CN104877978B - 黑曲霉来源α-葡萄糖苷酶固体制剂的制备方法及应用 - Google Patents
黑曲霉来源α-葡萄糖苷酶固体制剂的制备方法及应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104877978B CN104877978B CN201510073096.9A CN201510073096A CN104877978B CN 104877978 B CN104877978 B CN 104877978B CN 201510073096 A CN201510073096 A CN 201510073096A CN 104877978 B CN104877978 B CN 104877978B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- aspergillus niger
- alpha
- glucosidase
- solid pharmaceutical
- preparation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 title claims abstract description 61
- 239000007787 solid Substances 0.000 title claims abstract description 56
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 title claims abstract description 43
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 27
- 108010028144 alpha-Glucosidases Proteins 0.000 title claims description 64
- 102100024295 Maltase-glucoamylase Human genes 0.000 title claims 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 38
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 24
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 23
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims abstract description 19
- 235000020429 malt syrup Nutrition 0.000 claims abstract description 17
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims abstract description 15
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 15
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 15
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims abstract description 15
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims abstract description 15
- 238000012856 packing Methods 0.000 claims abstract description 12
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 10
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims abstract description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 7
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 claims abstract description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 22
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 13
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 11
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 4
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 claims description 3
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 claims description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 3
