CN104844810A - 普鲁兰多糖-类人胶原蛋白水凝胶及其制备方法 - Google Patents
普鲁兰多糖-类人胶原蛋白水凝胶及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104844810A CN104844810A CN201510269823.9A CN201510269823A CN104844810A CN 104844810 A CN104844810 A CN 104844810A CN 201510269823 A CN201510269823 A CN 201510269823A CN 104844810 A CN104844810 A CN 104844810A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- collagen
- human
- pullulan
- hydrogel
- solution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 title claims abstract description 96
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 title claims abstract description 96
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 title claims abstract description 96
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 title claims abstract description 80
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 229920001218 Pullulan Polymers 0.000 claims abstract description 53
- 239000004373 Pullulan Substances 0.000 claims abstract description 53
- 235000019423 pullulan Nutrition 0.000 claims abstract description 53
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 37
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 27
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 21
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 claims abstract description 20
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 claims abstract description 15
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 claims abstract description 9
- SHKUUQIDMUMQQK-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(oxiran-2-ylmethoxy)butoxymethyl]oxirane Chemical compound C1OC1COCCCCOCC1CO1 SHKUUQIDMUMQQK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 15
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 15
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 15
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 15
- 241000223678 Aureobasidium pullulans Species 0.000 claims description 9
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 9
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 9
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 9
