CN104892600B

CN104892600B - 7‑（3‑氨甲基‑4‑取代苄氧亚胺基‑1‑吡咯烷基）萘啶酮羧酸类化合物

Info

Publication number: CN104892600B
Application number: CN201510300446.0A
Authority: CN
Inventors: 刘明亮; 郭慧元; 黄举; 李林虎; 张芮; 王春兰; 沈伟艺; 陈仕洪
Original assignee: Institute of Medicinal Biotechnology of CAMS; Zhejiang Starry Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Institute of Medicinal Biotechnology of CAMS; Zhejiang Starry Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2015-06-04
Filing date: 2015-06-04
Publication date: 2017-02-01
Anticipated expiration: 2035-06-04
Also published as: CN104892600A

Abstract

本发明涉及式(I)所示7‑(3‑氨甲基‑4‑苄氧亚胺基‑1‑吡咯烷基)萘啶酮羧酸类化合物，其制备方法和医药用途以及以其为有效成分的抗结核药物组合物。更具体地讲，本发明涉及一类6‑氟‑1,4‑二氢‑4‑氧代‑1,8‑萘啶‑3‑羧酸类化合物，其1‑位取代基是(1R,2S)‑2‑氟环丙基；7‑位取代基是3‑氨甲基‑4‑取代苄氧亚胺基‑1‑吡咯烷基，其中，R代表氟、氯、溴、甲基、甲氧基、二甲氧基、次甲基二氧基。

Description

7-（3-氨甲基-4-取代苄氧亚胺基-1-吡咯烷基）萘啶酮羧酸类化合物

技术领域

本发明属于医药化学领域，涉及具有抗结核活性的6-氟-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸类化合物及其制备方法，以及含有它们的抗结核药物组合物；更具体地说，本发明涉及的萘啶酮羧酸类化合物的1-位取代基是(1R,2S)-2-氟环丙基；7-位取代基是3-氨甲基-4-取代苄氧亚胺基-1-吡咯烷基。

背景技术

结核病(TB)是由结核分枝杆菌(MTB)引起的严重危害人类健康的重大传染病之一。从20世纪80年代开始，耐药TB，尤其是耐多药TB(MDR-TB)的发病率不断上升以及TB与HIV/AIDS相结合使TB疫情再度上升，成为全球关注的重大公共卫生问题和社会问题。据统计，全球每年有800万新增TB患者，近300万人死于结核，近1/3人口携带潜伏态结核杆菌，具有潜在的发病危险。传统的抗TB药物，如链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇和吡嗪酰胺等联合用药可使85％以上的初治肺结核患者痊愈，但存在治疗周期长(大于6个月)且对MDR-TB无效的缺点，同时对潜伏态MTB的作用不强，因此研发抗TB新药，实现对TB的有效治疗与控制迫在眉睫(国外医药-抗生素分册，2009，30(1)：19-24)。

氟喹诺酮类抗菌药物普遍具有良好的药动学性质，不良反应较小，适合长期给药。其中某些品种具有良好的抗结核活性，它们与其他一、二线抗TB药物之间无交叉耐药性，且MTB对其耐药发生率相对较低。世界卫生组织(WHO)于1996年推出的耐药TB处理指南明确把氟喹诺酮类抗菌药，如环丙沙星、氧氟沙星和司帕沙星作为二线抗TB药物，与其他抗TB药物联合使用治疗MDR-TB及对不能耐受一线抗TB药物的患者使用(中国新药杂志，2010，19(3)：190-198)。其中，司帕沙星的抗TB活性较强，但因其存在明显的光毒性而被严格限制使用。随着环丙沙星和氧氟沙星的广泛使用，MTB对这两个品种的耐药性逐年增加，已引起人们的极大关注。

莫西沙星被认为是抗结核活性最强的新氟喹诺酮类抗菌药。Hu等研究发现，莫西沙星不仅对生长缓慢的MTB具有明确的杀菌活性，而且对耐受高浓度利福平的持留菌也表现出有效的杀灭活性(Antimicrob Agents Chemother,2003，47(2):653-657)。小鼠感染MTB模型的研究结果表明，用莫西沙星替代标准治疗方案中的异烟肼，其疗程可由6个月缩短至4个月(Am J RespirCrit Care Med,2006,174(1):94-101)。本品用于治疗TB的III期临床试验已接近完成，预期明年获得美国FDA批准上市。

