CN104897837A - 一种治疗气滞胃痛的药物制剂的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种治疗气滞胃痛的药物制剂的检测方法，包括如下对柠檬烯的含量测定步骤：(1)取待测药物制剂2.0～3.0g，加30％～100％甲醇10～100mL，称重，超声或加热回流10～60min，放冷，再次称重，用30％～100％甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取滤液，作为供试品溶液；(2)取柠檬烯对照品，加入甲醇，制成每1mL甲醇含柠檬烯0.05～0.15μL的溶液，作为对照品溶液；(3)色谱条件：以C18为色谱柱，以化学键合相为固定相，乙腈：水体积比为60～80：40～20的混合溶液为流动相，时间：20～40min，柱温：10～30℃，检测波长：210nm，流速0.5～1.5mL/min；(4)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液6～10μL，注入高效液相色谱仪，测定。该检测方法快速、全面、针对性强，有利于对该药物的质量进行有效控制，有助于提高使用的安全性和稳定性。

Description

一种治疗气滞胃痛的药物制剂的检测方法

技术领域

本发明属于中药制剂检测领域，具体涉及一种治疗气滞胃痛的药物制剂的检测方法。

背景技术

气滞胃痛颗粒由原料药柴胡、甘草、香附、延胡索、白芍、枳壳组成，具有舒肝理气、和胃止痛的作用，临床用于肝郁气滞、胸痞胀满、胃脘疼痛等疾病的治疗。《中国药典2010版》通过对芍药苷的TLC定性鉴别和芍药苷的HPLC定量测定以控制气滞胃痛颗粒的质量。

枳壳，始载于《雷公炮炙论》，为芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.及其栽培变种的干燥未成熟果实，具有破气，行痰，消积的功效，临床用于胸膈痰滞、胸痞、胁胀、食积、噫气、呕逆、下痢后重、脱肛、子宫脱垂等疾病的治疗。枳壳含有由单萜、倍半萜组成的挥发油成分，主要成分为柠檬烯。根据现有资料的报道，柠檬烯为气滞胃痛颗粒中发挥胃肠动力作用的主要有效物质。

《HPLC法测定留兰香油中柠檬烯》(安徽农业科学，2012，40(2)，743-744)公开了一种用HPLC法测定留兰香油中柠檬烯含量的方法，色谱条件具体为：以ODS C18(4.6mm×250mm，5μm)为色谱柱，以无水甲醇：水＝75:25(V：V)为流动相等。以《HPLC法测定留兰香油中柠檬烯》的方法对气滞胃痛颗粒中柠檬烯的含量进行测定时，由于气滞胃痛颗粒由原料药柴胡、甘草、香附、延胡索、白芍、枳壳组成，柠檬烯与气滞胃痛颗粒中的其他化学成分的分离效果较差，从而导致不能进行含量测定。因此，《HPLC法测定留兰香油中柠檬烯》的方法并不适用于气滞胃痛颗粒中的柠檬烯的含量测定。

因此，建立一种气滞胃痛颗粒中的柠檬烯含量测定方法，对于气滞胃痛颗粒的质量进行全面控制具有重要意义。

发明内容

为此，本发明所要解决的是现有技术中没有气滞胃痛颗粒中的柠檬烯含量测定方法、不利于从整体上对气滞胃痛颗粒的质量进行全面控制的技术问题，从而提出一种治疗气滞胃痛的药物制剂的检测方法。

为解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案来实现的：

本发明提供一种治疗气滞胃痛的药物制剂的检测方法，所述药物制剂的原料药组成为：

柴胡、甘草、香附、

延胡索、白芍、枳壳；

该检测方法包括如下对柠檬烯的含量测定步骤：

(1)取待测药物制剂2.0～3.0g，加30％～100％甲醇10～100mL，称重，超声或加热回流10～60min，放冷，再次称重，用30％～100％甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取滤液，作为供试品溶液；

(2)取柠檬烯对照品适量，加入30％～100％甲醇，制成每1mL甲醇含柠檬烯0.05～0.15μL的溶液，作为对照品溶液；

(3)色谱条件：以C18为色谱柱，以化学键合相为固定相，以乙腈：水体积比为60～80：40～20的混合溶液为流动相，时间：20～40min，柱温：10～30℃，检测波长：210nm，流速为0.5～1.5mL/min；

