CN104854455A - 筛选分子群的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种筛选分子群的方法，其包含检测所述分子群是否对介质具有结合特异性。本发明还提供一种筛选细胞内或细胞上的生物标记群的方法、一种包含所述分子群的组合物、一种递送治疗剂的方法和一种诊断个体状态的方法。

Description

筛选分子群的方法
技术领域
本发明涉及一种筛选分子群的方法。更具体说来，本发明涉及一种筛选分子群的方法，所述分子对某些令人感兴趣的标记具有高选择性。
背景技术
所有的生物反应都需要分子间的相互作用。抗体与抗原间以及配体与受体间的相互作用对于因外在刺激而起始一连串的路径十分关键。辨识相互作用中所涉及的特异分子对于研究及制药发展非常重要。
举例来说，在人类基因组计划完成后，大多数人类表达基因已得到辨识。然而，在新兴的蛋白质组学纪元中，蛋白质在这些所揭露的基因中起重要作用。为了可有效地破解这些蛋白质的谜团，已做了许多努力以产生针对人类基因组中的每一种人类表达基因的至少一种抗体。抗体因其固有的敏感性及特异性，而成为研究其一对一关系的标靶蛋白质时最多功能的工具。然而，错综复杂的其中一个原因在于，当放置于不同的细胞(如癌细胞)中时，这些蛋白质并非永远以相同的方式表达。许多蛋白质已知在不同的细胞环境中具有易位能力，因此，其对应的抗体在给定的细胞中可辨识独特的位置。此外，在许多情况下，蛋白质易位与癌细胞的活化相关。在未来，检测这些活动可能帮助诊断癌症的类型与阶段。在细胞膜上直接筛选抗原的高通量方法可能发现潜在的治疗标靶以及新的疾病标记。
然而，即使已生成了许多有用的抗体，仍有两方面的主要限制，即(1)如何在给定的细胞中直接发现特异性抗原(如膜或表面标记)，及(2)如何快速地识别可识别这些抗原的有用的抗体。
以膜结合蛋白为例，许多膜结合蛋白与特定的疾病状态(如肺癌)相关联，且常成为引人注意的治疗标靶。膜结合蛋白的系统性与定量分析可增进我们了解其在不同的疾病状态中，调控生物程序所扮演的角色。在最常被定序的基因组中，估计约有20到30％的开放阅读框架编码完整的膜结合蛋白(布朗德J.(Blonder，J.)等人，富集完整膜蛋白以使用液相色谱-串联质谱法进行蛋白质组学分析(Enrichment of integral membrane proteinsfor proteomic analysis using liquid chromatography-tandem mass spectrometry).蛋白质组学研究杂志(Journal ofProteome Research)，2002.1(4)：第351-360页；韩D.K.(Han，D.K.)等人，使用同位素编码的亲和标签和质谱法对分化诱导的微粒体蛋白进行定量图谱化(Quantitative profiling of differentiation-induced microsomal proteins using isotope-codedaffinity tags and mass spectrometry).自然生物技术(Nature Biotechnology)，2001.19(10)：第946-951页)。然而，由于少量的膜结合蛋白，膜结合蛋白质组尚未被图谱化且仍具实验挑战性。此外，利用高通量的蛋白质组学以及以基因芯片为基础的筛选研究，所辨识出的新颖标靶常常缺乏抗体来确立其位置及功能，进一步阻碍了研究者研究潜在的膜结合蛋白。直接表达分析方法来识别抗体及辨识受体(表面标记或膜结合蛋白)为必要的。
因生理条件的不同，造成随机筛选很耗时且常常不可行。使用单独抗体来筛选新的受体也不可能，因为其必须要有超过25000种抗体来适用整个基因组。此外，癌细胞常常具有多种过度表达的受体且同样的标靶蛋白在不同的细胞类型可能有不同的位置布置。因此，有必要开发一种快速且有效的方法，在同一时间中解决这些问题。
