CN104902904A

CN104902904A - 7-α-[9-(4,4,5,5,5-五氟戊基亚硫酰基)壬基]-雌甾-1,3,5(10)-三烯-3,17β-二醇及其衍生物的用途

Info

Publication number: CN104902904A
Application number: CN201380069403.5A
Authority: CN
Inventors: 焦亚奇; 王九成; 胡忍乐
Original assignee: Xian Libang Pharmaceutical Technology Co Ltd
Current assignee: Xian Libang Pharmaceutical Technology Co Ltd
Priority date: 2013-04-18
Filing date: 2013-04-18
Publication date: 2015-09-09
Also published as: EP2987492A1; JP2016539077A; AU2013386726B2; WO2014169456A1; EP2987492B1; AU2013386726A1; US20160038439A1; CA2909419A1; EP2987492A4; KR20150143821A

Abstract

本发明提供以下式A化合物在制备用于治疗肿瘤坏死因子相关疾病的药物中的用途以及一种治疗与肿瘤坏死因子有关的疾病的方法，所述方法包括向有需要的受试者给予治疗有效量的如下式A化合物。

Description

7-α-[9-(4, 4, 5, 5, 5-五氟戊基亚硫酰基)壬基] -雌甾 -1, 3, 5(10)-三烯 -3,

17 β -二醇及其衍生物的用途技术领域

本发明属医药领域，具体涉及到通式 Α化合物的新医药用途，具体地，本发明涉及 7-α-[9-(4, 4, 5, 5, 5-五氟戊基亚硫酰基)壬基] -雌甾 -1 , 3, 5(10)-三烯 -3, 17 β-二醇及其酯类衍生物的新用途，用于在用于治疗风湿、类风湿性关节炎等肿瘤坏死因子相关疾病方面的用途。背景技术

7-α-[9-(4, 4, 5, 5, 5-五氟戊基亚硫酰基)壬基] -雌甾 -1 , 3, 5(10)- 三烯 -3, 17β-二醇，别名氟维司群 (Fulvestrant), 是一类已知的雌甾激素受体阻断剂，通常用于抗雌甾激素疗法治疗无效、雌甾激素受体呈阳性的绝经后晚期乳腺癌的治疗。

肿瘤坏死因子- a (TNF- α)则是类风湿关节炎 (RA)中的主要炎性细胞因子，由激活的单核细胞、巨噬细胞、 Τ淋巴细胞所释放。与其受体结合后可发挥免疫调节作用并参与机体的多种病理生理过程，包括发热、炎症、感染、创伤愈合和肿瘤杀伤。在正常情况下，它的表达和分泌受机体严格抑制，在参与多种疾病的炎症反应时均有所表达，其参与调控的炎症反应可导致关节的病理改变，其在 RA中它的异常表达是 RA发病的重要因素。 TNF-o是炎症通路中一重要的细胞因子，存在于类风湿关节炎患者的滑膜组织、滑液及血清中。 TNF-o通过与多种组织因子和基质蛋白相互作用促进 RA 的炎症反应、滑膜细胞异常增殖和凋亡、血管翳生成及软骨与骨的破坏，推动 RA 炎症反应持续性进展。因而， TNF-o可以作为 RA 病情活动的一个临床指标，同时又是治疗 RA 的一个有效靶点。

