CN104922652A - 小麦低聚肽在制备脾虚功效保健食品或药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及保健品技术领域,特别涉及小麦低聚肽在制备脾虚功效保健食品或药物中的应用。研究表明,小麦低聚肽组合物高剂量(3.74g/kg体重)和小麦低聚肽高剂量(0.554g/kg体重)均能使大黄所致的脾虚大鼠的症状得到改善;使变薄的胃黏膜厚度增加;使外周血清中低下的D-XY和AMY水平增高。组合物高剂量还能使脾虚大鼠外周血清中低下的PGⅠ水平增高。表明小麦低聚肽及其组合物能够改善大黄所致的大鼠脾虚证而具有健脾作用。
Description
技术领域
本发明涉及保健品技术领域,特别涉及小麦低聚肽在制备脾虚功效保健食品或药物中的应用。
背景技术
脾虚是中医的一种临床常见证候,中医理论认为,脾主运化,即是指脾具有把水谷(饮食物)化为精微,并将精微物质转输至全身的生理功能。脾的运化功能旺盛,则机体的消化吸收功能才能健全,才能为化生精、气、血、津液提供足够的养料,才能使脏腑、经络、四肢百骸、筋肉皮毛等得到充分的滋养,从而进行正常的生理活动。若脾虚,运化功能减弱,则机体的消化吸收功能即因之失常,而出现便溏,食欲不振,倦怠、消瘦等症状。
中医认为脾最主要的功能是“运化水谷精微”,而五谷恰恰是最好的健脾益胃的中药。如《黄帝内经》指出“毒药攻邪,五谷为养”;汉代张仲景常在用药时“啜粥”,既可作药引以增加药力,又可以顾养胃气,这里的“啜粥”是指啜饮米粥、大麦粥等;根据文献记载健脾也是谷类中药最主要的功效之一,如小麦具有“养心益肾,和血健脾”之功,大豆具有“活血利水,祛风解毒,健脾益肾”之功,梗米具有“补中益气、健脾和胃、除烦渴、止泻痢”之功,等。同时谷类中药具有资源丰富、价格低廉的优势,因此从谷类中药中筛选具有健脾功效的功能因子具有广阔的市场前景。
小麦低聚肽是近年来从小麦中获取的功能因子,其是以小麦谷朊粉为原料,经调浆、蛋白酶酶解、分离、过滤、喷粉干燥等工艺制得的小分子多肽物质,2012年国家卫生部第16号文件《关于批准中长链脂肪酸食用油和小麦低聚肽作为新资源食品等的公告》,批准小麦低聚肽作为新资源食品,确定了小麦低聚肽在食品行业中直接使用的合法地位。小麦低聚肽具有天然无毒、价格低廉等特点,并且含有大量二肽、三肽等小分子肽类,摄入后可迅速被机体吸收并发挥作用。小麦低聚肽的作用主要包括以下几点:
(1)有抑制胆固醇上升的作用。小麦低聚肽能促进胰岛素分泌作用,其功能物质是低聚蛋氨酸,可用于调节人的血糖,改善糖尿病症状。小麦肽能阻碍血管紧张素酶的作用,因而有降血压作用。小麦低聚肽的特点之一是含高谷酰胺,能够有效调节神经,也可作肠功能障碍时的特殊营养物质。
(2)具有ACE抑制作用、免疫调节、抗氧化等多种生物活性,能够刺激机体淋巴细胞增殖,增强巨噬细胞吞噬功能,提高机体抵御外界病原体感染的能力,降低机体发病率等。
(3)小麦低聚肽是小麦蛋白酶解产物,能抑制血管紧张素转化酶的活性,使血管紧张素原不能转变成能使血压升高的血管紧张素Ⅱ,从而生理地降低血压,而对正常血压不起用。
(4)抗氧化活性。
(5)调节免疫。
(6)抑制凋亡。
到目前为止,还未有关于小麦低聚肽具有健脾功效的报道。
发明内容
有鉴于此,本发明提供了小麦低聚肽在制备脾虚功效保健食品或药物中的应用。研究表明,小麦低聚肽组合物高剂量(3.74 g/kg体重)和小麦低聚肽高剂量(0.554g/kg体重)均能使大黄所致的脾虚大鼠的症状得到改善;使变薄的胃黏膜厚度增加;使外周血清中低下的D-XY和AMY水平增高。组合物高剂量还能使脾虚大鼠外周血清中低下的PGⅠ水平增高。表明小麦低聚肽及其组合物能够改善大黄所致的大鼠脾虚证而具有健脾作用。
为了实现上述发明目的,本发明提供以下技术方案:
本发明提供了小麦低聚肽在制备健脾功效保健食品或药物中的应用。
小麦低聚肽是从天然食品——小麦蛋白粉中提取的蛋白质,再经过定向酶切及特定小肽分离技术获得的小分子多肽物质。其为采用蛋白酶对小麦蛋白进行水解,得到小麦肽。
在本发明提供的一些实施例中,健脾功效为改善脾虚患者的精神状态,增加脾虚患者胃粘膜厚度,和/或增加脾虚患者外周血中α-淀粉酶、D-木糖、胃蛋白酶原水平。
