CN104826618A - 氨基二醇亲水色谱固定相及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明氨基二醇亲水色谱固定相，其结构为：；本发明的制备方法包括以下步骤：⑴制备末端炔基硅胶：①在有机溶剂中加入硅烷偶联剂和丙炔胺；②加入活化的微球型硅胶；③反应、洗涤得到固体物；④真空干燥得到末端炔基硅胶；⑵利用“链接化学”制备氨基二醇亲水色谱固定相：①制备硅胶上炔基；②加入修饰有叠氮基团的氨基二醇及催化剂；③反应、洗涤得到固体物；④真空干燥得到氨基二醇亲水色谱固定相。本发明采用氨基二醇作为极性功能基团，在亲水作用液相色谱模式下能实现对强极性化合物的高效分离；氨基二醇表面结构不会因pH的变化而变化，也不易与溶质分子发生反应；本发明的制备方法能在温和的条件下实现高选择性和高转化率的固载。
Description
技术领域
本发明涉及液相色谱固定相技术领域，具体的说，是一种使用“链接化学”（click chemistry）作为键合方法制备的氨基二醇亲水色谱固定相以及所述氨基二醇亲水色谱固定相的制备方法。
技术背景
亲水作用色谱（英文简称HILIC），是近年来发展起来的用于分离强极性组分的色谱技术，是一种以极性固定相（如硅胶或衍生硅胶）及含高浓度极性有机溶剂和低浓度水溶液为流动相的色谱模式。所述亲水作用色谱解决了传统反相色谱疏水性固定相（如C18、C8等对强极性化合物——如核苷、头孢、培南等）保留很弱、甚至无保留的问题。将亲水作用色谱用于分离极性化合物，如氨基酸、肽和糖等已有文献报道。其中，亲水作用色谱的固定相依然是使用正相固定相：主要是直接使用硅胶、氨基、酰胺基、二醇基、糖类等作为固定相。但是，不同类型的固定相存在着不同的保留机制和分离性能，有些类型的固定相会存在一些比较大的缺点，例如：硅胶柱容易发生不可逆吸附现象；氨基柱会与糖类生成Schiff碱；从而影响分离。目前，为亲水作用色谱开发专门固定相的工作还在刚刚起步，亲水作用色谱商品化的固定相种类非常少，因此，为亲水作用色谱开发专门固定相的工作必须要有进一步的发展。
“链接化学”（click chemistry）亦称“点击化学”，是由贝瑞·夏普利斯（K.Barry Sharpless）等人提出的，其核心内容是：用少量简单可靠及高选择性的化学转变来获得更广泛的分子多样性。“链接化学”开创了快速、有效、甚至是100%可靠的、高选择性地制造各类新化合物的合成化学新领域，其中，最为广泛应用的反应是Huisgen 1,3-diploar cycloaddition反应，它在色谱固定相的合成上发挥了很重要的作用。Huisgen 1,3-diploar cycloaddition的反应式为：
。
发明内容
本发明的目的在于克服上述不足，提供一种氨基二醇亲水色谱固定相，以满足在亲水作用色谱模式下实现对强极性化合物的分离。本发明的第二个目的是，提供所述氨基二醇亲水色谱固定相的制备方法，采用“链接化学”作为键合反应方法，可以在温和条件下实现高选择性和高转化率的固载。
为实现上述目的，本发明采取以下技术方案。
一种氨基二醇亲水色谱固定相，其特征在于，其结构为：
。
为实现上述第二个目的，本发明采取以下技术方案。
一种氨基二醇亲水色谱固定相的制备方法，使用“链接化学”作为键合方法键合氨基二醇分子，包括以下具体步骤：
（1）制备末端炔基硅胶
①在有机溶剂中加入硅烷偶联剂和丙炔胺，于60～150℃条件下反应6～36小时；所述硅烷偶联剂与丙炔胺的摩尔比为1～5:1.2～5；
②加入活化的微球型硅胶，每克微球型硅胶所需的硅烷偶联剂为1～10mmol；
③在80～120℃条件下反应12～48小时，尔后用砂芯漏斗过滤，依次用二氯甲烷、甲醇和丙酮洗涤，得到固体物；
④将步骤（1）③得到的固体物置于真空干燥箱中在40～80℃条件下干燥6～12小时，得到末端炔基硅胶；
其特征在于：
（2）利用“链接化学”制备氨基二醇亲水色谱固定相
