%，优选6重量%，更优选5重量%，最优选4重量%。

优选的是提供0.1至100 mg/ml，优选1至50 mg/ml，更优选2 至40 mg/ml的本发明化合物在药物组合物中的浓度。

特别优选的是提供0.1至100 mg/ml，优选1至50 mg/ml，更优选2至40 mg/ml的瑞戈非尼在药物组合物中的浓度。

特别优选的是提供获自添加0.1至100 mg/ml，优选1至50 mg/ml，更优选2至40 mg/ml的量的瑞戈非尼单水合物的药物组合物。

根据本发明的局部眼科药物组合物包括但不限于滴眼液、凝胶、软膏、分散体或悬浮液。

优选的是提供为悬浮液的局部眼科药物组合物。

本发明的化合物，优选瑞戈非尼，更优选瑞戈非尼单水合物优选以微粒化形式使用。

通过技术人员已知的标准研磨方法，优选通过喷气研磨实现微粉化。所述微粉化形式的平均粒度可以为0.5至10 µm，优选1至6 µm，更优选2至3 µm。指出的粒度为通过技术人员已知的激光衍射测量的粒度分布的平均值(测量装置: HELOS, Sympatec)。

本发明的一种实施方案为一种为悬浮液的局部眼科药物组合物，其包含悬浮在可施用的药物可接受的媒介物中的固体形式、优选结晶形式、更优选微晶形式的本发明化合物，优选瑞戈非尼，更优选瑞戈非尼单水合物，并任选还包含一种或多种药物可接受的赋形剂，其中所述组合物不含疏水性二氧化硅。

优选的是提供基于非水媒介物的悬浮液，更优选提供基于疏水性媒介物的悬浮液。

根据本发明的合适的药物可接受的媒介物包括但不限于油酰聚乙二醇甘油酯, 亚油酰聚乙二醇甘油酯, 月桂酰聚乙二醇甘油酯, 烃媒介物例如液体链烷烃 (矿脂、矿油), 轻质液体链烷烃 (低粘度链烷烃、Paraffinum perliquidum、轻质矿物油), 软质链烷烃 (凡士林), 硬质链烷烃, 植物脂肪油如蓖麻油, 花生油或芝麻油, 合成脂肪油如中链甘油三酯 (MCT, 与饱和脂肪酸，优选辛酸和癸酸的甘油三酯), 肉豆蔻酸异丙酯, 辛酰癸酰聚乙二醇-8甘油酯(caprylocaproyl macrogol-8 glyceride), 辛酰癸酰聚乙二醇-8甘油酯(caprylocaproyl polyoxyl-8 glycerides), 羊毛醇如鲸蜡硬脂醇, 羊毛脂, 甘油, 丙二醇, 辛酸/癸酸的丙二醇二酯, 聚乙二醇 (PEG), 水如水性等渗氯化钠溶液或其混合物。

优选的是提供非水药物可接受的媒介物，其包括但不限于中链甘油三酯 (MCT, 与饱和脂肪酸，优选辛酸和癸酸的甘油三酯, 肉豆蔻酸异丙酯, 辛酰癸酰聚乙二醇-8甘油酯(caprylocaproyl macrogol-8 glyceride), 辛酰癸酰聚乙二醇-8甘油酯(caprylocaproyl polyoxyl-8 glycerides), 油酰聚乙二醇甘油酯, 油酰聚乙二醇-6甘油酯 (Labrafil M 1944 CS), 亚油酰聚乙二醇-6甘油酯(Labrafil M2125 CS = 亚油酰聚乙二醇-6甘油酯), 月癸酰聚乙二醇-6甘油酯(Labrafil M 2130 CS =月癸酰聚乙二醇-6甘油酯)), 烃媒介物, 脂肪油如蓖麻油或其混合物。最优选的是使用疏水性媒介物如烃媒介物，包括但不限于液体链烷烃或轻质液体链烷烃或其混合物。

非常令人惊讶地，根据本发明的包含亲脂性（或亲水性）媒介物如液体或轻质液体链烷烃的药物组合物通过局部给药向眼睛中提供足够量的活性剂，其有效治疗眼科疾病，不过亲脂性（或疏水性）媒介物中的瑞戈非尼单水合物的溶解度非常低。

药物可接受的媒介物为根据本发明的局部眼科药物组合物的基料，并以占所述组合物总量的按重量计75%，优选80%，更优选85%的最小浓度和99.9%，优选99%，更优选98%的最大浓度存在于所述组合物中。

根据本发明的药物组合物可以具有不同的粘度，从而使以大体上低粘度体系至糊的范围是可行的。优选的是提供包含低粘度和较高粘度体系的流体体系，只要它们在它们自身的重量下仍然流动。

在根据本发明的局部眼科药物组合物中使用的合适的其他药物可接受的赋形剂包括但不限于表面活性剂、聚合物基媒介物如胶凝剂、有机助溶剂、pH活性组分、渗透性活性组分和防腐剂。优选地，所述组合物不含稳定剂。

根据本发明的局部眼科药物组合物中使用的合适的表面活性剂包括但不限于脂质，例如磷脂(phospholipids)、磷脂酰胆碱、卵磷脂、心磷脂、脂肪酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂(phosphatides)、泰罗沙伯、聚乙二醇和衍生物如PEG 400、PEG 1500、PEG 2000、泊洛沙姆407、泊洛沙姆188、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20、月桂酸脱水山梨糖醇酯、硬脂酸脱水山梨糖醇酯、棕榈酸脱水山梨糖醇酯、或其混合物，优选聚山梨醇酯80。

根据本发明的局部眼科药物组合物中使用的合适的聚合物基础载体如胶凝剂包括但不限于纤维素、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羟丙基纤维素(HPC)、羧甲基纤维素(CMC)、甲基纤维素(MC)、羟乙基纤维素(HEC)、淀粉酶和衍生物、直链淀粉和衍生物、右旋糖酐和衍生物、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚乙烯醇(PVA)、和丙烯酸类聚合物例如聚丙烯酸或聚甲基丙烯酸的衍生物如HEMA、卡波姆和上述的衍生物或其混合物。

根据本发明的药物组合物中使用的合适的有机助溶剂包括但不限于乙二醇、丙二醇、N-甲基吡咯烷酮、2-吡咯烷酮、3-吡咯烷醇、1,4-丁二醇、二甲基二醇单甲醚(dimethylglycol monomethylether)、二乙二醇单甲醚、丙酮缩甘油、甘油、聚乙二醇、聚丙二醇。

根据本发明的药物组合物中使用的合适的pH活性组分例如缓冲剂或pH-调节剂包括但不限于磷酸二钠、磷酸单钠、硼酸、硼酸钠、柠檬酸钠、盐酸、氢氧化钠。

基于所述组合物的目标pH选择pH活性组分，所述目标pH通常为pH 4 - 9。

根据本发明的药物组合物中使用的合适的渗透性活性组分包括但不限于氯化钠、甘露糖醇、甘油。

根据本发明的药物组合物中使用的防腐剂包括但不限于苯扎氯铵、烷基二甲基苄基氯化铵、西曲溴铵、西吡氯铵、苯度溴铵、苄索氯铵、硫柳汞、氯丁醇、苄醇、苯氧乙醇、苯基乙醇、山梨酸、对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯、氯己定二葡糖酸盐、EDTA或其混合物。

