CN104798867B - 一种肉用防腐剂及其制备方法 - Google Patents
一种肉用防腐剂及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104798867B CN104798867B CN201510170968.3A CN201510170968A CN104798867B CN 104798867 B CN104798867 B CN 104798867B CN 201510170968 A CN201510170968 A CN 201510170968A CN 104798867 B CN104798867 B CN 104798867B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cosurfactant
- meat
- preservative
- meat preservative
- added
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Food Preservation Except Freezing, Refrigeration, And Drying (AREA)
- Meat, Egg Or Seafood Products (AREA)
Abstract
本发明公开一种肉用防腐剂及制备方法,所述肉用防腐剂按质量百分比计算,由10%表面活性剂失水山梨醇单油酸酯聚氧乙烯醚、7.5‑10.5%助表面活性剂乙醇、2.5‑3.5%肉桂精油、0.4%ε‑聚赖氨酸盐酸盐和余量的蒸馏水或去离子水组成,其中助表面活性剂与肉桂精油的质量比为3:1。其制备方法即将肉桂精油加入到助表面活性剂中,搅拌至均匀,然后加入表面活性剂,继续搅拌均匀得油相体系;将ε‑聚赖氨酸盐酸盐加入至蒸馏水或去离子水中搅拌均匀得水相;然后将水相滴加到油相体系中,滴加完后超声处理,然后在25℃水浴中静置平衡,即得具有很好的稳定性和保鲜效果的肉用防腐剂。其制备工艺简单,操作方便,便于规模化生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种肉用防腐剂及其制备方法,属于肉制品保鲜技术领域。
背景技术
随着科学的进步、社会的快速发展,人民的生活水平逐步提高,致使人民对食品的关注度不仅仅停留在食品的色香味上,更多的是关注食品的安全问题。肉类食品味道鲜美、营养丰富、深受人们喜爱,但同时,肉类食品极易滋生大量微生物,尤其是肉制品在贮藏、运输和销售过程中,容易引起腐败微生物和致病微生物的大量繁殖,使得其新鲜度下降,引起腐败导致其货架期缩短,甚至造成食物中毒。所以研究肉制品保鲜的防腐、延长其货架期一直是一个需要不断突破的环节。
目前市场上对于肉质品的防腐保鲜大都使用单一的化学防腐剂。但随着人民生活水平的提高和对于健康的更加关注,要求减少化学防腐剂在食品中的使用量,而增加天然防腐剂的使用。天然提取物像肉桂精油虽具有一定的抗氧化性和抑菌性,在食品保鲜中有一定的使用,但肉桂精油的易挥发性和不稳定性影响了其直接添加至肉制品中的防腐效果,使得其应用有一定的局限性。另外,ε-聚赖氨酸盐酸盐作为一种新兴天然防腐剂,市场前景广阔。但对于肉桂精油与ε-聚赖氨酸盐酸盐复配进行防腐保鲜还尚未有所研究。合理选用表面活性剂、助表面活性剂等和上述天然防腐剂肉桂精油及ε-聚赖氨酸盐酸盐复配,制备成热力学稳定的复合体系,可使得肉桂精油缓慢释放,并抑制肉制品中微生物的生长,从而达到延长货架期的目的,因而具有较好的创新性。
发明内容
本发明的目的之一是为了克服肉桂精油的易挥发性和不稳定性,并且解决传统以化学防腐剂作为单一保鲜剂的不足而提供一种新型的肉用防腐剂。该肉用防腐剂采用肉桂精油与ε-聚赖氨酸盐酸盐复配,形成具有很好的稳定性的复合体系,在肉制品中使用具有很好的防腐保鲜效果。
本发明的目的之二是提供上述的一种肉用防腐剂的制备方法。
本发明的技术方案
一种肉用防腐剂,按质量百分比计算,其原料组成及含量如下所示:
表面活性剂 10%
助表面活性剂 7.5-10.5%
肉桂精油 2.5-3.5%
ε-聚赖氨酸盐酸盐 0.4%
余量为蒸馏水或去离子水;
所述的表面活性剂为失水山梨醇单油酸酯聚氧乙烯醚;
