CN104829597A - 1h-吲哚-2-碳酰肼衍生物及其制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

1H-吲哚-2-碳酰肼衍生物及其制备方法和用途。制备方法：1)合成中间体丙酮酸乙酯对硝基苯腙；2)制备中间体5-硝基吲哚-2-羧酸乙酯；3)制备中间体5-氨基-1H-吲哚-2-羧酸乙酯；4)制备5-(4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吲哚-2-羧酸乙酯；5)制备5-(4--(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼；6)制备N'-取代甲基亚基-5-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼衍生物。可在制备预防或治疗涉及CDK9受体相关疾病药物的用途。

Description

1H-吲哚-2-碳酰肼衍生物及其制备方法和用途
技术领域
本发明涉及1H-吲哚-2-碳酰肼衍生物，尤其是涉及一类N'-取代甲基亚基-5-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼衍生物及其制备方法和用途。
背景技术
细胞周期是细胞生命活动的基本过程。细胞经过长期进化，发展并建立了一套精密的分子调控机制来维持细胞周期的有序进行[1]。肿瘤细胞的最基本特征之一则表现为细胞周期异常和细胞无限增殖。随着分子生物学深入发展,细胞周期调控的分子机制逐渐为人们所研究和证明。这其中处于核心地位的是一个被称为细胞周期依赖性激酶家族(cycl in-dependentkinases,CDKs),它是一类丝/苏氨酸激酶。CDKs家族目前已经发现13个成员(CDK1-CDK13)，按其胞内功能不同分为两类：调控细胞周期CDKs和调节基因转录的CDKs[2]。作为真核基因转录调控过程中的关键因子,正性转录延伸因子b(positive transcription elongationfactor b,P-TEFb)主要是由CDK9及其调节蛋白CycT1组成的异源二聚体。在调节基因转录的过程中，CDK9能够磷酸化RNA聚合酶Ⅱ中CTD区域的Ser2以及负性转录延伸因子，促进转录的进行[3]。研究表明，人类许多重大疾病的发生与基因转录调控有关，因此转录调控特别是P-TEFb中CDK9活性调节是目前疾病如肿瘤等治疗的重要靶点。作为威胁全世界人类健康的疾病，肿瘤是目前研究较清楚的依赖于P-TEFb进行转录调控的一类重大疾病[4]。
开发CDKs抑制剂抑制其在细胞内的功能，进而达到抗肿瘤的目的，具有很好的应用前景。近年来，以此为抗肿瘤靶点，已经有众多CDK抑制剂进入临床治疗或试验阶段，如Flavopiridol、R-Roscovitine等[5-7]因此设计合成具有生物利用度高、抗癌活性明显和毒性低等优点的CDKs抑制剂是目前研究的热点。
参考文献：
[1]S.Lapenna,A.Giordano,Cell cycle kinases as therapeutic targets for cancer,Nat Rev Drug Discov,8(2009)547-566.
[2]N.R.Penthala,S.Bommagani,V.Janganati,K.B.MacNicol,C.E.Cragle,N.R.Madadi,L.L.Hardy,A.M.MacNicol,P.A.Crooks,Heck products of parthenolide andmelampomagnolide-B as anticancer modulators that modify cell cycle progression,EurJ Med Chem,85(2014)517-525.
[3]A.Putey,G.Fournet,O.Lozach,L.Perrin,L.Meijer,B.Joseph,Synthesisand biological evaluation of tetrahydro[1,4]diazepino[1,2-a]indol-1-ones ascyclin-dependent kinase inhibitors,Eur J Med Chem,83(2014)617-629.
[4]Y.N.Song,X.Q.Lin,D.W.Kang,X.Li,P.Zhan,X.Y.Liu,Q.Z.Zhang,Discoveryand characterization of novel imidazopyridine derivative CHEQ-2as a potent CDC25inhibitor and promising anticancer drug candidate,Eur J Med Chem,82(2014)293-307.
[5]P.M.Fischer,A.Gianella-Borradori,CDK inhibitors in clinical developmentfor the treatment of cancer,Expert Opin Inv Drug,12(2003)955-970.
[6]C.Hofmeister,M.Poi,M.Bowers,W.Zhao,M.Phelps,D.Benson,E.Kraut,S.Farag,Y.Efebera,J.Sexton,T.Lin,M.Grever,J.Byrd,A phase I trial offlavopiridol in relapsed multiple myeloma,Cancer Chemother Pharmacol,73(2014)249-257.