在水性药物可接受的媒介物的情况下，优先使用胶凝剂、pH活性剂和渗透性活性剂。

在根据本发明的悬浮液中的进一步合适的药物可接受的赋形剂的量可以为该悬浮液总重量的0.1至15 %，优选0.5至10 %，更优选1至5 %。

优选地，根据本发明的悬浮液中羟丙基甲基纤维素的量可以为该悬浮液总重量的0.05至15 %，优选0.1至10 %，更优选1至5 %。

优选地，根据本发明的悬浮液中聚山梨醇酯80的量可以为该悬浮液总重量的0.05至10 %，优选0.1至7 %，更优选0.5至4 %。

根据本发明的药物组合物不含疏水性二氧化硅，优选不含稳定剂，包括硅胶、亲水性或疏水性二氧化硅。

疏水性二氧化硅是未被水润湿的二氧化硅；这意味着它们漂浮在水表面上。它们通过混合亲水性二氧化硅和硅烷（卤代硅烷、烷氧基硅烷、硅氮烷、硅氧烷）产生。这需要由烷基烷基化的硅醇基团，所述烷基优选具有一至最多18个碳原子，特别优选具有一至最多8个碳原子，非常特别优选具有一至最多4个碳原子，特别是甲基。生产疏水性二氧化硅中使用的硅烷的实例为六甲基二硅氮烷或优选二甲基二氯硅烷。合适的疏水性二氧化硅可以源自沉淀的、胶体的、预压实或火成二氧化硅，优选的是火成二氧化硅。例如，亲水性二氧化硅与二甲基二氯硅烷的反应导致获得专利商品名为Aerosil® R 972的疏水性Aerosil；这具有66%至75%的甲基化程度（通过滴定剩余硅醇基团测定）。

优选的是提供以例如悬浮在药物可接受的媒介物中的组合物总量的0.01至10重量%，更优选0.2至5重量%的浓度包含结晶瑞戈非尼单水合物，更优选微晶瑞戈非尼单水合物的局部眼科药物组合物，所述药物可接受的媒介物选自液体链烷烃、轻质液体链烷烃或其混合物，其中所述组合物不含疏水性二氧化硅。

优选的是提供以例如悬浮在油酰聚乙二醇甘油酯作为药物可接受的媒介物中的组合物总量的0.01至10重量%，更优选0.2至5重量%的浓度包含结晶瑞戈非尼单水合物，更优选微晶瑞戈非尼单水合物的局部眼科药物组合物，其中所述组合物不含疏水性二氧化硅。

使用本发明的药物组合物通过局部途径给药至眼睛的活性剂总量通常为每次给药和每只眼睛约0.01至50 mg，优选0.02至10 mg，更优选0.05至5 mg。基于用于治疗眼科疾病的对评价化合物已知的标准实验技术，通过用于测定哺乳动物中上述识别的疾病治疗的标准药理分析，和通过比较这些结果和用于治疗这些疾病的已知药物的结果，可以容易地由本领域那些技术人员确定本发明的药物组合物的有效剂量。根据此类考虑可以广泛地改变给予的活性成分的量，例如使用的特定化合物和剂量单位、给药模式和时间、治疗时间、治疗患者的年龄、性别和一般情况、治疗疾病的性质和程度、药物代谢和排泄的速率、潜在的药物组合和药物-药物相互作用等。

根据本发明的药物组合物每天一次或多次，优选最多五次，更优选最多三次给药。

根据本发明的药物组合物的通常给药方法为局部递送到眼睛中。

然而，在一些情况下，可以有利的是脱离给定的量，取决于对活性成分的个体响应、制备类型和给药起效经历的时间或间隔。例如，少于上述最小量在一些情况下是足够的，而指定的上限在其他情况下必须被超过。在给予相对大量的情况下，可能可取的是在这一天内将这些分成几个单独的计量。

该药物组合物用于通过优选局部给药于有需要的患者的眼睛中实现期望的药理效应，并且在药物释放、生物利用度、和/或哺乳动物依从性方面具有有利性质。患者，出于本发明目的，为对于特定病症或疾病需要治疗的哺乳动物，包括人类。

根据本发明的药物组合物化学稳定多于18个月，优选多于24个月。根据本发明的化学稳定意味着所述活性剂在储存期间没有显著降解(< 1 %)。

在这一点上，根据本发明的局部眼科药物组合物包含4-(4-氨基-3-氟苯氧基)吡啶-2-甲酸甲酰胺(IUPAC: 4-(4-氨基-3-氟苯氧基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺) (AFP-PMA)，基于式(I)化合物的量，以重量计，量为等于或少于0.05%，意味着0.001%至最多0.05%，优选的量为等于或少于0.025%，意味着0.001%至最多0.025%，最优选的量为等于或少于0.01%，意味着0.001%至最多0.01%。

制备方法

可以使用各种方法制备根据本发明的眼科药物组合物。首先，通过任选混合可施用媒介物或媒介物混合物与药物可接受的赋形剂制备所述药物可接受的媒介物。然后，将所述活性剂分散或悬浮于所述混合物中。所述方法也可以包括灭菌，例如通过无菌沉淀、γ辐射、无菌过滤、热灭菌、无菌填充、或此类可选择步骤的组合。

本发明还涉及用于制备根据本发明的局部眼科药物组合物的方法，其中任选在其他一种或多种药物可接受赋形剂的情况下本发明化合物悬浮在可施用的药物可接受媒介物中，并将所述悬浮液均化。

优选的是提供用于制备根据本发明的局部眼科药物组合物的方法，其中

a) 任选在其他一种或多种药物可接受赋形剂存在下，通过混合媒介物制备可施用的药物可接受的媒介物或可施用的药物可接受的媒介物的混合物，

b) 任选在其他一种或多种药物可接受的赋形剂的存在下，例如在室温下将本发明的化合物，优选瑞戈非尼，更优选瑞戈非尼单水合物悬浮到所述可施用药物可接受的媒介物或混合物中，

c) 通过搅拌、振荡、涡旋或高剪切均化，优选搅拌，在室温或不高于40℃下均化所述悬浮液，

d) 将所述悬浮液细分成单一单位并填充到可适用的小瓶、容器、管、烧瓶、点滴器和/或注射器中。

任选地，在步骤a)中，在升高的温度例如40至70℃下将其他一种或多种药物可接受的赋形剂添加至可施用的药物可接受的媒介物中。

治疗眼科疾病的方法

本发明还涉及根据本发明的药物组合物治疗或预防眼科疾病的用途。

此外，本发明还涉及治疗或预防眼科疾病的方法，包括给予包含药物有效量的根据本发明的活性剂的药物组合物。

根据本发明的眼科疾病的实例包括但不限于年龄相关性黄斑变性 (AMD), 脉络膜新生血管 (CNV), 脉络膜新生血管膜 (CNVM), 黄斑囊样水肿 (CME), 视网膜前膜 (ERM)和黄斑裂洞, 近视相关的脉络膜新生血管, 血管样条纹, 视网膜脱落, 糖尿病视网膜病变, 糖尿病黄斑水肿 (DME), 视网膜色素上皮细胞(RPE)的萎缩性病变, 视网膜色素上皮细胞(RPE)的肥厚性病变, 视网膜静脉阻塞, 脉络膜视网膜静脉阻塞, 黄斑水肿, 由于视网膜静脉阻塞导致的黄斑水肿, 色素性视网膜炎, 斯特格氏病, 青光眼, 眼睛的炎性疾病例如葡萄膜炎、巩膜炎或眼内炎、白内障, 难治性异常现象例如近视、远视或散光和圆锥形角膜和早产儿视网膜病变。另外，实例包括但不限于眼前部血管生成如例如角膜炎、角膜移植或角膜成形后角膜血管生成, 由于缺氧导致的角膜血管生成 (大量接触镜配戴), 翼状胬肉结膜, 视网膜下水肿和视网膜内水肿。年龄相关性黄斑变性 (AMD)的实例包括但不限于干性或非渗出性AMD、或湿性或渗出性或新生血管性AMD。