所述的助表面活性剂为乙醇;
所述的助表面活性剂与肉桂精油的质量比为3:1。
上述的一种肉用防腐剂的制备方法,具体包括以下步骤:
(1)、将肉桂精油加入到助表面活性剂中,搅拌至均匀,然后加入表面活性剂,继续搅拌至均匀,得到油相体系;
(2)、将ε-聚赖氨酸盐酸盐加入至蒸馏水或去离子水中,搅拌至均匀得到水相;
(3)、控制速率为1.0ml/min,将步骤(2)所得的水相滴加到步骤(1)所得的油相体系中,滴加完后超声处理30min,然后在25℃水浴中静置平衡24h,即得肉用防腐剂。
本发明的有益效果
本发明的一种肉用防腐剂,由于采用肉桂精油与ε-聚赖氨酸盐酸盐的协同作用,使得复配后的体系稳定性好,并且可明显抑制肉制品中微生物的生长,由此表明本发明的肉用防腐剂除具有很好的稳定性,同时具有很好的保鲜效果。
进一步,本发明的一种肉用防腐剂的制备方法,其工艺简单,操作方便,便于规模化生产。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步详细说明,但不以任何方式限制本发明。
实施例1
一种肉用防腐剂,按如下配方配制2kg,其原料组成及含量如下所示:
表面活性剂 200g
助表面活性剂 150g
肉桂精油 50g
ε-聚赖氨酸盐酸盐 8g
余量为蒸馏水;
所述的表面活性剂为失水山梨醇单油酸酯聚氧乙烯醚;
所述的助表面活性剂为乙醇;
所述的助表面活性剂与肉桂精油的质量比为3:1。
上述的一种肉用防腐剂的制备方法,具体包括以下步骤:
(1)、将肉桂精油加入到助表面活性剂中,搅拌至均匀,然后加入表面活性剂,继续搅拌至均匀,得到油相体系;
(2)、将ε-聚赖氨酸盐酸盐加入至蒸馏水中,搅拌至均匀得到水相;
(3)、控制速率为1.0ml/min,将步骤(2)所得的水相滴加到步骤(1)所得的油相体系中,滴加完后超声处理30min,然后在25℃水浴中静置平衡24h,即得肉用防腐剂。
上述所得的肉用防腐剂外观透明均匀稳定,常温放置两个月及用4000g离心机离心15分钟均未出现分层。其各项表征如下:pH为4.42,电导率为742μs,粘度30.84 mPa·s,粒径为38.4nm。
应用实施例1
取新鲜制作的酱牛肉,在实施例1所得的肉用防腐剂中浸泡1min,然后取出,在4℃条件下贮藏十天,并以未在实施例1所得的肉用防腐剂中浸泡的新鲜制作的酱牛肉做对照试验。
上述贮藏过程中,每隔两天测一次菌落总数。
用实施例1所得的肉用防腐剂浸泡后的新鲜的酱牛肉,第二天至第十天(每两天计数一次)的菌落总数依次为0、1.1×102CFU/g、3×102 CFU/g、3.4×103 CFU/g、1.7×104CFU/g。
而对照组,未使用实施例1所得的肉用防腐剂浸泡的新鲜的酱牛肉,第二天至第十天的菌落总数依次为1.6×101CFU/g、2.4 ×103CFU/g、5.8 ×104CFU/g、4.3×105CFU/g、4.9×106CFU/g。
对比上述结果表明,可以看出,未使用本发明的肉用防腐剂浸泡后的酱牛肉的细菌总数在第八天时已经超标,而使用了本发明的肉用防腐剂浸泡后的酱牛肉冷藏十天后的菌落数(1.7×104CFU/g)小于肉类腐败的理化指标(即细菌总数控制在105 CFU/g内)。
对照实施例1
一种肉用防腐剂,配制2kg,其原料组成及含量如下所示:
表面活性剂 200g
助表面活性剂 150g
肉桂精油 50g
余量为蒸馏水;
所述的表面活性剂为失水山梨醇单油酸酯聚氧乙烯醚;
所述的助表面活性剂为乙醇;
所述的助表面活性剂与肉桂精油的质量比为3:1。
上述的一种肉用防腐剂的制备方法,具体包括以下步骤:
(1)、将肉桂精油加入到助表面活性剂中,搅拌至均匀,然后加入表面活性剂,继续搅拌至均匀,得到油相体系;
(2)、以蒸馏水为水相,控制速率为1.0ml/min,将水相滴加到步骤(1)所得的油相体系中,滴加完后超声处理30min,然后在25℃水浴中静置平衡24h,即得肉用防腐剂。
上述所得的肉用防腐剂外观透明均匀稳定,常温放置两个月及用4000g离心机离心15分钟均未出现分层。其各项表征如下:pH为3.81,电导率为38.5μs,粘度25mPa·s,粒径为32nm;
应用对照实施例1