目前，氟维司群 (Fulvestrant)为代表的通式 A化合物用于治疗肿瘤坏死因子相关疾病尚未见 4艮道。发明内容

本发明的目的在于，提供以下式 A化合物在治疗与肿瘤坏死因子 TNF - α有关的疾病中的用途。

所述目的是通过以下技术方案实现的：一方面，本发明提供了以下式 A化合物在制备用于治疗肿瘤坏死因子相关疾病的药物中的用途，

式 A

其中：

取代基 R'选自 H、碳原子个数为 2至 4的烷酰基或烯酰基，

取代基 R选自 H、碳原子个数为 2至 22的烷酰基或烯酰基。

其中，所述肿瘤坏死因子相关疾病为关节炎，优选地，所述关节炎为风湿性关节炎或类风湿性关节炎。

其中，当 R'为碳原子个数为 2至 4的烷酰基时，为乙酰基；

优选地，所述取代基 R为碳原子个数为 11至 22的烯酰基；

优选地，所述取代基 R'为 H, 且取代基 R为包含一个或多个优选为 1 至 6个碳碳双键的、碳原子个数为 11至 22的直链或支链烯酰基；

优选地，取代基 R为支链烯酰基，其中所述双键可以在主链上，也可在支链上，优选地，取代基 R为十一碳 -2-烯酰基。

优选地，所述取代基 R为碳原子个数为 11至 22的烷酰基；

优选地，所述取代基 R'为 H, 且取代基 R为碳原子个数为 11至 22 的直链或支链烷酰基；

优选地，取代基 R选自十一烷酰基、二十二烷酰基、十八烷酰基和异硬酯酰基。

另一方面，本发明还提供了一种治疗肿瘤坏死因子相关疾病的方法，其中，所述方法包括向有需要的受试者给予治疗有效量的如上所述的式 A 化合物；

优选地，所述式 A化合物通过注射给药；

优选地，所述肿瘤坏死因子相关疾病为关节炎，更优选地，所述关节炎为风湿性关节炎或类风湿性关节炎。本发明采用鸡 Π型胶原性 SD大鼠关节炎模型，考察了式 A化合物 (具体包括下文所述化合物 I~VI )对其治疗作用。

将致炎造模成功的 SD大鼠，根据体重随机分为模型对照组 12只、受试药的低、中剂量组分别 8只、高剂量组 12只。模型对照组隔日 1次，连续 7日，尾静脉注射空白脂肪乳注射液 0.5mL; 受试药的低、中剂量组隔日 1次，连续 7日，尾静脉注射式 A化合物（具体包括下文所述化合物 I~VI )的脂肪乳注射液；高剂量组隔日 1次，连续 14日，尾静脉注射式 A 化合物的脂肪乳注射液。正常对照组 12只同样模型给予空白脂肪乳注射液。采用后足关节评分、后足关节厚度测定、血清和后足关节组织中 TNF- α水平、后足关节病理切片等指标评价药物的疗效。

结果显示，式 A化合物具有的降低大鼠后足肿胀程度及后足踝关节厚度的作用，能降低血清 TNF- o水平，能明显使踝关节 TNF- o水平显著下降。大鼠踝关节病理学切片结果与血清学结果基本一致。由此证明，式 A 化合物具有抗风湿、类风湿性关节炎的作用。附图说明

以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：

图 1为正常对照组大鼠后足踝关节病理切片（X 400);

图 2为模型对照组大鼠后足踝关节病理切片（X 400);

图 3为化合物 I高剂量组（1.40mg/kg)大鼠后足踝关节病理切片（X

400);

图 4为化合物 V高剂量组（1.80mg/kg)大鼠后足踝关节病理切片（X

400);

图 5为化合物 II高剂量组（1.80mg/kg)大鼠后足踝关节病理切片（X

400);

图 6为化合物 III高剂量组 (2.16mg/kg)大鼠后足踝关节病理切片（X

400);

图 7为化合物 IV高剂量组 (2.0mg/kg)大鼠后足踝关节病理切片（X 400)。

图 8为化合物 VI高剂量组（1.48mg/kg)大鼠后足踝关节病理切片（X

400)。具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。

本发明所使用的化合物 I购自西安力邦制药有限公司；化合物 II -VI 采用下述方法合成。本发明所使用的 SD大鼠购自上海西普尔 -必凯实验动物有限公司；鸡 II型胶原购自 Sigma公司，批号 87H5227; 大鼠肿瘤坏死因子 α [TNF-α]酶联免疫分析试剂盒 (ELISA)购自上海拜沃生物科技有限公司，批号 BV-E12102201 o