优选的是提供年龄相关性黄斑变性 (AMD)，如干性AMD、湿性AMD或脉络膜新生血管 (CNV)。

本发明的另一实施方案为用于治疗或预防眼后疾病的局部眼科药物组合物，其中所述组合物为包含可适用于治疗或预防眼后疾病的悬浮在可适用药物可接受的媒介物中的活性剂的悬浮液。

眼后疾病的实例包括但不限于年龄相关性黄斑变性 (AMD), 脉络膜新生血管 (CNV), 脉络膜新生血管膜 (CNVM), 黄斑囊样水肿 (CME), 视网膜前膜 (ERM)和黄斑裂洞, 近视相关的脉络膜新生血管, 血管样条纹, 视网膜脱落, 糖尿病视网膜病变, 糖尿病黄斑水肿 (DME), 视网膜色素上皮细胞(RPE)的萎缩性病变, 视网膜色素上皮细胞(RPE)的肥厚性病变, 视网膜静脉阻塞, 脉络膜视网膜静脉阻塞, 黄斑水肿, 由于视网膜静脉阻塞导致的黄斑水肿, 色素性视网膜炎, 斯特格氏病和早产儿视网膜病变。

优选的眼后疾病包括年龄相关性黄斑变性 (AMD)如干性AMD、湿性AMD或脉络膜新生血管 (CNV)。

年龄相关性黄斑变性 (AMD)的实例包括但不限于干性或非渗出性AMD, 或湿性或渗出性或新生血管性AMD。

根据本发明的适用于治疗或预防眼后疾病的活性剂包括但不限于靶向受体激酶结构域家族例如VEGFR, PDGFR, FGFR和它们相应的配体的信号传导抑制剂或其他途径抑制剂如VEGF-Trap (阿柏西普), 哌加他尼钠, 兰尼单抗, 帕唑帕尼, 贝伐西尼, KH-902, 梅坎米胺, PF-04523655, E-10030, ACU-4429, volociximab, 雷帕霉素, 芬维A胺, 双硫仑, sonepcizumab, 瑞戈非尼, 索拉非尼和/或坦度螺酮。这些试剂包括，但绝非限制于抗体例如阿瓦斯丁(贝伐单抗)。这些试剂包括但绝非限制于小分子抑制剂例如STI-571 /格列卫(Zvelebil, Curr. Opin. Oncol., Endocr. Metab. Invest. Drugs 2000, 2(1), 74-82), PTK-787 (Wood等人, Cancer Res. 2000, 60(8), 2178-2189), SU-11248 (Demetri 等人, Proceedings of the American Society for Clinical Oncology 2004, 23, 摘要3001), ZD-6474 (Hennequin等人, 92nd AACR Meeting, New Orleans, March 24-28, 2001, abstract 3152), AG-13736 (Herbst等人, Clin. Cancer Res. 2003, 9, 16 (增刊1), 摘要C253), KRN-951 (Taguchi等人, 第95届AACR会议, Orlando, FL, 2004, 摘要2575), CP-547,632 (Beebe等人, Cancer Res. 2003, 63, 7301-7309), CP-673,451 (Roberts等人, Proceedings of the American Association of Cancer Research 2004, 45, 摘要3989), CHIR-258 (Lee等人, Proceedings of the American Association of Cancer Research 2004, 45, 摘要2130), MLN-518 (Shen等人, Blood 2003, 102, 11, 摘要476), 和AZD-2171 (Hennequin等人, Proceedings of the American Association of Cancer Research 2004, 45, 摘要4539), PKC412, 奈帕芬胺。

优选的是提供瑞戈非尼、贝伐单抗、阿柏西普、哌加他尼钠、兰尼单抗、帕唑帕尼和/或贝伐西尼。

根据本发明的合适的药物可接受的媒介物包括但不限于油酰聚乙二醇甘油酯, 亚油酰聚乙二醇甘油酯, 月桂酰聚乙二醇甘油酯, 烃媒介物例如液体链烷烃 (矿脂, 矿油), 轻质液体链烷烃 (低粘度链烷烃, Paraffinum perliquidum, 轻质矿油), 软质链烷烃 (凡士林), 硬质链烷烃, 植物脂肪油如蓖麻油, 花生油或芝麻油, 合成脂肪油如中链甘油三酯 (MCT, 与饱和脂肪酸优选辛酸和癸酸的甘油三酯), 肉豆蔻酸异丙酯, 辛酰癸酰聚乙二醇-8甘油酯(caprylocaproyl macrogol-8 glyceride), 辛酰癸酰聚乙二醇-8甘油酯(caprylocaproyl polyoxyl-8 glycerides), 羊毛醇如鲸蜡硬脂醇, 羊毛脂, 甘油, 丙二醇, 辛酸/癸酸的丙二醇二酯, 聚乙二醇 (PEG)或其混合物。

优选的是提供非水药物可接受的媒介物，其包括但不限于中链甘油三酯 (MCT, 与饱和脂肪酸优选辛酸和癸酸的甘油三酯，肉豆蔻酸异丙酯、辛酰癸酰聚乙二醇-8甘油酯(caprylocaproyl macrogol-8 glyceride)、辛酰癸酰聚乙二醇-8甘油酯(caprylocaproyl polyoxyl-8 glycerides)、油酰聚乙二醇甘油酯、油酰聚乙二醇-6甘油酯(Labrafil M 1944 CS), 亚油酰聚乙二醇-6甘油酯(Labrafil M2125 CS =亚油酰聚乙二醇-6甘油酯)、月桂酰聚乙二醇-6甘油酯(Labrafil M 2130 CS =月桂酰聚乙二醇-6甘油酯))、烃媒介物、脂肪油如蓖麻油或其混合物。最优选地，使用疏水性媒介物，如烃媒介物，其包括但不限于液体链烷烃或轻质液体链烷烃或其混合物。

非常令人惊讶地，包含亲脂性媒介物例如液体或轻质液体链烷烃的根据本发明的悬浮液通过局部给药向眼后部提供足够量的活性剂，其有效治疗眼后疾病。

在根据本发明的局部眼科药物组合物中使用的合适的其他药物可接受的赋形剂包括但不限于表面活性剂、聚合物基载体如胶凝剂、有机助溶剂、pH活性组分、渗透性活性组分和防腐剂。

所述药物可接受的媒介物是根据本发明的局部眼科药物组合物的基料，并以占所述组合物总量的按重量计75%，优选80%，更优选85%的最小浓度和99.9%，优选99%，更优选98%的最大浓度存在于所述组合物中。在所述局部眼科药物组合物中使用的活性成分优选以微粉化形式使用。

可以通过技术人员已知的标准研磨法，优选通过喷气研磨实现微粉化。微粉化形式可以具有0.5至10 µm，优选1至6 µm，更优选2至3 µm的平均粒度。指定的粒度为通过技术人员已知的激光衍射(测量装置: HELOS, Sympatec)测量的粒度分布的平均值。

所述药物组合物中活性成分的浓度为0.1至100 mg/ml，优选1至50 mg/ml，更优选2至40 mg/ml。

根据本发明的药物组合物可以作为单独的药物组合物或与一种或多种其他药物组合物或活性剂的组合给药，其中所述组合导致不可接受的不良效果。

出于本发明目的，“组合”不仅是指含有全部活性剂的剂型（所谓的固定组合），含有彼此分开的活性剂的组合包，还指同时或顺序给药的活性剂，只要它们用于预防或治疗同样的疾病。

由于根据本发明的组合很好地耐受，并且甚至以低剂量也能够有效，因此可以是宽范围的制剂变体。因此，一种可能是分开配制根据本发明的组合的各个活性成分。在这种情况下，对于各个活性成分而言绝非必须同时进行；相反，顺序摄入以实现优化效果可能是有利的。对于此类分开给药，将各个活性成分的制剂同时一起合并在合适的主包装中是适当的。在每种情况下，所述活性成分存在于单独容器中的主包装中，所述容器可以例如为管、瓶或泡罩包装。接合主包装(joint primary packaging)中各组分的此类独立包装也称为药盒。

