CN104808006A - 一种糖化血红蛋白标准物质及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种糖化血红蛋白标准物质及其制备方法，属于医学检验领域。一种糖化血红蛋白标准物质，其特征在于：为3种浓度的具有医学决定水平的人血基质HbA_1c标准物质，浓度分别为：(1)浓度1：IFCC值为31-42mmol/mol或NGSP值为5.0-6.0HbA_1c％；(2)浓度2：IFCC值为43-58mmol/mol或NGSP值为6.1-7.5HbA_1c％；(3)浓度3：IFCC值为69-91mmol/mol或NGSP值为8.5-10.5HbA_1c％。该标准物质具有良好的均匀性、稳定性及互通性，能够用于糖化血红蛋白常规检测系统的溯源和质量评价；糖化血红蛋白检测试剂的制备及质量评价；校准物的制备、定值及质量评价；协作研究分析中的质量保证。可使用此标准物质对常规方法的溯源性和质量进行评价。

Description

一种糖化血红蛋白标准物质及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种糖化血红蛋白标准物质及其制备方法，属于医学检验领域。

背景技术

糖尿病已成为全球第一大流行病，由糖尿病导致的微血管并发症(视网膜病变、糖尿病肾病、神经病变和糖尿病足)及大血管并发症(心、脑血管疾病)的发生率、致残率和致死率极高，严重威胁糖尿病患者的生存质量甚至生命，也给医疗资源和社会经济造成巨大的负担，因此，糖尿病的早期诊断以及糖尿病患者血糖水平的合理控制是解决问题的关键所在。糖尿病及其并发症的发生、发展取决于患者体内蛋白长期的糖基化状态，评估这种糖基化状态的有效方法是检测血液中葡萄糖与血红蛋白的稳定的加合产物——糖化血红蛋白，其中血红蛋白A_1c(HbA_1c)是糖化血红蛋白的主要组成成分，大约占糖化血红蛋白的80％，以HbA_1c的结果来报告糖化血红蛋白在业界已达成共识。糖化血红蛋白与传统的诊断指标血糖相比，具有样本稳定、抽血时间不受限制、不易受干扰等优点，被业界誉为与胰岛素的发现作用等同。

HbA₁c是世界卫生组织推荐的糖尿病诊断标准(2011年)，还是糖尿病血糖控制的“金标准”，也是评估糖尿病微血管、大血管并发症的有效指标。目前相当一部分国家和地区采用糖化血红蛋白诊断、管理糖尿病，包括我们的邻国，日本和韩国。HbA₁c作为糖尿病诊断标准实施的关键前提是：HbA₁c的检测实现标准化，但我国目前还没有采用糖化血红蛋白诊断糖尿病，有部分原因是我们的实验室测定结果不准确、不可比，也就是：在我国HbA₁c的检测还没有实现标准化，使得HbA₁c在我国的临床应用没有发挥其应有的作用。

2013年，由美国糖尿病协会、欧洲糖尿病研究会、国际糖尿病联盟及IFCC发表联合声明：IFCC参考系统是HbA₁c标准化唯一有效的参考系统；HbA₁c测定应在全球范围内实现标准化；HbA₁c结果应以IFCC单位(mmol/mol)和NGSP单位(％)共同报告。

由于临床实验室检测HbA₁c的常规方法有几十种之多，所用原理不同、方法不同，所测组分有差异，加上变异血红蛋白等影响因素，导致各实验室之间结果有较大差异。因此，必须开展HbA₁c检测的标准化工作，以保证各实验室检测结果的溯源性，在此基础上实现准确性和可比性。标准化工作的核心是建立参考系统，参考系统包括标准物质和参考方法，标准物质对于实现检测结果的量值溯源，保证检测结果的准确性、可比性有重要意义。HbA₁c有国际标准物质(IRMM/IFCC-466HbA₁c﹑IRMM/IFCC-467HbA₀)，是高纯度的基准标准物质(primary reference material)，二个标准物质以一定的比例混合为IFCC推荐的、HbA₁c标准化唯一有效的参考测量程序(primary referencemeasurement procedure)校准，而作为HbA₁c测定结果的量值传递，HbA₁c次级标准物质是必不可少的，一些国家的HbA₁c标准化组织致力于制备形式各异的符合自己需要的标准物质，用于厂家仪器和临床实验室的校准。但我国没有HbA₁c标准物质，缺少HbA₁c检测标准化的基础，为促进我国HbA₁c的检测与临床应用早日与国际接轨，本发明将制备具有医学决定水平的人血基质HbA₁c候选标准物质。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种糖化血红蛋白标准物质。