①将步骤（1）④制备的末端炔基硅胶加入体积比为2～10:1的水与甲醇的混合溶剂中，每克末端炔基硅胶所需水与甲醇的混合溶剂的量为20～50mL，得到硅胶上炔基；
②在步骤（2）①得到的硅胶上炔基内加入修饰有叠氮基团的氨基二醇及催化剂：所述修饰有叠氮基团的氨基二醇加入的摩尔剂量为所述硅胶上炔基摩尔剂量的1～15倍；所述催化剂为二价铜和抗坏血酸钠，所述二价铜加入的摩尔剂量为所述硅胶上炔基摩尔剂量的1～10%，所述抗坏血酸钠加入的摩尔剂量为所述硅胶上炔基摩尔剂量的2～40%；
③在10～80℃条件下反应72～200小时，尔后用砂芯漏斗过滤，依次用水、重量浓度为2～20%的EDTA二钠水溶液、水、甲醇、丙酮洗涤，得到固体物；
④将步骤（2）③得到的固体物置于真空干燥箱中在40～80℃条件下干燥6～12小时，得到氨基二醇亲水色谱固定相；
步骤（2）的反应通式为：
，
式中，R的结构为：
。
进一步，步骤（1）①采用的有机溶剂为N,N-二甲基甲酰胺，每克硅胶所需有机溶剂的量为5～30mL。
进一步，步骤（1）①采用的硅烷偶联剂的结构为：
；
其反应式为：
。
进一步，步骤（1）②采用的微球型硅胶为粒径与孔径均匀的全多孔硅胶球状体，其粒径为5～40μm，孔径为60～300。
进一步，步骤（2）②采用的修饰有叠氮基团的氨基二醇的结构为：
。
进一步，步骤（2）②修饰有叠氮基团的氨基二醇的合成步骤为：
。
本发明的积极效果是：
（1）采用修饰有叠氮基团的氨基二醇作为极性功能基团，其结构简单，并且作为极性固定相在亲水作用液相色谱模式下能实现对强极性化合物的高效分离。
（2）将修饰有叠氮基团的氨基二醇作为功能基团，其性质十分稳定，其表面结构不会因为pH的变化而发生变化，也不容易与溶质分子发生反应。
（3）采用“链接化学”作为键合反应方法，可以在温和条件下实现高选择性和高转化率的固载。
附图说明
附图1为本发明氨基二醇亲水色谱固定相的制备方法的流程框图。
附图2为实施例1制备的氨基二醇亲水色谱固定相用于亲水模式下分离核苷的色谱图。
附图3为实施例1制备的氨基二醇亲水色谱固定相用于亲水模式下分离小分子酸的色谱图。
附图4为实施例1制备的氨基二醇亲水色谱固定相用于亲水模式下分离小分子碱的色谱图。
附图5为实施例1制备的氨基二醇亲水色谱固定相用于亲水模式下分离头孢的色谱图。
附图6为实施例1制备的氨基二醇亲水色谱固定相用于亲水模式下分离培南的色谱图。
具体实施方式
以下结合附图继续介绍本发明氨基二醇亲水色谱固定相的制备方法的具体实施方式，并证明本发明制备的氨基二醇亲水色谱固定相可有效地用于亲水作用色谱模式下对极性化合物的分离。需要说明的是，本发明的实施不限于以下的实施方式。
实施例1
一种氨基二醇亲水色谱固定相的制备方法，包含以下步骤（参见图1）：
（1）制备末端炔基硅胶
①在500ml三口烧瓶中加入50ml无水N,N-二甲基甲酰胺、35mmol（约8.66mL）3-异氰酸丙基三乙氧基硅烷、42mmol（约2.88mL）丙炔胺，于85℃条件下反应12小时。
②继续加入活化的、粒径为5μm、孔径为100的球形硅胶颗粒10g。
③在110℃条件下继续反应31小时，尔后用砂芯漏斗过滤，依次用300mL二氯甲烷、500mL甲醇、250mL丙酮洗涤，得到固体物。
④将步骤（1）③得到的固体物置于真空干燥箱中在60℃条件下干燥7小时，得到末端炔基硅胶。
（2）利用“链接化学”制备氨基二醇亲水色谱固定相
①将步骤（1）④制备的末端炔基硅胶加入体积比为2:1的水与甲醇的混合溶剂中，每克末端炔基硅胶所需水与甲醇的混合溶剂的量为20mL，得到硅胶上炔基。
②在步骤（2）①得到的硅胶上炔基内继续加入修饰有叠氮基团的氨基二醇及催化剂二价铜与抗坏血酸钠混合物或者一价铜盐催化剂：
加入的叠氮氨基二醇的制备方法为：
