CN104877925A

CN104877925A - 一种异壁放线菌和三种新的抗真菌maclafungins类化合物及其制备和应用

Info

Publication number: CN104877925A
Application number: CN201410072940.1A
Authority: CN
Inventors: 潘华奇; 胡江春; 王雪梅; 王书锦
Original assignee: Institute of Applied Ecology of CAS
Current assignee: Institute of Applied Ecology of CAS
Priority date: 2014-02-28
Filing date: 2014-02-28
Publication date: 2015-09-02
Anticipated expiration: 2034-02-28
Also published as: CN104877925B

Abstract

本发明涉及微生物和新型医药农药领域，具体为一种海洋异壁放线菌及其应用。异壁放线菌为Actinoalloteichus sp.SHA6，于2014年2月20日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC M2014041。以海洋异壁放线菌产生的maclafungin类化合物如(I)所示。本发明所得如(I)所示的maclafungins类化合物具有显著的抗真菌和杀虫作用，可作为抗菌和杀虫的理想候选化合物。所述的化合物能通过微生物发酵生产，其制备方法简单、高效，所得产物纯度高。该发明具有良好的应用前景。其中，R₁为H或CH₃；R₂为H或CH₃。

Description

一种异壁放线菌和三种新的抗真菌maclafungins类化合物及其制备和应用

技术领域

本发明涉及微生物和新型医药农药领域，具体为一种异壁放线菌和三种新的抗真菌maclafungins类化合物及其制备和应用。

背景技术

异壁放线菌属（Actinoalloteichus）是2000年日本科学家Tomohiko Tamura发现的一个新属。迄今为止一共报道了4个新种，分别为Actinoalloteichus cyanogriseus，Actinoalloteichus hymeniacidonis，Actinoalloteichus spitiensis和Actinoalloteichus nanshanensis。异壁放线菌含有丰富的次生代谢产物基因簇，从其中已经发现了新骨架生物碱cyanogrisides A-D，新化合物caerulomycins F-I和一些新的环戊烯酮。因此异壁放线菌是发现新颖活性产物的新资源。本发明提供了一个新的异壁放线菌株，具有非常强的抗菌和杀虫活性，且其能产生新颖的抗真菌和杀虫maclafungins类化合物。

Maclafungin是由印度学者Triptikumar Mukhopadhyay于1998年报道一个具有寡霉素骨架结构的新型抗真菌先导化合物，其具有极强的抗真菌活性。对Trichophyton mentagrophytes、Fusarium culmorum、Botrytis cinerea、Pyricularia oryzae、Alternaria solani抑制作用最强，Cercospora beticola、Microsporum gvpseum、Aspergillus niger、Penicillium digitatum抑制作用次之，对Candida albicans有较弱的抑制作用。Maclafungin类抗生素较为罕见，目前，该类化合物仅发现一个，因此其抗菌机理和生物合成机理尚未报道。

Maclafungin是一类在C₆-C₁₂和C₂₄的连接基团明显不同于寡霉素，但它们均为与寡霉素相似的具有二十六元环和螺环结构的大环内酯类抗生素，因此其可能具有类似于寡霉素的功能。寡霉素（oligomycins）由典型的Ⅰ型聚酮合酶催化合成，它们具有多样的生物活性，包括包括抗肿瘤活性、抗真菌活性及杀虫活性等。目前作为ATP合酶抑制剂，已被广泛应用于科学研究当中。它们作为化学试剂，价格昂贵，具有一定经济价值。因此可推测maclafungin也应该具有抗真菌、抗肿瘤和杀虫等多样的生物活性。

发明内容

本发明目的在于提供一种海洋异壁放线菌和以海洋异壁放线菌产生的maclafungin类化合物及其制备和应用。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种异壁放线菌，异壁放线菌为异壁放线菌SHA6(Actinoalloteichus sp. SHA6)，于2014年2月20日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO:M2014041。

一种以海洋异壁放线菌产生的maclafungin类化合物，其特征在于：maclafungin类化合物如(I)所示，

其中，R₁为H或CH₃；R₂为H或CH₃。

一种以海洋异壁放线菌产生的maclafungin类化合物的制备方法，

1)将异壁放线菌Actinoalloteichus sp.SHA6接种于含人工海盐的PSB培养基中发酵2-5天作为发酵种子；然后将发酵种子液于28℃培养5-10天，待用；