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 8
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 8
- 239000002245 particle Substances 0.000 abstract description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 7
- 238000010382 chemical cross-linking Methods 0.000 abstract description 4
- 239000002994 raw material Substances 0.000 abstract description 4
- 229920000578 graft copolymer Polymers 0.000 abstract description 3
- 208000014674 injury Diseases 0.000 abstract description 2
- 230000008733 trauma Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 11
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 10
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 10
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 8
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 5
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 5
- 238000001878 scanning electron micrograph Methods 0.000 description 5
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 208000022120 Jeavons syndrome Diseases 0.000 description 1
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002473 artificial blood Substances 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 150000003334 secondary amides Chemical class 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000037314 wound repair Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
本发明涉及普鲁兰多糖-类人胶原蛋白水凝胶及其制备方法，本发明将类人胶原蛋白溶于双蒸水中得到类人胶原蛋白溶液，加入不同分子量的普鲁兰多糖，再加入交联剂溶液，搅拌反应；将反应液水浴加热制得水凝胶后，相继用无热原水和磷酸盐缓冲溶液浸洗，用制粒机制成不同粒径的可注射的颗粒。本发明以类人胶原蛋白、不同分子量的普鲁兰多糖为原料，采用化学交联方法接枝共混形成接枝聚合物，可制成不同粒径的可注射颗粒，具有稳定性良好、生物学效价高、可避免外科手术的创伤和减少病人的疼痛的优点。
Description
技术领域
本发明涉及一种水凝胶，具体涉及一种普鲁兰多糖-类人胶原蛋白水凝胶及其制备方法。
背景技术
水凝胶的设计和发展成为具有多功能的高分子聚合物用于组织修复研究的热点，一般水凝胶的研究应用于组织工程、药物释放、基因传递、创伤修复。天然多糖因具有可再生、无毒、可降解材料特性而作为新型材料制备中不可缺少的一种，大多数多糖的研究都集中在甲壳素、壳聚糖、肝膦脂、藻酸盐和普鲁兰多糖。普鲁兰多糖本身具有良好的生物相容性和可降解性，可应用于组织工程领域，广泛应用在基因治疗、药物释放、骨组织工程和治疗肝细胞癌方面。
类人胶原蛋白应用于组织工程方面也比较多，比如，人工血管、人工骨、螯合物以及水凝胶，而且获得了良好的评价，具有水溶性好、低排异反应、无病毒隐患，结构与人体自身胶原蛋白极其接近的显著优点。
发明内容
本发明的目的是提供一种普鲁兰多糖-类人胶原蛋白水凝胶及其制备方法，采用化学交联方法制备更具生物相容性、安全性更高的皮肤填充材料和植入支架材料。
本发明的实现过程如下：
一种普鲁兰多糖-类人胶原蛋白水凝胶的制备方法，包括以下步骤：
(1)将类人胶原蛋白溶于双蒸水中，得到质量体积分数为5～30mg/mL的类人胶原蛋白溶液，向类人胶原蛋白溶液中加入不同分子量的普鲁兰多糖，温度控制为0～27℃，其中类人胶原蛋白与普鲁兰多糖的质量比为（1～3）：10；