发明内容
本发明提供了一种小群体表达筛选以筛选对令人感兴趣的特定生物标记具高度选择性的分子群。
本发明提供了一种筛选分子群的方法，包含检测所述分子群是否对介质具有结合特异性。
本发明另外提供一种筛选细胞内或细胞上的生物标记群的方法，其包含上述的方法，其中所述分子群为所述生物标记群。
本发明另外提供一种组合物，其包含由上述方法所筛选出的一群分子。
本发明另外提供一种递送治疗剂的方法，包含投与上述组合物至细胞或个体。
本发明另外提供一种诊断个体状态的方法，其包含提供生物样本；使上述组合物与所述生物样本接触；和辨识所述组合物是否与所述生物样本结合，其中所述结合的存在意指所述个体患有所述状态。
本发明将在以下段落中详细描述，本发明的其它特征、目的和优点可由以下实施方式和权利要求书显而易见。
附图说明
图1：脂质体/PEI/PEG复合物(LPPC)吸附抗体-标靶癌细胞的示意图。抗体与DiO-标记的LPPC混合，接着以PEG1500阻断。PEG-阻断LPPC/抗体复合物是与细胞培育(如A549)，且接着以FACScan流式细胞仪分析以测定其结合至细胞表面的效能。每个样本的荧光平均值以阳性对照组(细胞上有100％DiO-标记LPPC)及阴性对照组(未结合抗体)标准化。每个样本的荧光平均值先除以阳性对照组的荧光平均值，接着，所述标准化的值再除以阴性对照组的荧光平均值。
图2：以抗体为基础的脂质体用于药物筛选的示意图。总计450种抗体分为50个群，以用于形成脂质体/抗体(LPPC/抗体)复合物。为了筛选抗体结合至细胞表面的效能，50个LPPC/抗体复合物在4℃下与不同的癌细胞系培育。与细胞表面具有高结合效能的LPPC/抗体复合物优先以FACScan流式细胞仪进行分析。自选定群(如3A群)中的单独抗体，接着LPPC培育并继以FACScan分析，以测定其结合至细胞表面的效能。免疫荧光法则做为二级筛选以确定选定标靶的亚细胞(subcellular)定位。
图3：脂质体-调节抗体群的筛选以辨识不同癌细胞系内特异性受体。50个单独抗体群与DiO-标记LPPC混合，接着以三种不同细胞系(A549、HT29和MCF7)培育并以FACScan流式细胞仪分析。5个群(2G、2I、3A、3B和Y1C群)相较于其它抗体群展现了优选的结合效能。这些群再次分为单独抗体以测试它们对LPPC的结合效能，如图4到7所示。所述“细胞”意指未受DiO染色的单独细胞，“NC Ab”意指LPPC上的未结合抗体。
图4：确认在3B群中优先蛋白的亚细胞定位。(A)使用LPPC/抗体复合物系统，以三种不同的癌细胞测试3B群中的单独抗体。这些所选择的抗体中有许多经进一步以免疫荧光法确认其亚细胞定位。(B)3B-4(MAPK8，红色)位于HT29细胞(结肠癌细胞)的细胞膜上，但在A549细胞(肺癌细胞)中并无。
图5：确认在2G群中优先蛋白的亚细胞定位。(A)使用LPPC/抗体复合物系统，以三种不同的癌细胞测试2G群中的单独抗体。这些所选择的抗体中有许多经进一步以免疫荧光法确认其亚细胞定位。(B)2G-4(NU98，红色)位于A549细胞的细胞膜上，2G-7(MAG1A9，红色)位于A549和HT29细胞的细胞膜上。
图6：确认在2I群中优先蛋白的亚细胞定位。(A)使用LPPC/抗体复合物系统，以三种不同的癌细胞测试2I群中的单独抗体。这些所选择的抗体中的两个(2I-3及2I-6)进一步以免疫荧光法确认其亚细胞定位。(B)2I-3(PIK3R4，红色)和(C)2I-6(NPR2，红色)位于MCF7细胞的细胞膜上。