2)将发酵液和菌丝体固液分离，其中发酵液用大孔吸附树脂HP20吸附，吸附后经乙醇解吸回收乙醇溶剂后得maclafungin的粗提物A；菌丝体经丙酮浸提，将浸泡液减压浓缩为浸膏使用甲醇精制得到maclafungin的粗提物B；

3)将maclafungin的粗提物A和B合并，采用快速硅胶柱色谱法分离，按照二氯甲烷：甲醇(v/v)比为10:0-0:10梯度洗脱，收集体积比为10:0-2:8的二氯甲烷-甲醇(v/v)的洗脱组分，上述所得色谱流分再采用反相ODS快速色谱进行分离，按照甲醇：水(v/v)比为3:2-1:0梯度洗脱，收集体积百分比为85%-100%的甲醇水溶液洗脱液，将收集的组分再以反相HPLC进行纯化，流动相为含0.05%TFA的体积百分比85%的甲醇水溶液等度洗脱，流速为2-5ml/min;于保留时间13-23min收集组分即为如(I)所示m的aclafungin类化合物。

所述步骤3）反相HPLC进行纯化保留时间17.0-18.2min即为纯的maclafungins B（3a），保留时间18.5-19.5min即为纯的maclafungins C（3b）和保留时间20.0-21.0min即为纯的maclafungins D（3c）。

所述步骤1）将发酵种子与含人工海盐的PSB培养基按照体积比1:8-1:20的比例混合于28℃培养5-10天进行发酵。

所述步骤2）发酵液用大孔吸附树脂HP20吸附，树脂与发酵液体积比为1:15-1:30混合，混合后吸附2-？h吸附后，先用蒸馏水洗涤树脂，10-15% 乙醇除去杂质，再用100%乙醇解吸，回收乙醇溶剂后得maclafungin的粗提物A；菌丝体经丙酮浸提3次，将浸泡液减压浓缩为浸膏使用甲醇精制得到maclafungin的粗提物B；

一种以海洋异壁放线菌产生的maclafungin类化合物的应用，所述化合物可作为制备成医用、兽用或农用非治疗目的的抗真菌剂。

所述化合物可作为制备成医用、兽用或农用非治疗目的的杀虫剂。

所述化合物可作为立枯丝核菌或镰刀菌的抑菌剂。

所述化合物可作为杀卤虫剂。

本发明所具有的优点：本发明分离自深海的异壁放线菌Actinoalloteichus sp.SHA6具有较强的抗菌和杀虫作用，其能发酵产生较高含量的新颖的maclafungin类化合物，这些maclafungin类化合物均表现出较强的抗真菌活性和杀卤虫作用。它们可作为医用、兽用或者农用的抗真菌剂和杀虫剂，同时本发明所提供的制备方法简单、高效，所得产物纯度高。该发明具有良好的应用前景。

附图说明

图1为本发明实施例提供的Actinoalloteichus sp.SHA6孢子丝的扫描电镜照片。

图2为本发明实施例提供的Actinoalloteichus sp.SHA6基于其16SrRNA基因序列构建的进化树。

图3为本发明实施例提供的化合物3a(maclafungin B)的HRESIMS图。

图4为本发明实施例提供的化合物3a(maclafungin B)的2D-NMR(Bruker AV600，CDCl₃)主要相关信息。

图5为本发明实施例提供的化合物3b(maclafungin C)的HRESIMS图。

图6为本发明实施例提供的化合物3b(maclafungin C)的2D-NMR(Bruker AV600，CDCl₃)不同于3a相关信息。

图7为本发明实施例提供的化合物3c(maclafungin D)的HRESIMS图。

图8为本发明实施例提供的化合物3c(maclafungin D)的2D-NMR(Bruker AV600，CDCl₃)不同于3a相关信息。

具体实施方式

为了更好的理解本发明的内容，下面结合具体实施例作进一步说明，但本专利的保护内容不仅限于此。

实施例1深海放线菌SHA6的鉴定

放线菌SHA6，分离自中国南海-3587m的深海沉积物(17°59'48.135N，114°34'16.668E),于2014年2月20日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO:M2014041，分类学命名为异壁放线菌SHA6(Actinoalloteichus sp.SHA6)，保藏单位地址为中国.武汉.武汉大学。

