CN104940196A - 坎地沙坦在制备甲基苯丙胺成瘾药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种坎地沙坦在制备甲基苯丙胺成瘾药物中的应用，本发明研究了坎地沙坦在苯丙胺类成瘾行为奖赏中的作用，结果发现坎地沙坦促进苯丙胺类成瘾小鼠成瘾行为奖赏的消退，坎地沙坦对苯丙胺类成瘾小鼠水迷宫训练的学习与记忆有明显的促进作用，坎地沙坦对于大鼠吸药后的温度有明显的调节作用，坎地沙坦对大鼠甲基苯丙胺奖赏动机的抑制作用，坎地沙坦给药对于甲基苯丙胺诱导的大鼠自发活动行为有明显的抑制作用，说明坎地沙坦可用于戒断甲基苯丙胺的成瘾，以开发作为新的戒毒药物。

Description

坎地沙坦在制备甲基苯丙胺成瘾药物中的应用

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及坎地沙坦的一种新用途，具体涉及一种坎地沙坦在制备甲基苯丙胺成瘾药物中的应用。

背景技术

甲基苯丙胺(methamphetamine，METH)属于苯丙胺类中枢兴奋剂，具有中枢兴奋性、食欲抑制等多种药理、毒理作用，是联合国管制的精神活性药物。自21世纪以来，世界毒品生产和消费格局发生显著变化，滥用新型毒品正在成为一个增长迅速且日益严重的社会问题。尤其是以甲基苯丙胺(METH)为代表的苯丙胺类兴奋剂在国际上迅速泛滥,长期滥用可导致暴力,给社会治安带来严重的不良后果。在我国甲基苯丙胺的基础和临床研究尚处于起步阶段。METH对多巴胺能和非多巴胺能神经元均有毒性作用，长期应用可严重损害运动和认知功能。研究METH的神经毒性机制和相关的干预治疗方法，是当前急需解决的重大课题。

外周的肾素-血管紧张素系统是人体重要的体液调节系统，对心血管系统的正常发育和功能、电解质和体液平衡，以及血压调节具有重要的作用。肾素经肾静脉进入血液循环，启动链式反应，逐步生成血管紧张素I(AngI)和II(AngII)，并进一步产生AngIII，AngIV，以及Ang(1-7)等。

血管紧张素通过与细胞膜表面高度特异的血管紧张素受体(ATR1，ATR2，ATR3和ATR4)结合而发挥作用。除了在外周系统，中枢也存在一个相对独立的肾素-血管紧张素系统。血管紧张素原不仅是肾脏近球细胞分泌的一种酸性蛋白酶，也广泛存在于大脑的胶质细胞和部分神经元内。中枢AngII主要存在于神经元细胞体、轴突和神经末梢上，对中枢及外周起着多重调节作用，包括细胞生长、性行为、血管收缩、应激、压力感受反射、情感、以及记忆巩固等。

AngII是一个具有多效性的神经肽，是中枢血管紧张素系统的主要组成部分。中枢AngII主要通过与ATR1结合在中枢系统发挥调节内分泌、交感和应激系统的作用。中枢AngII主要受体亚型为ATR1和ATR2。ATR1在众多的脑区中也有分布，包括大脑皮层、中脑、后脑和下丘脑。ATR2在脑内的分布相对较少，主要在丘脑和下丘。因为AngII对中枢的多重调节作用，越来越多的研究将中枢AngII系统与神经退行性疾病以及心理障碍的发病机制联系起来。其中，尤以阿尔茨海默症和帕金森症的研究最为突出。比如，脑室内持续注射AngII可以增加大鼠大脑皮层β Amyloid和磷酸化Tau蛋白生成，而两者的产生被认为是阿尔茨海默症主要的发病机制。在阿尔茨海默症的APP/PS1转基因小鼠模型中，ATR1拮抗剂氯沙坦可以显著减少大脑皮层β Amyloid生成。临床研究也证明AngII受体拮抗剂在男性患者中延缓阿尔茨海默症病情发生和发展方面，均优于血管紧张素水解酶抑制剂和其它心血管药物。在帕金森患者死亡后的大脑切片中发现黑质和纹状体内的血管紧张素受体数目明显变化。在模拟帕金森症的不同动物模型上，ATR1拮抗剂ARB和坎地沙坦同样可以逆转多巴胺神经元的凋亡。虽然对中枢AngII系统在中枢性疾病的发病机制中扮演的角色尚不明确，但是中枢AngII系统已经和其它多个神经和精神疾病，包括神经性炎症、中风、双向人格障碍、癫痫等的发病机制存在相关性。