新一代氟喹诺酮类抗菌药吉米沙星对革兰阴性菌和革兰阳性菌具有良好广谱活性，是美国FDA批准的首个用于治疗多重耐药性肺炎链球菌感染的氟喹诺酮类药物(国外医药-抗生素分册,2002,23(6):279-283)，但其抗MTB活性较差。

2013年，本专利发明人公开了具有以下通式[X]的氟喹诺酮类化合物及其抗革兰阳性菌的活性(CN201310428280.1)：

其中，与本专利有相关性的A代表N、CH、COCH₃、CCl；R代表甲基、乙基、苄基。但其苄基中的苯环上并无任何取代基。

为了克服上述现有技术所存在的缺陷，本发明人进行了广泛的研究，设计合成了7-位具有各种3-氨甲基-4-取代苄氧亚胺基-1-吡咯烷基取代基的1-[(1R,2S)-2-氟环丙基]萘啶酮羧酸类化合物，并测定了它们体外抗MTB活性。最终发现，其具有意想不到的强大抗MTB活性，与抗结核氟喹诺酮类药物(如环丙沙星，莫西沙星等)相比，尤其是对MDR-MTB具有更加优越的活性。

发明内容

本发明的目的是提供一类由通式(I)表示的萘啶酮羧酸类化合物及其药用盐，

其中：

R代表氟、氯、溴、甲基、甲氧基、二甲氧基、次甲基二氧基。

在本发明的通式(I)化合物的吡咯烷基部分中，由于含有肟基，因此通式(I)化合物可以E型或Z型或E型和Z型混合物的形式存在，本发明通式(I)化合物包括所有这些异构体和混合物。

本发明的式(I)化合物的在药学上可接受的非毒性的药用盐，包括与无机酸，如盐酸、硫酸形成的盐，与有机酸，如乙酸、三氟乙酸、柠檬酸、马来酸、草酸、琥珀酸、苯甲酸、酒石酸、富马酸、扁桃酸、抗坏血酸或苹果酸形成的盐，以及氨基酸，如丙氨酸、天冬氨酸、赖氨酸形成的盐或与磺酸，如甲磺酸、对甲苯磺酸形成的盐。

本发明的式(I)化合物也可以溶剂化物(如水合物)的形式存在，因此，这些溶剂化物(如水合物)也包括在本发明的化合物之内。

本发明具体包括以下化合物，以及它们的药用盐：

1-[(1R,2S)-2-氟环丙基]-6-氟-7-[3-氨甲基-4-(4-氟苄氧亚胺基)吡咯烷-1-基)]-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸

1-[(1R,2S)-2-氟环丙基]-6-氟-7-[3-氨甲基-4-(4-氯苄氧亚胺基)吡咯烷-1-基)]-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸

1-[(1R,2S)-2-氟环丙基]-6-氟-7-[3-氨甲基-4-(4-溴苄氧亚胺基)吡咯烷-1-基)]-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸

1-[(1R,2S)-2-氟环丙基]-6-氟-7-[3-氨甲基-4-(4-甲基苄氧亚胺基)吡咯烷-1-基)]-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸

1-[(1R,2S)-2-氟环丙基]-6-氟-7-[3-氨甲基-4-(4-甲氧基苄氧亚胺基)吡咯烷-1-基)]-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸

1-[(1R,2S)-2-氟环丙基]-6-氟-7-[3-氨甲基-4-(2,3-二甲氧基苄氧亚胺基)吡咯烷-1-基)]-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸

1-[(1R,2S)-2-氟环丙基]-6-氟-7-[3-氨甲基-4-(2,5-二甲氧基苄氧亚胺基)吡咯烷-1-基)]-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸

1-[(1R,2S)-2-氟环丙基]-6-氟-7-[3-氨甲基-4-(2,3-次甲基二氧基苄氧亚胺基)吡咯烷-1-基)]-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸

1-[(1R,2S)-2-氟环丙基]-6-氟-7-[3-氨甲基-4-(3,4-次甲基二氧基苄氧亚胺基)吡咯烷-1-基)]-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸

本发明还涉及式(I)化合物的制备方法，如反应路线1所示。

反应路线1：

在反应路线1中，R如前述的定义。

在非质子偶极溶剂中加入缚酸剂，在室温至100℃温度范围内反应，将式(Ⅱ)化合物和式(III)化合物加入到上述混合溶液中进行缩合反应0.5～10小时，得式(I)化合物，

本反应一般在缚酸剂存在下进行。在此情形下，为了提高较贵的起始物式(II)化合物的反应效率，使用过量的反应物式(III)化合物，例如对相对起始物为等摩尔到10倍摩尔量，优选等摩尔量到3倍摩尔量。在室温到100℃，有或无压力条件下搅拌反应式(II)化合物和式(III)化合物0.5～10小时，来制备式(I)化合物。当使用过量反应物式(III)化合物时，反应后留下的未反应的混合物可回收并重新用于反应。

用于本反应的非质子偶极溶剂选自N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、二甲基亚砜或乙腈；所述的缚酸剂选自三乙胺、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾。

在本发明中用作起始物的式(II)化合物为已知化合物,并按现有出版物中已知的方法可容易地制得，例如LiuH M等，Eur J Med Chem,2014,57:628。用作起始物的式(III)化合物也为已知化合物，并按现有出版物中已知的方法可容易地制得，例如Feng L S等，Eur J Med Chem,2012(55):125；郭慧元等，CN 201110193510.1。

本发明还提供含有如上所定义的式(I)化合物作为活性成分的抗结核组合物。

药物组合物含有的本发明化合物在组合物中的重量比为0.1～99.9％，药物可接受的载体在组合物中的重量比为0.1～99.9％。药物组合物以适合药用的制剂形式存在。

药用的制剂为片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、缓释片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、缓释胶囊剂、散剂。

本发明的药物组合物，作为制剂形式，每剂中含有的本发明化合物的有效量为0.1～1000mg，所述每剂指的是，每一制剂单位，如片剂的每片，胶囊的每粒，也可指每次服用剂量，如每次服用100mg。

本发明的药物组合物在制备成粉剂、片剂、可分散粉剂、胶囊、扁囊剂形式的固体药物制剂时，可使用固体载体。可使用的固体载体优选为选自稀释剂、调味剂、增溶剂、润滑剂、悬浮剂、粘合剂、膨胀剂等中的一种或多种物质，或可为包封物质。适宜的固体载体包括碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、蔗糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、可可脂等。由于它们易于给药，片剂，粉剂、扁囊剂和胶囊等代表最有利的口服固体制剂。

为了易于给药及剂量均一，将上述药物制剂配制成剂量单位形式是特别有利的。制剂的剂量单位形式指适于作为单一剂量的物理分离单位，每个单位含有产生所期望的治疗效果的计算好的预定量的活性成分。这种剂量单位形式可为包装形式，如片剂、胶囊或装在小管或小瓶中的粉剂。

虽然剂量单位形式中所含活性成分的量可以变化，但一般根据所选择活性成分的效力，调节在1～800mg范围内。

当本发明的式(I)活性化合物用作治疗结核分枝杆菌感染的药物时，优选在第一阶段给以6～14mg/kg体重的量。但给药剂量可随着病人的需要、欲治疗的感染的严重性、所选化合物等而变化。

本领域技术人员可按常规方法确定适于某种情况的优选剂量。一般，开始治疗的量低于活性成分的最佳剂量，然后逐渐增加给药剂量，直到达到最佳治疗效果。为方便起见，总的日剂量可分为几部分，分数次给药。

