CN104887787B - 一种胆木注射用溶液的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明是提供一种胆木注射用溶液的制备方法，其主要制备方法为：将胆木粉碎后水煮提取得到流浸膏，将浸膏用醇充分提取，将醇提液浓缩稀释过滤后，调至较强酸性沉降两次、明胶处理一次，过滤后再加活性炭于室温搅拌后滤过，调节溶液的pH值至偏碱性，加注射用水稀释到浓度要求的范围即得。此方法不仅大大提高了药效成分的提取收率，且产品质量能保持稳定，还明显缩短了生产周期，有效降低了生产成本。

Description

一种胆木注射用溶液的制备方法

技术领域

本发明属于植物提取物领域，具体涉及一种胆木注射用溶液的制备方法。

背景技术

急性扁桃体炎、急性咽喉炎、急性结膜炎、上呼吸道感染、肺炎、支气管炎等呼吸系统疾病为临床的常见病、多发病。引起上呼吸道感染的病原体多数为病毒，目前对此还没有特效药，一般的抗生素对上呼吸道感染无明显的治疗作用。如果过多地或不必要地使用抗生素不仅会对人体产生一些毒副作用，更容易在体内发生“菌群失调”。而中医中药在这方面具有明显的优势。因此，自主的开发中药具有非常重要的意义。

胆木注射液为茜草科植物胆木的茎、枝、树皮提取而成。胆木中含有的多种黄酮有抑制细菌蛋白质合成、阻滞叶酸代谢的作用，同时对病毒蛋白质合成有抑制作用，具有广谱抗菌、抗病毒作用，由于其抗菌、抗病毒有效成分复杂，细菌、病毒不易产生耐药性。

中国专利申请号：CN200510087735.3的胆木注射用溶液的制备方法为:取胆木3000g，切片，粉碎成小块，加水煎煮三次，依次加水6、5、4倍量，煎煮2、1.5、1小时，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.18～1.19(50～60℃)，加4倍量的熟石膏粉混匀后，70～80℃减压干燥，粉碎成50目粉，依次加乙醇3，2，2倍量，使含醇量达85％，搅拌提取三次，冷藏，静置24小时，取上清液，回收乙醇，加注射用水至相对密度1.02～1.03(50～60℃)，放冷至室温，用10％盐酸溶液调节pH值至1～2.0～3.0，冷藏，静置24小时，滤过，滤液用20％氢氧化钠溶液调节pH值至7.0～7.2，冷藏，静置12小时，滤过，测定含量(含胆木提取物以无水芦丁(C₂₇H₃₀O₁₆)计应不低于3.6mg/ml)即得。

该方法需要把熟石膏加入到浸膏中混匀、加热真空干燥，粉碎后用醇提取， 浓缩后再酸处理，缺点是在浸膏中加入熟石膏后加热干燥后粉碎操作过程中，操作难度大、动用设备多，能耗大、耗费的工时长，更由于浸膏的加热干燥和粉碎容易造成浸膏中原有化学成分的变化和损失，干燥时温度的不均和局部高温及粉碎时的局部高温易造成稳定性较差的生物碱、酚酸类等有机成分的破坏，粉碎时产生的粉尘造成提取物的损失及污染，导致最终产品胆木注射用溶液的效价低，质量差，生产成本高；另外该法因在水提取物中加入大量石膏给后续的醇提操作增加了额外的工作量和物料消耗，已经不适合生产要求，被淘汰。

中国专利申请号：200610097689.X提出的胆木提取物的制备方法为：取茜草科乌檀属胆木片状心材、枝、干、皮或者叶，干燥，粉碎，用水或者碱性水溶液提取，提取液冷藏过夜，滤过，以酸性溶液调pH至中性，过滤，滤液浓缩，加入2～4倍乙醇进行醇沉，混匀，静置冷藏，过滤，回收乙醇，浓缩得浓缩液A；浓缩液A加入3～5被乙醇再沉淀，混匀，静置冷藏，过滤，回收乙醇，浓缩，得浓缩液B；取浓缩液A或浓缩液B，加入1～5倍量pH为8～3的水溶液，混匀，冷藏，静置，过滤，弃去滤渣，即得粗提取物溶液。