坎地沙坦是又名地沙坦酯C8中间体，中文别名2-乙氧基-3-[[4-[2-(1H-四唑-5-基)苯基]苯基]甲基]-3H-苯并咪唑-4-羧酸，其分子式为：

坎地沙坦能阻断血管神经收缩和醛固酮的分泌从而起降压作用能阻止血管紧张素II介导的炎症及氧化应激效应。

坎地沙坦能竞争抑制经任何途径生成的Ang II与AT1受体结合，全面阻断Ang Ⅱ的有害作用，并可使AT2受体密度上调，代偿性增高的Ang Ⅱ经AT2受体介导发挥的有益作用显著增强。AT2受体主要存在于脑、肾上腺髓质、子宫和卵巢等，兴奋时可激活缓激B2受体和一氧化氮合酶，产NO，舒张血管，促进凋亡。

有实验证实，坎地沙坦对高盐SHRSP除了降血压外，可明显下调心、血管和肾脏NAD(P)H氧化酶的表达，降低外周血MNC硫代巴比妥酸反应物(TBARS)水平，证实了ARB除了具有降血压效应外，还具有明确的抗氧化作用。大脑是对氧化应激非常敏感的器官，活性氧等高活性分子具有多种不同的分子反应，引起蛋白质、脂质、DNA的氧化应激，通过一系列途径引起神经细胞死亡和神经退行性疾病，从而造成认知功能的损伤和学习记忆能力的下降。

神经化学、解剖和行为学研究表明AngII与中枢多巴胺系统关系密切。比如，ATR1在多巴胺神经元的胞体和轴突上均有分布。体内和体外实验都证明了中枢AngII可刺激纹状体多巴胺的释放，而两者功能性的联系可以被ATR1拮抗剂阻断。同时，敲除多巴胺受体亚型D2R基因可以直接导致大鼠纹状体和黑质体内ATR1水平的上调。AngII受体ATR1拮抗剂坎地沙坦显著降低长期注射安非他命产生的纹状体神经元活性增加。降低大鼠伏隔核内AngII水平，可以显著降低大鼠的酒精使用量，这种作用可能是通过ATR1和ATR2受体实现。因此，中枢AngII在大脑内可能参与了多巴胺系统的调控，从而间接影响了多巴胺系统变化所伴随的外在行为表现。因为中枢AngII与多巴胺系统的联系，中枢AngII也逐渐走入药物成瘾研究者的视野，但有关TR1拮抗剂坎地沙坦作为甲基苯丙胺成瘾的戒毒药并未见有相关的报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术现状而提供一种坎地沙坦在制备甲基苯丙胺成瘾药物中的应用。

本发明所述的坎地沙坦的有效剂量范围为5-10mg/kg/d。

作为优选，坎地沙坦的有效剂量为10mg/kg/d。

所述成瘾药物是以有效量的坎地沙坦为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。

进一步地，所述药剂是注射制剂。

下面将通过动物实验进一步说明坎地沙坦在甲基苯丙胺成瘾治疗应用中的有益效果。

1、自发活动

大鼠连续14天腹腔注射甲基苯丙胺，然后每天让其在自发活动箱中作自发活动，观察大鼠行为。第15天将所有大鼠分为4组，每组8只，分别为生理盐水组、低剂量坎地沙坦组、高剂量坎地沙坦组和溶媒组。①生理盐水组：测试前腹腔给予0.37ml生理盐水；②低剂量组：测试前2h灌胃给予5mg/kg的坎地沙坦0.37ml；③高剂量组：测试前2h灌胃给予10mg/kg坎地沙坦0.37ml；④溶媒组：测试前2h灌胃注射0.37ml DMSO。

2、温度的测定

自发活动14天后的大鼠，分为四组，在做随后的自发活动前，测量大鼠体温。

3、水迷宫

(1)定位航行实验(place navigation)，用于测量小鼠对水迷宫学习和记忆的获取能力。实验历时4天，上、下午各训练1次，共计8次。实验观察和记录小鼠寻找并爬上平台的路线图及所需时间，即记录其潜伏期和游泳速度。(2)空间搜索实验(spatial probe test)，用于测量学会寻找平台后，对平台空间位置记忆的保持能力。定位航行实验结束后，撤去平台，从同一个入水点放入水中，测其第一次到达原平台位置的时间、穿越原平台的次数。

1、获得性训练(Acquisition phase)理论上将水池分为4个象限，平台置于其中一个象限区的中央。

(1)将动物(大鼠或小鼠)头朝池壁放入水中，放入位置随机取东、西、南、北四个起始位置之一。记录动物找到水下平台的时间(s)。在前几次训练中，如果这个时间超过60s，则引导动物到平台。让动物在平台上停留10s.