(2)加入质量分数为1～10%的交联剂1,4丁二醇二缩水甘油醚溶液，搅拌均匀，温度控制为20～30℃；其中，类人胶原蛋白与交联剂的质量比为50～300:1～40；
(3)将反应液放于45～55℃反应3h～6h，制得水凝胶；
(4)制得的水凝胶相继用无热原水和磷酸盐缓冲溶液浸洗2～6天，用制粒机制成可注射的颗粒。
上述类人胶原蛋白为基因工程菌BL21高密度发酵生产的类人胶原蛋白。
上述普鲁兰多糖为由出芽短梗霉分泌的水溶性胞外中性多糖，分子量为100000g/mol～530000g/mol。
上述磷酸盐缓冲溶液pH为7.4。
上述普鲁兰多糖-类人胶原蛋白水凝胶的制备方法为：
(1)将类人胶原蛋白溶于双蒸水中，得到10mL质量体积分数为5～30mg/mL的类人胶原蛋白溶液，向类人胶原蛋白溶液中加入不同分子量的普鲁兰多糖粉末，令类人胶原蛋白与普鲁兰多糖的质量比为（1～3）：10，反应温度控制为0～27℃，在搅拌条件下反应0.5～1h；
(2)加入0.1～0.35mL、质量分数为1～10%的交联剂1,4丁二醇二缩水甘油醚溶液，反应温度控制为20～30℃，在搅拌条件下反应0.2～0.5h；
(3)将反应液放于50℃恒温水浴锅中3h～6h，制得水凝胶；
(4)制得的水凝胶相继用无热原水和磷酸盐缓冲溶液浸洗2～6天，用制粒机制成可注射的颗粒。
本发明具有以下优点：
本发明所涉及的一种用普鲁兰多糖和类人胶原蛋白合成的水凝胶，是将不同分子量的普鲁兰多糖和类人胶原蛋白结合起来制成的皮肤填充材料，以基因工程菌BL21高密度发酵生产的类人胶原蛋白、由出芽短梗霉（Aureobasidium pullulans）分泌的不同分子量的水溶性胞外中性普鲁兰多糖为原料，采用化学交联方法制成，类人胶原蛋白和普鲁兰多糖通过接枝共混形成接枝聚合物，由1，4-丁二醇二缩水甘油醚交联对接形成聚合物，可制成不同粒径的可注射颗粒，具有稳定性良好、生物学效价高、可避免外科手术的创伤和减少病人的疼痛的优点，从而真正实现皮肤填充的优势。
附图说明
图1为水凝胶的红外吸收图谱；图中，A中，1号为分子量为100,000g/moL的普鲁兰多糖的红外图，2号为分子量为530,000g/moL的普鲁兰多糖的红外图；B中，1号为类人胶原蛋白的红外图，2号为1，4-丁二醇二缩水甘油醚的红外图；C中，1号为分子量为100,000g/moL的普鲁兰多糖与类人胶原蛋白制备的水凝胶的红外图，2号为分子量为530,000g/moL的普鲁兰多糖与类人胶原蛋白制备的水凝胶的红外图；
图2为水凝胶中1，4-丁二醇二缩水甘油醚的残留量；图中，A号为分子量为100,000g/moL的普鲁兰多糖与类人胶原蛋白制备的水凝胶中BDDE的残留量，B为分子量为530,000g/moL的普鲁兰多糖与类人胶原蛋白制备的水凝胶中BDDE的残留量；
图3为水凝胶的样品图；图中，A、B、C为水凝胶的照片图；A为分子量为100,000g/moL的普鲁兰多糖与类人胶原蛋白制备的水凝胶的样品图；B，C为分子量为530,000g/moL的普鲁兰多糖与类人胶原蛋白制备的水凝胶的样品图；
图4为水凝胶的扫描电镜图；图中，1号为水凝胶的扫描电镜图（放大100倍），2号为水凝胶的扫描电镜图（放大250倍），3号为水凝胶的扫描电镜图（放大100倍），4号为水凝胶的扫描电镜图（放大250倍）；1，2为分子量为100,000g/moL的普鲁兰多糖与类人胶原蛋白制备的水凝胶的内部结构图；3，4为分子量为530,000g/moL的普鲁兰多糖与类人胶原蛋白制备的水凝胶的内部结构图；
图5为水凝胶注射于小鼠皮下图；图中，A为分子量为100,000g/moL的普鲁兰多糖与类人胶原蛋白制备的水凝胶注射于小鼠皮下2周后的图，B为分子量为530,000g/moL的普鲁兰多糖与类人胶原蛋白制备的水凝胶注射于小鼠皮下2周后的图，C为分子量为100,000g/moL和530,000g/moL的普鲁兰多糖与类人胶原蛋白制备的水凝胶注射于小鼠皮下2周后的图，D为注射于小鼠皮下2周后取出的水凝胶的图；
图6为水凝胶注射于小鼠皮下后的H&E染色图；图中，1，2为分子量为100,000g/moL的普鲁兰多糖与类人胶原蛋白制备的水凝胶注射于小鼠皮下后的H&E组织染色图；3，4为分子量为530,000g/moL的普鲁兰多糖与类人胶原蛋白制备的水凝胶注射于小鼠皮下后的H&E组织染色图。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行详细的说明。
本发明所涉及的普鲁兰多糖-类人胶原蛋白水凝胶的制备方法，选择交联剂1，4-丁二醇二缩水甘油醚（BDDE）与以基因工程菌BL21高密度发酵生产的类人胶原蛋白和由出芽短梗霉（Aureobasidium pullulans）分泌的水溶性胞外中性普鲁兰多糖交联制备水凝胶，采用交联剂进行化学交联，再在25℃搅拌下进行物理交联。BDDE是一种双功能团交联剂，可以开环与普鲁兰多糖的羟基交联生成醚键，也可以氧化羟基为醛基，也可以实现普鲁兰多糖与类人胶原蛋白的交联。而且，BDDE已经是FDA/EMEA法规认证的。因此选用BDDE交联剂，不同分子量的普鲁兰多糖和类人胶原蛋白制备新型的水凝胶。同时阐释水凝胶的空间构象变化、机械性能和生物学功效之间的关系。