本发明还提供式(I)化合物或其药用盐在制备抗结核药物中的应用。

本发明所述式(I)化合物或其药用盐在制备抗MDR-MTB药物中的应用。

含有式(I)化合物或其药用盐的药物组合物在制备抗结核药物中的应用。

含有式(I)化合物或其药用盐的药物组合物在制备抗MDR-MTB药物中的应用。

如上所述，本发明化合物对结核分枝杆菌的活性远高于同类抗菌药物以及一线抗结核药异烟肼和利福平。例如，实施例1、2、4、6、8、9化合物对结核分枝杆菌标准株MTBH37Rv ATCC 27294的体外活性均优于一线抗结核药物利福平和异烟肼、喹诺酮抗结核药环丙沙星和莫西沙星、结构相似物吉米沙星及先导化合物IMB-1402,尤其是对利福平和异烟肼均耐药的临床分离株MDR-MTB 20161的体外活性显著优于环丙沙星、莫西沙星、吉米沙星及IMB-1402。

具体实施方式

在以下实施例中，将更加具体地解释本发明。但应理解，下列实施例旨在说明本发明而不对本发明的范围构成任何限制。

实施例11-[(1R,2S)-2-氟环丙基]-6-氟-7-[3-氨甲基-4-(4-氟苄氧亚胺基)-吡咯烷-1-基]-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸

1-[(1R,2S)-2-氟环丙基]-7-氯-6-氟-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸(180mg,0.6mmol)、3-氨甲基-4-(氯苄氧亚胺基)-吡咯烷二盐酸盐(345mg,1mmol)、三乙胺(0.42ml)和无水乙腈(30ml)的混合物于室温下搅拌反应10h。减压浓缩，想残余物中加入5％NaOH(5mL)，搅拌0.5h，抽滤，滤液用20％的醋酸调pH至6.5～7.0，用CHCl₃萃取，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，残余物用乙醚-二氯甲烷打浆，抽滤的淡黄色黄色固体230mg，收率(44.2％).(c 0.040,CH₃OH),¹H NMR(600MHz,dmso)δ8.67(s,1H),8.01(d,J＝12.6Hz,1H),7.53–7.35(m,2H),7.24–7.01(m,2H),5.31–4.99(m,3H),4.61(s,2H),4.21–4.08(m,1H),3.92-3.87(m,1H),3.83–3.67(m,1H),3.02(s,1H),2.81-2.71(m,2H),1.90–1.79(m,1H),1.65-1.58(m,1H).MS-ESI(m/z):502.39(M+H)⁺.HRMS-ESI(m/z):Calcd.for C₁₈H₂₀O₄N₅F₂(M+H)⁺:502.16967；Found：502.16971.

将上述淡黄色固体(100mg，0.20mmol)溶于无水乙醇，搅拌下通入干燥盐酸气30min，然后同温搅拌30min。抽滤，得淡黄色固体80mg(收率74.8％)。

C₂₄H₂₂F₃N₅O₄·HCl	C	H	N	F	Cl
						计算值	53.59	4.31	13.02	10.60	6.59

实测值

53.58

4.32

13.04

10.58

6.60

类似地也可以制备下述的盐，例如：

1-[(1R,2S)-2-氟环丙基]-6-氟-7-[3-氨甲基-4-(4-氟苄氧亚胺基)-吡咯烷-1-基]-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸苹果酸盐

将上述淡黄色固体溶于乙醇，搅拌下加入等量L-苹果酸，减压蒸去乙醇，加入适量乙腈，搅拌加热10min，冷却至室温，抽滤，得淡黄色固体。

实施例21-[(1R,2S)-2-氟环丙基]-6-氟-7-[3-氨甲基-4-(4-氯苄氧亚胺基)-吡咯烷-1-基]-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸

同实施例1化合物的制备方法，1-[(1R,2S)-2-氟环丙基]-7-氯-6-氟-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸与3-氨甲基-4-(4-氯苄氧亚胺基)-吡咯烷二盐酸盐发生缩合反应，然后碱性水解,得浅白色固体(53.9％).(c 0.049,CH₃OH),¹H NMR(600MHz,dmso)δ8.67(s,1H),8.02(d,J＝12.6Hz,1H),7.58–7.23(m,4H),5.25–4.99(m,3H),4.63(s,2H),4.28–4.08(m,1H),3.92-3.89(m,1H),3.75-3.71(m,1H),3.02(s,1H),2.76-2.47(m,2H),1.91–1.79(m,1H),1.65-1.58(m,1H).MS-ESI(m/z):518.20(M+H)⁺.HRMS-ESI(m/z):Calcd.for C₁₈H₂₀O₄N₅F₂(M+H)⁺:518.14011；Found：518.14048.