该对比文件制备胆木粗提取液选材过宽，能用于胆木注射用溶液的材料应该是胆木的茎部，用胆木的枝和叶(或含枝叶超过1/5时)制备胆木注射用溶液，难度很大，因为其中的胶状物质偏多，而活性成分偏少，难以达到注射液的稳定性质量要求；而且此方法中的醇提和后续的处理过程中的控制参数范围太宽不明确，按此制备的胆木注射用溶液的质量不稳定，煮沸放置后产生沉淀物，不符合质量要求。该对比文件中把上述的粗提液上大孔树脂吸附，再收集40～70％乙醇洗脱部分，得到的提取物中只含有的化学成分类型主要是与异长春花苷内酰胺结构类似的生物碱或其糖苷，而黄酮类、酚酸类有机活性成分因结构与其差别较大不能得到收集。该对比文件中将上述提取液再经有机溶剂萃取后上硅胶柱后结晶纯化得到的提取物主要含有异长春花苷内酰胺(含量90％以上)，这一提取物中其它有机活性成分的含量会更少。

针对上述工艺存在的问题，无论是从医疗所需，还是市场、成本考虑，研发一种高产、高效的胆木注射用溶液制备方法显得极为重要。

发明内容

本发明的目的是提供一种高产、高效的胆木注射用溶液的制备方法，克服现有技术的上述弊病，提高产品的质量和疗效，更好地满足医疗的需要。

为了达到以上目的，本发明采用的技术方案为：一种胆木注射用溶液的制备方法，包括如下步骤：

1)浸膏制备：

a、取胆木粉碎，加胆木粉质量的8-12倍水，煎煮1-2小时，过滤，收集滤渣和煎液；

b、向a步骤中滤渣加入所述滤渣质量的6-10倍水，煎煮1-1.5小时，过滤，收集滤渣和煎液；

c、向b步骤中滤渣加入其质量的6-8倍水，煎煮0.8-1小时，过滤，收集煎液；

d、合并步骤a-c收集的煎液，在温度为50℃-60℃条件下过滤，浓缩至相对密度为1.18-1.19，冷却至20℃-25℃，过滤即得浸膏；

2)醇提操作：

a、在醇提罐中注入乙醇溶液，搅拌，将步骤1)所得浸膏加入到乙醇溶液中，控制乙醇浓度为80％-85％，继续搅拌18-25分钟，静置分层，提取上层乙醇溶液；

b、向醇提罐中加入40℃～100℃水，搅拌溶解后注入乙醇溶液，继续搅拌，控制乙醇浓度为80％-85％，再继续搅拌18-25分钟，静置分层，提取上层乙醇溶液；

c、重复b步骤2～3次；

d、向醇提罐中加入乙醇溶液，搅拌溶解，经离心处理后，回收上层乙醇溶 液；

e、合并步骤a-d中的上层乙醇溶液；

3)醇液浓缩：

将步骤2)e步骤中的上层乙醇溶液在温度为60℃-70℃、压力为-0.07-0.09mpa的条件下浓缩，再加入注射用纯化水，继续浓缩至无乙醇蒸出为止，冷却，过滤，得到醇浓缩水稀释液；

4)醇提液的酸和明胶处理：

a、将步骤3)所得的醇浓缩水稀释液加入20％盐酸溶液，搅拌，调节pH值为1-2，在6℃-10℃冰柜中放置4-12小时，静置分层，过滤得上清液Ⅰ；

b、用20％氢氧化钠溶液调节该上清液ⅠpH值至4-6，加1％-2％明胶溶液，搅拌，在6℃-10℃冰柜中放置4-12小时，静置分层，过滤的上清液Ⅱ；

c、向上清液Ⅱ中加乙醇溶液，搅拌，使含醇量达到80％-85％，放置2-4小时，静置分层，过滤得上清液Ⅲ；

d、上清液Ⅲ在60℃-70℃、-0.07mpa-0.09mpa的条件下，回收乙醇至无醇味，滤纸过滤，得明胶处理液，调节pH值至1-2，在6℃-10℃冰柜中放置4-12小时，静置分层，过滤得上清液Ⅳ，

e、将上清液Ⅳ稀释1-2倍，搅拌，调pH值至7.2-7.6，过滤得滤液；

5)活性炭处理：

将活性炭粉加入滤液中，搅拌20-30分钟，过滤，即得胆木注射用溶液。

优选的，所述步骤1)中a步骤中加胆木粉质量为12倍的水、煎煮2小时；b步骤所加滤渣质量为10倍的水，煎煮1.5小时；c步骤所加滤渣质量为8倍的水，煎煮1小时。

优选的，所述步骤2)中a步骤、b步骤中，控制乙醇浓度为85％，搅拌25分钟。

优选的，所述步骤4)中，a步骤、e步骤中调节pH值为2，b步骤中pH 值调节为5，加入2％明胶溶液，f步骤中调节pH值为7.6。

优选的，所述离心处理为在转速为3000r/min的防爆离心机离心10-20分钟。

由于上述技术方案，本发明具有以下有益效果：

1、本发明确定了最经济和最优化的胆木初提取物制备工艺：用水做溶剂水煮提取，提取次数3次，料液比分别为1:12、1:10和1:8，水煮提取时间分别为，2小时、1.5小时和1小时，只有在本发明给出的水量和水煮次数才能达到最优的综合效果。