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 claims description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 claims description 2
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 claims description 2
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 claims description 2
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 claims description 2
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 claims description 2
- 229920001592 potato starch Polymers 0.000 claims description 2
- 238000003828 vacuum filtration Methods 0.000 claims description 2
- 239000002002 slurry Substances 0.000 claims 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 3
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 abstract description 2
- 230000008676 import Effects 0.000 abstract description 2
- 102100033448 Lysosomal alpha-glucosidase Human genes 0.000 description 54
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 16
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 16
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 13
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 10
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 10
- DLRVVLDZNNYCBX-RTPHMHGBSA-N isomaltose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O1 DLRVVLDZNNYCBX-RTPHMHGBSA-N 0.000 description 9
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 9
- 150000004043 trisaccharides Chemical class 0.000 description 9
- 102000005744 Glycoside Hydrolases Human genes 0.000 description 7
- 108010031186 Glycoside Hydrolases Proteins 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 5
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 5
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 5
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 4
- 240000003183 Manihot esculenta Species 0.000 description 4
- 235000016735 Manihot esculenta subsp esculenta Nutrition 0.000 description 4
- 108010019077 beta-Amylase Proteins 0.000 description 4
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 4
- 229940099112 cornstarch Drugs 0.000 description 4
- DQJCDTNMLBYVAY-ZXXIYAEKSA-N (2S,5R,10R,13R)-16-{[(2R,3S,4R,5R)-3-{[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy}-5-(ethylamino)-6-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy}-5-(4-aminobutyl)-10-carbamoyl-2,13-dimethyl-4,7,12,15-tetraoxo-3,6,11,14-tetraazaheptadecan-1-oic acid Chemical class NCCCC[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@@H](C)NC(=O)C(C)O[C@@H]1[C@@H](NCC)C(O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 DQJCDTNMLBYVAY-ZXXIYAEKSA-N 0.000 description 2
- HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 3-[3-[3,5-dihydroxy-6-methyl-4-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]oxydecanoyloxy]decanoic acid;hydrate Chemical class O.OC1C(OC(CC(=O)OC(CCCCCCC)CC(O)=O)CCCCCCC)OC(C)C(O)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(C)O1 HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930186217 Glycolipid Chemical class 0.000 description 2
- 108010015899 Glycopeptides Chemical class 0.000 description 2
- 102000002068 Glycopeptides Human genes 0.000 description 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 2
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 2
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 2
- 229940100486 rice starch Drugs 0.000 description 2
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 1
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 108010055629 Glucosyltransferases Proteins 0.000 description 1
- 102000000340 Glucosyltransferases Human genes 0.000 description 1
- 244000017020 Ipomoea batatas Species 0.000 description 1
- 235000002678 Ipomoea batatas Nutrition 0.000 description 1
- 238000012356 Product development Methods 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 102000016679 alpha-Glucosidases Human genes 0.000 description 1
- 230000000675 anti-caries Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 150000001719 carbohydrate derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 229940111205 diastase Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- -1 farina Polymers 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003262 industrial enzyme Substances 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000003245 working effect Effects 0.000 description 1
Abstract
本发明公开一种黑曲霉来源α‑葡萄糖苷酶固体制剂的制备方法及应用,具体涉及以下工艺流程：（1）液体培养黑曲霉（Aspergillus niger）M1菌株，经离心或膜分离技术收集含α‑葡萄糖苷酶的菌丝体；（2）将上述菌丝体保持完整或经研磨后制成细胞碎片或粉末；（3）将完整菌丝体、细胞碎片或粉末经冷冻干燥或喷雾干燥后，计量，分装，即制得α‑葡萄糖苷酶固体制剂。本发明方法生产工艺简便、清洁，生产成本低；该α‑葡萄糖苷酶剂用于转化淀粉糖化液或麦芽糖浆生产低聚异麦芽糖，与采用进口酶制剂相比，可大幅度降低生产成本。
Description
技术领域
本发明属于微生物酶制剂领域，特别涉及到一种黑曲霉来源α-葡萄糖苷酶固体制剂的制备方法及其用途。
背景技术