实施例31-[(1R,2S)-2-氟环丙基]-6-氟-7-[3-氨甲基-4-(4-溴苄氧亚胺基)-吡咯烷-1-基]-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸

同实施例1化合物的制备方法，1-[(1R,2S)-2-氟环丙基]-7-氯-6-氟-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸与3-氨甲基-4-(4-溴苄氧亚胺基)-吡咯烷二盐酸盐发生缩合反应，然后碱性水解,得浅白色固体收率(33.7％).(c 0.023,CH₃OH), ¹H NMR(600MHz,dmso)δ8.67(s,1H),8.01(d,J＝12.6Hz,1H),7.60–7.50(m,2H),7.33-7.29(m,2H),5.26–5.01(m,3H),4.63(s,2H),4.29–4.05(m,1H),4.03–3.86(m,1H),3.75-3.71(dt,m,1H),3.01(s,1H),2.85–2.67(m,2H),1.93–1.79(m,1H),1.71– 1.56(m,1H).MS-ESI(m/z):562.12(M+H)⁺.HRMS-ESI(m/z):Calcd.for C₁₈H₂₀O₄N₅F₂(M+H)⁺:562.09278；Found：562.09326.

实施例41-[(1R,2S)-2-氟环丙基]-6-氟-7-[3-氨甲基-4-(4-甲基苄氧亚胺基)-吡咯烷-1-基]-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸

同实施例1化合物的制备方法，1-[(1R,2S)-2-氟环丙基]-7-氯-6-氟-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸与3-氨甲基-4-(4-甲基苄氧亚胺基)-吡咯烷二盐酸盐发生缩合反应，然后碱性水解,得浅白色固体(32.4％).(c 0.046,CH₃OH)¹H NMR(600MHz,dmso)δ8.69(s,1H),8.02(d,J＝12.5Hz,1H),7.23(dd,J＝21.3,7.2Hz,2H),7.14(dd,J＝21.3,7.2Hz,2H),5.34–4.97(m,3H),4.60(s,2H),4.30–4.10(m,1H),3.92-3.87(m,1H),3.79–3.66(m,1H),3.11(s,1H),2.98–2.73(m,2H),2.28(s,3H),1.95–1.79(m,1H),1.65-1.58(m,1H).MS-ESI(m/z):498.30(M+H)⁺.HRMS-ESI(m/z):Calcd.for C₁₈H₂₀O₄N₅F₂(M+H)⁺:498.19474；Found：498.19484.

实施例51-[(1R,2S)-2-氟环丙基]-6-氟-7-[3-氨甲基-4-(4-甲氧基苄氧亚胺基)-吡咯烷-1-基]-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸

同实施例1化合物的制备方法，1-[(1R,2S)-2-氟环丙基]-7-氯-6-氟-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸与3-氨甲基-4-(4-甲氧基苄氧亚胺基)-吡咯烷二盐酸盐发生缩合反应，然后碱性水解,得浅白色固体(47.5％).(c 0.049,CH₃OH) ¹H NMR(600MHz,dmso)δ8.68(s,1H),8.01(d,J＝12.6Hz,1H),7.29(dd,J＝11.9,9.1Hz,2H),6.90(dd,J＝11.9,9.1Hz,2H),5.27–4.98(m,3H),4.58(s,2H),4.26–4.10(m,1H),3.92-3.85(m,1H),3.81–3.66(m,4H),3.03(s,1H),2.91–2.69(m,2H),1.88-1.76(m,1H),1.73–1.55(m,1H).

MS-ESI(m/z):514.25(M+H)⁺.HRMS-ESI(m/z):Calcd.for C₁₈H₂₀O₄N₅F₂(M+H)⁺:514.18965；Found：514.18967.