菌株SHA6细胞为革蓝氏阳性，形成直长的孢子丝，孢子大小约1.0×0.7μm；在28-37℃生长良好，4℃和8℃时生长缓慢；在PDA和改良Emerson's培养基上生长良好并形成孢子丝（图1），培养时间较长时往往产生黑色素；能耐受12%浓度的NaCl，最适生长NaCl浓度为0-5%；能耐受pH6-11.6的酸碱度，最适生长pH为7-11；需氧和微需氧条件下均能生长；在液体的发酵培养基中也能形成完整的直链孢子丝。

将菌株SHA6液体培养72h后，提取总DNA，经纯化后采用通用引物进行16S rRNA基因序列的PCR扩增，PCR产物经检测、纯化后进行测序，得到16S rDNA序列如下所示，在GenBank核酸序列数据库进行相关种属序列比较，结果显示，SHA616S rRNA基因与异壁放线菌属（Actinoalloteichus）的菌株高度同源，与Actinoalloteichus hymeniacidonis的序列同源性高达99.6%。MEGA5.0构建进化树结果显示：SHA6与异壁放线菌进化关系最为密切，且与Actinoalloteichus hymeniacidonis聚在同一个进化分支上（图2），说明SHA6是异壁放线菌属的成员。因此将菌株SHA6初步鉴定为异壁放线菌属的成员。

>SHA616S rRNA

GTAGGCCCTTCGGGGTACACGAGCGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCCTGCACTTTGGGATAACCTCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATAGGACATGCCATCGCATGGTGGTGTGTGGAAAGTTCCGGCGGTGTGGGATGGGCCCGCGGCCTATCAGCTTGTTGGTGGGGTGATGGCCTACCAAGGCGACGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGCGACCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCGCAATGGGCGAAAGCCTGACGCAGCGACGCCGCGTGAGGGATGACGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTCAGCGCCGAAGAAGCGAGAGTGACGGTAGGCGCAGAAGAAGCACCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGTGCGAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGAGCTCGTAGGCGGTTTGTCGCGTCGGCTGTGAAAACCTGGGGCTTAACCCTGGGCGTGCAGTCGATACGGGCAGACTTGAGTTCGGCAGGGGAGACTGGAATTCCTGGTGTAGCGGTGAAATGCGCAGATATCAGGAGGAACACCGGTGGCGAAGGCGGGTCTCTGGGCCGATACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGGTGGGCGCTAGGTGTGGGGGATTTCCACGTCCTCCGTGCCGTAGCTAACGCATTAAGCGCCCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGTGGATTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCTGGGTTTGACATGCACCGGACAGCCTCAGAGATGGGGTTTCCGCAAGGTCGGTGTACAGGTGGTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATTCCATGTTGCCAGCACGTGATGGTGGGGACTCATGGGAGACTGCCGGGGTCAACTCGGAGGAAGGTGGGGACGACGTCAAGTCATCATGCCCCTTATGTCCAGGGCTTCACACATGCTACAATGGCCGGTACAAAGGGCTGCTAAACCGTGAGGTGGAGCGAATCCCATAAAGCCGGTCTCAGTTCGGATCGGGGTCTGCAACTCGACCCCGTGAAGTCGGAGTCGCTAGTAATCGCAGATCAGCAACGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACGTCACGAAAGTCGGTAACACCCGAAGCCCATGGCCCAACCCG

实施例2菌株SHA6发酵制备maclafungin类化合物

2.1菌种活化：将菌株SHA6用划线法接种于准备好的ISP3培养基平板上，28℃恒温培养5d；

所述ISP3培养基为：将20.0g燕麦粉用1L水煮约30min，用四层纱布过滤获得滤液，并用水补足至1L，微量元素母液1mL，琼脂20g，蒸馏水1L，pH7.2。微量元素母液（1000×）：MgSO₄·7H₂O1.0g，ZnSO₄·7H₂O1.0g，MnCl₂·4H₂O1.0g，FeSO₄·7H₂O1.0g，CoCl₂·6H₂O1.0g，CaCl₂1.0g，H₃BO₃1.0g。

2.2种子液的制备：在平板上菌株生长浓密处用打孔器取直径5mm菌块，接种于250mL三角瓶装有50mL含人工海盐的PSB培养基中，28℃180rpm恒温摇床培养72h；