在本发明提供的一些实施例中,改善脾虚患者的精神状态为脾虚患者活动增加、反应性增强、四肢力量增加、进食积极。
在本发明提供的一些实施例中,健脾功效为改善脾虚大鼠的精神状态,增加脾虚大鼠胃粘膜厚度,和/或增加脾虚大鼠外周血中α-淀粉酶、D-木糖、胃蛋白酶原水平。
在本发明提供的一些实施例中,改善脾虚大鼠的精神状态为脾虚大鼠活动增加、反应性增强、四肢力量增加、毛色变光泽、进食积极。
本发明还提供了一种保健食品,包括小麦低聚肽。
作为优选,小麦低聚肽在保健食品中的质量百分含量为10%~100%。
作为优选,保健食品的剂型为胶囊剂、粉剂、颗粒剂、片剂或口服液。
在本发明提供的一些实施例中,保健食品还包括食品学上可接受的辅料。
本发明还提供了一种保健食品,包括小麦低聚肽、大豆分离蛋白、豌豆蛋白、小麦蛋白和山药,小麦低聚肽、大豆分离蛋白、豌豆蛋白、小麦蛋白和山药组成小麦低聚肽组合物。
作为优选,以重量份计,小麦低聚肽1~30份,大豆分离蛋白1~80份,豌豆蛋白1~30份,小麦蛋白1~30份,山药1~40份。
优选地,以重量份计,小麦低聚肽10~20份,大豆分离蛋白50~60份,豌豆蛋白10~20份,小麦蛋白10~20份,山药10~20份。
更优选地,以重量份计,小麦低聚肽10份,大豆分离蛋白50份,豌豆蛋白20份,小麦蛋白20份,山药20份。
在本发明提供的一些实施例中,该保健食品还包括食品学上可接受的辅料。
在本发明提供的一些实施例中,小麦低聚肽组合物在保健食品中的质量百分含量为10%~100%。
作为优选,保健食品的剂型为胶囊、粉剂、颗粒剂、片剂或口服液。
本发明还提供了一种药物,包括小麦低聚肽。
作为优选,小麦低聚肽在药物中的质量百分含量为10%~100%。
在本发明提供的一些实施例中,该药物还包括药学上可接受的辅料。
作为优选,药物的剂型为胶囊、粉剂、颗粒剂、片剂或口服液。
本发明还提供了一种药物,包括小麦低聚肽、大豆分离蛋白、豌豆蛋白、小麦蛋白和山药。
作为优选,以重量份计,小麦低聚肽1~30份,大豆分离蛋白1~80份,豌豆蛋白1~30份,小麦蛋白1~30份,山药1~40份。
优选地,以重量份计,小麦低聚肽10~20份,大豆分离蛋白50~60份,豌豆蛋白10~20份,小麦蛋白10~20份,山药10~20份。
更优选地,以重量份计,小麦低聚肽10份,大豆分离蛋白50份,豌豆蛋白20份,小麦蛋白20份,山药20份。
在本发明提供的一些实施例中,该药物还包括药学上可接受的辅料。
在本发明提供的一些实施例中,小麦低聚肽组合物在药物中的质量百分含量为10%~100%。
作为优选,药物的剂型为胶囊、粉剂、颗粒剂、片剂或口服液。
本发明提供了小麦低聚肽在制备脾虚功效保健食品或药物中的应用。研究表明,小麦低聚肽组合物高剂量(3.74g/kg体重)和小麦低聚肽高剂量(0.554g/kg体重)均能使大黄所致的脾虚大鼠的症状得到改善;使变薄的胃黏膜厚度增加;使外周血清中低下的D-XY和AMY水平增高。小麦低聚肽组合物高剂量还能使脾虚大鼠外周血清中低下的PGⅠ水平增高。表明小麦低聚肽及其组合物能够改善大黄所致的大鼠脾虚证而具有健脾作用。
具体实施方式
本发明公开了小麦低聚肽在制备脾虚功效保健食品或药物中的应用,本领域技术人员可以借鉴本文内容,适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是,所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的,它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述,相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合,来实现和应用本发明技术。
本发明提供的小麦低聚肽在制备脾虚功效保健食品或药物中的应用中所用原料或辅料均可由市场购得:
(1)实验动物