原料中的类人胶原蛋白采用的是由基因工程菌BL21高密度发酵生产的类人胶原蛋白，与来自动物源提取的胶原蛋白相比，其具有水溶性好、低排异反应、无病毒隐患，结构与人体自身胶原蛋白极其接近的显著优点。另外，动物源胶原蛋白也可作为原料制造水凝胶。普鲁兰多糖为由出芽短梗霉（Aureobasidium pullulans）分泌的水溶性胞外中性多糖。普鲁兰多糖本身具有良好的生物相容性和可降解性，可应用于组织工程领域。
本发明涉及的普鲁兰多糖-类人胶原蛋白水凝胶的制备方法，其特征在于：
由以下步骤实现：
步骤一：将类人胶原蛋白溶于双蒸水中，得到10mL质量体积分数为5～30mg/mL的类人胶原蛋白溶液，向类人胶原蛋白溶液中加入不同分子量的普鲁兰多糖粉末，令类人胶原蛋白与普鲁兰多糖的质量比为（1～3）：10，反应温度控制为0～27℃，在搅拌条件下反应0.5～1h；
步骤二：加入0.1～0.35mL、质量分数为1～10%的交联剂溶液，反应温度控制为20～30℃，在搅拌条件下反应0.2～0.5h；
步骤三：将反应液放于50℃恒温水浴锅中3h～6h，制得水凝胶；
步骤四：制得的水凝胶相继用无热原水和磷酸盐缓冲溶液浸洗2～6天，用制粒机制成不同粒径的可注射的颗粒。
步骤一中，类人胶原蛋白为基因工程菌BL21高密度发酵生产的类人胶原蛋白。
步骤一中，普鲁兰多糖为由出芽短梗霉分泌的水溶性胞外中性多糖，分子量为100000g/mol～530000g/mol。
步骤二中，交联剂为1,4丁二醇二缩水甘油醚。
步骤四中，磷酸盐缓冲溶液pH为7.4。
其中，交联剂将不同分子量的普鲁兰多糖和类人胶原蛋白接枝聚合物对接，形成不同链断空间构象变化和不同分子量的聚合物。制备的水凝胶为粗产品，颜色发黄。对粗产品进行纯化处理，即用无热原水和磷酸盐缓冲溶液置换水凝胶中残留的BDDE、一些未反应的普鲁兰多糖、类人胶原蛋白分子以及杂质。置换时间为2～6天。
实施例1
步骤一：将类人胶原蛋白溶于双蒸水中，得到10mL质量体积分数为5mg/mL的类人胶原蛋白溶液，向类人胶原蛋白溶液中加入不同分子量的普鲁兰多糖粉末，令类人胶原蛋白与普鲁兰多糖的质量比为3：10，反应温度控制为0℃，在搅拌条件下反应1h；
步骤二：加入0.1mL、质量分数为10%的交联剂溶液，反应温度控制为20℃，在搅拌条件下反应0.5h；
步骤三：将反应液放于50℃恒温水浴锅中3h，制得水凝胶；
步骤四：制得的水凝胶相继用无热原水和磷酸盐缓冲溶液浸洗6天，用制粒机制成不同粒径的可注射的颗粒。
步骤一中，类人胶原蛋白为基因工程菌BL21高密度发酵生产的类人胶原蛋白。
步骤一中，普鲁兰多糖为由出芽短梗霉分泌的水溶性胞外中性多糖，分子量为100000g/mol～240000g/mol。
步骤二中，交联剂为1,4丁二醇二缩水甘油醚。
步骤四中，磷酸盐缓冲溶液pH为7.4。
实施例2
步骤一：将类人胶原蛋白溶于双蒸水中，得到10mL质量体积分数为15mg/mL的类人胶原蛋白溶液，向类人胶原蛋白溶液中加入不同分子量的普鲁兰多糖粉末，令类人胶原蛋白与普鲁兰多糖的质量比为2：10，反应温度控制为14℃，在搅拌条件下反应0.7h；
步骤二：加入0.22mL、质量分数为5%的交联剂溶液，反应温度控制为25℃，在搅拌条件下反应0.3h；
步骤三：将反应液放于50℃恒温水浴锅中4.5h，制得水凝胶；
步骤四：制得的水凝胶相继用无热原水和磷酸盐缓冲溶液浸洗4天，用制粒机制成不同粒径的可注射的颗粒。
步骤一中，类人胶原蛋白为基因工程菌BL21高密度发酵生产的类人胶原蛋白。
步骤一中，普鲁兰多糖为由出芽短梗霉分泌的水溶性胞外中性多糖，分子量为240000g/mol～380000g/mol。
步骤二中，交联剂为1,4丁二醇二缩水甘油醚。
步骤四中，磷酸盐缓冲溶液pH为7.4。
实施例3
步骤一：将类人胶原蛋白溶于双蒸水中，得到10mL质量体积分数为30mg/mL的类人胶原蛋白溶液，向类人胶原蛋白溶液中加入不同分子量的普鲁兰多糖粉末，令类人胶原蛋白与普鲁兰多糖的质量比为1：10，反应温度控制为27℃，在搅拌条件下反应0.5h；
步骤二：加入0.35mL、质量分数为1%的交联剂溶液，反应温度控制为30℃，在搅拌条件下反应0.2h；
步骤三：将反应液放于50℃恒温水浴锅中6h，制得水凝胶；
步骤四：制得的水凝胶相继用无热原水和磷酸盐缓冲溶液浸洗2天，用制粒机制成不同粒径的可注射的颗粒。
步骤一中，类人胶原蛋白为基因工程菌BL21高密度发酵生产的类人胶原蛋白。
步骤一中，普鲁兰多糖为由出芽短梗霉分泌的水溶性胞外中性多糖，分子量为380000g/mol～530000g/mol。
步骤二中，交联剂为1,4丁二醇二缩水甘油醚。