2、本发明采用了直接用醇提取胆木的流浸膏的方法和工艺，方便了操作，提高了药效成分的提取收率，减少了溶剂乙醇的消耗，省去了采用在流浸膏中加入石膏拌匀后干燥、粉碎的工艺步骤，避免了这两步工序中的局部高温对浸膏中的稳定性差的生物碱、酚酸类和黄酮等有机物质的破坏和损失，减少了人工。

3、本发明增加了酸处理后明胶处理的工序，将胆木提取物的醇浓缩水稀释液调至酸性时能将大部分的酸性或碱性的鞣质或树脂沉淀；但少量水溶性相对较好的中性鞣质难以沉淀，而明胶与鞣质易形成不溶性的鞣酸蛋白，在冷藏温度下能沉淀下来，从而更完全的去除了溶液中的少量鞣质和树脂杂质，保证了制剂安瓿在高温灭菌后不发生沉淀的问题，保证了质量稳定。

4、本发明采用胆木药材的茎部和根部，严格去除了胆木提取物溶液中含有的树脂和鞣质成分，保证了胆木注射用溶液的质量。

综上所述，本发明方法获得的胆木注射用溶液的量与现有技术有明显的提高，且大大缩短了生产周期，生产成本有明显的降低，产品质量能保持稳定。

具体实施方式

下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的所有其 他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1：

一种胆木注射用溶液的制备方法，包括如下步骤：

1)浸膏制备：

a、取3000g胆木洗净晾干后粉碎，加胆木粉质量的12倍水，煎煮2小时，过滤，收集煎液和滤渣；

b、向a步骤中滤渣加入其质量的10倍水，煎煮1.5小时，过滤，收集煎液和滤渣；

c、向b步骤中滤渣加入其质量的8倍水，煎煮1小时，过滤，收集煎液；

d、合并步骤a-c收集的煎液，在温度为60℃条件下过滤，浓缩至相对密度为1.19的浸膏，200目不锈钢滤网过滤得浸膏460g。

2)醇提操作：

a、先在醇提罐中注入2/3体积的95％乙醇溶液，开动搅拌，缓慢将步骤1)所得浸膏加入到乙醇溶液中，并控制乙醇浓度为85％，待浸膏均匀充分的与乙醇接触，浸膏中不溶于醇的物质变成细小均匀的团粒，再继续搅拌25分钟，停止搅拌，静置分层，提取上层乙醇溶液；

b、向提取罐中的沉淀物加入适量100℃水，搅拌均匀，充分溶解，向溶解后所得溶液内慢慢注入95％乙醇溶液，搅拌均匀，控制乙醇浓度为85％，再继续搅拌25分钟，静置分层，提取上层乙醇溶液；

c、再重复b步骤3次；

d、最后向罐底的沉淀物中加入适量乙醇溶液，搅拌均匀，充分溶解，溶解后所得溶液在转速为3000r/min的不锈钢防爆离心机离心20min，回收离心后乙醇溶液；

e、合并步骤a-d中的上层乙醇溶液；

3)醇液浓缩：

将步骤2)e步骤中的上层乙醇溶液在70℃、0.09mpa条件下浓缩到原体积1/4，再加入注射用纯化水，继续浓缩至无乙醇蒸出为止，200目滤网过滤得到醇浓缩水稀释液；