α-葡萄糖苷酶(α-glucosidase，EC 3.2.1.20)是一种广泛存在于动、植物及微生物体内的外切型糖苷酶。它能识别并水解糖类、糖脂、糖肽等糖类衍生物或糖类类似物的非还原性端的α-(1,4)糖苷键，释放出D-葡萄糖；除了水解活力外，某些α-葡萄糖苷酶还在不同程度上具备催化转苷反应的能力，能将游离的葡萄糖残基转移到其它的糖类物质、糖类衍生物或糖类类似物受体底物上，形成新的糖类、糖脂或糖肽等，因而此类α-葡萄糖苷酶又被称作葡萄糖基转移酶(transglucosidase，D-glucosyltransferase，EC 2.4.1.24)。由黑曲霉等丝状真菌产生的α-葡萄糖苷酶能够通过其自身的转苷活力催化发酵性的糊精及低聚麦芽糖转化成非发酵性的低聚异麦芽糖，是目前低聚异麦芽糖工业生产中的关键酶。
低聚异麦芽糖(Isomaltooligosaccharides,IMO)，是由一系列聚合度为2-10的葡聚糖组成的混合物，它们的分子中均至少带有1个α-(1,6)糖苷键。IMO的理化性质相当稳定、加工性质佳、保健功能确切且在同类低聚糖产品中性价比高，目前是产量最大、应用最广、价格最有竞争力的低聚糖产品，其具有低热量、抗龋齿、促进机体肠道双歧杆菌增殖等特殊生理功能，现已广泛应用于食品、医药及保健品、饲料等行业。近年来IMO在日本的年需求量稳定保持在15,000吨以上；在我国，IMO的产销量均保持稳定增长，已突破50,000吨/年，并被列为我国“OLIGO项目”的重点推广品种之一。
目前，IMO产业在国内已初具规模，涌现了如山东保龄宝等较大的生产企业，以及数量众多的产品开发和销售企业，国内IMO的生产和消费也进入迅速增长中。但是，国内IMO的生产多采用传统的转化法工艺，生产中液化和糖化工序所使用的为国产淀粉酶制剂，但转苷反应所用的关键酶α-葡萄糖苷酶因为国内的产品技术尚不成熟，需要以大量从日本进口(产品名为Transglucosidase)。Transglucosidase的转苷能力强且性能稳定，更利于IMO产品质量的控制以及工艺优化，但其价格昂贵且供应量有限，使得国内IMO的生产成本居高不下，相当程度上阻碍了IMO的推广。因此，开发可替代日本产品的转苷酶制剂的是我国IMO产业面临的紧迫问题。国内学者为此做了很多工作，如选育产生转苷酶的菌株、确定并优化其发酵产酶的条件；具有转葡萄糖基活力相关酶基因资源的开发利用；研究酶的纯化、纯酶的性质及工业酶制剂的制备技术；开发酶或产酶微生物细胞的固定化及重复使用等应用技术。但在大量的研究工作中，仅有少数技术适用于IMO的工业化生产。
α-葡萄糖苷酶工业化生产的研究进展之所以如此缓慢，很大程度上是因为α-葡萄糖苷酶高产菌株的缺乏以及酶制剂制备技术的滞后。一方面，国内外研究人员选育获得的α-葡萄糖苷酶菌株其酶活力均较低，难以实现工业化生产；另一方面，通过基因工程手段使α-葡萄糖苷酶在大肠杆菌中高效表达，一般为胞内酶，其提取工艺复杂，酶活回收率低，也不利于工业化生产。
发明内容
本发明本发明的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种黑曲霉来源α-葡萄糖苷酶固体制剂的制备方法及其应用。
为了实现上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的：
本发明的黑曲霉来源α-葡萄糖苷酶固体制剂，有效成分为α-葡萄糖苷酶，其来源于黑曲霉(Aspergillus niger)M1菌株，其合成的α-葡萄糖苷酶为胞内酶。该黑曲霉的保藏编号CCTCC NO:M2014421，保藏日期为2014年9月23日，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏地址：湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学。
本发明利用具有自主知识产权的黑曲霉(Aspergillus niger)M1菌株，其所产α-葡萄糖苷酶为胞内酶，液体培养后经离心或膜分离技术收集含α-葡萄糖苷酶的菌丝体，将菌丝体保持完整或经研磨后制成细胞碎片或粉末，经冷冻干燥或喷雾干燥后，即制得α-葡萄糖苷酶固体制剂。该酶制剂可用于转化淀粉糖化液或麦芽糖浆生产低聚异麦芽糖。本发明不仅实现了α-葡萄糖苷酶的国产化，大大改善国内低聚异麦芽糖生产工业受制于国外企业的局面，而且可大幅度降低低聚异麦芽糖生产中的酶制剂成本。
黑曲霉来源α-葡萄糖苷酶固体制剂的制备方法包括以下步骤：
(1)液体培养黑曲霉(Aspergillus niger)M1菌株，收集含α-葡萄糖苷酶的菌丝体；方法为：以黑曲霉(Aspergillus niger)M1为发酵菌种，在30～35℃条件下在培养24h～48h后，发酵液经离心或膜分离技术收集含α-葡萄糖苷酶的菌丝体；所述膜分离技术为真空抽滤、板框过滤或超滤中的任意一种。
(2)将上述菌丝体保持完整或经研磨后制成细胞碎片或粉末。
(3)将步骤(2)中的完整菌丝体、细胞碎片或粉末经冷冻干燥或喷雾干燥。
(4)计量，分装，即得α-葡萄糖苷酶固体制剂。
本发明黑曲霉来源的α-葡萄糖苷酶固体制剂，主要应用在在转化淀粉糖化液或麦芽糖浆生产低聚异麦芽糖方面。所述的淀粉糖化液是利用薯类淀粉或谷类淀粉，例如木薯淀粉、马铃薯淀粉、红薯淀粉、玉米淀粉、小麦淀粉或大米淀粉经过α-淀粉酶或真菌淀粉酶液化，然后用β-糖化酶或真菌淀粉酶糖化制取；所述的麦芽糖浆是固形物质量百分含量5～50％的市售麦芽糖浆。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
1.自主知识产权菌株黑曲霉(Aspergillus niger)M1，与现有报道的α-葡萄糖苷酶菌株相比，其合成的α-葡萄糖苷酶为胞内酶，菌体细胞可作为其天然的固定载体，可以菌丝体、细胞碎片或粉末形式制成α-葡萄糖苷酶固体制剂，十分有利于规模化制备。