SD大鼠72只,SPF级,雌雄各半,体重198g-221g,由中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心提供,许可证号:SCXK-(军)2012-0004。饲养于中国中医科学院中医基础理论研究所清洁级实验动物室,实验动物使用许可证号:SYXK-(京)2010-0032。
(2)药品
小麦低聚肽组合物:20g/袋,无限极(中国)有限公司提供。以重量份计,在小麦低聚肽组合物中,小麦低聚肽10份,大豆分离蛋白50份,豌豆蛋白20份,小麦蛋白20份,山药20份。临用前,用纯净水分别配制成浓度为0.144g/ml和0.288g/ml的溶液。
小麦低聚肽:由无限极(中国)有限公司提供,批号:130731。临用前,用纯净水分别配制成浓度为0.0213g/ml和0.0426g/ml的溶液。
参苓白术散原方水煎液:人参10g、茯苓10g、白术(炒)10g、山药10g、白扁豆(炒)7.5g、莲子5g、薏苡仁(炒)5g、砂仁5g、桔梗5g、甘草10g等10味药材均购自北京景弘康泰海馨大药房有限公司。参苓白术散原方水煎液制备:将上述药材混合后,加入10倍量水,回流煎煮1h,收集滤液,滤渣加入10倍量水再煎煮1h,合并两次滤液,将滤液浓缩至0.208g/mL。-20℃冰箱保存。临用前,用温水浴融化,摇匀。
大黄:产地:四川,购自北京景弘康泰海馨大药房有限公司,经中国中医科学院中药研究所生药室鉴定,为蓼科大黄属掌叶大黄Rheum palmatum L.的干燥根及根茎的切片。大黄水溶液制备:将大黄切片粉碎,过40目筛,加10倍水,搅匀,超声提取3h,水温控制不超过50℃,静置过夜。离心(4500r/min)11min,取上清液,75℃水浴浓缩成浓度为1g生药/ml的水溶液。-20℃冰箱保存。临用前,用温水浴融化,摇匀。中医认为大黄具有“泻热通肠,凉血解毒,逐瘀通经”的功效,生大黄可引起明显腹泻,长期服用大黄可导致脾胃虚弱。在临床前实验研究中,灌胃大黄水煎液致脾虚模型是最常见的造模方法。
(3)主要试剂
大鼠亮氨酸氨基肽酶(Leucine aminopeptidase,LAP)ELISA试剂盒:美国Cusabio biotech公司,批号:A06037266;大鼠D-木糖(D-Xylose,D-XY)、大鼠脂肪酶(Lipase,LPS)、大鼠α-淀粉酶(α-Amylase,α-AMY)和大鼠胃蛋白酶原(Pepsinogen Ⅰ,PGⅠ)ELISA试剂盒:北京科盈美科技有限公司,批号分别为14062205、14063001、14063004和14070201;胰蛋白酶(Trypsin,TRY)测试盒和蛋白定量测试盒(考马斯亮兰):南京建成生物工程研究所,批号分别为20140507、20140512。
(4)主要仪器
Multiskan Mk3酶标仪、Wellwash 4 Mk2洗板机、Mutifuge X3离心机、-80℃低温冰箱:美国,Thermo公司;Lambda 12紫外分光光度计:瑞典,PerkinElmer公司;Tissue-Tek TECTM组织包埋机、Tissue-Tek IVS-410切片机:日本,樱花公司;恒温混匀器:德国,Eppendorf公司;DM 6000B正置显微镜、Qwin Pro V3.5.0图像分析系统:德国,Leica公司;TDZ5-WS多管架自动平衡离心机:中国,长沙湘仪离心机仪器有限公司。
下面结合实施例,进一步阐述本发明:
实施例1 功效试验
(一)动物分组及处理
采用Excel软件的随机数字功能,分别对雌、雄大鼠进行随机分组,先分为2组:空白对照组12只,造模组72只,两组均雌雄各半。采用大黄对造模组大鼠进行造模:给大鼠灌胃给予1g生药/ml的大黄水溶液,1ml/100g体重,剂量为10g生药/kg体重。每天灌胃1次,连续2周。每周大鼠称重一次,据此调整给予的大黄溶液量。空白对照组按同法灌胃给予等体积的纯净水。造模2周后,造模组大鼠便溏,肛门污秽,进食不积极,精神倦怠,眯眼,蜷缩,不活泼,反应迟缓,四肢无力,毛发欠光泽、疏松,并且体重明显低于空白对照组大鼠;而空白对照组大鼠大便正常,进食积极,精神状态良好,行为活泼,毛发光泽。这表明脾虚模型制作成功。