图7：确认在Y1C群中优先蛋白的亚细胞定位。(A)使用LPPC/抗体复合物系统，以六种不同的癌细胞测试Y1C群中的单独抗体。这些所选择的抗体中有许多经进一步以免疫荧光法确认其亚细胞定位。(B)Y1C-4(SPAG5，红色)位于Mahlavu(肝细胞癌细胞)和MCF7(乳腺癌细胞系)的细胞膜上，但在A549细胞(肺癌细胞系)、肝细胞和Huh7(肝细胞癌细胞)中并无。(C)Y1C-5(POLR2A，红色)位于A549细胞的细胞膜上。
具体实施方式
本发明提供了一种筛选分子群的方法，所述方法包含检测所述分子群是否对介质具有结合特异性。
本文中术语“分子”意指一种涉及生物化学反应的小分子或大分子。优选地，所述分子为大分子，如蛋白质、肽、核酸、寡核苷酸或多核苷酸。所述分子可为天然或人造分子。另一方面，所述分子可经纯化或与其它成分混合。在本发明的一个优选实施例中，所述分子在正常状态和非正常状态(如疾病)下有不同的表达型态。在本发明的另一优选实施例中，所述分子在不同的细胞型态下有不同的表达型态。在本发明的又一优选实施例中，所述分子为抗体、抗原、酶、底物、配体、受体、膜结合蛋白或细胞表面标记。在本发明的其它优选实施例中，所述分子为抗体。
本发明中术语“分子群”意指分子的群组，其中所述分子可为相同或不同的。
本发明中术语“介质”意指一种涉及生物化学反应的小分子或大分子。优选地，所述介质为大分子，如蛋白质、肽、核酸、寡核苷酸或多核苷酸。所述介质可为天然或人造介质。另一方面，所述介质可经纯化或与其它成分混合。优选地，所述介质位于细胞内或细胞上。在本发明的一个优选实施例中，所述分子在正常状态和非正常状态(如疾病)下有不同的表达型态。在本发明的另一优选实施例中，所述分子在不同的细胞型态下有不同的表达型态。在本发明的又一优选实施例中，所述分子为抗体、抗原、酶、底物、配体、受体、膜结合蛋白或细胞表面标记。在本发明的其它优选实施例中，所述分子为抗原。
本发明中术语“结合特异性”意指一种特性，即便有不同的分子出现，仅具有互补于活性区域的特异形状的分子者可结合于所述介质的活性区域。
为了便于操作，所述分子群优选位于载体上。使所述分子定位的方式可为自然发生或使所述分子群人工地结合于所述载体。根据所述载体及所述分子的型态，本发明所属技术领域的技术人员可选择适合的方式来达成所述结合。例如，美国专利第US 7,880,882号揭示了一种制备抗体或抗体片段标靶的阳离子免疫脂质体或聚合物复合物。此揭露内容是以引用的方式并入本文中。在本发明的一个实施例中，所述载体是脂质体、微胶粒(micelle)、定时释放胶囊、微脂粒、微球体、纳米颗粒、聚复合物或细胞；优选为脂质体。
大多数当前可获得的脂质体是由标靶分子共价地结合于脂质成分(如胆固醇或聚合物修饰的脂质侧链)制备而得。所述偶联反应可能会剧烈地损害某些标靶分子的活性(纳博思L.(Nobs，L.)等人，用于连接标靶配体到脂质体和纳米颗粒的当前方法(Currentmethods for attaching targeting ligands to liposomes and nanoparticles).药物科学杂志(Journal ofPharmaceutical Sciences)，2004.93(8)：第1980-1992页；科奇贝克P.(Kocbek，P.)等人，使用经单克隆抗体修饰的PLGA纳米颗粒表面靶向癌细胞(Targeting cancer cellsusing PL GA nanoparticles surface modified with monoclonal antibody).控制释放杂志(Journal ofControlled Release)，2007.120(1-2)：第18-26页)。一种避免这一问题的方式是使用非共价粘附所述标靶分子到所述阳离子脂质体。然而，所述标靶分子由所述脂质体的解离所带来的另外一个问题为影响所述脂质体的活性(纳博思L.等人)。这主要是因为所述标靶分子与所述脂质体之间的微弱相互作用。