——于250mL单口瓶中加入10g 1-（对硝基苯基）-2-N,N-二甲氨基-1,3-丙二醇；100mL甲醇和1gRaney Ni，鼓上氢气球，室温搅拌10h，TLC检测反应完全，抽滤旋蒸得到8.3g黄色固体，收率为95%。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.13 (d, 2 H, J = 8.4 Hz), 6.64 (d,2 H, J = 8.4 Hz), 4.31 (d,1 H,J=10.0Hz), 3.50-3.46 (m,1 H), 3.38-3.34 (m,1 H), 2.70-2.64 (m,1 H), 2.50 (s,6 H), 1.25 (s,2 H)。
——于250mL单孔瓶中加入6.3g上步产物，0.08g五水硫酸铜（0.01equiv），12.4g碳酸钾（3equiv）和90mL甲醇，搅拌冰浴降温，冰水浴下分批加入9.4g叠氮磺酰咪唑盐酸盐（1.5equiv）,加完室温搅拌10h，TLC检测反应，抽滤旋蒸过柱得到5.6g黄色色油状物，收率79%。1H NMR （400 MHz, CDCl3）: δ 7.33（d,2 H,J=7.2 Hz）, 6.98（d,2 H,J=7.2 Hz） , 4.38（d,2H, J=9.6 Hz）, 3.52-3.47（m,1 H）, 3.42-3.39（m,1 H）, 2.64-2.59（m, 1 H）, 2.50 （s,6H）； 13C NMR（100MHz, CDCl3）:δ139.7, 138.8, 128.6, 119.2, 71.4, 70.7, 58.2, 41.5; IR（KBr cm-1）: 2100（-N3-）, 3350（-OH-）, HRMS-ESI Calcd for C11H17N4O2 [M+H]+ 237.1352, found: [M+H]+ 237.1346。
所述叠氮氨基二醇加入的摩尔剂量为步骤（2）①得到的硅胶上炔基摩尔剂量的1倍；
所述二价铜加入的摩尔剂量为所述硅胶上炔基摩尔剂量的5%，抗坏血酸钠加入的摩尔剂量为所述硅胶上炔基摩尔剂量的20%：
取0.22g五水硫酸铜与0.7g抗坏血酸钠分别用5mL水溶解，将五水硫酸铜溶液滴加至抗坏血酸钠溶液中，再将二价铜与抗坏血酸钠混合液滴加至4.2g叠氮氨基二醇与100mL甲醇体系中，缓慢搅拌下加入6g硅胶上炔基。
③在40℃条件下搅拌反应150小时，尔后用砂芯漏斗过滤，依次用300mL甲醇、500mL 10% EDTA溶液、300mL50℃的水、200mL甲醇、200mLTHF、200mL乙腈、200mL二氯甲烷洗涤，得到固体物，其结构为：
。
④将步骤（2）③得到的固体物置于真空干燥箱中在50℃条件下干燥10小时，得到目标产物——氨基二醇亲水色谱固定相。
对实施例1制备的氨基二醇亲水色谱固定相装柱进行色谱评价
将所得氨基二醇亲水色谱固定相填装于4.6mm×150mm的不锈钢HPLC色谱柱中，制得的色谱柱用于测试其在亲水色谱模式下对强极性化合物的保留和分离混合样品。
（1）用于分离核苷
以乙腈和水作为流动相，乙腈与水的体积比为85︰15，流速1mL／min，柱温为35℃，检测波长为254nm，其色谱图如图2所示：图中：1为尿嘧啶；2为5-甲基尿苷；3为腺嘌呤；4为胞嘧啶；5为次黄嘌呤；6为肌苷。
分离结果显示，在本发明所提供的氨基二醇亲水色谱固定相的不锈钢HPLC色谱柱上，反相色谱柱死时间流出的强极性化合物尿嘧啶得到了很好的保留，其他核苷也得到了很好的基线分离，表现出了典型的亲水作用模式特征和良好的分离选择性。
（2）用于分离小分子酸
以乙腈和20mM甲酸铵（pH3.3）作为流动相，乙腈与缓冲盐的体积比为85︰15，流速1mL／min，柱温为35℃，检测波长为254nm，色谱图如图3所示：图中：1为对叔丁基苯甲酸，2为山梨酸，3为对甲氧基苯甲酸，4为肉桂酸，5为对羟基苯甲酸，6为对溴苯甲酸，7为3,4-二羟基苯甲酸。
分离结果显示，在本发明所提供的氨基二醇亲水色谱固定相的不锈钢HPLC色谱柱上，几个小分子酸得到了很好的基线分离，表现出了典型的亲水作用模式特征和良好的分离选择性。
（3）用于分离小分子碱