所述人工海盐的PSB培养基：20.0g蔗糖糖，200g土豆浸出液，25.0g人工海盐（市购），用蒸馏水配平至1L，pH5.0～8.0。

2.3大瓶发酵：用容量为3L的三角瓶，每瓶装含人工海盐的PSB培养基0.70L，115℃灭菌30min后备用。每瓶接种种子液50mL，28℃180rpm恒温摇床培养7d；共计发酵24L。

2.4粗提物的获得：将发酵物于4000rpm离心20-30min，收集上清液，离心所得沉淀，待用；收集的上清液以每1000mL上清液中加入60mL湿HP20大孔吸附树脂，在摇床上以180rpm处理2h，处理后再以清水洗涤HP20并弃去洗涤液，然后用15%乙醇洗脱并弃去溶媒，最后用100%乙醇洗涤数次并收集洗脱液，至大孔树脂接近初始颜色为止，将得到的洗脱液减压蒸馏、冷冻干燥，即得发酵液粗提物A。

上述离心所得的菌体沉淀用丙酮超声提取3次，同样经减压蒸馏并冷冻干燥得到粗提物B。合并粗提物A和B，并加入纯MeOH溶液150-200mL，超声10-20min使其尽量完全溶解，然后静止10min以上，待固液分离后将MeOH精制的上清液吸取至另一圆底烧瓶，经减压浓缩后获得5.27g提取物，即为maclafungin类抗生素粗提物。

2.5快速硅胶柱色谱分离：

首先将合并后maclafungin类抗生素粗提物与硅胶质量比约为1:2的比例拌样，减压蒸馏至完全干燥。同时准备好500-600目柱层析硅胶柱。完成干法上样后，按照二氯甲烷/甲醇体系进行梯度洗脱分离（v/v10:0-0:10）。收集体积比为10:0-8:2的二氯甲烷-甲醇(v/v)洗脱下的洗脱组分，获得777mg含maclafungin类化合物的色谱流分。

2.6快速ODS柱色谱和HPLC分离：

将上述流分采用快速ODS色谱柱分离，按照甲醇：水(v/v)比为3:2-1:0梯度洗脱，收集体积百分比为9:1-10:0的甲醇水溶液洗脱液，将收集的185mg组分再以反相HPLC进行纯化，分别于保留时间17.1、18.9、20.5min收集3个色谱峰获得纯的maclafungins B（3a，46mg）、C（3b，16.6mg）和D（3c，28.4mg）。HPLC条件为：色谱柱规格为10mm×250mm；流速2.5ml/min;检测波长220nm；流动相为含0.05%TFA的体积百分比85%的甲醇水溶液等度洗脱;

实施例3Maclafungin类化合物的结构解析

Maclafungin B（3a）：白色粉末，HR-ESI-MS显示（图3）：m/z781.5617[M+H]⁺（Calcd.for C₄₄H₇₇O₁₁，781.5466）和m/z803.5490[M+Na]⁺（Calcd.for C₄₄H₇₆O₁₁Na，803.5285），推断其分子式为C₄₄H₇₆O₁₁，其不饱和度为7。

化合物3a的¹H NMR（600MHz，CDCl₃）（表1）谱中给出6个甲基信号δ_H1.22（3H，d，J=6.1Hz），1.14（3H，d，J=6.4Hz），0.90（3H，d，J=7.1Hz），0.85（3H，d，J=6.9Hz），0.80（3H，t，J=7.4Hz），0.74（3H，d，J=6.8Hz）；1个甲氧基信号δ_H3.35（3H，s）；3对反式双键信号δ_H6.57（1H，dd，J=15.6，10.2Hz），7.77（1H，d，J=15.6Hz），6.08（1H，dd，J=14.3，10.7Hz），5.41（1H，m），5.92（1H，dd，J=14.8，10.7Hz），5.33（1H，dd，J=14.8，9.8Hz）；多个连氧碳上的质子信号（信号重叠多），如δ_H4.05，4.03，3.79，3.74，3.64，3.54，3.42等。¹³C NMR（150MHz，CDCl₃）（表1）谱中给出44个碳信号包括1个酯羰基碳信号δ_C165.14，6个烯碳信号δ_C150.03，137.39，132.01，130.91，130.22，121.94，1个缩酮碳信号δ_C97.35，10个连氧的碳信号δ_C80.81，80.38，78.62，74.98，73.99，71.07，70.34，67.42，64.64，62.63，1个甲氧基碳信号δ_C55.75。结合分子式给出的不饱和度，除去1个羰基和3个双键，化合物3a应该是含有三环的大环内酯类化合物。其应该具有oligomycins相似的骨架结构。进一步¹H-¹H COSY谱和HMBC谱确定了C-36—C-6—C-12—C-37片段和C-23—C-24—C-40—C-41—C-42片段（图4）。因此命名化合物3a为新的maclafungin类抗生素maclafungin B。