(2)将动物移开、擦干。必要时将动物(尤其是大鼠)放在150W的白炽灯下烤5min，放回笼内。每只动物每天训练4次，两次训练之间间隔15～20min,连续训练5d。

2、探查训练(probe trial1)最后一次获得性训练结束后的第二天，将平台撤除，开始60s的探查训练。将动物由原先平台象限的对侧放入水中。记录动物在目标象限(原先放置平台的象限)所花的时间和进入该象限的次数，以此作为空间记忆的检测指标。

3、对位训练(reveral phase)测定动物的工作记忆(workingmemory)。探查训练结束后的第二天，开始维持4天的对位训练。将平台放在原先平台所在象限的对侧象限，方法与获得性训练相同。每天训练4次。每次记录找到平台的时间和游泳距离以及游泳速度。

4、坎地沙坦对甲基苯丙胺甲基苯丙胺成瘾大鼠自身给药的抑制作用

建立稳定的大鼠甲基苯丙胺自身给药模型

甲基苯丙胺成瘾所述的成瘾指与成瘾有关的行为，主要包括强迫性觅药和用药，在动物模型中通常表现为甲基苯丙胺自身给药模型，经典的大鼠甲基苯丙胺甲基苯丙胺自身给药模型可以很好的模拟临床上吸毒患者的甲基苯丙胺吸食行为，大鼠经过训练可以产生对甲基苯丙胺的自我给药，同时训练过程中不断上升的对甲基苯丙胺的行为反应率和给药量可以反映吸毒患者从一开始接触甲基苯丙胺到大量吸食甲基苯丙胺成瘾的这样一个过程。

我们采用如下方法来建立大鼠的自身给药模型：首先，SD大鼠进行颈静脉插管手术，在右颈静脉插入一段PE管，并经背部穿出体外，手术后抗菌和恢复一周以上。随后，大鼠分别在自身给药操作笼内进行训练，每次训练前连通大鼠背部的PE管与操作笼内的甲基苯丙胺注射系统；操作笼内设左右两个鼻触器，其中一个为有效鼻触器，大鼠触鼻一下有效鼻触器将获得一针甲基苯丙胺注射，同时操作笼内的笼灯亮起(作为一种伴药的线索)，计算机记录；另外一个为无效鼻触器，大鼠触鼻一下无效鼻触器没有任何甲基苯丙胺注射和灯光，仅计算机记录。两次甲基苯丙胺注射之间有20秒的不应期，期间触鼻有效鼻触器将不会有甲基苯丙胺注射和灯光，仅计算机记录，每天的甲基苯丙胺注射针数限制为50针(防止过量注射死亡)。32个操作笼采用大型服务器的计算机同时控制，自身给药训练软件为自主编写的AniLabV652，训练程序为固定比率的FR1，即大鼠触鼻一次有效鼻触器获得一针甲基苯丙胺注射。大鼠经过3天，每天4小时的训练后，有效触鼻反应率和注射量均明显上升，在最后几天趋于稳定，从而形成了稳定的甲基苯丙胺成瘾状态。

5、坎地沙坦对大鼠甲基苯丙胺奖赏动机的抑制作用

采用累进比率PR3-4程序来测定大鼠的Break-Point(断点)，不同于之前训练所用的固定比率程序，PR3-4程序测定下大鼠获得每次甲基苯丙胺注射所要求的有效触鼻次数呈累进上升趋势，Break-Point的意义在于能够评价大鼠吸食甲基苯丙胺的主观能动性，相当于临床患者吸食甲基苯丙胺的动机。在累进比率PR3-4程序下，大鼠需要更多的有效触鼻反应才能获得下一次的甲基苯丙胺注射，具体数值参见以下公式：触鼻反应数＝(5x e(0.2xinfusion number))-5，举例来说，一共28次的甲基苯丙胺注射，有效触鼻数需要1，2，4，6，9，12，15，20，25，32，40，50，62，77，95，118，145，178，219，268，328，402，603，737，901，1102和1347次，最后一次成功获得甲基苯丙胺注射所付出的有效触鼻数被认为是这个训练期的Break-Point。

