CN104797569A - 取代的1,5-苯并二氮杂*酮化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了式(I)化合物，其中R1为-CH2CH2CF3；R2为-CH2CH2CF3、-CH2(环丙基)或苯基；R3为H或-CH3；环A为苯基或吡啶基；且Rx、Ry、Ra、Rb、y和z如本文中所定义。本发明还公开了使用这些化合物抑制Notch受体的方法，及包含这些化合物的药物组合物。这些化合物可用于治疗、预防各种医疗领域中的疾病或病症(例如癌症)或减缓其进展。

Description

取代的1,5-苯并二氮杂*酮化合物
发明内容
一般而言，本发明涉及用作Notch抑制剂的苯并二氮杂酮化合物。本发明进一步涉及药物组合物，其包含可用于治疗与Notch途径相关的病状(如癌症及其他增殖性疾病)的本发明的至少一种化合物。
现有技术
Notch信号传导参与各种细胞过程，如细胞命运特化、分化、增殖、凋亡及血管生成。(Bray,Nature Reviews Molecular Cell Biology,7:678-689(2006)；Fortini,Developmental Cell,16:633-647(2009))。Notch蛋白为单程异源二聚体跨膜分子。Notch家族包括4种受体NOTCH 1至4，其在结合至来自DSL家族(δ-样1、3、4和Jagged 1及2)的配体后变为活化。
NOTCH的活化及成熟需要一系列加工步骤，包括由γ分泌酶(即含有早老素1或早老素2、纳卡斯特罗因(nicastrin)、APH1及PEN2的多蛋白蛋白复合物)介导的蛋白水解切割步骤。一旦切割NOTCH后，自膜释放NOTCH细胞内结构域(NICD)。所释放的NICD易位至核，在该核中其与CSL家族成员(RBPSUH、“无毛基因抑制因子(suppressor of hairless)”及LAG1)协作起转录活化子的作用。NOTCH靶基因包括HES家族成员，例如HES-1。HES-1起到基因的转录抑制子的作用，例如HERP1(亦称为HEY2)、HERP2(亦称为HEY1)及HATH1(亦称为ATOH1)。
Notch途径的异常活化有助于肿瘤生成。Notch信号传导的活化参与各种实体肿瘤(包括卵巢癌、胰腺癌以及乳癌)及血液肿瘤(例如白血病、淋巴瘤及多发性骨髓瘤)的发病机制。Notch抑制的作用及其治疗各种实体及血液肿瘤的效用阐述于Miele,L.等，Current Cancer Drug Targets,6:313-323(2006)；Bolos,V.等，Endocrine Reviews,28:339-363(2007)；Shih,I-M.等，CancerResearch,67:1879-1882(2007)；Yamaguchi,N.等，Cancer Research,68:1881-1888(2008)；Miele,L.,Expert Review Anticancer Therapy,8:1197-1201(2008)；Purow,B.,Current Pharmaceutical Biotechnology,10:154-160(2009)；Nefedova,Y.等，Drug Resistance Updates,11:210-218(2008)；Dufraine,J.等，Oncogene,27:5132-5137(2008)；及Jun,H.T.等，Drug Development Research,69:319-328(2008)中。
仍需要可用作Notch抑制剂且具有足够代谢稳定性以提供有效的药物暴露水平的化合物。此外，仍需要用作Notch抑制剂的可向患者经口或经静脉内给药的化合物。
美国专利第7,053,084B1号公开用于治疗神经病症如阿兹海默氏病(Alzheimer′s Disease)的琥珀酰基氨基苯并二氮杂化合物。该参考文献公开这些琥珀酰基氨基苯并二氮杂化合物抑制γ分泌酶活性及与类淀粉蛋白的神经沉积物形成相关的类淀粉前体蛋白加工。
申请人已发现具有作为Notch抑制剂的活性且具有足够代谢稳定性以在静脉内或经口给药时提供有效的药物暴露水平的强效化合物。提供这些化合物用作具有对其可成药性甚为重要的期望稳定性、生物可用度、治疗指数及毒性值的药物。
发明内容
本发明藉由提供用作Notch信号传导途径的选择性抑制剂的1,5-苯并二氮杂酮化合物来满足前述需求。
本发明亦提供包含药学上可接受的载体；及至少一种式(I)化合物的药物组合物。
本发明亦提供治疗与Notch受体的活性相关的疾病或病症的方法，该方法包含向哺乳动物患者给药至少一种式(I)化合物。
本发明亦提供用于制造式(I)化合物的方法及中间体。
本发明亦提供用于疗法的式(I)化合物。
本发明亦提供式(I)化合物用于制造治疗癌症的药物的用途。
式(I)化合物及包含这些化合物的组合物为Notch抑制剂，可用于治疗、预防或治愈各种Notch受体相关病状。包含这些化合物的药物组合物可用于治疗、预防多种医疗领域中的疾病或病症(如癌症)或减缓其进展。
随着本公开内容的继续将以展开形式阐述本发明的这些及其他特征。
发明详述
本发明的第一方面提供至少一种式(I)化合物或其至少一种前药：
其中：
R1为-CH2CH2CF3；
R2为-CH2CH2CF3、-CH2(环丙基)或苯基；
R3为H或-CH3；
环A为苯基或吡啶基；
各Ra独立地为F、Cl、-CN、-CHF2或环丙基；
各Rb独立地为F、Cl、-CN、-CH3、-CHF2、-CF3或环丙基；
y为零、1或2；和
z为零、1或2。
一个实施方案提供至少一种式(I)化合物，其中R3为H且R1、R2、Ra、Rb、y和z在第一方面中定义。在该实施方案中包括其中R2为-CH2CH2CF3的化合物。在该实施方案中还包括其中R2为-CH2CH2CF3且环A为苯基的化合物。
一个实施方案提供至少一种式(I)化合物，其中R2为-CH2CH2CF3且R1、R3、Ra、Rb、y和z在第一方面中定义。在该实施方案中包括其中R3为H、环A为苯基且y为零或1的化合物。在该实施方案中还包括其中R3为H、环A为吡啶基且y为零或1的化合物。
一个实施方案提供至少一种式(I)化合物，其中R2为-CH2(环丙基)且R1、R3、Ra、Rb、y和z在第一方面中定义。在该实施方案中包括其中R3为H、环A为苯基且y为零或1的化合物。在该实施方案中还包括其中R3为H、环A为吡啶基且y为零或1的化合物。
一个实施方案提供至少一种式(I)化合物，其中R2为苯基且R1、R3、Ra、Rb、y和z在第一方面中定义。在该实施方案中包括其中R3为H、环A为苯基且y为零或1的化合物。在该实施方案中还包括其中R3为H、环A为吡啶基且y为零或1的化合物。
一个实施方案提供至少一种具有以下结构的式(I)化合物：
其中环A为苯基且R2、R3、Ra、Rb、y和z在第一方面中定义。
一个实施方案提供至少一种式(I)化合物，其中R3为H；且R1、R2、Ra、Rb、y和z在第一方面中定义。在该实施方案中包括其中R3为氘(D)或氚(T)的化合物。
一个实施方案提供式(I)化合物，其中R3为-CH3；且R1、R2、Ra、Rb、y和z在第一方面中定义。R3包括其中一个或多个氢原子被氘(D)和/或氚(T)同位素置换的甲基。在该实施方案的一个实例中，R3为-CD3。在该实施方案中还包括其中R2为-CH2CH2CF3的化合物。
一个实施方案提供选自以下的式(I)化合物：(2R,3S)-N-((3S)-6-氯-1-(3-环丙基苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(1)；(2R,3R)-N-((3S)-1-(3-氰基苯基)-6-(二氟甲基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-苯基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(2)；(2R,3S)-N-((3S)-1-(3-氯苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(3)；(2R,3S)-N-((3S)-1-(4-氯苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(4)；(2R,3S)-N-((3S)-1-(3-环丙基苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(5)；(2R,3S)-N-((3S)-1-(4-氟苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(6)；(2R,3S)-N-((3S)-1-(3-氯苯基)-6-环丙基-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(7)；(2R,3R)-N-((3S)-6-氰基-4-氧代-1-(3-(三氟甲基)苯基)-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-苯基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(8)；(2R,3R)-N-((3S)-1-(3-氯-5-氰基苯基)-6-(二氟甲基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-苯基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(9)；(2R,3S)-N-((3S)-1-(3-氰基苯基)-6-(二氟甲基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(10)；(2R,3R)-N-((3S)-1-(3-氰基-5-甲基苯基)-6-(二氟甲基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-苯基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(11)；(2R,3S)-N-((3S)-6-(二氟甲基)-1-(3-(二氟甲基)苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(12)；(2R,3R)-N-(1-(3-氰基-5-氟苯基)-6-(二氟甲基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-苯基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(13)；(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-6-氟-4-氧代-1-(3-(三氟甲基)苯基)-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(14)；(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-1-(3-环丙基苯基)-6-氟-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(15)；(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-1-(3,4-二氯苯基)-6-氟-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(16)；(2R,3S)-N-((3S)-1-(3-氰基苯基)-6-氟-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(17)；(2R,3R)-N-((3S)-1-(3-氰基苯基)-6-氟-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-苯基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(18)；(2R,3S)-N-((3S)-6-氯-1-(4-氯苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(19)；(2R,3S)-N-((3S)-6-氯-4-氧代-1-(3-(三氟甲基)苯基)-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(20)；(2R,3S)-N-((3S)-6-氯-4-氧代-1-(3-(三氟甲基)苯基)-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(21)；(2R,3R)-N-((3S)-6-氯-4-氧代-1-(3-(三氟甲基)苯基)-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-苯基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(22)；(2R,3S)-N-((3S)-6-氯-1-(3-氰基苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(23)；(2R,3R)-N-((3S)-6-氯-1-(3-氰基苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-苯基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(24)；(2R,3S)-N-((3S)-6-氯-1-(3-氰基苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(25)；(2R,3S)-N-((3S)-6-氯-1-(2-氰基苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(26)；(2R,3R)-N-((3S)-6-氯-1-(3-氰基-5-氟苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-苯基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(27)；(2R,3S)-N-((3S)-6-氯-1-(3-氰基-5-氟苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(28)；(2R,3S)-N-((3S)-6-氯-1-(3-环丙基苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(29)；(2R,3R)-N-((3S)-6-氯-1-(3,4-二氯苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-苯基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(30)；(2R,3S)-N-((3S)-6-氯-1-(3-氯苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(31)；(2R,3S)-N-((3S)-6-氯-1-(3,4-二氯苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(32)；(2R,3S)-N-((3S)-6-氯-4-氧代-1-(2-吡啶基)-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(33)；(2R,3R)-N-((3S)-6-氯-4-氧代-1-(6-(三氟甲基)-2-吡啶基)-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-苯基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(34)；(2R,3S)-N-((3S)-6-氯-4-氧代-1-(6-(三氟甲基)-2-吡啶基)-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(35)；(2R,3R)-N-((3S)-6-氯-4-氧代-1-(4-(三氟甲基)-2-吡啶基)-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-苯基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(36)；(2R,3S)-N-((3S)-7-氟-4-氧代-1-苯基-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(37)；和(2R,3S)-N-((3S)-7-氟-4-氧代-1-(3-(三氟甲基)苯基)-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(38)。
一个实施方案提供至少一种式(I)化合物，其具有至少45分钟的代谢半衰期，如于本文中所阐述的人类代谢稳定性半衰期分析中所测量。
一个实施方案提供至少一种式(I)化合物，其具有至少60分钟的代谢半衰期，如于本文中所阐述的人类代谢稳定性半衰期分析中所测量。
本发明可以其他具体形式体现，此不背离其精神或本质属性。本发明涵盖本文所提及的本发明方面和/或实施方案的所有组合。应理解，本发明的任一及所有实施方案可结合任一或多个其他实施方案来阐述其他实施方案。亦应理解，这些实施方案的每一个别元素意欲与来自任一实施方案的任一及所有其他元素组合来阐述其他实施方案。
定义
在阅读以下详细阐述时，本领域技术人员可更容易地理解本发明的特征及优势。应了解，本发明的出于清晰的原因于上下文中在单独实施方案的情形下阐述的某些特征亦可组合以形成单一实施方案。相反地，本发明的出于简洁的原因在单一实施方案的情形下所阐述的各种特征亦可组合以形成其子组合。本文中识别为实例性或优选的实施方案意欲为阐释性的，且并非限制性的。
除非本文中另有明确说明，否则所提及的单数形式亦可包括复数。例如，“一(a及an)”可为指一个、一或多个。
除非另有指示，否则假设具有未满足原子价的任何杂原子具有足以满足这些原子价的氢原子。
本文中所阐释的定义优先于以引用的方式并入本文中的任一专利、专利申请案和/或专利申请公开案中所阐释的定义。
下文列示用于描述本发明的各术语的定义。当在本说明书通篇中个别地或作为较大基团的一部分使用这些术语(除非在具体情况下另外限制这些术语)时，这些定义适用于这些术语。
在本说明书通篇中，本领域技术人员可选择基团及其取代基以提供稳定部分及化合物。
本文所用的术语“卤基”及“卤素”为指F、Cl、Br或I。
本文所用的术语“烷基”为指含有(例如)1个至12个碳原子、1个至6个碳原子及1个至4个碳原子的具支链及直链饱和脂肪族烃基团。烷基的实例包括(但不限于)甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(例如正丙基及异丙基)、丁基(例如正丁基、异丁基、仲丁基及叔丁基)及戊基(例如正戊基、异戊基、新戊基)、正己基、2-甲基戊基、2-乙基丁基、3-甲基戊基及4-甲基戊基。当数字在符号“C”后面以下标形式出现时，该下标更具体地定义特定基团可含有的碳原子的数量。例如、“C1-6烷基”表示具有1个至6个碳原子的直链及具支链烷基。
本文所用的短语“药学上可接受”为指那些化合物、材料、组合物和/或剂型在合理医学判断范围内适于与人类及动物组织接触使用且无过度毒性、刺激性、过敏反应或其他问题或并发症，与合理益处/风险比率相应。
式(I)化合物可以非晶形固体或结晶固体的形式提供。可采用冻干来提供呈固体形式的式(I)化合物。
应进一步了解，式(I)化合物的溶剂合物(例如水合物)亦属于本发明的范围内。术语“溶剂合物”意指式(I)化合物与一或多种溶剂分子(有机或无机)的物理缔合。此物理缔合包括氢键合。在某些情况下，溶剂合物将能够分离，例如当将一或多个溶剂分子并入结晶固体的晶格中时。“溶剂合物”涵盖溶液相及可分离溶剂合物二者。实例性溶剂合物包括水合物、醇合物、甲醇合物、异丙醇合物、乙腈溶剂合物及乙酸乙酯溶剂合物。溶剂化方法为领域内已知。
任一可在活体内转化以提供生物活性剂(即式I化合物)的化合物为属于本发明的范围及精神内的前药。其中R3为Rx或R4为Ry的式(I)化合物可用作其中R3为H或-CH3且R4为H的式(I)化合物的前药。
各种形式的前药为领域内所熟知且为阐述于以下文献中：
a)Wermuth,C.G.等，The Practice of Medicinal Chemistry，第31章，Academic Press(1996)；
b)Bundgaard,H.编，Design of Prodrugs,Elsevier(1985)；
c)Bundgaard,H.，第5章，“Design and Application of Prodrugs”,Krogsgaard-Larsen,P.等编，A Textbook of Drug Design and Developmen，第113页第191页，Harwood Academic Publishers(1991)；及
d)Testa,B.等，Hydrolysis in Drug and Prodrug Metabolism,Wiley-VCH(2003)。
另外，在制备式(I)化合物后可对其实施分离及纯化，以获得含有等于或大于99重量％的量的式(I)化合物(“基本上纯”)的组合物，然后如本文中所阐述对其进行使用或配制。这些“基本上纯的”式(I)化合物亦作为本发明的一部分涵盖于本文中。
“稳定化合物”及“稳定结构”意欲指示足够稳固以经受自反应混合物分离至有用纯度并配制成有效治疗剂的化合物。本发明意欲体现稳定化合物。
“治疗有效量”意欲包括仅本发明化合物单独的量、或所要求保护的化合物的组合的量，或本发明化合物与可有效用作NOTCH受体的抑制剂或可有效治疗或预防增殖性疾病(如癌症)的其他活性成份的组合的量。
本文所用“治疗(treating或treatment)”涵盖哺乳动物(特定而言人类)中的疾病状态的治疗，且包括：(a)在哺乳动物中、特定而言在该哺乳动物易患该疾病状态但尚未诊断为患有该疾病状态时预防该疾病状态发生；(b)抑制该疾病状态，即遏制其发展；和/或(c)缓解该疾病状态，即使该疾病状态消退。
本发明化合物意欲包括在本发明化合物中出现的原子的所有同位素。同位素包括那些具有相同原子序数但具有不同质量数的原子。根据一般实例且不加以限制，氢的同位素包括氘(D)及氚(T)。碳的同位素包括13C及14C。本发明的经同位素标记的化合物通常可藉由本领域技术人员已知的常规技术来制备，或可藉由与本文中所阐述方法类似的方法使用适当的经同位素标记试剂代替原本采用的未经标记试剂来制备。
式(I)化合物可藉由适于预治疗的病状的任何方式给药，此可取决于对位点特异性治疗的需求或预递送的式(I)化合物的量。
本发明中亦涵盖一类药物组合物，其包含式(I)化合物；及一或多种无毒、药学上可接受的载体和/或稀释剂和/或佐剂(本文中统称为“载体”材料)及(若期望)其他活性成份。式(I)化合物可藉由任何适宜途径给药，优选以适于此一途径的药物组合物形式且以对期望治疗有效的剂量给药。本发明的化合物及组合物可(例如)经口、经粘膜或胃肠外(parentally)(包括经血管内、经静脉内、经腹膜内、经皮下、经肌内及经胸骨内)以含常规药学上可接受的载体、佐剂及媒剂的剂量单位配制物给药。例如，该药物载体可含有甘露醇或乳糖与微晶纤维素的混合物。该混合物可含有其他组分，例如润滑剂(例如硬脂酸镁)及崩解剂(例如交联聚维酮(crospovidone))。可将该载体混合物填充至明胶胶囊中或压制为片剂。该药物组合物可例如口服剂型或输注形式给药。
对于经口给药，药物组合物可呈(例如)片剂、胶囊、液体胶囊、悬浮液或液体形式。药物组合物优选制成含有特定量的活性成份的剂量单位形式。例如，药物组合物可以包含在约1mg至2000mg、优选约1mg至500mg且更佳约5mg至150mg的范围内的量的活性成份的片剂或胶囊形式提供。适于人类或其他哺乳动物的日剂量可视患者的病状及其他因素而宽泛地变化，但可使用常规方法确定。
本文中所涵盖的任一药物组合物可(例如)经由任何可接受且适宜的经口制剂经口递送。实例性经口制剂包括(但不限于，例如)片剂(tablets)、含片(troches)、锭剂(lozenges)、水性及油性悬浮液、可分散粉末或颗粒、乳液、硬胶囊及软胶囊、糖浆及酏剂。意欲用于经口给药的药物组合物可根据领域内已知用于制造意欲用于经口给药的药物组合物的任何方法制备。为提供医药上可口的制剂，本发明的药物组合物可含有至少一种选自甜味剂、矫味剂、着色剂、缓和剂(demulcents)、抗氧化剂及防腐剂的作用剂。
片剂可藉由(例如)将至少一种式(I)化合物与至少一种适于制造片剂的无毒且药学上可接受的赋形剂混合来制备。实例性赋形剂包括(但不限于，例如)惰性稀释剂，例如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙及磷酸钠；造粒剂及崩解剂，例如微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、玉米淀粉及海藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶、聚乙烯吡咯烷酮及阿拉伯胶(acacia)；及润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸及滑石粉。另外，片剂可未经涂覆，或藉由已知技术涂覆，以遮蔽味道令人不快的药物的坏味道，或延迟活性成份在胃肠道中的崩解及吸收，从而使活性成份的效应持续较长时期。实例性水溶性遮味材料包括(但不限于)羟丙基-甲基纤维素及羟丙基-纤维素。实例性延时材料包括(但不限于)乙基纤维素及乙酸丁酸纤维素。
硬明胶胶囊可藉由(例如)将至少一种式(I)化合物与至少一种惰性固体稀释剂(例如碳酸钙；磷酸钙；及高岭土(kaolin))混合来制备。
软明胶胶囊可藉由(例如)将至少一种式(I)化合物与至少一种水溶性载体(例如聚乙二醇)；及至少一种油性介质(例如花生油、液体石蜡及橄榄油)混合来制备。
水性悬浮液可藉由(例如)将至少一种式(I)化合物与至少一种适于制造水性悬浮液的赋形剂混合来制备。适于制造水性悬浮液的实例性赋形剂包括(但不限于，例如)悬浮剂，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基-纤维素、海藻酸钠、海藻酸、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶及阿拉伯胶；分散或润湿剂，例如天然存在的磷脂、例如卵磷脂；环氧烷与脂肪酸的缩合产物，例如聚氧乙烯硬脂酸酯；环氧乙烷与长链脂肪族醇的缩合产物，例如十七烷乙烯-氧基鲸蜡醇；环氧乙烷与衍生自脂肪酸及己糖醇的偏酯的缩合产物，例如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯；及环氧乙烷与衍生自脂肪酸及己糖醇脱水物的偏酯的缩合产物，例如聚乙烯脱水山梨糖单油酸酯。水性悬浮液亦可含有至少一种防腐剂，例如对羟基苯甲酸乙酯及对羟基苯甲酸正丙酯；至少一种着色剂；至少一种矫味剂；和/或至少一种甜味剂，包括(但不限于，例如)蔗糖、糖精及阿司巴甜(aspartame)。
油性悬浮液可藉由(例如)将至少一种式(I)化合物悬浮于植物油(例如花生油；橄榄油；芝麻油；及椰子油)中；或矿物油(例如液体石蜡)中来制备。油性悬浮液亦可含有至少一种增稠剂，例如蜂蜡；硬石蜡；及鲸蜡醇。为提供可口油性悬浮液，可将至少一种上文已述甜味剂和/或至少一种矫味剂添加至油性悬浮液中。油性悬浮液可进一步含有至少一种防腐剂，包括(但不限于，例如)抗氧化剂例如丁基化羟基苯甲醚及α-生育酚。
可分散粉末及颗粒可藉由(例如)将至少一种式(I)化合物与至少一种分散剂和/或润湿剂；至少一种悬浮剂；和/或至少一种防腐剂混合来制备。适宜分散剂、润湿剂及悬浮剂为如上文已阐述。实例性防腐剂包括(但不限于，例如)抗氧化剂，例如抗坏血酸。另外，可分散粉末及颗粒亦可含有至少一种赋形剂，包括(但不限于，例如)甜味剂；矫味剂；及着色剂。
