CN104833807A - 一种视黄醇结合蛋白的定量测定方法、试剂及试剂盒 - Google Patents
一种视黄醇结合蛋白的定量测定方法、试剂及试剂盒 Download PDFInfo
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Abstract
本申请涉及一种定量测定人体血清中视黄醇结合蛋白含量的试剂,该试剂由分别放置的试剂I和试剂II组成,其中,所述试剂I含有磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、聚乙二醇6000;所述试剂II含有磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、羊抗人视黄醇结合蛋白抗体、乳胶、吐温-20、蛋白保护剂2、小牛白蛋白。本发明采用的试剂盒及检测方法只需几微升血清,无需离心或电泳等分离处理,操作简便,可满足全自动化分析的要求,适用于大规模样品的及时准确检测。
Description
技术领域
本申请涉及一种人体视黄醇结合蛋白的定量测定方法、试剂及试剂盒。
背景技术
视黄醇结合蛋白是血液中维生素的转运蛋白,由肝脏合成、广泛分布于血液、脑脊液、尿液及其他体液中。血液中视黄醇结合蛋白以视黄醇、前白蛋白结合的复合物形式存在,当复合物中视黄醇与靶细胞结合后,视黄醇结合蛋白便与前白蛋白分离,自肾小球滤出,由近端肾小管上皮细胞吸收、降解。测定视黄醇结合蛋白能早期发现肾小管的功能损害,并能灵敏反映肾近曲小管的损害程度,还可作为肝功能早期损害和监护治疗的指标。
目前已知的测定视黄醇结合蛋白的方法有放射免疫测定法、酶联免疫测定法、乳胶凝集试验和免疫比浊法、荧光免疫测定法、滴金免疫法。这些方法具有操作繁琐、耗时长、价格昂贵、过度浪费资源的缺点,不适于常规检验,尤其是大规模流行病学检查或临床大批量标本诸多项目的同时检测。
发明内容
本申请的目的是提供一种能够应用于大规模临床试验的人体血清中视黄醇结合蛋白的定量测定方法、试剂及试剂盒。
本申请采用了以下技术方案:
本申请的一方面公开了一种定量测定人体血清中视黄醇结合蛋白含量的试剂,该试剂由分别放置的试剂I和试剂II组成,其中,所述试剂I含有磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、聚乙二醇6000;所述试剂II含有磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、羊抗人视黄醇结合蛋白抗体、乳胶、吐温-20、蛋白保护剂2、小牛白蛋白。
进一步的,所述试剂I中蛋白保护剂2为甘油。
进一步的,所述试剂I中磷酸二氢钠含量为100-200mmol/L,磷酸氢二钠含量为100-200mmol/L,聚乙二醇6000的浓度为1-2.5%(W/W)。
进一步的,所述试剂I中磷酸二氢钠含量为100mmol/L,磷酸氢二钠含量为100mmol/L,聚乙二醇6000的浓度为1.2%(W/W)。
进一步的,所述试剂II中磷酸二氢钠含量为100-200mmol/L,磷酸氢二钠含量为100-200mmol/L,羊抗人视黄醇结合蛋白抗体含量为0.1-0.5g/L,乳胶含量为0.5-5g/L,吐温-20含量为0.1-0.5%(V/V),蛋白保护剂2含量为0.5-1.5%,小牛白蛋白含量为20-100g/L。
进一步的,所述试剂II中磷酸二氢钠含量为100mmol/L,磷酸氢二钠含量为100mmol/L,羊抗人视黄醇结合蛋白抗体含量为0.15g/L,乳胶含量为0.6g/L,吐温-20含量为0.3%(V/V),蛋白保护剂2含量为1%,小牛白蛋白含量为50g/L。
本申请的另一方面提供一种定量测定人体血清中视黄醇结合蛋白含量的试剂盒,其中装有上述定量测定人体血清中视黄醇结合蛋白含量的试剂,该试剂由分别放置的试剂I及试剂II组成。