在一种实施方案中，本发明的药物组合物可以与其他眼科试剂组合。此类试剂的实例包括但不限于类胡萝卜素如番茄红素、叶黄素、玉米黄质、茄红素、六氢番茄红素、鼠尾草酸和其衍生物如鼠尾草酚、6,7-脱氢鼠尾草酸、7-酮基鼠尾草酸、锌矿石源如氧化锌或锌盐如其氯化物、乙酸盐、葡糖酸盐、碳酸盐、硫酸盐、硼酸盐、硝酸盐或硅酸盐、氧化铜、维生素A、维生素C、维生素E和/或ß-胡萝卜素。

在另一实施方案中，本发明的药物组合物可以与靶向受体激酶结构域家族例如VEGFR, PDGFR, FGFR和它们相应的配体的其他信号传导抑制剂或其他途径抑制剂VEGF-Trap(阿柏西普)、哌加他尼钠、兰尼单抗、帕唑帕尼、贝伐西尼、KH-902、梅坎米胺、PF-04523655, E-10030, ACU-4429、volociximab、雷帕霉素、芬维A胺、双硫仑、sonepcizumab和/或坦度螺酮组合。这些试剂包括但绝非限于抗体例如阿瓦斯丁(贝伐单抗)。这些试剂还包括但绝非限于小分子抑制剂例如STI-571 / Gleevec (Zvelebil, Curr. Opin. Oncol., Endocr. Metab. Invest. Drugs 2000, 2(1), 74-82), PTK-787 (Wood等人, Cancer Res. 2000, 60(8), 2178-2189), SU-11248 (Demetri等人, Proceedings of the American Society for Clinical Oncology 2004, 23, 摘要3001), ZD-6474 (Hennequin等人, 第92届AACR会议, New Orleans, 2001年3月24-28日, 摘要3152), AG-13736 (Herbst等人, Clin. Cancer Res. 2003, 9, 16 (增刊1), 摘要C253), KRN-951 (Taguchi等人, 第95届AACR会议, Orlando, FL, 2004, 摘要2575), CP-547,632 (Beebe等人, Cancer Res. 2003, 63, 7301-7309), CP-673,451 (Roberts等人, Proceedings of the American Association of Cancer Research 2004, 45, 摘要3989), CHIR-258 (Lee等人, Proceedings of the American Association of Cancer Research 2004, 45, 摘要2130), MLN-518 (Shen等人, Blood 2003, 102, 11, 摘要476), 和AZD-2171 (Hennequin等人, Proceedings of the American Association of Cancer Research 2004, 45, 摘要4539), PKC412, 奈帕芬胺。

优选的是提供与贝伐单抗、阿柏西普、哌加他尼钠、兰尼单抗、帕唑帕尼和/或贝伐西尼的组合。

通常，其他眼科试剂与本发明药物组合物组合的使用用于：

(1) 与单独的任何一种试剂给药相比，获得更好的效果，

(2) 提供更少量的给药试剂的给药，

(3) 提供哺乳动物，特别是人类的更宽谱治疗，

(4) 在治疗的患者中提供更高的响应率，

(5) 相比于其他试剂组合产生拮抗效应的已知情况获得至少与单独使用的试剂的那些同样好的有效和耐受性效果。据信本领域技术人员通过使用先前信息和本领域可获得的信息能够使用本发明至其最充分的程度。

对于本领域普通技术人员而言，应该明显的是可以在不脱离本发明精神或范围的情况下如其在本文中所述的对本发明作出变化和改变。

上下文引用的全部公开、申请和专利都并入本文中作为参考。

除非另外指出，否则重量数据为重量百分比，份为重量份。

实施例 ：

HPLC方法：

开发两种单独的HPLC方法用于测定瑞戈非尼含量、未识别的降解产物和未识别的次级组分，以及用于分别测定药物制剂中的特定降解产物4-(4-氨基-3-氟苯氧基)吡啶-2-甲酸甲酰胺 (AFP-PMA)。

1) 用于测定瑞戈非尼含量、未识别的次级组分和未识别的降解产物的HPLC方法：通过用水/乙腈(25/75) 将吸取制剂小份稀释成100µg/ml的最终瑞戈非尼浓度制备样品。将10µl 的各样品注射到Agilent 1100 HPLC 系统(Agilent, Waldbronn, Germany)中，并且样品在加热的(40℃)对称C18柱(150 x 4,6mm - 3,5μm粒度, Waters, Eschborn, Germany)上采用1ml/min的流速运行。流动相由磷酸钾缓冲剂pH 2.4 (A)和乙腈/乙醇(6/4) (B)的混合物构成。应用以下梯度：分钟0: A, 60% / B, 40%; 分钟12: A, 20% / B, 80%; 分钟16: A, 20% / B, 80%; 分钟16.5: A, 60% / B, 40%; 分钟20: A, 60% / B, 40%。使用DAD检测器以265 nm波长定量瑞戈非尼、未识别次级组分、和未识别降解产物。通过使用外部2-点校准直线定量制剂内瑞戈非尼含量（下表中柱3）。以%总样品相关的峰面积记载未识别次级组分和未识别降解产物（下表中柱5-7）。采用各样品设定运行，通过注射100% 瑞戈非尼标准(例如100µg/ml)六次测定系统精度，获自这六个注射的峰面积的变异系数总是低于2%。2-点（例如50µg/ml, 100µg/ml）校准直线的相对Y-轴截距总是低于3%（涉及100% 瑞戈非尼标准）。瑞戈非尼峰在11.5分钟处出现。

2)用于测定特定降解产物4-(4-氨基-3-氟苯氧基)吡啶-2-甲酸甲酰胺(IUPAC: 4-(4-氨基-3-氟苯氧基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺) (AFP-PMA)的HPLC方法。通过采用丙酮将吸取制剂小份稀释至3000µg/ml的最终瑞戈非尼浓度制备样品。将15µl 各样品注射到Agilent 1100 HPLC系统 (Agilent, Waldbronn, Germany)中，以10°保持在自动进样器中的样品在保持在20℃下的对称C18柱(150 x 4,6mm - 3,5μm粒度, Waters, Eschborn, Germany)上采用1ml/min的流速运行。所述流动相由磷酸钾缓冲剂pH 2.4 (A)和乙腈/乙醇(6/4) (B)的混合物构成。应用以下梯度：分钟0: A, 62% / B, 38%;分钟5: A, 44% / B, 56%;分钟5.01: A, 15% / B, 85%;分钟9: A, 15% / B, 85%;分钟9.01: A, 62% / B, 38%;分钟12: A, 62% / B, 38%。使用DAD 检测器以232 nm波长定量4-(4-氨基-3-氟苯氧基)吡啶-2-甲酸甲酰胺 (下表中柱4)，涉及外部3-点(例如0.04µg/ml, 0.1µg/ml, 1µg/ml)校准直线。4-(4-氨基-3-氟苯氧基)吡啶-2-甲酸甲酰胺峰出现在3.9分钟处。测定两种不同基质(水和链烷烃)的4-(4-氨基-3-氟苯氧基)吡啶-2-甲酸甲酰胺的检测限(LOD)和定量极限(LOQ), 为LOD: 4ppm = 0.0004% (水), 13ppm = 0.0013% (链烷烃); LOQ: 13ppm = 0.0013% (水)和43ppm = 0.0043% (链烷烃)。

实施例 1 : 在油酰聚乙二醇甘油酯中包含瑞戈非尼单水合物的眼科悬浮液 (20 mg/ml)