2.该α-葡萄糖苷酶固体制剂，生产工艺简便、清洁，生产成本低；该酶制剂可用于转化淀粉糖化液或麦芽糖浆生产低聚异麦芽糖，与采用进口酶制剂相比，可大幅度降低生产成本。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式并不局限于实施例表示的范围。
实施例1：黑曲霉来源α-葡萄糖苷酶固体制剂的制备方法及其应用1
(1)将产α-葡萄糖苷酶菌株黑曲霉(Aspergillus niger)M1作为菌种，32℃条件下培养36h后，发酵液经真空抽滤收集菌丝体。
(2)将菌丝体研磨后过10目筛，制成细胞碎片，经冷冻干燥后，计量、分装，即制得α-葡萄糖苷酶固体制剂。
(3)将固形物质量百分含量30％的麦芽糖浆，调节pH4.5，添加上述制得的α-葡萄糖苷酶固体制剂10％(m/v)，55℃条件下转苷反应7h，即制得低聚异麦芽糖浆，经高效液相色谱仪测定，有效三糖(IG+P+IG3)含量为62.52％。麦芽糖浆为市售产品，生产公司为肇庆焕发生物科技有限公司。
实施例2：黑曲霉来源α-葡萄糖苷酶固体制剂的制备方法及其应用2
(1)将产α-葡萄糖苷酶菌株黑曲霉(Aspergillus niger)M1作为菌种，35℃条件下培养36h后，发酵液经离心收集菌丝体。
(2)将菌丝体保持完整，经冷冻干燥后，计量、分装，即制得α-葡萄糖苷酶固体制剂。
(3)将固形物质量百分含量40％的麦芽糖浆，调节pH4.5，添加上述制得的α-葡萄糖苷酶固体制剂15％(m/v)，55℃条件下转苷反应6h，即制得低聚异麦芽糖浆，经高效液相色谱仪测定，有效三糖(IG+P+IG3)含量为69.26％。麦芽糖浆为市售产品，生产公司为肇庆焕发生物科技有限公司。
实施例3：黑曲霉来源α-葡萄糖苷酶固体制剂的制备方法及其应用3
(1)将产α-葡萄糖苷酶菌株黑曲霉(Aspergillus niger)M1作为菌种，30℃条件下培养48h后，发酵液经超滤收集菌丝体。
(2)将菌丝体研磨后过200目筛，制成细胞粉末，经喷雾干燥后，计量、分装，即制得α-葡萄糖苷酶固体制剂。
(3)将固形物质量百分含量10％的麦芽糖浆，调节pH4.5，添加上述制得的α-葡萄糖苷酶固体制剂10％(m/v)，50℃条件下转苷反应8h，即制得低聚异麦芽糖浆，经高效液相色谱仪测定，有效三糖(IG+P+IG3)含量为36.39％。麦芽糖浆为市售产品，生产公司为肇庆焕发生物科技有限公司。
实施例4：黑曲霉来源α-葡萄糖苷酶固体制剂的制备方法及其应用4
(1)将产α-葡萄糖苷酶菌株黑曲霉(Aspergillus niger)M1作为菌种，35℃条件下培养24h后，发酵液经板框过滤收集菌丝体。
(2)将菌丝体研磨后过18目筛，制成细胞碎片，经冷冻干燥后，计量、分装，即制得α-葡萄糖苷酶固体制剂。
(3)将固形物质量百分含量20％的麦芽糖浆，调节pH4.5，添加上述制得的α-葡萄糖苷酶固体制剂20％(m/v)，50℃条件下转苷反应8h，即制得低聚异麦芽糖浆，经高效液相色谱仪测定，有效三糖(IG+P+IG3)含量为49.66％。麦芽糖浆为市售产品，生产公司为肇庆焕发生物科技有限公司。
实施例5：黑曲霉来源α-葡萄糖苷酶固体制剂的制备方法及其应用5
(1)将产α-葡萄糖苷酶菌株黑曲霉(Aspergillus niger)M1作为菌种，32℃条件下培养36h后，发酵液经板框过滤收集菌丝体。
(2)将菌丝体研磨后过10目筛，制成细胞碎片，经冷冻干燥后，计量、分装，即制得α-葡萄糖苷酶固体制剂。
(3)将固形物质量百分含量50％的麦芽糖浆，调节pH4.5，添加上述制得的α-葡萄糖苷酶固体制剂20％(m/v)，55℃条件下转苷反应5h，即制得低聚异麦芽糖浆，经高效液相色谱仪测定，有效三糖(IG+P+IG3)含量为70.56％。麦芽糖浆为市售产品，生产公司为肇庆焕发生物科技有限公司。
实施例6：黑曲霉来源α-葡萄糖苷酶固体制剂的制备方法及其应用6
(1)将产α-葡萄糖苷酶菌株黑曲霉(Aspergillus niger)M1作为菌种，32℃条件下培养36h后，发酵液经离心收集菌丝体。
(2)将菌丝体研磨后过10目筛，制成细胞碎片，经冷冻干燥后，计量、分装，即制得α-葡萄糖苷酶固体制剂。
(3)将固形物质量百分含量20％的木薯淀粉糖化液，调节pH4.5，添加上述制得的α-葡萄糖苷酶固体制剂20％(m/v)，50℃条件下转苷反应8h，即制得低聚异麦芽糖浆，经高效液相色谱仪测定，有效三糖(IG+P+IG3)含量为49.66％。木薯淀粉糖化液是以木薯淀粉经α-淀粉酶液化，β-淀粉酶糖化后制取。
实施例7：黑曲霉来源α-葡萄糖苷酶固体制剂的制备方法及其应用7
(1)将产α-葡萄糖苷酶菌株黑曲霉(Aspergillus niger)M1作为菌种，32℃条件下培养36h后，发酵液经离心收集菌丝体。
(2)将菌丝体研磨后过10目筛，制成细胞碎片，经冷冻干燥后，计量、分装，即制得α-葡萄糖苷酶固体制剂。
(3)将固形物质量百分含量20％的玉米淀粉糖化液，调节pH4.5，添加上述制得的α-葡萄糖苷酶固体制剂10％(m/v)，55℃条件下转苷反应8h，即制得低聚异麦芽糖浆，经高效液相色谱仪测定，有效三糖(IG+P+IG3)含量为58.25％。玉米淀粉糖化液是以玉米淀粉经α-淀粉酶液化，β-淀粉酶糖化后制取。
实施例8：黑曲霉来源α-葡萄糖苷酶固体制剂的制备方法及其应用8
(1)将产α-葡萄糖苷酶菌株黑曲霉(Aspergillus niger)M1作为菌种，32℃条件下培养36h后，发酵液经离心收集菌丝体。
(2)将菌丝体研磨后过10目筛，制成细胞碎片，经冷冻干燥后，计量、分装，即制得α-葡萄糖苷酶固体制剂。