本申请的另一方面提供一种定量测定人体血清中视黄醇结合蛋白含量的方法,该方法包括向血清样品中加入所述试剂I,37℃孵育2-5分钟,然后加入试剂II,继续孵育10秒后,在一定的波长下测定样品吸光度A1;3分钟后测定吸光度A2,由下式(1)计算△A样本;用同样的方法测定校准液的吸光度值△A标准;再通过下式(2)计算得到血清样品的视黄醇结合蛋白含量:
△A=A2-A1 (1)
血清中视黄醇结合蛋白含量(mg/L)=△A样本/△A标准×标准液浓度 (2)
本方法的原理为:将视黄醇结合蛋白与试剂中相应抗体结合成抗原-抗体复合物,形成一定的浊度。测定该浊度,并与标准曲线比较,即能得出样本中视黄醇结合蛋白的含量。
本发明直接定量测定人血清样品中视黄醇结合蛋白含量的试剂盒,是将分别放置的上述试剂I和试剂II以不同的规格装入试剂盒 包装中。该试剂盒具有多种不同的规格,可以分别适用于目前在临床实验室普遍使用的各种国内外品牌的自动生化分析仪器。
本发明采用的试剂盒及检测方法只需几微升血清,无需离心或电泳等分离处理,操作简便,可满足全自动化分析的要求,适用于大规模样品的及时准确检测。
具体实施方式
实施例一
按照下述成分和比例配置下述本发明试剂I及试剂II:
试剂I:
磷酸二氢钠 100mmol/L
磷酸氢二钠 100mmol/L
聚乙二醇6000 2.5%
试剂II:
在样品管中将240μl试剂I和3μl血清样品混合,在37℃孵育2-5分钟,然后向样品中加入60μl试剂II,混匀,继续孵育10秒后,使用雅培C16000全自动生化分析仪,空白调零,在波长340nm处,测定吸光度A1,3分钟后测定吸光度A2。根据如下公式(1)计算△A样本。用同样的方法和条件测定标准液的吸光度值,并计算△A标准。然后根据公式(2)计算样品的血清样品中视黄醇结合蛋白含量:
△A=A2-A1 (1)
血清中视黄醇结合蛋白含量(mg/L)=△A样本/△A标准×标准液浓 度 (2)
本申请所用标准品为伯乐标准品。
实施例二
按照下述成分和比例配置下述本发明试剂I及试剂II:
试剂I:
磷酸二氢钠 100mmol/L
磷酸氢二钠 100mmol/L
聚乙二醇6000 1%
试剂II:
在样品管中将240μl试剂I和3μl血清样品混合,在37℃孵育2-5分钟,然后向样品中加入60μl试剂II,混匀,继续孵育10秒后,使用日立7180型全自动生化分析仪,空白调零,在波长340nm处,测定吸光度A1,3分钟后测定吸光度A2。根据如下公式(1)计算△A样本。用同样的方法和条件测定标准液的吸光度值,并计算△A标准。然后根据公式(2)计算样品的血清样品中视黄醇结合蛋白含量:
△A=A2-A1 (1)
血清中视黄醇结合蛋白含量(mg/L)=△A样本/△A标准×标准液浓度 (2)
实施例三
按照下述成分和比例配置下述本发明试剂I及试剂II:
试剂I:
磷酸二氢钠 200mmol/L
磷酸氢二钠 200mmol/L
聚乙二醇6000 2.5%
试剂II:
在样品管中将240μl试剂I和3μl血清样品混合,在37℃孵育2-5分钟,然后向样品中加入60μl试剂II,混匀,继续孵育10秒后,使用奥林帕斯AU400型全自动生化分析仪,空白调零,在波长340nm处,测定吸光度A1,3分钟后测定吸光度A2。根据如下公式(1)计算△A样本。用同样的方法和条件测定标准液的吸光度值,并计算△A标准。然后根据公式(2)计算样品的血清样品中视黄醇结合蛋白含量:
△A=A2-A1 (1)
血清中视黄醇结合蛋白含量(mg/L)=△A样本/△A标准×标准液浓度 (2)
实施例四
按照下述成分和比例配置下述本发明试剂I及试剂II:
试剂I:
磷酸二氢钠 100mmol/L
磷酸氢二钠 100mmol/L
聚乙二醇6000 1.2%
试剂II:
在样品管中将240μl试剂I和3μl血清样品混合,在37℃孵育2-5分钟,然后向样品中加入60μl试剂II,混匀,继续孵育10秒后,使用森龙8020型全自动生化分析仪,空白调零,在波长340nm处,测定吸光度A1,3分钟后测定吸光度A2。根据如下公式(1)计算△A样本。用同样的方法和条件测定标准液的吸光度值,并计算△A标准。然后根据公式(2)计算样品的血清样品中视黄醇结合蛋白含量:
△A=A2-A1 (1)
血清中视黄醇结合蛋白含量(mg/L)=△A样本/△A标准×标准液浓度 (2)
实施例五
使用本实施例1中所列的试剂,按照实施例1所述的方法和条件对100例血清样品的血清中视黄醇结合蛋白含量进行测定,每份血清样品同时以市售血清中视黄醇结合蛋白含量测定试剂盒(金华强盛生物科技有限公司)进行对照性测定。
1、SPSS定量统计分析
1.1统计描述
表1 描述统计量
表2 描述统计量
1.2配对T检验
表3 成对样本相关系数
N | 相关系数 | Sig. | |
对1本发明数据&对照数据 | 100 | .998 | .000 |
表4 成对样本检验
表5 成对样本检验
t | df | Sig.(双侧) | |
对1本发明数据-对照数据 | .272 | 99 | .786 |
其中,P=0.786,>0.05,表明两组数据相互独立,是两个不同试剂盒的结果。
1.3双变量相关性
表6 相关性
**.在.01水平(双侧)上显著相关。
R=0.998
1.4新型回归分析及散点表
表7 模型汇总
a.预测变量:(常量),对照数据
b.因变量:本发明数据。
表8 系数a
a.因变量:本发明数据
方程:Y=0.992*X+0.600,r=998,X轴:对照数据,Y轴:本发明数据
2、临床结果定性统计分析
临床研究视黄醇结合蛋白测定试剂盒与对比产品测定结果分析:交叉列表分析
表9 临床确诊与对照组试剂
以对比产品试剂盒为参照组:
阳性符合率=[30/(30+0)]×100%=100%
阴性符合率=[70/(70+0)]×100%=100%
总的一致性=[(70+30)/100]×100%=100%
3性能指标分析
3.1准确性
用已知视黄醇结合蛋白定值血清进行三次平行测量测定,取均值,得出:
表10
3.2重复性
同一批次试剂对同一标本进行10次重复测定,计算标本测定结果平均值,得出批内不精密度:CV≤6.0%。
表11
3.3线性范围
选取视黄醇结合蛋白128mg/L的血清,用生理盐水进行倍比稀释,取五个梯度浓度,每个浓度重复测定3次取平均值,计算理论浓度与相应实测值进行线性回归分析,计算相关系数γ,预测值为横坐标,实测值为纵坐标,发现两者有良好线性关系,进行直线回归统计分析,回归方程为Y=128.423X+1.223,并有统计学意义(p<0.0001)。
表12
表明本法在0-130mg/L血清RBP浓度范围内,实测值与实测值相关系数为r:0.9998。
4.讨论和结论
上述100例标本中,视黄醇结合蛋白异常标本30例,视黄醇结合蛋白正常标本70例通过交叉列表分析、SPSS软件统计,数据统计结果显示:本发明准确度高、重复性好、线性范围宽,并且与对照产品在阳性符合率、阴性符合率、总的一致性及相关性等方面符合较好。因此,本发明的视黄醇结合蛋白测定试剂盒能够满足临床性能要求,有效性强,安全性高,可满足全自动化分析的要求,适用于大规模样品的及时准确检测。
以上内容是结合具体的实施方式对本申请所作的进一步详细说明,不能认定本申请的具体实施只局限于这些说明。对于本申请所属技术领域的技术人员来说,在不脱离本申请构思的前提下,还可以做出若干简单推演或替换,都应当视为属于本申请的保护范围。
Claims (8)
1.一种定量测定人体血清中视黄醇结合蛋白含量的试剂,该试剂由分别放置的试剂I和试剂II组成,其中,所述试剂I含有磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、聚乙二醇6000;所述试剂II含有磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、羊抗人视黄醇结合蛋白抗体、乳胶、吐温-20、蛋白保护剂2、小牛白蛋白。
2.根据权利要求1所述的试剂,其特征在于,所述试剂I中蛋白保护剂2为甘油。
3.根据权利要求1-2任一项所述的试剂,其特征在于,所述试剂I中磷酸二氢钠含量为100-200mmol/L,磷酸氢二钠含量为100-200mmol/L,聚乙二醇6000的浓度为1-2.5%。