以乙腈和水作为流动相，乙腈与水的体积比为95︰5，流速1mL／min，柱温为35℃，检测波长为254nm，色谱图如图4所示：图中：1为二苯胺，2为咖啡因，3为可可碱，4为茶碱，5为槲皮素。
分离结果显示，在本发明所提供的氨基二醇亲水色谱固定相的不锈钢HPLC色谱柱上，几个小分子碱得到了很好的基线分离，表现出了典型的亲水作用模式特征和良好的分离选择性。
（4）用于分离头孢
以乙腈和20mM甲酸铵（pH3.2）作为流动相，乙腈与缓冲盐的体积比为60︰40，流速1mL／min，柱温为35℃，检测波长为254nm，色谱图如图5所示：图中：1为盐酸地尔硫卓，2为头孢拉定，3为哌拉西林钠，4为头孢孟多酯钠，5为头孢呋辛钠，6为头孢噻肟钠，7为头孢替唑钠。
分离结果显示，在本发明所提供的氨基二醇亲水色谱固定相的不锈钢HPLC色谱柱上，几个头孢得到了较好的分离，表现出了典型的亲水作用模式特征和良好的分离选择性。
（5）用于分离培南
以乙腈和20mM甲酸铵（pH3.1）作为流动相，0～10min：75%乙腈；10～20min：75%～40%乙腈；20～30min：40%乙腈；流速1mL／min，柱温为35℃，检测波长为254nm，色谱图如图6所示：图中：1为比阿培南，2为美罗培南，3为多尼培南，4为厄他培南。
分离结果显示，在本发明所提供的氨基二醇亲水色谱固定相的不锈钢HPLC色谱柱上，4个培南都得到了很好的基线分离，表现出了典型的亲水作用模式特征和良好的分离选择性。
实施例2
一种氨基二醇亲水色谱固定相的制备方法，包含以下步骤：
（1）制备末端炔基硅胶
①在500ml三口烧瓶中加入350ml无水N,N-二甲基甲酰胺、35mmol（约8.66m1）3-异氰酸丙基三乙氧基硅烷、175mmol（约12mL）丙炔胺，于60℃条件下反应36小时。
②继续加入活化的、粒径为20μm、孔径为60的球形硅胶颗粒35g。
③在80℃条件下继续反应48小时，尔后用砂芯漏斗过滤，依次用300mL二氯甲烷、500mL甲醇、250mL丙酮洗涤，得到固体物。
④将步骤（1）③得到的固体物置于真空干燥箱中在40℃条件下干燥12小时，得到末端炔基硅胶。
（2）利用“链接化学”制备氨基二醇亲水色谱固定相
①将步骤（1）得到的末端炔基硅胶加入体积比为5︰1的水与甲醇的混合溶剂中，每克末端炔基硅胶所需水与甲醇混合溶剂的量为40mL，得到硅胶上炔基。
②在步骤（2）①得到的硅胶上炔基内继续加入修饰有叠氮基团的氨基二醇及催化剂二价铜与抗坏血酸钠混合物：
所述叠氮氨基二醇加入的摩尔剂量为步骤（2）①得到的硅胶上炔基摩尔剂量的8倍；
所述二价铜加入的摩尔剂量为所述硅胶上炔基摩尔剂量的1%，抗坏血酸钠加入的摩尔剂量为所述硅胶上炔基摩尔剂量的2%：
取23mg抗坏血酸钠用5mL水溶解，取15mg五水硫酸铜也用5mL水溶解；将五水硫酸铜溶液滴加至抗坏血酸钠溶液中，再将二价铜与抗坏血酸钠混合液滴加至11g叠氮氨基二醇与100mL甲醇体系中,于缓慢搅拌下加入6g步骤（2）①得到的硅胶上炔基。
③ 在10℃条件下搅拌反应200小时，然后用砂芯漏斗过滤，再依次用300mL甲醇、500mL 2% EDTA溶液、300mL 50℃的水、200mL甲醇、200mL THF、200mL乙腈和200mL二氯甲烷洗涤，得到固体物。
④ 将步骤（2）③得到的固体物置于真空干燥箱中在40℃条件下干燥12小时，得到目标产物——氨基二醇亲水色谱固定相。
实施例3
一种氨基二醇亲水色谱固定相的制备方法，包含以下步骤：
（1）制备末端炔基硅胶
①在500ml三口烧瓶中加入105ml无水N,N-二甲基甲酰胺， 35mmol（约8.66m1）3-异氰酸丙基三乙氧基硅烷，35mmol丙炔胺（约2.4mL），150℃下反应6小时。
②继续加入活化的、粒径为40μm、孔径为300的球形硅胶颗粒3.5g。
③在120℃条件下继续反应12小时，尔后用砂芯漏斗过滤，依次用300mL二氯甲烷、500mL甲醇、250mL丙酮洗涤，得到固体物。
④将步骤（1）③得到的固体物置于真空干燥箱中在80℃条件下干燥6小时，得到末端炔基硅胶。
