CN104817547A - 新型巴弗洛霉素、其提取微生物和提取方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种新型巴弗洛霉素、其提取微生物和提取方法。属于巴弗洛霉素类抗生素技术领域。该新型巴弗洛霉素化合物的分子式为C40H65N3O11，其分子量为763.97，是一种新型结构的巴弗洛霉素，该抗生素对多种农业生产上的常见植物病原真菌及格兰仕阳性病原菌(如辣椒炭疽、稻瘟、水稻白叶枯、番茄灰霉、番茄早疫以及甜瓜枯萎等病原菌)具有强烈的抗性，尤其对农业生产上极难防治的马铃薯晚疫病具有较强抗性，抑菌谱广，可作为一种新型农用抗生素使用。

Description

新型巴弗洛霉素、其提取微生物和提取方法
技术领域
本发明涉及巴弗洛霉素类抗生素技术领域，具体而言，涉及一种新型巴弗洛霉素、其提取微生物和提取方法。
背景技术
巴弗洛霉素类抗生素的发现始于20世纪80年代初期，该类抗生素是一类含有16元环骨架的多烯大环内酯类抗生素。同时巴弗洛霉素又是一类在化学结构上极为特殊的大环内酯抗生素，其大部分衍生物的侧链结构中都含有一个六元环的半缩醛结构。
目前已经发现并报道了14种该类抗生素，其中，巴弗洛霉素A1、A2、B1、B2、C1、C2、D、E、F、G、H、I、J，均由国外科学家首先报道，巴弗洛霉素K则由我国科学家首次报道。其中，巴弗洛霉素D和E的侧链半缩醛环呈开环状态，从而有别于其它12种巴弗洛霉素。
巴弗洛霉素具有抗细菌、抗真菌、抗肿瘤以及免疫抑制剂功能。某些巴弗洛霉素可专一性抑制空泡型ATP酶。其中，巴弗洛霉素A1应用最广泛，此外巴弗洛霉素A1还具有抗疟疾活性。巴弗洛霉素B1和C1是潜在的抗肿瘤药物，可用来治疗骨溶性疾病。巴弗洛霉素D和E具有很强杀虫活性。巴弗洛霉素K则具有广谱抗真菌活性。
巴弗洛霉素类抗生素具有共同的16元环骨架结构，各衍生物间的差别主要在于其侧链结构和主体骨架结构上取代基的不同。鉴于巴弗洛霉素所具备的对常见植物病原真菌及格兰仕阳性病原细菌的抗性，寻找新型结构的巴弗洛霉素并将其应用到农业生产的植物病害防控中是人们亟待解决的一个技术问题。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种新型的新型巴弗洛霉素，该化合物的分子式为C40H65N3O11，其分子量为763.97；该化合物具有广谱抑菌活性，可以很好的应用到植物病害防治中。
本发明的第二目的在于提供一种所述的新型巴弗洛霉素的生产菌株，该菌株的分类命名为卡伍尔链霉菌(Streptomycescavourensis)。
本发明的第三目的在于提供一种利用所述的生产菌株制取新型巴弗洛霉素的方法。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
本发明提供了一种新型巴弗洛霉素，其结构式为：
本发明提供的这种新型巴弗洛霉素，该化合物的分子式为C40H65N3O11，其分子量为763.97，是一种新型的巴弗洛霉素，该抗生素对多种农业生产上的常见植物病原真菌及格兰仕阳性病原细菌都具有强烈的抗性，尤其对农业生产上极难防治的马铃薯晚疫病具有较强抗性，抑菌谱广，可作为一种新型农用抗生素使用。
一种用于提取所述的新型巴弗洛霉素的微生物菌株，所述微生物菌株的分类命名为卡伍尔链霉菌(Streptomyces cavourensis)；其保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编为：100101；保藏日期为：2014年11月06日；保藏编号为：CGMCC No.9946。
一种所述的微生物提取新型巴弗洛霉素的方法，包括以下步骤：
1)、将筛选分离得到的卡伍尔链霉菌以划线的方式接种于菌种斜面培养基于26-30℃避光培养至长出成熟孢子，得到斜面种子；