本发明要解决的另一个技术问题是提供这种糖化血红蛋白标准物质的制备方法。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种糖化血红蛋白标准物质，为3种浓度的具有医学决定水平的人血基质HbA₁c标准物质。

所述糖化血红蛋白标准物质的浓度分别为：

(1)浓度1：IFCC值为31-42mmol/mol或NGSP值为5.0-6.0HbA_1c％；

(2)浓度2：IFCC值为43-58mmol/mol或NGSP值为6.1-7.5HbA_1c％；

(3)浓度3：IFCC值为69-91mmol/mol或NGSP值为8.5-10.5HbA_1c％。

所述糖化血红蛋白标准物质的浓度分别为：

(1)浓度1：IFCC值为38.42(不确定度：1.60)mmol/mol或NGSP值为5.67(不确定度：0.24)HbA_1c％；

(2)浓度2：IFCC值为52.68(不确定度：2.20)mmol/mol或NGSP值为6.97(不确定度：0.29)HbA_1c％；

(3)浓度3：IFCC值为88.74(不确定度：3.65)mmol/mol或NGSP值为10.27(不确定度：0.42)HbA_1c％。

这3个浓度水平皆为医学决定水平，其中：浓度1为国际诊疗指南推荐的糖尿病筛查浓度，可以保证糖尿病高危人群的筛查质量；浓度2临近糖尿病诊断标准，可以保证检测质量，以减少糖尿病的漏诊率和误诊率；浓度3为高值，可用于糖尿病患者的治疗监测、验证常规方法的检测限及可报告范围。

所述糖化血红蛋白标准物质采用以下方法制备：收集不同HbA_1c浓度的人新鲜抗凝全血，在无菌条件下操作制成溶血液，根据糖化血红蛋白的医学决定水平，该标物包括高、中、低3个不同的浓度水平，分装并在-70℃下保存。具体包括以下步骤：

(1)用EDTA抗凝采血管采集空腹静脉血50ml/人，室温放置0.5小时，将采血管于8℃3000g离心10min，去除上层血浆；

(2)向下层红细胞中加入10倍体积的0.15mol/L NaCl溶液，置37℃温浴4h，离心20min，弃去上清液，重复该步骤，清洗红细胞2次；

(3)加入等体积超纯水，混匀，裂解红细胞；

(4)去除细胞碎片等杂质：离心20min，小心吸取上层溶液，加入10ml含稳定剂的水溶液，混匀后，用针头滤器过滤溶血液，测定总血红蛋白浓度；

(5)按糖化血红蛋白水平混合成3种浓度的标准物质；

(6)在无菌间将溶血液分装至1ml聚乙烯管中，加盖，编号，置-70℃保存。

所述步骤(4)所述的稳定剂水溶液为50mmol/Lβ-吗啉乙磺酸、10mmol/L KCl、1mmol/L Na₂CO₃，pH值为6.2。

一种糖化血红蛋白标准物质的制备方法，包括如下步骤：

(1)用EDTA抗凝采血管分别采集健康无糖尿病者、糖尿病控制良好者及糖尿病控制不好者的空腹静脉血50ml/人，室温放置0.5小时，将采血管于8℃3000g离心10min，去除上层血浆；

