CN104878003A - 一个棉花黄萎病抗性主效qtl及其连锁的分子标记 - Google Patents

一个棉花黄萎病抗性主效qtl及其连锁的分子标记 Download PDF

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CN104878003A CN201510331397.7A CN201510331397A CN104878003A CN 104878003 A CN104878003 A CN 104878003A CN 201510331397 A CN201510331397 A CN 201510331397A CN 104878003 A CN104878003 A CN 104878003A
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郭旺珍
蔡彩平
张天真
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Abstract

本发明公开了一个棉花黄萎病抗性主效QTL及其连锁的分子标记。棉花高抗黄萎病的主效QTL位点，位于棉花D11染色体上，该主效QTL解释13.23-13.25％的表型变异。有以下6个SSR标记与之紧密连锁，分别是：SSR/NAU6593，SSR/NAU6697，SSR/NAU6675，SSR/NAU6520，SSR/NAU6530，和SSR/NAU6431。本发明所述的棉花黄萎病抗性主效QTL及其连锁的分子标记在筛选或鉴定抗黄萎病棉花品种中的应用。本发明有助于克服现有育种技术对黄萎病抗性存在鉴定成本高、时间长、稳定性低等特点，大大加快我国高抗黄萎病棉花新品种培育与产业化进程。

Description

一个棉花黄萎病抗性主效QTL及其连锁的分子标记
技术领域
本发明属于作物遗传育种领域，涉及一个棉花黄萎病抗性主效QTL及其连锁的SSR分子标记。
背景技术
棉纤维是重要的纺织工业原料，棉花黄萎病是土传性维管束病害，大范围发生严重影响了棉花的产量和品质，被称为棉花的“癌症”。由于气候环境变化，棉田长期连作，棉种异地频繁引种等诸多因素影响，黄萎病害爆发严重，迫切需要发掘抗黄萎病新基因，培育抗黄萎病棉花新品种。
近年来，通过构建分离群体定位了大量的黄萎病抗性相关QTLs(Bolek et al.2005；Yang etal.2008；Wang et al.2008；Jiang et al.2009；Ning et al.2013；Fang et al.2013；Li et al.2013；Zhang et al.2014；Zhang et al.2014)。Zhao et al.(2014)利用212个SSRs对158个陆地棉种质材料开展黄萎病关联分析，共检测到42个黄萎病抗性关联位点，分布于棉花15条染色体上。同时比较了四篇关于黄萎病抗性QTLs定位的文献，整合获得至少60个黄萎病抗性相关QTLs，分布于棉花10条染色体上。由于棉花黄萎病鉴定工作比较困难，比如：对于暂时性的分析群体不可能实现多年多点黄萎病鉴定工作，黄萎病田间发病不均匀导致鉴定结果变异大等。因此明确抗病相关的稳定QTL，通过分子标记辅助选择(MAS)准确高效应用于育种实践非常重要。
MAS可以将传统的表型选择转变为直接选择基因型，从而大大提高选择效率。Boleket et al(2005)利用抗黄萎病海岛棉Pima S-7品种和感黄萎病品种Acala44配制了一个海陆杂交F2群体，用集团分离分析方法(BSA法)筛选到三个SSR标记(CM12、STS1、BNL3147-2)对黄萎病抗性有较大作用，上述3个标记均位于A11染色体上。