将200 mg微粉化瑞戈非尼单水合物悬浮在油酰聚乙二醇甘油酯(10 ml)中。通过在室温下搅拌15分钟均化所述悬浮液。

在25℃下，60% 相对湿度(r.h.)和40℃, 75% r.h.，95.0-101%理论浓度的瑞戈非尼含量、0.3至0.7%的最大未识别降解产物下经4周以3 mg/ml的浓度测量油酰聚乙二醇甘油酯中瑞戈非尼的稳定性。4-(4-氨基-3-氟苯氧基)吡啶-2-甲酸甲酰胺(AFP-PMA)含量低于< 13 ppm = 0.0013% (< LOD，对于链烷烃基制剂测定的, 表2)。对于分析细节，参见上述HPLC方法部分。

表2.瑞戈非尼在油酰聚乙二醇甘油基制剂中的含量和稳定性：

1	2	3	4	5	6	7
							储存时间	储存条件	通过外部校准获得的瑞戈非尼含量(%理论上)	通过外部校准获得的AFP-PMA含量(%涉及瑞戈非尼)	标准中最大未识别次级组分(%总峰面积)	样品中最大未识别次级组分(%总峰面积)	样品中最大未识别降解产物(%总峰面积)
0		95.0	< 0.0013	0.04	0.04	0.7
							1天	25℃ / 60% r.h.	101	< 0.0013	0.04	0.04	0.6
4周	25℃ / 60%r.h.	99.0	< 0.0013	0.04	0.04	0.3
							4周	40℃ / 75%r.h.	98.7	< 0.0013	0.04	0.04	0.3

实施例 2 : 在液体链烷烃中包含瑞戈非尼单水合物的眼科悬浮液 (20 mg/ml)

将400 mg微粉化瑞戈非尼单水合物悬浮在20 ml的轻质液体链烷烃中。通过在室温下搅拌15分钟均化所述悬浮液。

在25℃、60%相对湿度(r.h.)和40℃, 75% r.h.、74.8-99.6%理论浓度的瑞戈非尼含量下经13周以20mg/ml的浓度测试悬浮液稳定性。所观察到的波动最可能由于样品在人工摇动所述悬浮液之后的不均匀性。在色谱图中没有观察到未识别的降解产物。AFP-PMA含量低于< 43 ppm = 0.0043% (< LOQ，对于链烷烃基制剂测定的, 表3)。对于分析细节，参见上文的分析部分。

表3.在链烷烃基制剂内的瑞戈非尼的含量和稳定性。

1	2	3	4	5	6	7
							储存时间	储存条件	通过外部校准获得的瑞戈非尼含量(%理论上)	通过外部校准获得的AFP-PMA含量(% 涉及瑞戈非尼)	标准中最大未识别次级组分(%总峰面积)	样品中最大未识别次级组分(%总峰面积)	样品中最大未识别降解产物(%总峰面积)
0		99.6	< 0.0043	0.04	0.04	-
							4周	25℃/60%r.h.	85.4	< 0.0043	0.04	0.04	-
4周	40℃/75%r.h.	74.8	< 0.0043	0.04	0.04	-
							13周	25℃/60%r.h.	96.9	< 0.0043	0.04	0.04	-
13周	40℃/75%r.h.	94.6	< 0.0043	0.04	0.04	-

实施例 3 : 在水基媒介物中包含瑞戈非尼单水合物的眼科悬浮液 (20 mg/ml)

在70℃下将1.7 g羟丙基甲基纤维素15 cp (HPMC)分散在等渗氯化钠溶液(48 g, 0.9% NaCl在水中)。在搅拌的同时将该混合物冷却到室温。在室温蒸发水，随后添加聚山梨醇酯80 (0.5 g)并在适中搅拌下溶解。将518 mg瑞戈非尼单水合物添加至制得的小份媒介物(24.5g)中，并在室温下通过温和搅拌15分钟均化所述悬浮液。

经13周在25℃、60%相对湿度(r.h.)和40℃、75% r.h.、103-112%理论浓度的瑞戈非尼含量下以10 mg/ml的浓度测试悬浮液稳定性。在人工摇动所述悬浮液之后由于该样品的不均匀性，最可能观察到波动。最大的未识别降解产物为< 0.1%的总样品相关峰面积。仅在储存9周之后测定AFP-PMA的量。

表4.瑞戈非尼在水基制剂中的含量和稳定性。

1	2	3	4	5	6	7
							储存时间	储存条件	通过外部校准获得的瑞戈非尼含量(%理论上)	通过外部校准获得的AFP-PMA含量(% 涉及瑞戈非尼)	标准中最大未识别次级组分(%总峰面积)	样品中最大未识别次级组分(%总峰面积)	样品中最大未识别降解产物(%总峰面积)
0		103	n.d.	0.04	0.04	-
							4周	25℃/60%r.h.	104	n.d.	0.1	0.04	-
4周	40℃/75%r.h.	112	n.d.	0.1	0.04	-
							9周	25℃/60%r.h.		0.0056
9周	40℃/75%r.h.		0.0086
							13周	25℃/60%r.h.	104	n.d.	0.06	0.04	-
13周	40℃/75%r.h.	104	n.d.	0.06	0.04	-

在上表2、3和4中，柱5描述在HPLC方法中使用的标准中最大未识别次级组分的百分比含量以与在所述制剂中相同的未识别次级组分的百分比含量的柱6的值比较。柱7描述并非AFP-PMA的制剂中最大未识别降解产物的百分比含量。所述降解产物在标准中检测不到但在所述制剂中形成。

实施例 4 : 在中链甘油三酯 (MCT, miglyol) 中包含瑞戈非尼单水合物的眼科悬浮液 (20 mg/ml)

根据实施例1制备实施例4。

表5. MCT- 基制剂内瑞戈非尼的含量和稳定性。

1

2

3

4

5

6

7

储存时间

储存条件

通过外部校准获得的瑞戈非尼含量(%理论上)

通过外部校准获得的AFP-PMA含量(% 涉及瑞戈非尼)

标准中最大未识别次级组分(% 总峰面积)

样品中最大未识别次级组分(%总峰面积)

样品中最大未识别降解产物(%总峰面积)

0

106.0

<0.0043

<0.1

4周

25℃/60%r.h.

99.5

<0.0043

<0.1

4周

40℃/75%r.h.

101.8

<0.0043

<0.1

13周

25℃/60%r.h.

101.0

<0.0043

<0.1

13周

40℃/75%r.h.

101.5

<0.0043

<0.1

实施例 5 : 在单纯性眼膏 ( oculentum simplex ) 中包含瑞戈非尼单水合物的眼科悬浮液 (20 mg/g)

将100 mg微粉化瑞戈非尼单水合物悬浮在4900 mg单纯性眼膏（组成：胆固醇1重量%, 液体链烷烃 42.5重量%, 软质链烷烃 56.5重量%）中。通过在室温下在Agate砂浆中搅拌约1分钟均化所述悬浮液。

实施例 6 : 在大鼠激光诱导的脉络膜新生血管 (CNV) 模型中含有瑞戈非尼的不同制剂的局部效果

该研究的目的是确定是否两日局部给药根据本发明的局部眼科药物组合物（滴眼液）导致激光诱导的脉络膜新生血管的大鼠模型中血管渗漏和/或脉络膜新生血管的降低(Dobi等人, Arch. Ophthalmol. 1989, 107(2), 264-269或Frank等人, Curr. Eye Res. 1989 Mar, 8(3), 239-247)。