本发明采用 II型胶原性 SD大鼠关节炎模型，考察了化合物 I及其酯类衍生物 II- VI对关节炎（如风湿性关节炎和类风湿性关节炎）的治疗作用。实施例 1 化合物 II的合成

1 )反应处理

将 3g(4.95mmol) 氟维司群加入 250 mL圓底烧瓶中，加入 160 mL二氯曱烷搅拌溶解，然后顺次加入 0.0822g(0.66mmol)DMAP ( 4-二曱氨基吡啶）、 0.96g十一碳烷酸 (5.05mmol)、 1.02g(4.98mmol)DCC ( N, N-二环己基碳二亚胺），保持室温 (例如， 20±5 °C)搅拌反应 48小时后，中止反应。

2 )后处理

将反应体系先冷冻，尽可能析出反应的副产物 DCU ( N, N， -二环己基脲），滤除 DCU固体，滤液再以饱和碳酸氢钠溶液洗涤，并水洗至中性，旋蒸除去二氯曱烷，得到无色透明的胶状液体。再以少量乙酸乙酯溶解胶状液体，在冰箱中冷冻（例如，冷冻温度可为 -15 ± 3 °C ) , 直至再无白色固体 DCU析出。滤液浓缩除去乙酸乙酯，再以正己烷-乙酸乙酯混合溶剂重结晶，滤除析出白色固体 (未反应的原料氟维司群)。母液旋干溶剂后，为无色油状物。采用硅胶柱层析法进一步纯化 (洗脱剂为正己烷 -乙酸乙酯（1 : 1 , 体积比)）。旋蒸得无色油状物 1.0611g, 即化合物 II (HPLC测定纯度为 99.104%, C18柱，流动相 67% THF (四氢呋喃）水溶液，流速 1.0 mL /min, 检测波长 220nm), 摩尔收率 27.7%。

IR(cm-l): 3385 , 2926, 2855 , 1756, 1494, 1463 , 1199, 1152, 1059,

1017, 985 , 721。

^NMR OO MHz, CDC13 , ppm): δ 7.28 (s, 1 H), 6.83 (d, 1 H), 6.77 (d, 1 H), 3.73 (t, 1 H, J=8 Hz), 2.88-1.17 (t, 57 H), 0.89 (s, 3 H), 0.77 (s, 3 H)。

¹³CNMR(125 MHz, CDC13 , ppm): δ 172.64, 148.52, 137.13, 126.91, 122.37, 120.10, 118.64, 81.93, 52.75, 51.03, 46.47, 43.33, 41.67, 38.23, 36.89, 34.50, 34.45, 33.85, 31.89, 29.67, 29.50, 29.63, 29.55, 29.49, 29.46, 29.34, 29.30, 29.26, 29.16, 29.12, 28.80, 28.23, 27.11, 25.70, 25.01, 24.88, 22.66, 14.62, 14.50, 11.50。实施例 2 化合物 III的合成

1 )反应处理

将 3g(4.95 mmol) 氟维司群加入 250 mL圓底烧瓶中，加入 160 mL二氯曱烷搅拌溶解，然后顺次加入 0.0822g(0.66mmol)DMAP、 1.87g(5.05mmol) 二十二碳烷酸、 1.02g(4.98mmol)DCC, 保持室温 (例如， 20±5°C)搅拌反应 48小时后，中止反应。

1 )后处理

将反应液参照实施例 1中后处理方法处理，得白色固体粉末 1.016g

(HPLC纯度 92.634%)( C18柱，流动相 75% THF水溶液，流速 1.0 mL /min, 检测波长 220nm), 即化合物 III, 摩尔收率 22.1%。