4)醇提液的酸和明胶处理：

a、将步骤3)所得的醇浓缩水稀释液加入20％盐酸溶液，搅拌均匀，调节pH值为2，7℃冰柜中放置12小时，静置分层，500目滤布袋滤出上清液Ⅰ；

b、用20％氢氧化钠溶液调节该上清液ⅠpH值至5，加2％明胶溶液，搅拌均匀，7℃冰柜中放置过夜后，静置分层，经滤纸过滤出上清液Ⅱ；

c、向上清液Ⅱ中加95％乙醇溶液使含醇量达到85％，放置4小时静置分层，经滤纸过滤出上清液Ⅲ；

d、上清液Ⅲ于70℃，0.09mpa下回收乙醇至无醇味，经滤纸过滤，得明胶处理液；

e、均匀搅拌下再用20％盐酸溶液调节明胶处理液的pH值至2，7℃冰柜中放置12小时，用经滤纸过滤出上清液Ⅳ；

f、上清液Ⅳ用纯化水稀释2倍后，均匀搅拌下用10％氢氧化钠溶液调节稀释液的pH值至7.6，过滤得滤液；

5)活性炭处理：

将活性炭粉加入滤液的总质量0.2％的针剂用活性炭粉加入滤液Ⅰ中，室温下均匀搅拌30分钟后，用3层滤纸过滤，再经0.22μm的滤膜过滤，即得质量稳定的胆木注射用溶液446g。

实施例2：

一种胆木注射用溶液的制备方法，包括如下步骤：

1)浸膏制备：

a、取3000g胆木洗净晾干后粉碎，加胆木粉质量的8倍水，煎煮1小时，过滤，收集煎液和滤渣；

b、向a步骤中滤渣加入其质量的6倍水，煎煮1小时，过滤，收集煎液和滤渣；

c、向b步骤中滤渣加入其质量的6倍水，煎煮0.8小时，过滤，收集煎液；

d、合并步骤a-c收集的煎液，在温度为50℃条件下过滤，浓缩至相对密度为1.18的浸膏，经200目不锈钢滤网过滤即得浸膏443g。

2)醇提操作：

a、先在醇提罐中注入2/3体积的95％乙醇溶液，开动搅拌，缓慢将步骤1)所得浸膏加入到乙醇溶液中，并控制乙醇浓度为80％，待浸膏均匀充分的与乙醇接触，浸膏中不溶于醇的物质变成细小均匀的团粒，再继续搅拌18分钟，停止搅拌，静置分层，提取上层乙醇溶液；

b、向提取罐中的沉淀物加入适量70℃水，搅拌均匀，充分溶解，向溶解后所得溶液内慢慢注入95％乙醇溶液，搅拌均匀，控制乙醇浓度为80％，再继续搅拌18分钟，静置分层，提取上层乙醇溶液；

c、再重复b步骤2次；

d、最后向罐底的沉淀物中加入适量乙醇溶液，搅拌均匀，充分溶解，溶解后所得溶液在转速为3000r/min的不锈钢防爆离心机离心15min，回收离心出的乙醇溶液；

e、合并步骤a-d中的上层乙醇溶液；

3)醇液浓缩：

将步骤2)e步骤中的上层乙醇溶液在温度为60℃、-0.08mpa条件下浓缩为原体积1/4，再加入注射用纯化水，继续浓缩至无乙醇蒸出为止，放置至室温后200目滤网滤出得到醇浓缩水稀释液；

4)醇提液的酸和明胶处理：

a、将步骤3)所得的醇浓缩水稀释液加入20％盐酸溶液，搅拌均匀，调节pH值为1，6℃冰柜中放置4小时，静置分层，经500目滤布袋滤出上清液Ⅰ；

b、用20％氢氧化钠溶液调节该上清液ⅠpH值至4，加3％明胶溶液，搅拌均匀，6℃冰柜中放置过夜后，静置分层，经滤纸过滤出上清液Ⅱ；

c、向上清液Ⅱ中加95％乙醇溶液使含醇量达到80％，放置2小时静置分层，经滤纸过滤出上清液Ⅲ；

d、上清液Ⅲ于60℃，-0.07mpa下回收乙醇至无醇味，过滤，得明胶处理液；

e、均匀搅拌下再用20％盐酸溶液调节明胶处理液的pH值至1，6℃冰柜中放置4小时，经滤纸过滤出上清液Ⅳ；

f、上清液Ⅳ用纯化水稀释1倍后，均匀搅拌下用10％氢氧化钠溶液调节稀释液的pH值至7.2，过滤得滤液；

5)活性炭处理：

将活性炭粉加入滤液的总质量0.2％的针剂用活性炭粉加入滤液Ⅰ中，室温下均匀搅拌20分钟后，用2层滤纸过滤，再经0.22μm滤膜过滤，即得质量稳定的胆木注射用溶液437g。