(2)向下层红细胞中加入10倍体积的0.15mol/L NaCl溶液，置37℃温浴4h，离心20min，弃去上清液，重复该步骤，清洗红细胞2次；

(3)加入等体积超纯水，混匀，裂解红细胞；

(4)去除细胞碎片等杂质：离心20min，小心吸取上层溶液，加入10ml含稳定剂的水溶液，混匀后，用针头滤器过滤溶血液，测定总血红蛋白浓度；

(5)按糖化血红蛋白水平混合成3种浓度的标准物质；

(6)在无菌间将溶血液分装至1ml聚乙烯管中，加盖，编号，置-70℃保存。

所述步骤(4)的稳定剂水溶液为50mmol/Lβ-吗啉乙磺酸、10mmol/L KCl、1mmol/LNa₂CO₃，pH值为6.2。

所述步骤(4)测定总血红蛋白浓度的方法为氰化高铁血红蛋白测定法。

所述步骤(5)的3种浓度的标准物质为：

(1)浓度1：IFCC值为31-42mmol/mol或NGSP值为5.0-6.0HbA_1c％；

(2)浓度2：IFCC值为43-58mmol/mol或NGSP值为6.1-7.5HbA_1c％；

(3)浓度3：IFCC值为69-91mmol/mol或NGSP值为8.5-10.5HbA_1c％。

所述步骤(5)的3种浓度的标准物质为：

(1)浓度1：IFCC值为38.42(不确定度：1.60)mmol/mol或NGSP值为5.67(不确定度：0.24)HbA_1c％；

(2)浓度2：IFCC值为52.68(不确定度：2.20)mmol/mol或NGSP值为6.97(不确定度：0.29)HbA_1c％；

(3)浓度3：IFCC值为88.74(不确定度：3.65)mmol/mol或NGSP值为10.27(不确定度：0.42)HbA_1c％。

所述糖化血红蛋白标准物质用于检测人糖化血红蛋白常规方法的发展、溯源、评价，试剂的制备及质量评价，校准物的制备、定值及质量评价的应用。

所述糖化血红蛋白标准物质用于制备检测糖尿病的试剂的应用。

本发明的优点是：该标准物质具有良好的均匀性、稳定性及互通性，符合HbA_1c国际标准化工作的要求、《一级标准物质技术规范》及ISO Guide35的要求；标准物质采用新鲜血液制备溶血液，来源广泛，使用方便；制备方法简单，溶血液无须经过二D电泳或HPLC液相色谱的纯化，适合于常规方法使用；此标准物质在4℃可储存1个月，在-70℃可长期储存，便于运输，对于常规检测系统的溯源和质量评价、试剂的制备及质量评价、校准物的制备、定值及质量评价以及协作研究分析中的质量保证都可发挥作用。

以下结合具体实施方式详细说明本发明技术方案，并不以此限定本发明的实施范围。凡依照本发明公开内容所做的本领域等同替换，均属于本发明的保护范围。

具体实施方式

实施例1：制备糖化血红蛋白标准物质

一.材料

1.包装容器的选择

聚乙烯材料对候选标准物质基质中的成分没有吸收和释放，耐热、抗酸、抗碱、抗水，因此选择无菌聚乙烯管(Axygen公司，美国)作为标准物质的容器。

2.消毒

在制备前，无菌间和超净台紫外消毒。

3.采血志愿者选择

健康无糖尿病、糖尿病控制良好及糖尿病控制不好志愿者，年龄20～50岁、男女各半，人类免疫缺陷病毒抗体(HIV)和乙型、丙型肝炎表面抗原(HBV、HCV)阴性，填写知情同意书。

4.试剂

乙腈，色谱纯(Acetonitrile,Fisher公司，美国)，β-吗啉乙磺酸(MES，Sigma公司，美国)，乙二铵四乙酸二钠(Na₂-EDTA)﹑氯化钠(NaCl)、氯化钾(KCl)、碳酸氢钠(NaHCO₃)为分析纯(北京化学试剂公司)；所用水为超纯水(Elix 35clinical，Millipore，法国)。

5.仪器

EDTA真空采血管(BD，美国)，离心机(Sigma，德国)，真空干燥温育箱，型号282A(Fisher，美国)，电子天平(型号AE 163，Mettler，瑞士)。