[7]C.Hofmeister,M.Poi,M.Bowers,W.Zhao,M.Phelps,D.Benson,E.Kraut,S.Farag,Y.Efebera,J.Sexton,T.Lin,M.Grever,J.Byrd,A phase I trial offlavopiridol in relapsed multiple myeloma,Cancer Chemother Pharmacol,73(2014)249-257.
发明内容
本发明的第一目的在于提供一类具有新结构的N'-取代甲基亚基-5-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼衍生物及其制备方法。
本发明的第二目的在于提供一类N'-取代甲基亚基-5-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼衍生物在制备预防或治疗涉及CDK9受体相关疾病药物的用途。
N'-取代甲基亚基-5-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼衍生物的结构式为：
其中，R1代表氢原子；R2代表C1-C8的烷基，取代或未取代的芳基。
所述一类N'-取代甲基亚基-5-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼衍生物的制备方法包括以下步骤：
1)合成中间体丙酮酸乙酯对硝基苯腙；
2)制备中间体5-硝基吲哚-2-羧酸乙酯；
3)制备中间体5-氨基-1H-吲哚-2-羧酸乙酯；
4)制备5-(4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吲哚-2-羧酸乙酯；
5)制备5-(4--(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼；
6)制备N'-取代甲基亚基-5-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼衍生物。
在步骤1)中，所述合成中间体丙酮酸乙酯对硝基苯腙的具体方法可为：在干燥的反应瓶中，先依次加入对硝基苯肼，无水乙醇；再在搅拌状态下加入丙酮酸乙酯，升温至回流，反应1～2h；薄层色谱法(TLC)检测反应已完全，停止反应。反应液冷却至室温，抽滤，收集滤饼，烘干得黄色固体产物中间体丙酮酸乙酯对硝基苯腙，收率89％～95％；所述硝基苯肼、无水乙醇和丙酮酸乙酯的摩尔配比为1∶(5～15)∶1.2。
在步骤2)中，所述制备中间体5-硝基吲哚-2-羧酸乙酯的具体方法可为：在干燥的反应瓶中，先依次加入丙酮酸乙酯对硝基苯腙，多聚磷酸；再在搅拌状态升温到80～100℃，保温反应1～2h，TLC检测反应已完全，停止反应，反应液冷却至室温，加大量的冰水，抽滤，收集滤饼，烘干得绿色固体产物5-硝基吲哚-2-羧酸乙酯，收率88％～95％；所述丙酮酸乙酯对硝基苯腙和多聚磷酸的摩尔配比为1∶(10～15)。
在步骤3)中，所述制备中间体5-氨基-1H-吲哚-2-羧酸乙酯的具体方法可为：在干燥的反应瓶中，先依次加入乙醇、水、乙酸、铁粉；再在搅拌状态升温到65～78℃后，分批加入5-硝基吲哚-2-羧酸乙酯，保温反应1～2h；TLC检测反应已完全，停止反应，反应液热过滤，滤液减压浓缩除去溶剂；浓缩后滤液里加入与乙醇等体积的水，后在搅拌下加入与乙醇等体积的乙酸乙酯，最后用碳酸氢钠调pH至7～8；过滤，分液，有机相用无水硫酸钠干燥后，过滤，滤液减压浓缩得到的粗产物用硅胶柱层析分离(洗脱剂为石油醚∶乙酸乙酯＝3∶1，v/v)得红色固体产物5-氨基吲哚-2-羧酸乙酯，收率70％～85％；所述5-硝基吲哚-2-羧酸乙酯、铁粉、乙醇、水、乙酸乙酯的摩尔配比为1∶4∶40∶133∶25。
在步骤4)中，所述制备5-(4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吲哚-2-羧酸乙酯的具体方法可为：在干燥的反应瓶中，室温条件下先依次加入乙醇，5-氨基吲哚-2-羧酸乙酯，氰胺；再在搅拌状态下向反应体系中加入盐酸，升温，回流反应15h；TLC检测反应已完全，停止反应，反应液减压浓缩除溶剂后加入水，再在冰浴下-5～0℃滴加硝酸铵的水溶液，滴加结束继续保温反应1～2h后，停止反应。反应液进行过滤，滤饼用乙醚洗涤2次，滤饼在45℃的真空干燥箱干燥4～8h后溶解在乙醇中，加入3-(二甲氨基)-1-(3-吡啶基)-2-丙烯-1-酮，并加入乙醇钠的乙醇溶液，升温回流反应48～50h；TLC检测反应已完全，冷却得黄色固体产物5-(4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吲哚-2-羧酸乙酯，收率65％～75％；所述5-氨基吲哚-2-羧酸乙酯、氰胺、浓盐酸、硝酸铵摩、氢氧化钠的摩尔配比为1∶2.3∶1.5∶2∶1.2。