Maclafungin C（3b）：白色粉末，HR-ESI-MS显示（图5）：m/z793.5445[M-H] ^－（Calcd.for C₄₅H₇₇O₁₁，793.5466）和m/z795.5527[M+H]⁺（Calcd.for C₄₅H₇₉O₁₁，795.5622），推断其分子式为C₄₅H₇₈O₁₁，其不饱和度为7。

化合物3b的¹H NMR（600MHz，CDCl₃）（表1）谱中给出7个甲基信号，3组反式双键信号，以及多个连氧碳上的质子信号（信号重叠多）。¹³C NMR（150MHz，CDCl₃）谱中给出45个碳信号包括1个酯羰基，6个烯碳，1个缩酮碳，10个连氧的碳，1个甲氧基碳。化合物3b显示了与3a相似¹H NMR和¹³C NMR谱，所不同的是3a中1个连氧碳信号δ_C62.63消失，由3b的连氧碳信号δ_C68.51取代（表1），而且3b比3a多一个甲基信号δ_H1.08（3H，d，J=6.1Hz）。¹H-¹H COSY谱显示，δ_H1.92（1H，m，H-24）与1.37/1.34（2H，m，H-40）相关，δ_H3.65（1H，m，H-42）与1.41/1.34（2H，m，H-41）和1.08（3H，d，H-43）相关。HMBC谱中δ_H3.78（1H，m，H-23），5.28（1H，m，H-25），3.65（1H，m，H-42）同时与δ_C17.74（C-40）相关，δ_H1.08（3H，d，H-43）与δ_C40.49（C-41）和68.51（C-41）相关（图6）。这数据表明，C-24位连接有3-羟基正丁基，这一基团与化合物3a的羟丙基不同。其他部分的¹H-¹H COSY和HMBC的相关均与3a一致。因此命名化合物3b为新的maclafungin类抗生素maclafungin C。

Maclafungin D（3c）：白色粉末，HR-ESI-MS显示（图7）：m/z795.5548[M+H] ⁺（Calcd.for C₄₅H₇₉O₁₁，795.5622）和m/z817.5344[M+Na]⁺（Calcd.for C₄₅H₇₈O₁₁Na，817.5442），推断其分子式为C₄₅H₇₈O₁₁，其不饱和度为7。

化合物3c的¹H NMR（600MHz，CDCl₃）（表1）谱中给出6个甲基信号，3组反式双键信号，以及多个连氧碳上的质子信号（信号重叠多）。¹³C NMR（150MHz，CDCl₃）（表1）谱中给出45个碳信号，其中包括1个酯羰基，6个烯碳，1个缩酮碳，10个连氧碳，1个甲氧基碳。化合物3c显示了与3a非常相似的¹H NMR和¹³C NMR谱，所不同的是3a中1个连氧碳δ_C64.64消失，由3c中连氧碳δ_C69.83取代（表1）。¹H-¹H COSY谱显示，δ_H0.96（3H，t，H-35）与1.52（1H，m，H-34）相关，δ_H3.65（1H，m，H-33）与1.52/1.47（2H，m，H-34）和1.25（1H，m，H-32）相关，δ_H1.64（1H，m，H-32）与4.01（1H，brd，H-31）相关，表明存在C-33—C-34—C-35羟异丙基结构片段。HMBC谱中δ_H0.96（3H，t，C-35）与δ_C31.00（C-34）和69.83（C-33）远程相关，δ_H1.52（1H，m，H-34）与δ_C69.83（C-33）远程相关，δ_H4.01（1H，brd，H-31）和1.64（1H，m，H-32）分别δ_C69.83（C-33）和67.56（C-31）远程相关，进一步确定了上述片段的正确性。其余部分的¹H-¹H COSY和HMBC的相关均与化合物3a相同。因此命名化合物3c为新的maclafungin类抗生素maclafungin D。

