CN104829711B - 脑膜炎球菌荚膜多糖单克隆抗体及其应用 - Google Patents
脑膜炎球菌荚膜多糖单克隆抗体及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104829711B CN104829711B CN201510161178.9A CN201510161178A CN104829711B CN 104829711 B CN104829711 B CN 104829711B CN 201510161178 A CN201510161178 A CN 201510161178A CN 104829711 B CN104829711 B CN 104829711B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- monoclonal antibody
- polysaccharide
- antibody
- meningococcus
- chain variable
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Abstract
本发明提供了脑膜炎球菌荚膜多糖单克隆抗体及其应用，分别提供了针对脑膜炎球菌A、C、Y和W135群多糖特异性的小鼠单克隆抗体，通过免疫小鼠和制备杂交瘤细胞获得。本发明提供的各型流脑多糖特异的单克隆抗体与其它型荚膜多糖无明显交叉反应，用于检测A、C、Y和W135群脑膜炎球菌具有高特异性、高敏感性的优点，可以准确检测样品中各型脑膜炎球菌或荚膜多糖的含量，在临床检测和疫苗生产过程中有广泛的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及杂交瘤细胞系及其产生的单克隆抗体与应用，特别是涉及针对脑膜炎双球菌A、C、W135、Y血清型的四种荚膜多糖的单克隆抗体和分泌该抗体的杂交瘤细胞系以及含有该抗体的试剂盒的应用。
背景技术
流行性脑脊髓膜炎(流脑)已发现100余年，至今仍在不少国家流行，也是我国冬、春季比较常见的急性呼吸道传染病。该病是由脑膜炎奈瑟氏菌(Neisseria meningitides)引起的脑膜炎。据统计，每年的2～4月，"流脑"的发病率占全年的60％左右。病人主要是15岁以下的少年儿童，特别是6个月至2岁的婴幼儿容易感染。其特点是起病急、病情重、变化多、传播快、流行广、来势凶猛、病死率高、危害性大，所以必须切实做好预防工作。
脑膜炎双球菌属奈瑟氏菌属，革兰氏染色阴性，肾形，多成对排列，或四个相联。根据本菌的夹膜多糖抗原的不同，通过血凝试验将本菌分为A、B、C、D、X(1916)、Y(1889)、Z、W135(319)、29E(1892)、H、I、K和L13个血清群。以A、B、C群为多见。脑膜炎双球菌细菌素(meningocin)又可将A群分为4型，C群分为6型；B群分为11型，其中B群2型致病力最强。根据其脂多糖(CPS)将脑膜双球菌分为8个LPS免疫型，与致病关系尚不清楚。
近20年来欧美一些国家的流行菌群已由A群转变为B群和C群；我国的流行菌群主要是A群，B群仅占少数。但带菌者以B、C群为主，今后是否会成为主要流行菌群，有待于密切观察。
脑膜炎双球菌是不断变迁的，在脑膜炎球菌的13个血清群中，A群B群C群Y群和W135群引起的病例可达95％，无论是成人或儿童，对W135群流脑普遍易感。四价多糖疫苗针对的是包括奈瑟脑膜炎球菌A、C、W135、Y的4个血清群，具有保护率高(85％-95％)、反应率低(无全身反应和发热反应)及免疫有效期长(约2～3年)的三大优点。
目前在国内外尚未见到快速有效特异检测脑膜炎球菌荚膜多糖的ELISA试剂盒的报道。
发明内容
本发明的目的是提供脑膜炎球菌A、C、Y、W135群荚膜多糖(血清型)的单克隆抗体、产生该抗体的杂交瘤细胞系以及单克隆抗体的应用。
本发明提供一种单克隆抗体，分别以4种脑膜炎球菌荚膜多糖为免疫原，免疫动物制备获得；
其中，4种脑膜炎球菌荚膜多糖的血清型分别为A、C、Y和W135；所述单克隆抗体特异性地识别A、C、Y和W135脑膜炎球菌病原体。
所述载体蛋白为白喉毒素CRM197蛋白或破伤风类毒素TT蛋白。
本发明制备单克隆抗体过程中，免疫使用的动物为小鼠。
本发明提供了8种单克隆抗体，分别是脑膜炎球菌A、C、Y、W135群多糖的单克隆抗体。