目前，已发展出一种脂质体载体，即LPPC(脂质体/PEI/PEG复合物)，其不仅可便利地载入抗肿瘤药物，而且可强烈地在其表面吸附肿瘤特异性抗体，使所述粒子可针对所述癌细胞(刘Y.K.(Liu，Y.K.)等人，含有聚乙烯亚胺和聚乙二醇的脂质体的独特且有效蛋白结合性质：一种不可移位特性(A uniqueand potent protein binding nature of liposomes containing polyethylenimine and polyethyleneglycol：a nondisplaceable property).生物技术与生物工程(Biotechnology andBioengineering)，2011.108(6)：第1318-1327页)。此外，所述LPPC也可通过离心而分离，使所述LPPC/抗体复合物可由未结合的抗体中轻易纯化出。空的LPPC可轻易地与荧光染料结合以形成荧光纳米颗粒，当所述荧光LPPC吸附到特异抗体，而提供发展为特异性探针的潜力。
如本文所使用，所述细胞优选为正常细胞、癌细胞、干细胞或癌症干细胞。所述分子与所述介质间的特异性结合优选是发生在处于生理条件下或活体内的细胞中。
为了便于操作，所述载体优选包含可检测的标记。根据载体或所述可检测的标记的型态，本发明所属技术领域的技术人员可选择合适的方式以标记所述载体到可检测的标记。在本发明的一个优选实施例中，所述可检测的标记是荧光或放射性同位素。
为了应用所述方法，根据本发明的其它方面，如药物递送，所述载体优选地进一步包含至少一种药物、细胞毒性药物、生长因子、细胞因子、疫苗和寡核苷酸。
优选地，本发明的方法进一步包含辨识所述分子。本发明所属技术领域的技术人员可应用适当的化学、物理或生物分析以辨识所述分子。
在本发明的一个优选实施例中，所述方法包含下列步骤：
(a)提供候选分子群；
(b)将所述候选分子群分为多个子群；
(c)将每一子群装载于载体以形成复合物；和
(d)将(c)步骤的所述复合物与介质接触以检测所述子群是否包含对所述介质具结合特异性的分子，由此筛选出所述分子群。
本文中术语“候选分子”意指分子群，其是被怀疑为本发明所寻找的分子。所述候选分子群可为天然萃取或人工组合的，如可表达抗体的杂交瘤细胞群。
步骤(d)的接触状态优选为相当于生理状态者。本发明所属技术领域的技术人员可选择适合的状态。
在本发明的一个优选实施例中，所述方法进一步包含在步骤(b)后，所述子群分离为进一步的子群。此步骤以及步骤(b)和(c)和(d)可重复进行以缩小群中的分子数量。
优选地，步骤(d)进一步包含将(c)步骤的所述复合物与细胞接触以检测所述复合物是否与所述细胞结合，其中所述介质是位于细胞内或细胞上。如本文中所使用，所述细胞优选为正常细胞、癌细胞、干细胞或癌症干细胞。所述分子与所述介质间的特异性结合优选是发生在处于生理条件下或活体内的细胞中。
优选地，所述步骤(d)进一步包含将(c)步骤的所述复合物与细胞接触以检测所述复合物是否毒杀所述细胞，其中所述介质是位于细胞内或细胞上。如本文中所使用，所述细胞优选为癌细胞。
根据本发明，提供所述小群概念以辨识“混合抗体群(mixed-pool antibodies)”以揭露给定细胞中(如癌细胞或干细胞)过度表达的新受体。其根本的概念是将全部的抗体库进一步细分成更小的群以实质上在给定的癌细胞型态中增加检测到潜在受体(表面标记或膜结合蛋白)的可能性。当候选群抗体经辨识后，这种方法可以更容易地迅速分离单一的抗体；此外，不像其它蛋白质组学和基于微阵列的筛选研究，那些所辨识的标靶往往缺乏用以展现其在细胞膜上位置所必要的抗体，本发明的方法辨识了新颖的抗体辨识受体且可立即地运用于各种应用中。
本发明还提供了一种筛选细胞内或细胞上的生物标记群的方法，其包含如上所述的方法，其中所述生物标记为肿瘤特异性抗原、膜结合蛋白或细胞表面标记。