步骤四中，磷酸盐缓冲溶液pH为7.4。
对以上实施例的产物进行扫描电镜分析、样品观察、和H&E染色分析，结果如下：
1、水凝胶的红外吸收图谱如图1所示，在1645cm-1，1510 cm-1，1459 cm-1和1159 cm-1处有新的吸收峰，是仲酰胺和仲羟基的吸收峰。说明普鲁兰多糖和类人胶原蛋白在交联过程中接枝聚合形成新的聚合物。
2、水凝胶经过不同时间纯化处理后残留的BDDE含量如图2所示，纯化时间越长，BDDE的残留量越低，而且经过2天处理后仍然可以达到标准要求。
3、水凝胶填充材料的样品如图3所示，水凝胶类似于果冻状的乳白色凝胶。
4、水凝胶填充材料的扫描电镜分析如图4所示，水凝胶呈三维网络状的多孔结构，排布比较规整。
5、水凝胶填充材料注射于小鼠皮下分析如图5所示，在第二周水凝胶存在于小鼠皮下，略微有些降解；水凝胶填充材料注射于小鼠皮下2周取出后，水凝胶逐渐适应周围组织。
6、水凝胶填充材料的注射于小鼠皮下后的H&E染色分析如图6所示，1，2为分子量为100,000g/moL的普鲁兰多糖与类人胶原蛋白制备的水凝胶注射于小鼠皮下后1周和2周的H&E染色。3，4为分子量为530,000g/moL的普鲁兰多糖与类人胶原蛋白制备的水凝胶注射于小鼠皮下后后1周和2周的H&E染色。实施例四、五、六制备出的水凝胶，降解最慢。
本发明制得的水凝胶填充材料用于成年雌性ICR小鼠的动物实验表明：用化学交联法制备出的水凝胶，具有较好的生物相容性和组织相容性，且降解慢，适合用于组织填充。
本发明的内容不限于实施例所列举，本领域普通技术人员通过阅读本发明说明书而对本发明技术方案采取的任何等效的变换，均为本发明的权利要求所涵盖。
Claims (6)
1.一种普鲁兰多糖-类人胶原蛋白水凝胶的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)将类人胶原蛋白溶于双蒸水中得到质量体积分数为5～30mg/mL的类人胶原蛋白溶液，向类人胶原蛋白溶液中加入普鲁兰多糖，温度控制为0～27℃，其中类人胶原蛋白与普鲁兰多糖的质量比为（1～3）：10；
(2)加入质量分数为1～10%的交联剂1,4丁二醇二缩水甘油醚溶液，搅拌均匀，温度控制为20～30℃；其中，类人胶原蛋白与交联剂的质量比为50～300:1～40；
(3)将反应液放于45～55℃反应制得水凝胶；
(4)制得的水凝胶相继用无热原水和磷酸盐缓冲溶液浸洗2～6天，用制粒机制成可注射的颗粒。
2.根据权利要求1所述的普鲁兰多糖-类人胶原蛋白水凝胶的制备方法，其特征在于：类人胶原蛋白为基因工程菌BL21高密度发酵生产的类人胶原蛋白。
3.根据权利要求1所述的普鲁兰多糖-类人胶原蛋白水凝胶的制备方法，其特征在于：普鲁兰多糖为由出芽短梗霉分泌的水溶性胞外中性多糖，分子量为100000g/mol～530000g/mol。
4.根据权利要求1所述的普鲁兰多糖-类人胶原蛋白水凝胶的制备方法，其特征在于：磷酸盐缓冲溶液pH为7.4。
5.根据权利要求1所述的普鲁兰多糖-类人胶原蛋白水凝胶的制备方法，其特征在于：
(1)将类人胶原蛋白溶于双蒸水中得到10mL质量体积分数为5～30mg/mL的类人胶原蛋白溶液，向类人胶原蛋白溶液中加入普鲁兰多糖，使类人胶原蛋白与普鲁兰多糖的质量比为（1～3）：10，反应温度控制为0～27℃，在搅拌条件下反应0.5～1h；
(2)加入0.1～0.35mL、质量分数为1～10%的交联剂1,4丁二醇二缩水甘油醚溶液，反应温度控制为20～30℃，在搅拌条件下反应0.2～0.5h；
(3)将反应液放于50℃恒温水浴锅中3h～6h，制得水凝胶；
(4)制得的水凝胶相继用无热原水和磷酸盐缓冲溶液浸洗2～6天，用制粒机制成可注射的颗粒。
6.权利要求1所述的制备方法制得的普鲁兰多糖-类人胶原蛋白水凝胶。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510269823.9A CN104844810A (zh) | 2015-05-26 | 2015-05-26 | 普鲁兰多糖-类人胶原蛋白水凝胶及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510269823.9A CN104844810A (zh) | 2015-05-26 | 2015-05-26 | 普鲁兰多糖-类人胶原蛋白水凝胶及其制备方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104844810A true CN104844810A (zh) | 2015-08-19 |
Family
ID=53844830