IR(cm-l): 3607, 3424, 2919, 2851, 1754, 1495, 1471, 1199, 1153,

1141, 1112, 1081, 985, 719。

^NMR OO MHz, CDC13 , ppm): δ 7.28 (d, 1 Η), 6.83 (d, 1 Η), 6.77

(d, 1 Η), 3.74 (t, 1 Η, J=8 Hz), 2.91-1.05 (t, 79 H), 0.89 (t, 3 H), 0.77 (s, 3

H)。

¹³CNMR(125 MHz, CDC13 , ppm): δ 172.64, 148.53, 137.13, 126.91, 122.37, 118.64, 81.93, 52.83, 51.11, 46.48, 43.34, 41.68, 38.24, 36.89, 34.50 , 33.15 , 31.94 , 30.56 , 29.94 , 29.86 , 29.71, 29.67 , 29.63 , 29.62, 29.51, 29.48, 29.37, 29.35, 29.27, 29.17, 29.13, 28.81, 28.23, 27.12, 25.70, 25.01, 24.88, 23.16, 22.66, 14.50, 14.01, 11.50。实施例 3 化合物 IV的合成

将 3g(4.95mmol) 氟维司群加入 250 mL圓底烧瓶中，加入 160 mL二氯曱烷搅拌溶解，然后顺次加入 0.0822g(0.66mmol)DMAP、 1.44g(5.05mmol) 异硬脂酸、 1.02g(4.98mmol)DCC, 保持室温 (例如， 20 ± 5°C)搅拌反应 48 小时后，中止反应。将反应液参照实施例 1中后处理方法处理，得为无色胶状物 1.0028g (HPLC测定纯度为 99.312%) (方法参照实施例 2), 即化合物 IV, 摩尔收率 23.2%。

IR(cm-l): 3396, 2928, 2866, 1748, 1494, 1466, 1364, 1198, 1149, 1121, 1058, 1017, 984,720。

丽1 (500 MHz, CDC13 , ppm): δ 7.28 (s, 1 H), 6.83 (d, 1 H), 6.76 (s, 1 H), 3.74 (t, 1 H, J=8 Hz), 2.35-1.03 (t, 71 H), 1.09-0.94 (t, 3 H), 0.89 (s, 3 H), 0.77 (s, 3 H)„

¹³CNMR (125 MHz, CDC13, ppm): δ 171.15, 148.60, 137.03, 126.88, 122.45, 118.72, 81.94, 53.34, 53.04, 52.82, 51.39, 50.96, 48.46, 48.39,

48.32, 46.48, 43.33, 41.68, 38.21, 37.92, 37.86, 37.79, 36.89,

33.16, 32.37, 32.05, 31.11, 30.56, 30.06, 29.96, 29.87, 2299..6699,, 29.55,

29.50, 29.37, 29.32, 29.18, 28.81, 28.26, 27.11, 26.09, 2255..6655,, 24.81,

22.66, 21.21, 19.40, 14.61, 14.50, 11.51。实施例 4 化合物 V的合成

将 0.36g(0.6 mmol) 氟维司群加入 50 mL圓底烧瓶中，加入 25 mL二氯曱烷搅拌溶解，然后顺次加入 9.93mg(0.08mmol)DMAP、

0.113g(0.61mmol)十一碳烯酸、 0.13g(0.64 mmol)DCC, 保持室温 (例如， 20 ± 5 °C )搅拌反应 48小时，终止反应。

将反应液参照实施例 2中后处理方法处理，得为淡黄色油状物，采用 3次硅胶柱层析法和 1次中性氧化铝进一步纯化，蒸干后得淡黄色油状物 0.1g(HPLC纯度为 96.010%) (方法参照实施例 2),即化合物 V ,收率 21.5%。

IR(KBr, cm-1): 3387, 2927, 2855, 1736, 1652, 1494, 1461, 1356, 1312, 1198, 1154, 1121, 1059, 1016, 983, 721。

^NMRCSOO MHz, CDC13 , ppm): δ 7.27 (t, 1 H), 7.15 (t, 1 H), 6.87 (s, 1 H), 6.82 (s, 1 H), 6.43 (t, 2 H), 5.99 (t, 1 H), 3.74 (t, 1 H, J=8 Hz), 3.2-1.1 (t, 51 H), 0.89 (t, 3 H, J=7 Hz), 0.77 (s, 3 H)„