在步骤5)中，所述制备5-(4--(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼的具体方法可为：在干燥的反应瓶中，室温条件下先依次加入乙醇，5-(4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吲哚-2-羧酸乙酯，水合肼，升温至78℃，回流反应8h；TLC检测反应已完全，停止反应，冷却，反应液过滤，滤饼用乙醇洗涤2次，滤饼在45℃的真空干燥箱干燥4～8h，得白色固体产物5-(4--(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼，收率72％～85％。其中所述，乙基5-(4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼、水合肼、乙醇的摩尔配比为1∶4∶(10-15)。
在步骤6)中，所述制备N'-取代甲基亚基-5-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼衍生物的具体方法可为：在干燥的反应瓶中，依次加入乙醇、5-(4--(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼、脂肪醛或芳香醛，升温，回流反应8～9h；TLC检测反应已完全，停止反应，冷却，反应液过滤，滤饼用乙醇洗涤2次，干燥得黄色固体产物，收率75％～85％，所述5-(4--(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼、脂肪醛或芳香醛、乙醇的摩尔配比为1∶1∶10。
所述一类N'-取代甲基亚基-5-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼衍生物可在制备预防或治疗涉及CDK9受体相关疾病药物的用途，所述涉及CDK9受体相关疾病可以包括但不限于肿瘤疾病。
附图说明
图1为(E)-N'-((1H-吲哚-3-基)甲基亚基)-5-(4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼对CDK9激酶活性抑制的浓度依赖性效果图。在图1中，横坐标为样品浓度(μmol/mL)；纵坐标为变化率(％)；DMSO为阴性对照，flavopiridol为阳性对照。
图2为(E)-N'-((1H-吲哚-3-基)甲基亚基)-5-(4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼对CDK9激酶活性抑制的浓度依赖性效果图。在图2中，横坐标为样品浓度(μmol/mL)；纵坐标为变化率(％)；DMSO为阴性对照，flavopiridol为阳性对照。
具体实施方式
为了便于理解本发明，现结合具体实施方式对本发明作进一步说明，以进一步诠释本发明，但不构成对本发明的任何方式的限制。
实施例1：丙酮酸乙酯对硝基苯腙的合成
在250mL干燥双颈瓶中依次加入对硝基苯肼(10g,0.065mol)，无水乙醇(85mL)，再在搅拌状态下滴加丙酮酸乙酯(8.14g,0.072mol)，滴加结束后升温加热至回流，搅拌反应2h后，TLC检测反应已结束，停止反应。反应液冷却至室温，抽滤，收集滤饼，烘干得黄色固体产物丙酮酸乙酯对硝基苯腙13.8g。收率89.6％。熔点(m.p.)：197～199℃。
波谱数据：1H-NMR(600MHz,CDCl3):δ8.21(d,J＝8.99Hz,2H),8.09(s,1H),7.28(d,J＝8.99Hz,2H),4.32-4.39(m,2H),2.17(s,3H),1.40(t,J＝7.06Hz,3H)。
实施例2：5-硝基吲哚-2-羧酸乙酯的制备