（2）利用“链接化学”制备氨基二醇亲水色谱固定相
①将步骤（1）得到的末端炔基硅胶加入体积比为10︰1的水与甲醇的混合溶剂中，每克末端炔基硅胶所需水与甲醇混合溶剂的量为50mL，得到硅胶上炔基。
②在步骤（2）①得到的硅胶上炔基内继续加入修饰有叠氮基团的氨基二醇及催化剂二价铜与抗坏血酸钠混合物：
所述叠氮氨基二醇加入的摩尔剂量为步骤（2）①得到的硅胶上炔基摩尔剂量的15倍；
所述二价铜加入的摩尔剂量为所述硅胶上炔基摩尔剂量的10%，抗坏血酸钠加入的摩尔剂量为所述硅胶上炔基摩尔剂量的40%：
取280mg抗坏血酸钠用5mL水溶解，取90mg五水硫酸铜也用5mL水溶解；将五水硫酸铜溶液滴加至抗坏血酸钠溶液中，再将二价铜与抗坏血酸钠混合液滴加至12.4g叠氮氨基二醇与100mL甲醇体系中,于缓慢搅拌下加入0.5g步骤（2）①得到的硅胶上炔基。
③ 在80℃条件下搅拌反应72小时，然后用砂芯漏斗过滤，再依次用300mL甲醇、500mL 20% EDTA溶液、300mL50℃的水、200mL甲醇、200mL THF、200mL乙腈和200mL二氯甲烷洗涤，得到固体物。
④ 将步骤（2）③得到的固体物置于真空干燥箱中在80℃条件下干燥6小时，得到目标产物——氨基二醇亲水色谱固定相。
实施例4
一种氨基二醇亲水色谱固定相的制备方法，包含以下步骤：
（1）制备末端炔基硅胶
①在500ml三口烧瓶中加入105ml无水N,N-二甲基甲酰胺，35mmol（约8.66m1）3-异氰酸丙基三乙氧基硅烷，35mmol丙炔胺（约2.4mL），140℃下反应8小时。
②继续加入活化的、粒径为40μm、孔径为300的球形硅胶颗粒3.5g。
③在110℃条件下继续反应13小时，尔后用砂芯漏斗过滤，依次用300mL二氯甲烷、500mL甲醇、250mL丙酮洗涤，得到固体物。
④将步骤（1）③得到的固体物置于真空干燥箱中在70℃条件下干燥6小时，得到末端炔基硅胶。
（2）利用“链接化学”制备氨基二醇亲水色谱固定相
①将步骤（1）得到的末端炔基硅胶加入体积比为10︰1的水与甲醇的混合溶剂中，每克末端炔基硅胶所需水与甲醇混合溶剂的量为50mL，得到硅胶上炔基。
②在步骤（2）①得到的硅胶上炔基内继续加入修饰有叠氮基团的氨基二醇及催化剂二价铜与抗坏血酸钠混合物：
所述叠氮氨基二醇加入的摩尔剂量为步骤（2）①得到的硅胶上炔基摩尔剂量的5倍；
所述二价铜加入的摩尔剂量为所述硅胶上炔基摩尔剂量的10%，抗坏血酸钠加入的摩尔剂量为所述硅胶上炔基摩尔剂量的40%：
取280mg抗坏血酸钠用5mL水溶解，取90mg五水硫酸铜也用5mL水溶解；将五水硫酸铜溶液滴加至抗坏血酸钠溶液中，再将二价铜与抗坏血酸钠混合液滴加至4.1g叠氮氨基二醇与100mL甲醇体系中,于缓慢搅拌下加入0.5g步骤（2）①得到的硅胶上炔基。
③ 在80℃条件下搅拌反应72小时，然后用砂芯漏斗过滤，再依次用300mL甲醇、500mL 20% EDTA溶液、300mL50℃的水、200mL甲醇、200mL THF、200mL乙腈和200mL二氯甲烷洗涤，得到固体物。
④ 将步骤（2）③得到的固体物置于真空干燥箱中在80℃条件下干燥6小时，得到目标产物——氨基二醇亲水色谱固定相。
实施例5
一种氨基二醇亲水色谱固定相的制备方法，包含以下步骤：
（1）制备末端炔基硅胶
①在500ml三口烧瓶中加入105ml无水N,N-二甲基甲酰胺， 35mmol（约8.66m1） 3-异氰酸丙基三乙氧基硅烷，35mmol丙炔胺（约2.4mL），130℃下反应9小时。
②继续加入活化的、粒径为40μm、孔径为300的球形硅胶颗粒3.5g。
③在90℃条件下继续反应35小时，尔后用砂芯漏斗过滤，依次用300mL二氯甲烷、500mL甲醇、250mL丙酮洗涤，得到固体物。
④将步骤（1）③得到的固体物置于真空干燥箱中在80℃条件下干燥6小时，得到末端炔基硅胶。
（2）利用“链接化学”制备氨基二醇亲水色谱固定相