至少一种式(I)化合物的乳液可(例如)制备成水包油型乳液。包含式(I)化合物的乳液的油相可自已知成份以已知方式构成。油相可由(但不限于，例如)植物油(例如橄榄油及花生油)；矿物油(例如液体石蜡)；及其混合物提供。尽管该相可仅包含乳化剂，但其可包含至少一种乳化剂与脂肪或油或者与脂肪及油二者的混合物。适宜乳化剂包括(但不限于，例如)天然存在的磷脂，例如大豆卵磷脂；衍生自脂肪酸及己糖醇脱水物的酯或偏酯，例如脱水山梨醇单油酸酯；及偏酯与环氧乙烷的缩合产物，例如聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯。优选地，包括亲水性乳化剂以及用作稳定剂的亲脂性乳化剂。亦优选包括油与脂肪二者。乳化剂在具有或不具有稳定剂的情况下一起构成所谓的乳化蜡，且该蜡与油及脂肪一起构成所谓的乳化软膏基质，该乳化软膏基质形成乳膏配制物的油性分散相。乳液亦可含有甜味剂、矫味剂、防腐剂和/或抗氧化剂。适用于本发明配制物的乳化剂及乳液稳定剂包括吐温60(Tween60)、斯盘80(Span 80)、鲸蜡硬脂醇、肉豆蔻醇、甘油单硬脂酸酯、月桂基硫酸钠、甘油二硬脂酸酯，单独或与蜡或领域内熟知的其他材料一起。
式(I)化合物亦可(例如)经静脉内、经皮下和/或经肌内经由任何药学上可接受且适宜的可注射形式递送。实例性可注射形式包括(但不限于，例如)包含可接受的媒剂及溶剂(例如水、林格式溶液(Ringer′s solution)及等渗氯化钠溶液)的灭菌水溶液；灭菌水包油型微乳液；及水性或油性悬浮液。
用于胃肠外给药的配制物可呈水性或非水性等渗灭菌注射溶液或悬浮液的形式。这些溶液及悬浮液可自灭菌粉末或颗粒使用一或多种所提及用于经口给药配制物中的载体或稀释剂或藉由使用其他适宜分散剂或润湿剂及悬浮剂来制备。这些化合物可溶于水、聚乙二醇、丙二醇、乙醇、玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、苯甲醇、氯化钠、黄蓍胶和/或各种缓冲剂中。佐剂及给药模式在医药技术中为众所周知。活性成份亦可藉由以与适宜载体(包括盐水、右旋糖或水)或与环糊精(即，)的组合物形式注射、共溶剂溶解(即，丙二醇)或胶束(micellar)溶解(即，吐温80)来给药。
灭菌可注射制剂亦可为存于无毒胃肠外可接受的稀释剂或溶剂中的灭菌可注射溶液或悬浮液，例如呈存于1,3-丁二醇中的溶液形式。可采用的可接受媒剂及溶剂包括水、林格氏溶液及等渗氯化钠溶液。另外，通常采用灭菌不挥发性油(fixed oils)作为溶剂或悬浮介质。出于此目的，可采用任一温和不挥发性油，包括合成单甘油酯或二甘油酯。另外，脂肪酸如油酸可用于制备可注射剂。
灭菌可注射的水包油型微乳液可藉由(例如)以下方式来制备：1)将至少一种式(I)化合物溶解于油相(例如大豆油与卵磷脂的混合物)中；2)将含式(I)油相与水及甘油混合物组合；及3)加工该组合以形成微乳液。
灭菌水性或油性悬浮液可依照领域内已知方法来制备。例如，灭菌水溶液或悬浮液可利用无毒的胃肠外可接受的稀释剂或溶剂(例如1,3-丁二醇)来制备；且灭菌油性悬浮液可利用灭菌无毒的可接受的溶剂或悬浮介质(例如灭菌不挥发性油，例如合成单甘油酯或二甘油酯；及脂肪酸(例如油酸))来制备。
可用于本发明药物组合物中的药学上可接受的载体、佐剂及媒剂包括(但不限于)离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、自乳化药物递送系统(SEDDS，如d-α-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯)、药物剂型中所用的表面活性剂(如吐温、聚乙氧基化蓖麻油如表面活性剂(BASF)或其他类似聚合递送基质)、血清蛋白(如人血清白蛋白)、缓冲物质(如磷酸盐)、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质(如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶质二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素基物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段共聚物、聚乙二醇及羊毛脂。环糊精(如α-、β-及γ-环糊精)或经化学修饰的衍生物(如羟基烷基环糊精包括2-及3-羟丙基-环糊精或其他溶解衍生物)亦可有利地用于增强本文中所述式的化合物的递送。
本发明的药物上活性化合物可依照常规药学方法加工以产生向患者(包括人及其他哺乳动物)给药的药剂。药物组合物可经受常规医药操作(如灭菌)，和/或可含有常规佐剂，如防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、缓冲液等。片剂及丸剂可另外制备有肠溶包衣。这些组合物亦可包含佐剂，如润湿剂、甜味剂、矫味剂及芳香剂。
所给药化合物的量及利用本发明的化合物和/或组合物治疗疾病状况的剂量方案取决于各种因素，包括受试者的年龄、重量、性别及医学状况、疾病类型、疾病的严重性、给药的途径及频率及所采用的特定化合物。因此，该剂量方案可在宽范围内改变，但可使用标准方法常规地确定。约0.001mg/kg体重至100mg/kg体重、优选约0.005-约50mg/kg体重且最优选约0.01mg/kg体重-10mg/kg体重的日剂量可为适当的。日剂量可每天以1次至4次剂量来给药。
出于治疗目的，本发明的活性化合物通常与一或多种适于所指示给药途径的佐剂组合。若经口给药，则化合物可与乳糖、蔗糖、淀粉粉末、烷酸的纤维素酯、纤维素烷基酯、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸镁、氧化镁、磷酸及硫酸的钠盐及钙盐、明胶、阿拉伯胶、海藻酸钠、聚乙烯基吡咯烷酮和/或聚乙烯醇混合，且然后压锭或囊封以方便给药。这些胶囊或片剂可含有受控释放配制物，其可以活性化合物存于羟丙基甲基纤维素中的分散液提供。
本发明的药物组合物包含式(I)化合物或其前药和任选的选自任何药学上可接受的载体、佐剂及媒剂的其他药剂。本发明的替代组合物包含本文中所述的式(I)化合物或其前药及药学上可接受的载体、佐剂或媒剂。
效用
式(I)化合物可用于治疗癌症，例如依赖于Notch活化的癌症。Notch活化参与各种实体肿瘤(包括卵巢癌、胰腺癌以及乳癌)及血液肿瘤(例如白血病、淋巴瘤及多发性骨髓瘤)的发病机制。
在一实施方案中，提供用于治疗癌症的方法，其包含向有需要的哺乳动物给药式(I)化合物。此实施方案的方法可用于治疗各种癌症，包括(但不限于)膀胱癌、乳癌、结肠直肠癌、胃癌、头颈癌、肾癌、肝癌、肺癌包括非小细胞肺癌(NSCLC)、卵巢癌、胰腺癌、胆囊癌、前列腺癌、甲状腺癌、骨肉瘤、横纹肌肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤(MFH)、纤维肉瘤、神经胶质母细胞瘤/星形细胞瘤、神经胚细胞瘤、黑色素瘤、T细胞急性淋巴胚细胞白血病(T-ALL)及间皮瘤。例如，此实施方案的方法为用于治疗乳癌、结肠癌或胰腺癌。优选地，哺乳动物为人类。例如，在本实施方案的方法中可给药用于治疗癌症的治疗有效量。
本实施方案中的给药途径包括胃肠外给药和经口给药。
在一实施方案中，提供用于治疗癌症的方法，其包含向有需要的哺乳动物给药至少一种式(I)化合物，其中该癌症为结肠直肠癌。优选地，哺乳动物为人类。例如，在本实施方案的方法中可给药用于治疗癌症的治疗有效量。本实施方案中的给药途径包括胃肠外给药和经口给药。
在一实施方案中，提供用于治疗癌症的方法，其包含向有需要的哺乳动物给药至少一种式(I)化合物，其中该癌症为三阴性乳腺癌。优选地，哺乳动物为人类。例如，在本实施方案的方法中可给药用于治疗癌症的治疗有效量。本实施方案中的给药途径包括胃肠外给药和经口给药。
在一实施方案中，提供用于治疗癌症的方法，其包含向有需要的哺乳动物给药至少一种式(I)化合物，其中该癌症为非小细胞肺癌。优选地，哺乳动物为人类。例如，在本实施方案的方法中可给药用于治疗癌症的治疗有效量。本实施方案中的给药途径包括胃肠外给药和经口给药。
在一实施方案中，提供用于治疗癌症的方法，其包含向有需要的哺乳动物给药至少一种式(I)化合物，其中该癌症为胰腺癌。优选地，哺乳动物为人类。例如，在本实施方案的方法中可给药用于治疗癌症的治疗有效量。本实施方案中的给药途径包括胃肠外给药和经口给药。
在一实施方案中，提供用于治疗癌症的方法，其包含向有需要的哺乳动物给药至少一种式(I)化合物，其中该癌症为卵巢癌。优选地，哺乳动物为人类。例如，在本实施方案的方法中可给药用于治疗癌症的治疗有效量。本实施方案中的给药途径包括胃肠外给药和经口给药。
在一实施方案中，提供用于治疗癌症的方法，其包含向有需要的哺乳动物给药至少一种式(I)化合物，其中该癌症为黑素瘤。优选地，哺乳动物为人类。例如，在本实施方案的方法中可给药用于治疗癌症的治疗有效量。本实施方案中的给药途径包括胃肠外给药和经口给药。
在一实施方案中，提供至少一种式(I)化合物用于制造用以治疗癌症的药品的用途。优选地，在本发明实施方案中，经受治疗的癌症包括膀胱癌、乳癌、结肠直肠癌、胃癌、头颈癌、肾癌、肝癌、肺癌包括非小细胞肺癌(NSCLC)、卵巢癌、胰腺癌、胆囊癌、前列腺癌、甲状腺癌、骨肉瘤、横纹肌肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤(MFH)、纤维肉瘤、神经胶质母细胞瘤/星形细胞瘤、神经胚细胞瘤、黑色素瘤、T细胞急性淋巴胚细胞白血病(T-ALL)及间皮瘤中的一种或多种。本发明实施方案的适宜药品包括用于胃肠外给药的药品(例如溶液及悬浮液)及用于经口给药的药品(例如片剂、胶囊、溶液及悬浮液)。
一实施方案提供至少一种用于治疗癌症的疗法中的式(I)化合物。在本发明实施方案中，经受治疗的癌症包括膀胱癌、乳癌、结肠直肠癌、胃癌、头颈癌、肾癌、肝癌、肺癌包括非小细胞肺癌(NSCLC)、卵巢癌、胰腺癌、胆囊癌、前列腺癌、甲状腺癌、骨肉瘤、横纹肌肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤(MFH)、纤维肉瘤、神经胶质母细胞瘤/星形细胞瘤、神经胚细胞瘤、黑色素瘤、T细胞急性淋巴胚细胞白血病(T-ALL)及间皮瘤中的一种或多种。
在一实施方案中，提供治疗哺乳动物的癌症的方法，其中该癌症依赖于Notch活化，该方法包含向患者给药至少一种式(I)化合物。此实施方案的方法可用于治疗各种癌症，包括(但不限于)膀胱癌、乳癌、结肠直肠癌、胃癌、头颈癌、肾癌、肝癌、肺癌包括非小细胞肺癌(NSCLC)、卵巢癌、胰腺癌、胆囊癌、前列腺癌、甲状腺癌、骨肉瘤、横纹肌肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤(MFH)、纤维肉瘤、神经胶质母细胞瘤/星形细胞瘤、神经胚细胞瘤、黑色素瘤、T细胞急性淋巴胚细胞白血病(T-ALL)及间皮瘤。优选地，此实施方案的方法为用于治疗乳癌、结肠癌或胰腺癌。优选地，哺乳动物为人类。例如，在本发明实施方案的方法中可给药用于治疗癌症的治疗有效量。适宜给药途径包括胃肠外给药及经口给药。
在治疗癌症中，化学治疗剂和/或其他治疗(例如辐射疗法)的组合经常为有利的。相较于主要治疗剂，第二(或第三)药剂可具有相同或不同作用机制。例如，可采用药物组合，其中所给药的两种或更多种药物以不同方式或在细胞周期的不同阶段作用，和/或其中该两种或更多种药物具有不重迭毒性或副效应，和/或其中所组合的药物在治疗患者所表现的特定疾病状态中各具有已证明的效力。
在一实施方案中，提供治疗癌症的方法，其包含向有需要的哺乳动物给药至少一种式(I)化合物；及给药一或多种其他抗癌剂。
短语“其他抗癌剂”为指选自以下中的一种或多种的药物：烷基化剂(包括氮芥、烷基磺酸盐、亚硝基脲、乙烯亚胺衍生物及三氮烯)；抗血管生成剂(包括基质金属蛋白酶抑制剂)；抗代谢物质(包括腺苷去胺酶抑制剂、叶酸拮抗剂、嘌呤类似物及嘧啶类似物)；抗生素或抗体(包括单株抗体、CTLA-4抗体、蒽环抗生素)；芳香酶抑制剂；细胞周期反应修饰剂；酶；法呢基-蛋白转移酶抑制剂(farnesyl-protein transferase inhibitor)；激素剂及抗激素剂及类固醇(包括合成类似物、糖皮质激素、雌激素/抗雌激素[例如SERM]、雄激素/抗雄激素、黄体素、黄体酮受体激动剂及促黄体激素释放[LHRH]激动剂及拮抗剂)；胰岛素样生长因子(IGF)/胰岛素样生长因子受体(IGFR)系统调节剂(包括IGFR1抑制剂)；整合素信号传导抑制剂；激酶抑制剂(包括多激酶抑制剂和/或Src激酶或Src/abl的抑制剂、周期素依赖性激酶[CDK]抑制剂、panHer、Her-1及Her-2抗体、VEGF抑制剂(包括抗VEGF抗体)、EGFR抑制剂、有丝分裂促进剂活化蛋白[MAP]抑制剂、MET抑制剂、MEK抑制剂、极光(Aurora)激酶抑制剂、PDGF抑制剂及其他酪氨酸激酶抑制剂或丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂)；微管破坏剂，例如海鞘素或其类似物及衍生物；微管稳定剂，例如紫杉烷(taxane)及天然存在的埃博霉素(epothilone)及其合成及半合成类似物；微管结合去稳定剂(包括长春花生物碱)；拓扑异构酶抑制剂；异戊二烯基蛋白转移酶抑制剂；铂配位错合物；信号转导抑制剂；及用作抗癌症及细胞毒性剂的其他作用剂，如生物反应修饰剂、生长因子及免疫调节剂。
因此，本发明的化合物可与用于治疗癌症或其他增殖性疾病的其他抗癌症治疗组合给药。本发明在本文中进一步包含至少一种式(I)化合物用于制备用以治疗癌症的药品的用途，和/或其包含将本文中的式(I)化合物与关于该化合物与用于治疗癌症的其他抗癌症或细胞毒性剂及治疗组合使用的说明书包装在一起。本发明进一步包含至少一种式(I)化合物和一种或多种其他药剂呈套组形式的组合，例如其中将其包装在一起或置于单独包装中以套组形式一起销售，或其中其为经包装以配制在一起。
在一实施方案中，提供治疗癌症的方法，其包含向有需要的哺乳动物给药至少一种式(I)化合物；给药达沙替尼(dasatinib)；和任选的一或多种其他抗癌剂。
在一实施方案中，提供治疗癌症的方法，其包含向有需要的哺乳动物给药至少一种式(I)化合物；给药紫杉醇(paclitaxel)；和任选的一或多种其他抗癌剂。
在一实施方案中，提供治疗癌症的方法，其包含向有需要的哺乳动物给药至少一种式(I)化合物；给药他莫昔芬(tamoxifen)；和任选的一或多种其他抗癌剂。
在一实施方案中，提供治疗癌症的方法，其包含向有需要的哺乳动物给药至少一种式(I)化合物；给药糖皮质激素；和任选的一或多种其他抗癌剂。适宜糖皮质激素的实例为地塞米松(dexamethasone)。
在一实施方案中，提供治疗癌症的方法，其包含向有需要的哺乳动物给药至少一种式(I)化合物；给药卡铂(carboplatin)；及任选的一或多种其他抗癌剂。
本发明的化合物可与针对在解决与上述病状相关的副效应中的特定用途所选择的其他治疗剂一起配制或共给药。例如，本发明的化合物可与预防恶心、过敏及胃刺激的药剂(如止吐剂及H1及H2抗组胺剂)一起配制。
在一实施方案中，提供药物组合物，其包含至少一种式(I)化合物；一或多种选自激酶抑制剂(小分子、多肽及抗体)、免疫阻抑剂、抗癌剂、抗病毒剂、抗炎剂、抗真菌剂、抗生素或抗血管超增殖化合物的其他药剂；及任何药学上可接受的载体、佐剂或媒剂。
当与本发明的化合物组合采用时，可以(例如)那些于Physicians′DeskReference(PDR)中所指示或本领域技术人员以其他方式确定的量使用以上其他治疗剂。在本发明的方法中，这些其他治疗剂可在给药本发明化合物之前、与其同时或在其之后给药。
然而，针对任何特定受试者的具体剂量值及剂量频率可有所变化，且通常取决于各种因素，包括(但不限于，例如)呈所给药形式的具体式(I)化合物的生物可用度、具体式(I)化合物的代谢稳定性及作用长度、受试者的物种、体重、总体健康、性别、饮食、给药的模式及时间、排泄速率、药物组合及特定病状的严重性。例如，约0.001mg/kg体重至100mg/kg体重、优选约0.005mg/kg体重-约50mg/kg体重且最优选约0.01mg/kg体重-10mg/kg体重的日剂量可为适当的。日剂量可每天以1次至4次剂量来给药。
可连续地(即，每日)或间歇地给药。本文所用的术语“间歇”或“间歇地”意指以规则或不规则间隔停止及开始。例如，间歇给药包括每周给药1天至6天；以周期形式给药(例如，每天给药并连续持续2周至8周、接着为长达1周不给药的停药期(rest period))；或隔天(on alternate days)给药。
在一实施方案中，向有需要的患者连续给药至少一种式(I)化合物，每天给药一或多次。例如，向有需要的患者给药治疗有效量的式(I)化合物，每天给药一或多次并连续持续数天。
在一实施方案中，向有需要的患者间歇地给药至少一种式(I)化合物，每天给药一或多次。例如，向有需要的患者给药治疗有效量的式(I)化合物，根据间歇时间表每天给药一或多次。
在一实施方案中，向有需要的患者给药至少一种式(I)化合物，每天给药一或多次并连续持续数天、接着不给药一或多天。优选地，给药治疗有效量的式(I)化合物。具有药物假期的连续给药实例为如下的周期：7天治疗、接着7天不治疗；14天治疗、接着7天不治疗；及7天治疗、接着14天不治疗。可根据需要，多次重复治疗/不治疗的周期来治疗患者。
在一实施方案中，根据间歇给药时间表向有需要的患者给药至少一种式(I)化合物。间歇给药时间表为重复时间表，其包括向患者给药式(I)化合物的各天及不向患者给药式(I)化合物的各天。间歇给药时间表的实例为：每周给药4天并连续持续3周，接着1周不给药，并以4周间隔重复；每周给药5天并连续持续2周，接着1周不给药，并以3周间隔重复；及，每周给药4天并持续1周，接着2周不给药，并以3周间隔重复。优选地，给药治疗有效量的式(I)化合物。
在一实施方案中，于某日给药将至少一种式(I)化合物，接着停药6天，并根据每周时间表重复。
在一实施方案中，于某日给药至少一种式(I)化合物，接着停药6天，并根据每周时间表重复并持续1周至4周，然后接着停药1周。例如，于某日给药式(I)化合物，接着停药6天，并持续3周，且然后接着停药1周。此4周周期可重复一或多次。
在一实施方案中，连续两天给药至少一种式(I)化合物，接着停药5天，并根据每周时间表重复。
在一实施方案中，连续3天给药至少一种式(I)化合物，接着停药4天，并根据每周时间表重复。
在一实施方案中，于某日给药至少一种式(I)化合物，接着停药10天至13天。
在一实施方案中，每天一次(QD)给药至少一种式(I)化合物。此实施方案包括每天一次经口给药。
在一实施方案中，每天两次(BID)给药至少一种式(I)化合物。此实施方案包括每天两次经口给药。
在一实施方案中，隔天给药至少一种式(I)化合物：1天给药，接着1天停药。此2天周期可重复一或多次。
制备方法
本发明的化合物可以有机合成领域的技术人员熟知的多种方式来制备。本发明的化合物可使用下文所阐述方法以及合成有机化学领域内已知的合成方法或其变化形式来合成，如那些本领域技术人员所了解。优选方法包括(但不限于)下文所阐述的那些。本文所引用的所有参考文献通过提述全文并入本文中。
可使用此部分中所阐述的反应及技术来制备本发明的化合物。各反应为在适于所用试剂及材料且适于所实施转变的溶剂中进行。而且，在下蚊所阐述合成方法的说明中，应理解，所有提出的反应条件(包括溶剂、反应氛围、反应温度、实验持续时间及处理程序的选择)均为选择为用于彼反应的标准条件，其应由本领域技术人员容易地识别。有机合成领域的技术人员应理解，分子的不同部分上存在的官能团必须与所提出的试剂及反应相容。本领域技术人员应容易地明了对与反应条件相容的取代基的这些限制，且然后必须使用替代方法。有时此需要进行判断以修改合成步骤的顺序或选择一种特定方法方案而非另一种，以获得本发明的期望化合物。亦应认识到，在计划此领域中的任一合成途径时的另一主要考虑因素为慎重选择用于保护本发明中所阐述的化合物中存在的反应官能团的保护基团。向训练有素的从业者阐述多种替代选择的权威解释为Greene等(Protective Groups in OrganicSynthesis，第三版，Wiley and Sons(1999))。
式(I)化合物可参照以下方案中所阐释的方法来制备。如本文中所显示，终产物为具有与式(I)相同的结构式的化合物。应理解，任何式(I)化合物可藉由这些方案藉由试剂的适宜选择利用适当取代来产生。本领域技术人员可容易地选择溶剂、温度、压力及其他反应条件。起始材料为市售或容易由本领域技术人员制备。化合物的成份为如此处或说明书中的其他部分所定义。
式(I)化合物的合成可使用方案1至5中所总结的方法进行。
方案1
步骤1：苯并二氮杂酮(vii)的制备可以本领域技术人员已知的多种方法完成。例如，如方案1所示，第一步骤可通过使用通过使用可偶联至受保护的氨基酸衍生物(ii)(PG＝保护基，例如PG＝Boc)的适当取代的2-氟硝基苯(i)在碱如碳酸钾的存在下在合适的溶剂(例如乙醇)中于合适的温度如80℃完成。
步骤2：该顺序的第二步骤为硝基部分的还原。硝基芳族化合物(iii)可以多种方法还原，例如以Pd/C氢化、以铁或其他金属在氢源如氯化铵的存在下于合适的溶剂如乙醇中氢化，或者本领域已知的其他方法，提供化合物iv。
步骤3：化合物iv可以多种方式环化成苯并二氮杂酮v。例如，化合物iv以偶联剂如TBTU、EDC/HOBt、EDC/HOAt或其他类似的偶联剂在碱如三乙胺的存在下于合适的溶剂如DMF中处理。
步骤4：化合物v可使用合适的偶联配偶体如适当取代的酰氯于催化剂如Pd2(dba)3和配体如2-(二环己基膦基)-2′,4′,6′-三异丙基联苯("X-Phos")或预催化剂如[PdCl(NH2C6H4C6H4)(XPhos)]的存在下使用或不使用另外的配体如Ruphos于碱如碳酸钾的存在下在合适的溶剂如t-BuOH中于合适的温度如80℃转化为化合物vi。
步骤5：化合物vii可以通过在本领域技术人员已知的合适条件下处理化合物vi除去保护基得到。例如，化合物vi可如TFA在合适的溶剂如CH2Cl2中以强酸处理。所得TFA盐可以本身使用，或可以游离碱化该物质的方式处理，例如通过以碱如饱和NaHCO3溶液处理并萃取化合物vii。
方案2
步骤1：方案2的第一步骤为藉由采用本领域技术人员已知的多种方式中的一种将化合物(viii)转化成酯(x)来实现，例如在试剂如三氟化硼醚合物的存在下在适当温度下于溶剂如THF中用经取代乙酰亚胺酯如化合物(ix)处理。
步骤2：可以本领域技术人员已知的众多方式将酸(xi)转化化合物(xiv)。例如，用诸如草酰氯等试剂于诸如DCM等溶剂中处理酸(xi)，得到酰氯(xii)。可在标准条件下用噁唑烷酮(xiii)处理化合物(xii)以得到化合物(xiv)(Evans,D.A.等，J.Am.Chem Soc.,112:4011(1990))。
步骤3：可以多种方式将化合物(xiv)转化成化合物(xv)(Baran,P.等，J.Am.Chem.Soc.,130(34):11546(2008))。例如，在诸如-78℃等低温及诸如N2等惰性氛围下于诸如甲苯等溶剂中用诸如LDA等碱处理化合物(ix)。将所得混合物添加至在诸如N2等惰性氛围下于诸如甲苯等溶剂中用氯化锂及诸如LDA等碱处理的化合物(xiv)的溶液中。在诸如-78℃等低温下在诸如N2等惰性氛围下，向所得的化合物(x)及(xiv)的烯醇酯的混合物中添加双(2-乙基己酰基氧基)铜，并升温至室温，产生化合物(xv)。
步骤4：化合物(xv)至(xvi)的转化可藉由在适当温度下使用诸如THF/水等溶剂混合物用过氧化氢及氢氧化锂处理其来实现。如有必要，此时可经由硅胶层析或制备型HPLC分离非镜像异构体。或者，可使混合物经受差向异构条件，例如藉由用LDA及氯化二乙基铝处理，接着利用甲醇或乙酸淬灭，以使期望非镜像异构体富集。
方案3
步骤1：方案5的第一步骤通过以试剂如亚硝酸钠在酸如H2SO4和溶剂如水中处理化合物(xxv)提供化合物xxvi来完成。
步骤2：将酸(xxvi)转化成化合物(xxvii)(PG＝保护基)。例如，酸(xxvi)以醇如苄基醇在溶剂如甲苯和酸如H2SO4中处理提供化合物xxvii。
步骤3：携带合适离去基团的化合物(xxviii)可以通过以碱如2,6-二甲基吡啶和试剂如三氟甲磺酸酐在溶剂如DCM于合适的温度下处理化合物(xxvii)制备。
步骤4：化合物(xxix)可以本领域技术人员已知的多种方式转化成化合物(xxx)，例如，在试剂如三氟化硼醚合物的存在下于合适的温度下在溶剂如THF中以取代的乙酰亚胺酸酯(acetimidate)如化合物(ix)处理。
步骤5：化合物(xxxi)的制备可以通过在溶剂如THF中于合适的温度如-78℃以碱如LiHMDS处理化合物(xxx)并且向所得混合物添加在溶剂如THF中的化合物(xxviii)来完成。
步骤6：化合物(xxxi)的保护基可以经由本领域技术人员已知的多种方式除去。例如，苄基可通过使其经历使用钯催化剂如Pearlman′s催化剂的氢化条件在溶剂如甲醇中除去从而提供化合物(xxxii)。
方案4
在方案2中的化合物(xvi)也可通过方案4中概述的合成顺序从化合物(xxxiii)制备。
步骤1：方案4的第一步骤通过在溶剂如THF中于低温如-78℃在惰性气氛中以碱如双(三甲基甲硅烷基)氨化钠处理化合物(xxxiii)来完成。所得(xxxiii)的烯醇化物以试剂如溴乙酸叔丁基酯处理得到化合物(xxxiv)。
步骤2：化合物(xxxiv)至(xxxv)的转化可以在合适的温度下使用溶剂混合物如THF/水通过以过氧化氢和氢氧化锂处理化合物(xxxiv)来完成。
步骤3：化合物(xxxv)可以于低温如-78℃载惰性气氛中在溶剂如THF中以碱如LDA处理来生成(xxxv)的烯醇化物并进一步以携带合适离去基团(如LG＝三氟甲磺酸(酯/盐))的试剂来处理而转化为化合物(xvi)。
方案5
在本发明中的实施例可使用一般方案1-4中制备的中间体使用本领域技术人员已知的方法来完成。
步骤1：第一步骤赋予适当取代的化合物xxxvi与适当取代的单保护的化合物xvi的偶联。例如，化合物(xvi)可以在偶联剂如TBTU和碱如TEA的存在下在溶剂如DMF中与化合物xxxvi偶联提供化合物xxxvii。
步骤2：化合物xxxvii至化合物xxxviii的转化可以本领域技术人员已知的许多种方法来完成。例如，化合物xxxvii的叔丁基酯可以酸如TFA于合适的温度如0℃在溶剂如DCM中处理提供化合物xxxviii。
步骤3：化合物(xxxviii)至化合物(xxxiix)的转化可经由于诸如DMF等溶剂中化合物(xxxviii)与诸如氨等适当胺来源、诸如EDC等碳化二亚胺、HOBT的偶合来实现。若需要，可使用适当分离技术(例如手性制备型层析)分离非镜像异构体混合物。
实施例
在以下实例中对本发明进一步加以定义。应理解，这些实例仅以阐释性方式给出。根据上文论述及实例，本领域技术人员可确定本发明的基本特性，且可在不背离其精神及范围的情况下作出各种变化及修改，以使本发明适用于各种用途及条件。因此，本发明并不限于下文所述的阐释性实例，而是由随附申请专利范围加以界定。
缩写
AcOH    乙酸
ACN     乙腈
AlMe3   三甲基铝
Boc     叔丁基氧基羰基
DCC     1,3-二环己基碳二亚胺
DCM     二氯甲烷
DEA     二乙胺
DMAP    二甲基氨基吡啶
DME     1,2-二甲氧基乙烷
DMF     二甲基甲酰胺
DMSO    二甲基亚砜
EDC     1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐
EDCI    1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺
Et2AlCl 二乙基氯化铝
EtOAc   乙酸乙酯
H2SO4   硫酸
HCl    氢氯酸
HOBT   羟基苯并三唑
HPLC   高效液相色谱
hr     小时
IPA    异丙醇
LCMS   液相色谱-质谱法
LDA    二异丙基氨基锂
LiHMDS 双(三甲基甲硅烷基)氨基锂
Me     甲基
MeOH   甲醇
min    分钟
MTBE   甲基叔丁基醚
N2     氮气
NaHMDS 双(三甲基甲硅烷基)氨基钠
Pd/C   钯/碳
Ph     苯基
RT     保留时间
sat    饱和
TBTU   O-(1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓四氟硼酸盐