(4)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液6～10μL，注入高效液相色谱仪，测定。

本发明上述治疗气滞胃痛的药物制剂的检测方法中，所述对柠檬烯的含量测定步骤为：

(1)取待测药物制剂2.5g，加100％甲醇50mL，称重，超声30min，放冷，再次称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取滤液，作为供试品溶液；

(2)取柠檬烯对照品适量，加入100％甲醇，制成每1mL甲醇含柠檬烯0.1μL的溶液，作为对照品溶液；

(3)色谱条件：以C18为色谱柱，以非极性键合相为固定相，以乙腈：水＝70:30为流动相，时间：30min，柱温：10-30℃，检测波长：210nm，流速为1.0mL/min；

(4)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液8μL，注入高效液相色谱仪，测定。

本发明上述治疗气滞胃痛的药物制剂的检测方法中，以硅碳型键合相为固定相。

优选地，以三个硅羟基键与一个键合相C18键合的十八烷基硅烷键合硅胶为固定相。

本发明上述治疗气滞胃痛的药物制剂的检测方法中，该方法还包括如下鉴别和/或含量测定步骤中的至少一种：

A、TLC法鉴别芍药苷

(1)取待测药物制剂0.4～0.6g，加乙醇8～12mL，振摇4～6分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇0.5～1.5mL使溶解，作为供试品溶液；

(2)取芍药苷对照品，加乙醇制成每1mL含0.8～1.2mg溶液，作为对照品溶液；

(3)照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各8～12μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸35～45：4～6：8～12：0.1～0.3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，进行鉴别；

B、HPLC法测定芍药苷的含量

(1)取待测药物制剂0.05～0.15g，精密称定，置50mL量瓶中，加稀乙醇30～40mL，超声处理20～40分钟，放冷，加稀乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；

(2)取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含50～70μg的溶液，作为对照品溶液；

(3)照高效液相色谱法试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.1％磷酸溶液12～16：88～84为流动相，检测波长为230nm，理论板数按芍药苷峰计算应不低于2000；

(4)分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各8～12μL，注入液相色谱仪，测定。

本发明上述治疗气滞胃痛的药物制剂的检测方法中，该方法还包括如下鉴别和/或含量测定步骤中的至少一种：

A、TLC法鉴别芍药苷

(1)取待测药物制剂0.5g，加乙醇10mL，振摇5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液；

(2)取芍药苷对照品，加乙醇制成每1mL含1mg溶液，作为对照品溶液；

(3)照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸40：5：10：0.2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，进行鉴别；

B、HPLC法测定芍药苷的含量

(1)取待测药物制剂0.1g，精密称定，置50mL量瓶中，加稀乙醇35mL，超声处理30分钟，放冷，加稀乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；

(2)取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含60μg的溶液，作为对照品溶液；

(3)照高效液相色谱法试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.1％磷酸溶液14：86为流动相，检测波长为230nm，理论板数按芍药苷峰计算应不低于2000；

(4)分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定。

本发明所述治疗气滞胃痛的药物制剂的相关处方及制备方法详见中国专利CN1712048A所公开的内容。

本发明上述治疗气滞胃痛的药物制剂的检测方法中，所述药物制剂的原料药组成为：

柴胡30～100重量份、甘草15～60重量份、香附35～120重量份、

延胡索35～120重量份、白芍40～150重量份、枳壳35～120重量份。

优选地，本发明上述治疗气滞胃痛的药物制剂的检测方法中，所述药物制剂的原料药组成为：

柴胡36重量份、甘草20重量份、香附40重量份、

延胡索40重量份、白芍48重量份、枳壳40重量份；或者

柴胡80重量份、甘草40重量份、香附90重量份、

延胡索90重量份、白芍120重量份、枳壳90重量份；或者

柴胡70重量份、甘草60重量份、香附120重量份、

延胡索80重量份、白芍150重量份、枳壳100重量份；或者

柴胡90重量份、甘草50重量份、香附45重量份、

延胡索100重量份、白芍120重量份、枳壳40重量份；或者

柴胡50重量份、甘草40重量份、香附100重量份、

延胡索40重量份、白芍70重量份、枳壳50重量份。

本发明上述治疗气滞胃痛的药物制剂的检测方法中，所述药物制剂为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、蜜炼丸剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂或注射制剂。