本发明还提供一种组合物，其包含群分子，其中所述群分子是由如上所述的方法所筛选者。
本发明还提供一种递送治疗剂的方法，包含投与如上所述的组合物到细胞或个体。
本发明还提供了一种诊断个体状态的方法，其包含提供生物样本；使上述组合物与所述生物样本接触；和辨识所述组合物是否与所述生物样本结合，其中所述结合的存在意指所述个体患有所述状态。
优选地，所述生物样本为癌细胞、癌症干细胞、肿瘤切片或培养组织。
优选地，所述个体为人类。
本发明的方法具有许多潜在的应用。在本发明的一个实施例中，所述筛选是通过比较正常细胞和病变细胞来辨识疾病相关受体的表达差异，通过脂质体与一个或多个抗体偶联，所述肿瘤细胞可接收与正常组织相比的相对高剂量的药物，而提供了另一种治疗策略。所述辨识出的受体可用于药物递送，例如，通过脂质体递送。
在本发明的另一实施例中，可在不同的情况下执行特异性细胞表面抗原的辨识。例如，这种方法可以用于在干细胞研究中辨识表面标记，所述干细胞例如间质干细胞(MSC)、神经干细胞(NSC)、多能干细胞和癌症干细胞，并确定细胞类型特异的分化标记。所述单一或多个所辨识的表面标记可用于从不同类的细胞群中识别且分离出感兴趣的细胞(或子群组)。换句话说，所述所辨识的细胞表面标记可用于通过如流式细胞仪的方式来分析和分选细胞。
在本发明的又一实施例中，本方法是由肽或噬菌体所产生的单克隆或多克隆抗体的大集合中，快速地辨识潜在受体(表面标记或膜结合蛋白)。在一般的情况下，缺乏一种系统的分析方法从这些抗体存货中发现潜在受体。而使用此基础小抗体群表达筛选，可以在短时间内筛选数千种抗体。
现以下列实例详细说明本发明，但不意味本发明仅局限于这些实例所揭示的内容。
实施例
方法
以LPPC/抗体复合物培有细胞
在此实施例中，将LPPC(脂质体/PEI/PEG复合物)以绿色荧光染料DiO标记30分钟。接着，将20μg的Dio-标记LPPC与1μg的含9种抗体的抗体群培育30分钟。LPPC/抗体复合物接着以PEG1500阻断30分钟并在5,900×g下离心5分钟以去除多余PEG。最后，PEG-阻断的LPPC/抗体复合物与3×105个细胞培育30分钟使其与细胞表面上的抗原结合。以FACScan流式细胞仪测量结合效能。每个样本的荧光平均值以阳性对照组(细胞上有100％DiO-标记LPPC者)以及阴性对照组(未结合抗体者)进行标准化。各样本的荧光平均值先除以阳性对照组的荧光平均值，接着，所述标准化的值再除以阴性对照组的荧光平均值；阈值是3倍变化者分类为阳性结果。
免疫荧光法
为了表征选定蛋白质的定位，利用抗体通过免疫荧光法为细胞染色。将细胞以磷酸盐缓冲液(PBS)清洗并以3.7％于PBS中的甲醛在25℃下固定5分钟，接着以PBS清洗3次，10分钟。将细胞以包含0.5％Triton X-100的PBS通透5分钟，并以5％正常山羊血清阻断30分钟。这一经固定的细胞以在PBS中包含原发抗体(例如SPAG5)和1％正常山羊血清在4℃下杂合过夜。以4，6-二脒基-2-苯基吲哚(4，6-diamidino-2-phenylindole，DAPI，2μg/mL)染色DNA。续以Olympus LSM Fluoview FV1000共焦激光扫描式显微镜(Olympus)取得免疫荧光法细胞图像。
结果
建立LPPC/抗体复合物用于筛选新颖受体和膜结合蛋白
LPPC/抗体复合物可容易地自未结合的抗体中纯化。此外，空的LPPC可容易地载入荧光染料而形成荧光纳米颗粒，而所述荧光LPPC吸附特异性抗体后，提供了发展特异性探针的潜力。所述抗体/荧光LPPC复合物不需要化学结合就可作为一种检测表面抗原的优良工具。通过FACScan流式细胞仪测量其结合效能(图1)。这些过程可简单进行且是在一个小试管内完成，且所述结果表明，本发明的方法用于辨识新的受体和/或膜结合蛋白是可行的。