具体地说是分别以脑膜炎球菌结合疫苗中的A、C、Y、W135荚膜多糖为免疫原免疫小鼠，采用杂交瘤技术经过细胞融合并筛选得到能持续、稳定分泌A、C、Y或W135群脑膜炎球菌多糖的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，由各细胞株分泌得到8种单克隆抗体。
本发明提供的单克隆抗体能特异识别脑膜炎球菌A血清型多糖的单克隆抗体为Clone6B7和Clone 6B12；特异识别脑膜炎球菌C血清型多糖的单克隆抗体为Clone2H4和Clone 5B3；特异识别脑膜炎球菌W135血清型多糖单克隆抗体为Clone5F1和Clone4H8；特异识别脑膜炎球菌Y血清型多糖的单克隆抗体为Clone7C6和Clone3A2；
所述单克隆抗体Clone6B7的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQID No.1和2所示；
所述单克隆抗体Clone6B12的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQID No.3和4所示；
所述单克隆抗体Clone2H4的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQID No.5和6所示；
所述单克隆抗体Clone 5B3的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQID No.7和8所示；
所述单克隆抗体Clone5F1的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQID No.9和10所示；
所述单克隆抗体Clone4H8的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQID No.11和12所示；
所述单克隆抗体Clone7C6的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQID No.13和14所示；
所述单克隆抗体Clone3A2的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQID No.15和16所示。
本发明提供了能稳定分泌上述单克隆抗体的杂交瘤细胞。
本发明针对每种血清型各自获得的单克隆抗体具有良好的特异性，实验表明，每种血清型的单克隆抗体与其它3种血清型的脑膜炎球菌荚膜多糖抗原没有显著的交叉反应，间接ELISA表明这些抗体具有较高的效价，因此可用于A、C、Y、W135群脑膜炎球菌荚膜多糖的检测。可以采用双抗夹心法，分别利用两个单克隆抗体对各型荚膜多糖进行检测。
本发明提供了上述8种单克隆抗体中任一种单克隆抗体在制备脑膜炎球菌检测试剂盒中的应用。
本发明提供了上述8种单克隆抗体中任一种单克隆抗体在制备脑膜炎球菌荚膜多糖A、C、Y或W135抗体检测试剂盒中的应用。
含有上述任一种或多种单克隆抗体的药物属于本发明的保护范围。
本发明提供了上述8种单克隆抗体任一种或多种单克隆抗体在制备脑膜炎球菌预防性药物中的应用。
本发明提供了含有上述任一种或多种单克隆抗体的检测试剂盒。
本发明提供一种用于脑膜炎荚膜多糖检测的试剂盒。
本发明提供的检测试剂盒，其为ELISA检测试剂盒，其以特异性地识别脑膜炎球菌A血清型多糖的一种单克隆抗体为包被抗体，以酶标记的异性地识别脑膜炎球菌A血清型多糖的另一种单克隆抗体作为检测抗体，所述单克隆抗体为Clone6B7或Clone 6B12。
本发明提供的检测试剂盒，其为ELISA检测试剂盒，其以特异性地识别脑膜炎球菌C血清型多糖的一种单克隆抗体为包被抗体，以酶标记的异性地识别脑膜炎球菌C血清型多糖的另一种单克隆抗体作为检测抗体，所述单克隆抗体为Clone2H4和Clone 5B3。
本发明提供的检测试剂盒，其为ELISA检测试剂盒，其以特异性地识别脑膜炎球菌W135血清型多糖的一种单克隆抗体为包被抗体，以酶标记的异性地识别脑膜炎球菌W135血清型多糖的另一种单克隆抗体作为检测抗体，所述单克隆抗体为Clone5F1和Clone4H8。