4.根据权利要求3所述的试剂,其特征在于,所述试剂I中磷酸二氢钠含量为100mmol/L,磷酸氢二钠含量为100mmol/L,聚乙二醇6000的浓度为1.2%。
5.根据权利要求1-2任一项所述的试剂,其特征在于,所述试剂II中磷酸二氢钠含量为100-200mmol/L,磷酸氢二钠含量为100-200mmol/L,羊抗人视黄醇结合蛋白抗体含量为0.1-0.5g/L,乳胶含量为0.5-5g/L,吐温-20含量为0.1-0.5%,蛋白保护剂2含量为0.5-1.5%,小牛白蛋白含量为20-100g/L。
6.根据权利要求5所述的试剂,其特征在于,所述试剂II中磷酸二氢钠含量为100mmol/L,磷酸氢二钠含量为100mmol/L,羊抗人视黄醇结合蛋白抗体含量为0.15g/L,乳胶含量为0.6g/L,吐温-20含量为0.3%,蛋白保护剂2含量为1%,小牛白蛋白含量为50g/L。
7.一种定量测定人体血清中视黄醇结合蛋白含量的试剂盒,其特征在于,其中装有权利要求1至6中任一所述的定量测定人体血清中视黄醇结合蛋白含量的试剂,该试剂由分别放置的试剂I及试剂II组成。
8.一种定量测定人体血清中视黄醇结合蛋白含量的方法,该方法包括向血清样品中加入所述试剂I,37℃孵育2-5分钟,然后加入试剂II,继续孵育10秒后,在一定的波长下测定样品吸光度A1;3分钟后测定吸光度A2,由下式(1)计算△A样本;用同样的方法测定校准液的吸光度值△A标准;再通过下式(2)计算得到血清样品的 视黄醇结合蛋白含量:
△A=A2-A1 (1)
血清中视黄醇结合蛋白含量(mg/L)=△A样本/△A标准×标准液浓度 (2)。
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Cited By (3)
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CN106383234A (zh) * | 2016-08-31 | 2017-02-08 | 上海科华生物工程股份有限公司 | 视黄醇结合蛋白检测试剂的包被方法 |
CN107656065A (zh) * | 2017-03-31 | 2018-02-02 | 迈克生物股份有限公司 | 抑制类风湿因子干扰的视黄醇结合蛋白胶乳增强免疫比浊试剂 |
CN108627652A (zh) * | 2018-05-31 | 2018-10-09 | 宁波海壹生物科技有限公司 | 一种基于单粒径并可同时检测血清和尿液样本中视黄醇结合蛋白的试剂盒 |
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Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106383234A (zh) * | 2016-08-31 | 2017-02-08 | 上海科华生物工程股份有限公司 | 视黄醇结合蛋白检测试剂的包被方法 |
CN106383234B (zh) * | 2016-08-31 | 2017-11-24 | 上海科华生物工程股份有限公司 | 视黄醇结合蛋白检测试剂的包被方法 |
CN107656065A (zh) * | 2017-03-31 | 2018-02-02 | 迈克生物股份有限公司 | 抑制类风湿因子干扰的视黄醇结合蛋白胶乳增强免疫比浊试剂 |
CN107656065B (zh) * | 2017-03-31 | 2020-06-12 | 迈克生物股份有限公司 | 抑制类风湿因子干扰的视黄醇结合蛋白胶乳增强免疫比浊试剂 |
CN108627652A (zh) * | 2018-05-31 | 2018-10-09 | 宁波海壹生物科技有限公司 | 一种基于单粒径并可同时检测血清和尿液样本中视黄醇结合蛋白的试剂盒 |
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