实施例3：

一种胆木注射用溶液的制备方法，包括如下步骤：

1)浸膏制备：

a、取3000g胆木洗净晾干后粉碎，加胆木粉质量的10倍水，煎煮1.5小时，收集煎液和滤渣；

b、向a步骤中滤渣加入其质量的8倍水，煎煮1.3小时，过滤，收集煎液和滤渣；

c、向b步骤中滤渣加入其质量的7倍水，煎煮0.9小时，过滤，收集煎液；

d、合并步骤a-c收集的煎液，在温度为55℃条件下，浓缩至相对密度为1.18的浸膏，经200目不锈钢滤网过滤即得浸膏438g；

2)醇提操作：

a、先在醇提罐中注入2/3体积的95％乙醇溶液，开动搅拌，缓慢将步骤1) 所得浸膏加入到乙醇溶液中，并控制乙醇浓度为83％，待浸膏均匀充分的与乙醇接触，浸膏中不溶于醇的物质变成细小均匀的团粒，再继续搅拌20分钟，停止搅拌，静置分层，提取上层乙醇溶液；

b、向提取罐中的沉淀物加入适量40℃水，搅拌均匀，充分溶解，向溶解后所得溶液内慢慢注入95％乙醇溶液，搅拌均匀，控制乙醇浓度为83％，再继续搅拌20分钟，静置分层，提取上层乙醇溶液；

c、再重复b步骤2次；

d、最后向罐底的沉淀物中加入适量乙醇溶液，搅拌均匀，充分溶解，溶解后所得溶液在转速为3000r/min的离心机离心15分钟，回收离心后上层乙醇溶液；

e、合并步骤a-d中的上层乙醇溶液；

3)醇液浓缩：

将步骤2)e步骤中的上层乙醇溶液在温度为65℃、0.01mpa条件下浓缩为原体积1/4，再加入注射用纯化水，继续浓缩至无乙醇蒸出为止，放置至室温后200目滤网滤出得到醇浓缩水稀释液；

4)醇提液的酸和明胶处理：

a、将步骤3)所得的醇浓缩水稀释液加入20％盐酸溶液，搅拌均匀，调节pH值为1，8℃冰柜中放置8小时，静置分层，500目滤布袋过滤出上清液Ⅰ；

b、用20％氢氧化钠溶液调节该上清液ⅠpH值至5，加2％明胶溶液，搅拌均匀，8℃冰柜中放置过夜后，静置分层，经滤纸过滤出上清液Ⅱ；

c、向上清液Ⅱ中加95％乙醇溶液使含醇量达到83％，放置3小时静置分层，经滤纸过滤出上清液Ⅲ；

d、上清液Ⅲ于65℃，0.01mpa下回收乙醇至无醇味，过滤，得明胶处理液；

e、均匀搅拌下再用20％盐酸溶液调节明胶处理液的pH值至1，8℃冰柜中放置8小时，经滤纸过滤出上清液Ⅳ；

f、上清液Ⅳ用纯化水稀释2倍后，均匀搅拌下用10％氢氧化钠溶液调节稀释液的pH值至7.4，过滤得滤液；

5)活性炭处理：

将活性炭粉加入滤液的总质量0.2％的针剂用活性炭粉加入滤液Ⅰ中，室温下均匀搅拌25分钟后，用3层滤纸过滤，再经0.22μm滤膜过滤即得质量稳定的胆木注射用溶液430g。

实施例4：

一种胆木注射用溶液的制备方法，包括如下步骤：

1)浸膏制备：

a、取3000g胆木洗净晾干后粉碎，加胆木粉质量的8倍水，煎煮2小时，收集煎液和滤渣；

b、向a步骤中滤渣加入其质量的6倍水，煎煮1.5小时，过滤，收集煎液和滤渣；

c、向b步骤中滤渣加入其质量的6倍水，煎煮1小时，过滤，收集煎液；

d、合并步骤a-c收集的煎液，在温度为55℃条件下过滤，浓缩至相对密度为1.18的浸膏，经200目不锈钢滤网过滤即得浸膏428g；

2)醇提操作：

a、先在醇提罐中注入2/3体积的95％乙醇溶液，开动搅拌，缓慢将步骤1)所得浸膏加入到乙醇溶液中，并控制乙醇浓度为85％，待浸膏均匀充分的与乙醇接触，浸膏中不溶于醇的物质变成细小均匀的团粒，再继续搅拌20分钟，停止搅拌，静置分层，提取上层乙醇溶液；