Yang et al(2008)利用海岛棉耐黄萎病品种海7124为母本与新疆棉区大面积推广的高感黄萎病陆地棉品种军棉1号为父本配制[(海7124×军棉1号)×军棉1号]BC1分离群体，构建了一张含205个位点，35个连锁群，覆盖1772.5cM的遗传图谱，标记间的平均间距为8.65cM，其中33个连锁群定位到相应的26条染色体上。以96个BC1S2家系分别种植在新疆和江苏南京两地，接种BP2，VD8和592等3个不同致病力的黄萎病菌株，调查叶片和劈杆两个时期各家系抗感黄萎病表现，开展抗病QTLs的筛选工作，共检测到13个黄萎病抗性相关QTLs，其中D11染色体上共检测到两个QTLs，一个为(qVV-D11-1BC1S2VD8)，标记区间为NAU643-NAU3481，解释的表型变异率为12.2％；另一个为(qVV-D11-1BC1S2592)，标记区间为NAU1640-BNL3279，解释的表型变异率为22.3％。推测第一个QTL与Boleket et al(2005)鉴定到的对黄萎病抗性有较大的影响的三个SSR标记之一BNL3147-2是位于部分同源群上的同一个QTL。
发明内容
本发明的目的是提供一个新的棉花高抗黄萎病的主效QTL位点。
本发明的另一目的是提供该棉花高抗黄萎病的主效QTL位点的分子标记。
本发明的又一目的是提供该主效QTL位点及其分子标记的引物。
本发明的目的可通过如下技术方案实现：
一个棉花高抗黄萎病的主效QTL位点qVV-D11-1，位于棉花D11染色体上，在海岛棉耐黄萎病品种海7124和新疆棉区大面积推广的高感黄萎病陆地棉品种军棉1号配制的回交群体[军棉1号×(海7124×军棉1号)]BC1S2家系接种黄萎病菌592及VD8，成株期调查维管束发病结果，检测到一个抗病主效QTL，解释13.23-13.25％的表型变异。有以下6个SSR标记与之紧密连锁，分别是：SSR/NAU6593，SSR/NAU6697，SSR/NAU6675，SSR/NAU6520，SSR/NAU6530，和SSR/NAU6431。各分子标记的引物及扩增的目的片段长度如下：
SSR/NAU6593的正向引物序列为SEQ ID NO.1，反向引物序列为SEQ ID NO.2，在耐黄萎病品种海7124中可扩增出长度为280bp的DNA片段；
SSR/NAU6697的正向引物序列为SEQ ID NO.3，反向引物序列为SEQ ID NO.4，在耐黄萎病品种海7124中可扩增出长度为200bp的DNA片段；
SSR/NAU6675的正向引物序列为SEQ ID NO.5，反向引物序列为SEQ ID NO.6，在耐黄萎病品种海7124中可扩增出长度为320bp的DNA片段；
SSR/NAU6520的正向引物序列为SEQ ID NO.7，反向引物序列为SEQ ID NO.8，在耐黄萎病品种海7124中可扩增出长度为310bp的DNA片段；
SSR/NAU6530的正向引物序列为SEQ ID NO.9，反向引物序列为SEQ ID NO.10，在耐黄萎病品种海7124中可扩增出长度为350bp的DNA片段；
SSR/NAU6431的正向引物序列为SEQ ID NO.11，反向引物序列为SEQ ID NO.12，在耐黄萎病品种海7124中可扩增出长度为420bp的DNA片段。
上述棉花黄萎病抗性基因主效QTL位点，是通过以下方法进行标记定位的：
Yang et al(2008)用抗黄萎病海岛棉品种海7124和感黄萎病陆地棉品种军棉1号配制杂交组合，用F1单株与军棉1号回交得到含有96个单株的BC1群体，自交产生BC1S2家系。用BC1群体构建了一张含有204个SSR位点，全长1772.54cM，标记间平均距离是8.65cM的海陆遗传图谱。对BC1S2家系接种黄萎病菌BP2，VD8，和592，在成株期调查群体的发病情况，用复合区间作图法进行抗病QTL的检测，结果在D11染色体上检测到2个QTL，一个为(qVV-D11-1BC1S2VD8)，标记区间为NAU643-NAU3481，解释的表型变异率为12.2％；另一个为(qVV-D11-1BC1S2592)，标记区间为NAU1640-BNL3279，解释的表型变异率为22.3％。同时，Guo et al.(2008)等人根据陆地棉Maxxa的142个BAC序列开发出578对SSR引物，并利用这些引物开展海陆种间遗传图谱的加密工作，将70个BACs的166个多态位点锚定到对应的染色体。