本发明提供的检测试剂盒，其为ELISA检测试剂盒，其以特异性地识别脑膜炎球菌Y血清型多糖的一种单克隆抗体为包被抗体，以酶标记的异性地识别脑膜炎球菌Y血清型多糖的另一种单克隆抗体作为检测抗体，所述单克隆抗体为Clone7C6和Clone3A2。
本发明提供了上述单克隆抗体在制备检测4种脑膜炎球菌荚膜多糖试剂盒中的应用，所述4种脑膜炎球菌荚膜多糖的血清型分别为A、C、Y和W135。
本发明提供的各型荚膜多糖特异的单克隆抗体分别与其它ACYW135群脑膜炎球菌型荚膜多糖无明显交叉反应，用于检测A、C、Y、W135群脑膜炎球菌荚膜多糖具有高特异性、高敏感性的优点，可以准确检测样品中各型多糖组分的水平，广泛应用于临床检测和疫苗厂家生产疫苗过程中的质检。
附图说明
图1是抗体的SDS-PAGE电泳图，其中M是蛋白分子量标准(kDa)，本发明获得的8种单克隆抗体，泳道1-9分别为BSA6B7、6B12、2H4、5B3、5F1、4H8、7C6、3A2单抗。
图2所示的是脑膜炎球菌A多糖ELISA法灵敏度实验的拟合曲线。
图3所示的是脑膜炎球菌C多糖ELISA法灵敏度实验的拟合曲线。
图4所示的是脑膜炎球菌W135多糖ELISA法灵敏度实验的拟合曲线。
图5所示的是脑膜炎球菌Y多糖ELISA法灵敏度实验的拟合曲线。
具体实施方法
以下实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。
若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
实施例1、杂交瘤细胞系的建立
一、实验材料
1、免疫原：分别以A、C、Y、W135群脑膜炎球菌的荚膜多糖为免疫原(购自天津康希诺生物技术有限公司)。
2、培养基：DMEM培养基购于Hyclone公司；HAT、HT选择培养基、降植烷购于sigma公司。
3、实验动物：Balb/c小鼠，8-12周龄，雌性，SPF级动物培养。
4、其他材料：弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂购于Sigma公司；PEG4000购于Fluka公司；HRP-山羊抗小鼠IgG抗体购于JacksonImmune公司；其余试剂均为国产分析纯产品。
二、杂交瘤细胞系的建立
1、动物免疫
1)基础免疫：将免疫原与弗氏完全佐剂等体积混合并充分乳化，分点皮下注射，每只Balb/c小鼠每次注射量为100μg。
2)加强免疫：加强免疫采用抗原与弗氏不完全佐剂的乳化液。在进行细胞融合前3天，经腹腔注射含150ug抗原的生理盐水溶液。
2、杂交瘤细胞的制备
按常规方法收集小鼠的脾细胞与SP2/0细胞按10:1的比例以500g/L的PEG4000进行融合。用HAT培养液选择培养，融合后10～15天，取上清采用间接ELISA法筛选分泌抗每种多糖型和载体蛋白的杂交瘤细胞株。对所得阳性克隆株采用有限稀释法进行亚克隆。间接ELISA法的操作步骤如下：用200μl的各型多糖和多糖载体蛋白分别包板，用免疫小鼠血清1:2000作为阳性对照，无克隆生长的培养基上清和正常小鼠血清作为阴性对照，每孔加1:2000HRP-山羊抗小鼠IgG 100μl，最后测定450nm OD值。凡OD450值大于阴性对照2倍以上者，即可初步判定为阳性克隆。
3、杂交瘤细胞系的建立
重复步骤2，进行2次细胞融合，经过4次亚克隆和间接ELISA筛选，得到8株分别针对各型多糖的，稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞系。
4、应用上述杂交瘤细胞系所得单抗的效价检测
1)细胞培养液上清效价测定：间接ELISA法检测上述杂交瘤细胞培养上清效价为：1：50000-1：100000。
2)小鼠腹水效价测定：间接ELISA法检测上述杂交瘤细胞制备的腹水效价为：1：500000-1：1000000。
5、杂交瘤细胞系的传代培养
将上述杂交瘤细胞系在含有10％胎牛血清的DMEM培养基中继续进行培养、传代，培养到10代后，杂交瘤细胞系仍然能够生长良好、稳定传代，培养液上清效价仍然可以达到1:10000以上。
以上结果表明，所得杂交瘤细胞系分别能够稳定传代，可以持续、稳定分泌抗A、C、Y、W135群脑膜炎球菌荚膜多糖和载体蛋白的单克隆抗体。
实施例2抗ACYW135群脑膜炎球菌荚膜多糖和载体蛋白的单克隆抗体的制备
一抗体制备