我们通过以下实验来证明坎地沙坦对于大鼠甲基苯丙胺奖赏动机的影响。首先，训练大鼠进行10天的甲基苯丙胺自身给药训练，并达到稳定的甲基苯丙胺成瘾状态(训练时任然采用的是固定比率程序FR1)，并在第11天分成3个组。①生理盐水组：测试前2h腹腔给予10ul生理盐水；②坎地沙坦10mg/kg组：测试前2h腹腔给予50μg/10μl的坎地沙坦；③DMSO溶媒组：测试前2h腹腔给予DMSO；随后采用累进比率PR3-4程序来测定大鼠的Break-Point，从而评价坎地沙坦对于甲基苯丙胺自身给药动机的影响。

6甲基苯丙胺造成的氧化应激

氧化应激异常导致细胞损伤或凋亡，是外周和中枢的毒性反应产生的关键原因。NADPH氧化酶2(Nox2)激活产生的活性氧(ROS)被认为是大脑氧化应激的主要来源之一，脑内Nox-ROS通路的异常可以直接造成大脑血管表皮和神经元损伤，从而成为了认知功能障碍、阿尔茨海默症和帕金森症等神经退行性疾病的发病学说之一。中枢血管紧张素II可以通过激活NADPH氧化酶复合体，调控氧化应激主要来源过氧化物的水平，增加氧化应激程度，最终加剧了神经组织的损害。临床实验证明了ATR1拮抗剂坎地沙坦通过下调冠心病患者血管NADPH氧化酶的表达来抑制氧化应激水平，从而改善内皮细胞功能，最终提高认知功能。甲基苯丙胺可导致实验动物体内产生活性氧自由基增多，自由基清除剂、铜锌超氧化物歧化酶(CuZnSOD)表达水平及活性降低、脂质过氧化产物以及丙二醛(MDA)含量上升、NO合成酶和NO含量增加等。因此，甲基苯丙胺神经毒性的来源之一正是导致了氧化应激水平增高，从而表现在神经细胞的可塑性的损害和记忆记忆学习障碍。本研究组的前期实验表明，氧化应激水平上调是甲基苯丙胺自身给药引起的外周(心、肝和肾)以及中枢毒性的主要原因。介于AngII可以通过改善氧化应激达到减少内在神经毒性以及外在认知功能障碍的作用，AngII可能通过增加中枢氧化应激水平参与了甲基苯丙胺神经毒性反应，而ATR1拮抗剂坎地沙坦有可能降低甲基苯丙胺的中枢神经毒性。

因此，本发明也针对大鼠自身给药结束后，断头去血，选择有代表性的氧化应激的指标MDA，SOD，NO，GSH，而作了相应的研究。

本发明的实验证明：在坎地沙坦对甲基苯丙胺类成瘾小鼠成瘾阶段的实验中，观察到坎地沙坦能对大鼠甲基苯丙胺奖赏动机起到抑制作用，同时坎地沙坦给药还能对甲基苯丙胺诱导的大鼠自发活动行为有明显的抑制作用，以及对苯丙胺类成瘾小鼠的学习与记忆有明显的促进作用，反映坎地沙坦具有治疗甲基苯丙胺成瘾的作用，说明坎地沙坦可用于戒断甲基苯丙胺的成瘾，以开发作为新的戒毒药物。

附图说明

图1：大鼠注射甲基苯丙胺后产生的行为敏化模型图；

图2：坎地沙坦腹腔给药对甲基苯丙胺成瘾大鼠自发行为影响的结果图；

图3：坎地沙坦腹腔给药对甲基苯丙胺成瘾大鼠温度影响的结果图；

图4：坎地沙坦腹腔给药对甲基苯丙胺成瘾大鼠的水迷宫训练影响的结果图；

图5：大鼠甲基苯丙胺自身给药模型图；

图6：坎地沙坦腹腔给药对甲基苯丙胺成瘾大鼠甲基苯丙胺注射量的影响；

图7：坎地沙坦腹腔给药对甲基苯丙胺成瘾大鼠自身给药动机的影响；

图8：坎地沙坦对甲基苯丙胺大鼠的氧化应激各参数指标的影响结果图。

具体实施方式

以下通过结合附图及实施例对本发明作进一步说明。

本发明实施例中所使用的甲基苯丙胺为标准品，来自宁波市微循环与莨菪类药研究所，采用静脉注射给药方式；坎地沙坦购自百灵威科技有限公司，溶于二甲基亚砜(DMSO)，并采用腹腔给药。