随即,采用Excel软件的随机数字功能,按体重分别对造模组雌、雄大鼠进行随机分组,共分为5组:模型组、参苓白术散组、小麦低聚肽组合物低剂量组、小麦低聚肽组合物高剂量组、小麦低聚肽低剂量组、小麦低聚肽高剂量组。以上各组均12只,雌雄各半。然后,各给药组开始灌胃给药:参苓白术散组灌胃给予浓度为0.208g/mL的参苓白术散原方水煎液,给药体积为13mL/kg体重,给药剂量为生药量2.7g/kg体重;组合物低剂量组和高剂量组分别灌胃给予浓度为0.144g/ml、0.288g/ml的小麦低聚肽组合物,给药体积均为13ml/kg体重,给药剂量分别为1.87g/kg体重和3.74g/kg体重;小麦低聚肽低剂量组和高剂量组分别灌胃给予浓度为0.0213g/ml、0.0426g/ml的小麦低聚肽,给药体积均为13ml/kg体重,给药剂量分别为0.277g/kg体重和0.554g/kg体重。以上给药一天一次,连续7周。空白对照组、模型组按同法给予等体积的纯净水。在给药同时,除空白对照组外,其余各组大鼠继续灌胃给予大黄水溶液(给药浓度、体积及剂量同上),隔天1次,连续7周。空白对照组则按同法给予等体积的纯净水。每周大鼠称重一次,据此调整给药量以及给予的大黄溶液量。
在给药7周后,在大鼠处死前,各组大鼠禁食不禁水12h。在麻醉前1h,给各组大鼠灌胃给予3%D-XY溶液,1ml/100g体重,剂量为0.3g/kg体重。给D-XY 1h后,将各组大鼠以45mg/kg体重剂量的戊巴比妥钠腹腔注射麻醉。沿腹中线打开腹腔,腹主动脉取血,静置2h,3000r/min离心15min,取血清,-80℃冰箱保存待测,用于检测外周血清中D-XY、AMY、LPS、LAP和PGⅠ的水平量。将大鼠处死,上端于胃与食管交界处剪断,下端于回盲部上1cm的回肠处剪断,迅速剥离胃及小肠周围的组织,取出胃和全部小肠。于幽门与十二指肠交界处剪断,将胃置于福尔马林中固定。于回肠末端横切1cm厚的回肠组织,置于福尔马林中固定。然后,将其余小肠用铝箔纸包裹后,放于-80℃冰箱中备用。
(二)检测指标
(1)D-XY(D-木糖)、AMY(α-淀粉酶)、LPS(脂肪酶)、LAP(亮氨酸氨肽酶)和PGⅠ(胃蛋白酶原I)水平的检测
检测前,从冰箱中取出冻存的大鼠外周血清,室温下复温。采用ELISA法,按照试剂盒所附说明书,用Multiskan Mk3酶标仪检测外周血清中D-XY、AMY、LPS、LAP和PGⅠ的水平。
(2)小肠食糜及黏膜中TRY(胰蛋白酶)水平的检测
将小肠从冰箱中取出,完全解冻后,沿肠壁纵向剪开,用小刀片刮下食糜及黏膜(整个操作过程放在保鲜薄膜上进行)。称取食糜及黏膜的重量,按照重量体积比1∶9(组织∶样本匀浆介质)在食糜和黏膜中加入样本匀浆介质,在冰浴条件下机械匀浆,2500r/min,离心10min,取上清液,置于-20℃冰箱保存待测。
检测前,从冰箱中取出冻存的分装的大鼠小肠食糜及黏膜上清液,室温下复温。先检测上清液中蛋白含量,其操作按照测试盒所附说明书进行,用紫外分光光度计,在595nm处测定吸光度OD值。然后,再根据蛋白含量的检测结果,检测TRY活性,其操作按照测试盒所附说明书进行,用紫外分光光度计,在253nm处测定吸光度OD值。
(3)胃和回肠黏膜厚度的检测
分别将胃和回肠组织标本从福尔马林中取出。于幽门上0.5cm处切取厚度为3mm的胃体组织,以及横切3mm厚度的回肠组织,用乙醇逐级脱水,二甲苯透明,石蜡包埋,用切片机切取厚度为5μm的切片;HE染色,光学树脂封片。
采用Qwin Pro V3.5.0图像分析系统,在4倍物镜下测量胃黏膜厚度;在10倍物镜下测量回肠黏膜厚度。
(三)统计学分析
实验结果皆以均数±标准差表示,均采用SPSS 20.0统计软件进行统计学处理。先进行正态性检验,正态分布数据两组以上的比较,采用单因素方差分析,组间两两比较,方差齐性的采用其项下的LSD检验;方差不齐的则采用其项下的Dunnett’s T3(3)检验。非正态分布数据采用非参数检验,两组以上的比较,采用Kruskal-Wallis 1-way ANOVA(k samples)进行检验,组间两两比较,采用其项下的Stepwise step-down检验。以上均采用Levene法进行方差齐性检验。