以下抗体制备是分别针对能够分泌抗A、C、Y、W135的单克隆抗体的杂交瘤细胞进行抗体制备的。
选择成年BALB/c小鼠，腹腔接种降植烷，每只小鼠0.5ml。7-10天后腹腔接种第16代杂交瘤细胞(分别接种能够分泌抗A、C、Y、W135的单克隆抗体的杂交瘤细胞)，每只小鼠1×106-2×106个。间隔5天后，待腹部明显膨大，以手触摸时，皮肤有紧张感，即可用9号针头采集腹水。
将腹水离心(13000r/min 30分钟)，除去细胞成分和其他的沉淀物，收集上清。用Protein G～Sepharose CL-4B进行纯化，上柱液为20mM的PBS缓冲液，柱层析洗脱液为：pH2.7,20mM的甘氨酸缓冲液，得到分别抗ACYW135群脑膜炎球菌荚膜多糖和抗载体蛋白的单克隆抗体。
二抗体的鉴定
1、抗体纯度鉴定：
SDS-PAGE电泳鉴定，纯度在95％以上。(图1)
2、抗体浊度检测：
将一定比例的抗原，抗体和乳胶颗粒结合物混在一起，37℃反应5－30分钟后用HITACHI 7180生化分析仪分析。(表1)
3、特异识别脑膜炎球菌A多糖的单克隆抗体Clone6B7和Clone 6B12；特异识别脑膜炎球菌C多糖的单克隆抗体Clone2H4和Clone 5B3；特异识别流脑膜炎球菌W135多糖单克隆抗体Clone5F1和Clone4H8；特异识别流脑膜炎球菌Y多糖的单克隆抗Clone7C6和Clone3A2的可变区序列测定
将获得的8株单克隆细胞分别提取mRNA，反转录为cDNA，使用可变区通用引物进行高保真PCR扩增，将PCR产物片段插入到T载体内进行DNA序列测定，并将获得的序列翻译成蛋白质的氨基酸序列。将获得的序列进行比对后未显示有相同序列，说明所获得的序列为特异的序列。
单克隆抗体Clone6B7的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQ IDNo.1和2所示；
所述单克隆抗体Clone6B12的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQID No.3和4所示；
所述单克隆抗体Clone2H4的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQID No.5和6所示；
所述单克隆抗体Clone 5B3的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQID No.7和8所示；
所述单克隆抗体Clone5F1的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQID No.9和10所示；
所述单克隆抗体Clone4H8的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQID No.11和12所示；
所述单克隆抗体Clone7C6的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQID No.13和14所示；
所述单克隆抗体Clone3A2的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQID No.15和16所示。
实施例3应用纯化抗体制备ACYW135群脑膜炎球菌荚膜多糖检测试剂
一、脑膜炎球菌A多糖ELISA双抗体夹心法识别脑膜炎球菌A多糖的单克隆抗体Clone6B7和Clone 6B12。
应用clone 6B7和Clone6B12抗体做配对实验，确定以clone 6B12为包被抗体，用HRP标记Clone 6B7作为检测抗体，确定了ELISA检测方法，试剂盒检测灵敏度可达0.008ng/mL(图3)。采用改良过碘酸钠法标记抗体。
表2ELISA法检测脑膜炎球菌多糖A的检测结果
检测方法：包被抗体clone 6B12用pH 9.60.05mol/L的碳酸盐缓冲溶液稀释成10μg/mL，在酶标板的每孔加100μL，4℃下包被过夜，倾去包被液，用PBST洗涤2次，拍干，然后在每孔中加入200μL 3％的小牛血清白蛋白(BSA)，放入37℃恒温箱中封闭2小时后，用PBS洗涤1次，加入10％的蔗糖水溶液，室温保护1小时，拍干后经干燥后装铝箔袋抽真空后4℃保存。用辣根过氧化物酶标记clone 6B7的抗体，得6B7-HRP并保存。向酶标板中分别加入脑膜炎球菌A多糖梯度稀释液100μL/孔，37℃孵育1.5小时，经洗板后再加入6B7-HRP(0.5ug/ml)100μL/，37℃孵育1小时，经洗涤拍干后加入显色剂A、B各50μL/孔进行显色，37℃温育10min，加入终止液50μL/孔，用酶标仪450nm波长进行读数。