实施例1坎地沙坦给药对于甲基苯丙胺诱导的大鼠自发活动行为有抑制作用

自发活动试验是一个中枢神经系统安全药理学评价及神经科学学科研究的常用方法，能为包括中枢神经系统安全药理学研究在内的多种药理学研究目的提供参数的重要方法。

方法：大鼠连续14天腹腔注射甲基苯丙胺，然后每天让其在自发活动箱中作自发活动，观察大鼠行为。第15天将所有大鼠分为4组，每组8只，分别为生理盐水组、低剂量坎地沙坦组、高剂量坎地沙坦组和溶媒组:

①生理盐水组：测试前腹腔给予0.37ml生理盐水；②低剂量组：测试前2h灌胃给予5mg/kg的坎地沙坦0.37ml，(其中，5mg/kg坎地沙坦的配制方法为1.5g坎地沙坦溶解在0.3ml的DMSO中，具体注射剂量按大鼠体重为计)；③高剂量组：测试前2h灌胃给予10mg/kg坎地沙坦0.37ml，(其中，10mg/kg坎地沙坦的配制方法为3g坎地沙坦溶解在0.3ml的DMSO中，具体注射剂量按大鼠体重为计)；④溶媒组：测试前2h灌胃注射0.37mlDMSO；观察4组的小鼠自发活动，实验重复三次，

结果如图(1和2)，从图1可以看出，随着连续不断的注射甲基苯丙胺，大鼠产生了行为敏化，其自发活动性增强。

从图2中可以看出，高剂量坎地沙坦组的自发活动与METH组相比，自发活动反应明显降低(与METH组比较，p值<0.05)，表明坎地沙坦给药对于甲基苯丙胺诱导的大鼠自发活动行为有明显的抑制作用。低剂量坎地沙坦组和跟METH组无明显差别(与METH组比较，p值＞0.05)。而溶媒组和生理盐水组相比，无统计学意义(与生理盐水比，p值＞0.05)。

从图1和图2的结果可以看出中枢兴奋药物甲基苯丙胺可以明显增加自主的活动而减少探究行为，一定剂量的坎地沙坦可以减少探究行为而影响自主行为。

实施例2坎地沙坦对于大鼠吸甲基苯丙胺后的温度有调节作用

方法：将大鼠进行吸食14天的甲基苯丙胺后，分为四组如实施例1，测量大鼠体温，结果如下图:

从图3观察到：Saline组平均体温35.2℃，DMSO组平均体温35.0℃，METH+10Candesartan组平均体温35.4℃，METH+10Candesartan组平均体温35.3℃，METH+DMSO组平均体温36.6℃，与METH组相比，高剂量组和低剂量组都使温度明显降低(与METH组比较，p值<0.05)，表明坎地沙坦对于大鼠吸药后的温度有明显的调节作用。同时，高剂量组和低剂量组跟生理盐水差别不大，所以坎地沙坦能使大鼠的体温更接近正常值。(与生理盐水组比较，p值＞0.05)，同时也说明坎地沙坦能缓解因中枢神经系统病变引起体温调节中枢的异常而产生的发热。

实施例3坎地沙坦对于大鼠吸甲基苯丙胺后的学习记忆的影响

(1)定位航行实验(place navigation)，用于测量小鼠对水迷宫学习和记忆的获取能力。实验历时4天，上、下午各训练1次，共计8次。实验观察和记录小鼠寻找并爬上平台的路线图及所需时间，即记录其潜伏期和游泳速度。

从图4观察到：与METH组相比，高剂量组的潜伏期明显降低(与METH组比较，p值<0.05)：低剂量组的潜伏期和METH组无统计学意义，p值＞0.05，高剂量组更接近生理盐水组，p值＞0.05，无统计学意义。表明高剂量组给药对于大鼠水迷宫有明显的促进作用，坎地沙坦能改善大鼠吸甲基苯丙胺后的学习记忆能力。

