CN104800321A - 乌梅及其提取物在制备防治肠癌药物或保健品中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了乌梅及其提取物在防治肠癌中的新用途，本发明在乌梅现有功效的基础上，通过大量实验深入研究，采用AOM-DSS诱导的肠病癌变的小鼠模型，研究结果表明乌梅及其提取物能够显著改善肠病癌变过程中模型小鼠体重下降的状况，显著改善肠病癌变小鼠不断进展的体质量下降、稀便及便血等症状；显著降低肠病癌变小鼠结肠肿瘤发生率，具有很好的预防和控制肠癌的功效。

Description

乌梅及其提取物在制备防治肠癌药物或保健品中的应用

技术领域

本发明涉及一种中药，具体涉及乌梅及其提取物在制备防治肠癌药物中的新用途，属于医药技术领域。

背景技术

大肠癌(colorectal cancer,CRC)又称结肠直肠癌，是最常见的恶性肿瘤之一，全球每年有超过一百万人惟患结直肠癌并造成大约五千万人的死亡，占世界恶性肿瘤死亡第四位，目前我国结直肠癌的发病率呈上升趋势，国内发病的上升速度约为4.8％远远超过国际水平2％。

目前用于CRC治疗的药物主要有奥沙利铂、氟尿嘧啶、伊立替康、叶酸和贝伐单抗等，然而CRC根治术后五年生存率仍徘徊在50％左右，晚期更是不到30％。早期诊断和癌前预防成为防治结直肠癌的主要策略。防治肠道炎癌转变成为结直肠癌化学预防的主要环节，相关研究在多个医疗领域进行了广泛研究并有所发展，中医特色的慢病管理对维持炎症相关肠病缓解期临床疗效确切，对急性期也有缓解作用，因此，从中医药中寻找低毒高效的药物用于CRC化学预防方面具有很好的前景。

中医认为肠病癌变早期为“肛痈”“肠痈”；腹痛反复发作伴有粘液脓血为“久痢”；病情进展出现包块或肠梗阻诊断为“积聚”“肠结”；病变后期各脏器功能受损诊断为“虚劳”。因此，湿邪内蕴、气血壅滞、脾肾亏虚是病机。临床采用乌梅丸治疗难治性肠病取得明显疗效。其中乌梅丸中的君药乌梅为蔷薇科落叶乔木植物梅Prunus mume的近成熟果实，经烟火熏制而成。乌梅，味酸、气平，可升可降，能柔肝缓肝，治疗肝郁克脾，又可收敛肝气，固涩大肠，止血痢。具有“五止”功效，即止渴、止咳、止泻、止痛及止血功效。

中国专利101317904A公开了一种乌梅提取物在抗畜禽病毒、细菌、支原体或衣原体的用途；103977105A公开了治疗哮喘的防风乌梅提取物组合物及其应用；102091315A公开了生姜与乌梅提取物组合物制备癌症放、化疗中解毒增效药物中的用途，101357182A公开了一种含有乌梅的治疗糖尿病的药物及其制备方法。但目前尚未有以乌梅提取物在制备防治肠病癌变药物中的用途相关报道。

发明内容

发明目的：本发明在乌梅现有用途的基础上，通过大量实验筛选其临床功效，开发其新用途，提供乌梅及其提取物在制备防治肠癌药物中的新应用。

技术方案：为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为：

乌梅在制备防治肠癌药物或保健品中的应用。

作为优选方案，所述的乌梅在制备防治肠癌药物或保健品中的应用，所述的肠癌为肠道炎性息肉、腺瘤、粘膜增生和/或炎症性肠病转变成的结肠癌或直肠癌。

乌梅提取物在制备防治肠道炎癌转变药物或保健品中的应用，所述的乌梅提取物由下列方法制备得到：

取干燥的乌梅药材，加药材重量5～15倍体积量的水蒸煮1～3次，每次1-3小时，过滤。滤液合并，3000rpm离心15～30分钟，分离上清液，60～70℃水浴浓浓缩至1g药材/ml，或减压干燥成干浸膏。