本发明上述治疗气滞胃痛的药物制剂的检测方法中，所述药物制剂由以下方法制备：

(1)取选定重量份的枳壳和香附，提取，得提取液A和挥发油A；

(2)取选定重量份的柴胡、甘草、延胡索和白芍，加水提取2次，第一次提取0.5～4小时，第二次提取0.5～3小时，合并2次提取所得的提取液，得提取液B；

(3)合并上述提取液A和提取液B，浓缩至相对密度为1.10～1.30的稠膏，加入挥发油A，混匀，加入常规辅料、按照常规工艺制成临床可接受的剂型。

本发明上述治疗气滞胃痛的药物制剂的检测方法中，所述药物制剂为无糖型颗粒剂。

本发明上述治疗气滞胃痛的药物制剂的检测方法中，所述无糖型颗粒剂由以下方法制备：

(1)取选定重量份的枳壳和香附，提取，得提取液A和挥发油A；所述挥发油A中加入β-环糊精和水，包合0.5～4小时，得包合物A；

(2)取选定重量份的柴胡、甘草、延胡索和白芍，加水提取2次，第一次提取0.5～4小时，第二次提取0.5～3小时，合并2次提取所得的提取液，得提取液B；

(3)合并上述提取液A和提取液B，浓缩至相对密度为1.10～1.30的稠膏，加入包合物A，混匀，加入常规辅料、按照常规工艺制成无糖型颗粒剂。

本发明的上述技术方案相比现有技术具有以下优点：

本发明的治疗气滞胃痛的药物制剂的检测方法，通过化学键合相色谱法测定柠檬烯的含量，通过选择提取方法、提取溶剂、提取溶剂用量、提取时间等，使气滞胃痛颗粒中的柠檬烯最大程度的被提取；通过选择色谱柱、流动相等，使气滞胃痛颗粒中的柠檬烯与其它化学成分的分离效果最好，从而准确地对气滞胃痛颗粒中的柠檬烯的含量进行测定。该检测方法快速、全面、针对性强，联合现有的TLC鉴别和HPLC法测定芍药苷的含量，有利于对该药物的质量进行有效控制，有助于提高该药物使用的安全性和稳定性。

附图说明

为了使本发明的内容更容易被清楚的理解，下面根据本发明的具体实施例并结合附图，对本发明作进一步详细的说明，其中：

图1(A)是本发明实验例中Angilent TC-C18(250×4.6mm，5μm)色谱柱对供试品的分离效果图；

图1(B)是本发明实验例中Angilent TC-C18(250×4.6mm，5μm)色谱柱对对照品的分离效果图；

图2(A)是本发明实验例中Phenomenexl TC-C18(250×4.6mm，5μm)色谱柱对供试品的分离效果图；

图2(B)是本发明实验例中Phenomenexl TC-C18(250×4.6mm，5μm)色谱柱对对照品的分离效果图；

图3(A)是本发明实验例中Angilent TC-C18(150×4.6mm，5μm)色谱柱对供试品的分离效果图；

图3(B)是本发明实验例中Angilent TC-C18(150×4.6mm，5μm)色谱柱对对照品的分离效果图；

图4(A)是本发明实验例中Welch Ultimate LP-C18(250×4.6mm，5μm)色谱柱对供试品的分离效果图；

图4(B)是本发明实验例中Welch Ultimate LP-C18(250×4.6mm，5μm)色谱柱对对照品的分离效果图；

图5是本发明实验例中空白溶剂的色谱图；

图6是本发明实验例中柠檬烯对照品的色谱图；

图7是本发明实验例中供试品溶液的色谱图；

图8是本发明实验例中柠檬烯的标准曲线图。

具体实施方式

实验例

1.仪器与试药

1.1仪器

岛津10A高效液相色谱仪(日本岛津公司)；

ACCULAB ALC-11C.4型电子天平(德国赛多利斯集团)；

SHZ-DⅢ型循环水式真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司)；

Welch Ultimate LP-C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)(美国月旭公司)，为采用三位键合工艺(三个硅羟基键与一个键合相C18结合)所制成；

超纯水处理装置(Milli-Q，美国Millipore公司)；

HS6150型超声波清洗器(天津恒奥科技发展有限公司)；

HHS型电子恒温水浴锅(上海博讯实业有限公司医疗设备厂)。

1.2试药

无糖型气滞胃痛颗粒(辽宁华润本溪三药有限公司，批号分别为20141112，20141111、20140304、20140914、20140910、20140601、20140911、20140404、20140718、20140912)；