为了更加准确定位位于棉花D11染色体上的抗黄萎病QTL，我们利用Guo et al.(2008)定位在D11染色体上，在海岛棉和陆地棉种间表现差异的23个多态位点(源于11个BAC克隆)对应的SSR引物，在海7124和军棉1号两个亲本间进行多态性筛选，利用多态性引物对群体中每个BC1单株的基因组DNA进行PCR扩增，完成基因型鉴定工作，利用遗传作图软件JoinMap3.0构建遗传连锁图谱；对分别种植在新疆和江苏的BC1S2家系接种BP2，VD8和592等3个不同致病力的黄萎病菌株，在叶片和成株劈杆两个时期进行黄萎病发病鉴定，开展抗病QTLs的筛选。利用Windows QTL Cartographer 2.5软件，采用复合区间作图法(Compositeinterval mapping)，LR阈值为11.5(相当于LOD值2.5)，1000次测验分析陆地棉黄萎病抗性的QTL。研究结果所述如下：
①、选用Guo et al.(2008)发表的D11染色体上海陆种间23个多态位点(源于11个BAC克隆)相对应的SSR引物，在海7124和军棉1号两个亲本间进行多态性筛选，共得到多态位点16个。与Yang et al(2008)建图数据进行整合，整合后的D11染色体上位点数由15个增加到31，连锁群长度由96.4cM增加到115.107cM，标记间平均距离由6.43cM减小到3.71cM。
②、基于BC1S2家系在南京农业大学江浦试验站和新疆石河子大学两环境，利用3个不同的黄萎病菌株(BP2，VD8和592)分别接种，在叶片和劈杆两个时期进行黄萎病抗性鉴定，开展抗病QTLs的筛选工作。利用复合区间作图法对黄萎病抗性QTL进行筛选。研究表明：在种植于新疆石河子大学的[(海7124×军棉1号)×军棉1号]BC1S2家系接种黄萎病菌592及种植于南京农业大学的[(海7124×军棉1号)×军棉1号]BC1S2家系接种黄萎病菌VD8成株期劈杆调查结果中，棉花D11染色体上检测到一个与黄萎病抗性相关的主效QTL(qVV-D11-1)，标记区间为NAU6593-NAU6431，解释13.23-13.25％的表型变异(图1)。与该QTL紧密连锁的SSR分子标记有6个，分别是：SSR/NAU6593，SSR/NAU6697，SSR/NAU6675，SSR/NAU6520，SSR/NAU6530，和SSR/NAU6431。因此，该目标QTL是一个抗黄萎病的主效QTL。该QTL与已经公布的位于D11染色体上的抗性QTL(Yang et al 2008)所在区间不同，是一个新的抗病QTL。
综上所述，本发明提供的棉花黄萎病抗性基因主效位点是一个新的QTL位点。利用SSR/NAU6593，SSR/NAU6697，SSR/NAU6675，SSR/NAU6520，SSR/NAU6530，和SSR/NAU64316个分子标记可以辅助筛选该黄萎病抗性主效位点QTL(qVV-D11-1)。
本发明所述的棉花抗黄萎病的主效QTL位点qVV-D11-1可由SSR/NAU6593，SSR/NAU6697，SSR/NAU6675，SSR/NAU6520，SSR/NAU6530，和SSR/NAU6431标定，qVV-D11-1距离分子标记SSR/NAU6593的遗传距离为1.122～4.072cM，距离分子标记SSR/NAU6697的遗传距离为0.569～3.519cM，距离分子标记SSR/NAU6675的遗传距离为0.476～3.426cM，距离分子标记SSR/NAU6520的遗传距离为0.016～2.934cM，距离分子标记SSR/NAU6530的遗传距离为0.531～2.419cM，距离分子标记SSR/NAU6431的遗传距离为0.938～2.012cM。