TEA    三乙胺
Tf2O   三氟甲基磺酸酐
TFA    三氟乙酸
THF    四氢呋喃
中间体S-1：(2R,3S)-3-(叔丁基氨基甲酰基)-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酸
中间体S-1A：叔丁基5,5,5-三氟戊酸酯
于0℃向5,5,5-三氟戊酸(5g,32.0mmol)在THF(30mL)和己烷(30mL)中的搅拌溶液添加2,2,2-三氯乙酰亚胺酸叔丁基酯(11.46mL,64.1mmol)。于0℃搅拌混合物15min。添加三氟化硼醚合物(0.406mL,3.20mmol)并将反应混合物温热至室温过夜。向该澄清反应混合物中添加固体NaHCO3(5g)并搅拌30min。混合物经MgSO4过滤并以己烷(200mL)洗涤。让溶液静置45min，且所得固体物质通过再次在相同MgSO4滤器上过滤而除去，以己烷(100mL)洗涤并在不加热条件下经减压浓缩。将体积减少至约30mL，通过干净的玻璃漏斗过滤，以己烷(5mL)洗涤，并且然后在不加热条件下经减压浓缩。所得纯的油状物经0.45μm尼龙膜滤盘过滤提供中间体S-1A(6.6g,98％)，为无色油状物：1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.38(s,9H)1.74-1.83(m,2H)2.00-2.13(m,2H)2.24(t,J＝7.28Hz,2H)。
中间体S-1B：(4S)-4-(丙-2-基)-3-(5,5,5-三氟戊酰基)-1,3-噁唑烷-2-酮
经5min向5,5,5-三氟戊酸(5.04g,32.3mmol)在DCM(50mL)和DMF(3滴)中的搅拌溶液滴加草酰氯(3.4mL,38.8mmol)并搅拌溶液直到所有的冒泡消退。反应混合物经减压浓缩得到浅黄色油状物。于-78℃经由注射器经5min向装有(4S)-4-(丙-2-基)-1,3-噁唑烷-2-酮(4.18g,32.4mmol)在THF(100mL)中的溶液的单独烧瓶滴加n-BuLi(2.5M在己烷中,13.0mL,32.5mmol)。搅拌10min后，经由套管经15min添加上述溶解在THF(20mL)中的酰氯。将反应混合物温热至0℃，并且随着浴升温温热至室温并搅拌过夜。向反应混合物添加饱和NH4Cl，并且然后以EtOAc(2x)萃取。合并的有机物以盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并减压浓缩。粗物质通过快速色谱纯化(Teledyne ISCOCombiFlash Rf,5％至60％溶剂A/B＝己烷/EtOAc,SiO2120g)。浓缩合适的级分提供中间体S-1B(7.39g,86％)，为无色油状物：1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 4.44(1H,dt,J＝8.31,3.53Hz),4.30(1H,t,J＝8.69Hz),4.23(1H,dd,J＝9.06,3.02Hz),2.98-3.08(2H,m),2.32-2.44(1H,m,J＝13.91,7.02,7.02,4.03Hz),2.13-2.25(2H,m),1.88-2.00(2H,m),0.93(3H,d,J＝7.05Hz),0.88(3H,d,J＝6.80Hz)。
中间体S-1C：(2S,3R)-6,6,6-三氟-3-((S)-4-异丙基-2-氧代噁唑烷-3-羰基)-2-(3,3,3-三氟丙基)己酸叔丁基酯，和
中间体S-1D：(2R,3R)-6,6,6-三氟-3-((S)-4-异丙基-2-氧代噁唑烷-3-羰基)-2-(3,3,3-三氟丙基)己酸叔丁基酯
在氮气气氛下向二异丙基胺(5.3mL,37.2mmol)在THF(59mL)中的冷(-78℃)的搅拌溶液中添加n-BuLi(2.5M在己烷中)(14.7mL,36.8mmol)，然后温热至0℃得到0.5M LDA溶液。将分开的容器装填以中间体S-1B(2.45g,9.17mmol)，物质与苯共沸两次(RotoVap进气口配有氮气入口以完全排除湿气)，然后添加甲苯(15.3mL)。将该添加至含干燥氯化锂(1.96g,46.2mmol)的烧瓶。向所得混合物(冷却至-78℃)添加LDA溶液(21.0mL,10.5mmol)并于-78℃搅拌10min，温热至0℃保持10min，然后再冷却至-78℃。含中间体S-1A(3.41g,16.07mmol)的分开的反应容器再次与苯共沸中两次，添加甲苯(15.3mL)(冷却至-78℃)。接下来，添加LDA(37.0mL,18.5mmol)并且所得溶液于-78℃搅拌25min。此时，经由套管将衍生自酯的烯醇式盐转移至噁唑烷酮烯醇化物的溶液，于-78℃再搅拌5min。除去隔膜并且经固体粉化的双(2-乙基己酰基氧基)铜(9.02g,25.8mmol)快速添加至反应容器并重新放上隔膜。将容器从冷浴立即除去并伴随快速旋流浸没入热水浴(40℃)中，同时发生从初始绿松石色至棕色的颜色变化。搅拌反应混合物20min，将其倒入5％NH4OH(360mL)水溶液并以EtOAc(2x)萃取。合并的有机物以盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并减压浓缩。剩余物通过快速色谱纯化(Teledyne ISCOCombiFlash Rf,0％至60％溶剂A/B＝己烷/EtOAc,SiO2120g)。浓缩合适的级分提供中间体S-1C和S-1D的混合物(2.87g,66％)，为浅黄色粘稠油状物。1H NMR显示产物为非对映异构体S-1C:S-1D的1.6:1混合物，由在2.74和2.84ppm的多重峰的积分确定：1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 4.43-4.54(2H,m),4.23-4.35(5H,m),4.01(1H,ddd,J＝9.54,6.27,3.51Hz),2.84(1H,ddd,J＝9.41,7.28,3.64Hz),2.74(1H,ddd,J＝10.29,6.27,4.02Hz),2.37-2.48(2H,m,J＝10.38,6.98,6.98,3.51,3.51Hz),2.20-2.37(3H,m),1.92-2.20(8H,m),1.64-1.91(5H,m),1.47(18H,s),0.88-0.98(12H,m)。
中间体S-1：(2R,3S)-3-(叔丁氧基羰基)-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酸，和
中间体S-1E：(2R,3R)-3-(叔丁氧基羰基)-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酸
向中间体S-1C和S-1D的混合物(4.54g,9.51mmol)在THF(140mL)和水(42mL)中的冷(0℃)的搅拌溶液依序添加过氧化氢(30％在水中,10.3g,91mmol)和LiOH(685.3mg,28.6mmol)并搅拌混合物1hr。此时，反应容器从冷浴除去并且然后搅拌1.5hr。反应通过HPLC判断完成。向反应混合物添加饱和NaHCO3(45mL)和饱和Na2SO3(15mL)，并且然后减压部分浓缩。所得粗溶液以DCM(3x)萃取。以1N HCl将水相酸化至pH～1-2，以DCM(3x)和EtOAc(1x)萃取。合并的有机物以盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并减压浓缩提供中间体S-1和中间体S-1E的混合物(3.00g,86％)，为无色油状物：1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 2.76-2.84(1H,m,非对映异构体2),2.64-2.76(3H,m),2.04-2.35(8H,m),1.88-2.00(4H,m),1.71-1.83(4H,m),1.48(9H,s,非对映异构体1),1.46(9H,s,非对映异构体2)；1H NMR显示S-1:S-1E的1.7:1混合物，通过叔丁基基团的峰的积分确定。
中间体S-1：(2R,3S)-3-(叔丁氧基羰基)-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酸，和
中间体S-1E：(2R,3R)-3-(叔丁氧基羰基)-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酸，富集的混合物
在氮气气氛下向二异丙基胺(1.7mL,11.93mmol)在THF(19mL)中的冷(-78℃)的搅拌溶液添加n-BuLi(2.5M在己烷中,4.8mL,12.00mmol)。搅拌混合物5min并且然后温热至0℃。在分开的容器中，经由套管经25min向中间体S-1和中间体S-1E的混合物(1.99g,5.43mmol)在THF(18mL)中的冷(-78℃)的搅拌溶液缓慢添加上述制备的LDA溶液中。搅拌混合物15min,然后温热至室温(置于24℃水浴中)保持15min，并且然后在此冷却至-78℃保持15min。经由注射器向反应混合物添加Et2AlCl(1M in己烷)(11.4mL,11.40mmol)，搅拌10min，温热至室温保持15min并且然后冷却回-78℃保持15min。快速添加甲醇(25mL)，剧烈旋流，同时温热回室温，然后浓缩至～1/4原体积。将混合物溶解于EtOAc中并以1N HCl(50mL)和冰(75g)洗涤。分离水相，以EtOAc(2x)萃取。合并的有机物以KF(2.85g在75mL水中)和1N HCl(13mL)[所得溶液pH 3-4]的混合物洗涤，然后以盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并减压浓缩得到中间体S-1和中间体S-1E的9:1(S-1:S-1E)富集非对映异构体混合物(由1H NMR确定)(2.13g,>99％)，为浅黄色粘性油状物：1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 2.64-2.76(2H,m),2.04-2.35(4H,m),1.88-2.00(2H,m),1.71-1.83(2H,m),1.48(9H,s)。
制备中间体S-1的备选方法：
中间体S-1F：三氟甲磺酸3,3,3-三氟丙基酯
经3min向2,6-二甲基吡啶(18.38mL,158mmol)在CH2Cl2(120mL)中的冷(-25℃)的搅拌溶液添加Tf2O(24.88mL,147mmol)，并搅拌5min。经3min期间向反应混合物添加3,3,3-三氟丙-1-醇(12g,105mmol)。2hr后，反应混合物温热至室温并搅拌1hr。反应混合物经浓缩至一般体积，然后通过直接装载在硅胶柱(330g Isco)上并以CH2Cl2洗脱而纯化。得到中间体S-1F(13.74g,53％)，为无色油状物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 4.71(2H,t,J＝6.15Hz),2.49-2.86(2H,m)。
中间体S-1G：(4S)-4-苄基-3-(5,5,5-三氟戊酰基)-1,3-噁唑烷-2-酮
中间体S-1G由5,5,5-三氟戊酸(3.35g,21.46mmol)和(4S)-4-苄基-1,3-噁唑烷-2-酮(3.80g,21.46mmol)通过中间体S-1B显示的一般方法制备。得到中间体S-1G(5.67g,84％)，为无色粘稠油状物：1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.32-7.39(2H,m),7.30(1H,d,J＝7.05Hz),7.18-7.25(2H,m),4.64-4.74(1H,m),4.17-4.27(2H,m),3.31(1H,dd,J＝13.35,3.27Hz),3.00-3.11(2H,m),2.79(1H,dd,J＝13.35,9.57Hz),2.16-2.28(2H,m),1.93-2.04(2H,m)。
中间体S-1H：(3R)-3-(((4S)-4-苄基-2-氧代-1,3-噁唑烷-3-基)羰基)-6,6,6-三氟己酸叔丁基酯
在氮气气氛下向中间体S-1G(3.03g,9.61mmol)在THF(20mL)中的冷(-78℃)的搅拌溶液添加NaHMDS(1.0M在THF中,10.6mL,10.60mmol)。2小时后，于-78℃经由注射器添加纯的2-溴乙酸叔丁基酯(5.62g,28.8mmol)并在相同温度保持搅拌。6小时后，反应混合物温热至室温。反应混合物在饱和NH4Cl和EtOAc之间分配。分离有机相，并且以以EtOAc水溶液萃取(3x)。合并的有机物以盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并减压浓缩。剩余物通过快速色谱纯化(Teledyne ISCO CombiFlash Rf,5％至100％溶剂A/B＝己烷/EtOAc,SiO2120g)。浓缩合适的级分提供中间体S-1H(2.79g,67.6％)为无色粘稠油状物：1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.34(2H,d,J＝7.30Hz),7.24-7.32(3H,m),4.62-4.75(1H,m,J＝10.17,6.89,3.43,3.43Hz),4.15-4.25(3H,m),3.35(1H,dd,J＝13.60,3.27Hz),2.84(1H,dd,J＝16.62,9.57Hz),2.75(1H,dd,J＝13.35,10.07Hz),2.47(1H,dd,J＝16.62,4.78Hz),2.11-2.23(2H,m),1.90-2.02(1H,m),1.72-1.84(1H,m),1.44(9H,s)。
中间体S-1I：(2R)-2-(2-叔丁氧基-2-氧代乙基)-5,5,5-三氟戊酸
中间体S-1I由中间体S-1H(2.79g,6.50mmol)通过中间体S-1和中间体S-1E的混合物显示的程序制备。得到中间体S-1I(1.45g,83％)，为无色油状物：1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 2.83-2.95(1H,m),2.62-2.74(1H,m),2.45(1H,dd,J＝16.62,5.79Hz),2.15-2.27(2H,m),1.88-2.00(1H,m),1.75-1.88(1H,m),1.45(9H,s)。
中间体S-1：(2R,3S)-3-(叔丁氧基羰基)-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酸，和
中间体S-1E：(2R,3R)-3-(叔丁氧基羰基)-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酸
在500mL圆底烧瓶中为在THF(60mL)中的中间体S-1I(5g,18.50mmol)得到无色溶液然后冷却至-78℃。向该冷却搅拌溶液中缓慢添加LDA(22.2mL,44.4mmol,2.0M)，反应7min。2h后，经3min将中间体S-1F(6.38g,25.9mmol)添加至反应混合物并于-78℃搅拌。60min后，将反应混合物置于-25℃浴(冰/MeOH/干冰)中，再搅拌60min，此时添加饱和NH4Cl水溶液。分离的水相以1N HCl水溶液酸化至pH 3，然后以Et2O萃取，合并的有机层以盐水(x2)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩提供中间体S-1和中间体S-1E(6.00g,89％)的1:4(S-1:S-1E)混合物(由1H NMR确定)，为淡黄色固体：1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 2.81(1H,ddd,J＝10.17,6.32,3.85Hz),2.63-2.76(1H,m),2.02-2.33(4H,m),1.86-1.99(2H,m),1.68-1.85(2H,m),1.47(9H,s)。
中间体S-1：(2R,3S)-3-(叔丁氧基羰基)-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酸，和
中间体S-1E：(2R,3R)-3-(叔丁氧基羰基)-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酸
经由注射器经10min向中间体S-1和中间体S-1E的混合物(5.97g,16.30mmol)在THF(91mL)中的冷(-78℃)的搅拌溶液中滴加LDA(19mL,38.0mmol,2.0M在THF/己烷/乙基苯中)(内部温度从不超过-65℃,探针置于反应溶液中)，搅拌15min，温热至室温(24℃水浴)，搅拌15min，冷却至-78℃保持15min。经由注射器向反应混合物添加Et2AlCl(41mL,41.0mmol,1M在己烷中)(内部温度从不超过-55℃),搅拌10min,温热至室温(24℃浴)保持15min，然后冷却回-78℃，搅拌15min。同时，1000mL RB烧瓶装填有MeOH(145mL)并预冷却至-78℃。伴随剧烈搅拌，反应混合物经由套管经5min转移至上述MeOH。烧瓶从浴除去，添加冰，接着缓慢添加1N HCl(147mL,147mmol)。随着添加HCl观察到气体发生。将反应混合物温热至室温，同时气体发生消退。反应混合物以EtOAc(750mL)稀释，以NaCl饱和，分离有机相，以氟化钾(8.52g,147mmol)和1N HCl(41mL,41.0mmol)在水(291mL)、盐水(100mL)的溶液洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩，然后经真空干燥。1H NMR显示产物为中间体S-1和中间体S-1E的9:1混合物。得到中间体S-1和中间体S-1E(6.12g,>99％产率)的富集混合物，为琥珀色油状物：1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 2.64-2.76(2H,m),2.04-2.35(4H,m),1.88-2.00(2H,m),1.71-1.83(2H,m),1.48(9H,s)。
非对映异构体纯的中间体S-1的制备方法：
中间体S-1J：(2R,3S)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酸1-苄基酯4-叔丁基酯
向中间体S-1和中间体S-1E的9:1富集混合物(5.98g,16.33mmol)在DMF(63ml)中的搅拌溶液添加碳酸钾(4.06g,29.4mmol)和苄基溴(2.9ml,24.38mmol)，然后搅拌过夜。反应混合物以EtOAc(1000mL)稀释，以10％LiCl(3x200mL)、盐水(200mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩，然后经真空干燥。剩余物通过SiO2色谱使用甲苯：己烷梯度纯化。得到非对映异构体纯的中间体S-1J(4.81g,65％)，为无色固体：1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.32-7.43(m,5H),5.19(d,J＝12.10Hz,1H),5.15(d,J＝12.10Hz,1H),2.71(dt,J＝3.52,9.20Hz,1H),2.61(dt,J＝3.63,9.63Hz,1H),1.96-2.21(m,4H),1.69-1.96(m,3H),1.56-1.67(m,1H),1.45(s,9H)。
中间体S-1
在H2-耐压瓶中向中间体S-1J(4.81g,10.54mmol)在MeOH(100mL)中的溶液添加10％钯/碳(湿,Degussa型,568.0mg,0.534mmol)。容器以N2(4x)然后以H2(2x)冲洗，然后加压制50psi并振荡过夜。对反应混合物减压并冲洗，混合物经过滤，以MeOH洗涤，然后浓缩并真空干燥。得到中间体S-1(3.81g,99％)，为无色固体：1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ2.62-2.79(m,2H),2.02-2.40(m,4H),1.87-2.00(m,2H),1.67-1.84(m,2H),1.48(s,9H)。
纯化中间体S-1的备选方法：
中间体S-1：(2R,3S)-3-(叔丁氧基羰基)-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酸
中间体S-1(作为与中间体S-1E的混合物)以类似于上述的方式从中间体S-1I制备，得到中间体S-1和中间体S-1E的1:2.2混合物(8.60g,23.48mmol)，其使用LDA(2.0M溶液，在THF中,乙基苯和庚烷,28.2mL,56.4mmol)和二乙基氯化铝(1.0M溶液，在己烷中,59mL,59.0mmol)在THF(91mL)中富集。如上解释的后处理后，发现所得剩余物为中间体S-1和中间体S-1E的13.2:1(通过1H NMR)混合物，对其进行如下处理：粗物质溶解于MTBE(43mL)。将己烷(26mL)缓慢地加入反应混合物，同时保持温度低于30℃。搅拌反应混合物10min。接下来，经20分钟期间缓慢地装填叔丁基胺(2.7mL,1.1当量)，同时保持温度低于30℃。此添加观察为放热的。低于30℃搅拌反应混合物2小时并过滤。固体物质以5:3MTBE：己烷(80mL)洗涤，滤液经浓缩并放置一边。过滤出的固体溶解在二氯甲烷(300mL)中，以1N HCl(100mL)洗涤，有机层以盐水(100mL x2)洗涤，然后低于45℃经减压浓缩。得到中间体S-1(5.46g,64％)。
中间体S-2：(R)-2-((S)-1-叔丁氧基-3-环丙基-1-氧代丙-2-基)-5,5,5-三氟戊酸
中间体S-2A：叔丁基3-环丙基丙酸酯
在N2下经5min向3-环丙基丙酸(5g,43.8mmol)在己烷(30.0mL)和THF(30mL)中的冷(0℃，预冷却至少15min)的搅拌溶液分份添加2,2,2-三氯乙酰亚胺酸叔丁基酯(15.7mL,88mmol)。搅拌反应混合物15min。添加三氟化硼醚复合物(0.555mL,4.38mmol)并且反应混合物随着浴升温温热至室温过夜。向该澄清反应混合物中添加NaHCO3(5g)并搅拌60min。悬浮液经MgSO4过滤并以300mL己烷洗涤。静止滤液，然后固体经相同MgSO4滤器过滤，以己烷(100mL)洗涤。滤液经真空浓缩并且不关闭水浴。剩余物通过硅胶色谱纯化(己烷/EtOAc)提供中间体S-1B(6.05g,81％)，为澄清油状物：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ2.29(2H,t,J＝7.48Hz),1.35-1.54(11H,m),0.60-0.75(1H,m),0.29-0.46(2H,m),-0.06-0.10(2H,m)。
中间体S-2B：(2S,3R)-2-(环丙基甲基)-6,6,6-三氟-3-((S)-4-异丙基-2-氧代噁唑烷-3-羰基)己酸叔丁基酯，和
中间体S-2C：(2R,3R)-2-(环丙基甲基)-6,6,6-三氟-3-((S)-4-异丙基-2-氧代噁唑烷-3-羰基)己酸叔丁基酯
二异丙基胺(6.64ml,46.6mmol)溶解于71.7mL的THF中并冷却至-78℃，然后经5分钟滴加n-BuLi(18.0mL,44.9mmol,2.5M在己烷中)。5分钟后，所得0.5M LDA溶液保持于0℃。在分离的烧瓶中，氯化锂(2.62g,61.7mmol)伴随加热高真空干燥并在氮气下冷却。中间体S-1B(3.0g,11.23mmol)(与甲苯共沸一次)与15.0mL甲苯一起转移至含LiCl并冷却至-78℃的烧瓶中。经由注射器经5min向该搅拌的悬浮液中滴加LDA(25.83mL,12.91mmol,1.15当量,0.5M LDA)。反应混合物于-78℃搅拌15分钟，然后于0℃搅拌10分钟并冷却至-78℃。
在分离的烧瓶中在N2下将中间体S-2A(3.44g,20.21mmol)溶解于15.0mL甲苯中并冷却至-78℃。向该溶液滴加LDA(46.48mL,23.24mmol,1.15当量,0.5M LDA)并于-78℃搅拌30分钟，此时经由套管将该溶液添加(快速负压，均在30秒内添加)至LiCl/噁唑烷酮溶液(-78℃)。转移后1分钟，于-78℃添加将固体双(2-乙基己酰基氧基)铜(10.80g,30.9mmol)，并且将烧瓶转移至40℃水浴并剧烈旋流15分钟，并在5％NH4OH溶液(20mL饱和NH4OH和100mL水)淬灭，并以乙酸乙酯(2x100mL)萃取。收集的有机相以盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩并通过硅胶色谱纯化(己烷/EtOAc)得到制备例S-2B和S-2C的混合物(1.58g,32％产率)，为油状物：1H NMR通过t-Bu峰的积分显示该物质为S-2B:S-2C的1.5:1混合物：非对映异构体混合物的1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.53-4.41(m,2H),4.39-4.19(m,5H),4.10-4.01(m,1H),2.89-2.77(m,2H),2.47-2.26(m,2H),2.16-1.72(m,8H),1.47(s,9H,t-Bu of S-2B,相对强度的积分为1.5),1.46(s,9H,t-Bu of S-2C,相对强度的积分为1),0.98-0.86(m,16H),0.78-0.64(m,2H),0.56-0.37(m,4H),0.14-0.01(m,4H)。
中间体S-2：(R)-2-((S)-1-叔丁氧基-3-环丙基-1-氧代丙-2-基)-5,5,5-三氟戊酸，和
中间体S-2D：(R)-2-((R)-1-叔丁氧基-3-环丙基-1-氧代丙-2-基)-5,5,5-三氟戊酸
向制备例S-2B:S-2C(3.4g,7.81mmol)的混合物在THF(60mL)和水(20mL)中的冷(0℃)的搅拌溶液添加30％H2O2(4.82mL,79mmol)，接着添加LiOH(0.567g,23.66mmol)。反应混合物逐渐温热至室温并室温搅拌3h。向反应混合物添加饱和Na2SO3(20mL)和饱和NaHCO3(40mL)，并且然后搅拌5min。反应混合物经部分浓缩并以DCM(80mL)萃取。将水相酸化至pH～2，以NaCl饱和，以EtOAc(2x)萃取。合并的萃取物经干燥(MgSO4)，过滤和浓缩提供中间体S-2和中间体S-2D(2.01g,79％)的混合物：通过t-Bu峰的积分1H NMR显示该物质为S-2:S-2D的1.4:1混合物：非对映异构体的混合物的1H NMR(400MHz,CDCl3)δ2.82-2.59(m,4H),2.31-2.03(m,4H),1.95-1.52(m,7H),1.44(s,9H,t-Bu of S-1,相对强度的积分为1.4),1.42(s,9H,t-Bu ofS-2E,相对强度的积分为1),0.93(d,J＝6.6Hz,1H),0.88(d,J＝6.8Hz,1H),0.74-0.57(m,2H),0.43(t,J＝6.8Hz,3H),0.11--0.04(m,3H)。
中间体S-2：(R)-2-((S)-1-叔丁氧基-3-环丙基-1-氧代丙-2-基)-5,5,5-三氟戊酸，和
中间体S-2D：(R)-2-((R)-1-叔丁氧基-3-环丙基-1-氧代丙-2-基)-5,5,5-三氟戊酸，富集的混合物