¹³CNMR(125 MHz, CDC13 , ppm): δ 170.90, 165.38, 151.71, 148.55, 137.10, 135.55, 126.91, 122.44, 120.94, 120.12, 118.79, 81.93, 52.77, 51.04, 46.50, 43.35, 41.71, 38.27, 36.91, 34.51, 33.18, 31.85, 30.56, 29.94, 29.87, 29.70, 29.62, 29.51, 29.36, 29.34, 29.19, 29.16, 29.09, 28.96, 28.81, 28.23, 27.13, 25.70, 24.88, 22.66, 14.50, 13.50, 11.10。实实施施例例 55 化化合合物物 VVII的的合合成成

将将 00..3311 gg((00..44 mmmmooll)) 化化合合物物 VVIIII((实实施施例例 44中中合合成成的的））、、 44 mmLL ((4400 mmmmooll)) 乙乙酸酸酐酐、、 00..22 gg((11..66 mmmmooll))、、 44--二二曱曱氨氨基基吡吡啶啶 ((DDMMAAPP))依依次次加加入入 5500 mmLL圓圓底底烧烧 55 瓶瓶中中，，加加入入 3300 mmLL四四氢氢呋呋喃喃溶溶液液，，回回流流反反应应 4488小小时时，，终终止止反反应应。。

将将反反应应体体系系冷冷却却后后，，先先水水洗洗至至中中性性，，分分液液，，有有机机层层旋旋干干，，硅硅胶胶柱柱层层析析纯纯化化 ((洗洗脱脱剂剂：：正正己己烷烷--乙乙酸酸乙乙酯酯 ((4400::11//1100::11//55::11,, 体体积积比比))))进进行行梯梯度度洗洗脱脱，，洗洗脱脱液液蒸蒸干干后后得得乳乳白白色色胶胶状状液液体体，，即即化化合合物物 VVII。。

IIRR((ccmm--ll)):: 33444499,, 22992277,, 22885555,, 11773366,, 11665511,, 11449944,, 11446611,, 11337733,, 11336600,, 1100 11331111,, 11224455,, 11119988,, 11115544,, 11112211,, 11004455,, 11002277,, 998833,, 889966,, 882222,, 772200。。

^^NNMMRR OOOOMMHHzz,, CCDDCC1133 ,, ppppmm)):: δδ 77..2277 ((tt,, 11 HH)),, 77..1155((tt,, 11 HH)),, 66..8877((tt,, 11 HH)),, 66..8811 ((dd,, 11 HH)),, 66..4400 ((tt,, 11 HH)),, 66..0000 ((dd,, 11 HH)),, 55..6633 ((tt,, 11 HH)),, 44..7700 ((tt,, 11 HH)),, 22..77--11..11 ((tt,, 5522 HH)),, 22..0055 ((tt,, 33 HH)),, 00..8899 ((tt,, 33 HH)),, 00..8822 ((ss,, 33 HH))。。

¹ ¹³³CCNNMMRR((112255 MMHHzz,, CCDDCC1133 ,, ppppmm)):: δδ 117700..9900,, 116655..3366,, 115511..7722,, 114488..5566,, 1155 113377..0077,, 113366..9977,, 112266..9922,, 112222..4433,, 112222..3322,, 112200..9922,, 111188..7733,, 8822..7766,, 5522..7711,, 5500..9988,, 4466..2266,, 4422..9944,, 4411..4400,, 3388..2200,, 3388..1122,, 3377..0066,, 3344..5500,, 3333..1177,, 3322..5500,, 3322..4411,, 3311..8844,, 2299..8855,, 2299..6677,, 2299..5555,, 2299..4499,, 2299..3355,, 2299..3322,, 2299..1188,, 2299..1155,, 2288..7799,, 2288..1166,, 2266..9966,, 2255..6644,, 2222..7788,, 2222..6655,, 2211..1177,, 1144..6633,, 1122..0022。。

