CN113702650A - 一种糖化血红蛋白全血质控品的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种糖化血红蛋白全血质控品的制备方法，包括将混合人全血按不同的血型进行分类，用滤筛进行过滤，最后加入蛋白还原剂即可。本发明适用于糖化血红蛋白能力验证质控品、正确度控制物和标准物质的制备，从而解决临床糖化血红蛋白检测标准化工作的准确性问题。
Description
技术领域
本发明属于临床医学领域，特别涉及一种糖化血红蛋白全血质控品的制备方法。
背景技术
糖化血红蛋白(Glycated hemoglobin，GHb)是红细胞中的血红蛋白与血清中的糖类相结合的产物，包括HbA1a、HbA1b、HbA1c，其中HbA1c约占70％,。GHb是通过缓慢、持续及不可逆的糖化反应形成，其含量的多少取决于血糖浓度以及血糖与血红蛋白接触时间，而与抽血时间、患者是否空腹、是否使用胰岛素等因素无关。因此，HbA1c可有效地反映糖尿病患者检测前一段时间内的血糖情况，是在临床上广泛应用的用于评估糖尿病人长期血糖控制水平的一项检测指标。目前，糖化血红蛋白(HbA1c)检测已被多个国家纳入为糖尿病常规检测项目，2010年美国糖尿病协会(ADA)、2011年世界卫生组织(WHO)将HbA1c的血液浓度超过6.5％作为诊断糖尿病的新标准，中华医学会糖尿病学分会(CDS)发布的《中国2型糖尿病防治指南(2020年版)》在有严格质量控制的实验室，采用标准化检测方法测定的糖化血红蛋白(HbA1c)可以作为糖尿病的补充诊断标准，诊断标准为≥6.5％。
为保证HbA1c检测结果的准确性，糖化血红蛋白的测定结果在各试剂间及各实验室间实现检测结果互认，随着糖化血红蛋白IFCC参考方法的建立，糖化血红蛋白测定的标准化工作也已经在中国逐渐展开。目前国家卫健委临床检验中心和上海市临床检验中心均开展了糖化血红蛋白的能力验证计划(PTP)和正确度验证计划(TVP)，为了消除各试剂和方法检测基质效应，真实客观的反映临床实验室的检测能力，能力验证质控品和正确度验证控制品均采用了临床混合全血，并采用IFCC一级参考方法或二级参考方法为正确度验证和能力验证的全血质控品进行定值。但在临床实践中发现，直接采用混合人全血的质控品会出现不同程度的溶血和凝块从而影响临床实验室的检测导致检测结果的不准确；此外，混合人全血质控品由于分装和运输会出现反复冻融的情况，而反复冻融的全血质控品会出现包括HbA1c在内的蛋白质分子发生氧化等反应情况，导致蛋白空间结构以及所带电荷数量发生一定程度改变，从而会影响部分检测系统的检测结果。
发明内容
为了解决上述糖化血红蛋白全血质控品在实践中所出现的问题，本发明的目的是提供一种适用于能力验证比对和正确度验证计划的糖化血红蛋白全血质控品的制备方法。
本发明提供了一种糖化血红蛋白全血质控品的制备方法，包括如下步骤：
(1)将收集到的不同糖化血红蛋白浓度水平的单人份EDTA抗凝全血进行血型鉴定，按A，B，O，AB血型进行分类；
(2)将同血型的单人份全血进行混合，用滤筛进行过滤；
(3)在过滤后的混合全血中加入蛋白还原剂，并充分混匀；
(4)添加了蛋白还原剂的混合全血质控品进行小瓶分装后，冷冻保存待用。
步骤(3)中所述的蛋白质还原剂为二硫苏糖醇DTT，添加质量浓度为0.5-1.5％，优选1％。
制备所得到的糖化血红蛋白全血质控品浓度范围为4％-12％。
所述方法在糖化血红蛋白能力验证质控品、正确度控制物和标准物质的制备中的应用。
有益效果