在N2中经由注射器经5min向中间体S-2和中间体S-2D的1.4:1混合物(2.00g,6.17mmol)在THF(30mL)中的冷(-78℃)的搅拌溶液中添加LDA(7.54mL,13.57mmol,1.8M),搅拌15min,温热至室温(24℃水浴),搅拌15min,并冷却至-78℃保持15min。经由注射器向反应混合物添加二乙基氯化铝(12.95mL,12.95mmol,1M在己烷中)，搅拌10min，温热至室温(24℃浴)保持15min，然后返回-78℃保持25min。快速添加MeOH(38.9mL,962mmol)。反应混合物从浴除去并且然后缓慢添加冰和1N HCl(55.5mL,55.5mmol)。一旦气体发生消退，混合物以EtOAc萃取(2x)，合并的有机物以氟化钾(3.26g,56.2mmol)在水(106mL,5895mmol)和1N HCl(15.72mL,15.72mmol)中的溶液、盐水洗涤，并且然后干燥(Na2SO4)。混合物接着进行过滤并浓缩得到中间体S-2和中间体S-2D(1.79g,90％)的～2:1(S-2:S-2D，由在1HNMR中的t-Bu峰的积分确定)富集混合物：非对映异构体的混合物的1HNMR(400MHz,CDCl3)δ2.87-2.57(m,2H),2.36-2.06(m,2H),1.97-1.81(m,2H),1.81-1.70(m,1H),1.70-1.56(m,1H),1.47(s,9H,t-Bu of S-2,相对强度的积分为2.0),1.45(s,9H,t-Bu of S-2D,相对强度的积分为1),0.99-0.87(m,1H),0.77-0.61(m,1H),0.54-0.38(m,2H),0.16--0.01(m,2H)。
中间体S-2E：(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酸1-苄基酯4-叔丁基酯，和
中间体S-2F：(2R,3R)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酸1-苄基酯4-叔丁基酯
向中间体S-2和中间体S-2D的2.15:1混合物(2.22g,6.84mmol)和苄基溴(0.98ml,8.24mmol)在DMF(25ml)中的搅拌溶液添加碳酸钾(1.41g,10.20mmol)。反应混合物然后搅拌5.5h。反应混合物以EtOAc(300mL)稀释，以10％LiCl(3x100mL)、饱和NaCl洗涤，然后干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。剩余物通过硅胶色谱纯化(己烷:甲苯)得到中间体S-2E(1.5g,53％)和中间体S-2F(0.778g,27％)：中间体S-2E：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.43-7.31(m,29H),5.17(d,J＝11.9Hz,6H),5.13(d,J＝11.9Hz,6H),2.75-2.64(m,11H),2.19-1.94(m,12H),1.93-1.81(m,6H),1.79-1.69(m,6H),1.63-1.56(m,4H),1.46(s,47H),1.14(ddd,J＝13.8,7.2,3.5Hz,6H),0.68-0.55(m,6H),0.45-0.37(m,11H),-0.02--0.11(m,6H)。中间体S-2F：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.40-7.32(m,5H),5.16(d,J＝12.3Hz,1H),5.13(d,J＝12.1Hz,1H),2.88-2.79(m,1H),2.74(ddd,J＝8.8,7.3,4.4Hz,1H),2.18-1.93(m,2H),1.90-1.79(m,2H),1.70-1.59(m,1H),1.44(s,9H),1.31(ddd,J＝14.1,7.3,4.5Hz,1H),0.73-0.61(m,1H),0.49-0.38(m,2H),0.10-0.03(m,1H),-0.01--0.07(m,1H)。
中间体S-2
中间体S-2E(2.80g,6.76mmol)溶解于乙酸乙酯(26.0mL)和甲醇(26.0mL)中。添加钯/碳(10％湿，Degussa,0.539g,0.507mmol)，然后气氛以H2交换三次。反应混合物搅拌约2h，然后以MeOH洗液过滤。滤液经浓缩得到中间体S-2(2.19g,100％产率)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ2.79-2.67(m,2H),2.36-2.21(m,1H),2.18-2.03(m,1H),1.94(dtd,J＝14.6,9.8,4.8Hz,1H),1.78(ddd,J＝11.1,5.3,3.0Hz,1H),1.63(ddd,J＝13.9,9.2,7.0Hz,1H),1.49(s,9H),1.35(ddd,J＝13.8,7.0,3.9Hz,1H),0.77-0.63(m,1H),0.48(dq,J＝8.1,1.7Hz,2H),0.15-0.02(m,2H)。
制备中间体S-2E并因此制备中间体S-2的备选方法：
中间体S-2G：(2R,3S)-3-(叔丁氧基羰基)-2-(3,3,3-三氟丙基)己-5-烯酸，和
中间体S-2H：(2R,3R)-3-(叔丁氧基羰基)-2-(3,3,3-三氟丙基)己-5-烯酸
烧瓶装填以THF(150ml)，冷却至-20℃,并且然后伴随搅拌添加正丁基锂(53.9ml,2.5M在己烷中,135mmol)，接着经55min添加二异丙基胺(19.4ml,137mmol)。内部温度保持在低于-8.5℃。添加完成后，反应混合物于0℃搅拌45min，并且然后冷却至-78℃。经20min向其中添加中间体S-1I(14.56g,53.9mmol)在THF(15.0ml)中的溶液，同时保持内部温度低于-72℃。添加完成后，混合物-78℃搅拌100min。经10min向其中添加烯丙基溴(6.38ml,75mmol)。搅拌反应混合物，并随着浴变暖缓慢温热至室温，并且然后搅拌过夜。向该溶液添加冰，以1N HCl(215mL)淬灭至pH约1，以NaCl饱和。分离各层。水层以EtOAc(1x250mL,1x150mL)萃取。合并的有机相以盐水(1x300mL)洗涤，干燥(MgSO4),过滤并蒸发。剩余物以苯(50mL)处理并蒸发两次，真空干燥得到制备例S-2G和S-2H(16.8g,100％)的混合物：1H NMR表明S-2G:S-2H的比例为1:2：非对映异构体混合物的1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.81-5.66(m,1H),5.17-5.04(m,2H),2.81-2.62(m,2H),2.45-2.38(m,2H),2.33-2.03(m,3H),1.96-1.83(m,2H),1.45(s,9H,t-Bu of S-2G,相对强度的积分为1),1.44(s,9H,t-Bu of S-2H,相对强度的积分为2)。
中间体S-2G：(2R,3S)-3-(叔丁氧基羰基)-2-(3,3,3-三氟丙基)己-5-烯酸，和
中间体S-2H：(2R,3R)-3-(叔丁氧基羰基)-2-(3,3,3-三氟丙基)己-5-烯酸，富集的混合物
向制备例S-2G和S-2H的混合物(10g,32.2mmol)在THF(150mL)中的冷(-78℃)的搅拌溶液缓慢添加LDA(39.4mL,70.9mmol,1.8M在庚烷/THF/乙基苯中)。搅拌15min后，将反应混合物置于室温水浴中。15min后，反应混合物放回-78℃浴中，搅拌15min，并且然后经由滴液漏斗添加二乙基氯化铝(81mL,81mmol,1M在己烷中)。反应混合物于-78℃搅拌。10min后，反应混合物置于室温水浴保持15min并且然后冷却回-78℃浴保持15min。同时，向分开的烧瓶装填MeOH(300mL)并冷却至-78℃。反应混合物然后经由套管通过氮气压强转移至冷的且快速搅拌的MeOH中。转移完成后，将冰(86g)添加至反应混合物，接着缓慢添加1N HCl(300mL)。搅拌反应混合物直到所有气体发生消退。添加EtOAc(400mL)，分离各相，并且水相以EtOAc(300mL)萃取。合并EtOAc层以氟化钾(17g)在600mL H2O和1N HCl(86mL)的混合物洗涤，接着以盐水洗涤。有机相经干燥(Na2SO4)，过滤并减压浓缩提供制备例S-2G和S-2H(10.0g,100％)的7:1(S-2G:S-2H)富集混合物：非对映异构体混合物的1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.81-5.66(m,1H),5.17-5.04(m,2H),2.81-2.62(m,2H),2.45-2.38(m,2H),2.33-2.03(m,3H),1.96-1.83(m,2H),1.45(s,9H,t-Bu ofS-2G,相对强度的积分为7),1.44(s,9H,t-Bu of S-2H,相对强度的积分为1)。
中间体S-2I：(2S,3R)-2-烯丙基-3-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酸4-苄基酯1-叔丁基酯
向制备例S-2G和S-2H的7:1富集混合物(10g,32.2mmol)在DMF(100ml)中的搅拌溶液添加苄基溴(4.6ml,38.7mmol)和碳酸钾(6.68g,48.3mmol).于室温搅拌反应混合物两小时。向反应混合物添加Et3N(9.0mL.64.5mmol)，接着搅拌60min。反应混合物以Et2O稀释，以10％LiCl(3x100mL)、盐水(100mL)洗涤，并且然后干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。剩余物通过硅胶色谱纯化(己烷/甲苯)提供中间体S-2I(8.7g,67％)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.40-7.31(m,5H),5.70(ddt,J＝16.9,10.2,7.1Hz,1H),5.19-5.11(m,2H),5.09-5.02(m,2H),2.83-2.68(m,2H),2.43-2.32(m,2H),2.19-1.94(m,2H),1.91-1.81(m,2H),1.42(s,9H)。
中间体S-2E：(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酸1-苄基酯4-叔丁基酯
向冷却至0℃的40％KOH[KOH(6g,107mmol)在水(9mL)中]和Et2O(60mL)的混合物分份添加1-甲基-3-硝基-1-亚硝基胍(1.5g,10.20mmol)。得到的溶液旋流数次。于0℃将乙醚层(黄色溶液)移液至中间体S-2I(450mg,1.124mmol)和Pd(OAc)2(25mg,0.11mmol)在Et2O(18mL)中的混合物。混合物于0℃搅拌3h，并且然后反应混合物以数滴乙酸淬灭。所得混合物以饱和NaHCO3和盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。上述油状物通过硅胶色谱纯化(己烷/EtOAc)得到中间体S-2E(377mg,81％)，为无色油状物：1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.43-7.31(m,5H),5.21-5.07(m,2H),2.76-2.62(m,2H),2.18-1.66(m,4H),1.58-1.54(m,1H),1.46(s,9H),1.14(ddd,J＝13.8,7.1,3.5Hz,1H),0.71-0.53(m,1H),0.47-0.34(m,2H),0.05--0.10(m,2H)；HPLC：RT＝3.790min(SpeedROD柱4.6x50mm,10-90％甲醇水溶液，经4分钟，含0.1％TFA,4mL/min,在220nm监控)；MS(ES)：m/z＝415[M+H]+。
中间体S-3：(R)-2-((R)-2-(叔丁氧基)-2-氧代-1-苯基乙基)-5,5,5-三氟戊酸
中间体S-3A：(2R)-5,5,5-三氟-2-羟基戊酸
向(2R)-2-氨基-5,5,5-三氟戊酸(4.09g,23.90mmol)(U.S.专利号2009/0111858A1)和H2SO4(2.8mL,52.5mmol)在水(95mL)中的冷(0℃)的搅拌溶液经由滴液漏斗经60min滴加亚硝酸钠(9.89g,143mmol)在水(30mL)中的溶液。反应混合物缓慢地温热至室温并搅拌过夜。反应混合物以Et2O稀释，分离水相并以Et2O(3x)萃取。合并的有机物经干燥(Na2SO4),过滤并减压浓缩提供中间体S-3A(4.1551g,>99％)，为琥珀色油状物：1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 4.33(1H,dd,J＝8.03,4.27Hz),2.09-2.42(3H,m),1.88-2.02(1H,m)。
中间体S-3B：(2R)-5,5,5-三氟-2-羟基戊酸苄基酯
向中间体S-3A(4.1551g,24.14mmol)、苄基醇(3.2mL,30.8mmol)在苯(40mL)中的搅拌溶液添加H2SO4(0.28mL,5.25mmol)。将反应混合物加热至50℃保持10h。将反应混合物冷却至室温,然后在冰/水浴中冷却并且然后添加0.5MNaOH(32mL,16.00mmol)。搅拌混合物若干分钟，并以Et2O萃取，以盐水洗涤，干燥(Na2SO4),过滤并减压浓缩。剩余物通过快速色谱纯化(Teledyne ISCOCombiFlash Rf,0％至100％溶剂CH2Cl2/EtOAc,SiO2120g)。浓缩合适的级分提供中间体S-3B(3.88g,61％)，为无色油状物：1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.33-7.44(5H,m),5.25(2H,s),4.28(1H,dt,J＝8.09,4.11Hz),2.85(1H,d,J＝4.77Hz),2.07-2.34(3H,m),1.84-1.96(1H,m)。
中间体S-3C：(2R)-5,5,5-三氟-2-{[(三氟甲基)磺酰基]氧基}戊酸苄基酯
向2,6-二甲基吡啶(2.352mL,20.19mmol)在CH2Cl2(30mL)中的冷(-25℃)的搅拌溶液经2分钟缓慢添加三氟甲磺酸酐(3.18mL,18.85mmol)。反应混合物于-25℃搅拌并且颜色变成黄色/橙色。10min后，经5min滴加中间体S-3B(3.53g,13.46mmol)并且于-25℃搅拌30分钟。反应混合物温热至室温并浓缩至小体积。剩余物以庚烷稀释并直接装至硅胶柱(220g)上，以20％CH2Cl2/庚烷至50％CH2Cl2/庚烷的梯度洗脱。浓缩合适的级分提供中间体S-3C(3.476g,66％)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.33-7.45(5H,m),5.29(2H,d,J＝5.50Hz),5.21(1H,t,J＝5.50Hz),2.04-2.37(4H,m)。
中间体S-3D：2-苯基乙酸叔丁基酯
2-苯基乙酸(12g,88mmol)在t-BuOAc(250mL)中的溶液于1L圆底烧瓶中以过氯酸处理(70％再蒸馏,0.212mL,3.53mmol)并于室温搅拌20小时。溶液非常缓慢地转移至饱和NaHCO3水溶液和Et2O的搅拌混合物。观察到气体发生。分离所得各层并且有机层以饱和NaHCO3水溶液洗洗涤，经MgSO4干燥，过滤，并浓缩得到中间体S-3D(11.6g,68％产率)：1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ7.34-7.29(m,2H),7.28-7.22(m,3H),3.52(s,2H),1.44(s,9H)。
中间体S-3E：(2R,3R)-3-苯基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酸1-苄基酯4-叔丁基酯：
在1L圆底烧瓶中中间体S-3D(8.5g,44.2mmol)在THF(400mL)中的溶液于-78℃浴冷却并经由套管经10分钟以KHMDS溶液(0.5M在甲苯中,97mL,48.6mmol)处理。10分钟后，混合物从-78℃浴除去并置于室温水浴中并搅拌15分钟并且然后再次于-78℃浴中冷却。15分钟后，于100mL圆底烧瓶中经由套管(以20mL THF漂洗)经10min添加中间体S-3C(19.18g,48.6mmol)在THF(50mL)中的溶液。反应混合物变浑浊。反应混合物于-78℃搅拌1小时。反应以饱和NH4Cl水溶液淬灭。反应混合物从-78℃浴除去，以10％LiCl水溶液稀释，并以Et2O萃取。有机层经MgSO4干燥,过滤并浓缩。所得浅棕色残余物溶解于100mL CH2Cl2中并以木炭处理。溶液再次以MgSO4干燥并通过MgSO4(以CH2Cl2漂洗)过滤得到几乎无色的溶液。该CH2Cl2溶液经浓缩并以己烷稀释并于-20℃冰箱中冷却。所得固体经过滤并以冷的己烷(含5％MTBE)漂洗并在烧结玻璃滤器上在氮气流中干燥得到8.16g。固体以40mL己烷和4mL MTBE研磨。白色悬浮液于室温搅拌1小时并于-20℃冷却3小时，然后过滤该白色固体并以冷的10:1己烷:MTBE漂洗液洗涤。所得物质在烧结玻璃滤器上干燥得到中间体S-3E(7.16g,37％产率)，为白色固体：1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ7.32-7.23(m,8H),7.05-6.97(m,2H),4.89-4.76(m,2H),3.69(d,J＝11.4Hz,1H),3.23(ddd,J＝11.2,9.9,3.9Hz,1H),2.19-2.04(m,2H),2.03-1.88(m,2H),1.40(s,9H)。
中间体S-3
在250mL圆底烧瓶中，中间体S-3E(7.16g,16.40mmol)和Pd/C,10％(1.746g,1.640mmol)在乙酸乙酯(35mL)和MeOH(35mL)中的悬浮液使用氢气填充的气球氢化，同时于室温搅拌。当(以HPLC监控)反应完成时，该悬浮液经0.45μm膜过滤并以MeOH和EtOAc漂洗。滤液经浓缩并真空干燥得到中间体S-3(5.65g,99％产率)：MS：m/z＝345[M-1]。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.37-7.26(m,5H),3.67(d,J＝10.5Hz,1H),3.04(td,J＝10.3,3.7Hz,1H),2.38-2.20(m,2H),1.88-1.70(m,2H),1.37(s,9H)。
中间体B-4：(S)-(9-氯-2-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮杂-3-基)氨基甲酸叔丁基酯
中间体B-4A：(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((3-氯-2-硝基苯基)氨基)丙酸
在N2下向1-氯-3-氟-2-硝基苯(2.28g,12.99mmol)和N-α-Boc-β-氨基-L-丙氨酸(2.92g,14.30mmol)在乙醇(30mL)中的搅拌溶液添加碳酸钾(5.40g,39.1mmol)。将悬浮液加热至80℃并伴随搅拌9小时，此时LCMS显示完全反应。反应混合物冷却至室温并且然后真空浓缩。剩余物溶解于水中，以Et2O(2x)萃取，水相冷却于冰中然后以浓HCl酸化至pH 3，以CH2Cl2(4x)萃取，合并的萃取物经干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。得到中间体B-4A(2.89g,62％产率)，为黄色固体：HPLC：RT＝1.967min(Waters SunFire C182.1x30mm,MeOH/H2O/0.1％TFA,2min梯度,波长＝254nm)；MS(ES)：m/z＝304[M-t-Bu+1]+。
中间体B-4B：(S)-3-((2-氨基-3-氯苯基)氨基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸
向中间体B-4A(2.89g,8.03mmol)和氯化铵(饱和水溶液,15mL)在EtOH(100mL)中的搅拌混合物添加铁(1.7992g,32.2mmol)，然后加热至80℃保持1.5hr，此时LCMS显示完全反应。向该冷的反应混合物添加～100mL EtOAc,通过过滤，以EtOAc洗涤。混合物以盐水(100mL)分配，pH以1N HCl调节至pH 3-4，水相以乙酸乙酯(2x200mL)反萃取，合并的有机相经干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。得到中间体B-4B(2.84g)，为深红色固体，其不经进一步纯化用于后续步骤：HPLC：RT＝1.837min(WatersSunFire C182.1x30mm,MeOH/H2O/0.1％TFA,2min梯度,波长＝254nm)；MS(ES)：m/z＝330[M+1]+。
中间体B-4
向中间体B-4B(2.84g,8.61mmol)和TBTU(3.04g,9.47mmol)在DMF(35mL)中的搅拌溶液添加Et3N(3.6mL,25.8mmol)。3h后，LCMS显示完全反应。混合物以EtOAc(300mL)稀释，以10％LiCl(3x100mL)和饱和NaCl水溶液洗涤，并且然后干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩，并真空干燥过夜。剩余物通过快速色谱纯化(Teledyne ISCO CombiFlash Rf,梯为0％至100％，使用溶剂A/B＝庚烷/EtOAc，经12柱体积,SiO280g,作为DCM溶液装载)。得到中间体B-4(1.60g,60％产率))，为黄色固体：HPLC：RT＝1.757min(Waters SunFire C182.1x30mm,MeOH/H2O/0.1％TFA,2min梯度,波长＝254nm)；MS(ES)：m/z＝256[M-t-Bu+H]+；1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.49(br.s.,1H),6.88-6.99(m,2H),6.66(dd,J＝2.75,6.71Hz,1H),5.72(d,J＝4.40Hz,1H),4.53(td,J＝5.06,10.12Hz,1H),3.86-4.04(m,2H),3.47(t,J＝10.56Hz,1H),1.45(s,9H)。
中间体B-5：(S)-(9-(二氟甲基)-2-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮杂-3-基)氨基甲酸叔丁基酯
中间体B-5A：1-(二氟甲基)-3-氟-2-硝基苯
经5min向3-氟-2-硝基苯甲醛(3.0g,17.74mmol)在无水CH2Cl2(90mL)中的冷溶液缓慢添加(二乙基氨基)三氟化硫(5.15mL,39mmol)。所得溶液从冷却浴除去并于室温搅拌1hr。将反应混合物冷却至-78℃并倒入冰(450mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(250mL)的快速搅拌的混合物中。所得两相混合物以二氯甲烷(400mL)稀释并分离有机层。水层以二氯甲烷(250mL)反萃取，合并有机层，以水(1x75mL)、盐水(1x75mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发至干燥。所得粗产物通过硅胶色谱纯化(SP1仪器，在40g ThomsonSINGLESilica套筒上，使用己烷/二氯甲烷梯度)得到中间体B-5A(3.0g,89％)，为黄色油状物：1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ7.73-7.64(m,1H),7.59(dd,J＝7.9,0.5Hz,1H),7.46(t,J＝8.9Hz,1H),7.01(t,J＝55.2Hz,1H)。
中间体B-5B：(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((3-(二氟甲基)-2-硝基苯基)氨基)丙酸
向150mL耐压瓶添加中间体B-5A(2.5g,13.08mmol)、N-α-Boc-beta-氨基-L-丙氨酸(2.95g,14.44mmol)、碳酸钾(5.53g,40.0mmol)和无水EtOH(80mL)。反应混合物以N2短暂地冲洗。将容器牢固的封盖并置于85℃油浴中并且然后加热过夜。反应混合物冷却至室温。真空蒸发溶剂，剩余物在EtOAc(1200mL)和水(200mL)之间分配。通过添加1.0M HCl将水相酸化至pH 2-3，并分离各层。水层以EtOAc(300mL)反萃取，然后合并有机层，以盐水洗涤(1x75mL)，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。得到中间体B-5B(5.1g)，为黄色/红色油状物：HPLC：RT＝3.568min(Luna 2.0x50mm 3μm,0.8mL/min MeOH/H2O/0.1％TFA,4min梯度,波长＝254nm)；MS(ES)：m/z＝398[M+Na]+。
中间体B-5C：(S)-3-((2-氨基-3-(二氟甲基)苯基)氨基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸
在N2下向中间体B-5B(5.1g,13.59mmol)在MeOH(350mL)中的溶液添加钯/碳,10％(1.05g,1.973mmol)和氢氧化钯/碳,20％,Degussa型(1.14g,0.812mmol)。所得悬浮液以N2冲洗，然后以H2(气球)冲洗并在H2(气球)气氛下于室温搅拌。85min后，反应混合物以N2冲洗，然后通过小垫过滤并蒸发至干燥。剩余物溶解于CH2Cl2(75mL)中并蒸发至干燥(重复3x)得到中间体B-5C。HPLC：RT＝1.880min(Luna 2.0x50mm 3μm,0.8mL/min MeCN：水：10mM乙酸铵,4min梯度,波长＝254nm)；MS(ES)：m/z＝346[M+1]+。
中间体B-5
向粗中间体B-5C(4.69g,13.59mmol)在无水CH2Cl2(200mL)中的溶液添加1-羟基-7-氮杂苯并三唑(HOAT,370mg,2.72mmol)。所得溶液以N2充分冲洗，然后以EDC(3.4g,17.74mmol)处理，接着立即以N-甲基吗啉(7.8mL,70.9mmol)冲洗。所得浅黄/橙色溶液以N2充分冲洗，封盖并于室温搅拌过夜。反应混合物经浓缩，且剩余物溶解于CH2Cl2中并蒸发至干燥。剩余物溶解于CH2Cl2中，施加至90g Thomson SINGLE硅胶筒的顶端并以100％CH2Cl2至35％EtOAc/CH2Cl2的线性梯度经10柱体积洗脱。合并含纯产物的级分，浓缩并真空干燥得到产物(985.5mg)，为黄色固体。不纯的级分经浓缩并如下再纯化：溶解在CH2Cl2(15mL)中并施加至90g ThomsonSINGLE硅胶筒的顶端。以从100％CH2Cl2至35％EtOAc/CH2Cl2的线性梯度经10柱体积洗脱柱子。合并含纯产物的级分并蒸发至干燥得到1.03g黄色固体。与先前的干净级分合并提供中间体B-5(2.02g,45％)，为浅黄色固体：HPLC：RT＝2.715min(Luna 2.0x50mm 3μm,0.8mL/min MeCN：水：10mM乙酸铵,4min梯度,波长＝254nm)；MS(ES)：m/z＝326[M-1]-；1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ7.49(br.s.,1H),7.18-7.10(m,1H),7.06(d,J＝7.6Hz,1H),6.95(d,J＝7.9Hz,1H),6.68(t,J＝54.8Hz,1H),5.66(d,J＝6.1Hz,1H),4.60(dt,J＝11.3,5.8Hz,1H),3.99(dt,J＝10.4,5.4Hz,1H),3.81(d,J＝4.9Hz,1H),3.51(t,J＝10.7Hz,1H),1.45(s,9H)。
在表1中的Boc-保护的1,5-苯并二氮杂酮根据中间体B-4或B-5描述的一般方法制备，从所示的适当取代的2-硝基氟苯(化合物i，方案1)起始。
表1
aWaters SunFire C182.1x30mm 2.5μ,MeOH/H2O/0.1％TFA,4min梯度,波长＝220nm.