①将步骤（1）得到的末端炔基硅胶加入体积比为10︰1的水与甲醇的混合溶剂中，每克末端炔基硅胶所需水与甲醇混合溶剂的量为50mL，得到硅胶上炔基。
②在步骤（2）①得到的硅胶上炔基内继续加入修饰有叠氮基团的氨基二醇及催化剂二价铜与抗坏血酸钠混合物：
所述叠氮氨基二醇加入的摩尔剂量为步骤（2）①得到的硅胶上炔基摩尔剂量的2倍；
所述二价铜加入的摩尔剂量为所述硅胶上炔基摩尔剂量的10%，抗坏血酸钠加入的摩尔剂量为所述硅胶上炔基摩尔剂量的40%：
取280mg抗坏血酸钠用5mL水溶解，取90mg五水硫酸铜也用5mL水溶解；将五水硫酸铜溶液滴加至抗坏血酸钠溶液中，再将二价铜与抗坏血酸钠混合液滴加至1.8g叠氮氨基二醇与100mL甲醇体系中,于缓慢搅拌下加入0.5g步骤（2）①得到的硅胶上炔基。
③ 在80℃条件下搅拌反应72小时，然后用砂芯漏斗过滤，再依次用300mL甲醇、500mL 20% EDTA溶液、300mL50℃的水、200mL甲醇、200mL THF、200mL乙腈和200mL二氯甲烷洗涤，得到固体物。
④ 将步骤（2）③得到的固体物置于真空干燥箱中在80℃条件下干燥6小时，得到目标产物——氨基二醇亲水色谱固定相。
实施例6
一种氨基二醇亲水色谱固定相的制备方法，包含以下步骤：
（1）制备末端炔基硅胶
①在500ml三口烧瓶中加入105ml无水N,N-二甲基甲酰胺， 35mmol（约8.66m1）3-异氰酸丙基三乙氧基硅烷，35mmol丙炔胺（约2.4mL），100℃下反应10小时。
②继续加入活化的、粒径为40μm、孔径为300的球形硅胶颗粒3.5g。
③在120℃条件下继续反应12小时，尔后用砂芯漏斗过滤，依次用300mL二氯甲烷、500mL甲醇、250mL丙酮洗涤，得到固体物。
④将步骤（1）③得到的固体物置于真空干燥箱中在80℃条件下干燥6小时，得到末端炔基硅胶。
（2）利用“链接化学”制备氨基二醇亲水色谱固定相
①将步骤（1）得到的末端炔基硅胶加入体积比为10︰1的水与甲醇的混合溶剂中，每克末端炔基硅胶所需水与甲醇混合溶剂的量为50mL，得到硅胶上炔基。
②在步骤（2）①得到的硅胶上炔基内继续加入修饰有叠氮基团的氨基二醇及催化剂二价铜与抗坏血酸钠混合物：
所述叠氮氨基二醇加入的摩尔剂量为步骤（2）①得到的硅胶上炔基摩尔剂量的15倍；
所述二价铜加入的摩尔剂量为所述硅胶上炔基摩尔剂量的1%，抗坏血酸钠加入的摩尔剂量为所述硅胶上炔基摩尔剂量的40%：
取280mg抗坏血酸钠用5mL水溶解，取9mg五水硫酸铜也用5mL水溶解；将五水硫酸铜溶液滴加至抗坏血酸钠溶液中，再将二价铜与抗坏血酸钠混合液滴加至12.4g叠氮氨基二醇与100mL甲醇体系中,于缓慢搅拌下加入0.5g步骤（2）①得到的硅胶上炔基。
③ 在80℃条件下搅拌反应72小时，然后用砂芯漏斗过滤，再依次用300mL甲醇、500mL 20% EDTA溶液、300mL50℃的水、200mL甲醇、200mL THF、200mL乙腈和200mL二氯甲烷洗涤，得到固体物。
④ 将步骤（2）③得到的固体物置于真空干燥箱中在80℃条件下干燥6小时，得到目标产物——氨基二醇亲水色谱固定相。
实施例7
一种氨基二醇亲水色谱固定相的制备方法，包含以下步骤：
（1）制备末端炔基硅胶
①在500ml三口烧瓶中加入105ml无水N,N-二甲基甲酰胺， 35mmol（约8.66m1）3-异氰酸丙基三乙氧基硅烷，35mmol丙炔胺（约2.4mL），75℃下反应25小时。
②继续加入活化的、粒径为40μm、孔径为300的球形硅胶颗粒3.5g。
③在120℃条件下继续反应12小时，尔后用砂芯漏斗过滤，依次用300mL二氯甲烷、500mL甲醇、250mL丙酮洗涤，得到固体物。
④将步骤（1）③得到的固体物置于真空干燥箱中在80℃条件下干燥6小时，得到末端炔基硅胶。
（2）利用“链接化学”制备氨基二醇亲水色谱固定相
①将步骤（1）得到的末端炔基硅胶加入体积比为10︰1的水与甲醇的混合溶剂中，每克末端炔基硅胶所需水与甲醇混合溶剂的量为50mL，得到硅胶上炔基。