取新鲜的酱牛肉,在对照实施例1所得的肉用防腐剂中浸泡1min,然后取出,在4℃条件下贮藏十天,并以未在对照实施例1所得的肉用防腐剂中浸泡的新鲜的酱牛肉做对照试验。
上述贮藏过程中,每隔两天测一次菌落总数。
用对照实施例1所得的肉用防腐剂浸泡后的新鲜的酱牛肉,第二天至第十天(每两天计数一次)的菌落总数依次为0、2.1×102CFU/g、1.4×103CFU/g、3.3×104 CFU/g、1.1×105CFU/g。
而对照组,未使用对照实施例1所得的肉用防腐剂浸泡的新鲜的酱牛肉,第二天至第十天的菌落总数依次为1.6×101CFU/g、2.4×103CFU/g、5.8×104CFU/g、4.3×105CFU/g、4.9×106CFU/g。
通过上述结果进行对比,可以看出,未使用不含ε-聚赖氨酸盐酸盐的肉用防腐剂浸泡后的酱牛肉的细菌总数在第八天时已经超标严重,而使用了不含ε-聚赖氨酸盐酸盐的肉用防腐剂浸泡后的酱牛肉冷藏十天后的菌落数(1.1×105CFU/g)超过了肉类腐败的理化指标。
进一步,应用对照实施例1中,使用对照实施例1中所得的不含ε-聚赖氨酸盐酸盐的肉用防腐剂浸泡后的酱牛肉冷藏十天后的菌落数(1.1×105 CFU/g)刚好超过肉类腐败的理化指标,而应用实施例1中,使用实施例1所得的含有ε-聚赖氨酸盐酸盐的肉用防腐剂浸泡后的酱牛肉冷藏十天后的菌落数(1.7×104CFU/g)小于肉类腐败的理化指标,即不含ε-聚赖氨酸盐酸盐的肉用防腐剂的抑菌效果不如含有ε-聚赖氨酸盐酸盐的肉用防腐剂的抑菌效果好,由此表明ε-聚赖氨酸盐酸盐的存在可以增强体系的保鲜效果。
实施例2
一种肉用防腐剂,配制2kg,其原料组成及含量如下所示:
表面活性剂 200g
助表面活性剂 210g
肉桂精油 70g
ε-聚赖氨酸盐酸盐 8g
余量为蒸馏水;
所述的表面活性剂为失水山梨醇单油酸酯聚氧乙烯醚;
所述的助表面活性剂为乙醇;
所述的助表面活性剂与肉桂精油的质量比为3:1。
上述的一种肉用防腐剂的制备方法,具体包括以下步骤:
(1)、将肉桂精油加入到助表面活性剂中,搅拌至均匀,然后加入表面活性剂,继续搅拌至均匀,得到油相体系;
(2)、将ε-聚赖氨酸盐酸盐加入至蒸馏水中,搅拌至均匀得到水相;
(3)、控制速率为1.0ml/min,将步骤(2)所得的水相滴加到步骤(1)所得的油相体系中,滴加完后超声处理30min,然后在25℃水浴中静置平衡24h,即得肉用防腐剂。
上述所得的肉用防腐剂外观透明均匀稳定,常温放置两个月及用4000g离心机离心15分钟均未出现分层。其各项表征如下:pH为4.15,电导率为715μs,粘度42mPa·s,粒径为45nm。
应用实施例2
取新鲜的酱牛肉,在实施例2所得的肉用防腐剂中浸泡1min,然后取出,在4℃条件下贮藏十天,并以未在实施例2所得的肉用防腐剂中浸泡的新鲜的酱牛肉做对照试验。
上述贮藏过程中,每隔两天测一次菌落总数。
用实施例2所得的肉用防腐剂浸泡后的新鲜的酱牛肉,第二天至第十天(每两天计数一次)的菌落总数依次为0、1.0×102 CFU/g、2.8×102 CFU/g、2.7×103 CFU/g、1.3×104CFU/g。
而对照组未使用实施例2所得的肉用防腐剂浸泡的新鲜的酱牛肉,第二天至第十天的菌落总数依次为1.6×101CFU/g、2.4 ×103CFU/g、5.8 ×104CFU/g、4.3×105CFU/g、4.9×106CFU/g。
通过上述结果进行对比,可以看出,未使用本发明的肉用防腐剂浸泡后的酱牛肉的细菌总数在第八天时已经超标,而使用了本发明的肉用防腐剂浸泡后的酱牛肉冷藏十天后的菌落数(1.3×104CFU/g)小于肉类腐败的理化指标。即将细菌总数控制在105 CFU/g内。
对照实施例2
一种肉用防腐剂,配制2kg,其原料组成及含量如下所示:
表面活性剂 200g
助表面活性剂 210g
肉桂精油 70g
余量为蒸馏水;
所述的表面活性剂为失水山梨醇单油酸酯聚氧乙烯醚;
所述的助表面活性剂为乙醇;
所述的助表面活性剂与肉桂精油的质量比为3:1。
上述的一种肉用防腐剂的制备方法,具体包括以下步骤:
(1)、将肉桂精油加入到助表面活性剂中,搅拌至均匀,然后加入表面活性剂,继续搅拌至均匀,得到油相体系;