2)、将所述斜面种子接种到一级液体种子培养基中，于26-30℃摇床培养22-26小时，得到一级液体种子；
3)、将所述一级液体种子接种到二级液体种子培养基中，于26-30℃摇床培养22-26小时，得到二级液体种子；
4)、将所述二级液体种子接种到发酵液体培养基中，于26-30℃摇床培养92-100小时，得到发酵液；
5)、收集所述发酵液，在搅拌条件下加入酸，并调节至pH为2.0-3.5，离心收集下层沉淀物，得到粗提物；
6)、利用丙酮抽提所述粗提物2-3次，得到丙酮抽提液，并依次在40-45℃水浴条件下进行减压蒸发除去丙酮，鼓风干燥，得到水相烘干物；
7)、将所述水相烘干物利用丙酮复溶后抽滤，得到丙酮抽滤液，并将所述丙酮抽滤液于40-45℃的水浴条件下浓缩至无沉淀析出，得到丙酮浓缩液；
8)、在所述丙酮浓缩液中按照所含丙酮体积的10-15倍、1/6-1/5分别加入蒸馏水以及非极性大孔树脂，并调pH为8-8.5后吸附3-5小时，过滤收集吸附后大孔树脂；
9)、按照体积倍数计，向所述吸附后大孔树脂加入5-10倍的80-90％的丙酮水溶液后调pH为8-9后解析2-4小时，收集解析液并于40℃-45℃水浴条件下减压蒸发掉所述解吸液中的丙酮，得到剩余水相；
10)、将所述剩余水相用等体积的乙酸乙酯萃取后静置分层，取上层乙酸乙酯；并将所述上层乙酸乙酯于40℃-45℃水浴条件下蒸干，得到蒸干提取物；
11)、向所述蒸干提取物中滴加乙酸乙酯，直至蒸干提取物全部溶解，再加入体积为滴加所用乙酸乙酯20-30倍的正己烷，于-10℃-0℃重结晶8-15小时后进行抽滤，收集重结晶后抽滤液；
12)、将所述重结晶后抽滤液于40℃-45℃水浴条件下减压蒸干，再次滴加乙酸乙酯进行溶解后，继续加入体积为所滴加乙酸乙酯50-60倍的正己烷，于-10℃-0℃重结晶8-15小时，待析出沉淀后进行抽滤，得到粉末状新型巴弗洛霉素。
可选的，在步骤1)中，所述菌种斜面培养基按照重量份数计，其原料组分包括：葡萄糖1.6-2.0份、蛋白胨0.3-0.6份、黄豆饼粉0.2-0.4份、酵母膏0.1份、碳酸钙0.025份，琼脂粉1.8-2.2份。
可选的，在步骤2)中，所述一级液体种子培养基按照重量份数计，其原料组份包括：葡萄糖1.6-2.0份、蛋白胨0.3-0.6份、黄豆饼粉0.2-0.4份、酵母膏0.1份、碳酸钙0.025份。
可选的，在步骤3)中，所述二级液体种子培养基按照重量份数计，其原料组份包括：葡萄糖1.6-2.0份、蛋白胨0.3-0.6份、黄豆饼粉0.2-0.4份、酵母膏0.1份、碳酸钙0.025份。
可选的，在步骤4)中，所述发酵液体培养基按照重量份数计，其原料组份包括：葡萄糖1.8-2.2份、蛋白胨0.5-0.7份、黄豆饼粉0.2-0.4份、磷酸氢二钾(K2HPO4)0.02-0.04份、硫酸镁(MgSO4)0.008-0.012份、酵母膏0.15份、碳酸钙0.02份。
可选的，在步骤6)中，每次抽提的时间为3-4小时，且鼓风干燥的温度为40-50℃。
可选的，在步骤9)中，所述蒸发采用旋转蒸发仪进行。
可选的，在步骤10)中，所述萃取的次数为2-3次。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
(1)、本发明通过特定的制备方法提供了一种新型巴弗洛霉素，丰富了巴弗洛霉素类抗生素的种类，并且其抑菌谱广，对农业生产上的常见植物病原真菌及格兰仕阳性病原细菌都具有强烈的抗性，尤其对农业生产上极难防治的马铃薯晚疫病具有较强抗性，可作为一种新型农用抗生素使用。
(2)、本发明的新型巴弗洛霉素的生产菌株，为新型巴弗洛霉素提供了制取来源，而且其易于发酵培养。