柠檬烯对照品(上海源叶生物科技有限公司，批号：YM0510SA14)；

乙腈(色谱纯，中国天津科密欧化学试剂有限公司)；

超纯水(18.2MΩ)。

2.方法与结果

2.1供试品溶液制备

取无糖型气滞胃痛颗粒2.5g，精密称定，置于锥形瓶中，加甲醇50mL，称重，超声30min，放冷，再次称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2对照品溶液制备

取柠檬烯对照品适量，精密量取，加甲醇制成每1mL含柠檬烯0.1μL的溶液，即得。

2.3色谱条件

色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，Welch Ultimate LP-C18色谱柱；流动相为乙腈：水＝70:30，时间：30min，柱温：10-30℃，检测波长：210nm，流速为1.0mL/min。

2.4单因素变量分析

2.4.1色谱柱耐用性

选用不同的色谱柱，按上述色谱条件分析，记录试验情况，结果见表1、图1(A)、图1(B)、图2(A)、图2(B)、图3(A)、图3(B)、图4(A)和图4(B)。

表1 不同色谱柱对分离效果的影响

结果表明，以上色谱柱分离度均大于1.5，而只有Welch Ultimate LP-C18色谱柱表现为色谱峰对称性良好(对称度在0.95～1.05之间)，且WelchUltimate LP-C18色谱柱的理论塔板数明显高于其他三种色谱柱，且在实验过程中发现，其他三种色谱柱的重复性较差，进样次数越多，色谱峰的对称度越差。因此可以认为，Welch Ultimate LP-C18色谱柱对无糖型气滞胃痛颗粒中柠檬烯的分离效果最好。

2.4.2提取方法

取同一批次无糖型气滞胃痛颗粒2.5g四份(批号：20140601)，精密称定，置于锥形瓶中，加50％甲醇25mL，称重，分别采用超声处理30min和加热回流60min的处理方式，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得，结果见表2。

表2 提取方法的影响

结果表明，超声提取法较加热回流提取法柠檬烯含量较大，故将提取方法确定为超声提取。

2.4.3提取溶剂

取同一批次无糖型气滞胃痛颗粒2.5g六份(批号：20140910)，精密称定，置于锥形瓶中，分别加30％甲醇、50％甲醇、100％甲醇25mL，称重，超声处理30min，放冷，再称定重量，用提取溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得，结果见表3。

表3 提取溶剂的影响

结果表明，采用100％甲醇为提取溶剂的样品所测得的柠檬烯含量高于其他两种溶剂，故采用100％甲醇为提取溶剂。

2.4.4提取时间

取同一批次无糖型气滞胃痛颗粒2.5g六份(批号：20140910)，精密称定，置于锥形瓶中，加甲醇25mL，称重，分别超声处理10min、30min、60min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得，结果见表4。

表4 提取时间的影响

结果表明，提取时间为10min时，检测到的柠檬烯含量较低；提取时间为30min和60min时，测得的柠檬烯的含量差异不大，而故将提取时间定为30min。

2.4.5提取溶剂用量

取同一批次无糖型气滞胃痛颗粒2.5g六份(批号：20140404)，精密称定，置于锥形瓶中，分别加甲醇10mL、25mL、50mL、100mL，称重，分别超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得，结果见表5。

表5 溶剂用量的影响

结果表明，溶剂用量为50mL时测得的柠檬烯的含量最大，故将提取溶剂用量定为50mL。

综上所述，无糖型气滞胃痛颗粒中柠檬烯的最佳提取工艺为取无糖型气滞胃痛颗粒2.5g，精密称定，置于锥形瓶中，加甲醇50mL，称重，超声30min，放冷，再次称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液。

2.5方法学验证

2.5.1专属性

采用高效液相色谱仪分别检测甲醇、对照品溶液及供试品溶液，进样量8μL，结果分别见图5、6和7。

2.5.2标准曲线

精密吸取浓度为0.1μL/mL的柠檬烯对照品溶液2、4、8、10、12、20μL，分别注入液相色谱仪，测定各自峰面积，以对照品进样量X为横坐标，峰面积值Y为纵坐标，求得回归方程：Y＝634439577.9221X+2396.2273，R＝0.9998。

表6 柠檬烯标准曲线

结果见表6和图8。这表明，柠檬烯在0.0002-0.0020μL范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.5.3精密度