Table1.化合物SHA6-3a,3b,3c（maclafungins B-D）的¹H和¹³C NMR(CDCl₃)归属

实施例4活性产物生物活性的测定

采用纸-琼脂片扩散实验（paper-agar disk diffusion assay）测定了化合物maclafungins B-D对丝状真菌的抑制活性。首先将立枯丝核菌或黄瓜枯萎病菌等病原真菌活化后用打孔器打9mm菌块，接种到PDA平板中央，28℃恒温培养，待菌落生长至直径大于2cm时，将纯化的化合物maclafungins B-D分别配制成浓度为1mg/mL的甲醇溶液。用滤纸片法测定抗真菌活性，上样量为10μL，滤纸片直径为8mm，等滤纸片上甲醇挥发完全后将载有样品的滤纸片放置在距离病原菌菌丝2-3mm的琼脂平板上。继续28℃恒温培养至病原真菌生长至铺满整个平板时记录抑菌圈的直径大小，抑菌圈直径越大则说明该菌株的抗真菌的活性越强。实验结果表明，3 个化合物都表现出良好的抗真菌活性，抑菌圈直径均超过17mm（表2）。因此maclafungins可作为抗真菌活性先导化合物。

采用卤虫生物检测法(brine shrimp assay，BSA)评价化合物maclafungins B-D的杀虫活性。具体操作：首先将上述实施例制备所得化合物用灭菌的人工海水配制成终浓度分别为200、100、50、25、12.5、6.23μg/ml的水溶液，按照每孔100μl分别加到灭菌的96孔聚苯乙烯板中，每个浓度三个重复。以灭菌的人工海水为空白对照。然后将预先孵化好的卤虫液加入各96孔板中，使每孔中卤虫数为10-20只，体积为200μl。室温放置24h，用双目解剖镜观察，记录卤虫死亡数。将卤虫全部死亡时的浓度定为该化合物的最小杀灭浓度。结果如表2所示，3个化合物都表现出较好的杀虫活性，它们对卤虫的最小杀灭浓度相当，均达50μg/ml。

表2.Maclafungin类化合物抗真菌和杀虫活性

Claims

1.一种异壁放线菌，其特征在于：异壁放线菌为Actinoalloteichus sp.SHA6，于2014年2月20日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC M2014041。

2.一种权利要求1所述的以海洋异壁放线菌产生的maclafungin类化合物，其特征在于：maclafungin类化合物如(I)所示，

其中，R₁为H或CH₃；R₂为H或CH₃。

3.一种权利要求2所述的以海洋异壁放线菌产生的maclafungin类化合物的制备方法，其特征在于：

4.按权利要求3所述的以海洋异壁放线菌产生的maclafungin类化合物的制备方法，其特征在于：所述步骤3）反相HPLC进行纯化保留时间17.0-18.2min即为纯的maclafungins B（3a），保留时间18.5-19.5min即为纯的maclafungins C（3b）和保留时间20.0-21.0min即为纯的maclafungins D（3c）。

5.按权利要求3所述的以海洋异壁放线菌产生的maclafungin类化合物的制备方法，其特征在于：所述步骤1）将发酵种子与含人工海盐的PSB培养基按照体积比1:8-1:20的比例混合于28℃培养5-10天进行发酵。

6.按权利要求3所述的以海洋异壁放线菌产生的maclafungin类化合物的制备方法，其特征在于：所述步骤2）发酵液用大孔吸附树脂HP20吸附，树脂与发酵液体积比为1:15-1:30混合，混合后吸附2-？h吸附后，先用蒸馏水洗涤树脂，10-15%乙醇除去杂质，再用100%乙醇解吸，回收乙醇溶剂后得maclafungin的粗提物A；菌丝体经丙酮浸提3次，将浸泡液减压浓缩为浸膏使用甲醇精制得到maclafungin的粗提物B。

7.一种权利要求2所述的以海洋异壁放线菌产生的maclafungin类化合物的应用，其特征在于：所述化合物可作为制备成医用、兽用或农用非治疗目的的抗真菌剂。

8.一种权利要求2所述的以海洋异壁放线菌产生的maclafungin类化合物的应用，其特征在于：所述化合物可作为制备成医用、兽用或农用非治疗目的的杀虫剂。

9.权利要求7所述的以海洋异壁放线菌产生的maclafungin类化合物的应用，其特征在于：所述化合物可作为立枯丝核菌或镰刀菌的抑菌剂。

10.权利要求8所述的以海洋异壁放线菌产生的maclafungin类化合物的应用，其特征在于：所述化合物可作为杀卤虫剂。