b Luna C18,50mmx2mm,3μ,CH3CN/H2O/10mM乙酸铵,4min梯度,波长＝254nm
中间体B-10：(S)-(9-环丙基-2-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮杂-3-基)氨基甲酸叔丁基酯
参考美国公开US No.2007/185058A1(2007)。
在N2下向中间体B-8(500mg,1.404mmol)、环丙基硼酸(174mg,2.021mmol)、磷酸钾(1064mg,5.01mmol)和三环己基膦(26.4mg,0.094mmol)在甲苯(10ml)和水(0.5ml)中的搅拌溶液添加乙酸钯(II)(41.0mg,0.182mmol)。混合物以以N2清洗(泵/N2x4)并且然后加热至100℃并搅拌过夜。将反应混合物冷却至室温并且然后在Et2O和H2O分配。分离有机相，水相以Et2O(两次)萃取，合并的有机相以盐水洗涤，以硫酸钠干燥并浓缩得到棕色油状物。粗产物混合物经由ISCO纯化(EtOAC/庚烷的0％至100％，在15分钟，使用40g柱)得到中间体B-10(360mg,81％)：HPLC：RT＝2.76min(Waters SunFireC183.5μ,2.1x30mm,1mL/min MeOH/H2O/0.1％TFA,4min梯度,波长＝254nm)；MS(ES)：m/z＝318[M+1]+；1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.65-7.50(m,1H),7.08-6.82(m,1H),6.68(d,J＝7.9Hz,2H),5.78-5.62(m,1H),4.68-4.44(m,1H),4.05-3.87(m,1H),3.81-3.65(m,1H),3.60-3.38(m,2H),1.91-1.72(m,1H),1.46(s,9H),1.23(t,J＝7.0Hz,1H),0.91(s,2H),0.54-0.30(m,1H)。
中间体B-11：(S)-(9-氰基-2-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮杂-3-基)氨基甲酸叔丁基酯
在配备有冷凝器、隔膜、N2/真空入口和磁力搅拌棒的250mL圆底烧瓶中，氰化锌(394.4mg,3.36mmol)、锌粉(191.4mg,2.93mmol)和双(三叔丁基膦)钯(0)(72.3mg,0.141mmol)在DMA(55mL)中的混合物中间体B-8(991.0mg,2.78mmol)通过真空排气而脱气并回填以氮气(4x)。混合物然后于100℃加热。1.5h后，将反应混合物冷却至室温。混合物以EtOAc(500mL)稀释，以10％LiCl(3x125mL)、盐水(1x125mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤和浓缩，并真空干燥过夜。剩余物通过快速色谱纯化(Teledyne ISCO CombiFlash Rf,0％至100％的梯度，使用溶剂A/B＝庚烷/EtOAc，经12柱体积，SiO240g,作为DCM溶液装载)。得到中间体B-11(721.5mg,86％)为淡黄色固体：HPLC：RT＝0.76min(BEH C182.1x50mm 1.7μ,CH3CN/H2O/0.05％TFA,1min梯度,波长＝254nm)；MS(ES)：m/z＝303[M+1]+；基本峰m/z＝247[M-t-Bu]+；1H NM(400MHz,氯仿-d)δ7.58(br.s.,1H),7.10-7.15(m,1H),7.03-7.10(m,1H),6.93(dd,J＝1.10,8.14Hz,1H),5.74(d,J＝4.40Hz,1H),4.48-4.59(m,1H),4.18(d,J＝6.16Hz,1H),3.91(ddd,J＝3.85,7.21,11.17Hz,1H),3.45-3.54(m,1H),1.45(s,9H)。
中间体B-12：(S)-3-氨基-9-氯-5-(3-环丙基苯基)-4,5-二氢-1H-苯并[b][1,4]二氮杂-2(3H)-酮
中间体B-12A：(S)-(6-氯-1-(3-环丙基苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮杂-3-基)氨基甲酸叔丁基酯
对中间体B-4(201.8mg,0.647mmol)、1-溴-3-环丙基苯(246.7mg,1.252mmol)、Pd2(dba)3(58.5mg,0.064mmol)、2-(二环己基膦基)-2′,4′,6′-三异丙基联苯("X-Phos")(30.7mg,0.064mmol)和碳酸钾(414.7mg,3.00mmol)在t-BuOH(4.0mL)中的搅拌悬浮液进行脱气(泵/N2x3)并且然后加热至80℃过夜。将反应混合物冷却至室温。混合物以EtOAC稀释，通过4μm膜滤器过滤，浓缩，并且然后经真空干燥。剩余物通过快速色谱纯化(Teledyne ISCOCombiFlash Rf,0％至100％的梯度，使用溶剂A/B＝庚烷/EtOAc，经15柱体积，SiO240g,作为DCM溶液装载)。得到中间体B-12A(134.0mg,48％)，为黄褐色(tan)固体：HPLC：RT＝2.218min(Waters SunFire C182.1x30mm,MeOH/H2O/0.1％TFA,2min梯度,波长＝254nm)；MS(ES)：m/z＝372/374[M-t-Bu+1]+；1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.05-7.15(m,1H),6.59(d,J＝7.70Hz,1H),6.47-6.55(m,2H),5.61(d,J＝7.26Hz,1H),4.53-4.65(m,1H),4.26-4.33(m,1H),3.66(dd,J＝9.57,11.77Hz,1H),1.75-1.85(m,1H),1.46(s,9H),0.85-0.97(m,2H),0.57-0.71(m,2H)。
中间体B-12
向中间体B-12A(134.0mg,0.313mmol)在CH2Cl2(2.0mL)中的搅拌溶液添加TFA(1.0mL,12.98mmol)。2h后，LCMS显示完全反应。反应混合物以甲苯稀释，浓缩，并且然后真空干燥过夜。得到中间体B-12(156.1mg,90％)，作为二-TFA溶剂合物：HPLC：RT＝1.777min(LunaC182.5μm 2.0x30mm,MeOH/H2O/0.1％TFA,2min梯度,波长＝254nm)；MS(ES)：m/z＝328[M+1]+。
中间体B-13：(S)-3-氨基-9-氯-5-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)-4,5-二氢-1H-苯并[b][1,4]二氮杂-2(3H)-酮
中间体B-13A：(S)-(6-氯-4-氧代-1-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮杂-3-基)氨基甲酸叔丁基酯
向配备有搅拌棒和橡胶隔膜的48mL高压罐填充中间体B-4(304.4mg,0.976mmol)、Xphos预催化剂(CAS#1028206-56-5)(35.4mg,0.048mmol)、Ruphos(CAS#787618-22-8)(26.1mg,0.056mmol)和碳酸钾(394.4mg,2.85mmol)(在t-BuOH(6.0mL)中)。该混合物通过(真空/N2清洗x4)脱气。向其中添加2-溴-6-(三氟甲基)吡啶(446.7mg,1.977mmol)，除去隔膜并紧密设置Teflon盖，然后加热至100℃，搅拌75min，然后冷却至50℃，并搅拌2天。将反应混合物冷却至室温并以EtOAC稀释，经过过滤，以EtOAc洗涤，浓缩，并且然后经真空干燥。剩余物通过快速色谱纯化(Teledyne ISCO CombiFlash Rf,0％至100％的梯度，使用溶剂A/B＝庚烷/EtOAc，经12柱体积,SiO240g,作为DCM溶液装载)。得到中间体B-13A(322.8mg,72％)，为黄褐色泡沫：HPLC：RT＝1.05min(BEH C182.1x50mm 1.7μ,CH3CN/H2O/0.05％TFA,1min梯度,波长＝254nm)；MS(ES)：m/z＝457[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.86(s,1H),7.69(t,J＝7.81Hz,1H),7.62(dd,J＝1.76,7.70Hz,1H),7.32-7.44(m,3H),7.22(d,J＝7.26Hz,1H),6.51(d,J＝8.80Hz,1H),4.61-4.73(m,1H),4.20-4.33(m,1H),3.74(dd,J＝7.04,11.88Hz,1H),1.36(s,9H)。
中间体B-13
向中间体B-13A(316.3mg,0.692mmol)在CH2Cl2(4mL)中的搅拌溶液添加TFA(2mL,26.0mmol)。4h后，LCMS显示反应完成。混合物以甲苯(10mL)稀释，浓缩然后经周末真空干燥。得到中间体B-13(306.5mg,94％)，为乳状固体，为TFA溶剂合物：HPLC：RT＝0.69min(BEH C182.1x50mm 1.7μ,CH3CN/H2O/0.05％TFA,1min梯度,波长＝254nm)；MS(ES)：m/z＝357[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.47(s,1H),8.42(br.s.,3H),7.73(t,J＝7.92Hz,1H),7.66(dd,J＝1.43,8.03Hz,1H),7.49(dd,J＝1.32,8.14Hz,1H),7.38-7.45(m,1H),7.29(d,J＝7.26Hz,1H),6.58(d,J＝8.80Hz,1H),4.80(t,J＝11.99Hz,1H),4.32(dd,J＝6.93,12.21Hz,1H),3.98(dd,J＝6.93,11.77Hz,1H)。
在表2中5-芳基-1,5-苯并二氮杂酮根据中间体B-12(用于芳基溴)或B-13(用于溴吡啶)显示的一般程序制备，从所示的适当的Boc-保护的-1,5-苯并二氮杂酮和芳基卤开始。
表2
aWaters SunFire C182.1x30mm 2.5μ,MeOH/H2O/0.1％TFA,4min梯度,波长＝220nm.
bWaters SunFire C182.1x30mm 2.5μ,MeOH/H2O/0.1％TFA,2min梯度,波长＝220nm.
c Luna C18,50mmx2mm,3μ,CH3OH/H2O/0.1％TFA,4min梯度,波长＝254nm.
dWaters SunFire C183.5μ,2.1x30mm,1mL/min MeOH/H2O/0.1％TFA,4min梯度,波长＝254nm
eBEH C182.1x50mm 1.7μ,CH3CN/H2O/0.05％TFA,1min梯度,波长＝254nm.
f Luna C182.5μm 2.0x30mm,MeOH/H2O/0.1％TFA,2min梯度,波长＝254nm.
实施例1
(2R,3S)-N-((3S)-6-氯-1-(3-环丙基苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
制备例1A：(2S,3R)-3-(((S)-6-氯-1-(3-环丙基苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮杂-3-基)氨基甲酰基)-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酸叔丁基酯
向中间体B-12(64.8mg,0.147mmol)、中间体S-1(55.4mg,0.151mmol)和TBTU(54.8mg,0.171mmol)在DMF(1.0mL)中的搅拌溶液添加Et3N(0.08mL,0.574mmol)。2hr后，反应混合物以EtOAC稀释，以H2O、10％LiCl(3x)和饱和NaCl洗涤，然后干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩，经周末真空干燥。得到制备例1A(104.8mg,100％)，为淡黄色固体，其不经进一步纯化以其本身使用：HPLC：RT＝2.343min(Waters SunFire C182.1x30mm,MeOH/H2O/0.1％TFA,2min梯度,波长＝254nm)；MS(ES)：m/z＝676[M+1]+。
制备例1B：(2S,3R)-3-(((S)-6-氯-1-(3-环丙基苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮杂-3-基)氨基甲酰基)-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酸
向制备例1A(104.8mg,0.155mmol)在CH2Cl2(1mL)中的搅拌溶液添加TFA(1mL,12.98mmol)。2.5hr后，LCMS显示完全反应。反应混合物以甲苯(10mL)稀释，浓缩，并且然后真空干燥过夜。得到制备例1B(110.3mg,97％)，为TFA溶剂合物：HPLC：RT＝2.208min(Waters SunFire C182.1x30mm,MeOH/H2O/0.1％TFA,2min梯度,波长＝254nm)；MS(ES)：m/z＝620[M+1]+。
实施例1
向制备例1B(110.3mg,0.150mmol)、EDC(92.0mg,0.480mmol)和HOBT(71.9mg,0.470mmol)在THF(2.2mL)中的搅拌溶液添加氨(2.0M在IPA中，0.45mL,0.900mmol)。1.5hr后，LCMS显示完全反应。反应混合物在EtOAc和H2O之间分配，分离有机相，水相以EtOAc萃取，合并的有机相以饱和NaCl洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩得到无色固体。剩余物通过快速色谱纯化(Teledyne ISCO CombiFlash Rf，0％至40％的梯度，使用溶剂A/B＝CH2Cl2/丙酮，经20柱体积，SiO212g,作为DCM溶液装载)。收集含产物的各级分并浓缩，真空干燥过夜。该物质进一步通过制备型SFC色谱纯化(Berger SFC MGII,IC 25x3cm ID,5μm,85/15CO2/MeOH,85mL/min,检测器波长：220nm)。得到实施例1(27.9mg,30％)，为无色固体：HPLC：RT＝2.150min(MeOH/H2O/0.1％TFA,WatersSunFire C182.1x30mm,2min梯度,波长＝254nm)；MS(ES)：m/z＝619[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.88(s,1H),8.64(d,J＝7.70Hz,1H),7.65(br.s.,1H),7.44(dd,J＝1.32,8.14Hz,1H),7.23(t,J＝8.14Hz,1H),7.13(s,1H),7.06-7.11(m,2H),6.57(d,J＝7.92Hz,1H),6.41-6.45(m,2H),4.50(td,J＝7.26,12.32Hz,1H),3.94(dd,J＝6.82,9.90Hz,1H),3.81(dd,J＝10.12,12.10Hz,1H),2.38-2.47(m,3H),2.03-2.23(m,3H),1.77-1.86(m,1H),1.52-1.67(m,3H),1.38-1.50(m,1H),0.87-0.92(m,2H),0.58-0.65(m,1H),0.52-0.58(m,1H)。
实施例2
(2R,3R)-N-((3S)-1-(3-氰基苯基)-6-(二氟甲基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-苯基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
制备例2A：(2R,3R)-3-(((S)-1-(3-氰基苯基)-6-(二氟甲基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮杂-3-基)氨基甲酰基)-6,6,6-三氟-2-苯基己酸叔丁基酯
在N2下向干燥小瓶中添加中间体B-19(98mg,0.222mmol)、中间体S-3(79mg,0.228mmol),HOAT(11mg,0.081mmol)和无水CH2Cl2(3mL)。反应混合物以N2非常短暂地冲洗并且然后以N-甲基吗啉(150μl,1.364mmol)处理。20秒后，添加EDC(54mg,0.282mmol)。反应混合物再次以N2冲洗，封盖并于室温搅拌。3.5hr后，蒸发溶剂。剩余物溶解于CH2Cl2(5mL)中并施加至25g Thomson SINGLE硅胶筒的顶端并以3柱体积的CH2Cl2洗脱，接着以100％CH2Cl2至40％EtOAc/CH2Cl2的线性梯度经5柱体积洗脱。得到制备例2A(81mg,56％)，为白色固体：HPLC：RT＝3.923min(Luna 2.0x50mm 3μm,0.8mL/min MeCN：水：10mM乙酸铵,4min梯度,波长＝254nm)；MS(ES)：m/z＝657[M+1]+。
制备例2B：(2R,3R)-3-(((S)-1-(3-氰基苯基)-6-(二氟甲基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b][1,4]二氮杂-3-基)氨基甲酰基)-6,6,6-三氟-2-苯基己酸
向制备例2A(81mg,0.123mmol)在无水CH2Cl2(7mL)中的溶液伴随剧烈搅拌添加TFA(3mL,38.9mmol)。1.5h后，将另外的TFA(1.75mL)添加至反应混合物。反应混合物于室温再静置60min。反应混合物经浓缩，溶解在少量CH2Cl2(10mL)中并添加无水甲苯(30mL)。将混合物蒸发至干燥过夜。得到制备例2B(75.3mg,>99％)，为白色固体：HPLC：RT＝2.345min(Luna 2.0x50mm 3μm,0.8mL/min MeCN：水：10mM乙酸铵,4min梯度,波长＝254nm)；MS(ES)：m/z＝601[M+1]+。
实施例2
向制备例2B(74mg,0.123mmol)在新鲜蒸馏的THF(2.0mL)中的溶液添加HOAT(70.4mg,0.517mmol)、EDC(95mg,0.496mmol)和氨(2.0M在2-丙醇中,375μL,0.750mmol)。所得黄色悬浮液于室温搅拌。1h后，LCMS显示所需的产物。反应混合物以THF(5mL)稀释并且除去搅拌棒。另外添加NH3(200μL)并伴随剧烈旋流，并且所得悬浮液于室温静置1hr。反应混合物经浓缩，溶解在CH2Cl2(25mL)中，并蒸发干燥(两次)。接下来，添加CH2Cl2(25mL)并且通过过滤除去固体。将滤液施加至25g Thomson SINGLE硅胶筒的顶端并以从100％CH2Cl2至50％EtOAc/CH2Cl2的线性梯度经10柱体积洗脱，于40％EtOAc/CH2Cl2保持，同时所需产物从所述柱洗脱掉。得到实施例2(70mg,94％)，为无色固体：HPLC：RT＝2.84min(MeCN/H2O/10mM NH4OAc,Luna C182x50mm,4min梯度,波长＝254nm)；MS m/z＝600[M+1]+；598[M-1]-；1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ7.94(s,1H),7.65-7.58(m,1H),7.56-7.44(m,5H),7.35-7.29(m,1H),7.27-7.22(m,2H),7.21-7.17(m,1H),7.12(d,J＝7.0Hz,1H),6.94-6.66(m,3H),5.57(br.s.,2H),4.59(dt,J＝11.5,6.8Hz,1H),3.59-3.53(m,1H),3.51-3.40(m,2H),2.50(dd,J＝11.3,10.2Hz,1H),2.06-1.95(m,3H),1.94-1.85(m,1H)。
实施例3
(2R,3S)-N-((3S)-1-(3-氯苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例3由中间体B-14(38mg,0.131mmol)和中间体S-1(53mg,0.144mmol)根据实施例1显示的一般程序制备。产物通过制备型SFC色谱纯化(Berger SFC MGII,手性IC 25x3cm ID,5μm,90/10CO2/MeOH,85.0mL/min,检测器波长：220nm)。得到实施例3(8mg,10％)：HPLC：RT＝2.20min(MeOH/H2O/0.1％TFA,Waters SunFire C182.1x30mm,2min梯度,波长＝220nm)；MS(ES)：m/z＝579[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.06(s,1H),8.64(d,J＝8.1Hz,1H),7.65(br.s.,1H),7.38-7.31(m,1H),7.28-7.18(m,4H),7.14(br.s.,1H),6.86(dd,J＝7.9,1.3Hz,1H),6.61(t,J＝2.2Hz,1H),6.55(dd,J＝8.5,2.1Hz,1H),4.63-4.54(m,1H),4.00-3.92(m,1H),3.91-3.82(m,1H),2.24-2.05(m,4H),1.68-1.53(m,4H),1.46(d,J＝11.0Hz,1H)。
实施例4
(2R,3S)-N-((3S)-1-(4-氯苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例4由中间体B-15(50mg,0.175mmol)和中间体S-1(71mg,0.193mmol)根据实施例1显示的一般程序制备。产物通过制备型SFC色谱纯化(Berger SFC MGII,手性AS-H 25x3cm ID,5μm,88/12CO2/MeOH,85.0mL/min,检测器波长：220nm)。得到实施例4(8mg,8％)：HPLC：RT＝2.16min(MeOH/H2O/0.1％TFA,Waters SunFire C182.1x30mm,2min梯度,波长＝220nm)；MS(ES)：m/z＝579[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.06(s,1H),8.67(d,J＝8.1Hz,1H),7.65(s,1H),7.36-7.10(m,8H),6.69-6.60(m,2H),4.59(dt,J＝12.4,7.2Hz,1H),3.94(dd,J＝10.2,6.7Hz,1H),3.88-3.79(m,1H),2.24-2.04(m,4H),1.66-1.54(m,4H),1.45(d,J＝11.2Hz,1H)。
实施例5
(2R,3S)-N-((3S)-1-(3-环丙基苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例5由中间体B-16(78mg,0.267mmol)和中间体S-1(108mg,0.294mmol)根据实施例1显示的一般程序制备。产物通过制备型SFC色谱纯化(Berger SFC MGII,手性IC 25x3cm ID,5μm,85/15CO2/MeOH,85.0mL/min,检测器波长：220nm)。得到实施例5(32mg,20％)：HPLC：RT＝2.21min(MeOH/H2O/0.1％TFA,Waters SunFire C182.1x30mm,2min梯度,波长＝220nm)；MS(ES)：m/z＝585[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.01(s,1H),8.65(d,J＝7.9Hz,1H),7.65(s,1H),7.32-7.25(m,1H),7.23-7.17(m,2H),7.16-7.11(m,2H),7.06(t,J＝8.1Hz,1H),6.54(d,J＝7.7Hz,1H),6.42-6.36(m,2H),4.57(dt,J＝12.5,7.3Hz,1H),3.98-3.89(m,1H),3.83(dd,J＝12.3,10.3Hz,1H),2.48-2.40(m,2H),2.25-2.05(m,3H),1.87-1.74(m,1H),1.68-1.53(m,3H),1.52-1.41(m,1H),1.32-1.21(m,1H),0.95-0.82(m,2H),0.65-0.50(m,1H)。
实施例6
(2R,3S)-N-((3S)-1-(4-氟苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例6由中间体B-17(45mg,0.167mmol)和中间体S-1(67mg,0.184mmol)根据实施例1显示的一般程序制备。产物通过制备型SFC色谱纯化(Berger SFC MGII,手性IC 25x3cm ID,5μm,90/10CO2/MeOH,85.0mL/min,检测器波长：220nm)。得到实施例6(8mg,9％)：HPLC：RT＝2.10min(MeOH/H2O/0.1％TFA,Waters SunFire C182.1x30mm,2min梯度,波长＝220nm)；MS(ES)：m/z＝563[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.04(s,1H),8.67(d,J＝7.9Hz,1H),7.65(s,1H),7.32-7.24(m,1H),7.22-7.16(m,2H),7.14(s,1H),7.12-7.03(m,3H),6.73-6.64(m,2H),4.62-4.52(m,1H),3.96(dd,J＝9.9,6.8Hz,1H),3.79(dd,J＝12.3,10.1Hz,1H),2.47-2.40(m,2H),2.24-2.05(m,3H),1.66-1.53(m,3H),1.45(d,J＝10.3Hz,1H),1.32-1.22(m,1H),0.92-0.84(m,1H)。
实施例7
(2R,3S)-N-((3S)-1-(3-氯苯基)-6-环丙基-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例7由中间体B-18(75mg,0.17mmol)和中间体S-1(68.3mg,0.178mmol)根据实施例1显示的一般程序制备。产物通过制备型SFC色谱纯化(BergerSFC MGII,手性OD 25x3cm ID,5μm,82/18CO2/MeOH,85.0mL/min,检测器波长：220nm)。得到实施例7(30mg,28％)：HPLC：RT＝3.756min(Waters SunFireC183.5μ,2.1x30mm,1mL/min MeOH/H2O/0.1％TFA,4min梯度,波长＝254nm)；MS(ES)：m/z＝619.02[M+1]+；1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.28-7.14(m,2H),7.03(d,J＝7.9Hz,2H),6.90-6.79(m,1H),6.74-6.53(m,2H),4.72(dd,J＝11.9,7.3Hz,1H),4.06-3.85(m,2H),2.74-2.50(m,2H),2.50-2.30(m,1H),2.30-2.05(m,4H),1.90-1.69(m,3H),1.69-1.53(m,1H),1.19-0.88(m,3H),0.87-0.65(m,2H)。
实施例8