在干燥的500mL反应瓶中，先依次加入丙酮酸乙酯对硝基苯腙(10g,0.042mol)，多聚磷酸(110g)，再在搅拌状态升温到100℃，保温反应2h。TLC检测反应已结束，停止反应。反应液冷却至室温，加大量的冰水，抽滤，收集滤饼，烘干得绿色固体产物5-硝基吲哚-2-羧酸乙酯8.9g，收率90.2％，m.p.:222～224℃。
波谱数据：1H-NMR(600MHz,DMSO-d6):δ12.58(brs,1H),8.71(d,J＝2.02Hz,1H),8.12(dd,J＝2.20,9.17Hz,1H),7.61(d,J＝9.17Hz,1H),7.42(d,J＝0.92Hz,1H),4.37(q,J＝7.09Hz,2H),1.35(t,J＝7.15Hz,3H)。
实施例3：5-氨基吲哚-2-羧酸乙酯的制备
在干燥的250mL反应瓶中，先依次加入乙醇(80mL)，水(20mL)，乙酸(10mL)，铁粉(8.624g,0.154mol)；再在搅拌状态升温到75℃，分批加5-硝基吲哚-2-羧酸乙酯(9g,0.0385mol)，滴加结束后保温反应2h。薄层色谱法检测反应已结束，停止反应。反应液热过滤，滤液冷却后减压浓缩除去溶剂；浓缩得到的粘稠液体中加入80mL水后，在搅拌下加入80mL乙酸乙酯，并用碳酸氢钠调pH为7～8；液体过滤后分液，有机相用15g无水硫酸钠干燥5h，过滤，滤液减压浓缩得到的固体用硅胶柱层析分离(洗脱剂为石油醚∶乙酸乙酯＝3∶1，v/v)得红色固体产物5-氨基吲哚-2-羧酸乙酯6.1g，收率77.7％。
波谱数据：1H-NMR(600MHz,DMSO-d6):δ11.38(brs,1H),7.16-7.19(m,1H),6.84(dd,J＝0.83,2.11Hz,1H),6.69-6.73(m,2H),4.63(brs,2H),4.29(q,J＝7.09Hz,2H),1.31(t,J＝7.15Hz,3H)；13C-NMR(150MHz,DMSO-d6):δ161.9,142.5,132.0,128.2,127.1,117.2,113.2,106.6,103.6,60.6,14.8.
实施例4：5-(4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吲哚-2-羧酸乙酯的制备
在干燥的250mL反应瓶中，室温条件下先依次加入乙醇100mL，5-氨基吲哚-2-羧酸乙酯(3.39g,0.0166mol)，氰胺(1.59g,0.038mol)，再在搅拌状态下滴加浓盐酸(2.1mL,0.025mol)，滴加结束后升温至回流反应24h。薄层色谱法检测反应已结束，停止反应。反应液减压浓缩除溶剂后加入水，再在0℃滴加硝酸铵(2.64g,0.033mol)的水溶液，滴加结束后保温反应1h，过滤，乙醚洗涤滤饼2次，滤饼在45℃的真空干燥箱干燥4～8h后，在将其溶解在乙醇中，加入3-(二甲氨基)-1-(3-吡啶基)-2-丙烯-1-酮(2.92g,0.0166mol)，并滴加氢氧化钠(0.797g,0.01992mol)的乙醇溶液，滴加结束，升温至回流反应48h。薄层色谱法检测反应已结束，停止反应，冷却得黄色固体产物5-(4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吲哚-2-羧酸乙酯4.12g，收率69.1％,m.p.:255～257℃。
波谱数据：1H-NMR(600MHz,DMSO-d6):δ11.79(brs,1H),9.63(s,1H),9.35(s,1H),8.73(d,J＝3.67Hz,1H),8.58(d,J＝4.95Hz,1H),8.51(d,J＝7.89Hz,1H),8.18(s,1H),7.57-7.62(m,2H),7.41-7.46(m,2H),7.13(s,1H),4.35(q,J＝7.03Hz,2H),1.36(t,J＝7.06Hz,3H)；13C-NMR(150MHz,DMSO-d6):δ162.0,161.8,161.1,159.8,151.9,148.6,134.8,134.3,133.8,132.8,128.1,127.2,124.4,120.5,112.8,111.9,108.0,60.8,14.8；HRMS:calcd forC20H18N5O2[M+H]+360.1455,found 360.146；calcd for C20H17N5O2Na[M+Na]+382.1274,found382.1283.