b、向提取罐中的沉淀物加入适量50℃水，搅拌均匀，充分溶解，向溶解后所得溶液内慢慢注入95％乙醇溶液，搅拌均匀，控制乙醇浓度为85％，再继续搅拌20分钟，静置分层，提取上层乙醇溶液；

c、再重复b步骤2次；

d、最后向罐底的沉淀物中加入适量乙醇溶液，搅拌均匀，充分溶解，溶解后所得溶液在转速为3000r/min的离心机离心20分钟，回收离心后上层乙醇溶液；

e、合并步骤a-d中的上层乙醇溶液；

3)醇液浓缩：

将步骤2)e步骤中的上层乙醇溶液在温度为65℃、0.01mpa条件下浓缩为原体积1/4，再加入注射用纯化水，继续浓缩至无乙醇蒸出为止，放置至室温后200目滤网滤出得到醇浓缩水稀释液；

4)醇提液的酸和明胶处理：

a、将步骤3)所得的醇浓缩水稀释液加入20％盐酸溶液，搅拌均匀，调节pH值为2，10℃冰柜中放置12小时，静置分层，500目滤布袋过滤出上清液Ⅰ；

b、用20％氢氧化钠溶液调节该上清液ⅠpH值至5，加2％明胶溶液，搅拌均匀，10℃冰柜中放置过夜后，静置分层，经滤纸过滤出上清液Ⅱ；

c、向上清液Ⅱ中加95％乙醇溶液使含醇量达到85％，放置4小时静置分层，经滤纸过滤出上清液Ⅲ；

d、上清液Ⅲ于60℃，0.01mpa下回收乙醇至无醇味，过滤，得明胶处理液；

e、均匀搅拌下再用20％盐酸溶液调节明胶处理液的pH值至2，10℃冰柜中放置12小时，经滤纸过滤出上清液Ⅳ；

f、上清液Ⅳ用纯化水稀释2倍后，均匀搅拌下用10％氢氧化钠溶液调节稀释液的pH值至7.2，过滤得滤液；

5)活性炭处理：

将活性炭粉加入滤液的总质量0.2％的针剂用活性炭粉加入滤液Ⅰ中，室温下均匀搅拌30分钟后，用3层滤纸过滤，再经0.22μm滤膜过滤即得质量稳定的胆木注射用溶液413g。

各实施例获得的胆木注射用溶液中主要有效成分含量

对比实验

实验组1：采用实施例2的制备方法制备胆木提取物。

1)浸膏制备：

a、取3000g胆木洗净晾干后粉碎，加胆木粉质量的8倍水，煎煮1小时，过滤，收集煎液和滤渣；

b、向a步骤中滤渣加入其质量的6倍水，煎煮1小时，过滤，收集煎液和滤渣；

c、向b步骤中滤渣加入其质量的6倍水，煎煮0.8小时，过滤，收集煎液；

d、合并步骤a-c收集的煎液，在温度为50℃条件下过滤，浓缩至相对密度为1.18的浸膏，经200目不锈钢滤网过滤即得浸膏443g。

2)醇提操作：

a、先在醇提罐中注入2/3体积的95％乙醇溶液，开动搅拌，缓慢将步骤1)所得浸膏加入到乙醇溶液中，并控制乙醇浓度为80％，待浸膏均匀充分的与乙醇接触，浸膏中不溶于醇的物质变成细小均匀的团粒，再继续搅拌18分钟，停止搅拌，静置分层，提取上层乙醇溶液；

b、向提取罐中的沉淀物加入适量70℃水，搅拌均匀，充分溶解，向溶解后所得溶液内慢慢注入95％乙醇溶液，搅拌均匀，控制乙醇浓度为80％，再继续 搅拌18分钟，静置分层，提取上层乙醇溶液；

c、再重复b步骤2次；

d、最后向罐底的沉淀物中加入适量乙醇溶液，搅拌均匀，充分溶解，溶解后所得溶液在转速为3000r/min的不锈钢防爆离心机离心15min，回收离心出的乙醇溶液；

e、合并步骤a-d中的上层乙醇溶液；

3)醇液浓缩：

将步骤2)e步骤中的上层乙醇溶液在温度为60℃、-0.08mpa条件下浓缩为原体积1/4，再加入注射用纯化水，继续浓缩至无乙醇蒸出为止，放置至室温后200目滤网滤出得到醇浓缩水稀释液；