二、方法

1.采血、去除血浆：用EDTA抗凝采血管，每位志愿者采取空腹静脉血50mL，室温放置0.5h。将采血管于8℃3000g离心10min，去除上层血浆。

2.清洗红细胞：向下层红细胞中加入10倍体积的0.15mol/L NaCl溶液，置37℃温浴4h，离心20min，弃去上清液，重复该步骤，清洗红细胞2次；

3.裂解红细胞：加入等体积超纯水，混匀；

4.去除细胞碎片等杂质。离心20min，小心吸取上层溶液，加入10ml含稳定剂的水溶液(50mmol/L MES、10mmol/LKCL、1mmol/L Na₂CO₃，pH 6.2)，混匀后，用针头滤器过滤溶血液，用ICSH方法测定总血红蛋白浓度；候选标准物质血红蛋白浓度采用ICSH推荐的氰化高铁血红蛋白测定法进行测定(方法参照：Zwart A,VanAssendelft OW,Bull BS,et al.Recommendations for reference method forhaemoglobinometry in human blood(ICSH Standard 1995)and specifications forinternational haemoglobincyanide standard(4th edition).J Clin Pathol.1996,49:271-274.人类血液血红蛋白测定参考方法(国际血液标准化委员会标准1995)及国际氰化高铁血红蛋白标准物质规范(第4版)。)

5.混合：按糖化血红蛋白水平混合成3种浓度，编号为CRM11、CRM12及CRM13；3种浓度的标准物质为：

(1)浓度1(CRM11)：IFCC值为38.42(不确定度：1.60)mmol/mol或NGSP值为5.67(不确定度：0.24)HbA_1c％；

(2)浓度2(CRM12)：IFCC值为52.68(不确定度：2.20)mmol/mol或NGSP值为6.97(不确定度：0.29)HbA_1c％；

(3)浓度3(CRM13)：IFCC值为88.74(不确定度：3.65)mmol/mol或NGSP值为10.27(不确定度：0.42)HbA_1c％。

6.分装：在无菌间将溶血液分装至1ml聚乙烯管中，加盖，编号，置-70℃保存。3个浓度分别制备218支、246支和219支。

实施例2：均匀性检验

一.检测方法

离子交换HPLC法是临床常用的HbA_1c测定方法之一，该法的精密度较好，能够满足均匀性检验的要求，且检测成本低，时间短，适合大样本量的分析。因此综合考虑，研究单位采用离子交换HPLC法为均匀性检验的测定方法。

1.采用随机取样方式，将分装实施例1得到的候选标准物质顺序编号，每个浓度随机抽取21瓶进行均匀性检验，测定的方法是离子交换HPLC法，最小取样量为5μl。所有样品在测定前于-70℃保存。

2.测定前，将样品在室温下复溶，于血液混合器上旋转混合均匀。使用离子交换HPLC法HLC-723G7糖化血红蛋白检测仪及配套试剂(Tosoh公司，日本)进行检测(方法参照：Gremmels HD,Richter A,Watzkel.Evaluation of the hemoglobinA1c-analyzer TOSOH HLC-723G7.Clin Lab.2003,49:243-250.TOSOH HLC-723G7糖化血红蛋白分析仪的评价)。每个浓度测定21个样品，每个样品重复测定3次。使用颠倒测量样品顺序的方法进行重复测量，每次测量前都对分析仪进行校准。方案如下：