实施例61-[(1R,2S)-2-氟环丙基]-6-氟-7-[3-氨甲基-4-(2,3-二甲氧苄氧亚胺基)-吡咯烷-1-基]-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸

同实施例1化合物的制备方法，1-[(1R,2S)-2-氟环丙基]-7-氯-6-氟-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸与3-氨甲基-4-(2,3-二甲氧苄氧亚胺基)-吡咯烷二盐酸盐发生缩合反应，然后碱性水解,得浅白色固体(51.4％).(c 0.016,CH₃OH)¹H NMR(600MHz,dmso)δ8.69(s,1H),8.02(d,J＝12.6Hz,1H),7.13–6.90(m,3H),5.24–5.03(m,3H),4.60(s,2H),4.26–4.12(m,1H),3.91-3.86(m,1H),3.79(s,3H),3.76–3.69(m,4H),3.03(s,1H),2.89–2.67(m,2H),1.93–1.77(m,1H),1.64-1.57(m,1H).MS-ESI(m/z):544.68(M+H)⁺.HRMS-ESI(m/z):Calcd.for C₁₈H₂₀O₄N₅F₂(M+H)⁺:544.20022；Found：544.20023.

实施例71-[(1R,2S)-2-氟环丙基]-6-氟-7-[3-氨甲基-4-(2,5-二甲氧苄氧亚胺基)-吡咯烷-1-基]-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸

同实施例1化合物的制备方法，1-[(1R,2S)-2-氟环丙基]-7-氯-6-氟-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸与3-氨甲基-4-(2,5-二甲氧苄氧亚胺基)-吡咯烷二盐酸盐发生缩合反应，然后碱性水解,得浅白色固体(47.6％).(c 0.011,CH₃OH)¹H NMR(500MHz,DMSO)δ8.72(s,1H),8.08(d,J＝12.5Hz,1H),7.04–6.81(m,3H),5.18-5.05(s,3H),4.66(s,2H),4.53–4.32(m,1H),3.99–3.82(m,2H),3.75-3.72(m,4H),3.70(s,3H),3.446-3.43(m,1H),3.24–3.04(m,2H),1.93-1.87(m,1H),1.65-1.62(m,1H).MS-ESI(m/z):544.40(M+H)⁺.HRMS-ESI(m/z):Calcd.for C₁₈H₂₀O₄N₅F₂(M+H)⁺:544.20022；Found：544.20036.

实施例81-[(1R,2S)-2-氟环丙基]-6-氟-7-[3-氨甲基-4-(2,3-次甲基二氧基苄氧亚胺基)-吡咯烷-1-基]-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸

同实施例1化合物的制备方法，1-[(1R,2S)-2-氟环丙基]-7-氯-6-氟-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸与3-氨甲基-4-(2,3-次甲基二氧基苄氧亚胺基)-吡咯烷二盐酸盐发生缩合反应，然后碱性水解,得浅白色固体(47.6％).(c 0.020,CH₃OH)¹H NMR(600MHz,dmso)δ8.68(s,1H),8.01(d,J＝12.5Hz,1H),6.90–6.70(m,3H),5.98(s,2H),5.13(d,J＝64.6Hz,1H),5.03–4.96(m,2H),4.59(s,2H),4.31–4.07(m,1H),3.92-3.87(m,1H),3.82–3.68(m,1H),3.03(s,1H),2.83-2.72(m,2H), 1.85-1.82(m,1H),1.65-1.58(m,1H).MS-ESI(m/z):528.37(M+H)⁺.HRMS-ESI(m/z):Calcd.for C₁₈H₂₀O₄N₅F₂(M+H)⁺:528.16892；Found：528.16911.

实施例91-[(1R,2S)-2-氟环丙基]-6-氟-7-[3-氨甲基-4-(3,4-次甲基二氧基苄氧亚胺基)-吡咯烷-1-基]-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸

同实施例1化合物的制备方法，1-[(1R,2S)-2-氟环丙基]-7-氯-6-氟-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸与3-氨甲基-4-(3,4-次甲基二氧基苄氧亚胺基)-吡咯烷二盐酸盐发生缩合反应，然后碱性水解,得浅白色固体(40.5％).(c 0.020,CH₃OH)¹H NMR(600MHz,dmso)δ8.67(s,1H),8.03(d,J＝12.5Hz,1H),6.78–6.80(m,3H),5.97(s,2H),5.17(d,J＝64.8Hz,1H),5.15–4.98(m,2H),4.55(s,2H),4.35–4.00(m,1H),3.80-3.92(m,1H),3.70–3.50(m,1H),3.06(s,1H),2.87-2.76(m,2H),1.85-1.83(m,1H),1.65-1.58(m,1H).MS-ESI(m/z):528.37(M+H)⁺.HRMS-ESI(m/z):Calcd.for C₁₈H₂₀O₄N₅F₂(M+H)⁺:528.16892；Found：528.16870.