(3)、本发明的新型巴弗洛霉素的提取方法，以卡伍尔链霉菌为提取来源，通过控制和优化操作工艺，实现了新型巴弗洛霉素的制备，为规模化获取新型巴弗洛霉素提供了保障。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，以下将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1为本发明实施例2提取的新型巴弗洛霉素的高分辨质谱图(M+H+Na)；
图2为本发明实施例2提取的新型巴弗洛霉素的红外光谱图；
图3为本发明实施例2提取的新型巴弗洛霉素的核磁共振碳谱图；
图4为本发明实施例2提取的新型巴弗洛霉素的核磁共振氢谱图；
图5为本发明实施例2提取的新型巴弗洛霉素的二维核磁图。
用于提取所述的新型巴弗洛霉素的微生物的保藏日期为2014年11月06日；保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏编号为CGMCC No.9946。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
实施例1
本发明实施例提供的新型巴弗洛霉素制备方法包括：
S11：将筛选分离得到的卡伍尔链霉菌以划线的方式接种于菌种斜面培养基于28℃避光培养至长出成熟孢子，得到斜面种子；
对于卡伍尔链霉菌，其原始来源为分离自云南省祥云县鹿鸣乡土壤的卡伍尔链霉菌。
S12：将所述斜面种子接种到一级液体种子培养基中，于28℃摇床培养24小时，得到一级液体种子；
S13：将所述一级液体种子接种到二级液体种子培养基中，于28℃摇床培养24小时，得到二级液体种子；
S14：将所述二级液体种子接种到发酵液体培养基中，于28℃摇床培养96小时，得到发酵液；
S15：收集所述发酵液，在搅拌条件下加入酸，并调节至pH为2.0-3.5，离心收集下层沉淀物，得到粗提物；
S16：利用丙酮抽提所述粗提物2-3次，得到丙酮抽提液，并依次在40-45℃的水浴条件下利用旋转蒸发仪蒸除丙酮，剩余水相经鼓风干燥，得到水相烘干物；
S17：将所述水相烘干物利用丙酮复溶后抽滤，得到丙酮抽滤液，并将所述丙酮抽滤液于40-45℃的水浴条件下浓缩至无沉淀析出，得到丙酮浓缩液；
S18：在所述丙酮浓缩液中按照所含丙酮体积的10倍、1/6分别加入蒸馏水以及非极性大孔树脂，并调pH为8-8.5后吸附3-5小时，得到吸附后大孔树脂；
S19：按照体积倍数计，向所述吸附后大孔树脂加入5倍体积的80-90％的丙酮水溶液后调pH为8-9后解析2-4小时，收集解析液并于40℃-45℃水浴条件下蒸发掉所述解吸液中的丙酮，得到剩余水相；
S110：将所述剩余水相用等体积的乙酸乙酯萃取后静置分层，取上层乙酸乙酯；并将所述上层乙酸乙酯于40℃-45℃水浴条件下蒸干，得到蒸干提取物；
S111：在所述蒸干提取物中滴加乙酸乙酯，直至蒸干提取物全部溶解，再加入体积为滴加所用乙酸乙酯25倍的正己烷，于-10℃-0℃重结晶8-15小时后进行抽滤，得到重结晶后抽滤液；
S112：将所述重结晶后抽滤液于40℃-45℃水浴条件下蒸干溶解后，再次滴加乙酸乙酯进行溶解后，继续加入体积为所滴加乙酸乙酯60倍的正己烷，于-10℃-0℃重结晶8-15小时，待析出沉淀后进行抽滤，得到粉末状新型巴弗洛霉素。
经过测定该化合物的结构式为：
实施例2
本发明实施例提供的新型巴弗洛霉素制备方法包括：
S21：将筛选分离得到的卡伍尔链霉菌以划线的方式接种于菌种斜面培养基于28℃避光培养至长出成熟孢子，得到一级种子；
卡伍尔链霉菌来源与实施例1一致。
另外，对于菌种斜面培养基，其配方包括：葡萄糖1.8份、蛋白胨0.5份、黄豆饼粉0.3份、酵母膏0.1份、碳酸钙0.025份，琼脂粉2份。
更具体的，该配方为：葡萄糖18.0g/L、蛋白胨5.0g/L、黄豆饼粉3.0g/L、酵母膏1.0g/L、碳酸钙0.25g/L，琼脂粉20.0g/L，用1.0L蒸馏水溶解后调节溶液pH＝8.5。以6.0mL/管分装于20.0mL容量的玻璃斜面试管中，加棉塞后于121℃灭菌30min，将试管摆成斜面，待培养基冷却至室温后备用。