(2)、以蒸馏水为水相,控制速率为1.0ml/min,将水相滴加到步骤(1)所得的油相体系中,滴加完后超声处理30min,然后在25℃水浴中静置平衡24h,即得肉用防腐剂。
上述所得的肉用防腐剂外观透明均匀稳定,常温放置两个月及用4000g离心机离心15分钟均未出现分层。其各项表征如下:pH为4.02,电导率为34.5μs,粘度34mPa·s,粒径为38nm;
应用对照实施例2
取新鲜的酱牛肉,在对照实施例2所得的肉用防腐剂中浸泡1min,然后取出,在4℃条件下贮藏十天,并以未在对照实施例2所得的肉用防腐剂中浸泡的新鲜的酱牛肉做对照试验。
上述贮藏过程中,每隔两天测一次菌落总数。
用对照实施例2所得的肉用防腐剂浸泡后的新鲜的酱牛肉,第二天至第十天(每两天计数一次)的菌落总数依次为0、1.8×102 CFU/g、1.1×103 CFU/g、3.0×104 CFU/g、1.0×105 CFU/g。
而对照组,未使用对照实施例2所得的肉用防腐剂浸泡的新鲜的酱牛肉,第二天至第十天的菌落总数依次为1.6×101CFU/g、2.4×103CFU/g、5.8×104CFU/g、4.3×105CFU/g、4.9×106CFU/g。
通过上述结果进行对比,可以看出,未使用不含ε-聚赖氨酸盐酸盐的肉用防腐剂浸泡后的酱牛肉的细菌总数在第八天时已经超标严重,而使用了不含ε-聚赖氨酸盐酸盐的肉用防腐剂浸泡后的酱牛肉冷藏十天后的菌落数(1.0×105CFU/g)超过了肉类腐败的理化指标。
进一步,应用对照实施例2中使用不含ε-聚赖氨酸盐酸盐的肉用防腐剂浸泡后的酱牛肉冷藏十天后的菌落数(1.0×105 CFU/g)刚好超过肉类腐败的理化指标,而应用实施例2中使用实施例2所得的含有ε-聚赖氨酸盐酸盐的肉用防腐剂浸泡后的酱牛肉冷藏十天后的菌落数(1.3×104CFU/g)小于肉类腐败的理化指标,即不含ε-聚赖氨酸盐酸盐的肉用防腐剂的抑菌效果不如含有ε-聚赖氨酸盐酸盐的肉用防腐剂的抑菌效果好,由此表明ε-聚赖氨酸盐酸盐的存在可以增强体系的保鲜效果。
以上所述仅是本发明的实施方式的举例,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明技术原理的前提下,还可以做出若干改进和变型,这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。
Claims (4)
1.一种肉用防腐剂,其特征在于所述肉用防腐剂,按质量百分比计算,其原料组成及含量如下所示:
表面活性剂 10%
助表面活性剂 7.5-10.5%
肉桂精油 2.5-3.5%
ε-聚赖氨酸盐酸盐 0.4%
余量为蒸馏水或去离子水;
所述的表面活性剂为失水山梨醇单油酸酯聚氧乙烯醚;
所述的助表面活性剂为乙醇;
所述的助表面活性剂与肉桂精油的质量比为3:1。
2.如权利要求1所述的肉用防腐剂,其特征在于按质量百分比计算,其原料组成及含量如下所示:
表面活性剂 10%
助表面活性剂 7.5%
肉桂精油 2.5%
ε-聚赖氨酸盐酸盐 0.4%
余量为蒸馏水或去离子水。
3.如权利要求1所述的肉用防腐剂,其特征在于按质量百分比计算,其原料组成及含量如下所示:
表面活性剂 10%
助表面活性剂 10.5%
肉桂精油 3.5%
ε-聚赖氨酸盐酸盐 0.4%
余量为蒸馏水或去离子水。
4.如权利要求1-3任一所述的肉用防腐剂的制备方法,其特征在于具体包括以下步骤:
(1)、将肉桂精油加入到助表面活性剂中,搅拌至均匀,然后加入表面活性剂,继续搅拌至均匀,得到油相体系;
(2)、将ε-聚赖氨酸盐酸盐加入至蒸馏水或去离子水中,搅拌至均匀得到水相;
(3)、控制速率为1.0ml/min,将步骤(2)所得的水相滴加到步骤(1)所得的油相体系中,滴加完后超声处理30min,然后在25℃水浴中静置平衡24h,即得肉用防腐剂。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510170968.3A CN104798867B (zh) | 2015-04-13 | 2015-04-13 | 一种肉用防腐剂及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510170968.3A CN104798867B (zh) | 2015-04-13 | 2015-04-13 | 一种肉用防腐剂及其制备方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN104798867A CN104798867A (zh) | 2015-07-29 |