其中显色剂A液配方为每1000mL水中加入过氧化脲1g，10.3g柠檬酸，35.8gNa2HPO4·12H2O，吐温-20100μL，pH5；B液配方为每1000mL蒸馏水中加入四甲基联苯胺(TMB)700mg(40mL DMSO溶解)，10.3g柠檬酸，pH2.4。试剂盒特异性试验：用上述建立的方法进行多糖其它型的样品检测，结果表明，该试剂检测脑膜炎球菌多糖A信号良好，而与其它型多糖无交叉。结果见表2
二、脑膜炎球菌C多糖ELISA双抗体夹心法识别脑膜炎球菌C多糖的单克隆抗体Clone2H4和Clone 5B3
应用clone 2H4和Clone5B3抗体做配对实验，确定以clone 2H4为包被抗体，用HRP标记Clone 5B3作为检测抗体，确定了ELISA检测方法，试剂盒检测灵敏度可达6ng/mL(图4)。采用改良过碘酸钠法标记抗体。
表3ELISA法检测脑膜炎球菌多糖C的检测结果
检测方法：包被抗体clone 2H4用pH 9.60.05mol/L的碳酸盐缓冲溶液稀释成10μg/mL，在酶标板的每孔加100μL，4℃下包被过夜，倾去包被液，用PBST洗涤2次，拍干，然后在每孔中加入200μL 3％的小牛血清白蛋白(BSA)，放入37℃恒温箱中封闭2小时后，用PBS洗涤1次，加入10％的蔗糖水溶液，室温保护1小时，拍干后经干燥后装铝箔袋抽真空后4℃保存。用辣根过氧化物酶标记clone 5B3的抗体，得5B3-HRP并保存。向酶标板中分别加入脑膜炎球菌C多糖梯度稀释液100μL/孔，37℃孵育1.5小时，经洗板后再加入5B3-HRP(0.5ug/ml)100μL/，37℃孵育1小时，经洗涤拍干后加入显色剂A、B各50μL/孔进行显色，37℃温育10min，加入终止液50μL/孔，用酶标仪450nm波长进行读数。
其中显色剂A液配方为每1000mL水中加入过氧化脲1g，10.3g柠檬酸，35.8gNa2HPO4·12H2O，吐温-20100μL，pH5；B液配方为每1000mL蒸馏水中加入四甲基联苯胺(TMB)700mg(40mL DMSO溶解)，10.3g柠檬酸，pH2.4。试剂盒特异性试验：用上述建立的方法进行多糖其它型的样品检测，结果表明，该试剂检测脑膜炎球菌多糖C信号良好，而与其它型多糖无交叉。
三、脑膜炎球菌W135多糖ELISA双抗体夹心法识别脑膜炎球菌W135多糖的单克隆抗体Clone5F1和Clone 4H8
应用clone 5F1和Clone4H8抗体做配对实验，确定以clone 5F1为包被抗体，用HRP标记Clone 4H8作为检测抗体，确定了ELISA检测方法，试剂盒检测灵敏度可达0.008ng/mL(图5)。采用改良过碘酸钠法标记抗体。
表4ELISA法检测脑膜炎球菌多糖W135的检测结果
检测方法：包被抗体clone 5F1用pH 9.60.05mol/L的碳酸盐缓冲溶液稀释成10μg/mL，在酶标板的每孔加100μL，4℃下包被过夜，倾去包被液，用PBST洗涤2次，拍干，然后在每孔中加入200μL 3％的小牛血清白蛋白(BSA)，放入37℃恒温箱中封闭2小时后，用PBS洗涤1次，加入10％的蔗糖水溶液，室温保护1小时，拍干后经干燥后装铝箔袋抽真空后4℃保存。用辣根过氧化物酶标记clone 4H8的抗体，得4H8-HRP并保存。向酶标板中分别加入脑膜炎球菌W135多糖梯度稀释液100μL/孔，37℃孵育1.5小时，经洗板后再加入4H8-HRP(0.5ug/ml)100μL/，37℃孵育1小时，经洗涤拍干后加入显色剂A、B各50μL/孔进行显色，37℃温育10min，加入终止液50μL/孔，用酶标仪450nm波长进行读数。
其中显色剂A液配方为每1000mL水中加入过氧化脲1g，10.3g柠檬酸，35.8gNa2HPO4·12H2O，吐温-20100μL，pH5；B液配方为每1000mL蒸馏水中加入四甲基联苯胺(TMB)700mg(40mL DMSO溶解)，10.3g柠檬酸，pH2.4。试剂盒特异性试验：用上述建立的方法进行多糖其它型的样品检测，结果表明，该试剂检测脑膜炎球菌多糖W135信号良好，而与其它型多糖无交叉。