出于此目的，选择没有视觉缺陷的可视符号的总共133只着色的棕色沟鼠并随机分配成每组六至八只动物的八组。在第0天，通过腹腔内注射15 mg / kg 甲苯噻嗪和80 mg / kg 氯胺酮（溶解在含5 mg/ml氯丁醇半水合物和丙二醇的水中）麻痹动物。在滴注1滴0.5 %阿托品（溶解在含苯扎氯铵的0.9 %盐水中）以扩大瞳孔之后，通过使用532 nm氩激光器在每只动物的一只眼睛（病变尺寸：50 µm，激光强度：150 mW；刺激持续时间：100 ms）的视网膜（布鲁赫膜的破坏）中烧灼6个洞诱发脉络膜新生血管。

以下制剂包括：

a) 实施例1中使用的100 % 油酰聚乙二醇甘油酯 (媒介物对照), n=8

b) 实施例1 (20 mg/ml, 悬浮液), n=8

c) 实施例2中使用的100 % 轻质液体链烷烃(媒介物对照), n=8

d) 实施例2 (20 mg/ml, 悬浮液), n=8

e) 水基媒介物 (实施例3中使用的羟丙基甲基纤维素15 cp 3.5%, 聚山梨醇酯80 0.5%, 等渗NaCl 溶液96% (媒介物对照), n=6

f) 实施例3 (20 mg/ml, 悬浮液), n=6

g) 实施例4中使用的100 % Miglyol (媒介物对照), n=8

h) 实施例4 (20 mg/ml, 悬浮液), n=7

i) 实施例5中使用的100 %单纯性眼膏 (媒介物对照), n=8

j) 实施例5 (20 mg/g, 悬浮液), n=6。

在各制剂中，在23天的完整观察时间期间以10:14小时间隔将10 µl 施加至受病眼睛每日两次。在开始之前和在研究期间每日一次记录全部动物的体重。使用荧光眼底照相机在第21天进行血管造影术(Kowe Genesis Df, Japan)。在本文中，在麻醉和瞳孔稀释之后，皮下注射10 %荧光素钠（染料，溶解在水中）并在染料注射之后记录照片约2分钟。通过三个不同的检测者评价血管造影片上的荧光素的血管渗漏，对所述检测者进行盲组分配（实施例1至3 vs. 相应的媒介物）。各病变分数为0（无渗漏）至3（强染色），全部6个病变的平均值用作相应动物的值。在第23天，杀死动物并取出眼睛，在室温下固定在4%多聚甲醛溶液中1小时。在洗涤之后，将视网膜小心剥皮，洗涤、阻断(blocked)并用FITC-同工凝集素B4抗体染色巩膜-脉络膜复合体，从而呈现脉管系统。然后，水平放置巩膜-脉络膜并在荧光显微镜(Keyence Biozero)下以488 nm的激发波长检测。使用ImageTool软件测量脉络膜新生血管面积(以µm²计)。

结果 :

A)关于血管渗漏的功效 (血管造影术分数第21天):

图1: 在第21天媒介物(油酰聚乙二醇甘油酯 (Labrafil), 制剂a)和瑞戈非尼 (实施例1, 制剂b)治疗的动物的血管造影术分数。数据示为平均值± SD, 根据t-测试的p-值，每组N=8。

表6: 图1中描述了直方图的原始数据。单值代表对治疗盲选的三个不同的观察者的平均值。

动物	100% 油酰聚乙二醇甘油酯 (制剂a)	实施例1 (制剂b)
			1	1.80	1.14
2	1.72	0.67
			3	1.63	1.44
4	1.72	0.90
			5	1.67	1.00
6	2.00	1.22
			7	1.56	1.33
8	2.33	1.33

图2: 在第21天媒介物(链烷烃, 制剂c)和瑞戈非尼 (实施例2, 制剂d)治疗的动物的血管造影术分数。数据示为平均值± SD, 根据t-测试的p-值，每组N=8。

表7: 图2中描述了直方图的原始数据。单值代表对治疗盲选的三个不同的观察者的平均值。

动物	100%链烷烃(制剂c)	实施例2 (制剂d)
			1	2.33	1.29
2	1.77	1.78
			3	1.50	0.69
4	1.91	1.34
			5	2.21	0.67
6	2.06	1.00
			7	2.10	0.96
8	2.54	1.51

图3: 在第21天媒介物(水基, 制剂e)和瑞戈非尼 (实施例3, 制剂f) 治疗的动物的的血管造影术分数。数据示为平均值± SD, 根据t-测试的p-值，每组N=6。

表8: 图3中描述了直方图的原始数据。单值代表对治疗盲选的三个不同的观察者的平均值。

动物	制剂e	实施例3 (制剂f)
			1	1.61	1.78
2	1.78	1.60
			3	1.93	1.34
4	2.27	2.00
			5	1.49	0.80
6	2.10	2.20

B) 关于新血管形成的功效(新生血管面积第23天):

图4: 在第23天媒介物(油酰聚乙二醇甘油酯 (Labrafil), 制剂a)和瑞戈非尼 (实施例1, 制剂b)治疗的动物的新生血管面积。数据示为平均值± SD, 根据t-测试的p-值，每组N=8。

表9: 在图4中描绘直方图的原始数据。单值表示全部6个病变的平均值。

动物	100 % 油酰聚乙二醇甘油酯 (制剂a)	实施例1 (制剂b)
			1	134507	90562
2	70878	59819
			3	84254	67222
4	86071	72584
			5	93586	30455
6	69696	47866
			7	103307	23991
8	98472	63033

图5: 在第23天媒介物(链烷烃, 制剂c)和瑞戈非尼 (实施例2, 制剂d)治疗的动物的新生血管面积。数据示为平均值± SD, 根据t-测试的p-值，每组N=8。

表10: 在图5中描绘直方图的原始数据。单值表示全部6个病变的平均值。

动物	100 %链烷烃(制剂c)	实施例2 (制剂d)
			1	105910	62047
2	81060	70927
			3	98735	84481
4	85019	80151
			5	98071	70568
6	101668	59804
			7	99413	63145
8	113797	91466

图6: 在第23天媒介物(水基, 制剂e)和瑞戈非尼 (实施例3, 制剂f) 治疗的动物的新生血管面积。数据示为平均值± SD, 根据t-测试的p-值，每组N=5。

表11: 在图6中描绘直方图的原始数据。单值表示全部6个病变的平均值。

动物	制剂e	实施例3 (制剂f)
			1	78759	107547
2	83420	117379
			3	96239	72404
4	107654	99371
			5	87960	91977

在两个组中，由于差的组织品质，不能对一个水平放置的制品计分。

实施例 1 结果 :

表12 (每组n=8)

制剂	A) 血管渗漏 [血管造影术分数]	B) 脉络膜新生血管病变尺寸 [µm²]
			a) 100% 油酰聚乙二醇甘油酯 (媒介物对照)	1.80 ± 0.25	92596 ± 20754
b) 在100% 油酰聚乙二醇甘油酯中的瑞戈非尼 (20 mg/ml) 悬浮液 (实施例1)	1.13 ± 0.26	56942 ± 22025
			p-值	< 0.001	0.005

实施例 2 结果 :

表13 (每组n=8)

制剂	A) 血管渗漏 [血管造影术分数]	B) 脉络膜新生血管病变尺寸 [µm²]
			c) 100 % 液体链烷烃 (媒介物对照)	2.05 ± 0.33	97959 ± 10580
d) 100 % 液体链烷烃中瑞戈非尼 (20 mg/ml)悬浮液(实施例2)	1.16 ± 0.39	72824 ± 11496
			p-值	< 0.001	< 0.001

实施例 3 结果 :

表14 (对于渗漏，每组n=6，对于新血管形成，每组n=5)

制剂	A) 血管渗漏 [血管造影术分数]	B) 脉络膜新生血管病变尺寸 [µm²]
			e) 水基媒介物对照	1.86 ± 0.30	90806 ± 11414
f) 在水基媒介物中的瑞戈非尼 (20 mg/ml)悬浮液(实施例6)	1.62 ± 0.50	97736 ± 17027
			p-值	0.330 (n.s.)	0.471 (n.s.)