本发明所述的棉花高抗黄萎病的主效QTL位点qVV-D11-1的分子标记引物分别是，分子标记SSR/NAU6593的正向引物序列为SEQ ID NO.1，反向引物序列为SEQ ID NO.2，在耐黄萎病品种海7124中可扩增出长度为280bp的DNA片段；SSR/NAU6697的正向引物序列为SEQID NO.3，反向引物序列为SEQ ID NO.4，在耐黄萎病品种海7124中可扩增出长度为200bp的DNA片段；SSR/NAU6675的正向引物序列为SEQ ID NO.5，反向引物序列为SEQ ID NO.6，在耐黄萎病品种海7124中可扩增出长度为320bp的DNA片段；SSR/NAU6520的正向引物序列为SEQ ID NO.7，反向引物序列为SEQ ID NO.8，在耐黄萎病品种海7124中可扩增出长度为310bp的DNA片段；SSR/NAU6530的正向引物序列为SEQ ID NO.9，反向引物序列为SEQID NO.10，在耐黄萎病品种海7124中可扩增出长度为350bp的DNA片段；SSR/NAU6431的正向引物序列为SEQ ID NO.11，反向引物序列为SEQ ID NO.12，在耐黄萎病品种海7124中可扩增出长度为420bp的DNA片段。
本发明所述的棉花高抗黄萎病的主效QTL位点qVV-D11-1的分子标记方法，利用所述的分子标记SSR/NAU6593，SSR/NAU6697，SSR/NAU6675，SSR/NAU6520，SSR/NAU6530，和SSR/NAU6431的引物对中的一对或多对引物对，对待鉴定棉花材料的DNA进行PCR扩增，扩增产物进行电泳检测，如扩增出对应大小的DNA片段，则标志着棉花高抗黄萎病的主效QTL位点qVV-D11-1。
本发明所述的分子标记在鉴定棉花高抗黄萎病的主效QTL位点(qVV-D11-1)中的应用。
本发明所述的分子标记在筛选或鉴定抗黄萎病棉花品种中的应用。
本发明所述的分子标记引物在筛选或鉴定抗黄萎病棉花品种中的应用。
本发明所述的分子标记方法在筛选或鉴定抗黄萎病棉花品种中的应用。
有益效果：
1.利用位于棉花D11染色体上，源于11个BAC克隆的23对海陆种间多态SSR标记加密图谱，完成黄萎病抗性QTLs筛选工作。研究结果显示，在接种黄萎病菌592及VD8成株期劈杆调查结果中，在棉花D11染色体上检测到一个黄萎病抗性主效位点qVV-D11-1，标记区间为NAU6593-NAU6431，解释的表型变异率为13.23-13.25％。有6个SSR标记，SSR/NAU6593，SSR/NAU6697，SSR/NAU6675，SSR/NAU6520，SSR/NAU6530，和SSR/NAU6431与之紧密连锁(图1)。
2.在不同环境以及接种不同黄萎病菌生理菌系的研究表明，qVV-D11-1在不同环境以及接种不同的黄萎病菌生理菌系其抗性表现均很稳定，是一个广谱高抗的QTL。为提高我国棉花品种的黄萎病抗性水平奠定了基础。
3.本发明不但有助于解决我国棉花黄萎病抗性育种进展迟缓的问题，而且有助于克服现有育种技术对黄萎病抗性存在鉴定成本高、时间长、稳定性低等特点；利用本发明棉花黄萎病抗性QTL主效位点及其分子标记可以提高黄萎病抗性的选择效率，尽快提高我国棉花品种的黄萎病抗性水平，并应用于棉花黄萎病抗性品种的生产与抗性检测，大大加快我国高抗黄萎病棉花新品种培育与产业化进程。
附图说明
图1 抗黄萎病主效QTL的染色体定位
位于棉花D11染色体上，有6个SSR标记，SSR/NAU6593，SSR/NAU6697，SSR/NAU6675，SSR/NAU6520，SSR/NAU6530和SSR/NAU6431与qVV-D11-1紧密连锁，该QTL区间被这6个标记标定。
图2 6个SSR引物在亲本间的扩增结果