(2R,3R)-N-((3S)-6-氰基-4-氧代-1-(3-(三氟甲基)苯基)-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-苯基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例8由中间体B-24(115.8mg,0.252mmol)和中间体S-3(87mg,0.252mmol)根据实施例1显示的一般程序制备。产物通过制备型SFC色谱纯化(Berger SFC MGII,手性IC 25x3cm ID,5μm,83/17CO2/MeOH,85.0mL/min,检测器波长：220nm)。得到实施例8(42.2mg,26％)：HPLC：RT＝1.01min(CH3CN/H2O/0.05％TFA,BEH C182.1x50mm 1.7μ,1min梯度,波长＝254nm)；MS(ES)：m/z＝618[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.46(s,1H),8.28(d,J＝7.48Hz,1H),7.79(dd,J＝1.54,7.70Hz,1H),7.68(s,1H),7.47(dd,J＝1.43,8.25Hz,1H),7.43(t,J＝7.92Hz,1H),7.33-7.39(m,3H),7.18-7.32(m,4H),6.93(s,1H),6.69-6.75(m,2H),4.28(td,J＝7.46,11.28Hz,1H),3.59(d,J＝11.22Hz,1H),3.17-3.26(m,3H),2.35-2.45(m,1H),2.16-2.31(m,1H),1.64-1.75(m,2H)。
实施例9
(2R,3R)-N-((3S)-1-(3-氯-5-氰基苯基)-6-(二氟甲基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-苯基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例9由中间体B-21(31.6mg,0.087mmol)和中间体S-3(31mg,0.090mmol)根据实施例2显示的一般程序制备。产物通过硅胶色谱纯化。得到实施例9(17.3mg,30.2％)：HPLC：RT＝3.0min(MeCN/H2O/10mM NH4OAc,Luna C182x50mm,4min梯度,波长＝254nm)；MS m/z＝634/636[M+1]+；632/634[M-1]-；1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ7.93(s,1H),7.67-7.61(m,1H),7.55-7.49(m,5H),7.36(t,J＝7.9Hz,1H),7.27(s,1H),7.15-7.12(m,1H),7.06(d,J＝6.9Hz,1H),6.96-6.53(m,3H),5.55(d,J＝4.0Hz,2H),4.57(dt,J＝11.5,6.7Hz,1H),3.58-3.50(m,1H),3.50-3.36(m,2H),2.52-2.37(m,1H),2.10-1.95(m,3H),1.95-1.80(m,1H)。
实施例10
(2R,3S)-N-((3S)-1-(3-氰基苯基)-6-(二氟甲基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例10由中间体B-19(49mg,0.111mmol)和中间体S-1(45mg,0.123mmol)的40％混合物(60％的对映异构体)根据实施例2显示的一般程序制备。产物通过制备型SFC色谱纯化(Berger SFC MGII,AD 25x2.1cm ID,5μm,90/10CO2/IPA,60.0mL/min,检测器波长：220nm)。得到实施例10(7.9mg,11.5％)：HPLC：RT＝2.86min(MeCN/H2O/10mM NH4OAc,LunaC182x50mm,4min梯度,波长＝254nm)；MS m/z＝620[M+1]+；618[M-1]-；1HNMR(500MHz,氯仿-d)δ8.33(br.s.,1H),8.00(d,J＝6.1Hz,1H),7.55(d,J＝7.5Hz,1H),7.42-7.29(m,3H),7.19(d,J＝7.8Hz,1H),7.00-6.73(m,3H),6.12(br.s.,1H),5.98(br.s.,1H),4.90(dt,J＝11.6,6.7Hz,1H),4.37(dd,J＝9.4,6.6Hz,1H),3.71(dd,J＝11.4,9.6Hz,1H),2.96-2.89(m,1H),2.62-2.43(m,1H),2.34-2.17(m,1H),2.15-1.84(m,5H),1.78-1.69(m,2H),1.23(d,J＝6.1Hz,1H)。
实施例11
(2R,3R)-N-((3S)-1-(3-氰基-5-甲基苯基)-6-(二氟甲基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-苯基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例11由中间体B-22(57mg,0.125mmol)和中间体S-3(44mg,0.127mmol)根据实施例2显示的一般程序制备。产物通过硅胶色谱纯化。得到实施例11(28mg,35.1％)：HPLC：RT＝2.92min(MeCN/H2O/10mM NH4OAc,Luna C182x50mm,4min梯度,波长＝254nm)；MS m/z＝614[M+1]+；612[M-1]-；1HNMR：1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ7.81(s,1H),7.63-7.56(m,1H),7.54-7.49(m,4H),7.47(d,J＝7.6Hz,1H),7.35-7.29(m,1H),7.27-7.21(m,1H),7.01(s,1H),6.94(d,J＝7.0Hz,1H),6.79(t,J＝54.5Hz,1H),6.59-6.47(m,2H),5.53(d,J＝9.2Hz,2H),4.57(dt,J＝11.5,6.8Hz,1H),3.55(d,J＝10.7Hz,1H),3.43(dd,J＝9.9,6.6Hz,1H),3.38(td,J＝10.5,3.2Hz,1H),2.47(dd,J＝11.3,10.1Hz,1H),2.30(s,3H),2.15-1.85(m,4H)。
实施例12
(2R,3S)-N-((3S)-6-(二氟甲基)-1-(3-(二氟甲基)苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例12由中间体B-20(59.1mg,0.126mmol)、以及中间体S-1(46.3mg,0.126mmol)的40％混合物(60％的对映异构体)根据实施例2显示的一般程序制备。产物通过制备型SFC色谱纯化(Berger SFC MGII,AD 25x2.1cm ID,5μm,90/10CO2/IPA,60.0mL/min,检测器波长：220nm)。得到实施例12(4.9mg,6.0％)：RT＝3.02min(Luna C18,50mmx2mm,3μ,CH3CN/H2O/10mM乙酸铵,4min梯度,波长＝254nm)；MS(ES)：m/z＝645[M+1]+；m/z＝643[M-1]-；1H NMR(500MHz,丙酮-d6)δ9.04-8.67(m,1H),7.89(d,J＝7.6Hz,1H),7.65(d,J＝6.6Hz,1H),7.51-7.33(m,3H),7.23(s,1H),7.15-7.06(m,1H),6.99-6.65(m,3H),6.59(br.s.,1H),4.92-4.80(m,1H),4.23(dd,J＝9.8,6.9Hz,1H),3.94(ddd,J＝12.1,9.9,2.3Hz,1H),2.78-2.70(m,1H),2.67-2.57(m,1H),2.47-2.34(m,1H),2.30-2.16(m,3H),1.90-1.62(m,4H)。
实施例13
(2R,3R)-N-(1-(3-氰基-5-氟苯基)-6-(二氟甲基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-苯基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例13由中间体B-23(180mg,0.391mmol)和中间体S-3(126mg,0.364mmol)根据实施例2显示的一般程序制备。产物通过制备型HPLC纯化(Luna Axia 30x100mm柱，从35％溶剂B至100％溶剂B，经12min，40mL/min，于254nm检测。溶剂A为10％MeOH/90％水，含0.1％TFA，溶剂B为90％MeOH和10％水，含0.1％TFA)。得到实施例13(73.7mg,30.9％)：HPLC：RT＝2.88min(Luna C18,50mmx2mm,3μ,CH3CN/H2O/10mM乙酸铵,4min梯度,波长＝254nm)；MS(ES)：m/z＝618[M+1]+；m/z＝616[M-1]-；1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.95(s,1H),7.61(dd,J＝8.8,5.0Hz,1H),7.55-7.45(m,5H),7.45-7.28(m,2H),7.14(d,J＝7.0Hz,1H),7.01-6.60(m,2H),6.49(s,1H),6.39(dt,J＝11.3,2.3Hz,1H),6.04(br.s.,1H),5.69(br.s.,1H),4.58(dt,J＝11.5,6.6Hz,1H),3.64-3.52(m,1H),3.50-3.29(m,2H),2.55-2.40(m,1H),2.13-1.82(m,5H)。
实施例14
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-6-氟-4-氧代-1-(3-(三氟甲基)苯基)-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例14由中间体B-25(140mg,0.412mmol)和中间体S-2(160mg,0.494mmol)根据实施例1显示的一般程序制备。产物通过制备型SFC色谱纯化(Berger SFC MGII,手性IA 25x2cm ID,5μm,90/10CO2/MeOH,50.0mL/min,检测器波长：220nm)。得到实施例14(64mg,26％)：HPLC：RT＝3.48min(MeOH/H2O/0.1％TFA,Waters SunFire C182.1x30mm,2min梯度,波长＝220nm)；MS(ES)：m/z＝589[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.05(br.s.,1H),8.54(d,J＝7.7Hz,1H),7.60(br.s.,1H),7.44(t,J＝7.9Hz,1H),7.32-7.26(m,2H),7.20(d,J＝7.7Hz,1H),7.08-7.03(m,1H),6.99-6.91(m,3H),4.62-4.53(m,1H),4.12-4.03(m,2H),3.97-3.88(m,1H),2.46-2.38(m,2H),2.15(d,J＝4.6Hz,1H),1.65-1.53(m,2H),1.50-1.38(m,1H),1.00-0.79(m,1H),0.55(d,J＝7.3Hz,1H),0.38-0.26(m,2H),0.01(d,J＝7.9Hz,1H),-0.13(d,J＝8.1Hz,1H)。
实施例15
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-1-(3-环丙基苯基)-6-氟-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例15由中间体B-26(96mg,0.309mmol)和中间体S-2(120mg,0.371mmol)根据实施例1显示的一般程序制备。产物通过制备型SFC色谱纯化(Berger SFC MGII,手性IC 25x3cm ID,5μm,80/20CO2/MeOH,85.0mL/min,检测器波长：220nm)。得到实施例15(28mg,15％)：HPLC：RT＝3.55min(MeOH/H2O/0.1％TFA,Waters SunFire C182.1x30mm,2min梯度,波长＝220nm)；MS(ES)：m/z＝561[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.97(s,1H),8.52(d,J＝7.7Hz,1H),7.60(br.s.,1H),7.28-7.17(m,2H),7.13-7.06(m,1H),6.95(dd,J＝9.8,3.0Hz,2H),6.58(d,J＝7.7Hz,1H),6.51-6.42(m,2H),4.59-4.48(m,1H),4.02-3.93(m,1H),3.88-3.79(m,1H),2.47-2.37(m,3H),2.15(d,J＝4.6Hz,1H),1.89-1.78(m,1H),1.59(d,J＝7.5Hz,2H),1.50-1.39(m,1H),0.99-0.85(m,3H),0.70-0.47(m,3H),0.39-0.28(m,2H),0.05--0.03(m,1H),-0.13(d,J＝9.0Hz,1H)。
实施例16
(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-1-(3,4-二氯苯基)-6-氟-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例16由中间体B-27(56mg,0.166mmol)和中间体S-2(64mg,0.199mmol)根据实施例1显示的一般程序制备。产物通过制备型SFC色谱纯化(Berger SFC MGII,手性IC 25x3cm ID,5μm,80/20CO2/MeOH,85.0mL/min,检测器波长：220nm)。得到实施例16(20mg,19％)：HPLC：RT＝3.57min(MeOH/H2O/0.1％TFA,Waters SunFire C182.1x30mm,2min梯度,波长＝220nm)；MS(ES)：m/z＝589[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.05(br.s.,1H),8.52(d,J＝7.7Hz,1H),7.60(br.s.,1H),7.44(d,J＝9.0Hz,2H),7.34-7.21(m,3H),7.12-7.03(m,1H),6.97(br.s.,1H),6.90(d,J＝2.6Hz,1H),6.63(dd,J＝9.0,2.9Hz,1H),4.56(dt,J＝12.6,7.2Hz,1H),4.00(dd,J＝10.3,6.8Hz,1H),3.92-3.79(m,1H),2.39(br.s.,1H),2.15(dd,J＝10.7,5.8Hz,1H),1.69-1.51(m,2H),1.50-1.39(m,1H),1.33-1.22(m,1H),0.99-0.82(m,1H),0.53(br.s.,1H),0.36-0.24(m,2H),0.06--0.07(m,1H),-0.08--0.17(m,1H)。
实施例17
(2R,3S)-N-((3S)-1-(3-氰基苯基)-6-氟-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例17由中间体B-28(90mg,0.304mmol)和中间体S-1(122mg,0.334mmol)根据实施例1显示的一般程序制备。产物通过制备型SFC色谱纯化(Berger SFC MGIII,手性IC 25x3cm ID,5μm,92/8CO2/MeOH,140.0mL/min,检测器波长：220nm)。得到实施例17(33mg,18％)：HPLC：RT＝1.92min(MeOH/H2O/0.1％TFA,Waters SunFire C182.1x30mm,2min梯度,波长＝220nm)；MS(ES)：m/z＝588[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.96(br.s.,1H),8.64(d,J＝7.7Hz,1H),7.67(s,1H),7.54(d,J＝8.1Hz,1H),7.46-7.36(m,1H),7.29(d,J＝7.3Hz,2H),7.20(d,J＝7.3Hz,1H),7.15(br.s.,1H),7.06(s,1H),6.93(dd,J＝8.6,2.0Hz,1H),4.55(dt,J＝12.2,7.3Hz,1H),4.08(q,J＝5.3Hz,1H),4.04-3.97(m,1H),3.95-3.83(m,1H),2.49-2.39(m,2H),2.27-1.98(m,3H),1.72-1.52(m,3H),1.51-1.37(m,1H)。
实施例18
(2R,3R)-N-((3S)-1-(3-氰基苯基)-6-氟-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-苯基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例18由中间体B-28(90mg,0.334mmol)和中间体S-3(116mg,0.334mmol)根据实施例1显示的一般程序制备。产物通过制备型SFC色谱纯化(Berger SFC MGIII,AD-H 25x3cm,5μm,CO2/MeOH＝85/15,200mL/min,检测器波长：220nm)。得到实施例18(29mg,16％)：HPLC：RT＝1.84min(MeOH/H2O/0.1％TFA,Waters SunFire C182.1x30mm,2min梯度,波长＝220nm)；MS(ES)：m/z＝568[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.07(s,1H),8.27(d,J＝7.7Hz,1H),7.68(br.s.,1H),7.43-7.36(m,3H),7.35-7.28(m,4H),7.27-7.22(m,2H),7.00-6.90(m,2H),6.83-6.74(m,2H),4.32(dt,J＝11.7,7.2Hz,1H),3.60(d,J＝11.4Hz,1H),3.30-3.21(m,1H),3.20-3.09(m,1H),2.43-2.35(m,1H),2.32-2.20(m,2H),1.77-1.60(m,4H)。
实施例19
(2R,3S)-N-((3S)-6-氯-1-(4-氯苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例19由中间体B-30(69mg,0.215mmol)和中间体S-2(77mg,0.237mmol)根据实施例1显示的一般程序制备。产物通过制备型SFC色谱纯化(Berger SFC MGII,IC 25x3cm,5μm,CO2/MeOH＝80/20,85mL/min,检测器波长：220nm)。得到实施例19(7.4mg,6％)：HPLC：RT＝2.09min(MeOH/H2O/0.1％TFA,Waters SunFire C182.1x30mm,2min梯度,波长＝220nm)；MS(ES)：m/z＝571[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.89(s,1H),8.53(d,J＝7.9Hz,1H),7.60(br.s.,1H),7.48(dd,J＝7.9,1.3Hz,1H),7.33-7.21(m,3H),7.16-7.09(m,1H),6.97(br.s.,1H),6.70(d,J＝9.0Hz,2H),4.55-4.41(m,1H),4.00-3.91(m,1H),3.89-3.77(m,1H),2.55(s,1H),2.42(d,J＝7.3Hz,2H),2.14(s,1H),1.58(br.s.,2H),1.44(br.s.,1H),1.00-0.79(m,1H),0.52(br.s.,1H),0.41-0.22(m,2H),-0.01(br.s.,1H),-0.12(br.s.,1H)。
实施例20
(2R,3S)-N-((3S)-6-氯-4-氧代-1-(3-(三氟甲基)苯基)-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例20由中间体B-32(72mg,0.204mmol)和中间体S-1(82mg,0.224mmol)根据实施例1显示的一般程序制备。产物通过制备型SFC色谱纯化(Berger SFC MGII,手性ID 25x3cm ID,5μm,92/8CO2/MeOH,85.0mL/min,检测器波长：220nm)。得到实施例20(44mg,32％)：HPLC：RT＝2.15min(MeOH/H2O/0.1％TFA,Waters SunFire C182.1x30mm,2min梯度,波长＝220nm)；MS(ES)：m/z＝647[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.96(s,1H),8.66(d,J＝7.7Hz,1H),7.67(s,1H),7.54(d,J＝6.8Hz,1H),7.44(t,J＝8.0Hz,1H),7.35-7.26(m,1H),7.24-7.17(m,2H),6.97-6.82(m,2H),4.60-4.50(m,1H),4.09-4.00(m,1H),3.95-3.86(m,1H),2.48-2.40(m,2H),2.25-2.09(m,3H),1.68-1.53(m,3H),1.52-1.40(m,1H)。
实施例21
(2R,3S)-N-((3S)-6-氯-4-氧代-1-(3-(三氟甲基)苯基)-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例21由中间体B-32(72mg,0.204mmol)和中间体S-2(73mg,0.224mmol)根据实施例1显示的一般程序制备。产物通过制备型SFC色谱纯化(Berger SFC MGII,手性ID 25x3cm ID,5μm,80/20CO2/MeOH,85.0mL/min,检测器波长：220nm)。得到实施例21(43mg,34％)：HPLC：RT＝2.14min(MeOH/H2O/0.1％TFA,Waters SunFire C182.1x30mm,2min梯度,波长＝220nm)；MS(ES)：m/z＝605[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.91(s,1H),8.52(d,J＝7.7Hz,1H),7.60(s,1H),7.53(dd,J＝8.1,1.3Hz,1H),7.44(t,J＝7.8Hz,1H),7.30(t,J＝8.0Hz,1H),7.20(d,J＝8.1Hz,2H),7.01-6.87(m,3H),4.55-4.44(m,1H),4.09-4.00(m,1H),3.97-3.88(m,1H),2.46-2.35(m,3H),2.24-2.09(m,1H),1.59(d,J＝6.6Hz,2H),1.50-1.39(m,1H),0.98-0.89(m,1H),0.54(br.s.,1H),0.39-0.27(m,2H),0.05--0.04(m,1H),-0.13(d,J＝8.4Hz,1H)。
实施例22
(2R,3R)-N-((3S)-6-氯-4-氧代-1-(3-(三氟甲基)苯基)-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-苯基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例22由中间体B-32(72mg,0.204mmol)和中间体S-3(78mg,0.224mmol)根据实施例1显示的一般程序制备。产物通过制备型SFC色谱纯化(Berger SFC MGII,手性IC 25x3cm ID,5μm,88/12CO2/MeOH,85.0mL/min,检测器波长：220nm)。得到实施例22(42mg,32％)：HPLC：RT＝2.11min(MeOH/H2O/0.1％TFA,Waters SunFire C182.1x30mm,2min梯度,波长＝220nm)；MS(ES)：m/z＝627[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.91(br.s.,1H),8.28(d,J＝7.7Hz,1H),7.68(s,1H),7.51-7.40(m,2H),7.39-7.34(m,2H),7.33-7.21(m,4H),7.21-7.08(m,2H),6.94(s,1H),6.76-6.68(m,2H),4.22(dt,J＝11.8,7.4Hz,1H),3.59(d,J＝11.2Hz,1H),3.29-3.12(m,3H),2.45-2.35(m,1H),2.32-2.16(m,1H),1.77-1.62(m,2H)。
实施例23
(2R,3S)-N-((3S)-6-氯-1-(3-氰基苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例23由中间体B-33(108mg,0.345mmol)和中间体S-1(139mg,0.380mmol)根据实施例1显示的一般程序制备。产物通过制备型SFC色谱纯化(Berger SFC MGIII,手性IC 25x3cm ID,5μm,CO2/MeOH＝90/10,120mL/min,检测器波长：220nm)。得到实施例23(32mg,15％)：HPLC：RT＝1.93min(MeOH/H2O/0.1％TFA,Waters SunFire C182.1x30mm,2min梯度,波长＝220nm)；MS(ES)：m/z＝604[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.11(s,1H),8.66(d,J＝7.7Hz,1H),7.66(s,1H),7.49-7.36(m,1H),7.34-7.24(m,3H),7.19-6.89(m,4H),4.63(dt,J＝12.4,7.2Hz,1H),4.14-4.00(m,2H),3.96-3.79(m,1H),2.48-2.39(m,2H),2.26-2.01(m,3H),1.71-1.53(m,3H),1.52-1.38(m,1H)。
实施例24
(2R,3R)-N-((3S)-6-氯-1-(3-氰基苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-苯基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例24由中间体B-33(108mg,0.345mmol)和中间体S-3(131mg,0.380mmol)根据实施例1显示的一般程序制备。产物通过制备型SFC色谱纯化(Berger SFC MGIII,AD-H 25x3cm,5μm,CO2/MeOH＝75/25,150mL/min,检测器波长：220nm)。得到实施例24(38mg,19％)：HPLC：RT＝1.91min(MeOH/H2O/0.1％TFA,Waters SunFire C182.1x30mm,2min梯度,波长＝220nm)；MS(ES)：m/z＝584[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.94(s,1H),8.27(d,J＝7.5Hz,1H),7.69(s,1H),7.49(dd,J＝8.0,1.2Hz,1H),7.42-7.36(m,2H),7.35-7.28(m,3H),7.25(t,J＝8.0Hz,1H),7.11(d,J＝7.0Hz,1H),6.94(br.s.,1H),6.84-6.74(m,2H),4.23(dt,J＝11.2,7.5Hz,1H),3.59(d,J＝11.2Hz,1H),3.29-3.20(m,2H),3.19-3.06(m,2H),2.38(br.s.,1H),2.31-2.17(m,1H),1.76-1.59(m,2H)。