用于辨识癌症特异性受体和/或膜结合蛋白的小抗体群表达筛选
本发明打算解决的问题为是否通过抗体筛选来辨别受体(表面标记或膜结合蛋白)。为了证明这个想法的可行性，首先收集450种抗体。接着，在载入LPPC之前，随机选择每9种抗体且混合在一起为一群，总共有50个LPPC-抗体群，并与3种不同的细胞系肺癌(A549)、结肠癌(HT29)和乳腺癌(MCF7)细胞进行初步培养。所述抗体-LPPC复合物接着进行FACScan分析(图2)。基于初步筛选的结果，许多群，包含3A、3B、Y1C、2I和2G群，相较于其它群在癌细胞试验分析上显示了较高的膜结合能力(图3)。使用GO(细胞成分)以及PubMed搜寻，仔细检查这5个选定群中每个抗体的亚细胞位置，我们发现这5个选定群各包含已知的膜结合蛋白，当然，会有更优选的膜结合效能。然而，2I群在细胞系试验中出现不同的结合效能(例如，在HT29细胞中相较A549和MCF7细胞有更高的结合效能)，具有不同抗体可能在不同的细胞中可辨识测试蛋白中的不同定位的可能性。因此，我们假定，我们可由这5个选定进一步研究的群中，使用各群中的单独抗体辨识出新的受体和/或膜结合蛋白(图4-7)。因此，在进行第一次筛选之后，由阳性群(如3A)中的9个单独抗体进行测试，通过将其再次加载于荧光LPPC上以确定哪些抗体是癌细胞的潜在受体(或膜结合蛋白)(图2)。由这5个群中的几个抗体，如3A-9(或PDGFRB)和Y1C-4(或SPAG5)(表1)，不仅重新发现为已知受体，还展现可辨识在癌细胞中潜在的膜结合蛋白的可能性。
由小群筛选出特定优先蛋白的亚细胞定位
几种已知的受体在此次筛选中重新被发现，如3A-9(或PDGFRB，见表1)和3B-7(或KRAS2，见表1)。此外，许多抗体展现对于不同的细胞系有不同的亲和力。例如，Y1C-5在A549和HT29细胞中相较于在MCF7细胞中有较高的亲和力，而Y1C-4在MCF7细胞中相较于A549和HT29细胞，有较高的亲和力。为了进一步验证这些观察结果，我们建立了一个二级免疫荧光法筛选来确认由初级LPPC筛选中所辨识的优先蛋白的膜定位。为了扩大此方式的应用，我们不仅由最初的肺癌(A549)、结肠癌(HT29)和乳腺癌细胞(MCF7)特定了选定标靶的亚细胞定位，而且还扩展到其它癌细胞系，包含肝细胞癌细胞(Mahlavu)。结果显示，3B-4(图4)、2G-4和2G-7(图5)、2I-3和2I-6(图6)以及Y1C-4和Y1C-5(图7)，位于细胞膜并具有细胞类型特异性。例如，Y1C-4(或SPAG5，参见表1)位于肝细胞癌细胞(Mahlavu)的细胞膜而非肺癌细胞(A549，图7)。SPAG5，有丝分裂纺锤体相关蛋白，已知是在于中期时调节染色体的正确对位，其表达与乳腺癌和非小细胞肺癌相关。此外，SPAG5缺失造成姐妹染色单体的内聚性。在一般情况下，在间期时SPAG5的表达非常低，而在中期才会向上调节并位于着丝粒和纺锤体上。需要进一步的研究分析SPAG5如何介导在肝癌的细胞膜上的信号途径。免疫荧光法结果的总结显示于表1。
表1：通过免疫荧光法(IF)确认优先抗体的亚细胞定位
ND：未测定
上述实施例仅为说明本发明的原理和其有效性，而非限制本发明。所属领域的技术人员对上述实施例所做的修改和变化仍不违背本发明的精神。本发明的权利范围应如后述权利要求书所列。

Claims (27)