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510269823.9A Pending CN104844810A (zh) | 2015-05-26 | 2015-05-26 | 普鲁兰多糖-类人胶原蛋白水凝胶及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104844810A (zh) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105860151A (zh) * | 2016-04-13 | 2016-08-17 | 西北大学 | 注射用高分子普鲁兰多糖-胶原蛋白复合水凝胶及其制备方法 |
| CN109971011A (zh) * | 2019-04-22 | 2019-07-05 | 宁波工程学院 | 一种聚多糖纳米晶改性胶原蛋白膜的制备方法 |
| CN114287624A (zh) * | 2021-12-27 | 2022-04-08 | 黑龙江八一农垦大学 | 一种复合蛋白乳液凝胶及其生产方法 |
| US11319566B2 (en) | 2017-04-14 | 2022-05-03 | Capsugel Belgium Nv | Process for making pullulan |
| CN114621467A (zh) * | 2022-05-17 | 2022-06-14 | 天新福（北京）医疗器材股份有限公司 | 一种无菌自固化胶原蛋白修复凝胶及其制备方法 |
| US11576870B2 (en) | 2017-04-14 | 2023-02-14 | Capsugel Belgium Nv | Pullulan capsules |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102229705A (zh) * | 2011-06-02 | 2011-11-02 | 陕西巨子生物技术有限公司 | 一种胶原蛋白温敏型水凝胶及其制备方法 |
| CN103554527A (zh) * | 2013-10-30 | 2014-02-05 | 无锡灵锡医疗器械科技有限公司 | 一种可水解逆转胶原蛋白的水凝胶及其制备方法 |
-
2015
- 2015-05-26 CN CN201510269823.9A patent/CN104844810A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102229705A (zh) * | 2011-06-02 | 2011-11-02 | 陕西巨子生物技术有限公司 | 一种胶原蛋白温敏型水凝胶及其制备方法 |
| CN103554527A (zh) * | 2013-10-30 | 2014-02-05 | 无锡灵锡医疗器械科技有限公司 | 一种可水解逆转胶原蛋白的水凝胶及其制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| XIAN LI ET AL.: ""Novel multifunctional PB and PBH hydrogels as soft filler for tissue engineering"", 《JOURNAL OF MATERIAL CHEMISTRY B》 * |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105860151A (zh) * | 2016-04-13 | 2016-08-17 | 西北大学 | 注射用高分子普鲁兰多糖-胶原蛋白复合水凝胶及其制备方法 |
| US11319566B2 (en) | 2017-04-14 | 2022-05-03 | Capsugel Belgium Nv | Process for making pullulan |
| US11576870B2 (en) | 2017-04-14 | 2023-02-14 | Capsugel Belgium Nv | Pullulan capsules |
| US11878079B2 (en) | 2017-04-14 | 2024-01-23 | Capsugel Belgium Nv | Pullulan capsules |
| CN109971011A (zh) * | 2019-04-22 | 2019-07-05 | 宁波工程学院 | 一种聚多糖纳米晶改性胶原蛋白膜的制备方法 |
| CN114287624A (zh) * | 2021-12-27 | 2022-04-08 | 黑龙江八一农垦大学 | 一种复合蛋白乳液凝胶及其生产方法 |
| CN114287624B (zh) * | 2021-12-27 | 2023-11-03 | 黑龙江八一农垦大学 | 一种复合蛋白乳液凝胶及其生产方法 |
| CN114621467A (zh) * | 2022-05-17 | 2022-06-14 | 天新福（北京）医疗器材股份有限公司 | 一种无菌自固化胶原蛋白修复凝胶及其制备方法 |