②在步骤（2）①得到的硅胶上炔基内继续加入修饰有叠氮基团的氨基二醇及催化剂二价铜与抗坏血酸钠混合物：
所述叠氮氨基二醇加入的摩尔剂量为步骤（2）①得到的硅胶上炔基摩尔剂量的15倍；
所述二价铜加入的摩尔剂量为所述硅胶上炔基摩尔剂量的10%，抗坏血酸钠加入的摩尔剂量为所述硅胶上炔基摩尔剂量的20%：
取140mg抗坏血酸钠用5mL水溶解，取90mg五水硫酸铜也用5mL水溶解；将五水硫酸铜溶液滴加至抗坏血酸钠溶液中，再将二价铜与抗坏血酸钠混合液滴加至12.4g叠氮氨基二醇与100mL甲醇体系中,于缓慢搅拌下加入0.5g步骤（2）①得到的硅胶上炔基。
③ 在80℃条件下搅拌反应72小时，然后用砂芯漏斗过滤，再依次用300mL甲醇、500mL 20% EDTA溶液、300mL50℃的水、200mL甲醇、200mL THF、200mL乙腈和200mL二氯甲烷洗涤，得到固体物。
④ 将步骤（2）③得到的固体物置于真空干燥箱中在80℃条件下干燥6小时，得到目标产物——氨基二醇亲水色谱固定相。
实施例8
一种氨基二醇亲水色谱固定相的制备方法，包含以下步骤：
（1）制备末端炔基硅胶
①在500ml三口烧瓶中加入105ml无水N,N-二甲基甲酰胺， 35mmol（约8.66m1）3-异氰酸丙基三乙氧基硅烷，35mmol丙炔胺（约2.4mL），70℃下反应30小时。
②继续加入活化的、粒径为5μm、孔径为300的球形硅胶颗粒3.5g。
③在120℃条件下继续反应12小时，尔后用砂芯漏斗过滤，依次用300mL二氯甲烷、500mL甲醇、250mL丙酮洗涤，得到固体物。
④将步骤（1）③得到的固体物置于真空干燥箱中在80℃条件下干燥6小时，得到末端炔基硅胶。
（2）利用“链接化学”制备氨基二醇亲水色谱固定相
①将步骤（1）得到的末端炔基硅胶加入体积比为10︰1的水与甲醇的混合溶剂中，每克末端炔基硅胶所需水与甲醇混合溶剂的量为50mL，得到硅胶上炔基。
②在步骤（2）①得到的硅胶上炔基内继续加入修饰有叠氮基团的氨基二醇及催化剂二价铜与抗坏血酸钠混合物：
所述叠氮氨基二醇加入的摩尔剂量为步骤（2）①得到的硅胶上炔基摩尔剂量的6倍；
所述二价铜加入的摩尔剂量为所述硅胶上炔基摩尔剂量的10%，抗坏血酸钠加入的摩尔剂量为所述硅胶上炔基摩尔剂量的40%：
取280mg抗坏血酸钠用5mL水溶解，取90mg五水硫酸铜也用5mL水溶解；将五水硫酸铜溶液滴加至抗坏血酸钠溶液中，再将二价铜与抗坏血酸钠混合液滴加至5g叠氮氨基二醇与100mL甲醇体系中,于缓慢搅拌下加入0.5g步骤（2）①得到的硅胶上炔基。
③ 在80℃条件下搅拌反应72小时，然后用砂芯漏斗过滤，再依次用300mL甲醇、500mL 20% EDTA溶液、300mL50℃的水、200mL甲醇、200mL THF、200mL乙腈和200mL二氯甲烷洗涤，得到固体物。
④ 将步骤（2）③得到的固体物置于真空干燥箱中在80℃条件下干燥6小时，得到目标产物——氨基二醇亲水色谱固定相。
实施例9
一种氨基二醇亲水色谱固定相的制备方法，包含以下步骤：
（1）制备末端炔基硅胶
①在500ml三口烧瓶中加入105ml无水N,N-二甲基甲酰胺， 35mmol（约8.66m1）3-异氰酸丙基三乙氧基硅烷，35mmol丙炔胺（约2.4mL），65℃下反应32小时。
②继续加入活化的、粒径为40μm、孔径为100的球形硅胶颗粒3.5g。
③在120℃条件下继续反应12小时，尔后用砂芯漏斗过滤，依次用300mL二氯甲烷、500mL甲醇、250mL丙酮洗涤，得到固体物。
④将步骤（1）③得到的固体物置于真空干燥箱中在80℃条件下干燥6小时，得到末端炔基硅胶。
（2）利用“链接化学”制备氨基二醇亲水色谱固定相
①将步骤（1）得到的末端炔基硅胶加入体积比为10︰1的水与甲醇的混合溶剂中，每克末端炔基硅胶所需水与甲醇混合溶剂的量为50mL，得到硅胶上炔基。
②在步骤（2）①得到的硅胶上炔基内继续加入修饰有叠氮基团的氨基二醇及催化剂二价铜与抗坏血酸钠混合物：