模型的建立：

将鸡 II型胶原溶于 O.lmol/L的醋酸中，在 4°C下搅拌使之充分溶解，浓度为 2mg/mL,置 4°C冰箱过夜。将液体石蜡与羊毛脂按照 2:1 (体积比）的比例混合，高压灭菌，制成弗氏不完全佐剂（IFA)。卡介苗 (60mg)80°C灭 25 活 1小时后转移至研钵中，逐滴加入 IFA, 充分研磨混匀后以双注射器反复推吸，制成完全弗氏佐剂（CFA), 卡介苗终浓度为 2mg/mL。将等量的鸡 II型胶原酸溶液与 CFA混合成稳定的乳剂（即每毫升含 lmg鸡 II型胶原）。

SD大鼠，雌性， 192只。随机选出 12只作为正常对照组。其余 180 30 只大鼠，碘酒消毒， 75%的乙醇脱碘后，将胶原乳剂于大鼠尾根部皮内注射 150 L, 并于大鼠右后足足跖皮内注射 100 L, 每只共 250 L。 7天后腹腔注射等量胶原乳剂作为再次免疫。

动物分组及给药：将致炎的大鼠根据体重随机分为模型对照组、受试药物低、中、高剂量组，按以下表 1所示的药物及分组、剂量和给药时间:

表 1 药物及分组、剂量和给药时间

注：各组自致炎第 20天后给药；第 28天处死 8只，其余按照给药间隔继续给药；第 35天处死其余动物，行组织学指标检测。其中，试验药物为以下化合物 I~VI：

化合物 I： 7-α-[9-(4, 4, 5, 5, 5-五氟戊基亚硫酰基)壬基] -雌甾 -1 , 3, 5(10)-三烯 -3,17 β -二醇

化合物 II： 7-α-[9-(4, 4, 5, 5, 5-五氟戊基亚硫酰基)壬基] -雌甾 -1 , 3, 5(10)-三烯 -3-羟基 -17-十一烷酰基

化合物 III： 7-α-[9-(4, 4, 5, 5, 5-五氟戊基亚硫酰基)壬基] -雌甾 -1 , 3, 5(10)-三烯 -3-羟基 -17-二十二烷酰基

化合物 IV： 7-α-[9-(4, 4, 5, 5, 5-五氟戊基亚硫酰基)壬基] -雌甾 -1 , 3, 5(10)-三烯 -3-羟基 -17-异硬脂酰基化合物 V : 7- α -[9-(4, 4, 5 , 5 , 5-五氟戊基亚硫酰基)壬基] -雌甾 -1 , 3 , ⁵(10)-三烯 -³-羟基 -17- (十一碳 -²-烯酰基）

化合物 VI： 7- α -[9-(4, 4, 5 , 5 , 5-五氟戊基亚硫酰基)壬基] -雌甾 -1 , 3 , ⁵(10)-三烯 -³-乙酰基 -17- (十一碳 -²-烯酰基）

试验药物均为脂肪乳注射液后给药。结果的评价与数据采集

致炎前，对各组大鼠后足关节评分，并测量踝关节厚度，对正常大鼠于眼眶静脉丛取血，分血清， -20°C冻存以检测细胞因子。致炎后间隔 3 天对大鼠进行关节评分；给药前 (致炎第 19天)、给药后 (致炎第 20天)第 3、 8天测量踝关节厚度。炎症较重时 (致炎后第 23天)，各组大鼠于眼眶静脉从取血，分离血清， -20°C冻存。致炎后第 28天，各组处死大鼠 8只，腹腔静脉取血，分离血清，行血清学检测 (TNF- o )。致炎后第 35天，处死其余大鼠，行组织学指标检测。试验结果

(1)后足关节评分结果

造模及给药后大鼠后足关节评分结果如表 2所显示的，与正常对照组相比，模型对照组关节评分有显著性升高 (p<0.01)。给药第 3天为炎症最严重的一天，模型对照组关节评分值最高，给药组有所下降，且多数和模型对照组相比有显著性差异 (p<0.01)。