实施例10包衣片

片芯处方:

取上述成分混合均匀，制粒后过筛整粒，干燥、压片制成100片片芯。

包衣液处方:

欧巴代(Opadry)5g，80％乙醇适量包衣。

实施例11胶囊

处方：

制备方法：

取处方量原辅料，分别过筛，加入5％聚乙烯吡咯烷酮醇液和吐温80制软材，用20目筛制粒，在室温下晾干，加入十二烷基硫酸钠，混合均匀，按0.27g/S装入0号胃溶胶囊，取样化验，溶出限度为Q＝80％，含量应为标示量的90-110％。

实施例12注射剂的制备

配方

实施例1盐类化合物2g

山梨糖醇50g

氢氧化钠适量

注射用蒸馏水 1000mL

制备方法：取2克实施例1盐类化合物和山梨糖醇50克，加入适量注射用蒸馏水溶解，再加入注射用蒸馏水至1000毫升，混合均匀后，调溶液pH至4.0。该溶液用膜过滤器(0.22μm)过滤，即得注射剂。

实施例13冷冻干燥制剂的制备

配方

实施例9化合物1g

甘露糖醇5g

氢氧化钠适量

注射用蒸馏水100mL

制备方法：取1克实施例9化合物和甘露糖醇5克，加入适量注射用蒸馏水溶解，在加入注射用蒸馏水至100毫升，混合均匀后，调溶液pH至5.0。该溶液用膜过滤器(0.22μm)过滤，使之冷冻干燥，即得注射用粉末制剂。

生物实施例1

体外抗分枝杆菌活性试验

本发明化合物的抗结核活性是通过测定其对结核分枝杆菌标准株MTB H37RvATCC 27294和临床分离株MDR-MTB 20161(对利福平和异烟肼耐药)的最小抑菌浓度(MIC,μg/mL)来表示的。在该试验中，以同类咪唑并[1,2-a]吡啶候选化合物A以及一线抗结核药异烟肼和利福平作对照药。最小抑菌浓度按如下方法测定：无菌48孔板(结核菌快速药敏专用微量培养板)，按药敏试验设计要求，各孔分别加入用2倍浓度培养基(改良米氏7H9液体培养基)稀释的药物。各化合物制成适当浓度的的初溶液，用培养基(2×)稀释成各所用化合物的二倍浓度，每种化合物各10个梯度，加入48孔板每孔100μL，试验药的终浓度分别为8、4、2……0.015μg/mL。标准株H37Rv ATCC 27294和临床分离株MDR-MTB 20161，每孔接种100μl，每孔菌量为4×10^-3mg。每板均设2个不含抗菌药的生长阳性对照孔和两个以蒸馏水替代培养基的生长阴性对照孔，将48孔板加盖后周围用透明胶带密封，置于湿盒37℃孵育。第3天后观察阳性生长对照孔和阴性生长对照孔，观察到两者有明确差别时，对各个试验孔细菌生长的数量和形态进行观察，判定抑制或耐药并记录结果，第7天后再观察记录一次进行确认。无菌生长的对照孔中所含药物最小的浓度即为最小抑菌浓度(MIC)。测定结果列于表1。

表1 部分实施例化合物对2株MTB的体外活性

MTB-1:MTB H37Rv ATCC 27294；MTB-2:MDR-MTB 20161(对利福平和异烟肼耐药)