CN104798867B true CN104798867B (zh) | 2018-08-28 |
Family
ID=53684427
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201510170968.3A Expired - Fee Related CN104798867B (zh) | 2015-04-13 | 2015-04-13 | 一种肉用防腐剂及其制备方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN104798867B (zh) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106172701A (zh) * | 2016-07-08 | 2016-12-07 | 上海应用技术学院 | 一种含有肉桂精油的微乳液肉制品防腐剂及其制备方法 |
CN110432422A (zh) * | 2019-07-10 | 2019-11-12 | 中国农业科学院农产品加工研究所 | 一种可食性抑菌薄膜剂及其制作方法与应用 |
CN110521943A (zh) * | 2019-09-26 | 2019-12-03 | 安徽恒盛实业有限责任公司 | 一种天然防腐酱牛肉的加工方法 |
CN114176116A (zh) * | 2021-12-14 | 2022-03-15 | 南昌大学 | 一种卤鸭脖保鲜的方法 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101971877A (zh) * | 2010-05-25 | 2011-02-16 | 浙江大学 | 植物精油微乳液柑橘保鲜剂及其制备方法 |
CN102660053A (zh) * | 2012-05-16 | 2012-09-12 | 上海应用技术学院 | 一种卡拉胶-肉桂精油可食性薄膜及其制备方法 |
-
2015
- 2015-04-13 CN CN201510170968.3A patent/CN104798867B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101971877A (zh) * | 2010-05-25 | 2011-02-16 | 浙江大学 | 植物精油微乳液柑橘保鲜剂及其制备方法 |
CN102660053A (zh) * | 2012-05-16 | 2012-09-12 | 上海应用技术学院 | 一种卡拉胶-肉桂精油可食性薄膜及其制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
O/W型肉桂精油微乳液对灰葡萄孢的抑菌效果;何艳,等;《食品科学》;20131231;第34卷(第15期);第87-90页 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN104798867A (zh) | 2015-07-29 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Mastromatteo et al. | Packaging solutions to prolong the shelf life of Fiordilatte cheese: Bio-based nanocomposite coating and modified atmosphere packaging | |
CN105309593B (zh) | 一种复合精油与气调包装联合保鲜调理牛肉的方法 | |
Mastromatteo et al. | Combined use of modified atmosphere packaging and natural compounds for food preservation | |