将混合人全血按不同的血型进行分类，可减少全血质控品在运输和长期反复冻融保存中的溶血现象，而将混合全血用滤筛过滤，可去除掉混合全血质控品中的凝块，降低因溶血和凝块对检测结果的影响。二硫苏糖醇DTT是一种小分子有机还原剂，作为强还原剂常常被用于蛋白质中二硫键的还原，可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键，保护蛋白质或酶中的巯基不致氧化而失活。DTT可一定程度的减少因反复冻融出现的包括HbA1c在内的蛋白质分子发生氧化反应的情况。
血液质控品中的添加剂对各检测系统会产生不同程度的基质效应(matrixeffect),但基质效应有绝对性也有其相对性，只要经方法学比较认可某基体效应可被忽略不计或由基质体效应对某检测系统引入的误差在可接受水平即可认为“无”基体效应。在临床常用的各检测体系中进行实验，本发明制备的糖化血红蛋白全血质控品在各检测体系中无明显基质效应。
本发明所提供的制备方法，适合用于糖化血红蛋白能力验证质控品、正确度控制物和标准物质的制备，从而解决临床糖化血红蛋白检测标准化工作的准确性问题，为糖化血红蛋白的结果互认和一致性提供基础。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
实施例1
将医院收集到的糖化血红蛋白HbA1c浓度范围为4％-12％的单人份EDTA抗凝血用ABO血型试剂进行血型测定，分别按A、B、O、AB型的血进行分类。将同血型组的单人份EDTA抗凝血按五个浓度梯度进行混合，混合时用糖化血红蛋白分析仪Premiers Hb 9120进行混合血的浓度初测。用40目筛网的滤筛将不同浓度的混合全血进行粗滤，滤掉血中的凝块待用。
将DTT进行称量配制为储存浓度为100mg/mL(质量浓度为10％)，按1:9的比例添加入过滤后的混合全血中，DTT的添加浓度为1％(质量浓度)，轻轻颠倒进行充分混匀。五个浓度梯度的混合全血质控品按每支0.5mL用EP管进行分装，置于-70℃冰箱进行冷冻保存待用。
分装后的五个浓度水平的全血质控品2-8℃冷藏运输至选取的上海20家医院进行质控品的适用性调查，选择的医院检测系统包括了市场上的主要糖化血红蛋白品牌伯乐、东曹、爱科来、惠中、普莱默斯等。调查结果进行数据统计，以调查数据的中位数为指定值，并计算20家实验室的离散度CV％。适用性调查的结果分析见表1。
表1糖化血红蛋白全血质控品适用性调查数据分析
表1的适用性调查数据分析显示，制备的五个浓度水平的糖化血红蛋白全血质控品在各检测系统中的离散度较小，均小于5％，能满足糖化血红蛋白能力验证质控品和正确度验证控制品的需要。
Claims (5)
1.一种糖化血红蛋白全血质控品的制备方法，包括如下步骤：
(1)将收集到的不同糖化血红蛋白浓度水平的单人份EDTA抗凝全血进行血型鉴定，按A，B，O，AB血型进行分类；
(2)将同血型的单人份全血进行混合，用滤筛进行过滤；
(3)在过滤后的混合全血中加入蛋白还原剂，并充分混匀；
(4)添加了蛋白还原剂的混合全血质控品进行小瓶分装后，冷冻保存待用。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(3)中所述的蛋白质还原剂为二硫苏糖醇DTT，添加质量浓度为0.5-1.5％。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述二硫苏糖醇DTT添加质量浓度为1％。
4.根据权利要求1-3中任一所述的制备方法，其特征在于：制备所得到的糖化血红蛋白全血质控品浓度范围为4％-12％。
5.根据权利要求1-3中任一所述的制备方法，其特征在于：在糖化血红蛋白能力验证质控品、正确度控制物和标准物质的制备中的应用。
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