作为优选方案，所述的乌梅提取物在制备防治肠道炎癌转变药物或保健品中的应用，所述的肠癌为肠道炎性息肉、腺瘤、粘膜增生和/或炎症性肠病转变成的结肠癌或直肠癌。

作为优选方案，所述的乌梅提取物在制备防治肠道炎癌转变药物或保健品中的应用，将乌梅提取物和药学上可接受的载体制备成含片、颗粒剂，片剂，胶囊剂或口服液制剂。

本发明在制成含片时，把乌梅提取物添加甜味剂，成型剂和/或粘合剂，混合均匀，然后压片制成含片。

本发明在制成片剂时，把乌梅提取物添加载体乳糖或玉米淀粉，需要时加入润滑剂硬脂酸镁，混合均匀，然后压片制成片剂。

本发明在制成胶囊剂时，把中药提取物细粉添加载体乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，然后装胶囊制成胶囊剂。

本发明在制成颗粒剂时，把中药提取物细粉和稀释剂乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，干燥，制成颗粒剂。

有益效果：本发明和现有技术相比具有以下优点：

(1)本发明在乌梅现有功效的基础之上，通过大量实验筛选，深入研究，提供乌梅及其提取物在防治肠癌中的新用途。本发明采用经典模型AOM-DSS诱导的小鼠结肠肿瘤，实验结果表明，乌梅及其提取物能够显著改善肠病癌变过程中模型小鼠体重下降的状况，显著改善肠病癌变小鼠不断进展的体质量下降、稀便及便血等症状；并且肠道外观及病理研究表明乌梅提取物能显著降低肠病癌变小鼠结肠肿瘤发生率，提示乌梅及其提取物具有很好的防治肠病癌变的功效，临床上可以用于防治肠癌疾病。

(2)本发明提供的乌梅及其乌梅提取物，可以方便和药学载体制备成多种剂型，临床上服用方便，且实验结果表明本发明提供的组合物，疗效可靠，使用安全，长期服用无毒副作用。

具体实施方式

根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。

实施例1

乌梅提取物的制备方法：取干燥的乌梅药材，加水蒸煮2-3次，每次1-3小时。第一次加水量5-15倍的水，过滤，药渣第二次加5-15倍量的水，过滤，第三次加5-10倍量的水，过滤。将3次滤液合并，离心(3000rpm)15分钟，分离上清液，60℃水浴浓度至1g药材/ml，或减压干燥成干浸膏。

实施例2乌梅提取物对AOM-DSS诱导的小鼠结肠肿瘤预防和治疗作用研究。

1.实验材料

1.1实验用药物及试剂

乌梅提取物：本发明实施例1制备的得到的乌梅提取物；氧化偶氮甲烷(Azoxymethane,AOM)购自sigma公司，批号：SLBD6763V；葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)购自Mpbio公司，批号：M8667。

1.2实验动物及饲养

C57小鼠，18-22g，雄性，由扬州大学比较医学中心提供，合格证号：SCXK(苏)2012-0004。全价营养颗粒饲料：由江苏省协同医药生物技术有限公司提供。饲养条件：室温20±2℃，湿度55–65％，明暗交替，光照适度，通风洁净良好。

2.方法

2.1AOM-DSS诱导的炎性肠病癌变小鼠模型造模方法：

采用C57小鼠，预先饲养两周，给予单次小剂量偶氮氧甲烷(AOM10mg/kg)腹腔注射联合三个循环DSS喂饲(2％DSS饮水1周+正常饮水2周为一个循环)，复制AOM-DSS诱导的炎性肠病相关的结直肠癌小鼠模型。