第一次：1-2-3-……-19-20-21

第二次：21-20-19……-3-2-1

第三次：1-2-3-……-19-20-21

3.数据统计分析方法

采用EXCEL 2007软件，对数据进行单因素方差分析。

二.检验结果

1.原始数据

三个水平候选标准物质的均匀性检验原始数据见1。均匀性检测中，方法测定的重复性为0.5％，符合均匀性检验中关于检测方法的要求。

表1：标准物质均匀性检测结果

2.统计分析

对3个水平候选标准物质的检测数据用EXCEL 2007作单因素方差分析，结果见表2。表中3个候选标准物质的显著性水平均大于0.05，统计学上没有显著性差异。

表2均匀性检验数据的单因素方差分析结果

3.均匀性的不确定度分析

根据GB/T15000.3-2008/ISO Guide35：2006，均匀性的不确定u_bb等于瓶间均匀性的标准偏差S _bb。

当MS_among>MS_within时，按照如下公式计算瓶间标准偏差(S_bb)。

$u_{\mathrm{bb}}=S_{\mathrm{bb}}=\sqrt{\frac{{\mathrm{MS}}_{\mathrm{among}}-{\mathrm{MS}}_{\mathrm{within}}}{n}}$

当MS_among<MS_within时，按照如下公式计算瓶间标准偏差(S_bb)。

$u_{\mathrm{bb}}=S_{\mathrm{bb}}=\sqrt{\frac{{\mathrm{MS}}_{\mathrm{within}}}{n}}4\sqrt{\frac{2}{v{\mathrm{MS}}_{\mathrm{within}}}}$

其中MS_among、MS_within、v_MSwithin和n分别为均匀性方差分析中的组间均方、组内均方，组内自由度和每个样品的重复测定次数。计算CRM11、CRM12、CRM13的均匀性不确定度如表3。

表3均匀性的不确定度分析

以上实验证明，本发明得到的糖化血红蛋白标准品的均匀性良好。

实施例3：稳定性检验

一.检测方法

按照GB/T15000.3-2008/ISO Guide35：2006中说明，采用同步稳定性研究进行稳定性检验研究。对于短期稳定性研究，共设计9个温度时间点，分别为零点、室温1天、2天、和4天；4℃1周、2周和1个月；-20℃2周、1个月和3个月、对于长期稳定性研究设计5个温度时间点，分别为零点，-70℃1个月、3个月、6个月、9个月和12个月；每个温时测定3瓶样品，每瓶重复分析3份。与均匀性检验研究相同，稳定性检验采用离子交换HPLC法为分析方法。

1.稳定性检验研究的样本储存

从总样品中随机抽取各温时点的样品如下安排：

3瓶，标记0，置液氮；

15瓶，分5组(3×3)，分别标记-70℃1m、-70℃3m、-70℃6m、-70℃9m、-70℃12m，置-70℃

9瓶，分3组(3×3)，分别标记-20℃0.5m、-20℃1m、-20℃3m，置-20℃

9瓶，分3组(3×3)，分别标记4℃0.25m、4℃0.5m、4℃1m，置4℃

9瓶，分3组(3×3)，分别标记RT1d、RT2d、RT3d，置室温(蔽光)

2.稳定性检验研究的样本转移

按照实验的设计(见表4)，以液氮作为参比温度，将在特定温时到期样本转移到液氮中，-20℃、4℃及常温放置的样本在转移至液氮前，先在-70℃冰箱放置过夜，然后再转移到液氮中。

3.分析流程

测定前，取所有相关样品，每个温时点样品3瓶，分别为70℃1m、-70℃3m、-70℃6m、-70℃9m；-20℃0.5m、-20℃1m、-20℃3m；4℃0.25m、4℃0.5m、4℃1m。将样品在室温下复溶，于血液混合器上旋转混合均匀。使用HLC-723G7糖化血红蛋白检测仪及配套试剂(Tosoh公司,日本)进行检测。每个温时点测定3个样品，每个样品重复测定3次。使用颠倒测量样品顺序的方法进行重复测量，每次测量前都对分析仪进行校准。

表4样本转移操作

4.数据统计分析方法

根据GB/T15000.3-2008/ISO Guide35：2006中稳定性结果评估的方法，以时间为X轴，HbA_1c浓度为Y轴，对所得数据进行线性回归分析，计算回归参数。对斜率b进行t-检验，检验b的显著性。