此外，在该步骤中，具体采用生化培养箱于28℃避光培养菌种。
该菌种斜面培养基以及培养方式利于卡伍尔链霉菌大量扩繁，并长出成熟孢子，具体的，待斜面变白即可进行后续的操作。
S22：将所述斜面种子接种到一级液体种子培养基中，于28℃摇床培养24小时，得到一级液体种子；
一级液体种子培养基的配方包括：葡萄糖1.8份、蛋白胨0.5份、黄豆饼粉0.3份、酵母膏0.1份、碳酸钙0.025份。
更具体的，该配方为：葡萄糖18.0g/L、蛋白胨5.0g/L、黄豆饼粉3.0g/L、酵母膏1.0g/L、碳酸钙0.25g/L，用蒸馏水配制500ml发酵液后调节溶液pH＝8.5，以500mL/瓶的装液量装于2000mL玻璃三角瓶中，用16层纱布封口后于121℃灭菌30min，冷却至室温后备用。
在摇床培养的过程中，具体采用回旋式恒温摇床于180转/min、28℃条件下恒温培养24小时。
S23：将所述一级液体种子接种到二级液体种子培养基中，于28℃摇床培养24小时，得到二级液体种子；
在该步骤中，二级液体种子培养基的配方包括：葡萄糖1.8份、蛋白胨0.5份、黄豆饼粉0.3份、酵母膏0.1份、碳酸钙0.025份。
更具体的，该配方为：葡萄糖18.0g/L、蛋白胨5.0g/L、黄豆饼粉3.0g/L、酵母膏1.0g/L、碳酸钙0.25g/L，用蒸馏水配制3.0L发酵液后，调节溶液pH＝8.5，以500mL/瓶的装液量分装于6个2000mL玻璃三角瓶中，用16层纱布封口后于121℃灭菌30min，冷却至室温后备用，且摇床培养的转速与步骤S22一致。接种量为50.0mL/瓶。
S24：将所述二级液体种子接种到发酵液体培养基中，于28℃摇床培养96小时，得到发酵液；
具体的，发酵液体培养基的配方包括：葡萄糖2.0份、蛋白胨0.6份、黄豆饼粉0.3份、磷酸氢二钾(K2HPO4)0.03份、硫酸镁(MgSO4)0.01份、酵母膏0.15份、碳酸钙0.02份。
更具体的，该发酵液体培养基为葡萄糖20.0g/L、蛋白胨6.0g/L、黄豆饼粉3.0g/L、酵母膏1.5g/Lg、磷酸氢二钾(K2HPO4)0.3g/L、硫酸镁(MgSO4)0.1g/L、碳酸钙0.2g/L，用蒸馏水配制30.0L发酵液后调节溶液pH＝8.5，以500mL/瓶的装液量分装于2000mL玻璃三角瓶中，用16层纱布封口后于121℃灭菌30min，冷却至室温后，备用。摇床培养的转速与步骤S22一致，接种量为50.0mL/瓶。
S25：收集所述发酵液并在搅拌条件下加入酸，调节至pH为2.0-3.5，离心收集下层沉淀物，得到粗提物；
在搅拌条件下加酸，调节发酵液至pH＝2.0-3.5范围，静置分层后，离心收取下层沉淀物，即可获得原始粗提物。
S26：利用丙酮抽提所述粗提物2-3次，得到丙酮抽提液，并依次在40-45℃的水浴条件下利用旋转蒸发仪蒸除丙酮，剩余水相经鼓风干燥，得到水相烘干物；
在抽提的过程中，每次抽提的时间为3-4小时，以实现抽提完全的效果，使得目标产物尽可能的溶于丙酮抽提液中，依次通过减压蒸发除去丙酮以及鼓风干燥(温度为40℃-50℃)后，得到水相烘干物。
S27：将所述水相烘干物利用丙酮复溶后抽滤，得到丙酮抽滤液，并将所述丙酮抽滤液于40-45℃的水浴条件下减压浓缩至无沉淀析出，得到丙酮浓缩液；
具体的，用丙酮复溶水相烘干物，抽滤，分别收集丙酮和滤渣，将滤渣用丙酮再溶解一次，合并两次的滤液(丙酮抽滤液)，在旋转蒸发仪上于40℃-45℃水浴条件下，浓缩丙酮抽滤液至无沉淀析出，得到丙酮浓缩液。
S28：在所述丙酮浓缩液中按照所含丙酮体积的12倍、1/5分别加入蒸馏水以及非极性大孔树脂，并调pH为8-8.5后吸附3-5小时，得到吸附后大孔树脂；