取同一对照品溶液8μL，重复进样6次，计算各色谱峰峰面积的RSD(相对标准偏差)(相对标准偏差＝标准偏差/计算结果的算术平均值×100％)，结果见表7。

表7 精密度试验结果

由上表可知，色谱峰峰面积RSD值为0.83％，小于3％。这表明，本发明所构建的采用化学键合相色谱法检测柠檬烯的含量的方法精密度良好。

2.5.4稳定性

取同一供试品溶液8μL(批号：20141111)，于0、2、4、6、8、10h测定柠檬烯含量，计算含量RSD值，结果见表8。

表8 稳定性试验结果

由上表可知，柠檬烯含量RSD值为1.59％，小于3％。这表明，本发明通过化学键合相色谱法检测柠檬烯含量的方法稳定性良好。

2.5.5重复性

取同一批次无糖型气滞胃痛颗粒六份(批号：20141111)，制成供试品溶液，检测其中柠檬烯的含量，计算含量RSD值，结果见表9。

表9 重复性试验结果

由上表可知，柠檬烯含量RSD值为0.56％，小于3％。这表明，本发明通过化学键合相色谱法检测柠檬烯含量的方法重复性良好。

2.5.6回收率

取同一批次无糖型气滞胃痛颗粒六份(批号：20141111)，加2.5μL/mL柠檬烯对照品溶液1mL，制成供试品溶液，测定样品中柠檬烯的含量，计算回收率，结果平均回收率为97.13％，RSD为0.64％，见表10。

表10 回收率试验结果

2.6样品含量测定

取10批次无糖型气滞胃痛颗粒2.5g，精密称定，制成供试品溶液，检测柠檬烯含量，检测结果见表11。

表11 10批次无糖型气滞胃痛颗粒柠檬烯的含量测定结果

2.7样品含量限度

根据以上10批样品中柠檬烯的含量测定结果，确定含量限度为：每1g无糖型气滞胃痛颗粒含柠檬烯量应不低于0.45μL。

3对比实验

分别按照对比例1和实施例2进行对比实验，实验结果如表12所示。

表12 对比例1和实施例2的分离效果的比较

由表12可知，采用对比例1的方法，分离度小于1.5，色谱峰对称性较差，且理论塔板数较小，对气滞胃痛颗粒中柠檬烯的分离效果较差，从而导致不能进行含量测定。因此，对比例1的方法并不适用于气滞胃痛颗粒中柠檬烯的含量测定。

综上所述，本发明一种无糖型气滞胃痛颗粒中挥发性指标成分柠檬烯的质量控制方法，通过单因素考察，得到了无糖型气滞胃痛颗粒中柠檬烯的最佳提取工艺，经方法学验证了此方法的科学性及合理性，并对10批次的无糖型气滞胃痛颗粒中的柠檬烯含量进行了检测，得到了其含量限度，完善了无糖型气滞胃痛颗粒的质量控制标准。该检测方法快速、全面、针对性强，联合现有的TLC鉴别和HPLC法测定芍药苷的含量，有利于对该药物的质量进行有效控制，有助于提高该药物使用的安全性和稳定性。

实施例1 无糖颗粒剂的制备

【处方】柴胡36重量份、甘草20重量份、香附40重量份、延胡索40重量份、白芍48重量份、枳壳40重量份。

【制备方法】(1)取选定重量份的枳壳和香附，提取，得提取液A和挥发油A；所述挥发油A中加入β-环糊精和水，包合0.5～4小时，得包合物A；

(2)取选定重量份的柴胡、甘草、延胡索和白芍，加水提取2次，第一次提取0.5～4小时，第二次提取0.5～3小时，合并2次提取所得的提取液，得提取液B；

(3)合并上述提取液A和提取液B，浓缩至相对密度为1.10～1.30(50℃测)的稠膏，加入包合物A，混匀，加入常规辅料、按照常规工艺制成无糖型颗粒剂。

实施例2 化学键合相色谱法测定柠檬烯的含量

本实施例化学键合相色谱法测定柠檬烯的含量包括以下步骤：

(1)取待测药物制剂2.5g，加100％甲醇50mL，称重，超声30min，放冷，再次称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取滤液，作为供试品溶液；

(2)取柠檬烯对照品适量，加入100％甲醇，制成每1mL甲醇含柠檬烯0.1μL的溶液，作为对照品溶液；

(3)色谱条件：以250×4.6mm，5μm的Welch Ultimate LP-C18为色谱柱，以三个硅羟基键与一个键合相C18键合的十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以乙腈：水＝70:30为流动相，时间：30min，柱温：10-30℃，检测波长：210nm，流速为1.0mL/min；