四、脑膜炎球菌Y多糖ELISA双抗体夹心法识别脑膜炎球菌Y多糖的单克隆抗体Clone7C6和Clone 3A2
应用clone 7C6和Clone3A2抗体做配对实验，确定以clone 7C6为包被抗体，用HRP标记Clone 3A2作为检测抗体，确定了ELISA检测方法，试剂盒检测灵敏度可达0.008ng/mL(图5)。采用改良过碘酸钠法标记抗体。
表5ELISA法检测脑膜炎球菌多糖Y的检测结果
检测方法：包被抗体clone 7C6用pH 9.60.05mol/L的碳酸盐缓冲溶液稀释成10μg/mL，在酶标板的每孔加100μL，4℃下包被过夜，倾去包被液，用PBST洗涤2次，拍干，然后在每孔中加入200μL 3％的小牛血清白蛋白(BSA)，放入37℃恒温箱中封闭2小时后，用PBS洗涤1次，加入10％的蔗糖水溶液，室温保护1小时，拍干后经干燥后装铝箔袋抽真空后4℃保存。用辣根过氧化物酶标记clone 3A2的抗体，得3A2-HRP并保存。向酶标板中分别加入脑膜炎球菌Y多糖梯度稀释液100μL/孔，37℃孵育1.5小时，经洗板后再加入3A2-HRP(0.5ug/ml)100μL/，37℃孵育1小时，经洗涤拍干后加入显色剂A、B各50μL/孔进行显色，37℃温育10min，加入终止液50μL/孔，用酶标仪450nm波长进行读数。
其中显色剂A液配方为每1000mL水中加入过氧化脲1g，10.3g柠檬酸，35.8gNa2HPO4·12H2O，吐温-20100μL，pH5；B液配方为每1000mL蒸馏水中加入四甲基联苯胺(TMB)700mg(40mL DMSO溶解)，10.3g柠檬酸，pH2.4。试剂盒特异性试验：用上述建立的方法进行多糖其它型的样品检测，结果表明，该试剂检测脑膜炎球菌多糖Y信号良好，而与其它型多糖无交叉。
表6ELISA法检测ACYW135群脑膜炎球菌多糖Y型试剂特异性评价结果
表7单克隆抗体的特异性检测
Claims (6)
1.特异识别流脑膜炎球菌Y血清型多糖的单克隆抗体，为Clone7C6和Clone3A2；所述单克隆抗体Clone7C6的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQ ID No.13和14所示；所述单克隆抗体Clone3A2的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQIDNo.15和16所示。
2.产生权利要求1所述单克隆抗体的杂交瘤细胞。
3.权利要求1所述单克隆抗体在制备脑膜炎球菌检测试剂盒中的应用。
4.含有权利要求1所述单克隆抗体的药物。
5.含有权利要求1所述单克隆抗体的检测试剂盒。
6.如权利要求5所述的检测试剂盒，其为ELISA检测试剂盒，其以特异性地识别脑膜炎球菌Y血清型多糖的一种单克隆抗体为包被抗体，以酶标记的异性地识别脑膜炎球菌Y血清型多糖的另一种单克隆抗体作为检测抗体，所述单克隆抗体为Clone7C6和Clone3A2。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510161178.9A CN104829711B (zh) | 2014-04-08 | 2015-04-07 | 脑膜炎球菌荚膜多糖单克隆抗体及其应用 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410138378 | 2014-04-08 | ||
| CN2014101383788 | 2014-04-08 | ||
| CN201510161178.9A CN104829711B (zh) | 2014-04-08 | 2015-04-07 | 脑膜炎球菌荚膜多糖单克隆抗体及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104829711A CN104829711A (zh) | 2015-08-12 |
| CN104829711B true CN104829711B (zh) | 2018-04-03 |
Family
ID=53807942