表 2 大鼠关节炎模型后足关节评分的结果

后足关节评分均值

组别 n

给药前给药后第 3天给药后第 8天正常对照组 12 0.8 1 1.1 模型对照组 12 5.4 6.2* 5.4 低剂量组 8 4.8 4.8" 5.9鼎

化合物 I 中剂量组 8 4.5 5.3" 5.1

高剂量组 12 5.1 4.9 4.9#

低剂量组 8 4.9 4.8 5.6*

化合物 II 中剂量组 8 4.9 4.9" 4.9

高剂量组 12 4.7 5.3"# 4.9

低剂量组 8 4.5 5.3" 5

化合物 III 中剂量组 8 5 4.8" 5.4

高剂量组 12 5.4 4.8"# 5.6 低剂量组 8 4.5 5.3*# 5.3# 化合物 IV 中剂量组 8 4.4 4.8" 5.6^## 高剂量组 12 4.7 4.9" 5.1

低剂量组 8 4.6 5.1" 5.9鼎化合物 V 中剂量组 8 4.4 5.Ί冊 4.4

高剂量组 12 4.5 5.6浦 4.8

低剂量组 8 4.6 5.4 ** 4.9

化合物 . ,**

VI 中剂量组 8 4.8 4.6 5.5

高剂量组 12 5.3 _{4 7}**# 5.5

注： η为动物数（下同）；与模型对照组相比 *ρ<0.05, **ρ<0.01 ; 与自身给药前相比 #ρ<0.05, ^##ρ<0.01

(²)后足踝关节厚度测定

表 3所示为给药后大鼠关节炎大鼠右踝关节厚度的变化。测量结果显示，模型对照组与正常对照组相比，踝关节厚度显著增加 (ρ<0.01) , 各给药组与模型对照组相比，踝关节厚度均有所下降，其中高剂量组有显著性差异 (p<0.01)。自身给药前后对照表明，受试药各组大鼠在给药前期后足踝关节厚度继续增长，随着给药时间的延长后足踝关节厚度有所减轻。

表 3. 大鼠右踝关节厚度千分尺测量结果 (平均数士标准差)

化合物 V 中剂量组 8 6.09 ± 0.45 6.74 ± 0.44^# 6.15 + 0.37 高剂量组 12 6.28 ± 0.44 6.44 ± 0.60 6.07 ± 0.41* 低剂量组 8 6.13 + 0.30 6.43 ± 0.21 6.33 + 0.57 化合物 IV 中剂量组 8 6.34 ± 0.51 6.58 + 0.28 6.42 ± 0.52 高剂量组 12 5.98 + 0.77 6.02 ± 0.46 5.69 + 0.40 注：与模型对照组相比 *p<0.05, **p<0.01。

(3)血清中 TNF- o测定结果

表 4为各组大鼠血清中 TNF- o含量的测定结果。当大鼠给药第 3天时，与正常组相比，各组血清中 TNF- o的水平均明显升高，而模型对照组升高最为显著 (p<0.01), 与模型对照组相比，给药组 TNF- o的水平明显降低，高剂量组的降低作用有显著性差异 (p<0.01)。到给药第 8天时，模型对照组血清中 TNF- o的水平继续升高，低剂量组水平稍有升高，但仍比模型对照组低，结果具有显著性差异。

对关节炎大鼠血清中 TN F - α水平的影响 (平均数士标准差)

高剂量组 12 28.27士 37.62** 26.56 ± 18.06** 注：与模型对照组相比 *p<0.05, **p<0.01

(⁴)后足踝关节组织中 TNF- o测定结果

表 5为各组大鼠后足踝关节中 TNF- o含量的测定结果。各给药组后足左右踝关节 TNF- o含量均显著高于正常组大鼠 (ρθ.01 , p<0.05)。左踝关节中，各治疗组均使踝关节 TNF- o水平显著下降，与模型对照组相比有显著性差异 (p<0.01),但和正常组大鼠踝关节中 TNF- o含量无明显差异。右踝关节中各治疗组也使踝关节 TNF- o水平明显下降，但总体效果不如左踝关节中效果明显。