实施例4坎地沙坦对甲基苯丙胺成瘾大鼠自身给药的抑制作用

(1)建立稳定的大鼠甲基苯丙胺自身给药模型

经典的大鼠甲基苯丙胺甲基苯丙胺自身给药模型可以很好的模拟临床上吸毒患者的甲基苯丙胺吸食行为，大鼠经过训练可以产生对甲基苯丙胺的自我给药，同时训练过程中不断上升的对甲基苯丙胺的行为反应率和给药量可以反映吸毒患者从一开始接触甲基苯丙胺到大量吸食甲基苯丙胺成瘾的这样一个过程。

我们采用如下方法来建立大鼠的自身给药模型：首先，SD大鼠进行颈静脉插管手术，在右颈静脉插入一段PE管，并经背部穿出体外，手术后抗菌和恢复一周以上。随后，大鼠分别在自身给药操作笼内进行训练，每次训练前连通大鼠背部的PE管与操作笼内的甲基苯丙胺注射系统；操作笼内设左右两个鼻触器，其中一个为有效鼻触器，大鼠触鼻一下有效鼻触器将获得一针甲基苯丙胺注射，同时操作笼内的笼灯亮起(作为一种伴药的线索)，计算机记录；另外一个为无效鼻触器，大鼠触鼻一下无效鼻触器没有任何甲基苯丙胺注射和灯光，仅计算机记录。两次甲基苯丙胺注射之间有20秒的不应期，期间触鼻有效鼻触器将不会有甲基苯丙胺注射和灯光，仅计算机记录，每天的甲基苯丙胺注射针数限制为50针(防止过量注射死亡)。32个操作笼采用大型服务器的计算机同时控制，自身给药训练软件为自主编写的AniLabV652，训练程序为固定比率的FR1，即大鼠触鼻一次有效鼻触器获得一针甲基苯丙胺注射。大鼠经过3天，每天4小时的训练后，有效触鼻反应率和注射量均明显上升，在最后几天趋于稳定，从而形成了稳定的甲基苯丙胺成瘾状态(见图5)。

(2)坎地沙坦对大鼠甲基苯丙胺自身给药的抑制作用

大鼠经过3天训练达到稳定的甲基苯丙胺成瘾状态以后，随后将大鼠分成四组(具体分组方法如实施例1)而进行2小时的甲基苯丙胺的自身给药测试，方法跟之前的训练方法一样，程序也是采用固定比率FR1以评价坎地沙坦坎地沙坦对于甲基苯丙胺成瘾的治疗作用，结果如图6；

从图6观察到：与生理盐水组比较，高剂量坎地沙坦的甲基苯丙胺注射量有明显的抑制作用(图中*与METH组比较，p值<0.05)，与图5的触鼻反应相对应。

实施例5坎地沙坦对大鼠甲基苯丙胺奖赏动机的抑制作用

采用累进比率PR_3-4程序来测定大鼠的Break-Point(断点)，不同于之前训练所用的固定比率程序，PR_3-4程序测定下大鼠获得每次甲基苯丙胺注射所要求的有效触鼻次数呈累进上升趋势，Break-Point的意义在于能够评价大鼠吸食甲基苯丙胺的主观能动性，相当于临床患者吸食甲基苯丙胺的动机。在累进比率PR_3-4程序下，大鼠需要更多的有效触鼻反应才能获得下一次的甲基苯丙胺注射，具体数值参见以下公式：触鼻反应数＝(5x e^{(0.2x infusion number)})-5，举例来说，一共28次的甲基苯丙胺注射，有效触鼻数需要1，2，4，6，9，12，15，20，25，32，40，50，62，77，95，118，145，178，219，268，328，402，603，737，901，1102和1347次，最后一次成功获得甲基苯丙胺注射所付出的有效触鼻数被认为是这个训练期的Break-Point。

我们通过以下实验来证明坎地沙坦对于大鼠甲基苯丙胺奖赏动机的影响。首先，训练大鼠进行10天的甲基苯丙胺自身给药训练，并达到稳定的甲基苯丙胺成瘾状态(训练时任然采用的是固定比率程序FR1，并在第11天分成3个组。①生理盐水组：测试前2h腹腔给予10ul生理盐水；②坎地沙坦10mg/kg组：测试前2h腹腔给予50μg/10μl的坎地沙坦；③DMSO溶媒组：测试前2h腹腔给予DMSO；随后采用累进比率PR_3-4程序来测定大鼠的Break-Point，从而评价坎地沙坦对于甲基苯丙胺自身给药动机的影响(见图5)。