实施例 4 结果 :

表15 (对于媒介物n=8, 对于瑞戈非尼n=7)

制剂	A) 血管渗漏 [血管造影术分数]	B) 脉络膜新生血管病变尺寸 [µm²]
			g) 100%中链甘油三酯(Miglyol, 媒介物对照)	1.53 ± 0.50	84971 ± 14882
h) miglyol中瑞戈非尼 (20 mg/ml)悬浮液	1.40 ± 0.27	68127 ± 8954
			p-值	0.567 (n.s.)	0.022

实施例 5 结果 :

表16 (对于媒介物n=8, 对于瑞戈非尼n=6)

制剂	A) 血管渗漏 [血管造影术分数]	B) 脉络膜新生血管病变尺寸 [µm²]
			i) 100%单纯性眼膏 (媒介物对照)	1.41 ± 0.41	83301 ± 9729
j) 单纯性眼膏中的瑞戈非尼 (20 mg/g)悬浮液	1.11 ± 0.36	60628 ± 17812
			p-值	0.180 (n.s.)	0.010

实施例 7 : 眼睛药代动力学 :

A)

在实验当天，通过使用Eppendorf移液管将限定计量的测试化合物（瑞戈非尼单水合物 20mg/ml）作为不同媒介物中的悬浮液施加到每只眼睛。在施加之后的24至96小时的时间段中，杀死一系列（8-12时间点）动物以获得这些动物（大鼠）的眼睛。在1 ml生理盐水溶液中冲洗这些眼睛至少2次并且之后用纸片(paper flies)干燥。为了测定眼睛中测试化合物的总浓度，其在限定量的盐水溶液中均化并且一小份匀浆用乙腈浸透(spiked)以沉淀溶液中的蛋白质。在离心之后，在上层清液中用合适的LC/MS-MS方法定量测试化合物和其可能的已知的分解产物。所述测试化合物或其可能的已知分解产物的浓度在眼睛的一些界定隔室中测定，将所述眼睛切割成适当的隔室并将每个隔室如上所示均化、处理并测量。

以那种方式测定浓度-时间曲线；然后将其用于计算标准药代动力学参数以评价某一制剂的品质（最大浓度和半衰期）。测试化合物或其释放的活性药物成分的计算的标准药代动力学参数为：AUC_norm, C_max, 和MRT（平均停留时间）。

在下表中示出从眼睛浓度-时间曲线计算的瑞戈非尼的药代动力学参数（对于相等计量但采用不同制剂）。

表17:

制剂	C_max [mg/L]	AUC_norm [kg*h/L]	MRT [h]
				b) Labrafil (实施例1)	1.0	23	40
d) 链烷烃(实施例2)	1.4	28	41
				f) 水(实施例3)	1.8	5.3	28
h) Miglyol (实施例4)	1.1	12	30
				j)单纯性眼膏 (实施例5)	1.7	4.8	28

B)

在每只眼睛的下部泪囊中采用限定量(30 µL)的在链烷烃中的悬浮液对未经麻醉的雌性兔子给药。使用玻璃毛细管经60 min时间收集泪液的几份重量控制的样品(n=8)。泪液中化合物的浓度的测定和药代动力学参数的评价与上文所述的相同。

表18:

制剂	C_max [mg/L]	AUC_norm [kg*h/L]	MRT [h]
				d) 链烷烃(实施例2)	149	99	0.6

结果示出在泪液中和角膜上的活性剂的令人惊讶的高停留时间。

实施例 8: 在非人类灵长类动物激光诱导的脉络膜新生血管 (CNV) 模型中含有瑞戈非尼的不同制剂的局部效果

该研究的目的是测定根据本发明的局部眼科药物组合物的每日两次局部给药（滴眼液）是否导致激光诱导的脉络膜新生血管的非人类灵长类动物模型中临床有意义的IV等级病变的降低(Ryan, 1982, Krzystolik等人, 2002, Nork 等人, 2011)。

出于此目的，选择没有眼睛缺陷的可视信号的总共51个着色非人类灵长类动物（食蟹猴）并随机分配成三组。在第0天，通过腹腔内注射麻醉动物(10-12 mg/kg氯胺酮)。在滴注一滴1%托吡卡胺扩大瞳孔之后，通过使用532 nm氩激光器在每个动物的一个眼睛(病变尺寸: 50 µm, 激光强度: 300-500 mW; 刺激持续时间: 50 ms)的视网膜中灼烧九个洞引发脉络膜新生血管(布鲁赫膜的破坏，仅在一个动物中，仅可以布置八个病变，动物5在瑞戈非尼/链烷烃组中)。

包含以下制剂:

a) 轻质液体链烷烃或含2% (w/v)疏水性二氧化硅的轻质液体链烷烃 (媒介物对照), n=23

b) 轻质液体链烷烃中的瑞戈非尼单水合物20 mg/ml悬浮液, n=16

c) 含2% (w/v)疏水性二氧化硅的轻质液体链烷烃中瑞戈非尼单水合物20 mg/ml悬浮液, n=12。

在各制剂中，在21天的完全观察时间段期间，以12:12小时间隔，将50 µl 施加至受病的眼睛，每日两次。在开始之前和在研究期间每日一次记录全部动物的体重。在第21天使用荧光眼底照相机进行血管造影术(Kowa VX-10i, Japan or FF450 plus IRu Retina Camera, Carl Zeiss Meditec, Jena, Germany)。在本文中，在麻醉和瞳孔扩大之后，皮下注射10 %荧光素钠（染料，溶解在水中，0.1 mL/kg），在染料注射后约2分钟（早期）和10分钟（后期）记录照片。由盲分配成组的检测者根据以下等级评分血管造影片上的荧光素的血管渗漏：其中“I级”（无高荧光），“II级”（高荧光无染料渗漏），“等级III”（早期高荧光，后期中度染料渗漏）或“IV级”（早期高荧光，后期在烧灼区域的边缘上严重染料渗漏）。等级IV被认为是临床上有意义的，并因此被认为是主读数。每只动物，9个病变中的等级IV病变的百分比视为原始数据。

制剂 k):

将轻质液体链烷烃填充到用橡胶塞封闭并用折边铝封闭物密封的棕色玻璃瓶中。在不少于25 kGY下将23个瓶子的十一个使用γ-辐射最终灭菌。

任选地，将5.0 g疏水性硅胶(Aerosil R972)添加到206.5632 g 轻质液体链烷烃中并在使用间歇式高剪切混合器下均化45分钟。将介质填充到用橡胶塞封闭并用折边铝封闭物密封的棕色玻璃瓶中。

制剂 l):

将41.494 g微粉化瑞戈非尼单水合物(等于40.0 g 瑞戈非尼)悬浮在1676.50 g轻质液体链烷烃中。在室温下搅拌所述悬浮液10分钟。之后，以10,000至12,000 rpm使用在线高剪切混合器将所述悬浮液均化30分钟。温度控制在不多于40℃下。在连续搅拌期间将所述悬浮液填充到棕色玻璃瓶中并将瓶用橡胶塞封闭并用折边铝封闭物密封。在不少于25 kGy下通过γ-辐射进行16个瓶中的11个的最终灭菌。

制剂 m):