实施例25
(2R,3S)-N-((3S)-6-氯-1-(3-氰基苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例25由中间体B-33(119mg,0.382mmol)和中间体S-2(136mg,0.420mmol)根据实施例1显示的一般程序制备。产物通过制备型SFC色谱纯化(Berger SFC MGII,手性IC 25x3cm ID,5μm,82/18CO2/MeOH,85.0mL/min,检测器波长：220nm)。得到实施例25(30mg,13％)：HPLC：RT＝1.93min(MeOH/H2O/0.1％TFA,Waters SunFire C182.1x30mm,2min梯度,波长＝220nm)；MS(ES)：m/z＝562[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.92(s,1H),8.51(d,J＝7.7Hz,1H),7.60(br.s.,1H),7.54(dd,J＝8.1,1.3Hz,1H),7.46-7.36(m,1H),7.34-7.26(m,2H),7.18(dd,J＝8.0,1.2Hz,1H),7.09(s,1H),7.01-6.89(m,2H),4.51(dt,J＝12.3,7.4Hz,1H),4.04-3.96(m,1H),3.95-3.84(m,1H),2.46-2.38(m,1H),2.23-2.07(m,1H),1.67-1.53(m,2H),1.51-1.34(m,1H),1.25(br.s.,1H),1.01-0.80(m,2H),0.61-0.45(m,1H),0.40-0.26(m,2H),0.04--0.05(m,1H),-0.13(dt,J＝5.3,2.7Hz,1H)。
实施例26
(2R,3S)-N-((3S)-6-氯-1-(2-氰基苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例26由中间体B-34(76mg,0.242mmol)和中间体S-2(86mg,0.266mmol)根据实施例1显示的一般程序制备。产物通过制备型SFC色谱纯化(Berger SFC MGII,手性IC 25x3cm ID,5μm,80/20CO2/MeOH,85.0mL/min,检测器波长：220nm)。得到实施例26(40mg,28％)：HPLC：RT＝1.83min(MeOH/H2O/0.1％TFA,Waters SunFire C182.1x30mm,2min梯度,波长＝220nm)；MS(ES)：m/z＝562[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.13(s,1H),8.53(d,J＝7.9Hz,1H),7.76-7.68(m,1H),7.64-7.59(m,2H),7.45(dd,J＝8.0,1.2Hz,1H),7.36(d,J＝8.4Hz,1H),7.23-7.12(m,2H),6.97(br.s.,1H),6.84(dd,J＝8.0,1.2Hz,1H),4.51(dt,J＝12.2,7.5Hz,1H),4.21(dd,J＝9.8,7.4Hz,1H),3.74(dd,J＝12.1,9.9Hz,1H),2.46-2.39(m,2H),2.24-2.05(m,1H),1.68-1.52(m,2H),1.44(ddd,J＝13.3,10.0,6.4Hz,1H),1.00-0.85(m,1H),0.60-0.45(m,1H),0.39-0.25(m,2H),0.08--0.06(m,1H),-0.13(dd,J＝7.9,3.1Hz,1H)。
实施例27
(2R,3R)-N-((3S)-6-氯-1-(3-氰基-5-氟苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-苯基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例27由中间体B-35(77mg,0.232mmol)和中间体S-3(88mg,0.255mmol)根据实施例1显示的一般程序制备。产物通过制备型SFC色谱纯化(BergerSFC MGII,手性IB 25x3cm ID,5μm,80/20CO2/MeOH,85.0mL/min,检测器波长：220nm)。得到实施例27(23mg,16％)：HPLC：RT＝1.97min(MeOH/H2O/0.1％TFA,Waters SunFire C182.1x30mm,2min梯度,波长＝220nm)；MS(ES)：m/z＝602[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.95(br.s.,1H),8.24(br.s.,1H),7.68(br.s.,1H),7.52(d,J＝8.1Hz,1H),7.43-7.14(m,8H),6.94(s,1H),6.64(br.s.,1H),6.53(d,J＝11.9Hz,1H),4.30-4.15(m,1H),3.59(d,J＝11.2Hz,1H),3.28-3.11(m,3H),2.37(br.s.,1H),2.32-2.20(m,1H),1.76-1.63(m,3H)。
实施例28
(2R,3S)-N-((3S)-6-氯-1-(3-氰基-5-氟苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例28由中间体B-35(77mg,0.232mmol)和中间体S-2(83mg,0.255mmol)根据实施例1显示的一般程序制备。产物通过制备型SFC色谱纯化(Berger SFC MGII,手性IB 25x3cm ID,5μm,82/18CO2/MeOH,85.0mL/min,检测器波长：220nm)。得到实施例28(37mg,28％)：HPLC：RT＝1.97min(MeOH/H2O/0.1％TFA,Waters SunFire C182.1x30mm,2min梯度,波长＝220nm)；MS(ES)：m/z＝580[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.93(s,1H),8.49(br.s.,1H),7.66-7.52(m,2H),7.40-7.16(m,3H),7.02-6.84(m,2H),6.76(d,J＝11.9Hz,1H),4.52(dt,J＝12.2,7.4Hz,1H),4.07-3.86(m,2H),2.48-2.38(m,2H),2.24-2.05(m,1H),1.67-1.53(m,2H),1.51-1.36(m,1H),1.33-1.20(m,1H),0.94(dd,J＝11.0,7.7Hz,1H),0.53(d,J＝6.8Hz,1H),0.39-0.24(m,2H),0.05--0.06(m,1H),-0.06--0.22(m,1H)。
实施例29
(2R,3S)-N-((3S)-6-氯-1-(3-环丙基苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例29由中间体B-12(48.8mg,0.149mmol)和中间体S-2(48.4mg,0.149mmol)根据实施例1显示的一般程序制备。产物通过制备型SFC色谱纯化(Berger SFC MGII,Lux Cellulose 2 25x3cm ID,5μm,80/20 CO2/MeOH,85.0mL/min,检测器波长：220nm)。得到实施例29(31.2mg,36％)：HPLC：RT＝2.145min(MeOH/H2O/0.1％TFA,Waters SunFire C182.1x30mm,2min梯度,波长＝254nm)；MS(ES)：m/z＝577[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.83(s,1H),8.49(d,J＝7.70Hz,1H),7.59(br.s.,1H),7.43(dd,J＝1.32,7.92Hz,1H),7.23(t,J＝8.14Hz,1H),7.05-7.12(m,2H),6.96(s,1H),6.56(d,J＝7.70Hz,1H),6.42-6.47(m,2H),4.44(td,J＝7.24,12.38Hz,1H),3.90-3.97(m,1H),3.83(dd,J＝10.23,12.43Hz,1H),2.37-2.44(m,2H),2.05-2.24(m,1H),1.78-1.88(m,1H),1.58(d,J＝5.50Hz,2H),1.38-1.49(m,1H),0.85-0.97(m,3H),0.59-0.67(m,1H),0.48-0.58(m,2H),0.26-0.37(m,2H),-0.05-0.03(m,1H),-0.14(dd,J＝2.86,7.70Hz,1H)。
实施例30
(2R,3R)-N-((3S)-6-氯-1-(3,4-二氯苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-苯基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例30由中间体B-31(48.5mg,0.103mmol)和中间体S-3(36.3mg,0.105mmol)根据实施例1显示的一般程序制备。产物通过制备型SFC色谱纯化(Berger SFC MGII,IC 25x3cm ID,5μm,80/20 CO2/MeOH,85.0mL/min,检测器波长：220nm)。得到实施例30(25.7mg,40％)：HPLC：RT＝2.142min(MeOH/H2O/0.1％TFA,Waters SunFire C182.1x30mm,2min梯度,波长＝254nm)；MS(ES)：m/z＝627[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.91(br.s.,1H),8.23(d,J＝7.70Hz,1H),7.67(br.s.,1H),7.47(dd,J＝1.10,7.92Hz,1H),7.42(d,J＝9.02Hz,1H),7.34-7.38(m,2H),7.28-7.33(m,3H),7.23(t,J＝8.14Hz,1H),7.12(d,J＝7.04Hz,1H),6.93(s,1H),6.63(d,J＝2.64Hz,1H),6.41(dd,J＝2.75,8.91Hz,1H),4.15-4.24(m,1H),3.57(d,J＝11.44Hz,1H),3.16-3.26(m,1H),3.10(d,J＝9.02Hz,2H),2.15-2.43(m,3H),1.62-1.74(m,3H)。
实施例31
(2R,3S)-N-((3S)-6-氯-1-(3-氯苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例31由中间体B-29(85.0mg,0.195mmol)和中间体S-1(73.6mg,0.201mmol)根据实施例1显示的一般程序制备。产物通过制备型SFC色谱纯化(Berger SFC MGII,IC 25x3cm ID,5μm,85/15CO2/MeOH,85.0mL/min,检测器波长：220nm)。得到实施例31(52.4mg,43％)：HPLC：RT＝2.100min(MeOH/H2O/0.1％TFA,Waters SunFire C182.1x30mm,2min梯度,波长＝254nm)；MS(ES)：m/z＝613[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.92(br.s.,1H),8.63(d,J＝7.70Hz,1H),7.65(s,1H),7.51(dd,J＝1.43,8.03Hz,1H),7.26-7.32(m,1H),7.23(t,J＝8.14Hz,1H),7.19(dd,J＝1.32,7.92Hz,1H),7.13(br.s.,1H),6.90(dd,J＝1.32,7.92Hz,1H),6.66(t,J＝2.09Hz,1H),6.58(dd,J＝1.76,8.36Hz,1H),4.52(td,J＝7.29,12.27Hz,1H),3.93-4.00(m,1H),3.82-3.90(m,1H),2.39-2.47(m,2H),2.02-2.27(m,4H),1.51-1.68(m,4H),1.37-1.49(m,1H)。
实施例32
(2R,3S)-N-((3S)-6-氯-1-(3,4-二氯苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例32由中间体B-31(101.9mg,0.217mmol)和中间体S-1(79.5mg,0.217mmol)根据实施例1显示的一般程序制备。产物通过制备型SFC色谱纯化(Berger SFC MGII,手性IC 25x3cm ID,5μm,90/10CO2/MeOH,85.0mL/min,检测器波长：220nm)。得到实施例32(60.5mg,41％)：HPLC：RT＝2.190min(MeOH/H2O/0.1％TFA,Waters SunFire C182.1x30mm,2min梯度,波长＝254nm)；MS(ES)：m/z＝647[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.94(s,1H),8.63(d,J＝7.70Hz,1H),7.65(s,1H),7.52(dd,J＝1.43,8.03Hz,1H),7.43(d,J＝9.02Hz,1H),7.25-7.34(m,1H),7.19-7.24(m,1H),7.14(s,1H),6.85(d,J＝2.86Hz,1H),6.59(dd,J＝2.75,8.91Hz,1H),4.52(td,J＝7.26,12.32Hz,1H),3.93-4.02(m,1H),3.81-3.90(m,1H),2.38-2.48(m,2H),2.01-2.26(m,3H),1.50-1.68(m,3H),1.38-1.49(m,1H)。
实施例33
(2R,3S)-N-((3S)-6-氯-4-氧代-1-(2-吡啶基)-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例33由中间体B-36(149.6mg,0.518mmol)和中间体S-1(189.0mg,0.516mmol)根据实施例1显示的一般程序制备。产物通过制备型SFC色谱纯化(Berger SFC MGIII,手性IC 25x3cm ID,5μm,88/12CO2/MeOH,120.0mL/min,检测器波长：220nm)。得到实施例33(59.3mg,19％)：HPLC：RT＝0.75min(CH3CN/H2O/0.05％TFA,BEH C182.1x50mm 1.7μ,1min梯度,波长＝254nm)；MS(ES)：m/z＝580[M+1]+；1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.17(ddd,J＝0.88,1.76,5.06Hz,1H),7.53(dd,J＝2.20,7.48Hz,1H),7.46(ddd,J＝1.87,7.04,8.69Hz,1H),7.24-7.35(m,2H),6.79(ddd,J＝0.66,5.06,7.04Hz,1H),6.37(d,J＝8.58Hz,1H),4.77(dd,J＝6.38,12.76Hz,1H),4.68(dd,J＝10.78,12.54Hz,1H),3.93(dd,J＝6.38,10.78Hz,1H),2.61(dt,J＝4.18,10.30Hz,1H),2.52(dt,J＝3.52,10.30Hz,1H),2.31-2.47(m,1H),2.01-2.26(m,3H),1.66-1.85(m,3H),1.53-1.65(m,1H)。
实施例34
(2R,3R)-N-((3S)-6-氯-4-氧代-1-(6-(三氟甲基)-2-吡啶基)-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-苯基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例34由中间体B-13(101.8mg,0.216mmol)和中间体S-3(81.4mg,0.235mmol)根据实施例1显示的一般程序制备。产物通过制备型SFC色谱纯化(Berger SFC MGII,Whelk-O R,R 25x3cm ID,5μm,82/18CO2/MeOH,85.0mL/min,检测器波长：220nm)。得到实施例34(59.9mg,44％)：HPLC：RT＝0.95min(CH3CN/H2O/0.05％TFA,BEH C182.1x50mm 1.7μ,1min梯度,波长＝254nm)；MS(ES)：m/z＝628[M+1]+；1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.49-7.60(m,2H),7.35-7.42(m,2H),7.19-7.33(m,5H),7.12(d,J＝7.26Hz,1H),6.41(d,J＝8.58Hz,1H),4.28-4.43(m,2H),3.60(d,J＝11.22Hz,1H),3.20(td,J＝7.10,11.11Hz,1H),3.05(dd,J＝4.84,10.12Hz,1H),2.14-2.41(m,2H),1.77-1.90(m,2H)。
实施例35
(2R,3S)-N-((3S)-6-氯-4-氧代-1-(6-(三氟甲基)-2-吡啶基)-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例35由中间体B-13(102.6mg,0.218mmol)和中间体S-1(81.6mg,0.223mmol)根据实施例1显示的一般程序制备。产物通过制备型SFC色谱纯化(Berger SFC MGII,ID 25x3cm ID,5μm,88/12CO2/MeOH,85.0mL/min,检测器波长：220nm)。得到实施例35(61.7mg,43％)：HPLC：RT＝0.98min(CH3CN/H2O/0.05％TFA,BEH C182.1x50mm 1.7μ,1min梯度,波长＝254nm)；MS(ES)：m/z＝648[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.98(s,1H),8.82(d,J＝7.48Hz,1H),7.69(t,J＝7.92Hz,1H),7.64(dd,J＝1.43,8.03Hz,2H),7.44(dd,J＝1.76,8.14Hz,1H),7.37(t,J＝8.10Hz,1H),7.24(d,J＝7.26Hz,1H),7.12(s,1H),6.50(d,J＝8.80Hz,1H),4.69-4.80(m,1H),4.51-4.61(m,1H),3.81(dd,J＝6.82,11.66Hz,1H),2.52-2.60(m,1H),2.37-2.47(m,1H),2.01-2.24(m,3H),1.51-1.68(m,3H),1.37-1.50(m,1H),1.26(d,J＝19.15Hz,1H)。
实施例36
(2R,3R)-N-((3S)-6-氯-4-氧代-1-(4-(三氟甲基)-2-吡啶基)-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-苯基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例36由中间体B-37(226.6mg,0.279mmol)和中间体S-3(100.0mg,0.289mmol)根据实施例1显示的一般程序制备。产物通过制备型SFC色谱纯化(Berger SFC MGII,Lux Cellulose 4 25x3cm ID,5μm,83/17CO2/MeOH,85.0mL/min,检测器波长：220nm).实施例36(28.8mg,16％)was obtained：HPLC：RT＝1.03min(CH3CN/H2O/0.05％TFA,BEH C182.1x50mm 1.7μ,1min梯度,波长＝254nm)；MS(ES)：m/z＝628[M+1]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.84(s,1H),8.39-8.47(m,2H),7.68(br.s.,1H),7.59(dd,J＝2.31,7.15Hz,1H),7.27-7.37(m,4H),7.14-7.26(m,3H),7.08(d,J＝5.06Hz,1H),6.92(s,1H),6.33(s,1H),4.37-4.49(m,1H),4.18(td,J＝7.29,12.71Hz,1H),3.59(d,J＝11.44Hz,1H),3.12-3.22(m,2H),2.37-2.48(m,1H),2.16-2.31(m,1H),1.59-1.75(m,2H)。
实施例37
(2R,3S)-N-((3S)-7-氟-4-氧代-1-苯基-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例37由中间体B-38(109mg,0.401mmol)和中间体S-1(162mg,0.441mmol)根据实施例1显示的一般程序制备。产物通过制备型SFC色谱纯化(Berger SFC MGII,手性IC 25x3cm ID,5μm,85/15CO2/MeOH,85.0mL/min,检测器波长：220nm)。得到实施例37(21mg,14％)：HPLC：RT＝2.06min(MeOH/H2O/0.1％TFA,Waters SunFire C182.1x30mm,2min梯度,波长＝220nm)；MS(ES)：m/z＝563[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.15(s,1H),8.69(d,J＝7.9Hz,1H),7.65(br.s.,1H),7.28-7.11(m,4H),7.10-6.97(m,2H),6.84(t,J＝7.4Hz,1H),6.64(d,J＝7.7Hz,2H),4.61(dt,J＝12.4,7.3Hz,1H),4.00-3.91(m,1H),3.90-3.78(m,1H),2.48-2.38(m,2H),2.26-1.99(m,3H),1.73-1.53(m,4H),1.47(dt,J＝7.0,3.7Hz,1H)。
实施例38
(2R,3S)-N-((3S)-7-氟-4-氧代-1-(3-(三氟甲基)苯基)-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例38由中间体B-39(111mg,0.328mmol)和中间体S-1(132mg,0.361mmol)根据实施例1显示的一般程序制备。产物通过制备型SFC色谱纯化(Berger SFC MGII,Regis Whelk-O R,R 25x3cm ID,5μm,88/12CO2/MeOH,85.0mL/min,检测器波长：220nm)。得到实施例38(21mg,9％)：HPLC：RT＝2.15min(MeOH/H2O/0.1％TFA,Waters SunFire C182.1x30mm,2min梯度,波长＝220nm)；MS(ES)：m/z＝631[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.19(s,1H),8.68(d,J＝7.9Hz,1H),7.66(br.s.,1H),7.41(t,J＝8.0Hz,1H),7.28(dd,J＝8.9,5.8Hz,1H),7.19-7.02(m,4H),6.91-6.77(m,2H),4.63(dt,J＝12.3,7.3Hz,1H),4.03(dd,J＝10.3,6.8Hz,1H),3.97-3.85(m,1H),2.47-2.41(m,1H),2.25-1.97(m,4H),1.71-1.53(m,4H),1.52-1.42(m,1H)。
比较化合物39至42
比较化合物39至42可根据美国专利第7,053,084号中分别针对实施例8、12a、38及45a所阐述的程序制备。
生物学测定法
本发明化合物的药理学性质可藉由许多生物测定法证实。利用本发明化合物进行下文所例示的生物测定法。
Notch-CBF1转活化测定法
基于Notch-CBF1(C-启动子结合因子I)细胞的转活化测定法为基于所释放的Notch细胞内结构域片段(NICD)连同CBF1及其他核因子一起作为转录因子功能的能力。使用荧光素酶测定法来测量对于Notch-CBF1转录活性的拮抗作用。使用含有截短的Notch 1、Notch 2、Notch 3或Notch 4受体的pCDNA3.1/Hygro质粒及含有CBF1结合位点的4个拷贝的PGL3荧光素酶报导子载体瞬时共转染HeLa子宫颈癌细胞。然后测试这些细胞在测试化合物的不存在或存在下的Notch-CBF1活性。取维持于DMEM(高葡萄糖，含HEPES)、1×谷氨酰胺/青霉素/链霉素及10％胎牛血清中的HeLa细胞，根据制造商说明书，使用Monster转染套组(Mirus编号MIR2906)，于T175烧瓶中进行过渡性转染(4.5×106个细胞/烧瓶)。表12表示用于转染的各个DNA量。
表12
DNA(μg) CBF1(μg) 载体(μg) 总DNA(μg)
人类Notch 1 6 14.4 15.6 36.0
人类Notch 2 2 14.4 19.6 36.0
人类Notch 3 0.3 14.4 21.3 36.0
人类Notch 4 4 14.4 17.6 36.0
转染后6小时，使用胰蛋白酶处理细胞，并依5×103个细胞/孔的密度平铺至经聚-D-赖氨酸涂覆的384孔黑色组织培养板中的95μL分析培养基(DMEM(高葡萄糖，含HEPES)、1×谷氨酰胺/青霉素/链霉素、0.0125％BSA、1X非必需氨基酸)中。将含有最终浓度在5μM至8.4×10-5μM(3倍连续稀释)的范围内的测试化合物的分析培养基(5μL)添加至这些细胞中，且然后在37℃及5％CO2下将这些细胞板培育18小时。对照孔含有DMSO媒剂(总计数)或0.5μM的自行使用的(in-house)小分子抑制剂(背景计数)。每一样品均一式两份。在与50μl荧光素酶试剂一起温育20分钟后，根据制造商说明书(Promega，目录编号E2550)测量荧光素酶活性，并藉由Envision板读数器(PerkinElmer,Boston,MA)分析。
化合物的拮抗效应为表示为100×[1-(平均样品-平均背景)/(平均总量-平均背景)]，其中样品为在测试化合物的存在下的荧光素酶活性，背景等于在小分子抑制剂对照的存在下的荧光素酶活性，且总量为DMSO孔中所诱导的信号。使用四参数逻辑拟合方程对数据作图，且IC50值为定义为抑制50％荧光素酶活性的化合物浓度。
下表13列出上文Notch-CBF1转活化测定法中所测量的本发明实施例1至38及比较化合物39至42的Notch 1及Notch 3 IC50值。在一些情形下，该值为多个实验的平均值，其中N为所实施的实验数。由实施例1至38所例示的本发明化合物显示22.5nM或更少的Notch 1值及46.2nM或更少的Notch 3 IC50值。
表13
高通量(HT)代谢稳定性组
胃肠外给药的化合物进入血流，并一或多次穿过肝。不易于被肝代谢的化合物可以治疗上有效血浆含量给药并持续治疗上有效时间。
经口给药的化合物通常经吸收穿过肠壁进入血流中，并第一次穿过肝。在此第一次穿过肝时不易代谢的化合物可以治疗有效量分布至身体的其他部位。
10分钟培育后，代谢稳定性分析使用人类、大鼠、小鼠、狗和/或猴微粒体评价活体外的CYP介导的代谢稳定性。一式两份测试每一化合物。
这些分析的结果为表示为该10分钟培育后反应混合物中所剩余的母体化合物的分数(剩余百分比)。一般而言，这些结果用于仅评价测试化合物的CYP介导或NADPH依赖性代谢的程度。当该化合物明显代谢(剩余<40％至50％)时，此指示由CYP介导的代谢导致的该化合物在活体内的高清除率。然而，若该化合物在这些活体外分析中展示中等(50％至80％)或低(>85％)代谢，则在活体内经由其他代谢及消除途径高清除率仍为可能的。
