CN106370872B - 一种牛全血添加高浓度金属元素的方法及牛全血质控品 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种牛全血添加高浓度金属元素的方法，包括如下步骤：A)收集牛全血，通过离心将血浆与血细胞分离；B)向所述血浆中添加高浓度金属元素物质，同时以800～1000rpm的转速磁力搅拌，混匀，得到混匀血浆；C)将所述混匀血浆与所述血细胞以200～400rpm的转速磁力搅拌，混匀，得到添加高浓度金属元素的牛全血。本发明属于医学检验技术领域，本发明提供的制备方法简单，成本低，通过该方法可以制得基质效应符合要求的金属元素全血质控品，减少沉淀的发生，终产品稳定性好，从而满足临床和日常检测对高浓度金属元素牛全血质控品的需求。

Description

一种牛全血添加高浓度金属元素的方法及牛全血质控品
技术领域
本发明属于医学检验技术领域，尤其涉及一种牛全血添加高浓度金属元素的方法及牛全血质控品。
背景技术
全血微量元素质控品是专门用于室内质控的、稳定的、与待测样品近似的材料，是保证准确测定的重要基础，其与待测样品相近的基质是质控品的核心要求之一，但出于对全血微量元素质控品浓度的不同需求，往往需添加一定量的金属元素物质进行质控浓度的调整，如铁元素、镁元素等。
当往全血中直接添加高浓度金属元素标液时，往往不可避免地会导致全血中蛋白质变性，导致血细胞聚集沉淀的情况发生。
中国专利申请201510300359.5公开了一种金属元素全血质控品的制备方法，包括如下步骤：收集牛全血；测定牛全血中金属元素的浓度；加入金属元素物质，轻轻混匀，采用纱布进行过滤，将牛全血中金属元素的浓度调节至目标浓度；55～60℃温度条件下灭活25～40min，离心或过滤去除纤维沉淀物；加入防腐剂，轻轻混匀。由于高浓度金属元素物质的加入，金属元素物质与全血中的蛋白质结合形成不溶性金属沉淀，同时使全血中蛋白质发生变性，导致红细胞聚集沉淀，导致活性成分的损失。
因此，发明一种减少沉淀的牛全血添加高浓度金属元素的方法具有重要意义。
发明内容
为解决现有技术中存在的问题，本发明提供一种牛全血添加高浓度金属元素的方法，制备方法简单，成本低，通过该方法可以避免沉淀的发生和活性成分的损失，制得的高浓度金属元素全血质控品基质效应符合要求，产品稳定性好，从而满足临床和日常检测对高浓度金属元素牛全血质控品的需求。
本发明的目的将通过下面的详细描述来进一步体现和说明。
本发明提供一种牛全血添加高浓度金属元素的方法，包括如下步骤：
A)收集牛全血，通过离心将血浆与血细胞分离；
B)向所述血浆中添加高浓度金属元素物质，同时以800～1000rpm的第一转速磁力搅拌，混匀，得到混匀血浆；
C)将所述混匀血浆与所述血细胞以200～400rpm的第二转速磁力搅拌，混匀，得到添加高浓度金属元素的牛全血。
采用上述技术方案，首先将牛全血的血浆和血细胞分离，再通过雾化器雾化和磁力搅拌法往分离出来的血浆中加入高浓度金属元素物质，然后再将此混匀血浆与血细胞混合，其优点在于对高浓度金属元素溶液进行雾化，形成直径非常小的气溶胶，同时使用磁力搅拌器，使得牛血浆在磁力搅拌器作用下形成漩涡状，可以与已雾化形成气溶胶的溶液充分接触(很大程度地增大了金属溶液与牛血浆的接触面积)，有效避免了局部金属溶液浓度过高而导致的蛋白质变性，进而避免了沉淀的产生和活性成分的浪费；提前利用基体简单的血浆对高浓度金属元素溶液进行有效地稀释(避免了高浓度金属元素溶液直接接触血细胞)，再以稀释后相对低金属元素浓度的血浆溶液与血细胞混合，从而有效地避免了因高浓度金属溶液接触蛋白质而导致蛋白质变性、血细胞聚集沉淀等现象的发生，方便快捷，不影响其他组分。
血浆与高浓度金属元素物质混匀时，800～1000rpm有利于提高混匀效率；得到的混匀血浆与血细胞混匀时，保持磁力搅拌转速200～400rpm，可以在实现血浆与血细胞的及时充分混匀，进一步避免蛋白质变性和红细胞聚集沉淀，得到已添加高浓度金属溶液的牛全血。
优选地，所述第一转速为900rpm，所述第二转速为300rpm。
优选地，所述离心的转速为2500～3500rpm，时间为2～4min。在实现快速分离的同时，避免血细胞受到破坏。
更优选地，所述离心的转速为3000rpm，时间为3min。
优选地，所述高浓度金属元素物质的添加采用雾化器雾化的方式。通过雾化器雾化的方式加入高浓度金属元素，形成气溶胶，增加了接触面积，避免了局部金属标液浓度过高，减少了不溶性金属盐沉淀的发生。
更优选地，所述雾化器的直径为0.05mm；氩气的压强为280KPa，氩气的流速为1.0L/min，进样管管径为1.02mm。
优选地，所述金属元素物质包括硝酸镁、氯化铁、镁元素标准物质、锰元素标准物质、铁元素标准物质、铜元素标准物质、锌元素标准物质、铅元素标准物、钙元素标准物质、硒元素标准物质中的一种或多种。
相应地，本发明还提供一种牛全血质控品，由所述方法得到的添加高浓度金属元素的牛全血，灭活，加入防腐剂，混匀得到。通过上述方法，可以制得基质效应符合要求的高浓度金属元素全血质控品，减少沉淀的发生，避免了活性成分的损失，终产品稳定性好。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明通过用雾化器雾化和磁力搅拌法向分离出来的血浆中加入金属元素物质，再与血细胞混合，实现了高浓度金属元素的添加，有效地避免了因高浓度金属溶液接触蛋白质而导致蛋白质变性、红细胞聚集沉淀等现象的发生，避免了活性成分的损失，方便快捷，不影响其他组分。本发明提供的制备方法简单，成本低，通过该方法，可以制得基质效应符合要求的高浓度金属元素牛全血质控品，从而满足临床和日常检测的需求。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明做进一步的详细说明。金属元素浓度的测定方法可以采用现有常规检测方法，如原子吸收光谱法(AAS)和/或电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)。
实施例一
收集3L牛全血，对牛全血先进行3000rpm离心3min，取血浆；称取硝酸镁、氯化铁，用去离子水定容至30ml，所得标液元素浓度为镁3.202mg/ml、铁2.040mg/ml；通过雾化器雾化和磁力搅拌方式把30ml的标液雾化至血浆中，用磁力搅拌以900rpm的第一转速将标液与血浆混匀，得到混匀血浆，将该混匀血浆与离心后的血细胞混合，用磁力搅拌器以300rpm的第二转速混匀血浆与血细胞，得到添加高浓度金属元素的牛全血。雾化器的直径为0.05mm；氩气的压强为280KPa，氩气的流速为1.0L/min，进样管管径为1.02mm。
将得到的添加高浓度金属元素的牛全血，灭活，加入Proclin 300防腐剂，混匀得到牛全血质控品。经检测，Mg的浓度为49.35mg/L,Fe的浓度为496.2mg/L，达到预期目标浓度的要求。
具体数据如下：
元素 Mg(mg/L) Fe(mg/L)
本底浓度 17.98 296.02
需加强浓度 32.02 203.98
预期目标浓度 50.00 500
结果：在添加高浓度金属元素后无沉淀物产生，实施例一制得的金属元素全血质控品也无沉淀物产生，基质的改变不大(〈1％)，符合质控的基质要求。
制得的牛全血质控品通过分装均匀性验证，稳定性验证，在≤-20℃条件下能储存18个月仍符合相关要求。
对比例一
收集3L牛全血；称取硝酸镁、氯化铁，用去离子水定容至30ml，所得标液元素浓度为镁3.202mg/ml、铁2.040mg/ml；通过雾化器雾化和磁力搅拌方式把30ml的标液雾化至牛全血中，用磁力搅拌以300rpm的转速将标液与牛全血混匀，得到添加高浓度金属元素的牛全血，有沉淀物产生。将得到的添加高浓度金属元素的牛全血灭活，加入Proclin 300防腐剂，混匀得到牛全血质控品。经检测，Mg的浓度为47.26mg/L,Fe的浓度为480.3mg/L，基质的改变达1.6％，未达到预期目标浓度的要求。
对比例二
收集3L牛全血，对牛全血先进行3000rpm离心3min，取血浆；称取硝酸镁、氯化铁，用去离子水定容至30ml，所得标液元素浓度为镁3.202mg/ml、铁2.040mg/ml；通过磁力搅拌方式把30ml的标液滴加至血浆中，用磁力搅拌以900rpm的第一转速将标液与血浆混匀，得到混匀血浆，将该混匀血浆与离心后的血细胞混合，用磁力搅拌器以300rpm的第二转速混匀血浆与血细胞，得到添加高浓度金属元素的牛全血，有沉淀物产生。将得到的添加高浓度金属元素的牛全血灭活，加入Proclin 300防腐剂，混匀得到牛全血质控品。经检测，Mg的浓度为45.18mg/L,Fe的浓度为442.5mg/L，未达到预期目标浓度的要求，需多次进行沉淀物的过滤及金属盐的补充加入，基质因沉淀物的产生而发生较大的改变()2％)。
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。