A-F依次为引物NAU6593，NAU6697，NAU6675，NAU6520，NAU6530，和NAU6431的PCR扩增结果，材料1为海7124，材料2为军棉1号。
具体实施方式
本发明的实施程序是：海7124为海岛棉耐黄萎病品种；军棉1号曾是新疆棉区大面积推广的陆地棉品种，其高感黄萎病。上述材料经南京农业大学棉花研究所引进后，多年自交保存繁殖，如果其他同行需要，南京农业大学棉花研究所可向国内研究单位提供这些种质材料。
2004年夏，Yang et al(2008)以海7124为母本，军棉1号为父本进行杂交，得到F1代。2005年夏，将F1与军棉1号回交得到BC1种子。2005年冬，南繁自交得到96个BC1S2家系，同时提取BC1各个单株的DNA。2006年春，把BC1S2各家系分成三份：两份种于南京农业大学江浦试验站的两个单菌系病池中，一份种于新疆石河子大学的病池中。共使用3种菌系，其中南京农业大学分别是非落叶型中等致病力菌系BP2和落叶型强致病力菌系VD8病池；新疆石河子是落叶型强致病力菌系592。
实施例1
用Guo et al(2008)报道的位于D11染色体上，海陆种间23个多态位点(源于11个BAC克隆)相对应的SSR引物在两个亲本间(海7124和军棉1号)进行多态性筛选。这些SSR标记引物均来源于CottonGen(http://www.cottongen.org)上已公布的棉花微卫星引物序列，由南京金斯瑞生物科技有限公司合成，本研究室保存。Taq酶、dNTPs等PCR试剂均购自Sigma公司。PCR反应体积为10μL，其中，1μL 10×Taq Buffer，1μL 25mM of MgCl2，1μL正向引物(10μM/μL)，1μL反向引物(10μM/μL)，1μL模板DNA(10ng/μL)，0.2μL 10mMdNTPs和0.1μL 500U Taq DNA聚合酶(2.5U/μL)。PCR反应在东胜基因扩增仪(EDC-810)上完成。PCR反应程序为：95℃预变性4分钟后，94℃变性45秒，57℃退火45秒，72℃延伸60秒，循环30次，最后72℃延伸10分种；扩增产物在聚丙烯酰胺(PAGE)胶上电泳，然后进行银染，银染过程如下所述：0.1％AgNO3中染色15分钟，显色液(含有2％NaOH，1％甲醛)中显影3-5分钟，记录结果。分子标记初步筛选结果表明，有16对SSR引物的扩增产物在海7124和军棉1号双亲中有差异。进一步鉴定了这16对引物在BC1各单株中的基因型。与原有15个标记进行整合，用JoinMap3.0软件构建连锁图谱，加密后的D11连锁群上位点数由15个增加到31，连锁群长度由96.4cM增加到115.107cM，标记间平均距离由6.43cM减小到3.71cM。利用Windows QTL Cartographer 2.5软件对不同地点、接种不同生理菌系黄萎病菌后不同时期的鉴定数据，进行黄萎病抗性相关QTLs的定位研究，发现：在接种黄萎病菌592及VD8成株期劈杆调查结果中，棉花D11染色体上检测到一个黄萎病抗性相关主效QTL(qVV-D11-1)，标记区间为NAU6593-NAU6431，解释13.23-13.25％的表型变异。其中有6个SSR标记，SSR/NAU6593，SSR/NAU6697，SSR/NAU6675，SSR/NAU6520，SSR/NAU6530，和SSR/NAU6431与之紧密连锁。如下所述：
SSR/NAU6593(用NAU6593引物对可扩增出280bp的DNA片段)；
SSR/NAU6697(用NAU6697引物对可扩增出200bp的DNA片段)；
SSR/NAU6675(用NAU6675引物对可扩增出320bp的DNA片段)；
SSR/NAU6520(用NAU6520引物对可扩增出310bp的DNA片段)；
SSR/NAU6530(用NAU6530引物对可扩增出350bp的DNA片段)；