实施例5：5-(4--(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼的制备
在干燥的100mL圆底烧瓶中，室温条件下先分别加入乙醇20mL，5-(4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吲哚-2-羧酸乙酯(3.59g,0.01mol)，水合肼(20mL)，升温至回流，反应8h。薄层色谱法检测反应已结束，停止反应，冷却得白色固体产物。反应液过滤，乙醇洗涤滤饼2次，滤饼在45℃的真空干燥箱干燥4～8h后得白色固体产物5-(4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼2.78g，收率80.6％。
波谱数据：1H-NMR(600MHz,DMSO-d6):δ11.50(brs,1H),9.73(brs,1H),9.57(brs,1H),9.35(brs,1H),8.73(brs,1H),8.57(brs,1H),8.49(d,J＝5.68Hz,1H),8.09(brs,1H),7.55-7.62(m,1H),7.51(d,J＝6.79Hz,1H),7.42(brs,1H),7.38(d,J＝7.52Hz,1H),7.05(brs,1H),4.50(brs,2H)；13C-NMR(150MHz,DMSO-d6):δ162.0,161.7,161.1,159.8,151.8,148.6,134.8,133.5,133.2,132.9,131.3,127.5,124.3,118.8,112.5,111.6,107.8,102.2；HRMS:calcd forC18H16N7O[M+H]+346.1411,found 346.1417；calcd for C18H15N7ONa[M+Na]+368.123,found368.1237.
实施例6(E)-N'-((1H-吲哚-3-基)甲基亚基)-5-(4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼的制备
在干燥的10ml反应瓶中，室温条件下先分别加入乙醇(5mL)，5-(4--(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼(0.069g,0.0002mol)，3-甲醛吲哚(0.029g,0.0002mol)，再升温至回流反应8h。薄层色谱法检测反应已结束，停止反应。反应液冷却，过滤；乙醇洗涤滤饼，滤饼在45℃的真空干燥箱干燥4-8h后得黄色固体产物(E)-N'-((1H-吲哚-3-基)甲基亚基)-5-(4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼0.081g，收率85.8％。
波谱数据：1H-NMR(600MHz,DMSO-d6):δ11.68(brs,1H),11.65(brs,1H),11.58(s,1H),9.75(s,1H),9.45(s,1H),8.88(d,J＝4.58Hz,1H),8.79(d,J＝7.89Hz,1H),8.66(s,1H),8.64(d,J＝4.95Hz,1H),8.33(d,J＝7.70Hz,1H),8.15(s,1H),7.83-7.89(m,2H),7.55(d,J＝8.44Hz,1H),7.51(d,J＝5.14Hz,1H),7.47(dd,J＝2.93,8.07Hz,2H),7.29(s,1H),7.21-7.25(m,1H),7.16-7.20(m,1H)；13C-NMR(150MHz,DMSO-d6):δ160.9,159.0,158.8,157.5,148.9,145.9,144.9,137.5,134.1,133.7,133.3,131.6,130.8,127.6,125.7,124.8,123.1,122.4,120.9,119.4,116.9,115.0,112.7,112.3,112.2,108.0,103.3；HRMS:calcd for C27H21N8O[M+H]+473.1833,found 473.1832；calcd for C27H20N8ONa[M+Na]+495.1652,found 495.1651.
实施例7(E)-N'-乙基-5-(4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼的制备
在干燥的10mL反应瓶中，室温条件下先分别加入乙醇(5mL)，5-(4--(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼(0.069g,0.0002mol)，乙醛(11.2μL,0.0002mol)，再升温至回流反应8h。薄层色谱法检测反应已结束，停止反应。反应液冷却，过滤；乙醇洗涤滤饼，滤饼在45℃的真空干燥箱干燥4～8h后得黄色固体产物(E)-N'-乙基-5-(4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼0.059g，收率79.5％。
波谱数据：1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.67(brs,1H),11.46(brs,1H),9.59(brs,1H),9.35(brs,1H),8.72(brs,1H),8.56(brs,1H),8.48(d,J＝4.40Hz,1H),8.19(brs,1H),7.75(brs,1H),7.55-7.61(m,1H),7.50(brs,1H),7.33-7.46(m,2H),7.18(brs,1H),1.96(brs,3H)；13C-NMR(150MHz,DMSO-d6):δ161.9,161.1,159.8,157.8,151.9,148.6,148.0,134.8,133.6,133.6,132.9,131.0,127.4,124.4,119.4,112.6,111.6,107.9,103.4,19.0；HRMS:calcd forC20H17N7O[M+H]+372.1567,found 372.1565；calcd for C20H27N7ONa[M+Na]+394.1387,found394.1385.