二.检测结果

1.短期稳定性检验研究结果

将HbA_1c候选标准物质在不同温度下保存，3个水平候选标准物质稳定结果分别见表5、6和7。

表5不同温度对CRM11的影响结果

表6不同温度对CRM12的影响结果

表7不同温度对CRM13的影响结果汇总

根据GB/T15000.3-2008/ISO Guide35：2006中稳定性结果评估的方法，以时间为X，HbA_1c浓度为Y，对所得数据进行线性回归分析，计算回归参数。对斜率b进行t-检验，检验b的显著性。用EXCEL 2007软件分析，所得结果列于表8。

表8HbA_1c标准物质在不同温度下贮存的稳定性统计分析

将HbA_1c候选标准物质在根据GB/T15000.3-2008/ISO Guide35：2006中对于无趋势时不确定度的评估，按照最大不确定度来源计算。在4℃下保存1个月(t＝1个月)CRM11、CRM12、CRM13稳定性的不确定度分量为0.022、0.019和0.029。说明实施例1得到的标准物质具有优异的短期稳定性。

2.长期稳定性检验研究结果

将实施例1得到的HbA_1c标准物质在-70℃温度下保存，3个水平候选标准物质稳定结果分别见表9。

表9长期稳定性考察结果汇总

根据GB/T15000.3-2008/ISO Guide35：2006中稳定性结果评估的方法，以时间为X，HbA1c浓度为Y，对所得数据进行线性回归分析，计算回归参数。对斜率b进行t-检验，检验b的显著性。用EXCEL 2007软件分析，所得结果列于表10。

表10HbA_1c标准物质长期稳定性统计分析

根据GB/T15000.3-2008/ISO Guide35：2006中对于无趋势时不确定度的评估，在-70℃下保存12个月(t＝12个月)CRM11、CRM12、CRM13稳定性的不确定度分量为0.064、0.068和0.068。说明实施例1得到的标准物质具有优异的长期稳定性。

实施例4：标准物质的互通性研究

一.样本

新鲜人血清样本来自两位健康志愿者，真空采血管采集新鲜抗凝全血，分别分装，标记为S1和S2。实施例1制备的标准物质CRM11、CRM12和CRM13。测定前于4℃保存，未冰冻。

二.测定

北京市13家三级以上医院(医院名称见表11)对上述S1、S2、CRM11、CRM12和CRM13进行测定，这13家医院分别采用不同原理、不同方法进行HbA_1c检测。CRM11、CRM12和CRM13在室温下复融、混匀后测定，S1、S2室温下混匀测定。测定程序按照各医院的标准操作规程进行。每个项目每个样本重复测定3次，以3次测定结果的均值为统计数据。结果见表12。

表11：参加研究的北京市13家三级以上医院名单

三.结果分析

研究结果表明，本研究制备的标准物质在采用不同原理、不同方法进行检测的检测系统中应用的互通性良好，可广泛用于目前临床实验室常规测定方法及试剂评价。

表12：北京市13家三级医院测定样品结果

Claims (10)

1.一种糖化血红蛋白标准物质，其特征在于：为3种浓度的具有医学决定水平的人血基质HbA_1c标准物质，浓度分别为：

(1)浓度1：IFCC值为31-42mmol/mol或NGSP值为5.0-6.0HbA_1c％；

(2)浓度2：IFCC值为43-58mmol/mol或NGSP值为6.1-7.5HbA_1c％；

(3)浓度3：IFCC值为69-91mmol/mol或NGSP值为8.5-10.5HbA_1c％。

2.根据权利要求1所述的一种糖化血红蛋白标准物质，其特征在于：所述糖化血红蛋白标准物质的浓度分别为：

(1)浓度1：IFCC值为38.42(不确定度：1.60)mmol/mol或NGSP值为5.67(不确定度：0.24)HbA_1c％；

(2)浓度2：IFCC值为52.68(不确定度：2.20)mmol/mol或NGSP值为6.97(不确定度：0.29)HbA_1c％；

(3)浓度3：IFCC值为88.74(不确定度：3.65)mmol/mol或NGSP值为10.27(不确定度：0.42)HbA_1c％。

3.根据权利要求1或2所述的一种糖化血红蛋白标准物质，其特征在于所述糖化血红蛋白标准物质采用以下方法制备：

(1)用EDTA抗凝采血管分别采集健康无糖尿病者、糖尿病控制良好者及糖尿病控制不好者的空腹静脉血50ml/人，室温放置0.5小时，将采血管于8℃ 3000g离心10min，去除上层血浆；