4)醇提液的酸和明胶处理：

a、将步骤3)所得的醇浓缩水稀释液加入20％盐酸溶液，搅拌均匀，调节pH值为1，6℃冰柜中放置4小时，静置分层，经500目滤布袋滤出上清液Ⅰ；

b、用20％氢氧化钠溶液调节该上清液ⅠpH值至4，加3％明胶溶液，搅拌均匀，6℃冰柜中放置过夜后，静置分层，经滤纸过滤出上清液Ⅱ；

c、向上清液Ⅱ中加95％乙醇溶液使含醇量达到80％，放置2小时静置分层，经滤纸过滤出上清液Ⅲ；

d、上清液Ⅲ于60℃，-0.07mpa下回收乙醇至无醇味，过滤，得明胶处理液；

e、均匀搅拌下再用20％盐酸溶液调节明胶处理液的pH值至1，6℃冰柜中放置4小时，经滤纸过滤出上清液Ⅳ；

f、上清液Ⅳ用纯化水稀释1倍后，均匀搅拌下用10％氢氧化钠溶液调节稀释液的pH值至7.2，过滤得滤液；

5)活性炭处理：

将活性炭粉加入滤液的总质量0.2％的针剂用活性炭粉加入滤液Ⅰ中，室温下均匀搅拌20分钟后，用2层滤纸过滤，再经0.22μm滤膜过滤，即得质量稳 定的胆木注射用溶液437g。

对比组1：

参照申请号为200510087735.3的专利实施例1的制备方法

提取物的制备：取5kg胆木，切片，粉碎成粗粉，加水10倍煎煮三次，第一次2小时，第二次1.5小时，第三次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.18(55℃)的清膏，加4倍量的熟石膏粉，混匀，75减压干燥，粉碎成50目粉，加乙醇使含醇量达85％，搅拌提取三次，冷藏温度为10℃，静置24小时，取上清液，回收乙醇，加注射用水至相对密度为1.02(55℃)，冷至室温，用10％盐酸溶液调节pH值至2.0，冷藏于10℃，静置24小时，滤过，滤液用20％氢氧化钠溶液调节pH值至7.2，冷藏于10℃，静置12小时，滤过，得胆木提取物341g。

对比组2：

参照申请号为:200610097689.X的专利实施例1的制备方法

一种胆木提取物，其步骤如下：

1)5kg胆木片状心材、枝、皮混合物，干燥，粉碎，用85％乙醇回流提取4次，提取液每次用量12倍；合并提取液，冷藏12小时，滤过，回收乙醇；然后加入到20倍量4mol/L的氢氧化钠溶液中，搅拌，冷藏，用5mol/L的HCL调节PH至4，冷藏，过滤，滤液另置，取沉淀再加至10％氢氧化钠溶液中，搅拌溶解，静置，再以20％盐酸溶液调节PH至4，冷藏12小时，静置，过滤，弃去滤渣，滤液与另置滤液合并；即得粗提取物溶液；

2)取粗提取物溶液以HPD100大孔树脂吸附，弃流出液，再以水洗脱，再以35％乙醇梯度洗脱，每个梯度洗脱体积为15个大孔树脂柱/床体积，弃去洗脱液；再以70％乙醇洗脱，洗脱体积为20个大孔树脂柱/床体积，收集洗脱液，浓缩，干燥，得黄色固体物质；

3)取黄色固体物质以30％乙醇溶解，过滤，浓缩，过滤至滤液澄清，滤液静置放冷，收集析出物，干燥即得胆木提取物53克。

各活性成分的检测方法：

(1)黄酮类化合物照紫外-可见分光光度法(中国药典2010一部附录VA)检测芦丁类物质

(2)异长春花苷内酰胺参考高效液相色谱法(中华人民共和国药典一部附录ⅥD)测定异长春花苷内酰胺类生物碱。以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水-磷酸(30：70：0.1)为流动相；检测波长为226nm。理论板数按异长春花苷内酰胺峰计算应不低于5000。

(3)原儿茶酸参考高效液相色谱法(中华人民共和国药典一部附录ⅥD)测定，条件为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.010mol/L的磷酸-甲醇(95:5)为洗脱液；检测波长280nm；理论塔板数按原儿茶酸计算应不低于2000.