实施例8(E)-N'-苯基-5-(4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼的制备
在干燥的10mL反应瓶中，室温条件下先分别加入乙醇(5mL)，5-(4--(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼(0.069g,0.0002mol)，苯甲醛(20.4μL,0.0002mol)，再升温至回流反应8h。薄层色谱法检测反应已结束，停止反应。反应液冷却，过滤；乙醇洗涤滤饼，滤饼在45℃的真空干燥箱干燥4～8h后得黄色固体产物(E)-N'-苯基-5-(4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼0.071g，收率80.14％。
波谱数据：1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.91(brs,1H),11.77(brs,1H),9.64(brs,1H),9.38(brs,1H),8.75(brs,1H),8.59(d,J＝2.93Hz,1H),8.44-8.54(m,2H),8.25(brs,1H),7.77(brs,2H),7.60(brs,1H),7.53(brs,1H),7.39-7.51(m,5H),7.31(brs,1H)；13C-NMR(150MHz,DMSO-d6)δ163.3,161.9,161.1,159.9,158.1,151.9,148.6,147.4,145.4,136.9,134.9,134.8,133.7,132.9,132.3,130.8,130.5,129.3,127.5,124.4,119.6,112.7,111.6,107.9,104.0；HRMS:calcd for C25H19N7O[M+H]+434.1724,found 434.1718；calcd for C25H19N7ONa[M+Na]+434.1718,found 456.1537.
在艾滋病基因转录的过程中，HIV的长末端重复序列LTR主要是受P-TEFb进行调节的。NH1细胞是在子宫颈癌细胞系Hela细胞中建立的稳定细胞株，能稳定的表达HIV-LTR-Luciferase，该细胞株内Luciferase报告基因的表达水平能间接反映CDK9的激酶活性。本发明以NH1细胞作为研究CDK9激酶活性的模型对合成的1H-吲哚-2-碳酰肼类衍生物进行筛选，实验结果发现该类衍生物能有效抑制CDK9激酶的活性。例如，(E)-N'-((1H-吲哚-3-基)甲基亚基)-5-(4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼能有效地抑制P-TEFb调节的HIV-LTR-luciferase的转录即抑制CDK9的活性，而且这种抑制效果呈现浓度依赖性(如图1:处理时间一定时，Luciferase的表达水平随着药物浓度的增加而降低，即CDK9的激酶活性随着药物浓度的增加而降低)以及时间依赖性(如图2：药物浓度一定的情况下，Luciferase表达水平随着处理时间的增加而降低，即CDK9的激酶活性随着药物处理时间的增加而降低)。由此可见(E)-N'-((1H-吲哚-3-基)甲基亚基)-5-(4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼能显著抑制CDK9(P-TEFb)的激酶活性，有效抑制基因转录的进行，因此可以在多种与CDK9调节的基因转录相关的疾病治疗中得到广泛应用。

Claims (10)

1.N'-取代甲基亚基-5-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼衍生物，其特征在于其结构式为：
其中，R1代表氢原子；R2代表C1-C8的烷基，取代或未取代的芳基。
2.N'-取代甲基亚基-5-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼衍生物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
1)合成中间体丙酮酸乙酯对硝基苯腙；
2)制备中间体5-硝基吲哚-2-羧酸乙酯；
3)制备中间体5-氨基-1H-吲哚-2-羧酸乙酯；
4)制备5-(4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吲哚-2-羧酸乙酯；
5)制备5-(4--(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼；
6)制备N'-取代甲基亚基-5-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼衍生物。
3.如权利要求2所述N'-取代甲基亚基-5-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼衍生物的制备方法，其特征在于在步骤1)中，所述合成中间体丙酮酸乙酯对硝基苯腙的具体方法为：在反应瓶中，先依次加入对硝基苯肼，无水乙醇；再加入丙酮酸乙酯，升温至回流反应；薄层色谱法检测反应完全后，停止反应；反应液冷却至室温，抽滤，收集滤饼，烘干得黄色固体产物中间体丙酮酸乙酯对硝基苯腙。
4.如权利要求3所述N'-取代甲基亚基-5-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼衍生物的制备方法，其特征在于所述回流反应的时间为1～2h；所述硝基苯肼、无水乙醇和丙酮酸乙酯的摩尔配比为1∶(5～15)∶1.2。