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510161178.9A Active CN104829711B (zh) | 2014-04-08 | 2015-04-07 | 脑膜炎球菌荚膜多糖单克隆抗体及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104829711B (zh) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106399257A (zh) * | 2016-06-22 | 2017-02-15 | 云南沃森生物技术股份有限公司 | 抗a群脑膜炎球菌荚膜多糖结合物单克隆抗体、杂交瘤细胞株及应用 |
| CN109879961B (zh) * | 2019-03-26 | 2022-04-26 | 天津喜诺生物医药有限公司 | 一种抗隐球菌荚膜多糖单克隆抗体及其杂交瘤细胞株制备与应用 |
| CN110903388B (zh) * | 2019-12-03 | 2024-01-02 | 兰州生物制品研究所有限责任公司 | 一种将脑膜炎球菌抗血清去交叉反应的方法 |
| CN112480250B (zh) * | 2020-12-23 | 2022-03-15 | 上海交通大学 | 一种抗人骨桥蛋白的抗体及其应用 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5425946A (en) * | 1992-08-31 | 1995-06-20 | North American Vaccine, Inc. | Vaccines against group C Neisseria meningitidis |
| CN1351503A (zh) * | 1999-03-19 | 2002-05-29 | 史密丝克莱恩比彻姆生物有限公司 | 疫苗 |
| CN1457879A (zh) * | 2003-05-12 | 2003-11-26 | 范玉柱 | 脑膜炎球菌疫苗及其制备方法 |
| CN1852733A (zh) * | 2003-05-07 | 2006-10-25 | 安万特巴斯德公司 | 多价脑膜炎球菌衍生的多糖－蛋白质缀合物及疫苗 |
-
2015
- 2015-04-07 CN CN201510161178.9A patent/CN104829711B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5425946A (en) * | 1992-08-31 | 1995-06-20 | North American Vaccine, Inc. | Vaccines against group C Neisseria meningitidis |
| CN1351503A (zh) * | 1999-03-19 | 2002-05-29 | 史密丝克莱恩比彻姆生物有限公司 | 疫苗 |
| CN1852733A (zh) * | 2003-05-07 | 2006-10-25 | 安万特巴斯德公司 | 多价脑膜炎球菌衍生的多糖－蛋白质缀合物及疫苗 |
| CN1457879A (zh) * | 2003-05-12 | 2003-11-26 | 范玉柱 | 脑膜炎球菌疫苗及其制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104829711A (zh) | 2015-08-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104829711B (zh) | 脑膜炎球菌荚膜多糖单克隆抗体及其应用 | |
| US10613085B2 (en) | Monoclonal antibodies specific for serogroup X of N. meningitidis and uses thereof in diagnosis | |
| CN104593332B (zh) | 一种检测小麦矮腥黑粉菌的试剂盒及方法 | |
| CN106066398B (zh) | 一种a型产气荚膜梭菌毒素抗体的间接elisa检测方法 | |
| CN104459144B (zh) | 一种猪伪狂犬病毒强毒株和疫苗毒株鉴别检测试纸 | |