上述表中仅列举本发明部分化合物的体外活性实验，本发明其他化合物结构相似，也具有和上述化合物相同或者相近的体外活性效果，在此就不一一列举。

由此可见，本发明化合物对MTB H37Rv ATCC 27294的体外活性均优于一线抗结核药物利福平和异烟肼、喹诺酮抗结核药环丙沙星和莫西沙星、结构相似物吉米沙星及先导化合物IMB-1402,对MDR-MTB 20161(对利福平和异烟肼耐药)的活性显著优于上述所有对照药。

生物实施例2

口服急性毒性试验

为测定本发明化合物的口服急性毒性，对实施例1化合物和实施例8化合物进行了急性毒性实验，将含不同浓度的这两个化合物的溶液口服给于雄性小鼠，剂量为0.1ml/10g体重，7日后分别记数死鼠量，用Bliss程序计算各化合物的半数致死量(LD₅₀)。结果列于表2中。

表2 实施例1和8化合物的小鼠口服急性毒性

化合物	LD₅₀(mg/kg)
		实施例1化合物	>2000
实施例8化合物	>2000

实验结果表明，这些化合物毒性很低，非常适合药用。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims

1.式(I)所示化合物及其药用盐:

其中：

2.根据权利要求1所述的式(I)所示化合物及其药用盐，其特征在于，其化合物为：

1-[(1R,2S)-2-氟环丙基]-6-氟-7-[3-氨甲基-4-(4-氟苄氧亚胺基)吡咯烷-1-基)]-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸；

1-[(1R,2S)-2-氟环丙基]-6-氟-7-[3-氨甲基-4-(4-氯苄氧亚胺基)吡咯烷-1-基)]-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸；

1-[(1R,2S)-2-氟环丙基]-6-氟-7-[3-氨甲基-4-(4-溴苄氧亚胺基)吡咯烷-1-基)]-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸；

1-[(1R,2S)-2-氟环丙基]-6-氟-7-[3-氨甲基-4-(4-甲基苄氧亚胺基)吡咯烷-1-基)]-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸；

1-[(1R,2S)-2-氟环丙基]-6-氟-7-[3-氨甲基-4-(4-甲氧基苄氧亚胺基)吡咯烷-1-基)]-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸；

1-[(1R,2S)-2-氟环丙基]-6-氟-7-[3-氨甲基-4-(2,3-二甲氧基苄氧亚胺基)吡咯烷-1-基)]-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸；

1-[(1R,2S)-2-氟环丙基]-6-氟-7-[3-氨甲基-4-(2,5-二甲氧基苄氧亚胺基)吡咯烷-1-基)]-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸；

1-[(1R,2S)-2-氟环丙基]-6-氟-7-[3-氨甲基-4-(2,3-次甲基二氧基苄氧亚胺基)吡咯烷-1-基)]-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸；

1-[(1R,2S)-2-氟环丙基]-6-氟-7-[3-氨甲基-4-(3,4-次甲基二氧基苄氧亚胺基)吡咯烷-1-基)]-1,4-二氢-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸。

3.根据权利要求1所述的式(I)所示化合物及其药用盐，其特征在于，式(I)化合物的药用盐，包括与无机酸：盐酸、硫酸形成的盐，与有机酸：乙酸、三氟乙酸、柠檬酸、马来酸、草酸、琥珀酸、苯甲酸、酒石酸、富马酸、扁桃酸、抗坏血酸或苹果酸形成的盐，以及氨基酸：丙氨酸、天冬氨酸、赖氨酸形成的盐或与磺酸：甲磺酸、对甲苯磺酸形成的盐。

4.一种制备权利要求1或2所述式(I)化合物及其药用盐的方法，其特征在于，包括如下步骤：

在非质子偶极溶剂中加入缚酸剂，在室温至100℃温度范围内反应，式(Ⅱ)化合物和式(III)化合物进行缩合反应0.5～10小时，得式(I)化合物，

其中：

R的定义同权利要求1。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述的非质子偶极溶剂选自N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、二甲基亚砜或乙腈；所述的缚酸剂选自三乙胺、碳酸钠、碳酸氢钠或碳酸钾。

6.含有权利要求1-3任意一项所述的化合物或其药用盐的药物组合物。

7.根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，该组合物选自片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂或散剂。

8.权利要求1-3任意一项所述的化合物或其药用盐在制备抗结核药物中的应用。