本发明方法获得的胆木注射用溶液的量远远高于对比组，且本发明所获得的胆木注射用溶液在治疗急性扁桃体炎、急性咽喉炎、急性结膜炎、上呼吸道感染、肺炎、支气管炎等呼吸系统疾病上具有显著功效，原因在于其含有较高质量的黄酮类物质、异长春花苷内酰胺、酚酸类物质，其中的黄酮类物质可以用于清热、解毒、消炎；异长春花苷内酰胺可以用于抗菌、抗病毒，酚酸类物质可以用于消炎、解毒，而且本发明方法获得的胆木注射用溶液的在灭菌后的稳定性良好，不产生沉淀。

对比组1与实验组1相比较，实验组1获得的胆木注射液溶液各有效成分(如黄酮类物质、异长春花苷内酰胺、酚酸类物质)显著高于对比组1。

对比组2与实验组1相比较，由于对比组2的目的是制取异长春花苷内酰胺，而其他有效成分(如黄酮类物质、酚酸类物质)显著低于实验组1。

以上所揭露的仅为本发明的几种较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，因此依本发明权利要求所作的等同变化，仍属本发明所涵盖的范围。

Claims (5)

1.一种胆木注射用溶液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)浸膏制备：

a、取胆木粉碎，加胆木粉质量的8-12倍水，煎煮1-2小时，过滤，收集滤渣和煎液；

b、向a步骤中滤渣加入所述滤渣质量的6-10倍水，煎煮1-1.5小时，过滤，收集滤渣和煎液；

c、向b步骤中滤渣加入其质量的6-8倍水，煎煮0.8-1小时，过滤，收集煎液；

d、合并步骤a-c收集的煎液，在温度为50℃-60℃条件下过滤，浓缩至相对密度为1.18-1.19，过滤，冷却至20℃-25℃即得浸膏；

2)醇提操作：

a、在醇提罐中注入乙醇溶液，搅拌，将步骤1)所得浸膏加入到乙醇溶液中，控制乙醇浓度为80％-85％，继续搅拌18-25分钟，静置分层，提取上层乙醇溶液；

b、向醇提罐中加入40℃～100℃水，搅拌溶解后注入乙醇溶液，继续搅拌，控制乙醇浓度为80％-85％，再继续搅拌18-25分钟，静置分层，提取上层乙醇溶液；

c、重复b步骤2～3次；

d、向醇提罐中加入乙醇溶液，搅拌溶解，经离心处理后，回收上层乙醇溶液；

e、合并步骤a-d中的上层乙醇溶液；

3)醇液浓缩：

将步骤2)e步骤中的上层乙醇溶液在温度为60℃-70℃、压力为-0.07-0.09mpa的条件下浓缩，再加入注射用纯化水，继续浓缩至无乙醇蒸出为止，冷却，过滤，得到醇浓缩水稀释液；

4)醇提液的酸和明胶处理：

a、将步骤3)所得的醇浓缩水稀释液加入20％盐酸溶液，搅拌，调节pH值为1-2，在6℃-10℃冰柜中放置4-12小时，静置分层，过滤得上清液Ⅰ；

b、用20％氢氧化钠溶液调节该上清液ⅠpH值至4-6，加1％-2％明胶溶液，搅拌，在6℃-10℃冰柜中放置4-12小时，静置分层，过滤的上清液Ⅱ；

c、向上清液Ⅱ中加乙醇溶液，搅拌，使含醇量达到80％-85％，放置2-4小时，静置分层，过滤得上清液Ⅲ；

d、上清液Ⅲ在60℃-70℃、-0.07mpa-0.09mpa的条件下，回收乙醇至无醇味，滤纸过滤，得明胶处理液，调节pH值至1-2，在6℃-10℃冰柜中放置4-12小时，静置分层，过滤得上清液Ⅳ，

e、将上清液Ⅳ稀释1-2倍，搅拌，调pH值至7.2-7.6，过滤得滤液；

5)活性炭处理：

将活性炭粉加入滤液中，搅拌20-30分钟，过滤，即得胆木注射用溶液。

2.根据权利要求1所述的一种胆木注射用溶液的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中a步骤中加胆木粉质量为12倍的水、煎煮2小时；b步骤所加滤渣质量为10倍的水，煎煮1.5小时；c步骤所加滤渣质量为8倍的水，煎煮1小时。

3.根据权利要求1所述的一种胆木注射用溶液的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中a步骤、b步骤中，控制乙醇浓度为85％，搅拌25分钟。

4.根据权利要求1所述的一种胆木注射用溶液的制备方法，其特征在于，所述步骤4)中，a步骤、d步骤中调节pH值为2，b步骤中pH值调节为5，加入2％明胶溶液，e步骤中调节pH值为7.6。

5.根据权利要求1所述的一种胆木注射用溶液的制备方法，其特征在于，所述离心处理为在转速为3000r/min的防爆离心机离心10-20分钟。