2.2乌梅提取物对AOM-DSS诱导的炎性肠病癌变小鼠结肠肿瘤预防和治疗作用。

C57小鼠30只，随机分为3组，每组10只。分别为正常对照组，模型组，乌梅提取物组2g/kg。空白对照组给予等量的生理盐水；模型组，乌梅提取物组采用上述方法造模，小剂量AOM10mg/kg腹腔注射一周后，乌梅提取物组每天口服给予乌梅提取物2g/kg，模型组给予等量的生理盐水。记录小鼠体重，大便性状及便血情况。实验终点时处死小鼠，取血，取结直肠组织测量长度和重量。记录肿瘤个数，多发性及肿瘤大小。部分用10％中性福尔马林固定，进行病理检查并统计评分；部分保存于液氮供Western Blot检测。

2.3小鼠疾病活动指数(DAI)计算

[1]小鼠体重变化：每日对各组小鼠称体重并记录观察值,利用公式计算体质量下降百分比。其公式如下：第n天体质量下降(％)＝(第n-1天体质量-第n天体质量)/第n-1天体质量×100％。小鼠体质量增加者记0分。

[2]小鼠粪便性状：观察各实验组小鼠肛门口以及其周围体毛变化：①正常粪便：成形的球块状、周围体毛干净；②半稀便：糊状便，但不粘附在肛周；③稀便：水样便，粘附肛周体毛。

[3]小鼠便血情况：采用大便隐血试纸检测判定为小鼠粪便正常者，为粪便隐血阴性；小鼠粪便不正常者，观察粪便颜色改变情况：①颜色显现为红色或褐色者，可认定为肉眼血便；②对肉眼血便不明显或粪便性状不正常而可疑隐血者，使用大便隐血胶体金检测试纸，按使用说明书检测大便隐血情况(酶联免疫吸附法)。综合以上观察，对小鼠疾病活动指数(diseaseactivity index,DAI)进行评估。

表1小鼠疾病活动指数(体质量下降、粪便性状、大便隐血/血便)评分标准

注：DAI＝(体质量下降分数+粪便性状分数+隐血分数)/3，体质量下降5％记分为1分，以此类推，以造模当日体质量为基础体质量。

2.4统计分析

数据采用表示，采用单因素方差分析(ANOVA)进行检验，p<0.05为差异有统计学意义。

3.实验结果

3.1乌梅提取物对AOM-DSS诱导的肠病癌变小鼠体重的影响。

表2乌梅提取物对AOM-DSS诱导的肠病癌变小鼠体重的影响(n＝6)

##p<0.01与正常对照组比较；*p<0.05,**p<0.01与模型组比较。

造模前各组小鼠体重相当，各组比较无显著性差异；第一循环，与对照组比较，模型组小鼠体重显著降低(##p<0.01)；与模型组比较，乌梅提取物组小鼠体重显著升高(*p<0.05)。第二循环，与对照组比较，模型组小鼠体重显著降低(##p<0.01)；乌梅提取物组小鼠体重显著升高，与模型组比较有显著性差异(*p<0.05)。第三循环，与正常对照组比较，模型组小鼠体重显著降低(##p<0.01)，乌梅提取物组与模型组比较无显著性差异。上述结果提示：乌梅提取物显著改善肠病癌变过程中模型小鼠体重下降的状况。

3.2乌梅提取物对AOM-DSS诱导的肠病癌变小鼠疾病活动指数(DAI)的影响。

表3乌梅提取物对AOM-DSS诱导的肠病癌变小鼠DAI的影响(n＝6)

###p<0.001与正常对照组比较；**p<0.01,***p<0.001与模型组比较。

DAI反映小鼠肠病--癌变疾病进展状况，模型组小鼠随着造模次数的增加，DAI相应增加；三个循环模型组DAI显著增高，与对照组比较，具有显著性差异(###p<0.001)；乌梅提取物组小鼠随着造模次数的增加，DAI稍有增加，但是与模型组比较，三个循环DAI均显著降低(**p<0.01,***p<0.001)。上述结果提示：乌梅提取物显著改善肠病癌变小鼠不断进展的体质量下降、稀便及便血等症状。

3.3乌梅提取物对AOM-DSS诱导的肠病癌变小鼠结肠重量/长度比值的影响

表4乌梅提取物对AOM-DSS诱导的肠病癌变小鼠结肠重量/长度比值的影响(n＝6)