从图7观察到：与生理盐水组相比，高剂量坎地沙坦组和METH组的Break-Point值相比，明显降低(p值<0.05，有效率达到95％以上)；表明注射坎地沙坦能够明显翻转甲基苯丙胺自身给药动机的抑制作用。

实施例6坎地沙坦降低了对大鼠甲基苯丙胺造成的氧化应激水平

氧化应激是指机体在遭受各种有害刺激时，体内高活性分子如活性氧自由基和活性氮自由基产生过多，超出机体氧化物的清除能力，使得氧化与抗氧化系统失衡，细胞则会进入氧化应激状态，从而继发细胞损伤。本实验的目的在于检测坎地沙坦是否具有降低甲基苯丙胺对大鼠造成的氧化应激水平。

待自身给药结束后，断头去血，选择有代表性的氧化应激的指标血清丙二醛(MDA)，超氧化歧化酶(SOD)，一氧化氮(NO)，谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)，通过ELISA实验给予检测，其中，MDA是膜脂过氧化最重要的产物之一，它的产生还能加剧膜的损伤，因此在植物衰老生理和抗性生理研究中MDA含量是一个常用指标，可通过MDA了解膜脂过氧化的程度，以间接测定膜系统受损程度以及植物的抗逆性。结果如图8A所示，生理盐水组和METH组比有显著性差异(p值<0.01)，说明注射METH后，产生了严重的膜脂过氧化，高，低剂量坎地沙坦组的坎地沙坦与METH组也有显著性差异(p值<0.01)。说明给予药物干预后，这种膜脂过氧化程度有一定程度的缓解，药物效果明显。

NO在心血管系统是由一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)蛋白家族合成的多能性调节气体。一氧化氮作为一种神经信使在中枢和外周发挥特有的生理效应。长时程增强效应是神经突触可塑性和突触传递的一种表现形式，被认为是学习和记忆的细胞学基础。结果如图8B所示，生理盐水组和METH组比有显著性差异(p值<0.01)。说明METH使得大鼠氧化应激因子NO提高。高剂量坎地沙坦组与METH组相比，有显著性差异(p值<0.01),说明高剂量的药物治疗能够降低氧化应激的水平，低剂量坎地沙坦与METH组相比，有差异(p值<0.05)，说明对缓解METH造成的氧化应激也有一定的作用。

SOD是一种源于生命体的活性物质，能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质。对人体不断地补充SOD具有抗衰老的特殊效果。结果如图8C所示，生理盐水组和METH组比有显著性差异(p值<0.01)。说明METH使得抗衰老的SOD含量降低。高、低剂量坎地沙坦组与METH组相比，有显著性差异(p值<0.01)。说明坎地沙坦有抗衰老的作用，使由METH造成的SOD水平得到恢复。

GSH-Px(谷胱甘肽过氧化物酶)是机体内广泛存在的一种重要的过氧化物分解酶。硒是GSH-Px酶系的组成成分，它能催化GSH变为GSSG，使有毒的过氧化物还原成无毒的羟基化合物，同时促进H₂O₂的分解，从而保护细胞膜的结构及功能不受过氧化物的干扰及损害。结果如图8D所示，生理盐水组和METH组比有显著性差异(p值<0.01)。说明METH使GSH-Px含量降低，产生了有毒的过氧化物H₂O₂，从而造成损伤。高剂量坎地沙坦组与METH组相比，也有显著性差异(p值<0.01)。说明产生的有毒氧化物减少，起到保护作用。低剂量坎地沙坦组的自发活动与METH组相比，有差异(p值<0.05)，对它的保护也有一定的保护作用。

Claims (5)

1.坎地沙坦在制备甲基苯丙胺成瘾药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的坎地沙坦在制备甲基苯丙胺成瘾药物中的应用，其特征在于所述坎地沙坦的有效剂量范围为5-10mg/kg/d。

3.根据权利要求2所述的坎地沙坦在制备甲基苯丙胺成瘾药物中的应用，其特征在于所述坎地沙坦的有效剂量为10mg/kg/d。

4.根据权利要求2或3所述的坎地沙坦在制备甲基苯丙胺成瘾药物中的应用，其特征在于所述成瘾药物是以有效量的坎地沙坦为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。

5.根据权利要求4所述的坎地沙坦在制备甲基苯丙胺成瘾药物中的应用，其特征在于所述药剂是注射制剂。