这些分析的剩余百分比结果预测活体内化合物清除率，此假设CYP介导的代谢为主要消除途径。在不同微粒体种类中，结果范围为大概如表14中所显示。
表14
代谢稳定性结果解释指南
方法及材料
利用肝微粒体的培育
以存于100％DMSO中的3.5mM储备溶液形式接受测试化合物。稀释该测试化合物以产生含有1.4％DMSO的50μM乙腈(ACN)溶液，然后作为100×储备溶液用于利用微粒体的温育。在代谢稳定性-人、大鼠及小鼠成套分析中，在三个物种中的每一者中单独地以一式两份测试每一化合物，或在代谢稳定性-狗或代谢稳定性-猴成套分析中的个别物种中以一式两份测试每一化合物。将化合物、NADPH及肝微粒体溶液合并用于在3个步骤中温育：
1.在37℃，使152μl的肝微粒体悬浮液(蛋白质浓度为存于100mM NaPi中1.1mg/ml，pH 7.4，5mM MgCl2缓冲液)预升温。
2.将1.7μl的50μM化合物(98.6％ACN,1.4％DMSO)添加至同一管中，并在37℃预温育5分钟。
3.藉由添加17μl于100mM NaPi中的经预升温10mM NADPH溶液(pH7.4)来起始该反应。
将这些反应组分充分混合，且将75μl的反应混合物立即转移至150μl淬灭/停止溶液中(0时间点，T0)。在37℃将反应温育10分钟，且然后将另一75μl等份试样转移至150μl淬灭溶液中。使用含有乙腈的100μM DMN(用于注射质量控制的UV标准物)作为终止代谢反应的淬灭溶液。
在X-12离心机，SX4750转子(Beckman Coulter公司，Fullerton，CA)中以1500rpm(约500×g)对经淬灭混合物离心15分钟，以使变性微粒体沉淀。然后将90μl的体积的上清液萃取物(含有母体化合物与其代谢物的混合物)转移至单独96孔板用于UV-LC/MS-MS分析，以测定该混合物中所剩余的母体化合物百分比。
表15
代谢稳定性分析-反应组分
反应组分 代谢稳定性分析中的最终浓度
化合物(底物) 0.5μM
NaPi缓冲液，pH 7.4 100mM
DMSO 0.014％
乙腈 0.986％
微粒体(人类、大鼠、小鼠)(BD/Gentest) 1mg/ml蛋白质
NADPH 1.0mM
MgCl2 5.0mM
反应组分 代谢稳定性分析中的最终浓度
37℃温育时间 0分钟和10分钟
淬灭/停止溶液(ACN+100μM DMN) 150μl
反应样品 75μl
变性微粒体的沉降 15分钟
上清液的UV-LC/MS分析 0.17μM
样品分析-仪器
HPLC：泵-Thermo Surveyor；自动取样器-CTC/LEAP HTS；UV检测器-Thermo Surveyor PDA plus；管柱-具有0.5μm直列式滤器的C18，3μm，2×20mm；用于结构完整性预分析的流动相：(A)98％水，2％乙腈，具有10mM乙酸铵；(B)10％水，90％乙腈，具有10mM乙酸铵；用于反应样品分析的流动相：(A)98％水，2％乙腈，具有0.1％甲酸；(B)2％水，98％乙腈，具有0.1％甲酸；(C)水中的0.1％氢氧化铵；(D)乙腈中的0.1％氢氧化铵。
质谱仪：Thermo TSQUltra三重四极柱质谱仪；
样品分析-结构完整性预分析
使用代谢稳定性结构完整性预分析来评估所分析化合物的纯度。化合物为以57μl的3.5mM DMSO溶液形式接受于96孔板中。利用含有相等体积的乙腈、异丙醇及MilliQ-H2O的溶液将3.5mM化合物DMSO储备溶液稀释至1/18。藉由LC-UV/MS于Thermo LCQ Deca XP Plus ion trap质谱仪上使用具有Waters Sentry 2.1mm保护管柱的Waters XBridge C18管柱(5μm,2×50mm)及下表中所阐述的LC条件(其中5μl注射及1ml/min的流速)针对结构完整性分析所得溶液(200μM)。所获得数据藉由220nm下的UV吸光度反映纯度。仅报告那些具有大于50％的纯度的化合物的结果。
表16
代谢稳定性-结构完整性梯度
梯度时间(min) A％ B％
0.00 100 0
4.00 0 100
5.00 0 100
5.10 100 0
6.00 100 0
样品分析-所温育的样品
于配备有加热电喷雾(H-ESI)来源的Thermo TSQ三重四极柱质谱仪上藉由自动化输注实施MS/MS条件优化，以获得SRM跃迁及其相应的碰撞能量值。以90μL/min的流速输注浓度为1:1甲醇:水中20μM的化合物溶液，然后与流速为50μL/min的流动相合并，然后引入该来源中。先使用流动相A及B(50％A及50％B)且若需要则使用流动相C及D(亦为50:50组成)使所有化合物优化。将经优化参数(包括极性、SRM跃迁及碰撞能量)储存于MICROSOFT数据库中。
使用自动化输注获得的质谱条件来分析来自代谢稳定性分析的温育样品。注射体积为5μl，且流速为0.8ml/min。所使用梯度为显示于下表中。以该梯度先使用流动相A及B注射所有样品。若需要(例如，出于层析的原因)，则以相同梯度、但使用流动相C及D再注射样品。在原始数据文件中以电子方式捕获所有LC-MS/MS分析参数。
表17
代谢稳定性-样品分析梯度
梯度时间(min) A％(或C％) B％(或D％)
0.00 95 5
0.20 95 5
0.30 0 100
1.05 0 100
1.10 95 5
1.50 95 5
数据分析
利用软件实施峰整合。对于每一化合物，藉由比较来自T10min样品的LC-MS/MS峰面积与来自T0min样品的峰面积来实施剩余百分比计算。
质量控制
于每一分析板中测试一组3种化合物以及测试化合物。仅在这些对照化合物属于下文所显示的预期范围内时，才接受并上传数据。
表18
代谢稳定性分析-藉由微粒体种类得到的对照化合物值
SD＝标准偏差
代谢稳定性半衰期组
使用活体外所测定人类或动物肝微粒体中的代谢速率及半衰期来确定化合物的固有清除率(CLint)及肝清除率(CLh,b)。这些参数可用于预测活体内人类清除率，该清除率界定活体内药物暴露含量(Obach等，1997、1999)。
代谢稳定性半衰期分析组评价CYP介导的(NADPH依赖性)代谢在活体外于人类、大鼠、小鼠、狗及猴微粒体中的时程及速率。该时程贯穿45分钟温育，且包括0分钟、5分钟、10分钟、15分钟、30分钟及45分钟时间点，在每一时间点处测量混合物中所剩余的测试化合物的量。
结果解释指南
代谢稳定性半衰期分析的结果为表示为半衰期(T1/2,min)。一般而言，这些结果应用于仅评价测试化合物的CYP介导或NADPH依赖性代谢的程度。当该化合物明显代谢(T1/2<14分钟)时，此指示由CYP介导的代谢导致的活体内高清除率。然而，若该化合物在这些活体外分析中展示中等(14分钟至70分钟)或低(>70分钟)代谢，则在活体内经由其他代谢及消除途径高清除率仍为可能的。
这些分析的结果预测活体内化合物清除率，此假设CYP介导的代谢为主要消除途径。在人类微粒体中，结果范围为大概如下表中所显示：
表19
代谢稳定性半衰期-结果解释指南
方法及材料
肝微粒体系购自BD-Biosciences(Woburn,MA)，且NADPH购自AppliChem Inc；所有其他试剂为获得自Sigma。
利用肝微粒体的温育
以存于100％DMSO中的3.5mM储备溶液形式接受测试化合物。稀释该测试化合物以产生含有1.4％DMSO的50μM乙腈(ACN)溶液，然后作为100倍储备溶液用于利用微粒体的温育。于人类、大鼠、小鼠、狗及猴肝微粒体中测试每一化合物。将化合物、NADPH及肝微粒体溶液合并用于在3个步骤中温育：
1.在37℃，使450μl的肝微粒体悬浮液(蛋白质浓度为存于100mM NaPi中1.1mg/ml，pH 7.4，5mM MgCl2缓冲液)预升温。
2.将5μl的50μM化合物(98.6％ACN,1.4％DMSO)添加至同一管中，并在37℃预温育5分钟。
3.藉由添加50μl存于100mM NaPi中的经预升温10mM NADPH溶液(pH 7.4)来起始该反应。
将反应组分充分混合，且将65μl立即转移至130μl淬灭/停止溶液中(0时间点，T0)。在37℃，将反应温育5分钟、10分钟、15分钟、30分钟及45分钟，且在每一时间点处将65μl等份试样转移至130μl的淬灭溶液中。使用含有乙腈的内标准物(100ng/ml)作为终止代谢反应的淬灭溶液。
在X-12离心机(SX4750转子，Beckman Coulter公司，Fullerton，CA)中以1500rpm(约500×g)对经淬灭混合物离心15分钟，以使变性微粒体沉淀。然后将90μl的体积的上清液萃取物(含有母体化合物与其代谢物的混合物)转移至单独96孔板用于LC/MS-MS分析，以测定该混合物中所剩余的母体化合物百分比。
表20
代谢稳定性半衰期分析-反应组分
反应组分 代谢稳定性分析中的最终浓度
化合物(底物) 0.5μM
NaPi缓冲液，pH 7.4 100mM
DMSO 0.014％
乙腈 0.986％
微粒体(人类、大鼠、小鼠)(BD/Gentest) 1mg/ml蛋白质
NADPH 1.0mM
MgCl2 5.0mM
反应组分 代谢稳定性分析中的最终浓度
37℃温育时间 0、5、10、15、30和45分钟
淬灭/停止溶液(ACN+100μM DMN) 130μl
反应样品 65μl
变性微粒体的沉降 15分钟
样品分析-仪器
HPLC：泵-Shimadzu LC-20AD系列二元泵；自动取样器-CTC/LEAP HTS
下表21列示于人类代谢稳定性半衰期分析中所测量的本发明实施例1至38及比较化合物39至42的CYP介导的代谢半衰期值。在一些情形下，该值为多个实验的平均值，其中N为所实施的实验数。由实施例1至38所例示的本发明化合物具有31分钟或更长的代谢稳定性半衰期值。相比之下，比较化合物39至42具有8分钟或更少的代谢稳定性半衰期值。
表21
实施例 HLM t1/2(min) N
1 40 2
2 103 3
3 42 3
4 96 2
5 32 3
6 73 2
7 46 1
8 >120 2
9 >120 2
10 85 1
11 92 2
12 98 3
13 118 2
14 >120 1
15 34 1
16 107 1
17 93 1
18 76 2
19 >120 2
20 >120 1
21 115 2
22 >120 1
23 118 2
24 114 1
实施例 HLM t1/2(min) N
25 57 2
26 31 2
27 >120 2
28 52 1
29 35 3
30 >120 1
31 54 3
32 >120 1
33 56 1
34 49 1
35 >120 2
36 >120 2
37 33 1
38 120 1
比较化合物39 8 1
比较化合物40 6 1
比较化合物41 6 1
比较化合物42 3 1
所列示的本发明化合物在人类代谢稳定性半衰期分析中显示由CYP介导的代谢导致的低清除率的惊奇优势。由实施例1至38所例示的本发明化合物在人类代谢稳定性半衰期分析中具有在31分钟或更大的代谢半衰期数值。相比之下，比较化合物39至42在人类代谢稳定性分析中具有8分钟或更少的代谢半衰期。比较化合物39至42在人类代谢稳定性分析中显示高清除率，此指示这些化合物为藉由肝微粒体来去除。
已将本发明化合物(实施例1至38)与美国专利第7,456,172号中所公开的比较化合物39至42相比较，且发现其尤其有利。本发明的化合物具有作为Notch 1及Notch 3的抑制剂的活性及优于肝微粒体的代谢稳定性的组合的惊奇优势。如表13及21中所显示，在所报告测试中，本发明的实施例1至38具有22.5nM或更少的Notch 1 IC50值及46.2nM或更少的Notch 3 IC50值；及在人类代谢稳定性半衰期分析中31分钟或更长的人类代谢稳定性半衰期。相比之下，在类似测试中，比较化合物39至42具有在5.1nM至64.1nM的范围内的Notch 1 IC50值及在12.5nM至74.5nM的范围内的Notch 3IC50值；及8分钟或更少的人类代谢稳定性半衰期。
小鼠中的人类肿瘤异种移植模型
所有啮齿动物为获得自Harlan Sprague Dawley公司(Indianapolis,Indiana)，且于无氨水环境中维持于经界定且无病原体群落中。在用于肿瘤传播及药物效力测试前大约1周对所有小鼠进行隔离。给小鼠随意饲喂食物及水。百时美施贵宝药品研究所(Bristol-Myers Squibb Pharmaceutical Research Institute)的动物照护计划经美国实验动物照护评鉴协会(American Association forAccreditation of Laboratory Animal Care，AAALAC)完全认可。依照百时美施贵宝(Bristol-Myers Squibb，BMS)动物测试方法及指南实施所有实验。
使肿瘤异种移植物生长，并经皮下(SC)维持于免疫受损的balb/c nu/nu裸或NOD-SCID小鼠(Harlan Sprague Dawley)中。使用自供体小鼠获得的肿瘤片段以皮下移植物形式于适当小鼠品系(表22)中传播肿瘤。
表22
用于各种人类肿瘤异种移植物于小鼠中的繁殖的组织学类型及宿主小鼠品系/性别要求
肿瘤类型 组织学 小鼠品系 性别
TALL-1 ALL NOD-SCID 雌性
HPB-ALL ALL NOD-SCID 雌性
ALL-SIL ALL NOD-SCID 雌性
MDA-MB-157 乳房 NOD-SCID 雌性
MDA-MB-468 乳房 NOD-SCID 雌性
PAT-34 卵巢 裸 雌性
PAT-50 卵巢 裸 雌性
PAT-26 胰腺 裸 雌性
PAT-27 胰腺 裸 雌性
临床前化学疗法试验
在实验开始时将需要检测有意义反应的所需数量的动物集合在一起，且利用13号套管针向每一者给予肿瘤片段(～20mg)的皮下植入物。使肿瘤生长至预定大小窗口(排除该范围外面的肿瘤)，且将动物均匀分布至各种治疗及对照组。通常每个治疗及对照组有8只小鼠，以SAL-IGF(此不包括于表19中)肿瘤模型实施的实验(其中每个治疗及对照组有5只小鼠)除外。每一动物的治疗为基于个别体重。每天检查经治疗动物的治疗相关的毒性/死亡率。在起始治疗之前(Wt1)且然后在最后一次治疗剂量之后再次(Wt2)对每组动物称重。体重的差异(Wt2-Wt1)提供治疗相关的毒性的量度。
肿瘤反应为藉由每周两次利用卡尺测量肿瘤来测定，直至肿瘤达到预定0.5gm或1gm(取决于肿瘤类型)的“目标”大小。自下式估计肿瘤重量(mg)：
肿瘤重量＝(长度×宽度2)÷2
用肿瘤生长抑制(％TGI)表示肿瘤反应标准。肿瘤生长延迟定义为经治疗肿瘤(T)达到预定目标大小所需要的时间(天)与对照组(C)的时间相比的差异。出于此目的，组的肿瘤重量为表示为中间肿瘤重量(MTW)。
肿瘤生长抑制为如下计算：
其中，
Ct＝治疗结束时的对照肿瘤大小中值
C0＝治疗起始时的对照肿瘤大小中值
Tt＝治疗结束时治疗组的肿瘤大小中值
T0＝治疗起始时治疗组的肿瘤大小中值
活性为定义为达成50％或更大的持久肿瘤生长抑制(即，TGI≥50％)或0.5或更大的细胞对数杀灭(LCK≥0.5)并持续相当于至少1个肿瘤体积倍增时间的时期，且药物治疗必须持续相当于至少2个肿瘤体积倍增时间的时期。
亦用肿瘤生长延迟(TGD值)表示肿瘤反应，肿瘤生长延迟定义为经治疗肿瘤(T)达到预定目标大小所需要的时间(天)与对照组(C)的时间相比的差异。
只要可能时，在高达最大耐受剂量(MTD)的剂量值范围内测定抗肿瘤活性，该最大耐受剂量定义为刚刚高于发生过高毒性(即，超过一个死亡)的剂量值。当发生死亡时，记录死亡的日期。认为在肿瘤达到目标大小之前死亡的经治疗小鼠死于药物毒性。死亡对照小鼠所携带肿瘤皆不小于目标大小。认为具有超过一个由药物毒性引起的死亡的治疗组已进行过高毒性治疗，且其数据不包括于化合物的抗肿瘤效力的评价中。
影响治疗耐受性的潜在药物毒性相互作用在组合化学疗法试验中为重要考虑因素。组合治疗结果的解释必须基于对同等耐受剂量的单一药剂与该组合的最佳可能反应的抗肿瘤活性的比较。因此，治疗协同作用定义为利用超过在单一疗法的任一耐受剂量下实现的最佳效果的组合药剂的耐受方案实现的治疗效果。使用格翰氏广义威尔卡森检验(Gehan′s generalizedWilcoxon test)实施数据的统计学评价。在P<0.05下宣布统计显著性。
药物给药
在活体外研究中，将所有药剂溶解于100％DMSO中，并连续稀释于培养基/10％胎牛血清中。使用以下赋形剂来向啮齿动物给药Notch抑制剂：ETOH/TPGS/PEG300(10:10:80)。通常根据QD×15、10天给药-2天停药-5天给药的时间表经口给药Notch抑制剂，但亦评价其他时间表，且显示为有效的。例如，显示由QD×12、4天给药-3天停药组成的给药方案与QD×15、10天给药-2天停药-5天给药同样有效。在BID研究中，在第一剂量后6小时至12小时给予第二剂量。

Claims (12)

1.式(I)化合物：
其中：
R1为-CH2CH2CF3；
R2为-CH2CH2CF3、-CH2(环丙基)，或苯基；
R3为H或-CH3；
环A为苯基或吡啶基；
各Ra独立地为F、Cl、-CN、-CHF2或环丙基；
各Rb独立地为F、Cl、-CN、-CH3、-CHF2、-CF3或环丙基；
y为零、1或2；和
z为零、1或2。
2.权利要求1的化合物，其中R3为H。
3.权利要求1的化合物，其中R3为-CH2CH2CF3。
4.权利要求1的化合物，其中R2为-CH2(环丙基)。
5.权利要求4的化合物，其中R2为苯基。
6.权利要求1的化合物，其中环A为苯基。
7.权利要求1的化合物，其中环A为吡啶基。
8.权利要求1的化合物，其选自：(2R,3S)-N-((3S)-6-氯-1-(3-环丙基苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(1)；(2R,3R)-N-((3S)-1-(3-氰基苯基)-6-(二氟甲基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-苯基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(2)；(2R,3S)-N-((3S)-1-(3-氯苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(3)；(2R,3S)-N-((3S)-1-(4-氯苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(4)；(2R,3S)-N-((3S)-1-(3-环丙基苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(5)；(2R,3S)-N-((3S)-1-(4-氟苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(6)；(2R,3S)-N-((3S)-1-(3-氯苯基)-6-环丙基-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(7)；(2R,3R)-N-((3S)-6-氰基-4-氧代-1-(3-(三氟甲基)苯基)-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-苯基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(8)；(2R,3R)-N-((3S)-1-(3-氯-5-氰基苯基)-6-(二氟甲基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-苯基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(9)；(2R,3S)-N-((3S)-1-(3-氰基苯基)-6-(二氟甲基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(10)；(2R,3R)-N-((3S)-1-(3-氰基-5-甲基苯基)-6-(二氟甲基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-苯基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(11)；(2R,3S)-N-((3S)-6-(二氟甲基)-1-(3-(二氟甲基)苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(12)；(2R,3R)-N-(1-(3-氰基-5-氟苯基)-6-(二氟甲基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-苯基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(13)；(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-6-氟-4-氧代-1-(3-(三氟甲基)苯基)-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(14)；(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-1-(3-环丙基苯基)-6-氟-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(15)；(2R,3S)-3-(环丙基甲基)-N-((3S)-1-(3,4-二氯苯基)-6-氟-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(16)；(2R,3S)-N-((3S)-1-(3-氰基苯基)-6-氟-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(17)；(2R,3R)-N-((3S)-1-(3-氰基苯基)-6-氟-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-苯基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(18)；(2R,3S)-N-((3S)-6-氯-1-(4-氯苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(19)；(2R,3S)-N-((3S)-6-氯-4-氧代-1-(3-(三氟甲基)苯基)-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(20)；(2R,3S)-N-((3S)-6-氯-4-氧代-1-(3-(三氟甲基)苯基)-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(21)；(2R,3R)-N-((3S)-6-氯-4-氧代-1-(3-(三氟甲基)苯基)-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-苯基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(22)；(2R,3S)-N-((3S)-6-氯-1-(3-氰基苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(23)；(2R,3R)-N-((3S)-6-氯-1-(3-氰基苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-苯基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(24)；(2R,3S)-N-((3S)-6-氯-1-(3-氰基苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(25)；(2R,3S)-N-((3S)-6-氯-1-(2-氰基苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(26)；(2R,3R)-N-((3S)-6-氯-1-(3-氰基-5-氟苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-苯基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(27)；(2R,3S)-N-((3S)-6-氯-1-(3-氰基-5-氟苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(28)；(2R,3S)-N-((3S)-6-氯-1-(3-环丙基苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-(环丙基甲基)-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(29)；(2R,3R)-N-((3S)-6-氯-1-(3,4-二氯苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-苯基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(30)；(2R,3S)-N-((3S)-6-氯-1-(3-氯苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(31)；(2R,3S)-N-((3S)-6-氯-1-(3,4-二氯苯基)-4-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(32)；(2R,3S)-N-((3S)-6-氯-4-氧代-1-(2-吡啶基)-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(33)；(2R,3R)-N-((3S)-6-氯-4-氧代-1-(6-(三氟甲基)-2-吡啶基)-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-苯基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(34)；(2R,3S)-N-((3S)-6-氯-4-氧代-1-(6-(三氟甲基)-2-吡啶基)-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(35)；(2R,3R)-N-((3S)-6-氯-4-氧代-1-(4-(三氟甲基)-2-吡啶基)-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-3-苯基-2-(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(36)；(2R,3S)-N-((3S)-7-氟-4-氧代-1-苯基-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(37)；和(2R,3S)-N-((3S)-7-氟-4-氧代-1-(3-(三氟甲基)苯基)-2,3,4,5-四氢-1H-1,5-苯并二氮杂-3-基)-2,3-双(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(38)。
9.药物组合物，其包含权利要求1至8中任一项的化合物和药学上可接受的载体。
10.权利要求1至9中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗癌症的疗法中。
11.权利要求10的化合物或其药学上可接受的盐，其中该疗法进一步包含一种或多种选自达沙替尼、紫杉醇、他莫昔芬、地塞米松及卡铂的额外药剂，其依序或同时给药用于治疗癌症。
12.权利要求1至9中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，用于制造治疗癌症的药物。
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