(3)将固形物质量百分含量25％的小麦淀粉糖化液，调节pH4.5，添加上述制得的α-葡萄糖苷酶固体制剂10％(m/v)，55℃条件下转苷反应8h，即制得低聚异麦芽糖浆，经高效液相色谱仪测定，有效三糖(IG+P+IG3)含量为52.39％。小麦淀粉糖化液是以小麦淀粉经α-淀粉酶液化，β-淀粉酶糖化后制取。
实施例9：黑曲霉来源α-葡萄糖苷酶固体制剂的制备方法及其应用9
(1)将产α-葡萄糖苷酶菌株黑曲霉(Aspergillus niger)M1作为菌种，32℃条件下培养36h后，发酵液经离心收集菌丝体。
(2)将菌丝体研磨后过10目筛，制成细胞碎片，经冷冻干燥后，计量、分装，即制得α-葡萄糖苷酶固体制剂。
(3)将固形物质量百分含量25％的大米淀粉糖化液，调节pH4.5，添加上述制得的α-葡萄糖苷酶固体制剂10％(m/v)，60℃条件下转苷反应7h，即制得低聚异麦芽糖浆，经高效液相色谱仪测定，有效三糖(IG+P+IG3)含量为55.42％。马铃薯淀粉糖化液是以马铃薯淀粉经α-淀粉酶液化，β-淀粉酶糖化后制取。
Claims (3)
1.黑曲霉来源α-葡萄糖苷酶固体制剂的制备方法，其特征在于：所述固体制剂有效成分为α-葡萄糖苷酶，其来源于黑曲霉（Aspergillus niger）M1菌株；
具体制备方法包括以下步骤：
（1）液体培养黑曲霉（Aspergillus niger）M1菌株，收集含α-葡萄糖苷酶的菌丝体；
（2）将上述菌丝体保持完整或经研磨后制成细胞碎片或粉末；
（3）将步骤（2）中的完整菌丝体、细胞碎片或粉末经冷冻干燥或喷雾干燥；
（4）计量，分装，即得α-葡萄糖苷酶固体制剂；
所述步骤（1）的具体方法为：以黑曲霉（Aspergillus niger）M1为发酵菌种，在30～35℃条件下在培养24h～48h后，发酵液经离心或膜分离技术收集含α-葡萄糖苷酶的菌丝体；所述膜分离技术为真空抽滤、板框过滤或超滤中的任意一种；
所述步骤（1）中的黑曲霉（Aspergillus niger）M1，保藏编号CCTCCNO:M2014421，保藏日期为2014年9月23日，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏地址：湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学。
2.根据权利要求1所述的黑曲霉来源α-葡萄糖苷酶固体制剂的制备方法，其特征在于：所述黑曲霉（Aspergillus niger）M1，其合成的α-葡萄糖苷酶为胞内酶。
3.权利要求l所制备的黑曲霉来源α-葡萄糖苷酶固体制剂在转化淀粉糖化液或麦芽糖浆生产低聚异麦芽糖方面的应用；
所述的淀粉糖化液是利用薯类淀粉或谷类淀粉经过α-淀粉酶或真菌淀粉酶液化，然后用β-糖化酶或真菌淀粉酶糖化制取；
所述的麦芽糖浆是固形物质量百分含量5～50%的麦芽糖浆。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510073096.9A CN104877978B (zh) | 2015-02-12 | 2015-02-12 | 黑曲霉来源α-葡萄糖苷酶固体制剂的制备方法及应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510073096.9A CN104877978B (zh) | 2015-02-12 | 2015-02-12 | 黑曲霉来源α-葡萄糖苷酶固体制剂的制备方法及应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104877978A CN104877978A (zh) | 2015-09-02 |
| CN104877978B true CN104877978B (zh) | 2018-04-27 |
Family
ID=53945657
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510073096.9A Expired - Fee Related CN104877978B (zh) | 2015-02-12 | 2015-02-12 | 黑曲霉来源α-葡萄糖苷酶固体制剂的制备方法及应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104877978B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105219665B (zh) * | 2015-10-29 | 2018-11-02 | 天津科技大学 | 一种低聚异麦芽糖的制造方法及其催化剂 |
| CN105925550B (zh) * | 2016-06-23 | 2019-06-04 | 福州大学 | α-葡萄糖苷酶及同步糖化转苷制备低聚异麦芽糖的方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2011021372A1 (ja) * | 2009-08-18 | 2011-02-24 | グリコ栄養食品株式会社 | 澱粉ゲル含有食品 |
| CN103146726A (zh) * | 2012-10-15 | 2013-06-12 | 江南大学 | 一种黑曲霉α-葡萄糖苷酶基因及其高效表达方法 |
| CN103695323A (zh) * | 2013-12-26 | 2014-04-02 | 青岛蔚蓝生物集团有限公司 | 一种稳定、高产α-转移葡萄糖苷酶的菌株 |
| CN104328096A (zh) * | 2014-10-29 | 2015-02-04 | 青岛蔚蓝生物集团有限公司 | 一种α-葡萄糖苷酶及其应用 |