5.如权利要求2所述N'-取代甲基亚基-5-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼衍生物的制备方法，其特征在于在步骤2)中，所述制备中间体5-硝基吲哚-2-羧酸乙酯的具体方法为：在反应瓶中，先依次加入丙酮酸乙酯对硝基苯腙，多聚磷酸；再升温到80～100℃，保温反应1～2h，TLC检测反应完全后，停止反应，反应液冷却至室温，加冰水，抽滤，收集滤饼，烘干得绿色固体产物5-硝基吲哚-2-羧酸乙酯；所述丙酮酸乙酯对硝基苯腙和多聚磷酸的摩尔配比可为1∶(10～15)。
6.如权利要求2所述N'-取代甲基亚基-5-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼衍生物的制备方法，其特征在于在步骤3)中，所述制备中间体5-氨基-1H-吲哚-2-羧酸乙酯的具体方法为：在反应瓶中，先依次加入乙醇、水、乙酸、铁粉；再升温到65～78℃后，分批加入5-硝基吲哚-2-羧酸乙酯，保温反应1～2h；TLC检测反应完全后，停止反应，反应液热过滤，滤液减压浓缩除去溶剂；浓缩后滤液里加入水，再加入乙酸乙酯，最后用碳酸氢钠调pH至7～8；过滤，分液，有机相用无水硫酸钠干燥后，过滤，滤液减压浓缩得到的粗产物用硅胶柱层析分离，得红色固体产物5-氨基吲哚-2-羧酸乙酯；所述浓缩后滤液里加入水，再加入乙酸乙酯，是浓缩后滤液里加入与乙醇等体积的水，再加入与乙醇等体积的乙酸乙酯；所述硅胶柱层析分离的洗脱剂按体积比可为石油醚∶乙酸乙酯＝3∶1；所述5-硝基吲哚-2-羧酸乙酯、铁粉、乙醇、水、乙酸乙酯的摩尔配比可为1∶4∶40∶133∶25。
7.如权利要求2所述N'-取代甲基亚基-5-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼衍生物的制备方法，其特征在于在步骤4)中，所述制备5-(4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吲哚-2-羧酸乙酯的具体方法为：在反应瓶中，先依次加入乙醇，5-氨基吲哚-2-羧酸乙酯，氰胺；再向反应体系中加入盐酸，升温回流反应；TLC检测反应完全后，停止反应，反应液减压浓缩除溶剂后加入水，再在冰浴下-5～0℃加入硝酸铵的水溶液，继续保温反应1～2h后，反应液进行过滤，滤饼用乙醚洗涤，滤饼干燥后溶解在乙醇中，加入3-(二甲氨基)-1-(3-吡啶基)-2-丙烯-1-酮，并加入乙醇钠的乙醇溶液，升温回流反应48～50h；TLC检测反应完全后，冷却得黄色固体产物5-(4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吲哚-2-羧酸乙酯；所述5-氨基吲哚-2-羧酸乙酯、氰胺、浓盐酸、硝酸铵摩、氢氧化钠的摩尔配比可为1∶2.3∶1.5∶2∶1.2；所述升温回流反应的时间可为15h；所述滤饼干燥可在45℃的真空干燥箱干燥4～8h。
8.如权利要求2所述N'-取代甲基亚基-5-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼衍生物的制备方法，其特征在于在步骤5)中，所述制备5-(4--(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼的具体方法为：在反应瓶中，先依次加入乙醇、5-(4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吲哚-2-羧酸乙酯、水合肼，升温回流反应；TLC检测反应完全后，停止反应，冷却，反应液过滤，滤饼用乙醇洗涤，滤饼干燥，得白色固体产物5-(4--(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼；所述乙基5-(4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼、水合肼、乙醇的摩尔配比可为1∶4∶(10～15)；所述升温回流反应的温度可为78℃，升温回流反应的时间可为8h；所述滤饼干燥可在45℃的真空干燥箱干燥4～8h。
9.如权利要求2所述N'-取代甲基亚基-5-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼衍生物的制备方法，其特征在于在步骤6)中，所述制备N'-取代甲基亚基-5-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼衍生物的具体方法为：在反应瓶中，依次加入乙醇、5-(4--(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼、脂肪醛或芳香醛，升温回流反应；TLC检测反应完全后，停止反应，冷却，反应液过滤，滤饼用乙醇洗涤，干燥得黄色固体产物，所述5-(4--(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼、脂肪醛或芳香醛、乙醇的摩尔配比可为1∶1∶10；升温回流反应的时间可为8～9h。
10.如权利要求1所述N'-取代甲基亚基-5-((4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-碳酰肼衍生物在制备预防或治疗涉及CDK9受体相关疾病药物应用；所述涉及CDK9受体相关疾病可以包括但不限于肿瘤疾病。
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