具体的，根据丙酮浓缩液最终剩余的丙酮体积，加入12倍体积的蒸馏水，调节pH＝8.0-8.5，并再加入1/5体积(丙酮浓缩液最终剩余的丙酮体积)的非极性大孔树脂，在搅拌条件下吸附3-5小时，待吸附完成后，抽滤，收集吸附后大孔树脂，备用。
S29：按照体积倍数计，向所述吸附后大孔树脂加入8倍的80-90％的丙酮水溶液后调pH为8-9后解析2-4小时，收集解析液并于40℃-45℃水浴条件下蒸发掉所述解吸液中的丙酮，得到剩余水相；
具体的，根据收集到的大孔树脂体积，向其中加入8倍丙酮体积占80％-90％(质量浓度)的丙酮水溶液，调节pH＝8.0-9.0，在搅拌条件下解吸附2-4小时，抽滤，收集解吸液；将大孔树脂在同样条件下再解吸附一次，合并两次的解吸液在旋转蒸发仪上，于40℃-45℃水浴条件下，蒸掉解吸液中的丙酮，保存水相。
S210：将所述剩余水相用等体积的乙酸乙酯萃取后静置分层，取上层乙酸乙酯；并将所述上层乙酸乙酯于40℃-45℃水浴条件下蒸干，得到蒸干提取物；
该步骤中，具体的，将剩余水相转入分液漏斗中，在振摇条件下用与剩余水相等体积的乙酸乙酯萃取2-3次；静置分层后，分取上层乙酸乙酯；将分取的乙酸乙酯转入旋蒸瓶中，在旋转蒸发仪上于40℃-45℃水浴条件下蒸干，得到蒸干提取物。
S211：在所述蒸干提取物中滴加乙酸乙酯，直至蒸干提取物全部溶解，再加入体积为滴加所用乙酸乙酯30倍的正己烷，于-10℃-0℃重结晶8-15小时后进行抽滤，得到重结晶后抽滤液；
抽滤过后，目标化合物多含于重结晶后抽滤液中，而一些杂质则含在抽滤后固相中被去除。
S212：将所述重结晶后抽滤液于40℃-45℃水浴条件下蒸干溶解后，再次滴加乙酸乙酯进行溶解后，继续加入体积为所滴加乙酸乙酯60倍的正己烷，于-10℃-0℃重结晶8-15小时，待析出沉淀后进行抽滤，得到粉末状新型巴弗洛霉素。
对第一次重结晶后的抽滤液再进行一次重结晶，抽滤，即可得到浅绿色粉末状目标产物。
通过本发明实施例提供的这种方法，即可获得新型结构的巴弗洛霉素。
另外，本发明实施例提取的目标化合物的高分辨质谱图(M+H+Na)、红外光谱图、核磁共振碳谱图、核磁共振氢谱图以及二维核磁图请分别参考图1-图5。
由图可知，该化合物为新型结构的巴弗洛霉素类抗生素，其分子式为C40H65N3O11，分子量为763.97。
实验例
对本发明实施例2获得的化合物水溶液(浓度为10mg/L)，进行常规的抑菌活性检测，得到如表1所述的抗菌活性结果。
表1 实施例2获得的化合物对部分真菌和细菌的抗菌活性
通过表1可以看出，该新型结构的抗生素对多种农业生产上的常见植物病原真菌及格兰仕阳性病原细菌都具有强烈的抗性，其抑菌谱广，尤其对于农业生产上常见病害如辣椒炭疽、稻瘟、水稻白叶枯、番茄灰霉、番茄早疫以及甜瓜枯萎等病原菌具有较强的抗性。可作为一种非常有应用前景的新型农用抗生素使用。
尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。

Claims (10)

1.一种新型巴弗洛霉素，其特征在于，其结构式为：
2.一种用于提取权利要求1所述的新型巴弗洛霉素的微生物，其特征在于，所述微生物的分类命名为卡伍尔链霉菌(Streptomycescavourensis)；其保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏日期为：2014年11月06日；保藏编号为：CGMCC No.9946。
3.一种根据权利要求2所述的微生物提取新型巴弗洛霉素的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)、将筛选分离得到的卡伍尔链霉菌以划线的方式接种于菌种斜面培养基于26-30℃避光培养至长出成熟孢子，得到斜面种子；
2)、将所述斜面种子接种到一级液体种子培养基中，于26-30℃摇床培养22-26小时，得到一级液体种子；