-
2015
- 2015-02-12 CN CN201510073096.9A patent/CN104877978B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2011021372A1 (ja) * | 2009-08-18 | 2011-02-24 | グリコ栄養食品株式会社 | 澱粉ゲル含有食品 |
| CN103146726A (zh) * | 2012-10-15 | 2013-06-12 | 江南大学 | 一种黑曲霉α-葡萄糖苷酶基因及其高效表达方法 |
| CN103695323A (zh) * | 2013-12-26 | 2014-04-02 | 青岛蔚蓝生物集团有限公司 | 一种稳定、高产α-转移葡萄糖苷酶的菌株 |
| CN104328096A (zh) * | 2014-10-29 | 2015-02-04 | 青岛蔚蓝生物集团有限公司 | 一种α-葡萄糖苷酶及其应用 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 透性化处理提高黑曲霉细胞α-葡萄糖苷酶的表观转苷活力;陈桂光 等;《食品工业科技》;20111231(第12期);摘要、第72页右栏第1段 * |
| 黑曲霉高转苷活性α-葡萄糖苷酶的研究;张云开;《万方.中国学位论文全文数据库》;20111130;摘要 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104877978A (zh) | 2015-09-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Das et al. | Review of inulinase production using solid-state fermentation | |
| EP1736548A1 (en) | Use of corn with low gelatinization temperature for production of fermentation-based products | |
| CN103484512B (zh) | 一种固定化细胞生产高功能性三糖含量的低聚异麦芽糖的方法 | |
| CN101736058A (zh) | 一种以菊芋为原料生物转化生产甘露醇的方法 | |
| CN105524850B (zh) | 酵母菌株的扩培方法以及生产乙醇的方法 | |
| CN104630189B (zh) | 一种糖化酶普鲁兰酶复合产品及其生产方法 | |
| CN104877911B (zh) | 一种黑曲霉及其在低聚异麦芽糖生产中的应用 | |
| CN108949713B (zh) | 一种米曲霉菌体发酵液的制备方法及其在低聚果糖生产中的应用 | |
| CN103421851B (zh) | 一种用甘薯废弃物制备糖和乙醇的方法 | |
| CN104877978B (zh) | 黑曲霉来源α-葡萄糖苷酶固体制剂的制备方法及应用 | |
| CN109321471A (zh) | 一种米曲霉及其在低聚异麦芽糖生产中的应用 | |
| US8227220B2 (en) | Process for the preparation of ethanol from starch | |
| CN102649971B (zh) | 黑曲霉麸曲的培养方法以及发酵制备柠檬酸的方法 | |
| CN102277308B (zh) | 一种用于麦芽糖生产的固定化催化剂及其制备方法 | |
| Gago et al. | Assessment of waxy and non-waxy corn and wheat cultivars as starch substrates for ethanol fermentation | |
| CN105505896A (zh) | 一种转葡糖苷酶的制备方法 | |
| CN105586367A (zh) | 一种基于pH响应阶段添加糖化酶发酵生产柠檬酸的方法 | |
| CN112159828B (zh) | 一种难消化分枝状葡聚糖及其加工方法 | |
| WO2011098843A2 (en) | Lactic acid production from starch-based materials by amylolytic lactic acid bacteria | |
| CN1884563A (zh) | 一种以汽爆秸秆为原料发酵生产柠檬酸的方法 | |
| CN1333371A (zh) | 高纯度低聚木糖的酶法制备 | |
| CN105087519B (zh) | 基因工程菊粉酶及其以菊芋为原料制备结晶果糖的方法 | |
| JPS60244294A (ja) | セルロ−スから高濃度アルコ−ルを半連続的に製造する方法 | |
| CN105838757A (zh) | 一种利用甘薯废渣制备异麦芽低聚糖的生产方法 | |
| CN103820356A (zh) | 一株高产热稳定性β-葡聚糖酶的地衣芽孢杆菌 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| EXSB | Decision made by sipo to initiate substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20180427 |