对关节炎大鼠踝关节中 TNF- α水平的影响 (平均数士标准差)

注：与模型对照组相比 *ρ<0.05, **ρ<0.01

(5)大鼠后足踝关节病理学检查结果表 6与图 1~7为大鼠后足踝关节病理学检查结果，表 6显示，模型对照组关节炎症状明显，关节病变最严重。高剂量组对关节炎的治疗效果较明显，与模型对照组相比有显著性差异。图 1显示，正常大鼠关节骨、软骨及滑膜组织未查见明显病理变化，周围双侧关节皮肤及皮下组织无炎细胞浸润。图 2显示，模型对照组大鼠多数关节滑模组织有炎细胞浸润，滑模细胞变性、少数有增生，关节周围皮下组织有中度或重度炎症反应。图 3 ~7显示，给药高剂量组的病变情况均轻于模型对照组。

表 6. 大鼠后足踝关节病理检查评分结果 (平均数 ±标准差)

注：与模型对照组相比 *ρ<0.05, **ρ<0.01

(6)结论

本实险研究了化合物 I 、 Π、 III、 IV、 V、 VI的脂肪乳注射液对鸡 II 胶原与佐剂联合诱导的大鼠关节炎的治疗作用，通过对关节炎大鼠各指标的分析，评估其治疗关节炎的药理活性。

从大鼠模型及给药组大鼠的后足肿胀程度及后足踝关节治疗的结果来看，均有一定的降低大鼠后足肿胀程度及后足踝关节厚度的作用。血清

TNF- a检测结果显示其能降低血清 TNF- α水平，大鼠踝关节病理学切片结果与血清学结果基本一致。

综上所述，化合物 Α及其酯类衍生物对本模型关节炎有治疗作用，可以预见随着剂量、给药时间的延长，药物疗效更好。

Claims

权利要求

1. 以下式 A化合物在制备用于治疗肿瘤坏死因子相关疾病的药物中的用途,

式 A 取代基 R'选自 H、碳原子个数为 2至 4的烷酰基或烯酰基，取代基 R选自 H、碳原子个数为 2至 22的烷酰基或烯酰基。
2. 根据权利要求 1所述的用途，其特征在于，所述肿瘤坏死因子相关疾病为关节炎，优选地，所述关节炎为风湿性关节炎或类风湿性关节炎。
3. 根据权利要求 1或 2所述的用途，其特征在于，当 R'为碳原子个数为 2至 4的烷酰基时，为乙酰基。
4. 根据权利要求 1-3任一项所述的用途，其特征在于，所述取代基 R 为碳原子个数为 11至 22的烯酰基。
5. 根据权利要求 4所述的用途，其特征在于，所述取代基 R'为 H, 且取代基 R为包含一个或多个优选为 1至 6个碳碳双键的、碳原子个数为

11至 22的直链或支链烯酰基。
6. 根据权利要求 5所述的用途，其特征在于，取代基 R为支链烯酰基，其中所述双键可以在主链上，也可在支链上，优选地，取代基 R为十一碳 -2-烯酰基。
7. 根据权利要求 1-3任一项所述的用途，其特征在于，所述取代基 R 为碳原子个数为 11至 22的烷酰基。
8. 根据权利要求 7所述的用途，其特征在于，所述取代基 R'为 H, 且取代基 R为碳原子个数为 11至 22的直链或支链烷酰基。
9. 根据权利要求 1-3或 7-8任一项所述的用途，其特征在于，取代基 R选自：十一烷酰基、二十二烷酰基、十八烷酰基和异硬酯酰基。
10.—种治疗肿瘤坏死因子相关疾病的方法，其特征在于，所述方法包括向有需要的受试者给予治疗有效量的如权利要求 1至 9中任一项所述的式 A化合物；

优选地，所述式 A化合物通过注射给药。
11. 根据权利要求 10所述的方法，其特征在于，所述肿瘤坏死因子相关疾病为关节炎，优选地，所述关节炎为风湿性关节炎或类风湿性关节炎。