(四)试验结果
1、一般状况
空白对照组大鼠精神状态良好,行为活泼,被毛光泽,进食积极,大便正常。模型组大鼠便溏,肛门污秽;精神状态差,倦怠,眯眼,蜷缩;不活泼,反应迟缓;四肢无力;被毛疏松,欠光泽;进食不积极。组合物低剂量组和小麦低聚肽低剂量组大鼠的状况与模型组相当。组合物高剂量组大鼠大便的性状明显好于模型组,有的虽软但成形;与模型组比较,大鼠精神状态明显变好,活动增加,反应性增强,四肢较有力;毛色也较模型组的光泽;进食积极。小麦低聚肽高剂量组、参苓白术散组大鼠的上述状况较模型组也有一定程度的改善,但不如组合物高剂量组。各组小鼠体重的变化见表1:
表1各组大鼠体重的变化
组别 | n | 雄性大鼠体重(g) | 雌性大鼠体重(g) |
空白对照组 | 6 | 536.8±28.2 | 304.0±23.0 |
模型组 | 6 | 440.7±30.3** | 237.8±27.5** |
参苓白术散组 | 6 | 450.4±32.5** | 261.7±33.1* |
组合物低剂量组 | 6 | 451.0±34.7** | 262.5±31.4* |
组合物高剂量组 | 6 | 485.3±29.2**△ | 279.8±22.1△ |
小麦低聚肽低剂量组 | 6 | 448.8±40.3** | 251.7±30.1** |
小麦低聚肽高剂量组 | 6 | 461.2±27.1** | 264.3±26.4* |
注:与空白对照组比较:*P<0.05,**P<0.01;
与模型组比较:△P<0.05,△△P<0.01;
组合物高剂量组与其低剂量组比较:▲P<0.05,▲▲P<0.01;
小麦低聚肽高剂量组与其低剂量组比较:#P<0.05,##P<0.01;
组合物高、低剂量组、小麦低聚肽高、低剂量组与参苓白术散组比较:■P<0.05,■■P<0.01。下同。
从表1可以看出,与空白对照组雄性大鼠比较,模型组以及各给药组雄大鼠的体重均明显下降;而与模型组雄性大鼠比较,组合物高剂量组雄性大鼠的体重明显增加,其它各给药组均无显著性差异。
从表1可以看出,与空白对照组雌性大鼠比较,模型组、参苓白术散组、组合物低剂量组、小麦低聚肽低剂量组以及其高剂量组雌性大鼠的体重均明显下降,组合物高剂量组则无显著性变化;而与模型组雌性大鼠比较,组合物高剂量组雌性大鼠的体重明显增加,其它各给药组均无显著性差异,但小麦低聚肽高剂量组有增加的趋势(P=0.099)。
2、小麦低聚肽及其组合物对脾虚大鼠胃和回肠黏膜厚度的影响
表2各组大鼠胃和回肠黏膜厚度的变化
组别 | n | 胃黏膜厚度(μm) | 回肠黏膜厚度(μm) |
空白对照组 | 12 | 1023.21±144.19 | 429.95±60.71 |
模型组 | 12 | 691.65±90.78** | 388.35±48.03 |
参苓白术散组 | 12 | 771.09±68.76** | 390.89±62.30 |
组合物低剂量组 | 12 | 773.02±74.46** | 393.22±59.30 |
组合物高剂量组 | 12 | 867.06±58.54*△△▲ | 405.94±101.97 |
小麦低聚肽低剂量组 | 12 | 730.16±107.14** | 369.13±85.74 |
小麦低聚肽高剂量组 | 12 | 792.38±51.15**△ | 371.09±83.24 |
从表2可以看出,与空白对照组比较,模型组以及各给药组大鼠胃黏膜厚度均显著减少。与模型组比较,组合物高剂量组和小麦低聚肽高剂量组的胃黏膜厚度明显增加,其它给药组则无显著性变化;与参苓白术散组比较,组合物高剂量组的胃黏膜厚度显著增加,其它给药组无显著性差异;组合物高剂量组的胃黏膜厚度与其低剂量组比较,明显增加;而小麦低聚肽高剂量组与其低剂量组比较,无显著性差异。
从表2可以看出各组之间比较,大鼠回肠黏膜厚度均无显著性差异。