SSR/NAU6431(用NAU6431引物对可扩增出420bp的DNA片段)。
NAU6593正向引物：5'TCCTTCCATTATATGCCAAA 3'(SEQ ID NO.1)
反向引物：5'CTTGCTTCGTCTCCATTTTT 3'(SEQ ID NO.2)
NAU6697正向引物：5'TTTGGCCAGTTCTTCTTCTC 3'(SEQ ID NO.3)
反向引物：5'CTATTTCCCCTCCATTGTTG 3'(SEQ ID NO.4)
NAU6675正向引物：5'TTGCCAGACATGAAGAGAGA 3'(SEQ ID NO.5)
反向引物：5'TGGAAGCAAACAAGTACCAA 3'(SEQ ID NO.6)
NAU6520正向引物：5'GTAATGGGCCAATCAAGAAA 3'(SEQ ID NO.7)
反向引物：5'TGCTTCATCTTCAACCTACAA 3'(SEQ ID NO.8)
NAU6530正向引物：5'GTCCTTGTAGTACACATTTCTTTC 3'(SEQ ID NO.9)
反向引物：5'CACCCCACAATATAAATGAA 3'(SEQ ID NO.10)
NAU6431正向引物：5'GAAGTGTTGGAAATTCTATTGG 3'(SEQ ID NO.11)
反向引物：5'GGGTTGGGGAAGCATTAT 3'(SEQ ID NO.12)
上述引物均由南京金斯瑞生物科技有限公司合成并应用于本发明。目标QTL在上述[(海7124×军棉1号)×军棉1号]BC1S2家系中可解释13.23-13.25％的表型变异。用分子标记辅助选择可有效地开展棉花的黄萎病抗性育种。该目标黄萎病抗性QTL及相应标记将会在陆地棉的抗病育种研究中有较高的利用价值。

Claims (9)

1.一个棉花高抗黄萎病的主效QTL位点qVV-D11-1，其特征在于：该主效QTL位点位于棉花D11染色体上,利用海岛棉耐黄萎病品种海7124和新疆棉区大面积推广的高感黄萎病陆地棉品种军棉1号配制的BC1S2家系接种黄萎病菌，成株期调查维管束发病结果，其抗病QTL解释13.23-13.25％的表型变异；有以下6个SSR标记与之紧密连锁，分别是：SSR/NAU6593，SSR/NAU6697，SSR/NAU6675，SSR/NAU6520，SSR/NAU6530，和SSR/NAU6431；各分子标记的引物及扩增的目的片段长度如下：
SSR/NAU6593的正向引物序列为SEQ ID NO.1，反向引物序列为SEQ ID NO.2，在耐黄萎病品种海7124中可扩增出长度为280bp的DNA片段；
SSR/NAU6697的正向引物序列为SEQ ID NO.3，反向引物序列为SEQ ID NO.4，在耐黄萎病品种海7124中可扩增出长度为200bp的DNA片段；
SSR/NAU6675的正向引物序列为SEQ ID NO.5，反向引物序列为SEQ ID NO.6，在耐黄萎病品种海7124中可扩增出长度为320bp的DNA片段；
SSR/NAU6520的正向引物序列为SEQ ID NO.7，反向引物序列为SEQ ID NO.8，在耐黄萎病品种海7124中可扩增出长度为310bp的DNA片段；
SSR/NAU6530的正向引物序列为SEQ ID NO.9，反向引物序列为SEQ ID NO.10，在耐黄萎病品种海7124中可扩增出长度为350bp的DNA片段；
SSR/NAU6431的正向引物序列为SEQ ID NO.11，反向引物序列为SEQ ID NO.12，在耐黄萎病品种海7124中可扩增出长度为420bp的DNA片段。