1.一种筛选分子群的方法，所述方法包含检测所述分子群是否对介质具有结合特异性。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述分子为抗体、抗原、酶、底物、配体、受体、细胞膜结合蛋白或细胞表面标记。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述抗体为单克隆抗体或多克隆抗体。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述介质是位于细胞内或细胞上。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述介质为抗体、抗原、酶、底物、配体、受体、细胞膜结合蛋白或细胞表面标记。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述分子群位于载体上。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述载体为脂质体、微胶粒(micelle)、定时释放胶囊、微脂粒(vesicle)、微球体、纳米颗粒、聚复合物(polyplex)或细胞。
8.根据权利要求4或7所述的方法，其中所述细胞是正常细胞、癌细胞、干细胞或癌症干细胞。
9.根据权利要求7所述的方法，其中所述载体包含可检测的标记。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述可检测的标记为荧光或放射性同位素。
11.根据权利要求6所述的方法，其中所述载体进一步包含药物、细胞毒性药物、生长因子、细胞因子、疫苗和寡核苷酸中的至少一种。
12.根据权利要求1所述的方法，其进一步包含辨识所述分子。
13.根据前述权利要求中任一权利要求所述的方法，其包含下列步骤：
(a)提供候选分子群；
(b)将所述候选分子群分为多个子群；
(c)将每一子群装载于载体以形成复合物；和
(d)将(c)步骤获得的所述复合物与介质接触，以检测所述子群是否包含对所述介质具结合特异性的分子，由此筛选出所述分子群。
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述步骤(d)进一步包含将步骤(c)获得的所述复合物与细胞接触以检测所述复合物是否与所述细胞结合，其中所述介质位于细胞内或细胞上。
15.根据权利要求13所述的方法，其中所述步骤(d)进一步包含将步骤(c)获得的所述复合物与细胞接触以检测所述复合物是否毒杀所述细胞，其中所述介质位于细胞内或细胞上。
16.一种筛选细胞内或细胞上的生物标记群的方法，其包含根据前述权利要求中任一权利要求所述的方法，其中所述生物标记是肿瘤特异性抗原、细胞膜结合蛋白或细胞表面标记。
17.一种组合物，其包含根据前述权利要求中任一权利要求所述的方法所筛选的分子群。
18.根据权利要求17所述的组合物，其中所述分子群位于载体上。
19.根据权利要求18所述的组合物，其中所述载体为脂质体、微胶粒、定时释放胶囊、微脂粒、微球体、纳米颗粒、聚复合物或细胞。
20.根据权利要求19所述的组合物，其中所述细胞是正常细胞、癌细胞、干细胞或癌症干细胞。
21.根据权利要求18所述的组合物，其中所述载体包含可检测的标记。
22.根据权利要求21所述的组合物，其中所述可检测的标记为荧光或放射性同位素。
23.根据权利要求18所述的组合物，其中所述载体进一步包含药物、细胞毒性药物、生长因子、细胞因子、疫苗和寡核苷酸中的至少一种。
24.一种递送治疗剂的方法，其包含投与根据权利要求17-23中任一权利要求所述的组合物到细胞或个体。
25.一种诊断个体状态的方法，其包含提供生物样本；使根据权利要求17-23中任一权利要求所述的组合物与所述生物样本接触；和辨识所述组合物是否与所述生物样本结合，其中所述结合的存在意指所述个体患有所述状态。
26.根据权利要求25所述的方法，其中所述个体是人类。
27.根据权利要求25所述的方法，其中所述生物样本是癌细胞、癌症干细胞、肿瘤切片或培养组织。
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