| CN114621467B (zh) * | 2022-05-17 | 2022-07-29 | 天新福（北京）医疗器材股份有限公司 | 一种无菌自固化胶原蛋白修复凝胶及其制备方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Li et al. | Controllable fabrication of hydroxybutyl chitosan/oxidized chondroitin sulfate hydrogels by 3D bioprinting technique for cartilage tissue engineering | |
| CN104844810A (zh) | 普鲁兰多糖-类人胶原蛋白水凝胶及其制备方法 | |
| TWI251596B (en) | Method for producing a double-crosslinked hyaluronate material | |
| Li et al. | Click chemistry-based biopolymeric hydrogels for regenerative medicine | |
| CN106310383B (zh) | 一种可注射骨修复水凝胶及其制备方法 | |
| Chen et al. | Exploring the potential of the recombinant human collagens for biomedical and clinical applications: a short review | |
| Puppi et al. | Microstructured chitosan/poly (γ-glutamic acid) polyelectrolyte complex hydrogels by computer-aided wet-spinning for biomedical three-dimensional scaffolds | |
| CN113679888A (zh) | 光固化成型复合水凝胶基质前驱体及其制备方法和带有其的支架 | |
| CN115429935B (zh) | 一种可注射性的交联硫酸软骨素水凝胶及其制备方法 | |
| Kim et al. | Norbornene-functionalized methylcellulose as a thermo-and photo-responsive bioink | |
| CN101283966A (zh) | 一种生物降解性水凝胶控释制剂及其制备方法和应用 | |
| CN103755981A (zh) | 一种用作皮肤填充材料的水凝胶及其制备方法 | |
| CN104861178A (zh) | 普鲁兰多糖-透明质酸水凝胶及其制备方法 | |
| de Olyveira et al. | Bacterial cellulose biocomposites for guided tissue regeneration | |
| CN106188609A (zh) | 一种l‑赖氨酸改性透明质酸衍生物水凝胶及其制备方法 | |
| CN101134784B (zh) | 琼脂糖与透明质酸接枝物及其制备方法与应用 | |
| CN109431971B (zh) | 一种可注射载药水凝胶及其制备方法 | |
| CN117323471A (zh) | 一种交联透明质酸-光滑羟基磷灰石凝胶及其制备方法 | |
| CN102924731B (zh) | 一种三重交联的胶原蛋白及制造方法和用途 | |
| CN104861214A (zh) | 普鲁兰多糖可注射水凝胶及其制备方法 | |
| CN104857560A (zh) | 羧基化普鲁兰多糖可注射水凝胶及其制备方法 | |
| CN103113594A (zh) | 琼脂糖-聚乙烯亚胺-透明质酸接枝物及其制备方法与应用 | |
| Kucińska-Lipka et al. | Polyurethanes modified with natural polymers for medical application. Part II. Polyurethane/gelatin, polyurethane/starch, polyurethane/cellulose | |
| CN110180023A (zh) | 一种高强度生物质组织工程支架材料的制备方法 | |
| CN105860151A (zh) | 注射用高分子普鲁兰多糖-胶原蛋白复合水凝胶及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| EXSB | Decision made by sipo to initiate substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20150819 |