2.权利要求1所述的棉花高抗黄萎病的主效QTL位点qVV-D11-1的分子标记，其特征在于该主效QTL位点可由SSR/NAU6593，SSR/NAU6697，SSR/NAU6675，SSR/NAU6520，SSR/NAU6530，和SSR/NAU6431分子标记标定；qVV-D11-1距离分子标记SSR/NAU6593的遗传距离为1.122～4.072cM，距离分子标记SSR/NAU6697的遗传距离为0.569～3.519cM，距离分子标记SSR/NAU6675的遗传距离为0.476～3.426cM，距离分子标记SSR/NAU6520的遗传距离为0.016～2.934cM，距离分子标记SSR/NAU6530的遗传距离为0.531～2.419cM，距离分子标记SSR/NAU6431的遗传距离为0.938～2.012cM。
3.根据权利要求2所述的分子标记，其特征在于所述的分子标记SSR/NAU6593的正向引物序列为SEQ ID NO.1，反向引物序列为SEQ ID NO.2，在耐黄萎病品种海7124中可扩增出长度为280bp的DNA片段；SSR/NAU6697的正向引物序列为SEQ ID NO.3，反向引物序列为SEQ ID NO.4，在耐黄萎病品种海7124中可扩增出长度为200bp的DNA片段；SSR/NAU6675的正向引物序列为SEQ ID NO.5，反向引物序列为SEQ ID NO.6，在耐黄萎病品种海7124中可扩增出长度为320bp的DNA片段；SSR/NAU6520的正向引物序列为SEQ ID NO.7，反向引物序列为SEQ ID NO.8，在耐黄萎病品种海7124中可扩增出长度为310bp的DNA片段；SSR/NAU6530的正向引物序列为SEQ ID NO.9，反向引物序列为SEQ ID NO.10，在耐黄萎病品种海7124中可扩增出长度为350bp的DNA片段；SSR/NAU6431的正向引物序列为SEQ IDNO.11，反向引物序列为SEQ ID NO.12，在耐黄萎病品种海7124中可扩增出长度为420bp的DNA片段。
4.权利要求2所述的棉花高抗黄萎病的主效QTL位点qVV-D11-1的分子标记引物对，其特征在于所述的分子标记SSR/NAU6593的正向引物序列为SEQ ID NO.1，反向引物序列为SEQID NO.2，在耐黄萎病品种海7124中可扩增出长度为280bp的DNA片段；SSR/NAU6697的正向引物序列为SEQ ID NO.3，反向引物序列为SEQ ID NO.4，在耐黄萎病品种海7124中可扩增出长度为200bp的DNA片段；SSR/NAU6675的正向引物序列为SEQ ID NO.5，反向引物序列为SEQ ID NO.6，在耐黄萎病品种海7124中可扩增出长度为320bp的DNA片段；SSR/NAU6520的正向引物序列为SEQ ID NO.7，反向引物序列为SEQ ID NO.8，在耐黄萎病品种海7124中可扩增出长度为310bp的DNA片段；SSR/NAU6530的正向引物序列为SEQ IDNO.9，反向引物序列为SEQ ID NO.10，在耐黄萎病品种海7124中可扩增出长度为350bp的DNA片段；SSR/NAU6431的正向引物序列为SEQ ID NO.11，反向引物序列为SEQ ID NO.12，在耐黄萎病品种海7124中可扩增出长度为420bp的DNA片段。
5.权利要求2所述的分子标记在鉴定棉花抗黄萎病的主效QTL位点qVV-D11-1中的应用。
6.权利要求2所述的分子标记在筛选或鉴定抗黄萎病棉花品种中的应用。
7.权利要求4所述的分子标记引物在筛选或鉴定抗黄萎病棉花品种中的应用。
8.权利要求1所述的棉花高抗黄萎病的主效QTL位点qVV-D11-1的分子标记方法，其特征在于利用权利要求4所述的分子标记引物对中的一对或多对引物对，对待鉴定棉花材料的DNA进行PCR扩增，扩增产物进行电泳检测，如扩增出对应大小的DNA片段，则标志着棉花高抗黄萎病的主效QTL位点qVV-D11-1。
9.权利要求8所述的分子标记方法在筛选或鉴定抗黄萎病棉花品种中的应用。
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