| CN101598733B (zh) | Ev71病毒中和表位抗原检测试剂盒或试剂及其制备方法 | |
| CN104862283B (zh) | 一对高特异性高亲和力结合人肌红蛋白的单克隆抗体及其应用 | |
| CN103266088A (zh) | 一种h7亚型禽流感病毒单克隆抗体及试剂盒 | |
| CN110526967A (zh) | 一种金黄色葡萄球菌肠毒素a纳米抗体a13、应用及试剂盒 | |
| CN103454411B (zh) | 一种生物素标记兔抗罗非鱼IgM多克隆抗体的制备方法及应用 | |
| CN1996020A (zh) | 黄瓜花叶病毒双抗体夹心酶联免疫吸附检测试剂盒及制备方法 | |
| CN109321532A (zh) | 一种用于检测山羊副流感病毒3型的双抗体夹心elisa检测试剂盒及其应用 | |
| CN101921337B (zh) | 间日疟原虫乳酸脱氢酶抗体、相关制备方法、杂交瘤细胞株和应用 | |
| CN102994455A (zh) | 一种黄瓜绿斑驳花叶病毒单克隆抗体及试剂盒 | |
| CN105777900B (zh) | 果斑病菌单抗及其杂交瘤细胞株 | |
| CN101612394B (zh) | 肺炎链球菌减毒活菌疫苗 | |
| CN103911351B (zh) | 分泌抗香蕉束顶病毒单抗杂交瘤细胞株及其单抗应用 | |
| Ahmed et al. | Characteristics of the serum vibriocidal and agglutinating antibodies in cholera cases and in normal residents of the endemic and non-endemic cholera areas | |
| CN1996019A (zh) | 百合隐症病毒双抗体夹心酶联免疫吸附检测试剂盒及制备方法 | |
| CN102690788A (zh) | 一种玉米赤霉烯酮抗独特型抗体及其制备方法和应用 | |
| CN105567643B (zh) | 可分泌抗ev71病毒蛋白vp1单克隆抗体的杂交瘤细胞、单克隆抗体及应用 | |
| CN105652003A (zh) | 金黄色葡萄球菌肠毒素检测试剂盒及其制备和使用方法 | |
| CN101424689A (zh) | 蓝舌病病毒检测试纸条 | |
| CN106399257A (zh) | 抗a群脑膜炎球菌荚膜多糖结合物单克隆抗体、杂交瘤细胞株及应用 | |
| Burns et al. | Characterization of monoclonal antibodies to human group B rotavirus and their use in an antigen detection enzyme-linked immunosorbent assay |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| EXSB | Decision made by sipo to initiate substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20200426 Address after: 101111 2-201, building 18, No. 99, Kechuang 14th Street, economic and Technological Development Zone, Daxing District, Beijing Patentee after: ABMAX BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd. Address before: Section 14 economic and Technological Development Zone of Beijing City, No. 99 18-2-201 street 101111 Patentee before: ABMAX BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd. |