(2)向下层红细胞中加入10倍体积的0.15mol/L NaCl溶液，置37℃温浴4h，离心20min，弃去上清液，重复该步骤，清洗红细胞2次；

(3)加入等体积超纯水，混匀，裂解红细胞；

(4)去除细胞碎片等杂质：离心20min，小心吸取上层溶液，加入10ml含稳定剂的水溶液，混匀后，用针头滤器过滤溶血液，测定总血红蛋白浓度；

(5)按糖化血红蛋白水平混合成3种浓度的标准物质；

(6)在无菌间将溶血液分装至1ml聚乙烯管中，加盖，编号，置-70℃保存。

4.根据权利要求3所述的一种糖化血红蛋白标准物质，其特征在于：所述步骤(4)所述的稳定剂水溶液为50mmol/Lβ-吗啉乙磺酸、10mmol/L KCl、1mmol/L Na₂CO₃，pH值为6.2。

5.一种糖化血红蛋白标准物质的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)用EDTA抗凝采血管采集空腹静脉血50ml/人，室温放置0.5小时，将采血管于8℃ 3000g离心10min，去除上层血浆；

(2)向下层红细胞中加入10倍体积的0.15mol/L NaCl溶液，置37℃温浴4h，离心20min，弃去上清液，重复该步骤，清洗红细胞2次；

(3)加入等体积超纯水，混匀，裂解红细胞；

(4)去除细胞碎片等杂质：离心20min，小心吸取上层溶液，加入10ml含稳定剂的水溶液，混匀后，用针头滤器过滤溶血液，测定总血红蛋白浓度；

(5)按糖化血红蛋白水平混合成3种浓度的标准物质；

(6)在无菌间将溶血液分装至1ml聚乙烯管中，加盖，编号，置-70℃保存。

所述步骤(4)的稳定剂水溶液为50mmol/Lβ-吗啉乙磺酸、10mmol/L KCl、1mmol/LNa₂CO₃，pH值为6.2。

6.根据权利要求5所述的一种糖化血红蛋白标准物质的制备方法，其特征在于：所述步骤(4)测定血总血红蛋白浓度的方法为氰化高铁血红蛋白测定法。

7.根据权利要求6所述的一种糖化血红蛋白标准物质的制备方法，其特征在于：所述步骤(5)的3种浓度的标准物质为：

(1)浓度1：IFCC值为31-42mmol/mol或NGSP值为5.0-6.0HbA_1c％；

(2)浓度2：IFCC值为43-58mmol/mol或NGSP值为6.1-7.5HbA_1c％；

(3)浓度3：IFCC值为69-91mmol/mol或NGSP值为8.5-10.5HbA_1c％。

8.根据权利要求7所述的一种糖化血红蛋白标准物质的制备方法，其特征在于：所述步骤(5)的3种浓度的标准物质为：

(1)浓度1：IFCC值为38.42(不确定度：1.60)mmol/mol或NGSP值为5.67(不确定度：0.24)HbA_1c％；

(2)浓度2：IFCC值为52.68(不确定度：2.20)mmol/mol或NGSP值为6.97(不确定度：0.29)HbA_1c％；

(3)浓度3：IFCC值为88.74(不确定度：3.65)mmol/mol或NGSP值为10.27(不确定度：0.42)HbA_1c％。

9.权利要求1所述的糖化血红蛋白标准物质用于检测人糖化血红蛋白常规方法的发展、溯源、评价；试剂的制备及质量评价；校准物的制备、定值及质量评价协作研究分析中的质量保证的应用。

10.权利要求1所述的糖化血红蛋白标准物质用于制备检测糖尿病的试剂的应用。