3)、将所述一级液体种子接种到二级液体种子培养基中，于26-30℃摇床培养22-26小时，得到二级液体种子；
4)、将所述二级液体种子接种到发酵液体培养基中，于26-30℃摇床培养92-100小时，得到发酵液；
5)、收集所述发酵液，在搅拌条件下加入酸，并调节至pH为2.0-3.5，离心收集下层沉淀物，得到粗提物；
6)、利用丙酮抽提所述粗提物2-3次，得到丙酮抽提液，并依次在40-45℃水浴条件下进行减压蒸发除去丙酮，鼓风干燥，得到水相烘干物；
7)、将所述水相烘干物利用丙酮复溶后抽滤，得到丙酮抽滤液，并将所述丙酮抽滤液于40-45℃的水浴条件下浓缩至无沉淀析出，得到丙酮浓缩液；
8)、在所述丙酮浓缩液中按照所含丙酮体积的10-15倍、1/6-1/5分别加入蒸馏水以及非极性大孔树脂，并调pH为8-8.5后吸附3-5小时，过滤收集吸附后大孔树脂；
9)、按照体积倍数计，向所述吸附后大孔树脂加入5-10倍的80-90％的丙酮水溶液后调pH为8-9后解析2-4小时，收集解析液并于40℃-45℃水浴条件下减压蒸发掉所述解吸液中的丙酮，得到剩余水相；
10)、将所述剩余水相用等体积的乙酸乙酯萃取后静置分层，取上层乙酸乙酯；并将所述上层乙酸乙酯于40℃-45℃水浴条件下蒸干，得到蒸干提取物；
11)、向所述蒸干提取物中滴加乙酸乙酯，直至蒸干提取物全部溶解，再加入体积为滴加所用乙酸乙酯20-30倍的正己烷，于-10℃-0℃重结晶8-15小时后进行抽滤，收集重结晶后抽滤液；
12)、将所述重结晶后抽滤液于40℃-45℃水浴条件下减压蒸干，再次滴加乙酸乙酯进行溶解后，继续加入体积为所滴加乙酸乙酯50-60倍的正己烷，于-10℃-0℃重结晶8-15小时，待析出沉淀后进行抽滤，得到粉末状新型巴弗洛霉素。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，在步骤1)中，所述菌种斜面培养基按照重量份数计，其原料组分包括：葡萄糖1.6-2.0份、蛋白胨0.3-0.6份、黄豆饼粉0.2-0.4份、酵母膏0.1份、碳酸钙0.025份，琼脂粉1.8-2.2份。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，在步骤2)中，所述一级液体种子培养基按照重量份数计，其原料组份包括：葡萄糖1.6-2.0份、蛋白胨0.3-0.6份、黄豆饼粉0.2-0.4份、酵母膏0.1份、碳酸钙0.025份。
6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，在步骤3)中，所述二级液体种子培养基按照重量份数计，其原料组份包括：葡萄糖1.6-2.0份、蛋白胨0.3-0.6份、黄豆饼粉0.2-0.4份、酵母膏0.1份、碳酸钙0.025份。
7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，在步骤4)中，所述发酵液体培养基按照重量份数计，其原料组份包括：葡萄糖1.8-2.2份、蛋白胨0.5-0.7份、黄豆饼粉0.2-0.4份、磷酸氢二钾(K2HPO4)0.02-0.04份、硫酸镁(MgSO4)0.008-0.012份、酵母膏0.15份、碳酸钙0.02份。
8.根据权利要求3-7任一项所述的方法，其特征在于，在步骤6)中，每次抽提的时间为3-4小时，且鼓风干燥的温度为40-50℃。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，在步骤9)中，所述蒸发采用旋转蒸发仪进行。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，在步骤10)中，所述萃取的次数为2-3次。
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