(4)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液8μL，注入高效液相色谱仪，测定。

实施例3 化学键合相色谱法测定柠檬烯的含量

本实施例化学键合相色谱法测定柠檬烯的含量包括以下步骤：

(1)取待测药物制剂2.0g，加30％甲醇100mL，称重，超声或加热回流60min，放冷，再次称重，用30％甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取滤液，作为供试品溶液；

(2)取柠檬烯对照品适量，加入30％甲醇，制成每1mL甲醇含柠檬烯0.05μL的溶液，作为对照品溶液；

(3)色谱条件：以150×4.6mm，5μm的Angilent TC-C18为色谱柱，以乙腈：水体积比为60：40的混合溶液为流动相，时间：20min，柱温：10℃，检测波长：210nm，流速为0.5mL/min；

(4)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液6μL，注入高效液相色谱仪，测定。

实施例4 化学键合相色谱法测定柠檬烯的含量

本实施例化学键合相色谱法测定柠檬烯的含量包括以下步骤：

(1)取待测药物制剂3.0g，加100％甲醇10mL，称重，超声或加热回流10min，放冷，再次称重，用100％甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取滤液，作为供试品溶液；

(2)取柠檬烯对照品适量，加入100％甲醇，制成每1mL甲醇含柠檬烯0.15μL的溶液，作为对照品溶液；

(3)色谱条件：以250×4.6mm，5μm的Angilent TC-C18为色谱柱，以乙腈：水体积比为80：20的混合溶液为流动相，时间：40min，柱温：30℃，检测波长：210nm，流速为1.5mL/min；

(4)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液10μL，注入高效液相色谱仪，测定。

实施例5 化学键合相色谱法测定柠檬烯的含量

本实施例化学键合相色谱法测定柠檬烯的含量包括以下步骤：

(1)取待测药物制剂2.5g，加100％甲醇50mL，称重，超声30min，放冷，再次称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取滤液，作为供试品溶液；

(2)取柠檬烯对照品适量，加入100％甲醇，制成每1mL甲醇含柠檬烯0.1μL的溶液，作为对照品溶液；

(3)色谱条件：以250×4.6mm，5μm的Phenomenexl TC-C18为色谱柱，以乙腈：水＝70:30为流动相，时间：30min，柱温：10-30℃，检测波长：210nm，流速为1.0mL/min；

(4)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液8μL，注入高效液相色谱仪，测定。

实施例6 TLC法鉴别芍药苷

本实施例TLC法鉴别芍药苷包括以下步骤：

(1)取待测药物制剂0.5g，加乙醇10mL，振摇5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液；

(2)取芍药苷对照品，加乙醇制成每1mL含1mg溶液，作为对照品溶液；

(3)照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸40：5：10：0.2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，进行鉴别。

实施例7 HPLC法测定芍药苷的含量

本实施例HPLC法测定芍药苷的含量包括以下步骤：

(1)取待测药物制剂0.1g，精密称定，置50mL量瓶中，加稀乙醇35mL，超声处理30分钟，放冷，加稀乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；

(2)取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含60μg的溶液，作为对照品溶液；

(3)照高效液相色谱法试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.1％磷酸溶液14：86为流动相，检测波长为230nm，理论板数按芍药苷峰计算应不低于2000；

(4)分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定。

对比例1 化学键合相色谱法测定柠檬烯的含量

本实施例化学键合相色谱法测定柠檬烯的含量与实施例2化学键合相色谱法测定柠檬烯的含量的各步骤的操作参数均相同，区别仅在于：色谱条件：以ODS C₁₈(4.6mm×250mm，5μm)为色谱柱，以无水甲醇：水＝75:25(V：V)为流动相，时间：30min，柱温：25℃，检测波长：200nm，流速为1.0mL/min，进样量为10μL。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (10)

1.一种治疗气滞胃痛的药物制剂的检测方法，其特征在于，所述药物制剂的原料药组成为：柴胡、甘草、香附、延胡索、白芍、枳壳；

该检测方法包括如下对柠檬烯的含量测定步骤：

(1)取待测药物制剂2.0～3.0g，加30％～100％甲醇10～100mL，称重，超声或加热回流10～60min，放冷，再次称重，用30％～100％甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取滤液，作为供试品溶液；