脾虚时胃黏膜的防御能力减弱,有研究表明大黄致脾虚模型可能存在自身对攻击因子的高敏感性,导致脾虚大鼠胃黏膜易损性增高,从而引起胃黏膜组织结构的改变,如胃黏膜变薄。本实验采用大黄造模9周,可使大鼠胃黏膜的厚度显著减少,变薄;而组合物高剂量和小麦低聚肽高剂量能使其明显增加。上述试验结果表明,从组织形态角度证明,小麦低聚肽及其组合物对大黄所致的大鼠脾虚证具有明显改善作用。模型组大鼠的回肠黏膜厚度与空白对照组比较,无显著性差异,说明采用大黄对大鼠造模9周,尚不能使其厚度发生显著性改变;而小麦低聚肽及其组合物也未能对其产生明显影响。
3、小麦低聚肽及其组合物对脾虚大鼠外周血清中D-XY水平的影响
表3各组大鼠外周血清中D-XY水平的变化
组别 | n | D-XY(μg/ml) |
空白对照组 | 12 | 215.19±61.56 |
模型组 | 12 | 98.80±42.08** |
参苓白术散组 | 12 | 125.77±41.52** |
组合物低剂量组 | 12 | 129.83±31.82** |
组合物高剂量组 | 12 | 170.73±47.17*△△▲ |
小麦低聚肽低剂量组 | 12 | 118.10±38.80** |
小麦低聚肽高剂量组 | 12 | 136.63±36.64**△ |
从表3可以看出,模型组以及各给药组大鼠外周血清中D-XY水平均明显低于空白对照组。组合物高剂量组和小麦低聚肽高剂量组的D-XY水平明显高于模型组,其它给药组与模型组比较,均无显著性差异;与参苓白术散组比较,组合物高剂量组的D-XY水平显著增加,其它给药组无显著性差异;组合物高剂量组与其低剂量组比较,D-XY水平显著增高;而小麦低聚肽高剂量组与其低剂量组比较,无显著性差异。
D-XY(D-木糖)吸收实验能够准确地反映小肠的消化、吸收功能,D-XY水平的变化是公认的反映脾虚状态的重要指标之一。D-XY是一种水溶性戊糖,口服后主要由十二指肠和空肠经易化扩散而吸收。因其为单糖,所以在吸收前不需要先行消化、分解,吸收后也不被肝脏和周围组织所代谢,并不受胰腺、甲状腺功能状态的影响;大部分以原型从尿中排出,且肾脏的D-XY排出量与血中的含量成正比。因此,检测血清以及尿中D-XY的水平可以衡量小肠吸收功能的强弱。临床研究表明,脾虚证患者的D-XY排泄率显著低于健康人。本实验结果显示,采用大黄造模9周,大鼠外周血清中D-XY水平显著降低,表明大鼠的小肠吸收功能减弱,发生了脾虚;而组合物高剂量和小麦低聚肽高剂量能使D-XY含量明显增高,说明小麦低聚肽及其组合物能够增强脾虚大鼠小肠的吸收功能而改善脾虚证,达到健脾的作用。
4、小麦低聚肽及其组合物对脾虚大鼠外周血清中AMY、LPS和LAP水平的影响
表4各组大鼠外周血清中AMY、LPS和LAP水平的变化
组别 | n | AMY(U/L) | LPS(U/L) | LAP(U/mL) |
空白对照组 | 12 | 487.97±75.81 | 43.30±13.30 | 16.34±8.27 |
模型组 | 12 | 305.86±44.80** | 32.82±15.63 | 15.43±7.01 |
参苓白术散组 | 12 | 330.77±65.12** | 34.67±8.05 | 15.35±6.82 |
组合物低剂量组 | 12 | 334.34±71.24** | 34.10±9.35 | 18.10±7.22 |
组合物高剂量组 | 12 | 423.75±63.75*△△▲▲ | 37.36±16.08 | 14.63±6.69 |
小麦低聚肽低剂量组 | 12 | 317.46±57.74** | 31.94±15.19 | 13.79±4.21 |
小麦低聚肽高剂量组 | 12 | 361.95±65.40**△ | 38.63±11.88 | 18.02±6.36 |
从表4可以看出,与空白对照组比较,模型组以及各给药组大鼠外周血清中AMY水平均明显降低。组合物高剂量组和小麦低聚肽高剂量组的AMY水平明显高于模型组,其它给药组与模型组比较,均无显著性差异;与参苓白术散组比较,组合物高剂量组的AMY水平显著增加,其它给药组无显著性差异;与组合物低剂量组比较,组合物高剂量组的AMY水平显著增高;与小麦低聚肽低剂量组比较,小麦低聚肽高剂量组的AMY水平虽有增高的趋势(P=0.093),但无统计学意义。