在使用间歇式高剪切混合器下将5.0 g疏水性硅胶(Aerosil R972)添加到206.563 g 轻质液体链烷烃中并均化45分钟。温度设定在不高于40℃。将5.187 g 瑞戈非尼单水合物（等于5.0 g 瑞戈非尼）悬浮在分散体介质中，并使用间歇式高剪切混合器以10,000至12,000 rpm将所述悬浮液均化45分钟。温度控制在不高于40℃。在连续搅拌期间将所述悬浮液填充到棕色玻璃瓶中，并将该瓶用橡胶塞封闭并用折边铝封闭物密封。在不少于25 kGy下通过γ-辐射进行12个瓶的5个的最终灭菌。

结果 :

A) 关于血管渗漏的功效 (血管造影术分数第21天):

图7: 在第21天分别为含或不含2%疏水性二氧化硅的媒介物治疗的动物（媒介物=制剂k）和含或不含2%疏水性二氧化硅的瑞戈非尼-治疗的动物中的%IV级病变(链烷烃 = 制剂l和链烷烃 2% 二氧化硅 = 制剂m)。数据表示成平均值± SEM。

表19: 图7中描绘直方图的原始数据。单值代表各动物的IV级病变的%。

动物	媒介物 (制剂k)	瑞戈非尼单水合物 20 mg / ml 链烷烃 (制剂l)	瑞戈非尼单水合物 20 mg / ml 包含2% (w/v) 疏水性二氧化硅的链烷烃(制剂m)
				1	0	0	22
2	55	0	33
				3	33	0	0
4	11	11	0
				5	33	25	55
6	0	11	0
				7	0	0	0
8	44	0	0
				9	0	22	22
10	44	44	11
				11	22	0	0
12	33	0	33
				13	44	0
14	0	0
				15	11	0
16	0	0
				17	22
18	11
				19	22
20	33
				21	22
22	33
				23	0

尽管本发明已经参照具体实施方案进行公开，很明显本领域其他技术人员在不脱离本发明的精神和范围的情况下可以想到本发明的其他实施方案和变体。权利要求意在理解为包括全部此类实施方案和等同的变体。

Claims

1.局部眼科药物组合物，其包含瑞戈非尼、瑞戈非尼的水合物、溶剂化物或药物可接受的盐、或其多晶形物作为活性剂和至少一种药物可接受的媒介物，其中所述组合物为包含悬浮在可施用的药物可接受的媒介物中的活性剂的悬浮液并且其中所述组合物不含疏水性二氧化硅。

2.权利要求1所述的药物组合物，其中所述组合物不含任何稳定剂，所述稳定剂包括硅胶、亲水性或疏水性二氧化硅。

3.权利要求1至2任一项所述的药物组合物，其包含瑞戈非尼单水合物作为活性剂。

4.权利要求1至3任一项所述的药物组合物，其中所述活性剂为固体形式。

5.权利要求1至4任一项所述的药物组合物，其中所述活性剂为结晶形式。

6.权利要求1至5任一项所述的药物组合物，其中所述活性剂为微晶形式。

7.权利要求1至6任一项所述的药物组合物，其中所述活性剂在所述药物组合物中的浓度为所述组合物总量的0.01至10重量%。

8.权利要求1至7任一项所述的药物组合物，其中所述药物可接受的媒介物选自油酰聚乙二醇甘油酯, 亚油酰聚乙二醇甘油酯, 月桂酰聚乙二醇甘油酯, 液体链烷烃, 轻质液体链烷烃, 软质链烷烃 (凡士林), 硬质链烷烃, 蓖麻油, 花生油, 芝麻油, 中链甘油三酯, 鲸蜡硬脂醇, 羊毛脂, 甘油, 丙二醇, 聚乙二醇 (PEG)或它们的混合物, 水或它们的混合物。

9.权利要求1至8任一项所述的药物组合物，其基于非水媒介物。

10.权利要求1至9任一项所述的药物组合物，其基于疏水性媒介物。

11.权利要求1至10任一项所述的药物组合物，其中所述药物可接受的媒介物选自液体链烷烃, 轻质液体链烷烃或其混合物。

12.权利要求1至11任一项所述的药物组合物，其进一步包含药物可接受的赋形剂，如表面活性剂、聚合物基础载体，如胶凝剂、有机助溶剂、pH活性组分、渗透性活性组分和防腐剂。

13.用于制备根据权利要求1至12任一项的药物组合物的方法，其中任选在进一步存在一种或多种药物可接受的赋形剂的情况下，将所述活性剂悬浮在可施用的药物可接受的媒介物中，并将所述悬浮液为均化。

14.权利要求1至12任一项所述的药物组合物，其用于治疗或预防选自如下的眼科疾病：年龄相关性黄斑变性 (AMD), 脉络膜新生血管 (CNV), 脉络膜新生血管膜 (CNVM), 黄斑囊样水肿 (CME), 视网膜前膜 (ERM)和黄斑裂洞, 近视相关的脉络膜新生血管, 血管样条纹, 视网膜脱落, 糖尿病视网膜病变, 糖尿病黄斑水肿 (DME), 视网膜色素上皮细胞(RPE)的萎缩性病变, 视网膜色素上皮细胞(RPE)的肥厚性病变, 视网膜静脉阻塞, 脉络膜视网膜静脉阻塞, 黄斑水肿, 由于视网膜静脉阻塞导致的黄斑水肿, 色素性视网膜炎, 斯特格氏病, 青光眼, 炎性疾病, 白内障, 难治性异常现象, 圆锥形角膜, 早产儿视网膜病变, 眼前部血管生成, 角膜炎后角膜血管生成, 角膜移植或角膜成形, 由于缺氧导致的角膜血管生成 (大量接触镜配戴), 翼状胬肉结膜, 视网膜下水肿和视网膜内水肿。

15.权利要求14所述的药物组合物，其用于治疗或预防选自干性AMD、湿性AMD或脉络膜新生血管 (CNV)的眼科疾病。

16.用于治疗或预防选自如下的眼科疾病的方法，年龄相关性黄斑变性 (AMD), 脉络膜新生血管 (CNV), 脉络膜新生血管膜 (CNVM), 黄斑囊样水肿 (CME), 视网膜前膜 (ERM)和黄斑裂洞, 近视相关的脉络膜新生血管, 血管样条纹, 视网膜脱落, 糖尿病视网膜病变, 糖尿病黄斑水肿 (DME), 视网膜色素上皮细胞(RPE)的萎缩性病变, 视网膜色素上皮细胞(RPE)的肥厚性病变, 视网膜静脉阻塞, 脉络膜视网膜静脉阻塞, 黄斑水肿, 由于视网膜静脉阻塞导致的黄斑水肿, 色素性视网膜炎, 斯特格氏病, 青光眼, 炎性疾病, 白内障, 难治性异常现象, 圆锥形角膜, 早产儿视网膜病变, 眼前部血管生成, 角膜炎后角膜血管生成, 角膜移植或角膜成形, 由于缺氧导致的角膜血管生成 (大量接触镜配戴), 翼状胬肉结膜, 视网膜下水肿和视网膜内水肿，其包括给予包含药物有效量的活性剂的根据权利要求1至12任一项的药物组合物。

17.局部眼科药物组合物，其用于治疗或预防眼后疾病，其中所述组合物为包含适用于治疗或预防眼后疾病的悬浮在可施用的药物可接受的媒介物中的活性剂的悬浮液，其中所述组合物不含疏水性二氧化硅。

18.权利要求17所述的局部眼科药物组合物，其中所述组合物不含任何稳定剂，该稳定剂包括硅胶、亲水性或疏水性二氧化硅。

19.权利要求17或18所述的局部眼科药物组合物，其中所述药物可接受的媒介物为非水媒介物。

20.权利要求19所述的局部眼科药物组合物，其中所述药物可接受的媒介物为疏水性媒介物。

21.权利要求20所述的局部眼科药物组合物，其中所述药物可接受的媒介物选自液体链烷烃, 轻质液体链烷烃或其混合物。