(2)取柠檬烯对照品适量，加入30％～100％甲醇，制成每1mL甲醇含柠檬烯0.05～0.15μL的溶液，作为对照品溶液；

(3)色谱条件：以C18为色谱柱，以化学键合相为固定相，以乙腈：水体积比为60～80：40～20的混合溶液为流动相，时间：20～40min，柱温：10～30℃，检测波长：210nm，流速为0.5～1.5mL/min；

(4)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液6～10μL，注入高效液相色谱仪，测定。

2.根据权利要求1所述的治疗气滞胃痛的药物制剂的检测方法，其特征在于，所述对柠檬烯的含量测定步骤为：

(1)取待测药物制剂2.5g，加100％甲醇50mL，称重，超声30min，放冷，再次称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取滤液，作为供试品溶液；

(2)取柠檬烯对照品适量，加入100％甲醇，制成每1mL甲醇含柠檬烯0.1μL的溶液，作为对照品溶液；

(3)色谱条件：以C18为色谱柱，以非极性键合相为固定相，以乙腈：水＝70:30为流动相，时间：30min，柱温：10-30℃，检测波长：210nm，流速为1.0mL/min；

(4)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液8μL，注入高效液相色谱仪，测定。

3.根据权利要求1或2所述的治疗气滞胃痛的药物制剂的检测方法，其特征在于，以硅碳型键合相为固定相。

4.根据权利要求3所述的治疗气滞胃痛的药物制剂的检测方法，其特征在于，以三个硅羟基键与一个键合相C18键合的十八烷基硅烷键合硅胶为固定相。

5.根据权利要求1-4任一项所述的治疗气滞胃痛的药物制剂的检测方法，其特征在于，所述药物制剂的原料药组成为：

柴胡30～100重量份、甘草15～60重量份、香附35～120重量份、

延胡索35～120重量份、白芍40～150重量份、枳壳35～120重量份。

6.根据权利要求5所述的治疗气滞胃痛的药物制剂的检测方法，其特征在于，所述药物制剂的原料药组成为：

柴胡36重量份、甘草20重量份、香附40重量份、

延胡索40重量份、白芍48重量份、枳壳40重量份；或者

柴胡80重量份、甘草40重量份、香附90重量份、

延胡索90重量份、白芍120重量份、枳壳90重量份；或者

柴胡70重量份、甘草60重量份、香附120重量份、

延胡索80重量份、白芍150重量份、枳壳100重量份；或者

柴胡90重量份、甘草50重量份、香附45重量份、

延胡索100重量份、白芍120重量份、枳壳40重量份；或者

柴胡50重量份、甘草40重量份、香附100重量份、

延胡索40重量份、白芍70重量份、枳壳50重量份。

7.根据权利要求1-6任一项所述的治疗气滞胃痛的药物制剂的检测方法，其特征在于，所述药物制剂为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、蜜炼丸剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂或注射制剂。

8.根据权利要求7所述的治疗气滞胃痛的药物制剂的检测方法，其特征在于，所述药物制剂由以下方法制备：

(1)取选定重量份的枳壳和香附，提取，得提取液A和挥发油A；

(2)取选定重量份的柴胡、甘草、延胡索和白芍，加水提取2次，第一次提取0.5～4小时，第二次提取0.5～3小时，合并2次提取所得的提取液，得提取液B；

(3)合并上述提取液A和提取液B，浓缩至相对密度为1.10～1.30的稠膏，加入挥发油A，混匀，加入常规辅料、按照常规工艺制成临床可接受的剂型。

9.根据权利要求1-8任一项所述的治疗气滞胃痛的药物制剂的检测方法，其特征在于，所述药物制剂为无糖型颗粒剂。

10.根据权利要求9所述的治疗气滞胃痛的药物制剂的检测方法，其特征在于，所述无糖型颗粒剂由以下方法制备：

(1)取选定重量份的枳壳和香附，提取，得提取液A和挥发油A；所述挥发油A中加入β-环糊精和水，包合0.5～4小时，得包合物A；

(2)取选定重量份的柴胡、甘草、延胡索和白芍，加水提取2次，第一次提取0.5～4小时，第二次提取0.5～3小时，合并2次提取所得的提取液，得提取液B；

(3)合并上述提取液A和提取液B，浓缩至相对密度为1.10～1.30的稠膏，加入包合物A，混匀，加入常规辅料、按照常规工艺制成无糖型颗粒剂。