AMY(α-淀粉酶)是公认的反映脾虚状态的另一个重要指标。其不需激活就具有活性,可将淀粉、糖原和大多数其它碳水化合物水解为糊精、麦芽糖以及麦芽寡糖;若其合成或分泌不足,就不能使食物得到充分的消化,进而导致小肠对营养物质的吸收减少。临床研究表明,脾气虚证患者血清中的AMY水平明显降低。本实验结果显示,采用大黄造模9周,大鼠外周血清中的AMY水平显著降低。这一结果说明,大黄可使AMY的水平下降,进而妨碍了小肠对食物的消化与吸收,这是大黄之所以能够导致脾虚证发生的机理之一;而组合物高剂量和小麦低聚肽高剂量能使其水平明显增高,这说明小麦低聚肽及其组合物可通过提高AMY的水平而增强小肠的消化与吸收功能,进而改善脾虚证,达到健脾的作用。
从表4可以看出,大鼠外周血清中的LPS和LAP水平,各组之间相互比较,均无显著性差异。
LPS(脂肪酶)是消化脂肪的主要酶;LAP(亮氨酸氨肽酶)是一种能水解蛋白质和多肽链N末端氨基酸的酶。本实验结果显示,与空白对照组比较,模型组大鼠外周血清中LPS和LAP水平无显著性变化,说明采用大黄对大鼠造模9周,还不能使它们发生显著性变化;而小麦低聚肽及其组合物也未能对其产生明显影响。
5、小麦低聚肽及其组合物对脾虚大鼠外周血清中PGⅠ水平的影响
表5各组大鼠外周血清中PGⅠ水平的变化
组别 | n | PGⅠ(ng/mL) |
空白对照组 | 12 | 25.56±8.12 |
模型组 | 12 | 14.77±5.33** |
参苓白术散组 | 12 | 16.78±6.73** |
组合物低剂量组 | 12 | 17.49±8.25** |
组合物高剂量组 | 12 | 21.56±6.30△ |
小麦低聚肽低剂量组 | 12 | 13.54±6.02** |
小麦低聚肽高剂量组 | 12 | 19.91±4.87*# |
从表5可以看出,与空白对照组比较,模型组、参苓白术散组、组合物低剂量组、小麦低聚肽低剂量组以及其高剂量组大鼠外周血清中PGⅠ水平均明显降低,而组合物高剂量组无显著性变化。与模型组比较,组合物高剂量组的PGⅠ水平明显增高,其它各给药组均无显著性差异,但小麦低聚肽高剂量组有增高的趋势(P=0.061);各给药组与参苓白术散组比较,无显著性差异;组合物高剂量组的PGⅠ水平与其低剂量组比较,无显著性差异;小麦低聚肽高剂量组与其低剂量组比较,明显增高。
PG(胃蛋白酶原)是胃蛋白酶的前体,主要由泌酸腺的主细胞合成和分泌,黏液颈细胞、贲门腺和幽门腺的黏液细胞及十二指肠近端的腺体也能分泌。PG以无活性的酶原形式储存于细胞内。其分泌进入胃腔后,在盐酸的作用下或在酸性环境中,变成有活性的胃蛋白酶。胃蛋白酶能将蛋白质分解成膘、胨及少量多肽和氨基酸。PG可分为PGⅠ、PGⅡ。有少量PG可透过胃黏膜毛细血管进入血液中,当胃粘膜发生病变时,血清中的PG含量也随之发生改变,其是反映胃黏膜状态和功能以及胃蛋白酶的分泌情况的良好指标。本实验结果显示,采用大黄造模9周,大鼠外周血清中PGⅠ的水平显著降低,说明大鼠的胃黏膜受损、功能下降;而组合物高剂量能明显提高PGⅠ的水平,说明小麦低聚肽组合物能够改善脾虚大鼠胃黏膜的损伤以及提高其功能,进而达到健脾作用。与模型组比较,小麦低聚肽高剂量组的PGⅠ水平虽无统计学意义,但增高的趋势明显,P=0.061;这一结果提示:小麦低聚肽也可能在一定程度上能改善胃黏膜的损伤以及提高其功能。
6、小麦低聚肽及其组合物对脾虚大鼠小肠食糜及黏膜中TRY活性的影响
表6各组大鼠小肠食糜及黏膜中TRY活性的变化
组别 | n | TRY(U/mgprot) |
空白对照组 | 12 | 41.87±9.68 |
模型组 | 12 | 31.25±8.29** |
参苓白术散组 | 12 | 36.74±6.09 |
组合物低剂量组 | 12 | 34.97±7.96 |
组合物高剂量组 | 12 | 37.78±6.31 |
小麦低聚肽低剂量组 | 12 | 31.90±9.18** |
小麦低聚肽高剂量组 | 12 | 36.86±10.48 |