##p<0.01与正常对照组比较；*p<0.05,**p<0.01与模型组比较。

实验结束后，与正常对照组比较，模型组小鼠结肠重量长度比值显著升高(##p<0.01)；乌梅提取物组小鼠结肠重量长度比值降低，与模型组比较有显著性差异(**p<0.01)。上述结果提示：乌梅提取物显著改善模型组小鼠结直肠炎性水肿和异常增生。

3.4乌梅提取物对AOM-DSS诱导的肠病癌变小鼠肠道肿瘤的影响。

表5乌梅提取物对AOM-DSS诱导的肠病癌变小鼠结肠肿瘤发生率、多发性的影响

以上表5的实验结束后，模型组小鼠结肠出现多个肉眼可见的肿瘤、肿瘤发生率为100％；乌梅提取物组小鼠未见肉眼可见肿瘤。上述结果提示乌梅提取物可明显降低炎性肠病癌变小鼠结肠肿瘤发生率。

表6乌梅提取物对AOM-DSS诱导的炎性肠病癌变小鼠炎症和肿瘤病理评分的影响

#p<0.05与正常对照组比较；**p<0.01与模型组比较。

以上表6的实验结果表明。正常组小鼠显微镜下固有层未见炎症，未见隐窝损伤；小鼠结肠壁粘膜上皮细胞未见不典型增生，未见肿瘤组织；模型组小鼠光镜下见重度炎症；结肠壁粘膜层查见肿瘤组织。而本发明提供的乌梅提取物组，所有小鼠未查见肿瘤。病理研究结果进一步证明，本发明提供的乌梅提取物具有很好的防治肠病癌变的功效。

氧化偶氮氧甲烷(AOM)加腹腔注射联合三个循环右旋糖酐硫酸酯钠(DSS)喂饲为肠炎癌变大部分研究使用的统一的动物模型，其中AOM为遗传毒性剂，给药一次后，联合促炎剂DSS三个周期，导致的小鼠结直肠肿瘤组织学和分子的变化类似于发生在人类的CAC，该动物模型可以施用任何遗传背景的小鼠，精准的模拟了肠病相关癌变的过程，为结肠炎相关癌症的典范，由于其具有良好的重现性，有效性和易用性，目前已经得到广泛普及。以上药效学试验结果显示，本发明提供的乌梅提取物能够显著改善肠道癌变模型小鼠体重下降的状况，显著改善肠道癌变小鼠不断进展的体质量下降、稀便及便血等症状；肠道外观及病理研究表明乌梅提取物显著降低肠道癌变小鼠结肠肿瘤发生率，显示出很好的防治肠病癌变的功效。

以上实施方式只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人了解本发明内容并加以实施，并不能以此限制本发明的保护范围，凡根据本发明精神实质所做的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围内。

Claims (5)

1.乌梅在制备防治肠癌药物或保健品中的应用。

2.根据权利要求1所述的乌梅在制备防治肠癌药物或保健品中的应用，其特征在于，所述的肠癌为肠道炎性息肉、腺瘤、粘膜增生和/或炎症性肠病转变成的结肠癌或直肠癌。

3.乌梅提取物在制备肠癌药物或保健品中中的应用，所述的乌梅提取物由下列方法制备得到：

取干燥的乌梅药材，加药材重量5～15倍体积量的水蒸煮1～3次，每次1-3小时，过滤，

滤液合并，3000rpm离心15～30分钟，分离上清液，60～70℃水浴浓浓缩至1g药材/ml，或减压干燥成干浸膏。

4.根据权利要求3所述的乌梅提取物在制备防治肠癌药物或保健品中的应用，所述的肠癌为肠道炎性息肉、腺瘤、粘膜增生和/或炎症性肠病转变成的结肠癌或直肠癌。

5.根据权利要求3或4所述的乌梅提取物在制备防治肠癌药物或保健品中的应用，其特征在于，将乌梅提取物和药学上或食品上可接受的载体制备成含片，颗粒剂，胶囊剂或口服液制剂。