所述叠氮氨基二醇加入的摩尔剂量为步骤（2）①得到的硅胶上炔基摩尔剂量的1.5倍；
所述二价铜加入的摩尔剂量为所述硅胶上炔基摩尔剂量的10%，抗坏血酸钠加入的摩尔剂量为所述硅胶上炔基摩尔剂量的40%：
取280mg抗坏血酸钠用5mL水溶解，取90mg五水硫酸铜也用5mL水溶解；将五水硫酸铜溶液滴加至抗坏血酸钠溶液中，再将二价铜与抗坏血酸钠混合液滴加至1.3g叠氮氨基二醇与100mL甲醇体系中,于缓慢搅拌下加入0.5g步骤（2）①得到的硅胶上炔基。
③ 在80℃条件下搅拌反应72小时，然后用砂芯漏斗过滤，再依次用300mL甲醇、500mL 20% EDTA溶液、300mL50℃的水、200mL甲醇、200mL THF、200mL乙腈和200mL二氯甲烷洗涤，得到固体物。
④ 将步骤（2）③得到的固体物置于真空干燥箱中在80℃条件下干燥6小时，得到目标产物——氨基二醇亲水色谱固定相。
以上所述仅为本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员而言，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应该视为本发明的保护范围。
Claims (7)
1.一种氨基二醇亲水色谱固定相，其特征在于，其结构为：
。
2.一种氨基二醇亲水色谱固定相的制备方法，使用“链接化学”作为键合方法键合氨基二醇分子，包括以下具体步骤：
（1）制备末端炔基硅胶
①在有机溶剂中加入硅烷偶联剂和丙炔胺，于60～150℃条件下反应6～36小时；所述硅烷偶联剂与丙炔胺的摩尔比为1～5:1.2～5；
②加入活化的微球型硅胶，每克微球型硅胶所需的硅烷偶联剂为1～10mmol；
③在80～120℃条件下反应12～48小时，尔后用砂芯漏斗过滤，依次用二氯甲烷、甲醇和丙酮洗涤，得到固体物；
④将步骤（1）③得到的固体物置于真空干燥箱中在40～80℃条件下干燥6～12小时，得到末端炔基硅胶；
其特征在于：
（2）利用“链接化学”制备氨基二醇亲水色谱固定相
①将步骤（1）④制备的末端炔基硅胶加入体积比为2～10:1的水与甲醇的混合溶剂中，每克末端炔基硅胶所需水与甲醇的混合溶剂的量为20～50mL，得到硅胶上炔基；
②在步骤（2）①得到的硅胶上炔基内加入修饰有叠氮基团的氨基二醇及催化剂：所述修饰有叠氮基团的氨基二醇加入的摩尔剂量为所述硅胶上炔基摩尔剂量的1～15倍；所述催化剂为二价铜和抗坏血酸钠，所述二价铜加入的摩尔剂量为所述硅胶上炔基摩尔剂量的1～10%，所述抗坏血酸钠加入的摩尔剂量为所述硅胶上炔基摩尔剂量的2～40%；
③在10～80℃条件下反应72～200小时，尔后用砂芯漏斗过滤，依次用水、重量浓度为2～20%的EDTA二钠水溶液、水、甲醇、丙酮洗涤，得到固体物；
④将步骤（2）③得到的固体物置于真空干燥箱中在40～80℃条件下干燥6～12小时，得到氨基二醇亲水色谱固定相；
步骤（2）的反应通式为：
，
式中，R的结构为：
。
3.根据权利要求2所述的氨基二醇亲水色谱固定相的制备方法，其特征在于，步骤（1）①采用的有机溶剂为N,N-二甲基甲酰胺，每克硅胶所需有机溶剂的量为5～30mL。
4.根据权利要求2所述的氨基二醇亲水色谱固定相的制备方法，其特征在于，步骤（1）①采用的硅烷偶联剂的结构为：
；
其反应式为：
。
5.根据权利要求2所述的氨基二醇亲水色谱固定相的制备方法，其特征在于，步骤（1）②采用的微球型硅胶为粒径与孔径均匀的全多孔硅胶球状体，其粒径为5～40μm，孔径为60～300。
6.根据权利要求2所述的氨基二醇亲水色谱固定相的制备方法，其特征在于，步骤（2）②采用的修饰有叠氮基团的氨基二醇的结构为：
。
7.根据权利要求6所述的氨基二醇亲水色谱固定相的制备方法，其特征在于，步骤（2）②修饰有叠氮基团的氨基二醇的合成步骤为：
。
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