从表6可以看出,模型组、小麦低聚肽低剂量组大鼠小肠食糜及黏膜中TRY活性与空白对照组的比较,显著降低;其它各组与之比较,均无显著性差异。各给药组的TRY活性与模型组比较,均无显著性差异,但组合物高剂量组的有增加的趋势(P=0.072)。
TRY(胰蛋白酶)是胰液中重要的蛋白质水解酶之一,其以无活性的酶原形式存在于胰液中。胰腺分泌的胰液经胰管排入十二指肠,进入小肠,其中无活性的胰蛋白酶原在小肠液中的肠激酶激活下,转变成有活性的TRY。TRY能将蛋白质分解为膘和胨。小肠粘膜上皮吸收细胞微绒毛表面的细胞衣,吸附有TRY等。因此,TRY存在于小肠食糜及黏膜之中。本实验结果显示,采用大黄造模9周,可导致大鼠小肠食糜及黏膜中TRY活性降低。与模型组比较,组合物高剂量组的TRY活性虽无统计学意义,但增高的趋势明显,P=0.072,这提示:小麦低聚肽组合物高剂量可能有提高小肠食糜及黏膜中TRY活性的作用。
综合上述试验结果可以看出,组合物高剂量(3.74g/kg体重)和小麦低聚肽高剂量(0.554g/kg体重)均能使大黄所致的脾虚大鼠的症状得到改善;使变薄的胃黏膜厚度增加;使外周血清中低下的D-XY和AMY水平增高。组合物高剂量还能使脾虚大鼠外周血清中低下的PGⅠ水平增高。表明小麦低聚肽及其组合物能够改善大黄所致的大鼠脾虚证而具有健脾作用。
实施例2 小麦低聚肽保健食品粉剂的制备
保健食品粉剂的处方如表7所示。
表7保健食品粉剂的处方
结晶果糖使用整粒机过40目筛,称取处方量,备用。
将小麦低聚肽、全脂乳粉、结晶果糖混合30分钟至颜色均匀。
最后进行装袋,控制湿度50%以下,背封,80mm空白铝箔,4.5g/袋,每袋装量差异±4.5%。
实施例3 小麦低聚肽保健食品粉剂的制备
保健食品粉剂的处方如表8所示。
表8保健食品粉剂的处方
结晶果糖使用整粒机过40目筛,称取处方量,备用。
将小麦低聚肽、全脂乳粉、结晶果糖混合30分钟至颜色均匀。
最后进行装袋,控制湿度50%以下,背封,80mm空白铝箔,4.5g/袋,每袋装量差异±4.5%。
实施例4 小麦低聚肽保健食品胶囊剂的制备
取小麦低聚肽与常规辅料混合,按照常规方法制得胶囊剂。
实施例5 小麦低聚肽保健食品颗粒剂的制备
取小麦低聚肽与常规辅料混合,按照常规方法制得颗粒剂。
实施例6 小麦低聚肽保健食品片剂的制备
取小麦低聚肽20份、大豆分离蛋白60份、豌豆蛋白10份、小麦蛋白10份和山药粉10份与常规辅料混合,按照常规方法制得片剂。
实施例7 小麦低聚肽保健食品口服液的制备
取小麦低聚肽与常规辅料混合,按照常规方法制得口服液。
实施例8 小麦低聚肽药物的制备
取小麦低聚肽与药学上常规辅料混合,按照常规方法制得小麦低聚肽药物。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.小麦低聚肽在制备健脾功效保健食品或药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述健脾功效为改善脾虚患者的精神状态,增加脾虚患者胃粘膜厚度,和/或增加脾虚患者外周血中α-淀粉酶、D-木糖、胃蛋白酶原水平。
3.一种保健食品,其特征在于,包括小麦低聚肽。
4.根据权利要求3所述的保健食品,其特征在于,所述保健食品的剂型为胶囊剂、粉剂、颗粒剂、片剂或口服液。
5.根据权利要求3或4所述的保健食品,其特征在于,所述保健食品还包括食品学上可接受的辅料。
6.一种保健食品,其特征在于,包括小麦低聚肽、大豆分离蛋白、豌豆蛋白、小麦蛋白和山药。
7.根据权利要求6所述的保健食品,其特征在于,以重量份计,所述小麦低聚肽1~30份,所述大豆分离蛋白1~80份,所述豌豆蛋白1~30份,所述小麦蛋白1~30份,所述山药1~40份。
8.根据权利要求7所述的保健食品,其特征在于,以重量份计,所述小麦低聚肽10~20份,所述大豆分离蛋白50~60份,所述豌豆蛋白10~20份,所述小麦蛋白10~20份,所述山药10~20份。
9.一种药物,其特征在于,包括小麦低聚肽。
10.一种药物,其特征在于,包括小麦低聚肽、大豆分离蛋白、豌豆蛋白、小麦蛋白和山药。
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