Claims (7)

1.一种牛全血添加高浓度金属元素的方法，其特征在于：包括如下步骤：
A）收集牛全血，通过离心将血浆与血细胞分离；
B）向所述血浆中添加高浓度金属元素物质，同时以800~1000rpm的第一转速磁力搅拌，混匀，得到混匀血浆，所述高浓度金属元素物质的添加采用雾化器雾化的方式；
C）将所述混匀血浆与所述血细胞以200~400rpm的第二转速磁力搅拌，混匀，得到添加高浓度金属元素的牛全血。
2.根据权利要求1所述的牛全血添加高浓度金属元素的方法，其特征在于：所述离心的转速为2500~3500rpm，时间为2~4min。
3.根据权利要求1所述的牛全血添加高浓度金属元素的方法，其特征在于：所述离心的转速为3000rpm，时间为3min。
4.根据权利要求1所述的牛全血添加高浓度金属元素的方法，其特征在于：所述雾化器的直径为0.05mm；氩气的压强为280KPa，氩气的流速为1.0L/min，进样管管径为1.02mm。
5.根据权利要求1所述的牛全血添加高浓度金属元素的方法，其特征在于：所述第一转速为900rpm，所述第二转速为300rpm。
6.根据权利要求1所述的牛全血添加高浓度金属元素的方法，其特征在于：所述金属元素物质包括硝酸镁、氯化铁、镁元素标准物质、锰元素标准物质、铁元素标准物质、铜元素标准物质、锌元素标准物质、铅元素标准物、钙元素标准物质、硒元素标准物质中的一种或多种。
7.一种牛全血质控品，其特征在于：由权利要求1至6中任一项所述方法得到的添加高浓度金属元素的牛全血，灭活，加入防腐剂，混匀得到。
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