CN104798867B (zh) | 一种肉用防腐剂及其制备方法 | |
CN106343004A (zh) | 一种肉用缓释型天然防腐保鲜微胶囊及其制备方法 | |
Zhao et al. | Developing food-grade coatings for dry-cured hams to protect against ham mite infestation | |
CN103798228B (zh) | 一种含有聚谷氨酸或其盐的花卉保鲜剂 | |
CN104621680B (zh) | 一种用于米饭的天然复合保鲜剂及保鲜方法 | |
BRPI0708585B1 (pt) | solubilizado livre de agente de estabilização, processo para a preparação e uso do mesmo | |
CN107582459B (zh) | 一种含有连翘的防腐剂及其制备方法 | |
KR101880214B1 (ko) | 사과산 및 구연산을 유효성분으로 함유하는 항균제 조성물 | |
CN103549622A (zh) | 一种协同抑制常见微生物的天然抑箘剂组合物 | |
CN102150922B (zh) | 一种用于杀灭生食食品有害菌的植物精油组合物 | |
Perdones et al. | Effect on tomato plant and fruit of the application of biopolymer–oregano essential oil coatings | |
CN104757097A (zh) | 一种蛋类保鲜膜的制备和应用 | |
CN106172701A (zh) | 一种含有肉桂精油的微乳液肉制品防腐剂及其制备方法 | |
Istrati et al. | Study of the combined effect of spices and marination on beef meat vacuum packaged | |
Alvarez et al. | Combined effect of bioactive compounds and storage temperature on sensory quality and safety of minimally processed celery, leek and butternut squash | |
CN104663868A (zh) | 一种缓释型乙醇保鲜剂及其制备方法与应用 | |
CN104012647A (zh) | 一种枇杷果实纳米包装复合植物精油处理保鲜方法 | |
CN102240060B (zh) | 食品保鲜剂及保鲜香肠 | |
CN101926386A (zh) | 一种水果保鲜剂 | |
Zhu et al. | Application of antimicrobial nanocomposite film packaging on the postharvest quality and specific spoilage organisms of mushrooms (Russula virescens) | |
Bambace et al. | Prebiotic edible coatings with biopreservatives: Quality and safety of fresh apple cubes | |
CN104207956A (zh) | 含纳他霉素的复配防腐剂及其用途 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
EXSB | Decision made by sipo to initiate substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20180828 Termination date: 20210413 |
|
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |