CN104968648A - 1,4-苯并二氮杂*酮化合物的前药 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了式(I)化合物和其盐，其中：a)R1为H或-CH3且R2为Ry；或b)R1为Rx且R2为H；其中Rx和Ry如本申请中所公开的。本发明还公开了使用这些化合物抑制Notch受体的方法，及包含这些化合物的药物组合物。这些化合物为可用于治疗、预防各种医疗领域中的疾病或病症(例如癌症)或减缓其进展的化合物的前药。

Description

1,4-苯并二氮杂*酮化合物的前药
发明内容
一般而言，本发明涉及用作Notch抑制剂前药的苯并二氮杂酮化合物。本发明进一步涉及包含至少一种本发明的化合物的药物组合物，该化合物可用作用于治疗与Notch路径相关的病状(例如癌症及其他增殖性疾病)的化合物的前药。
现有技术
Notch信号传导牵涉在多个细胞过程中，诸如细胞命运特异化(cell fate specification)、分化、增殖、细胞凋亡和血管生成。(Bray,Nature Reviews Molecular Cell Biology,7:678-689(2006)；Fortini,Developmental Cell 16:633-647(2009))。Notch蛋白为单次杂二聚跨膜分子。Notch家族包括4种受体，即Notch1至4，其在结合至DSL家族(Delta-样1、3、4和Jagged 1和2)的配体后活化。
NOTCH的活化及成熟需要一系列加工步骤，包括由γ分泌酶(即含有早老素1或早老素2、纳卡斯特罗因(nicastrin)、APH1及PEN2的多蛋白蛋白复合物)介导的蛋白水解裂解步骤。在裂解NOTCH后，自膜释放NOTCH细胞内结构域(NICD)。所释放的NICD易位至核，在该核中其与CSL家族成员(RBPSUH、“无毛基因抑制因子(suppressor ofhairless)”及LAG1)协作起转录活化子的作用。NOTCH靶标基因包括HES家族成员，例如HES-1。HES-1起到基因的转录抑制子的作用，例如HERP1(亦称为HEY2)、HERP2(亦称为HEY1)及HATH1(亦称为ATOH1)。
Notch路径的异常活化导致肿瘤生成。Notch信号传导的活化牵涉在各种实体肿瘤(包括卵巢癌、胰腺癌以及乳癌)及血液肿瘤(例如白血病、淋巴瘤及多发性骨髓瘤)的发病机理中。Notch抑制的作用及其治疗各种实体及血液肿瘤的效用为阐述于Miele,L.等人，Current CancerDrug Targets,6:313-323(2006)；Bolos,V.等人，Endocrine Reviews,28:339-363(2007)；Shih,I-M.等人，Cancer Research,67:1879-1882(2007)；Yamaguchi,N.等人，Cancer Research,68:1881-1888(2008)；Miele,L.,Expert Review Anticancer Therapy,8:1197-1201(2008)；Purow,B.,Current Pharmaceutical Biotechnology,10:154-160(2009)；Nefedova,Y.等人，Drug Resistance Updates,11:210-218(2008)；Dufraine,J.等人，Oncogene,27:5132-5137(2008)；及Jun,H.T.等人，Drug Development Research,69:319-328(2008)中。
领域内仍需要可用作Notch抑制剂且具有足够代谢稳定性以提供有效水平的药物暴露的化合物。此外，领域内仍需要用作Notch抑制剂的可向患者经口或经静脉内给药的化合物。
美国专利第7,053,084B1号公开用于治疗诸如阿兹海默氏病(Alzheimer's Disease)等神经病症的琥珀酰基氨基苯并二氮杂化合物。该参考文献公开这些琥珀酰基氨基苯并二氮杂化合物抑制γ分泌酶活性及与类淀粉蛋白神经沉积物形成关联的类淀粉前体蛋白加工。
具有式(A)结构的化合物(2R,3S)-N-((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺：
和具有式(B)结构的(2R,3S)-N-((3S)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺：
具有作为Notch路径的抑制剂的活性，因此使其可用作抗癌剂。这些化合物、制备例方法及其使用这些化合物的方法披露于美国专利申请US No.13/426,730中。该申请转让给本受让人并以其整体结合在本申请中作为参考。
可以理解的是，对于向患者递送化合物(A)和(B)的改进仍然存在需求。
申请人已经发现化合物(A)和(B)的前药可用于分别给药化合物化合物(A)和(B)。在生理上重要的pH值，这些前药比化合物(A)和(B)的溶解性更好，并出人意料地以允许以更宽的剂量范围和/或更宽的药物制剂给药(A)和(B)。提供这些前药化合物用作具有对其可药性甚为重要的期望稳定性、生物可用度、治疗指数及毒性值的医药。
发明内容
本发明藉由提供用作Notch信号传导路径的选择性抑制剂的(2R,3S)-N-((3S)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺和(2R,3S)-N-((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺的前药化合物、包括前药化合物的盐来满足前述需求。
本发明亦提供包含药学上可接受的载体；及至少一种式(I)化合物的药物组合物或其药学上可接受的盐。
本发明亦提供治疗与Notch受体的活性相关的疾病或病症的方法，该方法包含向哺乳动物患者给药式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
本发明亦提供用于制造式(I)化合物或其盐的方法及中间体。
本发明亦提供用于疗法的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
本发明亦提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐用以制造用以治疗癌症的药品的用途。
式(I)化合物为Notch抑制剂的前药，可用于治疗、预防或治愈各种Notch受体相关病状。包含这些前药化合物的药物组合物可用于治疗、预防各种医疗领域中的疾病或病症(例如癌症)或减缓其进展。
随着本公开内容的继续将以展开形式阐述本发明的这些及其他特征。
附图说明
参照下文所阐述的附图来阐释本发明。
图1显示化合物A和实施例12(化合物A的前药)对TALL1人类T细胞急性淋巴胚细胞白血病的抗肿瘤效力。静脉内给药QDx3，每周x 3。每一符号代表一组8只小鼠的肿瘤负荷量中值。(●)对照；(□)化合物A,3mg/kg；(○)实施例12,1.5mg/kg；(◇)实施例12,3mg/kg；(△)实施例12,6mg/kg。
具体实施方式
本发明的第一方面提供至少一种式(I)化合物：
或其盐，其中：
a)R1为H或-CH3且R2为Ry；或
b)R1为Rx且R2为H；
Rx为-CH2OC(O)-(CH2)n-(CRaRb)n-X；
X为-NReRf、-OP(＝O)(OH)2、或
Ra和Rb独立地为H和/或C1-3烷基，或与它们连接的碳原子一起形成C3-5环烷基环；
各n独立地为零和/或1；
Ry为Z或-S-Z；
Z为-NRcRd和/或-CO2Rg取代的C1-6烷基；
Rc和Rd独立地为H和/或C1-4烷基，或与它们连接的氮一起形成含1至2个氮原子的杂环，其中所述杂环取代以零至2个独立地选自以下的取代基：-OH、C1-4烷基和/或NReRf；
Re和Rf独立地为H和/或C1-4烷基；且
Rg为H或C1-4烷基。
一实施方案提供式(I)化合物或其盐，其中：
a)R1为H或-CH3且R2为Ry；或
b)R1为Rx且R2为H；
Rx为：-CH2OC(O)C(CH3)2NH2、-CH2OC(O)CH(CH3)NH2、-CH2OC(O)CH(CH(CH3)2)NH2、 或且
Ry为：-SCH2CH2NH2、-SCH2CH2N(CH3)2、-SCH2CH(NH2)C(O)OH、-SCH2CH(NH2)C(O)OCH3、-CH2NHCH2CH(CH3)2、 或
一实施方案提供式(I)化合物或其盐，其中R1为H或-CH3；R2为Ry；且Ry在第一方面中定义。该化合物具有式(II)的结构：
一实施方案提供式(II)化合物或其盐，其中Ry为Z或-S-Z；Z为-NRcRd和/或-CO2Rg取代的C1-6烷基；Rc和Rd独立地为H和/或C1-4烷基，或与它们连接的氮杂原子和零至1个另外的杂原子一起形成5至6元杂环，其中所述杂环取代以零至2个独立地选自以下的取代基：-OH、C1-4烷基和/或NReRf；且Re和Rf在第一方面中定义。在该实施方案中包括其中5至6元杂环含有氮杂原子和零至1个选自氮或氧的另外的杂原子的化合物。在该实施方案中还包括其中5至6元杂环选自吡咯烷、哌啶、哌嗪和吗啉的化合物。
一实施方案提供式(II)化合物或其盐，其中R1和Ry在第一方面中定义；且Rc和Rd独立地为H和/或C1-4烷基。在该实施方案中包括其中Rc和Rd独立地为H和/或C1-2烷基的化合物。在该实施方案中还包括其中Rc和Rd独立地为H和/或-CH3的化合物。
一实施方案提供式(II)化合物或其盐，其中R1和Ry在第一方面中定义；且Rc和Rd与它们连接的氮一起形成含有氮杂原子和零至1个另外的杂原子的5至6元杂环，其中所述杂环取代以零至2个独立地选自以下的取代基：-OH、C1-4烷基和/或NReRf。在该实施方案中还包括其中5至6元杂环含有氮杂原子和零至1个另外的选自氮或氧的杂原子的化合物。在该实施方案中还包括其中5至6元杂环选自吡咯烷、哌啶、哌嗪和吗啉的化合物。
一实施方案提供式(I)化合物或其盐，其中R1和R2在第一方面中定义；且Re和Rf独立地为H和/或C1-2烷基。在该实施方案中包括其中Re和Rf独立地为H或-CH3的化合物。在该实施方案中还包括其中Re为H且Rf为H的化合物。
一实施方案提供式(II)化合物或其盐，其中R1和Ry在第一方面中定义；且Rg为H或C1-2烷基。在该实施方案中还包括其中Rg为H或-CH3的化合物。
一实施方案提供式(I)化合物或其盐，其中R1为H且R2为Ry。该化合物具有式(III)的结构：
在该实施方案中包括式(III)化合物或其盐，其中Ry为-SCH2CH2NH2或-SCH2CH(NH2)C(O)OH。
一实施方案提供选自以下的式(III)化合物或其盐:
和
一实施方案提供式(I)化合物或其盐，其中R1为-CH3且R2为Ry。该化合物具有式(IV)的结构：
一实施方案提供式(IV)化合物或其盐，其中Ry为-CH2NHCH2CH(CH3)2、-SCH2CH2NH2、-SCH2CH2N(CH3)2、-SCH2CH(NH2)C(O)OH、-SCH2CH(NH2)C(O)OCH3、 或
一实施方案提供选自以下的式(III)化合物或其盐：
或
一实施方案提供选自以下的式(III)化合物或其盐：
和一实施方案提供选自以下的式(III)化合物或其盐：
或
一实施方案提供选自以下的式(III)化合物或其盐：
或
一实施方案提供式(I)化合物其中R1为Rx且R2为H；或其盐。该化合物具有式(V)的结构：
一实施方案提供式(V)化合物或其盐，其中Rx在第一方面中定义；且X为-NReRf、或
一实施方案提供式(V)化合物或其盐，其中Rx在第一方面中定义；且X为-NReRf。在该实施方案中包括其中Re和Rf独立地为H和/或C1-2烷基的化合物。在该实施方案中还包括其中X为-NH2或-N(CH3)2的化合物。
一实施方案提供式(V)化合物或其盐，其中Rx为：-CH2OC(O)C(CH3)2NH2、-CH2OC(O)CH(CH3)NH2、-CH2OC(O)CH(CH(CH3)2)NH2或
一实施方案提供式(V)化合物或其盐，其中Rx在第一方面中定义；且X为：或
一实施方案提供式(V)化合物或其盐，其中Rx为：或
一个实施方案提供选自以下的至少一种式(I)化合物和/或至少一种盐：(4-(膦酰基氧基)苯基)乙酸((3S)-3-(((2R,3S)-3-氨基甲酰基-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰基)氨基)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯(1)；4-((膦酰基氧基)甲基)苯甲酸((3S)-3-(((2R,3S)-3-氨基甲酰基-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰基)氨基)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯(2)；3-(2,4-二甲基-6-(膦酰基氧基)苯基)-3-甲基丁酸(3-(((2R,3S)-3-氨基甲酰基-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰基)氨基)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯(3)；2-甲基丙氨酸((3S)-3-(((2R,3S)-3-氨基甲酰基-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰基)氨基)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯(4)；L-丙氨酸((3S)-3-(((2R,3S)-3-氨基甲酰基-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰基)氨基)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯(5)；L-缬氨酸((3S)-3-(((2R,3S)-3-氨基甲酰基-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰基)氨基)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯(6)；1-氨基环丙烷甲酸((3S)-3-(((2R,3S)-3-氨基甲酰基-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰基)氨基)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯(7)；(2S,3R)-N-((2-氨基乙基)硫基)-N′-((3S)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(8)；S-(((2S,3R)-6,6,6-三氟-3-(((3S)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)氨基甲酰基)-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰基)氨基)-L-半胱氨酸(9)；(2S,3R)-N-((异丁基氨基)甲基)-N′-((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(10)；(2S,3R)-N-((2-氨基乙基)硫基)-N′-((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(11)；S-(((2S,3R)-6,6,6-三氟-3-(((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)氨基甲酰基)-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰基)氨基)-L-半胱氨酸(12)；(2S,3R)-N-((2-(二甲基氨基)乙基)硫基)-N′-((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(13)；S-(((2S,3R)-6,6,6-三氟-3-(((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)氨基甲酰基)-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰基)氨基)-L-半胱氨酸甲基酯(14)；(2R,3S)-N-((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-N′-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(15)；(2R,3S)-N-((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-N′-(1-哌啶基甲基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(16)；(2S,3R)-N-((4-氨基-1-哌啶基)甲基)-N′-((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(17)；(2S,3R)-N-((4-(二甲基氨基)-1-哌啶基)甲基)-N′-((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(18)；(2S,3R)-N-((4-羟基-1-哌啶基)甲基)-N′-((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(19)；(2S,3R)-N-((3-羟基-1-吡咯烷基)甲基)-N′-((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(20)；(2S,3R)-N-((3-(二甲基氨基)-1-吡咯烷基)甲基)-N′-((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(21)；和(2R,3S)-N-((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-N′-(1-吡咯烷基甲基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(22)。
本发明可以其他具体形式体现，此不背离其精神或本质属性。本发明涵盖本申请所提及的本发明方面和/或实施方案的所有组合。应理解，本发明的任一及所有实施方案可结合任一或多个其他实施方案来阐述其他实施方案。亦应理解，这些实施方案的每一个别元素意欲与来自任一实施方案的任一及所有其他元素组合来阐述其他实施方案。
定义
在阅读以下详细阐述时，本领域技术人员可更容易地理解本发明的特征及优势。应了解，本发明的出于清晰的原因于上下文中在单独实施方案的情形下阐述的某些特征亦可组合以形成单一实施方案。相反地，本发明的出于简洁的原因在单一实施方案的情形下所阐述的各种特征亦可组合以形成其子组合。本申请中识别为实例性或优选的实施方案意欲为阐释性的，且并非限制性的。
除非本申请中另有明确说明，否则所提及的单数形式亦可包括复数。例如，“一(a)”和“一(an)”可指一个或一种一或多个或种。
除非另有指示，否则假设具有未满足原子价的任何杂原子具有足以满足这些原子价的氢原子。
本申请中所阐释的定义优先于以引用的方式并入本申请中的任一专利、专利申请案和/或专利申请公开案中所阐释的定义。
下文列示用于描述本发明的各术语的定义。当在本说明书通篇中个别地或作为较大基团的一部分使用这些术语(除非在具体情况下另外限制这些术语)时，这些定义适用于这些术语。
在本说明书通篇中，本领域技术人员可选择基团及其取代基以提供稳定部分及化合物。
根据本领域内使用的惯例，在本申请的结构式中使用的用来描述基团部分或取代基连接至母核或主链结构的连接点的键。
本申请所用的术语“烷基”为指含有(例如)1个至6个碳原子及1个至4个碳原子的具支链及直链饱和脂肪族烃基团。烷基的实例包括(但不限于)甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(例如正丙基及异丙基)、丁基(例如正丁基、异丁基、仲丁基及叔丁基)及戊基(例如正戊基、异戊基、新戊基)、正己基、2-甲基戊基、2-乙基丁基、3-甲基戊基及4-甲基戊基。当数字在符号“C”后面以下标形式出现时，该下标更具体地定义特定基团可含有的碳原子的数量。例如、“C1-6烷基”表示具有1个至6个碳原子的直链及具支链烷基。
术语"环烷基"是指含有1个以上环且每个环3至6个碳的完全饱和的烃基。术语"C3-6环烷基"意在包括C3、C4、C5和C6环烷基。示例性环烷基包括但不限于：环丙基、环丁基、环戊基和环己基。支链环烷基例如1-甲基环丙基和2-甲基环丙基也包括在"环烷基"的定义中。
术语"杂环基团"或"杂环基"可以互换使用，是指非芳香族3至7元单环，其中至少一个环具有至少一个杂原子(O、S或N)，所述杂原子含有优选具有1至3个独立地选自O、S和/或N的杂原子的环。氮原子可以任选季铵化。
本申请所用的词组“药学上可接受”为指那些化合物、材料、组合物和/或剂型在合理医学判断范围内适于与人类及动物组织接触使用且无过度毒性、刺激性、过敏反应或其他问题或并发症，与合理益处/风险比率相应。
式(I)化合物可以非晶形固体或结晶固体的形式提供。可采用冻干来提供呈固体形式的式(I)化合物。
还应当理解式(I)化合物的溶剂化物(例如，水合物)也在本发明的范围内。术语“溶剂化物”意指式(I)化合物与一个或多个溶剂分子(无论是有机的还是无机的)的物理缔合。该物理缔合包括氢键。在一些情况中，该溶剂化物能够分离，例如当一个或多个溶剂分子掺入至结晶固体的晶格中时。“溶剂化物”涵盖溶液相溶剂化物和可分离的溶剂化物。示例性溶剂化物包括水合物、乙醇合物、甲醇合物、异丙醇合物、乙腈溶剂化物和乙酸乙酯溶剂化物。溶剂化的方法是本领域已知的。
前药为可以在体内转化提供生物活性药剂的化合物。
另外，在制备式(I)化合物后可对其实施分离及纯化，以获得含有等于或大于99重量％的量的式(I)化合物(“实质上纯”)的组合物，然后如本申请中所阐述对其进行使用或配制。这些“实质上纯的”式(I)化合物亦作为本发明的一部分涵盖于本申请中。
“稳定化合物”及“稳定结构”意欲指示健壮足以经受自反应混合物分离达有用纯度并配制成有效治疗剂的化合物。本发明意欲体现稳定化合物。
“治疗有效量”意欲包括仅本发明化合物单独的量、或所主张化合物的组合的量,或本发明化合物与可有效用作抑制剂或NOTCH受体或可有效治疗或预防增殖性疾病(例如癌症)的其他活性成份的组合的量。
本申请所用“治疗(treating或treatment)”涵盖哺乳动物(特定而言人类)中的疾病状态的治疗，且包括：(a)在哺乳动物中、特定而言在该哺乳动物易患该疾病状态但尚未诊断为患有该疾病状态时预防该疾病状态发生；(b)抑制该疾病状态，即遏制其发展；和/或(c)缓解该疾病状态，即使该疾病状态消退。
本发明化合物意欲包括在本发明化合物中出现的原子的所有同位素。同位素包括那些具有相同原子序数但具有不同质量数的原子。根据一般实例且不加以限制，氢的同位素包括氘(D)及氚(T)。碳的同位素包括13C及14C。本发明的经同位素标记的化合物通常可藉由本领域技术人员已知的习用技术来制备，或可藉由与本申请中所阐述方法类似的方法使用适当的经同位素标记试剂代替原本采用的未经标记试剂来制备。
式(I)化合物可形成亦在本发明范围内的盐。除非另有指示，否则所提及的本发明化合物应理解为包括提及的其一或多种盐。术语“盐”表示与无机和/或有机酸及碱形成的酸性和/或碱性盐。另外，术语“盐”可包括两性离子(内盐)，例如当式(I)化合物含有碱性部分(例如胺或吡啶或咪唑环)及酸性部分(例如羧酸)时。药学上可接受的(即，无毒、生理上可接受)盐优选，例如可接受的金属盐及胺盐，其中阳离子对盐的毒性或生物活性无显著贡献。然而，其他盐可用于(例如)可在制备期间采用的分离或纯化步骤，且因而涵盖于本发明的范围内。例如，可藉由使式(I)化合物与一定量的酸或碱(例如，1当量量)在诸如其中可沉淀盐的介质等介质中或在水性介质中反应、继而冻干来形成式(I)化合物的盐。
实例性酸加成盐包括乙酸盐(例如与乙酸或三卤乙酸(例如三氟乙酸)形成的那些)、己二酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬胺酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙烷磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐(与盐酸形成)、氢溴酸盐(与溴化氢形成)、氢碘酸盐、马来酸盐(与马来酸形成)、2-羟基乙烷磺酸盐、如酸盐、甲烷磺酸盐(与甲烷磺酸形成)、2-萘磺酸盐、烟碱酸盐、硝酸盐、草酸盐、果胶酯酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐(例如与硫酸形成的那些)、磺酸盐(例如本申请中所提及的那些)、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐(toluenesulfonate，例如tosylate)、十一碳酸盐及诸如此类。
实例性碱性盐包括铵盐、诸如钠、锂及钾盐等碱金属盐；诸如钙及镁盐等碱土金属盐；钡、锌及铝盐；与有机碱(例如有机胺)形成的盐，例如诸如三乙基胺等三烷基胺、普鲁卡因(procaine)、二苄基胺、N-苄基-β-苯乙基胺、1-二苯羟甲胺、N,N'-二苄基乙二胺、去氢二乙胺、N-乙基六氢吡啶、苄基胺、二环己基胺或类似的药学上可接受的胺；及与诸如精胺酸、赖氨酸及诸如此类等氨基酸形成的盐。碱性含氮基团可用诸如以下等试剂季铵化：低碳烷基卤化物(例如甲基、乙基、丙基及丁基的氯化物、溴化物及碘化物)、硫酸二烷基酯(例如硫酸二甲酯、硫酸二乙酯、硫酸二丁酯及硫酸二戊酯)、长链卤化物(例如癸基、月桂基、肉豆蔻基及硬脂酰基的氯化物、溴化物及碘化物)、芳烷基卤化物(例如苄基溴及苯乙基溴)；及其他试剂。优选盐包括单盐酸盐、硫酸氢盐、甲烷磺酸盐、磷酸盐或硝酸盐。
式(I)化合物可藉由适于预治疗的病状的任何方式给药，此可取决于对位点特异性治疗的需求或预递送的式(I)化合物的量。
本发明中亦涵盖一类药物组合物，其包含至少一种式(I)化合物或其盐；及一或多种无毒、药学上可接受的载体和/或稀释剂和/或佐剂(本申请中统称为“载体”材料)及(若期望)其他活性成份。式(I)化合物可藉由任何适宜途径给药，优选以适于此一途径的药物组合物形式且以对期望治疗有效的剂量给药。本发明的化合物及组合物可(例如)经口、经黏膜或非经肠(包括经血管内、经静脉内、经腹膜内、经皮下、经肌内及经胸骨内)以含习用药学上可接受的载体、佐剂及媒剂的剂量单位配制物给药。例如，该药物载体可含有甘露醇或乳糖与微晶纤维素的混合物。该混合物可含有其他组份，例如润滑剂(例如硬脂酸镁)及崩解剂(例如交联聚维酮(crospovidone))。可将该载体混合物填充至明胶胶囊中或压制为锭剂。该药物组合物可以例如经口剂型或输注形式给药。
对于经口给药，药物组合物可呈(例如)锭剂、胶囊、液体胶囊、悬浮液或液体形式。药物组合物优选制成含有特定量的活性成份的剂量单元形式。例如，药物组合物可以包含在约1mg至2000mg、优选约1mg至500mg且更佳约5mg至150mg的范围内的量的活性成份的锭剂或胶囊形式提供。适于人类或其他哺乳动物的日剂量可视患者的病状及其他因而在宽范围内变化素，但可使用常规方法确定。
本申请中所涵盖的任一药物组合物可(例如)经由任何可接受且适宜的经口制剂经口递送。实例性经口制剂包括(但不限于，例如)锭剂、口含锭、含片、水性及油性悬浮液、可分散粉末或颗粒、乳液、硬胶囊及软胶囊、糖浆及酏剂。意欲用于经口给药的药物组合物可根据领域内已知用于制造意欲用于经口给药的药物组合物的任何方法制备。为提供医药上可口的制剂，本发明的药物组合物可含有至少一种选自甜味剂、矫味剂、着色剂、缓和剂、抗氧化剂及防腐剂的药剂。
锭剂可藉由(例如)将至少一种式(I)化合物与至少一种适于制造锭剂的无毒且药学上可接受的赋形剂混合来制备。实例性赋形剂包括(但不限于，例如)惰性稀释剂，例如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙及磷酸钠；造粒剂及崩解剂，例如微晶纤维素、交联羧甲基纤维素、玉米淀粉及海藻酸；黏合剂，例如淀粉、明胶、聚乙烯吡咯烷酮及阿拉伯胶(acacia)；及润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸及滑石粉。另外，锭剂可未经涂覆，或藉由已知技术涂覆，以遮蔽味道不快的药物的坏味道，或延迟活性成份在胃肠道中的崩解及吸收，从而使活性成份的效应持续较长时期。实例性水溶性遮味材料包括(但不限于)羟丙基-甲基纤维素及羟丙基-纤维素。实例性延时材料包括(但不限于)乙基纤维素及乙酸丁酸纤维素。
硬明胶胶囊可藉由(例如)将至少一种式(I)化合物与至少一种惰性固体稀释剂(例如碳酸钙；磷酸钙；及高岭土(kaolin))混合来制备。
软明胶胶囊可藉由(例如)将至少一种式(I)化合物与至少一种水溶性载体(例如聚乙二醇)；及至少一种油性介质(例如花生油、液体石蜡及橄榄油)混合来制备。
水性悬浮液可藉由(例如)将至少一种式(I)化合物与至少一种适于制造水性悬浮液的赋形剂混合来制备。适于制造水性悬浮液的实例性赋形剂包括(但不限于，例如)悬浮剂，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基-纤维素、海藻酸钠、海藻酸、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶及阿拉伯胶；分散或润湿剂，例如天然存在的磷脂、例如卵磷脂；环氧烷与脂肪酸的缩合产物，例如聚氧乙烯硬脂酸酯；环氧乙烷与长链脂肪族醇的缩合产物，例如十七烷乙烯-氧基鲸蜡醇；环氧乙烷与衍生自脂肪酸及己糖醇的部分酯的缩合产物，例如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯；及环氧乙烷与衍生自脂肪酸及己糖醇酸酐的部分酯的缩合产物，例如聚乙烯山梨醇酐单油酸酯。水性悬浮液亦可含有至少一种防腐剂，例如对羟基苯甲酸乙酯及对羟基苯甲酸正丙酯；至少一种着色剂；至少一种矫味剂；和/或至少一种甜味剂，包括(但不限于，例如)蔗糖、糖精及阿司巴甜(aspartame)。
油性悬浮液可藉由(例如)将至少一种式(I)化合物悬浮于植物油(例如花生油；橄榄油；芝麻油；及椰子油)中；或矿物油(例如液体石蜡)中来制备。油性悬浮液亦可含有至少一种增稠剂，例如蜂蜡；硬石蜡；及鲸蜡醇。为提供可口油性悬浮液，可将至少一种上文已述甜味剂和/或至少一种矫味剂添加至油性悬浮液中。油性悬浮液可进一步含有至少一种防腐剂，包括(但不限于，例如)抗氧化剂例如丁基化羟基苯甲醚及α-生育酚。
可分散粉末及颗粒可藉由(例如)将至少一种式(I)化合物与至少一种分散剂和/或润湿剂；至少一种悬浮剂；和/或至少一种防腐剂混合来制备。适宜分散剂、润湿剂及悬浮剂为如上文已阐述。实例性防腐剂包括(但不限于，例如)抗氧化剂，例如抗坏血酸。另外，可分散粉末及颗粒亦可含有至少一种赋形剂，包括(但不限于，例如)甜味剂；矫味剂；及着色剂。
至少一种式(I)化合物的乳液可(例如)制备成水中油型乳液。包含式(I)化合物的乳液的油相可自已知成份以已知方式构成。油相可由(但不限于，例如)植物油(例如橄榄油及花生油)；矿物油(例如液体石蜡)；及其混合物提供。尽管该相可仅包含乳化剂，但其可包含至少一种乳化剂与脂肪或油或者与脂肪及油二者的混合物。适宜乳化剂包括(但不限于，例如)天然存在的磷脂，例如大豆卵磷脂；衍生自脂肪酸及己糖醇酸酐的酯或部分酯，例如山梨醇酐单油酸酯；及部分酯与环氧乙烷的缩合产物，例如聚氧乙烯山梨醇酐单油酸酯。优选地，包括亲水性乳化剂以及用作稳定剂的亲脂性乳化剂。亦优选包括油与脂肪二者。乳化剂在具有或不具有稳定剂的情况下一起构成所谓的乳化蜡，且该蜡与油及脂肪一起构成所谓的乳化软膏基质，该乳化软膏基质形成乳膏配制物的油性分散相。乳液亦可含有甜味剂、矫味剂、防腐剂和/或抗氧化剂。适用于本发明配制物的乳化剂及乳液稳定剂包括吐温60(Tween 60)、斯盘80(Span 80)、鲸蜡硬脂醇、肉豆蔻醇、甘油单硬脂酸酯、月桂基硫酸钠、甘油二硬脂酸酯，单独或与蜡或领域内熟知的其他材料一起。
式(I)化合物亦可(例如)经静脉内、经皮下和/或经肌内经由任何药学上可接受且适宜的可注射形式递送。实例性可注射形式包括(但不限于，例如)包含可接受的媒剂及溶剂(例如水、林格式溶液(Ringer'ssolution)及等渗氯化钠溶液)的灭菌水溶液；灭菌水中油型微乳液；及水性或油性悬浮液。
用于非经肠给药的配制物可呈水性或非水性等渗灭菌注射溶液或悬浮液的形式。这些溶液及悬浮液可自灭菌粉末或颗粒使用一或多种所提及用于经口给药配制物中的载体或稀释剂或藉由使用其他适宜分散剂或润湿剂及悬浮剂来制备。这些化合物可溶于水、聚乙二醇、丙二醇、乙醇、玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、苯甲醇、氯化钠、黄蓍胶和/或各种缓冲剂中。佐剂及给药模式在医药技术中为众所周知。活性成份亦可藉由以与适宜载体(包括盐水、右旋糖或水)或与环糊精(即，)的组合物形式注射、共溶剂溶解(即，丙二醇)或微胞溶解(即，吐温80)来给药。
灭菌可注射制剂亦可为存于无毒非经肠可接受的稀释剂或溶剂中的灭菌可注射溶液或悬浮液，例如呈存于1,3-丁二醇中的溶液形式。可采用的可接受媒剂及溶剂包括水、林格氏溶液及等渗氯化钠溶液。另外，通常采用灭菌不挥发性油作为溶剂或悬浮介质。出于此目的，可采用任一温和不挥发性油，包括合成单甘油酯或二甘油酯。另外，诸如油酸等脂肪酸可用于制备可注射剂。
灭菌可注射的水中油型微乳液可藉由(例如)以下方式来制备：1)将至少一种式(I)化合物溶解于油相(例如大豆油与卵磷脂的混合物)中；2)将含式(I)油相与水及甘油混合物组合；及3)加工该组合以形成微乳液。
灭菌水性或油性悬浮液可依照领域内已知方法来制备。例如，灭菌水溶液或悬浮液可利用无毒的非经肠可接受的稀释剂或溶剂(例如1,3-丁二醇)来制备；且灭菌油性悬浮液可利用灭菌无毒的可接受的溶剂或悬浮介质(例如灭菌不挥发性油，例如合成单甘油酯或二甘油酯；及脂肪酸(例如油酸))来制备。
可用于本发明药物组合物中的药学上可接受的载体、佐剂及媒剂包括(但不限于)离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、自乳化药物递送系统(SEDDS，例如d-α-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯)、药物剂型中所用的表面活性剂(例如吐温、诸如表面活性剂(BASF)等聚乙氧基化蓖麻油或其他类似聚合递送基质)、血清蛋白(例如人类血清白蛋白)、缓冲物质(例如磷酸盐)、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质(例如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶质二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素基物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段共聚物、聚乙二醇及羊毛脂。环糊精(α-、β-及γ-环糊精)或经化学改质的衍生物(例如包括2-及3-羟丙基-环糊精的羟基烷基环糊精或其他溶解衍生物)亦可有利地用于增强本申请中所述式的化合物的递送。
本发明的药物上活性化合物可依照习用药学方法加工以产生向患者(包括人类及其他哺乳动物)给药的药剂。药物组合物可经受习用医药操作(例如灭菌)，和/或可含有习用佐剂，例如防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、缓冲液等。锭剂及丸剂可另外制备有肠溶包衣。这些组合物亦可包含佐剂，例如润湿剂、甜味剂、矫味剂及香化剂。
所给药化合物的量及利用本发明的化合物和/或组合物治疗疾病状况的剂量方案取决于各种因素，包括受试者的年龄、重量、性别及医学状况、疾病类型、疾病的严重性、给药的途径及频率及所采用的特定化合物。因此，该剂量方案可在宽范围内改变，但可使用标准方法常规地确定。约0.001mg/kg体重至100mg/kg体重、优选介于约0.005与约50mg/kg体重的间且最佳介于约0.01mg/kg体重至10mg/kg体重的间的日剂量可为适当的。日剂量可每天以1次至4次剂量来给药。
出于治疗目的，本发明的活性化合物通常与一或多种适于所指示给药途径的佐剂组合。若经口给药，则化合物可与乳糖、蔗糖、淀粉粉末、烷酸的纤维素酯、纤维素烷基酯、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸镁、氧化镁、磷酸及硫酸的钠盐及钙盐、明胶、阿拉伯胶、海藻酸钠、聚乙烯基吡咯烷酮和/或聚乙烯醇混合，且然后压锭或囊封以方便给药。这些胶囊或锭剂可含有受控释放配制物，其可以活性化合物存于羟丙基甲基纤维素中的分散液提供。
本发明的药物组合物包含式(I)化合物或其盐和任选的选自任何药学上可接受的载体、佐剂及媒剂的其他药剂。本发明的替代组合物包含本申请中所述的式(I)化合物或其前药及药学上可接受的载体、佐剂或媒剂。
效用
式(I)化合物可用于治疗癌症，例如依赖于Notch活化的癌症。Notch活化参与各种实体肿瘤(包括卵巢癌、胰腺癌以及乳癌)及血液肿瘤(例如白血病、淋巴瘤及多发性骨髓瘤)的发病机制。
在一实施方案中，提供用于治疗癌症的方法，其包含向有需要的哺乳动物给药式(I)化合物或其盐。此实施方案的方法可用于治疗各种癌症，包括(但不限于)膀胱癌、乳癌、结肠直肠癌、胃癌、头颈癌、肾癌、肝癌、肺癌包括非小细胞肺癌(NSCLC)、卵巢癌、胰腺癌、胆囊癌、前列腺癌、甲状腺癌、骨肉瘤、横纹肌肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤(MFH)、纤维肉瘤、神经胶质母细胞瘤/星形细胞瘤、神经胚细胞瘤、黑色素瘤、T细胞急性淋巴胚细胞白血病(T-ALL)及间皮瘤。例如，此实施方案的方法为用于治疗乳癌、结肠癌或胰腺癌。优选地，哺乳动物为人类。例如，在本实施方案的方法中可给药用于治疗癌症的治疗有效量。本实施方案中的给药途径包括非经肠给药和经口给药。
在一实施方案中，提供用于治疗癌症的方法，其包含向有需要的哺乳动物给药式(I)化合物或其盐，其中该癌症为结肠直肠癌。优选地，哺乳动物为人类。例如，在本实施方案的方法中可给药用于治疗癌症的治疗有效量。本实施方案中的给药途径包括非经肠给药和经口给药。
在一实施方案中，提供用于治疗癌症的方法，其包含向有需要的哺乳动物给药式(I)化合物或其盐，其中该癌症为三阴性乳腺癌。优选地，哺乳动物为人类。例如，在本实施方案的方法中可给药用于治疗癌症的治疗有效量。本实施方案中的给药途径包括非经肠给药和经口给药。
在一实施方案中，提供用于治疗癌症的方法，其包含向有需要的哺乳动物给药式(I)化合物或其盐，其中该癌症为非小细胞肺癌。优选地，哺乳动物为人类。例如，在本实施方案的方法中可给药用于治疗癌症的治疗有效量。本实施方案中的给药途径包括非经肠给药和经口给药。
在一实施方案中，提供用于治疗癌症的方法，其包含向有需要的哺乳动物给药式(I)化合物或其盐，其中该癌症为胰腺癌。优选地，哺乳动物为人类。例如，在本实施方案的方法中可给药用于治疗癌症的治疗有效量。本实施方案中的给药途径包括非经肠给药和经口给药。
在一实施方案中，提供用于治疗癌症的方法，其包含向有需要的哺乳动物给药式(I)化合物或其盐，其中该癌症为卵巢癌。优选地，哺乳动物为人类。例如，在本实施方案的方法中可给药用于治疗癌症的治疗有效量。本实施方案中的给药途径包括非经肠给药和经口给药。
在一实施方案中，提供用于治疗癌症的方法，其包含向有需要的哺乳动物给药式(I)化合物或其盐，其中该癌症为黑素瘤。优选地，哺乳动物为人类。例如，在本实施方案的方法中可给药用于治疗癌症的治疗有效量。本实施方案中的给药途径包括非经肠给药和经口给药。
在一实施方案中，提供式(I)化合物或其盐用于制造用以治疗癌症的药品的用途。优选地，在本发明实施方案中，经受治疗的癌症包括膀胱癌、乳癌、结肠直肠癌、胃癌、头颈癌、肾癌、肝癌、肺癌包括非小细胞肺癌(NSCLC)、卵巢癌、胰腺癌、胆囊癌、前列腺癌、甲状腺癌、骨肉瘤、横纹肌肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤(MFH)、纤维肉瘤、神经胶质母细胞瘤/星形细胞瘤、神经胚细胞瘤、黑色素瘤、T细胞急性淋巴胚细胞白血病(T-ALL)及间皮瘤中的一种或多种。本发明实施方案的适宜药品包括用于非经肠给药的药品(例如溶液及悬浮液)及用于经口给药的药品(例如锭剂、胶囊、溶液及悬浮液)。
一实施方案提供用于治疗癌症的疗法中的式(I)化合物或其盐。在本发明实施方案中，经受治疗的癌症包括膀胱癌、乳癌、结肠直肠癌、胃癌、头颈癌、肾癌、肝癌、肺癌包括非小细胞肺癌(NSCLC)、卵巢癌、胰腺癌、胆囊癌、前列腺癌、甲状腺癌、骨肉瘤、横纹肌肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤(MFH)、纤维肉瘤、神经胶质母细胞瘤/星形细胞瘤、神经胚细胞瘤、黑色素瘤、T细胞急性淋巴胚细胞白血病(T-ALL)及间皮瘤中的一种或多种。
在一实施方案中，提供治疗哺乳动物的癌症的方法，其中该癌症依赖于Notch活化，该方法包含向患者给药式(I)化合物或其盐。此实施方案的方法可用于治疗各种癌症，包括(但不限于)膀胱癌、乳癌、结肠直肠癌、胃癌、头颈癌、肾癌、肝癌、肺癌包括非小细胞肺癌(NSCLC)、卵巢癌、胰腺癌、胆囊癌、前列腺癌、甲状腺癌、骨肉瘤、横纹肌肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤(MFH)、纤维肉瘤、神经胶质母细胞瘤/星形细胞瘤、神经胚细胞瘤、黑色素瘤、T细胞急性淋巴胚细胞白血病(T-ALL)及间皮瘤。优选地，此实施方案的方法为用于治疗乳癌、结肠癌或胰腺癌。优选地，哺乳动物为人类。例如，在本发明实施方案的方法中可给药用于治疗癌症的治疗有效量。适宜给药途径包括非经肠给药及经口给药。
在治疗癌症中，化学治疗剂和/或其他治疗(例如辐射疗法)的组合经常为有利的。相较于主要治疗剂，第二(或第三)药剂可具有相同或不同作用机制。例如，可采用药物组合，其中所给药的两种或更多种药物以不同方式或在细胞周期的不同阶段作用，和/或其中该两种或更多种药物具有不重迭毒性或副效应，和/或其中所组合的药物在治疗患者所表现的特定疾病状态中各具有明显效力。
在一实施方案中，提供治疗癌症的方法，其包含向有需要的哺乳动物给药式(I)化合物或其盐；及给药一或多种其他抗癌剂。
词组“其他抗癌剂”为指选自以下中的一种或多种的药物：烷基化剂(包括氮芥、烷基磺酸盐、亚硝基脲、乙烯亚胺衍生物及三氮烯)；抗血管生成剂(包括基质金属蛋白酶抑制剂)；抗代谢物质(包括腺苷去胺酶抑制剂、叶酸拮抗剂、嘌呤类似物及嘧啶类似物)；抗生素或抗体(包括单株抗体、CTLA-4抗体、蒽环抗生素)；芳香酶抑制剂；细胞周期反应修饰剂；酶；法呢基-蛋白转移酶抑制剂(farnesyl-proteintransferase inhibitor)；激素剂及抗激素剂及类固醇(包括合成类似物、糖皮质激素、雌激素/抗雌激素[例如SERM]、雄激素/抗雄激素、黄体素、黄体酮受体激动剂及促黄体激素释放[LHRH]激动剂及拮抗剂)；胰岛素样生长因子(IGF)/胰岛素样生长因子受体(IGFR)系统调节剂(包括IGFR1抑制剂)；整合素信号传导抑制剂；激酶抑制剂(包括多激酶抑制剂和/或Src激酶或Src/abl的抑制剂、周期素依赖性激酶[CDK]抑制剂、panHer、Her-1及Her-2抗体、VEGF抑制剂(包括抗VEGF抗体)、EGFR抑制剂、有丝分裂促进剂活化蛋白[MAP]抑制剂、MET抑制剂、MEK抑制剂、极光激酶抑制剂、PDGF抑制剂及其他酪胺酸激酶抑制剂或丝胺酸/苏胺酸激酶抑制剂)；微管破坏剂，例如海鞘素或其类似物及衍生物；微管稳定剂，例如紫杉烷(taxane)及天然存在的埃博霉素(epothilone)及其合成及半合成类似物；微管结合去稳定剂(包括长春花生物碱)；拓扑异构酶抑制剂；异戊二烯基蛋白转移酶抑制剂；铂配位错合物；信号转导抑制剂；及用作抗癌症及细胞毒性剂的其他药剂，例如生物反应修饰剂、生长因子及免疫调节剂。
因此，本发明的化合物可与用于治疗癌症或其他增殖性疾病的其他抗癌症治疗组合给药。本发明在本申请中进一步包含式(I)化合物或其盐用于制备用以治疗癌症的药品的用途，和/或其包含将本申请中的式(I)化合物与关于该化合物与用于治疗癌症的其他抗癌症或细胞毒性剂及治疗组合使用的说明书包装在一起。本发明进一步包含式(I)化合物或其盐以及一种或多种其他药剂呈套组形式的组合，例如其中将其包装在一起或置于单独包装中以套组形式一起销售，或其中其为经包装以配制在一起。
在一实施方案中，提供治疗癌症的方法，其包含向有需要的哺乳动物给药式(I)化合物或其盐；给药达沙替尼(dasatinib)；和任选的一或多种其他抗癌剂。
在一实施方案中，提供治疗癌症的方法，其包含向有需要的哺乳动物给药式(I)化合物或其盐；给药紫杉醇；和任选的一或多种其他抗癌剂。
在一实施方案中，提供治疗癌症的方法，其包含向有需要的哺乳动物给药式(I)化合物或其盐；给药他莫昔芬(tamoxifen)；和任选的一或多种其他抗癌剂。
在一实施方案中，提供治疗癌症的方法，其包含向有需要的哺乳动物给药式(I)化合物或其盐；给药糖皮质激素；和任选的一或多种其他抗癌剂。适宜糖皮质激素的实例为地塞米松(dexamethasone)。
在一实施方案中，提供治疗癌症的方法，其包含向有需要的哺乳动物给药式(I)化合物或其盐；给药卡铂(carboplatin)；及任选的一或多种其他抗癌剂。
本发明的化合物可与针对在解决与上述病状相关的副效应中的特定用途所选择的其他治疗剂一起配制或共给药。例如，本发明的化合物可与恶心、过敏及胃刺激的药剂(例如止吐剂及H1及H2抗组胺剂)一起配制。
在一实施方案中，提供药物组合物，其包含式(I)化合物或其盐；一或多种选自激酶抑制剂(小分子、多肽及抗体)、免疫阻抑剂、抗癌剂、抗病毒剂、抗炎剂、抗真菌剂、抗生素或抗血管超增殖化合物的其他药剂；及任何药学上可接受的载体、佐剂或媒剂。
当与本发明的化合物组合采用时，可以(例如)那些于Physicians'Desk Reference(PDR)中所指示或本领域技术人员以其他方式确定的量使用以上其他治疗剂。在本发明的方法中，这些其他治疗剂可在给药本发明化合物之前、与其同时或在其之后给药。
然而，针对任何特定受试者的具体剂量值及剂量频率可有所变化，且通常取决于各种因素，包括(但不限于，例如)呈所给药形式的具体式(I)化合物的生物可用度、具体式(I)化合物的代谢稳定性及作用长度、受试者的物种、体重、总体健康、性别、饮食、给药的模式及时间、排泄速率、药物组合及特定病状的严重性。例如，约0.001mg/kg体重至100mg/kg体重、优选介于约0.005mg/kg体重与约50mg/kg体重的间且最佳介于约0.01mg/kg体重至10mg/kg体重的间的日剂量可为适当的。日剂量可每天以1次至4次剂量来给药。
可连续地(即，每日)或间歇地给药。本申请所用的术语“间歇”或“间歇地”意指以规则或不规则间隔停止及开始。例如，间歇给药包括每周给药1天至6天；以周期形式给药(例如，每天给药并连续持续2周至8周、接着为长达1周不给药的停药期)；或隔天给药。
在一实施方案中，向有需要的患者连续给药式(I)化合物，每天给药一或多次。例如，向有需要的患者给药治疗有效量的式(I)化合物，每天给药一或多次并连续持续数天。
在一实施方案中，向有需要的患者间歇地给药式(I)化合物，每天给药一或多次。例如，向有需要的患者给药治疗有效量的式(I)化合物，根据间歇时间表每天给药一或多次。
在一实施方案中，向有需要的患者给药式(I)化合物，每天给药一或多次并连续持续数天、接着不给药一或多天。优选地，给药治疗有效量的式(I)化合物。具有药物假期的连续给药实例为如下的周期：7天治疗、接着7天不治疗；14天治疗、接着7天不治疗；及7天治疗、接着14天不治疗。可根据需要，多次重复治疗/不治疗的周期来治疗患者。
在一实施方案中，根据间歇给药时间表向有需要的患者给药式(I)化合物。间歇给药时间表为重复时间表，其包括向患者给药式(I)化合物的各天及不向患者给药式(I)化合物的各天。间歇给药时间表的实例为：每周给药4天并连续持续3周，接着1周不给药，并以4周间隔重复；每周给药5天并连续持续2周，接着1周不给药，并以3周间隔重复；及，每周给药4天并持续1周，接着2周不给药，并以3周间隔重复。优选地，给药治疗有效量的式(I)化合物。
在一实施方案中，于某日给药将至少一种式(I)化合物和/或其至少一种盐，接着停药6天，并根据每周时间表重复。
在一实施方案中，于某日给药至少一种式(I)化合物和/或其至少一种盐，接着停药6天，并根据每周时间表重复并持续1周至4周，然后接着停药1周。例如，于某日给药式(I)化合物，接着停药6天，并持续3周，且然后接着停药1周。此4周周期可重复一或多次。
在一实施方案中，连续两天给药至少一种式(I)化合物和/或其至少一种盐，接着停药5天，并根据每周时间表重复。
在一实施方案中，连续3天给药至少一种式(I)化合物和/或其至少一种盐，接着停药4天，并根据每周时间表重复。
在一实施方案中，于某日给药至少一种式(I)化合物和/或其至少一种盐，接着停药10天至13天。
在一实施方案中，每天一次(QD)给药至少一种式(I)化合物和/或其至少一种盐。此实施方案包括每天一次经口给药。
在一实施方案中，每天两次(BID)给药至少一种式(I)化合物和/或其至少一种盐。此实施方案包括每天两次经口给药。
在一实施方案中，隔天给药至少一种式(I)化合物和/或其至少一种盐：1天给药，接着1天停药。此2天周期可重复一或多次。
制备方法
本发明的化合物可以有机合成领域的技术人员熟知的多种方式来制备。本发明的化合物可使用下文所阐述方法以及合成有机化学领域内已知的合成方法或其变化形式来合成，如那些本领域技术人员所了解。优选方法包括(但不限于)下文所阐述的那些。本申请所引用的所有参考文献以引用方式全文并入本申请中。
可使用此部分中所阐述的反应及技术来制备本发明的化合物。各反应为在适于所用试剂及材料且适于所实施转变的溶剂中进行。而且，在下蚊所阐述合成方法的说明中，应理解，所有提出的反应条件(包括溶剂、反应氛围、反应温度、实验持续时间及处理程序的选择)均为选择为用于彼反应的标准条件，其应由本领域技术人员容易地识别。有机合成领域的技术人员应理解，分子的不同部分上存在的官能团必须与所提出的试剂及反应相容。本领域技术人员应容易地明了对与反应条件相容的取代基的这些限制，且然后必须使用替代方法。有时此需要进行判断以修改合成步骤的顺序或选择一种特定方法方案而非另一种，以获得本发明的期望化合物。亦应认识到，在计划此领域中的任一合成途径时的另一主要考虑因素为慎重选择用于保护本发明中所阐述的化合物中存在的反应官能团的保护基团。向训练有素的从业者阐述多种替代选择的权威解释为Greene等人(Protective Groupsin Organic Synthesis，第三版，Wiley and Sons(1999))。
式(I)化合物可参照以下方案中所阐释的方法来制备。如本申请中所显示，终产物为具有与式(I)相同的结构式的化合物。应理解，任何式(I)化合物可藉由这些方案藉由试剂的适宜选择利用适当取代来产生。本领域技术人员可容易地选择溶剂、温度、压力及其他反应条件。起始材料为市面有售或容易由本领域技术人员制备。化合物的成份为如此处或说明书中的其他部分所定义。
式(I)化合物的合成可使用方案1至8中所总结的方法进行(Guarino,V.R.et al.,Prodrugs：Challenges and Rewards,Stella,V.J.etal.eds.,Springer：New York(2007),Part 2,pp 133-187以及本申请所引用的参考文献)。
方案1
步骤1：本领域已知的多种方法可以用来制备化合物v。例如，如方案1所示，适当取代的苯并二氮杂(i)可以卤代烷基硫醚如(氯甲基)(甲基)硫烷在碱如碳酸铯的存在下在合适的溶剂如N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中处理，得到式ii化合物。
步骤2：以试剂如硫酰氯在胺盐如三乙基氯化铵的存在下在非质子溶剂如二氯甲烷(DCM)中处理化合物ii可以用来实施至式iii化合物(Hal＝氯)的转化。
步骤3：式iv化合物可以从化合物iii可以在碱(当从羧酸开始时)如碳酸钾的存在下在非质子溶剂如乙腈或DMF中通过适当取代的羧酸或羧酸盐处理制备。
步骤4：化合物iv的脱保护可以本领域技术人员已知的多种方式完成。例如，当PG＝tBu或Boc时，化合物iv可以试剂如三氟乙酸在溶剂如DCM处理，得到化合物v。
制备化合物v的另外的方法示于方案2中。
方案2
步骤1：适当官能化的羧酸(PG-X-(CRaRb)n(CH2)nCO2H)或羧酸盐(vi)可以在碱如Na2CO3和季铵盐如四丁基硫酸铵的存在下在水和合适有机溶剂如DCM的两相混合物中在低温如0℃下以烷基化试剂如氯磺酸氯甲基酯处理，得到化合物vi。
步骤2：在合适的溶剂如DCM中于K2CO3的存在下以化合物i处理碱化合物vi得到化合物iv。
步骤3：化合物iv的脱保护可以本领域技术人员已知的多种方式完成。例如，当PG＝tBu或Boc，化合物iv可以在溶剂如DCM以试剂如三氟乙酸处理，得到化合物v。
母体化合物i的基于硫基酰胺(sulfenamide)的前药的制备例示于方案3中。
方案3
步骤1：银盐如硝酸银和二硫化物如(乙烷-2,1-二基)二氨基甲酸叔丁基酯2,2′-二硫烷二基酯在醇性溶剂如MeOH中的混合物可以在碱如三乙胺的存在下以化合物i处理，得到化合物viii。
步骤2：化合物viii的脱保护可以本领域技术人员已知的多种方式完成。例如，当PG＝tBu或Boc时，化合物viii可以以试剂如三氟乙酸在溶剂如DCM中处理，得到化合物ix。
化合物xi的曼尼希碱类型的前药可以通过本领域技术人员已知的方法制备(方案4)。
方案4
步骤1：例如，化合物i可以与甲醛、胺如吡咯烷在合适的溶剂如MeOH中反应得到化合物x。
步骤2：化合物x的脱保护可以本领域技术人员已知的多种方式完成。例如，当PG＝tBu或Boc时，化合物x以试剂如三氟乙酸在溶剂如DCM或无水HCl中在溶剂如以及中处理，得到化合物xi。
实施例
在以下实例中对本发明进一步加以定义。应理解，这些实例仅以阐释性方式给出。根据上文论述及实例，本领域技术人员可确定本发明的基本特性，且可在不背离其精神及范围的情况下作出各种变化及修改，以使本发明适用于各种用途及条件。因此，本发明并不限于下文所述的阐释性实例，而是由随附申请专利范围加以界定。
缩写
ACN    乙腈
Bn     苄基
Boc    叔丁氧基羰基
Boc2O  一缩二碳酸二叔丁基酯
CBz    苄基氧基羰基
DCM    二氯甲烷
DEA    二乙基胺
dil.   稀
DMF    二甲基甲酰胺
DMSO   二甲基亚砜
EDCI   1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐
EtOH   乙醇
EtOAc  乙酸乙酯
equiv. 当量
g      克
h或hr  小时
HOBt   羟基苯并三唑
HPLC   高压液相色谱
IPA    异丙醇
LCMS   液体色谱-质谱法
LDA    二异丙基氨基锂
LAH    氢化锂铝
MeOH   甲醇
min    分钟
mL     毫升
mmol   毫摩尔
n-BuLi 正丁基锂
NaHMDS 二(三甲基甲硅烷基)氨基钠
NH4OAc 乙酸铵
RT     保留时间
t-Bu   叔丁基
TBTU   O-(1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓四氟硼酸盐
TEA    三乙胺
TFA    三氟乙酸
Tf2O   三氟甲基磺酸酐
THF    四氢呋喃
TLC    薄层色谱
μL    微升
化合物A
(2R,3S)-N-((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
制备例A-1A：5,5,5-三氟戊酸叔丁基酯
于0℃向5,5,5-三氟戊酸(5g,32.0mmol)在THF(30mL)和己烷(30mL)中的搅拌溶液添加2,2,2-三氯乙酰亚胺酸叔丁基酯(11.46mL,64.1mmol)。于0℃搅拌混合物15min。添加三氟化硼醚合物(0.406mL,3.20mmol)并让反应混合物温热至室温过夜。向该澄清反应混合物中添加固体NaHCO3(5g)并将其搅拌30min。然后混合物经MgSO4过滤并以己烷(200mL)洗涤。让溶液静置45min，并且所得固体物质再次经相同MgSO4滤器通过过滤除。滤饼以己烷(100mL)洗涤并且滤液在不加热条件下经减压浓缩。容积减少至约30mL，并且混合物经干净的玻璃漏斗过滤，以己烷(5mL)洗涤，并且然后在不加热条件下经减压浓缩。所得纯的油状物经0.45μm尼龙膜滤片过滤得到制备例A-1A(6.6g,31.4mmol 98％产率)，为无色油状物：1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.38(s,9H)1.74-1.83(m,2H)2.00-2.13(m,2H)2.24(t,J＝7.28Hz,2H)。
制备例A-1B：(4S)-4-(丙-2-基)-3-(5,5,5-三氟戊酰基)-1,3-噁唑烷-2-酮
经5min向5,5,5-三氟戊酸(5.04g,32.3mmol)在DCM(50mL)和DMF(3滴)中的中的搅拌溶液滴加草酰氯(3.4mL,38.8mmol)并且搅拌溶液直到所有的冒泡消退。反应混合物经减压浓缩，得到浅黄色油状物。经5min经由注射器于-78℃向装填有(4S)-4-(丙-2-基)-1,3-噁唑烷-2-酮(4.18g,32.4mmol)在THF(100mL)中的溶液的分开的烧瓶中滴加n-BuLi(2.5M in己烷)(13.0mL,32.5mmol)。搅拌10min后，经由套管经15min添加上述在THF(20mL)中的酰氯。将反应混合物温热至0℃，并随着浴升温温热至室温并搅拌过夜。向反应混合物添加饱和NH4Cl，并且混合物然后以EtOAc(2x)萃取。合并的有机物以盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并减压浓缩。粗物质通过快速色谱纯化(Teledyne ISCO CombiFlash Rf,5％至60％溶剂A/B＝己烷/EtOAc,SiO2 120g)。浓缩合适的级分提供制备例A-1B(7.39g,86％)，为无色油状物：1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 4.44(1H,dt,J＝8.31,3.53Hz),4.30(1H,t,J＝8.69Hz),4.23(1H,dd,J＝9.06,3.02Hz),2.98-3.08(2H,m),2.32-2.44(1H,m,J＝13.91,7.02,7.02,4.03Hz),2.13-2.25(2H,m),1.88-2.00(2H,m),0.93(3H,d,J＝7.05Hz),0.88(3H,d,J＝6.80Hz)。
制备例A-1C：(2S,3R)-6,6,6-三氟-3-((S)-4-异丙基-2-氧代噁唑烷-3-羰基)-2-(3,3,3-三氟丙基)己酸叔丁基酯，和
制备例A-1D：(2R,3R)-6,6,6-三氟-3-((S)-4-异丙基-2-氧代噁唑烷-3-羰基)-2-(3,3,3-三氟丙基)己酸叔丁基酯
向二异丙基胺(5.3mL,37.2mmol)在THF(59mL)中的冷(78℃)的搅拌溶液在氮气气氛下添加n-BuLi(2.5M在己烷中)(14.7mL,36.8mmol)，并且然后将混合物温热至0℃得到LDA的0.5M溶液。将分开的容器装填以制备例A-1B(2.45g,9.17mmol)，物质与苯共沸两次(RotoVap进气口装配以氮气进气口以完全排除湿气)，并且然后添加甲苯(15.3mL)。将该溶液添加至含有干燥氯化锂的烧瓶(1.96g,46.2mmol)。向冷却至-78℃的所得混合物中添加上述LDA溶液(21.0mL,10.5mmol)并且混合物于-78℃搅拌10min，温热至0℃保持10min并且然后冷却至-78℃。向于苯共沸两次的含有制备例A-1A(3.41g,16.07mmol)的分开反应容器中添加甲苯(15.3mL)。将混合物冷却至-78℃并添加LDA(37.0mL,18.5mmol)，并且所得溶液于-78℃搅拌25min。此时，经由套管将衍生自酯的烯醇式盐转移至噁唑烷酮烯醇式盐的溶液中并于-78℃再搅拌5min。移除隔膜并将固体粉末化二(2-乙基己酰基氧基)铜(9.02g,25.8mmol)快速添加至反应容器中并再盖上隔膜。将容器从冷浴快速除去并浸没入热水浴(40℃)中，伴随快速旋流，同时发生从初始绿松石色到棕色的颜色变化。搅拌反应混合物20min，倒入5％NH4OH水溶液(360mL)中并以EtOAc(2x)萃取。合并的有机物以盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并减压浓缩。剩余物通过快速色谱纯化(Teledyne ISCO CombiFlash Rf,0％至60％溶剂A/B＝己烷/EtOAc,SiO2 120g)。浓缩合适的级分提供制备例A-1C(2.87g,66％)，为浅黄色粘性油状物。1H NMR显示产物为非对映异构体1C:1D的1.6:1混合物，由在2.74和2.84ppm的多重峰的积分确定：1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 4.43-4.54(2H,m),4.23-4.35(5H,m),4.01(1H,ddd,J＝9.54,6.27,3.51Hz),2.84(1H,ddd,J＝9.41,7.28,3.64Hz),2.74(1H,ddd,J＝10.29,6.27,4.02Hz),2.37-2.48(2H,m,J＝10.38,6.98,6.98,3.51,3.51Hz),2.20-2.37(3H,m),1.92-2.20(8H,m),1.64-1.91(5H,m),1.47(18H,s),0.88-0.98(12H,m)。
制备例A-1E：(2R,3S)-3-(叔丁氧基羰基)-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酸，和
制备例A-1F：(2R,3R)-3-(叔丁氧基羰基)-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酸
向制备例A-1C和1D(4.54g,9.51mmol)在THF(140mL)和水(42mL)中的冷(0℃)的搅拌溶液依序添加过氧化氢(30％在水中)(10.3g,91mmol)和LiOH(685.3mg,28.6mmol)并搅拌混合物1hr。此时，反应容器从冷浴除去并且然后搅拌1.5hr。向反应混合物添加饱和NaHCO3(45mL)和饱和Na2SO3(15mL)，并且然后减压部分浓缩。所得粗溶液以DCM(3x)萃取。以1N HCl将水相酸化至pH～1-2，并且然后以DCM(3x)和EtOAc(1x)萃取。合并的有机物以盐水洗涤，干燥(Na2SO4),过滤并减压浓缩提供制备例A-1E和1F(3.00g,86％)的混合物，为无色油状物：1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 2.76-2.84(1H,m,非对映异构体2),2.64-2.76(3H,m),2.04-2.35(8H,m),1.88-2.00(4H,m),1.71-1.83(4H,m),1.48(9H,s,非对映异构体1),1.46(9H,s,非对映异构体2)；1H NMR显示A-1E:A-1F的1.7:1混合物，通过叔丁基基团的峰的积分确定。
制备例A-1E：(2R,3S)-3-(叔丁氧基羰基)-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酸，和
制备例A-1F：(2R,3R)-3-(叔丁氧基羰基)-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酸
向二异丙基胺(1.7mL,11.93mmol)在THF(19mL)中的冷(-78℃)的搅拌溶液在氮气气氛下添加n-BuLi(2.5M在己烷中)(4.8mL,12.00mmol)。搅拌混合物5min并且然后温热至0℃。在分开的容器中，经由套管经25min向制备例A-1E和1F(1.99g,5.43mmol)的混合物在THF(18mL)中的冷(-78℃)的搅拌溶液添加上述制备的LDA。搅拌混合物15min，然后温热至室温(置于24℃水浴中)保持15min，并且然后再次冷却至-78℃保持15min。经由注射器向反应混合物添加Et2AlCl(1M在己烷)(11.4mL,11.40mmol)。所得混合物搅拌10min，温热至室温保持15min并且然后冷却回-78℃保持15min。快速添加甲醇(25mL)，然后剧烈旋流混合物同时温热回室温。所得混合物然后浓缩至～1/4原体积。将混合物溶解于EtOAc中并以1N HCl(50mL)和冰(75g)洗涤。分离水相并以EtOAc(2x)萃取。合并的有机物以KF(2.85g在75mL水中)和1N HCl(13mL)的混合物[产生的溶液pH 3-4]洗涤，然后以盐水洗涤，然后干燥(Na2SO4)，过滤并减压浓缩，得到制备例A-1E和制备例A-1F的9:1(A-1E:A-1F)富集非对映异构体混合物(由1H NMR确定)(2.13g,>99％)，为浅黄色粘性油状物：1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 2.64-2.76(2H,m),2.04-2.35(4H,m),1.88-2.00(2H,m),1.71-1.83(2H,m),1.48(9H,s)。
制备例A-1G：(3S)-3-氨基-1-甲基-5-苯基-1,3-二氢-2H-1,4-苯并二氮杂-2-酮，和
制备例A-1H：(3R)-3-氨基-1-甲基-5-苯基-1,3-二氢-2H-1,4-苯并二氮杂-2-酮
外消旋的3-氨基-1-甲基-5-苯基-1,3-二氢-2H-1,4-苯并二氮杂-2-酮(Rittle,K.E.et al.,Tetrahedron Letters,28(5):521-522(1987))根据文献方法制备。各对映异构体在手性-SFC条件下使用下列方法分离：AS-H 5x25；移动相：30％MeOH+0.1％DEA/CO2；流速：280mL/min；压强：100bar；温度：35℃。
得到S-对映异构体(制备例A-1G)：HPLC：RT＝1.75min(30％MeOH+0.1％DEA/CO2在AS-H上4.6x250mm,3mL/min,35℃,100bar,230nm,10μl注射)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.58-7.63(2H,m),7.55(1H,ddd,J＝8.50,7.11,1.76Hz),7.40-7.47(1H,m),7.34-7.40(3H,m),7.31(1H,dd,J＝7.81,1.51Hz),7.14-7.22(1H,m),4.46(1H,s),3.44(3H,s),3.42(2H,s)；[α]D＝-155°(c＝1.9,MeOH)(Lit.Rittle,K.E.et al.,Tetrahedron Letters,28(5):521-522(1987)：[α]D＝-236°)。
还得到R-对映异构体(制备例A-1H)：HPLC：RT＝1.71min；[α]D＝+165°(c＝2.1,MeOH)(Lit[α]D＝+227°)。
制备制备例A-1G的备选方法：
制备例A-1G·CSA盐：(3S)-3-氨基-1-甲基-5-苯基-1,3-二氢-2H-1,4-苯并二氮杂-2-酮,(1S)-(+)-10-樟脑磺酸盐
制备例A-1G·CSA由外消旋的3-氨基-1-甲基-5-苯基-1,3-二氢-2H-1,4-苯并二氮杂-2-酮(9.98g,37.6mmol)(根据上文所示文献制备)根据文献方法制备(Reider,P.J.et al.,J.Org.Chem.,52:955-957(1987))。得到制备例A-1G·CSA(16.91g,99％)，为无色固体：旋光性：[α]D＝-26.99°(c＝1,H2O)(Lit.[α]D＝-27.8°(c＝1,H2O))。
制备例A-1I：(2S,3R)-6,6,6-三氟-3-(((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)氨基甲酰基)-2-(3,3,3-三氟丙基)己酸叔丁基酯，和
制备例A-1J：(2R,3R)-6,6,6-三氟-3-(((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)氨基甲酰基)-2-(3,3,3-三氟丙基)己酸叔丁基酯
向制备例A-1G(1.45g,5.47mmol)以及制备例A-1E和1F的9:1混合物(1.989g,5.43mmol)在DMF(19mL)中的搅拌溶液添加O-苯并三唑-1-基-N,N,N′,N′-四-甲基脲鎓四氟硼酸盐(1.79g,5.57mmol)和三乙胺(3.0mL,21.52mmol)并将混合物搅拌过夜。反应混合物然后倒入水(125mL)中并且并且沉淀的固体通过过滤收集，以水洗涤并风干以提供制备例A-1I和制备例A-1J的8:1混合物(2.95g,89％)，为乳状固体：MS(ES)：m/z＝614[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm7.55-7.65(3H,m),7.44-7.52(2H,m),7.35-7.45(4H,m),5.52(1H,d,J＝8.03Hz),3.48(3H,s),2.63(2H,ddd,J＝9.35,3.95,3.76Hz),2.14-2.25(4H,m),1.90-2.03(3H,m),1.69-1.82(1H,m),1.51(9H,s)。
制备例A-1K：(2S,3R)-6,6,6-三氟-3-(((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)氨基甲酰基)-2-(3,3,3-三氟丙基)己酸，和
制备例A-1L：(2R,3R)-6,6,6-三氟-3-(((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)氨基甲酰基)-2-(3,3,3-三氟丙基)己酸
向制备例A-1I和制备例A-1J的混合物(2.95g,4.81mmol)在DCM(20mL)中的的冷(0℃)的搅拌溶液添加TFA(20mL,260mmol)。搅拌反应混合物1hr，并且然后温热至室温并搅拌2.5hr。反应混合物以甲苯(50mL)稀释并并减压浓缩。所得剩余物再溶解于甲苯(50mL)中并减压浓缩并且然后高真空干燥。粗产物溶解于DCM中，添加SiO2(15g)，浓缩浆料，并且然后通过快速色谱纯化(Teledyne ISCOCombiFlash Rf,0％至45％溶剂A/B＝DCM/EtOAc,SiO280g)。浓缩合适的级分提供制备例A-1K和制备例A-1L的混合物(2.00g,75％)，为乳状固体：HPLC：RT＝2.770min(SpeedROD 4.6x 50mm(4min grad)，以10-90％MeOH水溶液洗脱4分钟，含0.1％TFA,4mL/min,于254nm监控)；MS(ES)：m/z＝558[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.32(1H,d,J＝8.03Hz),7.65-7.71(1H,m),7.50-7.60(3H,m),7.41-7.49(2H,m),7.39(1H,dd,J＝7.91,1.63Hz),7.23-7.35(2H,m),5.59(1H,d,J＝8.03Hz),3.51(3H,s),2.81(1H,ddd,J＝10.54,6.90,3.64Hz),2.67-2.76(1H,m),2.22-2.33(3H,m),1.99-2.12(3H,m),1.85-1.94(1H,m),1.79(1H,ddd,J＝13.87,7.84,3.64Hz)。
化合物A
在氮气气氛下向制备例A-1K和制备例A-1L的8:1混合物(3.46g,6.21mmol)在DMF(25mL)中的搅拌溶液添加氯化铵(3.32g,62.1mmol)、EDCI(3.55g,18.52mmol)、HOBT(2.85g,18.61mmol)和三乙胺(16mL,115mmol)并混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入水(200mL)中，伴随剧烈旋流，并且然后静置。所得固体通过过滤收集，以水洗涤，并干燥得到3.6g的无色固体。固体通过制备型SFC色谱纯化(Lux-Cellulose-2(3x25cm),8％甲醇/CO2,140ml/min220nm和35℃；样品：3.6g在50cc甲醇中,浓度＝70mg/ml,堆栈注射：0.5cc/9.2min)。含所需产物的各级分经浓缩并真空干燥过夜。得到化合物A(2.74g,79％)，为无色固体：HPLC：RT＝9.601min(H2O/CH3CN，含TFA,SunFire C18 3.5um,4.6x150mm,4.6x150mm,梯度＝15min,波长＝220和254nm)。MS(ES)：m/z＝557[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.54(1H,d,J＝7.28Hz),7.71-7.80(1H,m),7.68(2H,d,J＝8.78Hz),7.50-7.62(3H,m),7.45(2H,t,J＝7.28Hz),7.29-7.40(2H,m),7.15(1H,br.s.),5.30(1H,d,J＝7.28Hz),3.39(3H,s),2.74-2.86(1H,m),2.02-2.32(3H,m),1.45-1.79(4H,m)；
制备化合物A的备选方法：
制备例A-1M：三氟甲磺酸3,3,3-三氟丙基酯
经3min向2,6-二甲基吡啶(18.38mL,158mmol)在CH2Cl2(120mL)中的冷(-25℃)的搅拌溶液中添加Tf2O(24.88mL,147mmol)，并搅拌混合物5min。经3min的期间向反应混合物添加3,3,3-三氟丙-1-醇(12g,105mmol)。2hr后，将反应混合物温热至室温并搅拌1hr。反应混合物然后浓缩至其体积的一半并且然后通过直接装载至硅胶柱(330g ISCO)上并以CH2Cl2洗脱而纯化。得到制备例A-1M(13.74g,53％)，为无色油状物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 4.71(2H,t,J＝6.15Hz),2.49-2.86(2H,m)。
制备例A-1N：(4S)-4-苄基-3-(5,5,5-三氟戊酰基)-1,3-噁唑烷-2-酮
制备例A-1N由5,5,5-三氟戊酸(3.35g,21.46mmol)和(4S)-4-苄基-1,3-噁唑烷-2-酮(3.80g,21.46mmol)通过制备例A-1B显示的一般方法制备。得到制备例A-1N(5.67g,84％)为无色粘稠油状物：1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.32-7.39(2H,m),7.30(1H,d,J＝7.05Hz),7.18-7.25(2H,m),4.64-4.74(1H,m),4.17-4.27(2H,m),3.31(1H,dd,J＝13.35,3.27Hz),3.00-3.11(2H,m),2.79(1H,dd,J＝13.35,9.57Hz),2.16-2.28(2H,m),1.93-2.04(2H,m)。
制备例A-1O：(3R)-3-(((4S)-4-苄基-2-氧代-1,3-噁唑烷-3-基)羰基)-6,6,6-三氟己酸叔丁基酯
在氮气气氛下向制备例A-1N(3.03g,9.61mmol)在THF(20mL)中的冷(-78℃)的搅拌溶液中添加NaHMDS(1.0M in THF)(10.6mL,10.60mmol)。2小时后，经由注射器于-78℃添加纯的2-溴乙酸叔丁基酯(5.62g,28.8mmol)并在相同温度保持搅拌。6小时后，反应混合物温热至室温。反应混合物在饱和NH4Cl和EtOAc之间分配。分离有机相，并且水层以EtOAc(3x)萃取。合并的有机物以盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并减压浓缩。剩余物通过快速色谱纯化(TeledyneISCO CombiFlash Rf,5％至100％溶剂A/B＝己烷/EtOAc,SiO2 120g)。浓缩合适的级分提供制备例A-1O(2.79g,67.6％)，为无色粘稠油状物：1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.34(2H,d,J＝7.30Hz),7.24-7.32(3H,m),4.62-4.75(1H,m,J＝10.17,6.89,3.43,3.43Hz),4.15-4.25(3H,m),3.35(1H,dd,J＝13.60,3.27Hz),2.84(1H,dd,J＝16.62,9.57Hz),2.75(1H,dd,J＝13.35,10.07Hz),2.47(1H,dd,J＝16.62,4.78Hz),2.11-2.23(2H,m),1.90-2.02(1H,m),1.72-1.84(1H,m),1.44(9H,s)。
制备例A-1P：(2R)-2-(2-叔丁氧基-2-氧代乙基)-5,5,5-三氟戊酸
制备例A-1P由制备例A-1O(2.79g,6.50mmol)通过制备例A-1E显示的一般方法制备。得到制备例A-1P(1.45g,83％)，为无色油状物：1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 2.83-2.95(1H,m),2.62-2.74(1H,m),2.45(1H,dd,J＝16.62,5.79Hz),2.15-2.27(2H,m),1.88-2.00(1H,m),1.75-1.88(1H,m),1.45(9H,s)。
制备例A-1E：(2R,3S)-3-(叔丁氧基羰基)-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酸，和
制备例A-1F：(2R,3R)-3-(叔丁氧基羰基)-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酸
经7min向制备例A-1P(5.44g,20.13mmol)在THF(60mL)中的冷(-78℃)的搅拌溶液缓慢添加LDA(24.60mL,44.3mmol)。搅拌2hr后，经3min将制备例A-1M(6.44g,26.2mmol)添加至反应混合物。45min后，反应混合物温热至-25℃(冰/MeOH/干冰)保持1hr，并且然后温热至0℃。45min后，添加制备例A-1M(1g)并搅拌反应混合物20min。反应以水和1N NaOH淬灭并以CH2Cl2萃取。有机层再次以1N NaOH(2x)萃取并且合并水层。水层在冰/水浴中冷却并且然后然后以浓HCl酸化至pH 2。接着，水层以EtOAc萃取。合并的有机物以盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。剩余物经高真空干燥提供制备例A-1E和制备例A-1F的1:5(A-1E:A-1F)混合物(由1HNMR确定)(5.925g,80％)，为淡黄色固体。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 2.81(1H,ddd,J＝10.17,6.32,3.85Hz),2.63-2.76(1H,m),2.02-2.33(4H,m),1.86-1.99(2H,m),1.68-1.85(2H,m),1.47(9H,s)。
制备例A-1E：(2R,3S)-3-(叔丁氧基羰基)-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酸，和
制备例A-1F：(2R,3R)-3-(叔丁氧基羰基)-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酸
制备例A-1E和制备例A-1F(64mg,1.758mmol)的混合物溶解于THF(6mL)中得到无色溶液，将其冷却至-78℃。然后，经10min将LDA(2.149mL,3.87mmol)(1.8M在庚烷/THF/乙基苯)缓慢添加至反应混合物。搅拌15min后，反应混合物置于室温水浴中。15min后，将反应混合物放回-78℃浴中并且然后经5min缓慢添加二乙基氯化铝(3.87mL,3.87mmol)(1M在己烷中)。反应混合物于-78℃搅拌。15min后，将反应混合物置于室温水浴中保持10min并且然后冷却回-78℃浴。15min后，反应以MeOH(8mL,198mmol)淬灭，从-78℃浴除去并浓缩。向反应混合物添加冰和HCl(16mL,16.00mmol)，并且混合物以EtOAc萃取(2x)。有机层以氟化钾(920mg,15.84mmol)(在25mL H2O中)和HCl(4.5mL,4.50mmol)洗涤。有机物在无水硫酸镁上干燥并减压浓缩提供制备例A-1E和制备例A-1F(540mg,1.583mmol,90％产率)的9:1(A-1E:A-1F)富集混合物，为浅黄色/橙色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 2.64-2.76(2H,m),2.04-2.35(4H,m),1.88-2.00(2H,m),1.71-1.83(2H,m),1.48(9H,s)。
制备制备例A-1E的备选方法：
制备例A-1Q：(2R,3S)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酸1-苄基酯4-叔丁基酯
经15-20min于室温向配备有机械搅拌、温度计插口和氮气鼓泡器干净干燥的5L四颈圆底烧瓶装填以N,N-二甲基甲酰胺(2.07L)、制备例A-1E和制备例A-1F的1.2:1混合物(207g,0.5651摩尔)和碳酸钾(117.1g,0.8476摩尔)，接着添加苄基溴(116g,0.6781摩尔)。搅拌反应混合物2-3hr。反应完成后，反应混合物于50-55℃真空浓缩至干。将乙酸乙基酯(3.1L,30体积)装填进入浓缩反应物质并且混合物然后以水(2.07L)和盐水(0.6L)洗涤并且然后经无水硫酸钠干燥(207g)，过滤并于40-45℃真空浓缩至干燥。剩余物溶解于二氯甲烷(1.035L,5体积)并且然后吸收至硅胶(60-120)(607g,3.0w/w)上，并且然后使用石油醚和乙酸乙基酯作为溶剂的柱色谱纯化。在在收集多个批次后，得到制备例A-1Q(235g)。HPLC纯度：99.77％。
制备例A-1E：(2R,3S)-3-(叔丁氧基羰基)-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酸
干净干燥的2L反应釜填充以甲醇(540mL)并以氮气冲洗5-10分钟。向该反应釜中添加10％钯/碳(12g,20％),并且反应釜再以氮气冲洗5-10min。添加制备例A-1Q(60g,0.1315摩尔)并且反应釜以甲醇(60mL)冲刷并于20-25℃在5kg的氢气压强搅拌4-6hr。反应完成后，反应物质经过滤，以甲醇(180mL)洗涤，以无水硫酸钠(60g)干燥，过滤并浓缩至于45-50℃真空干燥得到制备例A-1E(45.8g,95％)，为无色固体：HPLC纯度：98.9％。
制备制备例A-1E的备选方法：
制备例A-1E：(2R,3S)-3-(叔丁氧基羰基)-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酸
制备例A-1E从制备例A-1E和A-1F(200g,0.5460摩尔)的混合物使用LDA(1.8M在THF、乙基苯和庚烷中的溶液)(698mL,2.3当量)和二乙基氯化铵(1.0M在己烷中的溶液)(1256mL,2.3当量)(在THF(2.0L)中)在如上所述的相同方法中制备。在如上解释的后处理后，所得剩余物如下处理：将粗物质添加至2L四颈圆底烧瓶，接着添加MTBE(1.0L)，在30℃下装填。所得混合物搅拌5-10分钟得到澄清的溶液。于低于30℃的温度将己烷(600mL)填充入反应混合物。搅拌反应混合物10min。接下来经15分钟期间于30℃下缓慢装填叔丁基胺(43.8g,1.1当量)。于30℃下搅拌反应混合物2小时并且然后过滤。固体物质以5:3MTBE：己烷(200mL)洗涤，滤液经浓缩并转移至琥珀色瓶中。过滤的固体溶解在二氯甲烷(2.0L)中并以1N HCl(2.0)洗涤。有机层以盐水(1.0L x 2)洗涤，并且然后在45℃下减压浓缩。该物质为91.12％纯。该物质通过上述叔丁基胺结晶纯化过程再纯化，得到制备例A-1E(78g,39％)：HPLC纯度：99.54％。
制备化合物A的备选方法:
制备例A-1I：(2S,3R)-6,6,6-三氟-3-(((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)氨基甲酰基)-2-(3,3,3-三氟丙基)己酸叔丁基酯
在氮气气氛下于20-25℃向装配有机械搅拌、温度计插口和氮气鼓泡器的干净干燥的2L四颈圆底烧瓶装填以N,N-二甲基甲酰胺(457mL)、制备例A-1E(45.7g,0.1248摩尔)和制备例A-1G·CSA(62.08g,0.1248moles)。于20-25℃搅拌反应混合物15-20分钟以生成澄清溶液。于20-25℃向反应混合物添加TBTU(48.16g,0.1498摩尔)，接着经15-20分钟于20-25℃添加三乙胺(50.51g,0.4992摩尔)。于20-25℃在氮气气氛下搅拌反应混合物60-120分钟。反应完成后，于20-25℃伴随搅拌将反应倒入水(1.37L,30体积)中。于20-25℃搅拌反应混合物30分钟。反应混合物经过滤并以水(228mL)洗涤。所得固体物质溶解于乙酸乙基酯(457mL)，以水(2x137mL)、盐水(137mL)洗涤并且然后以无水硫酸钠(45.7g)干燥。将活性炭(9.14g,20％)装填入反应混合物并搅拌30分钟。混合物经床和1μm滤布过滤，活性炭床以乙酸乙基酯(137mL)洗涤，浓缩至1.0体积阶段并且然后装填石油醚(457mL,10体积)并于20-25℃搅拌混合物30分钟。固体通过过滤收集，以石油醚(137mL)洗涤并且然后于40-45℃真空干燥8hr直到干燥损失小于3.0％。得到制备例A-1I(65.2g,85％)：HPLC纯度：98.26％。
制备例A-1K：(2S,3R)-6,6,6-三氟-3-(((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)氨基甲酰基)-2-(3,3,3-三氟丙基)己酸
于20-25℃在氮气气氛下向装配有机械搅拌、温度计插口和氮气鼓泡器的干净干燥的3L四颈圆底烧瓶装填二氯甲烷(980mL)接着添加制备例A-1I(140g,0.2282摩尔)。将反应混合物冷却至0-5℃并经30-40分钟缓慢装填三氟乙酸(980mL)。于0-5℃在氮气气氛下所得混合物搅拌2hr。将反应温度提升至20-25℃，并于20至25℃搅拌反应混合物1-2hr。反应完成后，于50至55℃将反应混合物真空浓缩至干。将甲苯(3x700mL)装入浓缩反应物质中，并且然后于50至55℃真空蒸馏除去。在从甲苯完全浓缩后，于20至25℃将乙酸乙基酯(280mL)装入反应物质中，搅拌60分钟，并且然后固体通过过滤收集。所得固体以乙酸乙基酯(140mL)洗涤，于50至55℃真空干燥12hr，直到干燥损失小于2.0％。得到制备例A-1K(106g,84％)：HPLC纯度：98.43％。
化合物A
于室温向反应容器中装入制备例A-1K(30g,53.81mmol)、HOBt(8.7g,64.38mmol)和THF(150mL)。向均匀的溶液添加EDCI(12.4g,64.68mmol)，并搅拌混合物15min，并且然后冷却至8℃。经5min向反应混合物添加氨(2M in IPA)(81mL,162mmol)从而保持温度低于10℃。将所得稠浆料搅拌10min，经30min温热至室温，并且然后搅拌4hr。在反应完成后，经15min缓慢添加水(230mL)以保持温度低于20℃，并且将所得混合物搅拌2hr。固体通过过滤收集，以水(3x60mL)洗涤，并且然后于55℃真空干燥48hr。将上述粗产物装填入1L 3颈圆底烧瓶中。添加IPA(200mL)，将混合物加热至80℃，形成均匀的溶液。将水(170mL)缓慢添加(15min)以保持内部温度>75℃。所得浆料经搅拌并冷却至室温保持2hr。固体通过过滤收集，以水(2x 50mL)洗涤，然后真空干燥(55℃保持24h，并30℃保持48h)。得到化合物A(23.4g,78％产率)：HPLC纯度：99.43％。
化合物B
(2R,3S)-N-((3S)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
制备例B-2A：(3S)-3-氨基-5-苯基-1,3-二氢-2H-1,4-苯并二氮杂-2-酮，和
制备例B-2B：(3R)-3-氨基-5-苯基-1,3-二氢-2H-1,4-苯并二氮杂-2-酮
外消旋的3-氨基-5-苯基-1,3-二氢-2H-1,4-苯并二氮杂-2-酮(J.Med.Chem.,49:2311-2319(2006),化合物#5)根据文献方法制备。在Berger SFC MGIII柱上分离对映异构体：Lux 25x3cm,5cm；移动相：30％MeOH+0.1％DEA/CO2；流速：150mL/min；温度：40℃；检测器波长：250nM。得到S-对映异构体制备例B-2A，为白色固体：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.67(1H,br.s.),7.58(1H,td,J＝7.65,1.76Hz),7.37-7.53(5H,m),7.23-7.30(2H,m),7.14-7.22(1H,m),4.23(1H,s),2.60(2H,br.s.)；HPLC：RT＝3.0625min(30％MeOH+0.1％DEA in CO2on OD-H柱,3mL/min,35℃,96bar,230nm,10μl注射)；[α]D＝-208.3°(5.05mg/mL,MeOH)。还得到R-对映异构体制备例B-2B，为灰白色固体：HPLC：RT＝3.970min；[α]D＝182.1°(2.01mg/mL,MeOH)。
制备例B-2C：(2S,3R)-6,6,6-三氟-3-(((3S)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)氨基甲酰基)-2-(3,3,3-三氟丙基)己酸叔丁基酯，和
制备例B-2D：(2R,3R)-6,6,6-三氟-3-(((3S)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)氨基甲酰基)-2-(3,3,3-三氟丙基)己酸叔丁基酯
制备例B-2C由制备例B-2A(564mg,2.244mmol)以及制备例A-1E和制备例A-1F的混合物(822mg,2.244mmol)根据制备例A-1I显示的一般方法制备。得到制备例B-2C和制备例B-2D(1.31g,97％)：HPLC：RT＝3.443min(ODS 4.6x 50mm(4min grad)以10-90％MeOH水溶液洗脱4分钟，含0.％TFA,4mL/min,在220nm监控)；MS(ES)：m/z＝600.3[M+H]+。
制备例B-2E：(2S,3R)-6,6,6-三氟-3-(((3S)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)氨基甲酰基)-2-(3,3,3-三氟丙基)己酸，和
制备例B-2F：(2R,3R)-6,6,6-三氟-3-(((3S)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)氨基甲酰基)-2-(3,3,3-三氟丙基)己酸
制备例B-2E和制备例B-2F的混合物由制备例B-2C和制备例B-2D(1.31g,2.185mmol)的混合物通过制备例A-1K显示的一般方法制备。得到制备例B-2E和制备例B-2F的混合物(1.18g,99％)：HPLC：RT＝2.885min(ODS 4.6x 50mm(4min度)，以10-90％MeOH水溶液洗脱4分钟，含0.％TFA,4mL/min,在220nm监控)。MS(ES)：m/z＝544.2[M+H]+。
化合物B
化合物B由制备例B-2E和制备例B-2F的混合物(354mg,0.651mmol)通过化合物A显示的一般方法制备。在分离非对映异构体后，得到化合物B(188mg,52％)，为白色固体：HPLC：RT＝9.063min(H2O/CH3CN，含TFA,SunFire C18 3.5um,4.6x150mm,4.6x150mm,梯度＝15min,波长＝220和254nm)；MS(ES)：m/z＝543[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.87(1H,br.s.),9.50-9.55(1H,m),7.62-7.69(2H,m),7.40-7.57(5H,m),7.29-7.36(2H,m),7.22-7.28(1H,m),7.16(1H,br.s.),5.25(1H,d),3.30-3.32(1H,m),2.75-2.86(1H,m),2.44-2.48(1H,m),2.06-2.34(3H,m),1.51-1.77(4H,m)；[α]D＝-114.4°(8.04mg/mL,DMSO)。
实施例1
(4-(膦酰基氧基)苯基)乙酸((3S)-3-(((2R,3S)-3-氨基甲酰基-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰基)氨基)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯
制备例1A：(2R,3S)-N1-((S)-1-((甲基硫基)甲基)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
向化合物B(0.020g,0.037mmol)在DMF(0.5mL)中的溶液添加Cs2CO3(0.036g,0.111mmol)。反应混合物在氮气下搅拌10分钟，并且然后添加(氯甲基)(甲基)硫烷(8.90mg,0.092mmol)。反应混合物在氮气下于室温搅拌2hr,并且然后以EtOAc(3mL)稀释并以盐水(2x 2mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，并于45℃真空浓缩。粗物质通过Prep-TLC(SiO2,50％EtOAc/石油醚)纯化，得到15mg的标题化合物，其用于后续步骤。MS(ES)：m/z＝603[M+H]+。
制备例1B：(2R,3S)-N1-((S)-1-(氯甲基)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
向制备例1A(0.015g,0.025mmol)在DCM(0.5mL)中的溶液添加三乙胺盐酸盐(5.14mg,0.037mmol)。反应混合物于室温搅拌5min并且然后于0℃在氮气下滴加硫酰氯(2.53μl,0.031mmol)。反应混合物于室温搅拌2hr并且然后于10℃减压浓缩。所得粗样品不经纯化直接用于后续步骤：MS(ES)：m/z＝587[M+H]+。
制备例1C：2-(4-((二叔丁氧基膦酰基)氧基)苯基)乙酸((S)-3-((2R,3S)-3-氨基甲酰基-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰胺基)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-1-基)甲基酯
向制备例1B(0.015g,0.025mmol)在DMF(0.5mL)中的溶液添加2-(4-((二叔丁氧基膦酰基)氧基)苯基)乙酸(0.015g,0.044mmol)、Cs2CO3(0.035g,0.107mmol)和碘化钠(3.80mg,0.025mmol)。反应混合物在氮气气氛下于室温搅拌10min。混合物然后以水(5mL)处理并以EtOAc(3x 3mL)萃取。合并的有机层经干燥(Na2SO4)，过滤并于45℃浓缩至干燥。粗物质通过制备型反相HPLC纯化，得到制备例1C(0.020g)：MS(ES)：m/z＝899[M+H]+。
实施例1
于0℃向制备例1C(0.020g,0.022mmol)在DCM(0.5mL)中的溶液添加三当量的1M HCl的醚溶液。反应混合物于室温在氮气气氛下搅拌4h，并且然后将另外的2当量的1M HCl的醚溶液添加至反应混合物并于室温继续搅拌2小时。添加最终份额的1M HCl/醚(2当量)并搅拌反应混合物另外两个小时，直到起始物料消失。在氮气流下除去溶剂并且所得粗产物经减压干燥。粗物质通过制备型反相HPLC纯化(柱：Symmetry C18(300x 19)mm,7μm,流速：17mL/min,移动相A：0.1％TFA/水,移动相B：ACN)，得到实施例1(0.009g,49％)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.58(d,J＝7.2Hz,1H),7.66-7.76(m,3H),7.40-7.59(m,6H),7.28(d,J＝7.6Hz,1H),7.15(br s,1H),7.00(s,4H),5.94(d,J＝10.4Hz,1H),5.81(d,J＝10.4Hz,1H),5.39(d,J＝7.2Hz,1H),2.77-2.85(m,1H),2.08-2.38(m,4H),1.50-1.76(m,5H),1.20-1.31(m,3H)；HPLC:RT＝11.765min(柱：Xbridge Phenyl(4.6x150)mm,3.5μm,缓冲液:0.05％TFA/水pH 2.5，以稀NH3调节,移动相A：缓冲液：乙腈(95:5),移动相B：乙腈：缓冲液(95:5),流速:1ml\min,在220nm监控)；MS(ES)：m/z＝787(M+H)+。
实施例2
4-((膦酰基氧基)甲基)苯甲酸((3S)-3-(((2R,3S)-3-氨基甲酰基-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰基)氨基)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯
制备例2A：4-(((二叔丁氧基膦酰基)氧基)甲基)苯甲酸((S)-3-((2R,3S)-3-氨基甲酰基-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰胺基)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-1-基)甲基酯
制备例1B(30mg,0.051mmol)、4-(((二叔丁氧基膦酰基)氧基)甲基)苯甲酸(30.6mg,0.089mmol)和Cs2CO3(69.5mg,0.213mmol)的溶液合并在DMF(1mL)中并于室温搅拌2小时。反应混合物然后以10mL的水和30mL的EtOAc稀释。分离各层并且水层以EtOAc(2x 20mL)萃取。合并的有机萃取物以盐水(20mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并真空浓缩。粗物质通过制备型TLC(SiO2,50％EtOAc/石油醚)纯化，得到制备例2A(22mg,0.015mmol,28.9％产率)，其直接用于后续步骤。MS(ES)：m/z＝899(M+H)+。
实施例2
于室温在氮气下向制备例2A(22mg,0.024mmol)在无水DCM(0.5mL)中的搅拌溶液添加1N HCl/醚(0.245mL,0.245mmol)。2小时后，添加0.5mL of 1N HCl的醚溶液并搅拌反应混合物45min。1小时后添加额外的1N HCl(0.5mL)的醚溶液并且搅拌反应混合物直到起始物料被消耗掉。所得反应混合物经浓缩且所得粗产物通过制备型反相HPLC纯化(柱：Symmetry C18(300x 19)mm,7μm,流速：17mL/min,移动相A：0.1％TFA/水,移动相B：ACN)，得到实施例2(3.6mg,4.30μmol,17.58％产率)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.58(d,J＝7.28Hz,1H),7.86-7.89(m,1H),7.75-7.82(m,1H),7.64-7.73(m,3H),7.31-7.53(m,9H)7.12-7.17(m,1H),6.10-6.17(m,2H),5.45(d,J＝7.2Hz,1H),4.91-4.93(m,2H),2.77-2.85(m,1H),2.32-2.38(m,1H),2.08-2.30(m,3H),1.50-1.76(m,5H)；HPLC：RT＝9.462min(柱：SunFire C18(4.6x 150)mm,3.5μm,缓冲液:0.05％TFA/水pH 2.5，以稀NH3调节，移动相A：缓冲液：乙腈(95:5),移动相B：乙腈：缓冲液(95:5),流速:1ml\min,在220nm监控)；MS(ES)：m/z＝787(M+H)+。
实施例3
3-(2,4-二甲基-6-(膦酰基氧基)苯基)-3-甲基丁酸(3-(((2R,3S)-3-氨基甲酰基-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰基)氨基)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯
制备例3A：2-(4-羟基-2-甲基丁-2-基)-3,5-二甲基苯酚
经15min于0℃向4,4,5,7-四甲基色烷-2-酮(2.7g,13.22mmol)在THF(20mL)中的搅拌溶液缓慢添加1M LAH的THF溶液(33.0mL,66.1mmol)并且反应混合物温热至室温保持2h。反应混合物以1.5NHCl淬灭，减压浓缩并且然后以EtOAC(100mL)稀释。有机层以盐水(3x 40mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。得到的剩余物通过硅胶色谱纯化(SiO2,20％EtOAc/己烷)，得到制备例3A(1.72g,8.26mmol,62.5％产率)，为粘稠油状物。1H NMR(400MHz,CHCl3-d)δppm 6.50(d,J＝0.75Hz,1H)6.35(s,1H)3.61(t,J＝7.15Hz,2H)2.47(s,3H)2.21(t,J＝7.15Hz,2H)2.18(s,3H)1.56(s,6H)。
制备例3B：2-(4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-甲基丁-2-基)-3,5-二甲基苯酚
于0℃向制备例3A(1.72g,8.26mmol)在DMF(10mL)中的搅拌溶液添加叔丁基氯二甲基硅烷(1.493g,9.91mmol)和咪唑(1.405g,20.64mmol)并且反应混合物温热至室温保持3h。反应混合物经减压浓缩,以EtOAC(20mL)稀释，以盐水洗涤(2x 20mL),并且然后将无水Na2SO4干燥并真空浓缩。棕色剩余物得到通过硅胶色谱纯化(SiO2,30％EtOAc/己烷)，得到制备例3B(2.5g,7.75mmol,94％产率)，为灰白色固体。1H NMR(400MHz,CHCl3-d)δppm 6.48(d,J＝0.50Hz,1H)6.40(d,J＝1.50Hz,1H)5.53(s,1H)3.59(t,J＝6.88Hz,2H)2.45(s,3H)2.18(s,3H)2.11(t,J＝7.00Hz,2H)1.55(s,6H)0.87(s,9H)0.03(s,6H)。
制备例3C：2-(4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-甲基丁-2-基)-3,5-二甲基苯基磷酸二苄基酯
向制备例3B(0.6g,1.860mmol)和2-甲基丙-2-醇酸钾(0.230g,2.046mmol)在THF(6mL)中的搅拌溶液添加二磷酸四苄基酯(1.102g,2.046mmol)并于60℃加热反应混合物过夜。反应混合物然后减压浓缩，以EtOAC稀释，并以盐水(2x10mL)洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。得到的剩余物通过硅胶色谱纯化(SiO2,20％EtOAc/己烷)，得到制备例3C(0.475g,0.815mmol,43.8％产率)，为浅黄色液体。1H NMR(400MHz,CHCl3-d)δppm 7.30-7.36(m,10H)7.09-7.12(m,1H)6.70-6.74(m,1H)5.12(d,J＝8.28Hz,4H)3.49(t,J＝7.40Hz,2H)2.51(s,3H)2.18(s,3H)2.10(t,J＝7.40Hz,2H)1.53(s,6H)0.83-0.85(m,9H),)0.03(s,6H)。
制备例3D：3-(2-(二(苄基氧基)膦酰基氧基)-4,6-二甲基苯基)-3-甲基丁酸
于0℃向制备例3C(0.288g,0.494mmol)在丙酮(10mL)中的搅拌溶液添加碘化钾(0.328g,1.977mmol)并搅拌反应混合物10分钟。然后于0℃缓慢地添加三氧化铬(1.35M琼斯试剂(Jones reagent))(1.464mL,1.977mmol)并将反应混合物温热至室温保持4h。反应混合物经减压浓缩，以EtOAc(10mL)稀释，以盐水(3x20mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥并且然后真空浓缩。得到的剩余物通过硅胶色谱纯化(SiO2,30％EtOAc/己烷)，得到制备例3D(0.152g,0.315mmol,63.7％产率)，为淡黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 11.78(s,1H)7.35-7.40(m,9H)6.93(s,1H)6.75(s,1H)5.15(d,J＝8.28Hz,4H)2.80(s,2H)2.49(s,3H)2.12(s,3H)1.52(s,6H)。
制备例3E：3-(2-((二(苄基氧基)膦酰基)氧基)-4,6-二甲基苯基)-3-甲基丁酸((S)-3-((2R,3S)-3-氨基甲酰基-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰胺基)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-1-基)甲基酯
于0℃向制备例1A(69mg,0.115mmol)在DCM(2mL)中的搅拌溶液滴加三乙胺盐酸盐(23.64mg,0.172mmol)和硫酰氯(0.279ml,3.44mmol)。反应混合物温热至室温保持1h。然后于室温在氮气气氛下减压浓缩反应混合物，并且直接后于后续步骤中。将上述得到的中间体溶解于DMF(2mL)中，并且于室温添加制备例3D(152mg,0.315mmol)和碳酸铯(187mg,0.573mmol)并搅拌反应混合物4h。然后于室温将反应混合物室温，以EtOAc(5mL)稀释，并以盐水(2x 10mL)洗涤。有机层经干燥(Na2SO4)，过滤并且然后真空浓缩。得到的剩余物通过硅胶色谱纯化(SiO2,30％EtOAc/己烷)，得到制备例3E(100mg,0.096mmol,84％产率)，为灰白色固体。HPLC RT：2.330min.(Column-Ascentis Express C8(5x2.1mm-2.7μm),流动相A：2％ACN-98％H2O-10mM NH4COOH,流动相B：98％ACN-2％H2O-10mMNH4COOH,流速＝1mL/min).MS(ES)：m/z＝1037[M+H]+。
实施例3
在氮气气氛下向制备例3E(75mg,0.072mmol)在乙醇(2mL)中的搅拌溶液添加10％Pd/C(30mg,0.282mmol)。反应混合物然后在氢气气氛下搅拌20分钟。反应混合物经垫过滤并且滤液经减压浓缩。粗的剩余物通过制备型反相HPLC纯化(Inertsil ODS(4.6x250)mm,5μm,移动相A：0.1％TFA/水：乙腈(90:10),移动相B:甲醇,流速:1mL\min)。冻干合适的级分得到12.5mg的实施例3，为灰白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.61(d,J＝7.78Hz,1H)7.59-7.69(m,2H)7.50-7.58(m,3H)7.37-7.49(m,3H)7.29-7.37(m,2H)7.15(s,1H)7.09(d,J＝8.28Hz,1H)6.51(s,2H)5.95(d,J＝10.54Hz,1H)5.38(d,J＝7.78Hz,1H)5.31(d,J＝10.29Hz,1H)3.02(d,J＝15.81Hz,2H)2.77-2.87(m,2H)2.31(s,3H)2.11-2.22(m,3H)2.06(s,3H)1.54-1.75(m,5H)1.40(s,6H)；HPLC：RT＝11.331min(SunFire C18(4.6x150)mm,3.5μm缓冲液:0.05％TFA/水pH 2.5，以氨调节，移动相A:缓冲液:乙腈(95:5)移动相B:乙腈:缓冲液(95:5)FLOW:1ml\min,在220nm监控)；MS(ES)：m/z＝857[M+H]+。
实施例4
2-甲基丙氨酸((3S)-3-(((2R,3S)-3-氨基甲酰基-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰基)氨基)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯
制备例4A：2-(叔丁氧基羰基氨基)-2-甲基丙酸氯甲基酯
于0℃向2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-甲基丙酸(1g,4.92mmol)、碳酸钠(2.61g,24.60mmol)和硫酸氢四丁基铵(0.334g,0.984mmol)在DCM(10mL)和水(5mL)的混合物中的搅拌溶添加氯磺酸氯甲基酯(1.624g,9.84mmol)。反应混合物温热至室温过夜。混合物以DCM(10mL)稀释，添加10mL水并分离有机层，以盐水(2x 10mL)洗涤并经无水Na2SO4干燥。混合物经过滤并真空浓缩并且得到的通过快速色谱纯化(SiO2,0-10％EtOAc/己烷)，得到制备例4A(0.8g,3.18mmol,64.6％产率)，为灰白色固体：1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 5.75(s,2H),4.90(br s.,1H),1.51(s,6H),1.43(s,9H)。
制备例4B：2-(叔丁氧基羰基氨基)-2-甲基丙酸碘甲基酯
向制备例4A(0.2g,0.795mmol)在丙酮(2mL)中的搅拌溶液添加碘化钠(0.476g,3.18mmol)。反应混合物于室温搅拌过夜。混合物以EtOAc(10mL)稀释，添加15mL的水并且分离有机层，以盐水(2x10mL)洗涤并经无水Na2SO4干燥。混合物经过滤并真空浓缩，得到制备例4B(0.21g,0.612mmol,77％产率)，为棕色液体。1H NMR(400MHz,CHCl3-d)δppm 5.96(s,2H),4.88(br s.,1H),1.47(s,6H),1.44(s,9H)。
制备例4C：2-(叔丁氧基羰基氨基)-2-甲基丙酸((S,Z)-3-((2R,3S)-3-氨基甲酰基-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰胺基)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-1-基)甲基酯
向化合物B(20mg,0.037mmol)和碳酸铯(24.02mg,0.074mmol)在DMF(1mL)中的混合物添加制备例4B(63.3mg,0.184mmol)在DMF(0.5mL)中的溶液。反应混合物于室温搅拌过夜。将水(5mL)添加至反应混合物，并且混合物以EtOAc萃取(3x 5mL)。合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干燥。粗物质通过制备型TLC(60％EtOAc/己烷)纯化，得到制备例4C(14mg,0.018mmol,50％产率)，为灰白色固体。HPLC RT：2.003min(柱：SB C18(4.6x50)mm,5μm,正模式流动相A：10％MeOH-90％H2O-0.1％TFA流动相B：90％MeOH-10％H2O-0.1％TFA流速：5ml/min).MS(ES)：m/z＝758[M+H]+。
实施例4
于0℃向制备例4C(28mg,0.037mmol)在DCM(0.5mL)中的溶液滴加4M HCl的二噁烷溶液(1mL,0.111mmol)。将混合物温热至室温并于24℃搅拌4h。反应混合物然后浓缩至干燥。得到的黄色固体吸收进入水/乙醚(4mL,1:1)混合物，其中将所需化合物萃取进入水中并且杂质在乙醚层中洗掉。冻干水层得到实施例4(19mg,0.029mmol,78％产率))，为灰白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.63(d,J＝7.28Hz,1H)8.45(br.s.,3H)7.74-7.84(m,2H)7.67(br.s.,1H)7.54-7.61(m,3H)7.43-7.52(m,3H)7.38-7.42(m,1H)7.16(br.s.,1H)6.17(d,J＝10.79Hz,1H)5.83(d,J＝10.54Hz,1H)5.43(d,J＝7.28Hz,1H)2.77-2.87(m,1H)2.15(dd,J＝19.07,10.04Hz,4H)1.52-1.76(m,5H)1.43(s,2H)1.31(s,3H)1.27(s,3H).HPLC：RT＝10.054min(SunFire C18(4.6x150)mm,3.5μm,缓冲液：0.05％TFA/水pH 2.5移动相A：缓冲液:乙腈(95:5)移动相B:乙腈:缓冲液(95:5)FLOW:1mL\min,在220nm监控)；MS(ES)：m/z＝658[M+H]+。
实施例5
L-丙氨酸((3S)-3-(((2R,3S)-3-氨基甲酰基-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰基)氨基)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯
制备例5A：(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸氯甲基酯
经4min期间向(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸(1g,5.29mmol)、四丁基硫酸氢铵(0.359g,1.057mmol)和Na2CO3(2.80g,26.4mmol)在DCM 20(mL)和水(20mL)(冷却在冰/水浴中)的剧烈搅拌的混合物中缓慢添加氯磺酸氯甲基酯(1.09mL,10.57mmol)。在冰/水浴中搅拌30min后，除去冷浴并且于室温搅拌反应。于室温搅拌16h后，反应以水稀释并以DCM萃取。水层以DCM反萃取并且合并的有机层经MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到制备例5A(1.64g)。
制备例5B：2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酸(S)-((S,Z)-3-((2R,3S)-3-氨基甲酰基-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰胺基)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-1-基)甲基酯
化合物B(50mg,0.092mmol)和K2CO3(38.2mg,0.277mmol)在DMF(2mL)中的悬浮液以制备例5A(54.8mg,0.230mmol)处理并且反应于室温搅拌过夜。反应以水(10mL)和EtOAc(10mL)稀释。分离各层且有机层以水洗涤一次，干燥(Na2SO4)，过滤并且然后浓缩至干燥。产物溶解于少量DCM中并且通过快速色谱纯化(SiO2,0％乙酸乙酯/己烷至70％乙酸乙酯/己烷,24g柱,30min梯度)，得到制备例5B(28mg,40.8％)。HPLC RT＝2.918min(SpeedROD,5.0um,4.6mm x 50mm,10-90％甲醇水溶液，含0.1％TFA,4min梯度,在220nm监控).MS(ES)：m/z＝744.5[M+H+]。
实施例5
制备例5B(19mg,0.026mmol)在DCM(1mL)中的溶液以4NHCl的二噁烷溶液(0.064mL,0.255mmol)处理并于室温搅拌4小时。所得悬浮液经浓缩至干燥。粗的反应产物溶解于少量MeOH中并通过反相HPLC(YMC ODS C18 5μm 20x 100mm,10-90％甲醇水溶液，含0.1％TFA,20mL/min,20min梯度,在220nm监控)。产物(保留时间＝12.838分钟)经分离并冻干至干燥得到实施例5(7.3mg,36.3％)。HPLC RT＝7.075min(Xbridge Phenyl 3.5μm,3x 150mm,10％95/5水/CAN，含0.05％TFA to 100％5/95水/CAN，含0.05％TFA,15分钟梯度,流速＝0.5mL/min,于220和254nm监控)。MS(ES)：m/z＝644.4[M+H+].1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.61(d,J＝7.3Hz,1H),8.27(br.s.,3H),7.83-7.71(m,2H),7.64(br.s.,1H),7.60-7.52(m,3H),7.51-7.42(m,3H),7.37(d,J＝7.3Hz,1H),7.14(s,1H),6.20(d,J＝10.6Hz,1H),5.73(d,J＝10.6Hz,1H),5.41(d,J＝7.3Hz,1H),4.10(br.s.,1H),2.87-2.77(m,1H),2.46-2.37(m,2H),2.29-2.05(m,3H),1.78-1.48(m,4H),1.16(d,J＝7.3Hz,3H)。
实施例6
L-缬氨酸((3S)-3-(((2R,3S)-3-氨基甲酰基-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰基)氨基)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯
制备例6A：(S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-甲基丁酸氯甲基酯
经4min向(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酸(4g,18.41mmol)、四丁基硫酸氢铵(1.25g,3.68mmol)和Na2CO3(9.76g,92mmol)在DCM(80mL)和水(80mL)(于冰/水浴中冷却)的剧烈搅拌的混合物汇总缓慢添加氯磺酸氯甲基酯(3.8mL,36.8mmol)。在冰/水浴中搅拌30min后，除去冷浴并反应于室温搅拌。于室温搅拌16h后，反应以水稀释并以DCM萃取。水层以DCM反萃取并且合并的有机层经MgSO4干燥，过滤并浓缩。粗物质(5.45g)不经纯化以原样使用。
制备例6B：2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-甲基丁酸(S)-((S,Z)-3-((2R,3S)-3-氨基甲酰基-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰胺基)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-1-基)甲基酯
化合物B(50mg,0.092mmol)和K2CO3(38.2mg,0.277mmol)在DMF(2mL)中的悬浮液以制备例6A(61.2mg,0.230mmol)处理并且反应于室温搅拌过夜。18h后，添加另外的制备例6A(61.2mg,0.230mmol)和K2CO3(38.2mg,0.277mmol)并且反应再次搅拌过夜。反应然后以水(10mL)和EtOAc(10mL)稀释。分离各层且有机层以水洗涤一次，干燥(Na2SO4)，过滤并且然后浓缩至干燥。粗产物溶解于少量DCM中并且通过快速色谱纯化(SiO2,0％乙酸乙酯/己烷至70％乙酸乙酯/己烷,24g柱,30min梯度)，得到制备例6B(19mg,26.7％)。HPLC RT＝3.128min(SpeedROD,5.0um,4.6mm x50mm,10-90％甲醇水溶液，含0.1％TFA,4min梯度,在220nm监控).MS(ES)：m/z＝772.5[M+H+]。
实施例6
制备例6B(19mg,0.025mmol)在DCM(1mL)中的溶液以4NHCl的二噁烷溶液(0.062mL,0.246mmol)处理并且室温搅拌4小时。所得悬浮液经浓缩至干燥。粗反应产物溶解于少量MeOH中并通过反相HPLC纯化(YMC ODS C18 5μm 20x 100mm,10-90％甲醇水溶液，含0.1％TFA,20mL/min,20min梯度,在220nm监控)。产物(保留时间＝13.726分钟)经分离并冻干至干燥得到实施例6(7.3mg,35.9％)。HPLC RT＝7.333min(Xbridge Phenyl 3.5μm,3x 150mm,10％95/5水/CAN，含0.05％TFA至100％5/95水/CAN，含0.05％TFA,15分钟梯度,流速＝0.5mL/min,在220和254nm监控)。MS(ES)：m/z＝672.4[M+H+].1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.64(d,J＝7.3Hz,1H),8.34(br.s.,3H),7.81-7.74(m,2H),7.65(br.s.,1H),7.61-7.53(m,4H),7.51-7.42(m,4H),7.41-7.37(m,1H),7.13(br.s.,1H),6.27(d,J＝10.8Hz,1H),5.65(d,J＝10.6Hz,1H),5.40(d,J＝7.3Hz,1H),3.96(br.s.,1H),2.84-2.76(m,1H),2.48-2.39(m,2H),2.30-2.06(m,4H),2.04-1.92(m,1H),1.74-1.46(m,4H),0.80(d,J＝7.0Hz,3H),0.76(d,J＝7.0Hz,3H)。
实施例7
1-氨基环丙烷羧酸((3S)-3-(((2R,3S)-3-氨基甲酰基-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰基)氨基)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯
制备例7A：1-((叔丁氧基羰基)氨基)环丙烷羧酸((S)-3-((2R,3S)-3-氨基甲酰基-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰胺基)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-1-基)甲基酯
向化合物B(0.015g,0.028mmol)在DMF(1mL)中的溶液添加K2CO3(7.64mg,0.055mmol)，并且反应混合物在氮气气氛下于室温搅拌10min。然后添加在DMF中的1-((叔丁氧基羰基)氨基)环丙烷羧酸氯甲基酯(0.035g,0.138mmol)并且混合物于室温搅拌过夜。添加另外的1-((叔丁氧基羰基)氨基)环丙烷羧酸氯甲基酯(0.035g,0.138mmol)和K2CO3(7.64mg,0.055mmol)并且混合物于室温搅拌过夜。粗的混合物以EtOAc稀释并以水(2x 1mL)洗涤。EtOAc层经干燥(Na2SO4)、过滤并浓缩至干燥。粗产物使用制备型TLC(50％EtOAc/石油醚)纯化，得到制备例7A(12mg)。MS(ES)：m/z＝756(M+H)+。
实施例7
于-10℃向制备例7A(12mg,0.16mmol)在DCM(0.5mL)中的溶液添加HCl在二噁烷(0.2mL)中的1M溶液。反应混合物于-10℃搅拌2小时并且然后于0℃添加另外的1M HCl的二噁烷溶液(0.2mL)。1小时后，反应混合物经浓缩并通过制备型反相HPLC(TFA/MeCN)纯化，得到5mg的实施例7。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.57(d,J＝7.03Hz,1H),8.28-8.72(m,1H),7.77(d,J＝3.51Hz,2H),7.63-7.69(m,1H),7.53-7.60(m,3H),7.42-7.52(m,3H),7.38(s,1H),7.15(br s,1H),6.09(d,J＝10.54Hz,1H),5.82(d,J＝10.54Hz,1H),5.42(d,J＝7.2Hz,1H),2.79-2.98(m,2H),2.06-2.29(m,3H),1.47-1.82(m,5H),1.06-1.30(m,5H)；HPLC：RT＝11.050min(SunFire C18(4.6×150)mm,3.5μm,缓冲液：0.05％TFA/水pH 2.5，以NH3调节,移动相A：缓冲液：乙腈(95:5),移动相B：乙腈：缓冲液(95:5),流速:1mL/min,在220nm监控)；MS(ES)：m/z＝656[M+H]+。
实施例8
(2S,3R)-N-((2-氨基乙基)硫基)-N′-((3S)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
制备例8A：(2-(((2S,3R)-6,6,6-三氟-3-(((S)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基)氨基甲酰基)-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰胺基)硫基)乙基)氨基甲酸叔丁基酯
硝酸银(23.49mg,0.138mmol)在MeOH(1mL)中的悬浮液以(二硫烷二基二(乙烷-2,1-二基))二氨基甲酸二叔丁基酯(48.7mg,0.138mmol)处理。搅拌反应混合物30分钟并且然后添加化合物B(25mg,0.046mmol)和TEA(0.019mL,0.138mmol)，产生浅黄色溶液。18小时后，反应混合物真空浓缩。粗的红色油状物溶解于少量DCM中并通过快速色谱纯化(SiO2,0％至50％EtOAc/己烷)，得到(2-(((2S,3R)-6,6,6-三氟-3-(((S)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基)氨基甲酰基)-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰胺基)硫基)乙基)氨基甲酸叔丁基酯。MS(ES)：m/z＝718(M+H)+。
实施例8
制备例8A(44mg,0.061mmol)在DCM(2mL)中的溶液于0℃以TFA(0.236mL,3.07mmol)处理。反应混合物温热至室温并保持搅拌4h。反应混合物然后经浓缩且粗物质通过制备型反相色谱纯化(柱：Symmetry C18(300x19)mm,7μm,流速：1mL/min,移动相A:0.1％TFA/水,移动相B：ACN)，得到实施例8(19.6mg,0.032mmol,51.8％产率)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.87(s,1H),9.58(s,1H),9.47(s,1H),7.87(br s,3H),7.63-7.69(m,1H),7.42-7.56(m,5H),7.23-7.35(m,3H),5.26(d,J＝7.28Hz,1H),3.49-3.52(m,1H),2.85-3.02(m,5H),2.65-2.73(m,1H),2.08-2.29(m,3H),1.57-1.84(m,3H),1.40-1.51(m,1H)；HPLC:RT＝11.765min(柱：SunFire C18(4.6x150)mm,3.5μm,缓冲液:0.05％TFA/水pH 2.5，以稀NH3调节，移动相A：缓冲液：乙腈(95:5),移动相B：乙腈：缓冲液(95:5),流速:1ml\min,在220nm监控)；MS(ES)：m/z＝618(M+H)+。
实施例9
S-(((2S,3R)-6,6,6-三氟-3-(((3S)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)氨基甲酰基)-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰基)氨基)-L-半胱氨酸
实施例9A：(2R,2′R)3,3′-二硫烷二基二(2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸二叔丁基酯
(2R,2′R)-3,3′-二硫烷二基二(2-氨基丙酸)二叔丁基酯(1.9g,5.39mmol)在THF(10.78ml)中的溶液以三乙胺(1.502ml,10.78mmol)处理并且室温搅拌10min。添加一缩二碳酸二叔丁基酯(2.59g,11.86mmol)，并且混合物于室温搅拌12h。反应混合物以乙酸乙基酯(100mL)稀释并以1N HCl(2x 50mL)洗涤。有机层然后以H2O(50mL)和盐水(50mL)洗涤。有机层然后经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到浅黄色油状物，其进一步通过快速色谱纯化(SiO2,乙酸乙酯/己烷)，得到(2R,2′R)-3,3′-二硫烷二基二(2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸)二叔丁基酯(1.4g,2.53mmol,47.0％产率)，为白色固体。1H NMR(400MHz,CHCl3-d)δppm 5.33(br s,2H),4.46(br s,2H),3.08-3.27(m,4H),1.48(s,18H),1.45(s,18H)。
实施例9B：(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(((2S,3R)-6,6,6-三氟-3-(((S)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基)氨基甲酰基)-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰胺基)硫基)丙酸叔丁基酯
硝酸银(31.3mg,0.184mmol)在甲醇(5mL)中的微量悬浮液以制备例9A(102mg,0.184mmol)处理。搅拌30min后，添加化合物B(25mg,0.046mmol)和TEA(25.7μl,0.184mmol)。所得混合物于室温搅拌过夜。反应然后浓缩至干燥。粗产物溶解于少量DCM中并通过快速色谱纯化(SiO2,0％乙酸乙酯/己烷至60％乙酸乙酯/己烷,24g柱,40min梯度)，得到制备例9B(19mg,50.4％)。HPLC RT＝3.356min(SpeedROD,5.0um,4.6mm x 50mm,10-90％甲醇水溶液，含0.1％TFA,4min梯度,在220nm监控)。MS(ES)：m/z＝818.5[M+H+].1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.40(br.s.,1H),7.78(s,1H),7.64(d,J＝7.7Hz,1H),7.60-7.50(m,3H),7.49-7.32(m,4H),7.26-7.15(m,2H),5.57(d,J＝7.7Hz,1H),5.45(d,J＝8.4Hz,1H),4.26(br.s.,1H),3.45(d,J＝14.3Hz,1H),2.88-2.79(m,1H),2.72(br.s.,1H),2.45-2.07(m,6H),2.03-1.91(m,2H),1.82-1.67(m,1H),1.47(d,J＝5.1Hz,18H)。
实施例9
制备例9B(18mg,0.022mmol)在DCM(3mL)中的溶液以TFA(0.3mL,3.89mmol)处理并室温搅拌8小时并且然后浓缩至干燥。粗反应产物溶解于少量MeOH并通过反相HPLC纯化(YMC ODS C18 5μm 20x 100mm,10-90％甲醇水溶液，含0.1％TFA,20mL/min,20min梯度,在220nm监控)。产物(保留时间＝14.069分钟)经分离并冻干至干燥得到实施例9(10.3mg,60.3％).HPLC RT＝8.928min(SunFire C18 3.5μm,3x 150mm,10％95/5水/ACN with 0.05％TFAto 100％5/95水/CAN，含0.05％TFA,15分钟梯度,流速＝0.5mL/min,在220和254nm监控)。MS(ES)：m/z＝622.4[M+H+].1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.86(s,1H),9.60(s,1H),9.56(d,J＝7.5Hz,1H),8.42(br.s.,3H),7.65(t,J＝7.0Hz,1H),7.57-7.39(m,5H),7.32(d,J＝7.5Hz,2H),7.28-7.22(m,1H),5.25(d,J＝7.5Hz,1H),3.98(br.s.,1H),3.27(dd,J＝14.9,3.6Hz,1H),3.02(dd,J＝15.1,8.9Hz,1H),2.94-2.84(m,1H),2.77-2.64(m,1H),2.28-2.10(m,2H),1.85-1.54(m,2H),1.45(d,J＝9.2Hz,1H)。
实施例10
(2S,3R)-N-((异丁基氨基)甲基)-N′-((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
2-甲基丙-1-胺(0.714mL,7.19mmol)溶解于化合物A(0.020g,0.036mmol)的醇性溶液(1.5mL)。然后缓慢添加甲醛(0.535mL,7.19mmol)并持续搅拌。于75℃加热反应混合物48h。反应混合物然后浓缩至干燥，以水(5mL)稀释并以EtOAc萃取。合并的有机层以Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干燥。粗物质通过制备型反相HPLC纯化(柱：Symmetry C18(300x19)mm 7μ,移动相A：0.1％TFA/水：乙腈(90:10),移动相B：乙腈,流速：15ml/min)，得到实施例10(0.0082g,35.6％)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.53(d,J＝7.2Hz,1H),8.28-8.48(m,1H),7.69-7.80(m,2H),7.51-7.59(m,3H),7.42-7.49(m,2H),7.32-7.38(m,2H),5.32(d,J＝7.53Hz,1H),4.12-4.20(m,1H),3.90-4.09(m,1H),3.40(s,1H),3.18-3.22(m,1H),2.82-2.90(m,1H),2.29(d,J＝6.8Hz,1H),2.09(m,6H),1.57-1.80(m,4H),0.85(d,J＝4.0Hz,6H)；HPLC:RT＝15.808min(柱：Xbridge Phenyl(4.6x150)mm,3.5μm,缓冲液:0.05％TFA/水pH 2.5，以稀NH3调节，移动相A：缓冲液：乙腈(95:5),移动相B：乙腈：缓冲液(95:5),流速:1ml\min,在220nm监控)；MS(ES)：m/z＝642(M+H)+。
实施例11
(2S,3R)-N-((2-氨基乙基)硫基)-N′-((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
制备例11A：2-((2S,3R)-6,6,6-三氟-3-((S,Z)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基氨基甲酰基)-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰胺基硫基)乙基氨基甲酸叔丁基酯
向硝酸银(0.018g,0.108mmol)在MeOH(1.2mL)中的悬浮液添加(二硫烷二基二(乙烷-2,1-二基))二氨基甲酸二叔丁基酯(0.038g,0.108mmol)并且混合物于24℃搅拌20min。然后将化合物A(0.020g,0.036mmol)添加至反应混合物接着添加TEA(0.015mL,0.108mmol)。搅拌4h后，混合物经真空浓缩。粗物质通过柱色谱(SiO2,0-10％EtOAc/己烷)部分纯化以除去银相关的杂质。粗物质通过制备型TLC(0-50％EtOAc/己烷)进一步纯化，得到制备例11A(0.028g,108％)：HPLC:RT＝18.653min(柱：Xbridge Phenyl(4.6x150)mm,3.5μm,缓冲液:0.05％TFA/水pH 2.5，以稀NH3调节,移动相A：缓冲液：乙腈(95:5),移动相B：乙腈：缓冲液(95:5),流速:1ml\min,在220nm监控)；MS(ES)：m/z＝732(M+H)+。
实施例11
于0℃向制备例11A(0.028g,0.038mmol)在DCM(1.2ml)中的溶液滴加TFA(0.147ml,1.913mmol)并且将混合物温热至室温。搅拌24h后，反应混合物经浓缩至干燥。粗物质通过制备型反相HPLC纯化(柱：Inertsil ODS(250x19mm)5μ,移动相A：0.1％TFA/水,移动相B：乙腈,流速：16ml/min)，得到实施例11(0.008g,33.1％)：1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.60(d,J＝7.28Hz,1H),9.46(s,1H),7.85(br.s.,3H),7.67-7.78(m,2H),7.52-7.59(m,3H),7.43-7.50(m,2H),7.32-7.38(m,2H),5.31(d,J＝7.28Hz,1H),3.40(s,3H),2.84-3.02(m,5H),2.63-2.72(m,1H),2.07-2.35(m,4H),1.56-1.84(m,3H),1.39-1.49(m,1H).HPLC：RT＝7.700min(柱：SunFire C18(4.6x150)mm,3.5μm,缓冲液:0.05％TFA/水pH 2.5以稀NH3调节，移动相A：缓冲液：乙腈(95:5),移动相B：乙腈：缓冲液(95:5),流速:1ml\min,在220nm监控)；MS(ES)：m/z＝632(M+H)+。
实施例12
S-(((2S,3R)-6,6,6-三氟-3-(((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)氨基甲酰基)-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰基)氨基)-L-半胱氨酸
制备例12A：S-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(((2S,3R)-6,6,6-三氟-3-(((S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基)氨基甲酰基)-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰胺基)硫基)丙酸叔丁基酯
硝酸银(8.39mg,0.049mmol)在MeOH(1mL)中的悬浮液以制备例9A(37.2mg,0.067mmol)处理。搅拌混合物30分钟并且然后以化合物A(20mg,0.036mmol)和TEA(10.02μl,0.072mmol)处。2小时后，添加另外的1.5当量的制备例9A,1.1当量的硝酸银和1.6当量的TEA并且反应混合物于室温搅拌过夜。混合物然后真空浓缩。粗的油状物溶解于少量DCM并且通过快速色谱纯化(SiO2,0％至50％EtOAc/己烷)，得到制备例12A(30.6mg,0.037mmol,82％产率)，为浅棕色油状物。MS(ES)：m/z＝832[M+H]+。
实施例12
制备例12A(15mg,0.018mmol)在DCM(1mL)中的溶液于0℃以TFA(0.069mL,0.902mmol)处理。于0℃搅拌反应混合物30min并且然后温热至室温保持3.5h。于0℃添加另外的TFA(0.069mL,0.902mmol)和于室温再搅拌反应混合物2h。于0℃添加另外的TFA(0.069mL,0.902mmol)并且反应混合物于室温搅拌过夜。所得溶液经浓缩并且剩余物通过制备型反相HPLC纯化(柱：Inertsil ODS(250x19mm)5μ,移动相A：0.1％TFA/水,移动相B：乙腈,流速：16ml/min)，得到实施例12(3mg,4.44μmol,24.62％产率)，冻干后为白色粉末。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.57-9.64(m,2H),8.41(br s,3H),7.66-7.79(m,2H),7.52-7.59(m,3H),7.44-7.48(m,2H),7.32-7.39(m,2H),5.31(d,7.2Hz,1H),3.97(br s,1H),2.98-3.06(m,2H),2.52-2.68(m,5H),2.11-2.28(m,3H),1.72-1.83(m,1H),1.56-1.71(m,2H),1.43(t,J＝12.30Hz,1H),1.15-1.26(m,1H)；HPLC：RT＝7.893min(SunFire C18(4.6×150)mm,3.5μm,缓冲液：0.05％TFA/水pH 2.5，以NH3调节,移动相A：缓冲液：乙腈(95:5),移动相B：乙腈：缓冲液(95:5),流速:1mL/min,在220nm监控)；MS(ES)：m/z＝676[M+H]+。
实施例13
(2S,3R)-N-((2-(二甲基氨基)乙基)硫基)-N′-((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
向硝酸银(0.183g,1.078mmol)在MeOH(1.2mL)中的悬浮液添加2,2′-二硫烷二基二(N,N-二甲基乙胺)(0.112g,0.539mmol)并且混合物于24℃搅拌20min。然后将化合物A(0.020g,0.036mmol)添加至反应混合物接着添加TEA(0.025mL,0.180mmol)。于室温搅拌24h后，将混合物真空浓缩至干燥。粗物质通过柱色谱部分纯化(SiO2,0-10％EtOAc/己烷)以除去金属杂质。其通过制备型反相HPLC(柱：Symmetry C18(300x19)mm 7μ,移动相A：0.1％TFA/水,移动相B：乙腈,流速：15ml/min)进一步纯化，得到实施例13(0.0042g,17.72％)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.60(d,J＝7.53Hz,1H),9.45(s,1H),9.15(br s,1H),7.67-7.78(m,2H),7.52-7.59(m,3H),7.44-7.50(m,2H),7.33-7.38(m,2H),5.30(d,J＝7.28Hz,1H),3.38-3.44(m,5H),3.19-3.27(m,6H),2.87-2.96(m,2H),2.65-2.69(m,4H),2.31-2.35(m,2H),1.42-1.71(m,4H)；HPLC:RT＝9.168min(柱：Xbridge Phenyl(4.6x150)mm,3.5μm,缓冲液:0.05％TFA/水pH 2.5，以稀NH3调节,移动相A：缓冲液：乙腈(95:5),移动相B：乙腈：缓冲液(95:5),流速:1ml\min,在220nm监控)；MS(ES)：m/z＝660(M+H)+。
实施例14
S-(((2S,3R)-6,6,6-三氟-3-(((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)氨基甲酰基)-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰基)氨基)-L-半胱氨酸甲基酯
制备例14A：2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-((2S,3R)-6,6,6-三氟-3-((S,Z)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基氨基甲酰基)-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰胺基硫基)丙酸甲基酯
硝酸银(22.89mg,0.135mmol)在MeOH(1mL)中的悬浮液以(2R,2′R)-3,3′-二硫烷二基二(2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸)二甲基酯(63.2mg,0.135mmol)处理。搅拌30分钟后，添加化合物A(25mg,0.045mmol)和TEA(0.019mL,0.135mmol)，产生浅黄色溶液。反应混合物于室温搅拌4h并且然后添加另外的3当量的所述二硫化物、3当量的硝酸银和3当量的TEA。搅拌40h后，反应混合物经真空浓缩。粗物质溶解于少量DCM中并通过快速色谱纯化(SiO2,0％至50％EtOAc/己烷)，得到制备例14A，为灰白色固体。MS(ES)：m/z＝790[M+H]+。
实施例14
制备例14A(56mg,0.071mmol)在DCM(2mL)中的溶液于0℃以TFA(0.273mL,3.55mmol)处理。反应混合物温热至室温并搅拌6h。反应混合物然后浓缩并通过Prep-HPLC纯化(柱：RP18(250x4.6)mm,5μm,流速：1mL/min,移动相A：0.1％TFA/水/ACN(90/10),移动相B：ACN)，得到实施例14(19.6mg,39.3％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.56-9.64(m,2H),8.54(br.s.,3H),7.66-7.78(m,2H),7.52-7.60(m,3H),7.47(m,2H),7.32-7.39(m,2H),5.32(d,J＝7.28Hz,1H),4.14(dd,J＝8.28,4.27Hz,1H),3.76(s,3H),3.31-3.41(m,3H)3.26(dd,J＝15.31,4.27Hz,2H),3.04(dd,J＝15.06,8.53Hz,1H),2.91(td,J＝10.42,3.26Hz,1H),2.63-2.73(m,1H),2.11-2.28(m,3H),1.72-1.84(m,1H),1.54-1.71(m,2H),1.38-1.48(m,1H)；MS(ES)：m/z＝690[M+H]+。
实施例15
(2R,3S)-N-((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-N′-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
向化合物A(0.020g,0.036mmol)在乙醇(1.2mL)中的溶液添加1-甲基哌嗪(0.720g,7.19mmol)，接着添加甲醛(0.198mL,7.19mmol)并且混合物于75℃加热18h。混合物经减压浓缩，以水(7mL)稀释并以EtOAc(2x 5mL)萃取。合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干燥。粗物质通过制备型反相HPLC纯化(柱：Symmetry C18(300x19)mm 7μ,移动相A：0.1％TFA/水：乙腈(90:10),移动相B：乙腈,流速：15ml/min)，得到实施例15(0.0156g,64.9％)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.57(d,J＝7.28Hz,1H),9.4(br s,1H),8.61(t,J＝5.65Hz,1H),7.66-7.78(m,2H),7.52-7.59(m,3H),7.43-7.49(m,2H),7.33-7.37(m,2H),5.31(d,J＝7.28Hz,1H),4.03-4.10(m,1H),3.93-4.01(m,1H),3.40(s,3H),2.82-3.01(m,6H),2.78(s,3H),2.62-2.74(m,1H),2.08-2.31(m,4H),1.48-1.80(m,4H)；HPLC:RT＝7.233min(柱：SunFire C18(4.6x150)mm,3.5μm,缓冲液:0.05％TFA/水pH 2.5，以稀NH3调节,移动相A：缓冲液：乙腈(95:5),移动相B：乙腈：缓冲液(95:5),流速:1ml\min,在220nm监控)；MS(ES)：m/z＝669(M+H)+。
实施例16
(2R,3S)-N-((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-N′-(1-哌啶基甲基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
化合物A(0.020g,0.036mmol)溶解于哌啶(0.712mL,7.19mmol)和甲醛(0.535mL,7.19mmol)的溶液中并于24℃搅拌18h。混合物经减压浓缩，以水(7ml)稀释并以EtOAc(2x 5mL)萃取。合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干燥。粗物质通过制备型反相HPLC纯化(柱：Symmetry C18(300x19)mm 7μ,移动相A：0.1％TFA/水：乙腈(90:10),移动相B：乙腈,流速：15ml/min)，得到实施例16(0.0129g,54.9％)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.60(d,J＝7.28Hz,1H),9.45(br s,1H),9.37(t,J＝6.65Hz,1H),7.67-7.78(m,2H),7.52-7.59(m,3H),7.44-7.50(m,2H),7.32-7.38(m,2H),5.32(d,J＝7.28Hz,1H),4.39-4.53(m,2H),3.40(s,3H),2.98-3.06(m,3H),2.92(td,J＝10.35,3.39Hz,2H),2.64(td,J＝9.98,3.64Hz,2H),2.13-2.34(m,4H),1.52-1.86(m,7H),1.22-1.40(m,2H)；HPLC:RT＝7.527min(柱：SunFire C18(4.6x150)mm,3.5μm SC/862,缓冲液:0.05％TFA/水pH2.5，以稀NH3调节，移动相A：缓冲液：乙腈(95:5),移动相B：乙腈：缓冲液(95:5),流速:1ml\min,在220nm监控)；MS(ES)：m/z＝654(M+H)+。
实施例17
(2S,3R)-N-((4-氨基-1-哌啶基)甲基)-N′-((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
实施例17A：1-(((2S,3R)-6,6,6-三氟-3-((S,Z)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂-3-基氨基甲酰基)-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰胺基)甲基)哌啶-4-基氨基甲酸叔丁基酯
向化合物A(0.020g,0.036mmol)在乙醇(1.0mL)中的溶液添加哌啶-4-基氨基甲酸叔丁基酯(1.440g,7.19mmol)，接着添加甲醛(0.535mL,7.19mmol)并且混合物于75℃加热18h。混合物经减压浓缩，以水(7mL)稀释并以EtOAc(2x5mL)萃取。合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干燥。粗物质通过制备型-TLC(0-50％EtOAc/己烷)纯化，得到制备例17A：(0.036g,129％)：MS(ES)：m/z＝769(M+H)+。
实施例17
于0℃向制备例17A(0.036g,0.047mmol)在DCM(2mL)中的溶液滴加TFA(0.361mL,4.68mmol)并且混合物于温热至室温。4h后，反应混合物经浓缩至干燥。粗物质通过制备型反相HPLC纯化(柱：Symmetry C18(300x19)mm 7μ,移动相A：0.1％TFA/水,移动相B：乙腈,流速：15ml/min)，得到实施例17(0.009g,28.7％)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.59(d,J＝7.28Hz,1H),7.95(br s,3H),7.68-7.78(m,2H),7.53-7.59(m,3H),7.44-7.49(m,2H),7.33-7.38(m,2H),5.32(d,J＝7.53Hz,1H),4.20-4.59(m,2H),3.40(s,3H),2.89-2.95(m,2H),2.66-2.69(m,1H),2.15-2.30(m,4H),2.01(br s,2H),1.47-1.74(m,9H)1.36-1.46(m,1H)；HPLC:RT＝6.447min(柱：SunFire C18(4.6x150)mm,3.5μm,缓冲液:0.05％TFA/水pH 2.5，以稀NH3调节,移动相A：缓冲液：乙腈(95:5),移动相B：乙腈：缓冲液(95:5),流速:1ml\min,在220nm监控)；MS(ES)：m/z＝669(M+H)+。
实施例18
(2S,3R)-N-((4-(二甲基氨基)-1-哌啶基)甲基)-N′-((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
向化合物A(0.020g,0.036mmol)在乙醇(1.2mL)中的溶液添加N,N-二甲基哌啶-4-胺(0.922g,7.19mmol)，接着添加甲醛(0.535mL,7.19mmol)并且混合物于75℃加热18h。混合物经减压浓缩，以水(7mL)稀释并以EtOAc(2x5mL)萃取。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干燥。粗物质通过制备型反相HPLC纯化(柱：SymmetryC18(300x19)mm 7μ,移动相A：0.1％TFA/水：乙腈(90:10),移动相B：乙腈,流速：15ml/min)，得到实施例18(0.0195g,78％)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.75(br s,1H),9.59(d,J＝7.28Hz,1H),7.67-7.79(m,1H),7.53-7.59(m,3H),7.43-7.50(m,2H),7.32-7.38(m,2H),5.32(d,J＝7.53Hz,1H),4.33(br s,2H),3.40(s,3H),2.90(t,J＝10.54Hz,2H),2.60-2.77(m,9H),2.07-2.31(m,6H),1.50-1.84(m,8H).HPLC：RT＝7.854min(柱：Xbridge Phenyl(4.6x150)mm,3.5μm,缓冲液:0.05％TFA/水pH 2.5，以稀NH3调节,移动相A：缓冲液：乙腈(95:5),移动相B：乙腈：缓冲液(95:5),流速:1ml\min,在220nm监控)；MS(ES)：m/z＝697(M+H)+。
实施例19
(2S,3R)-N-((4-羟基-1-哌啶基)甲基)-N′-((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
化合物A(0.020g,0.036mmol)溶解于哌啶-4-醇(0.727g,7.19mmol)和甲醛(0.535mL,7.19mmol)在MeOH(1.2mL)中的溶液并于75℃加热18h。混合物经浓缩，以水(7mL)稀释并以EtOAc(2x5mL)萃取。合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干燥。粗物质通过制备型反相HPLC纯化(柱：Inertsil ODS-3(250x20)mm 5μ,移动相A：0.1％TFA/水,移动相B：乙腈,流速：14ml/min)，得到实施例19(0.019g,79％)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.61(d,J＝7.28Hz,1H),9.38(dd,J＝13.18,6.65Hz,2H),7.72-7.79(m,1H),7.67-7.71(m,1H),7.52-7.59(m,3H),7.44-7.50(m,2H),7.33-7.39(m,2H),5.32(d,J＝7.28Hz,1H),4.42-4.55(m,2H),3.93(br s,1H),3.40(s,3H),3.33(d,J＝8.53Hz,1H),3.05-3.22(m,3H),2.87-2.96(m,2H),2.60-2.69(m,1H),2.14-2.35(m,3H),1.72-1.99(m,4H),1.50-1.72(m,5H).HPLC：RT＝7.381min(柱：SunFire C18(4.6x150)mm,3.5μm,缓冲液:0.05％TFA/水pH 2.5，以稀NH3调节，移动相A：缓冲液：乙腈(95:5),移动相B：乙腈：缓冲液(95:5),流速:1ml\min,在220nm监控)；MS(ES)：m/z＝670(M+H)+。
实施例20
(2S,3R)-N-((3-羟基-1-吡咯烷基)甲基)-N′-((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
化合物A(0.020g,0.036mmol)溶解于吡咯烷-3-醇(0.626g,7.19mmol)和甲醛(0.535mL,7.19mmol)在MeOH(1.0mL)中的溶液。然后反应混合物于75℃加热18h。混合物然后减压浓缩，以水(7mL)稀释并以EtOAc(2x5mL)萃取。合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干燥。粗物质通过制备型反相HPLC纯化(柱：SunFire C18(150x19)mm 5μ,移动相A：0.1％TFA/水,移动相B：乙腈,流速：14ml/min)，得到实施例20(0.0185g,79％)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.61(d,J＝7.28Hz,1H),9.40(br s,1H),7.68-7.79(m,2H),7.53-7.60(m,3H),7.44-7.50(m,2H),7.34-7.38(m,2H),5.45(br s,1H),5.32(d,J＝7.53Hz,1H),4.39-4.62(m,3H),3.40(s,3H),3.03-3.31(m,4H),2.92(t,J＝9.41Hz,1H),2.62(br s,1H),2.10-2.32(m,4H),1.73-2.00(m,3H),1.51-1.72(m,3H).HPLC:RT＝8.532min(柱：Xbridge Phenyl(4.6x150)mm,3.5μm,缓冲液:0.05％TFA/水pH 2.5，以稀NH3调节，移动相A：缓冲液：乙腈(95:5),移动相B：乙腈：缓冲液(95:5),流速:1ml\min,在220nm监控)；MS(ES)：m/z＝656(M+H)+。
实施例21
(2S,3R)-N-((3-(二甲基氨基)-1-吡咯烷基)甲基)-N′-((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
化合物A(0.020g,0.036mmol)溶解于N,N-二甲基吡咯烷-3-胺(0.821g,7.19mmol)和甲醛(0.535mL,7.19mmol)在MeOH(1.2mL)中的溶液。反应混合物于75℃加热18h。混合物经浓缩，以水(7mL)稀释并以EtOAc(2x5mL)萃取。合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干燥。粗物质通过制备型反相HPLC纯化(柱：SymmetryC18(250x20mm),移动相A：0.1％TFA/水：乙腈(90:10),移动相B：乙腈,流速：15ml/min)，得到实施例21(0.019g,77％)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.57(d,J＝7.28Hz,1H),8.65(br s,1H),7.72-7.78(m,1H),7.67-7.71(m,1H),7.52-7.59(m,3H),7.44-7.50(m,2H),7.33-7.38(m,2H),5.31(d,J＝7.53Hz,1H),4.00-4.22(m,2H),3.40(s,3H),2.77-2.91(m,6H),2.73(br s,7H),2.11-2.28(m,4H),1.94(d,J＝7.03Hz,1H),1.51-1.80(m,5H).HPLC：RT＝8.287min(柱：Xbridge Phenyl(4.6x150)mm,3.5μm,缓冲液:0.05％TFA/水pH 2.5，以稀NH3调节，移动相A：缓冲液：乙腈(95:5),移动相B：乙腈：缓冲液(95:5),流速:1mL\min,在220nm监控)；MS(ES)：m/z＝683(M+H)+。
实施例22
(2R,3S)-N-((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-N′-(1-吡咯烷基甲基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺
化合物A(0.020g,0.036mmol)溶解于甲醛(0.535mL,7.19mmol)和吡咯烷(0.595mL,7.19mmol)在MeOH(1.2mL)中的溶液。混合物于室温搅拌18h。混合物然后浓缩至干燥，以水(7mL)稀释并以EtOAc(2x5mL)萃取。合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干燥。粗物质通过制备型反相HPLC纯化(柱：SunFire C18(150x20)mm5μ,移动相A：10mM NH4OAc/水：乙腈(90:10),移动相B：乙腈,流速：14ml/min)，得到实施例16(0.0182g,79％)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.55(d,J＝7.53Hz,1H),8.51(t,J＝6.02Hz,1H),7.67-7.77(m,2H),7.52-7.59(m,3H),7.43-7.49(m,2H),7.33-7.37(m,2H),5.31(d,J＝7.28Hz,1H),4.13(dd,J＝12.42,6.40Hz,1H),3.95(dd,J＝12.55,5.52Hz,1H),3.40(s,3H),2.81-2.89(m,1H),2.06-2.30(m,8H),1.54-1.68(m,9H).HPLC：RT＝14.937min(柱：Xbridge Phenyl(4.6x150)mm,3.5μm,缓冲液:0.05％TFA/水pH 2.5，以稀NH3调节，移动相A：缓冲液：乙腈(95:5),移动相B：乙腈：缓冲液(95:5),流速:1ml\min,在220nm监控)；MS(ES)：m/z＝640(M+H)+。
生物学分析
本发明化合物的药理学性质可藉由许多生物分析证实。已经对本发明化合物进行了下文所例示的生物分析。
Notch-CBF1转活化分析
基于Notch-CBF1(C-启动子结合因子I)细胞的转活化分析为基于所释放的Notch细胞内结构域片段(NICD)连同CBF1及其他核因子一起作为转录因子功能的能力。使用荧光素酶分析来测量对于Notch-CBF1转录活性的拮抗作用。使用含有截短Notch 1、Notch 2、Notch 3或Notch 4受体的pCDNA3.1/Hygro质粒及含有CBF1结合位点的4个拷贝的PGL3荧光素酶报导子载体瞬时共转染HeLa子宫颈癌细胞。然后测试这些细胞在测试化合物的不存在或存在下的Notch-CBF1活性。取维持于DMEM(高葡萄糖，含HEPES)、1×谷氨酰胺/青霉素/链霉素及10％胎牛血清中的HeLa细胞，根据制造商说明书，使用Monster转染套组(Mirus编号MIR2906)，于T175烧瓶中进行瞬时转染(4.5×106个细胞/烧瓶)。表2表示了用于转染的各个DNA量。
表1
转染后6小时，使用胰蛋白酶处理细胞，并在95μL分析培养基(DMEM(含HEPES的高葡萄糖)、1×谷氨酰胺/青霉素/链霉素、0.0125％BSA、1×非必需氨基酸)中，以5×103个细胞/孔的密度涂布于已涂覆聚D-赖氨酸的384孔黑色组织培养板中。将含有最终浓度在5μM至8.4×10-5μM(3倍连续稀释)的范围内的测试化合物的分析培养基(5μL)添加至这些细胞中，且然后在37℃及5％CO2下将这些细胞板培育18小时。对照孔含有DMSO媒剂(总计数)或0.5μM的内部(in-house)的小分子抑制剂(背景计数)。每一样品均一式两份。在与50μl荧光素酶试剂一起培育20分钟后，根据制造商说明书(Promega，目录编号E2550)测量荧光素酶活性，并藉由Envision板读数器(PerkinElmer,Boston,MA)分析。
化合物的拮抗效应为表示为100×[1-(平均样品-平均背景)/(平均总量-平均背景)]，其中样品为在测试化合物的存在下的荧光素酶活性，背景等于在小分子抑制剂对照的存在下的荧光素酶活性，且总量为DMSO孔中所诱导的信号。使用四参数逻辑拟合等式对数据作图，且IC50值为定义为抑制50％荧光素酶活性的化合物浓度。
下表2列示上文Notch-CBF1转活化分析中所测量的本发明化合物A和化合物B的Notch 1及Notch 3IC50值。表2中的结果四舍五入至2位数。
表2
化合物 Notch 1(IC50,nM) Notch 3(IC50,nM)
化合物A 1.6 3.4
化合物B 1.7 3.3
高通量(HT)代谢稳定性组
非经肠给药的化合物进入血流，并一或多次穿过肝。不容易被肝脏代谢的化合物可以治疗有效的血浆含量给予并维持治疗有效的期限。
口服给予的化合物通常经由肠壁吸收进入血流中且首次穿过肝脏。在此首次穿过肝脏时不轻易地代谢的化合物可以以治疗有效量分布至身体的其它区域。
10分钟培育后，代谢稳定性分析使用人类、大鼠、小鼠、狗和/或猴微粒体评价活体外的CYP介导的代谢稳定性。一式两份测试每一化合物。
这些分析的结果为表示为该10分钟培育后反应混合物中所剩余的母体化合物的分数(剩余百分比)。一般而言，这些结果为用于仅评价测试化合物的CYP介导或NADPH依赖性代谢的程度。当该化合物被明显代谢(剩余<40％至50％)时，此指示由CYP介导的代谢导致的该化合物在活体内的高清除率。然而，若该化合物在这些活体外分析中展示中等(50％至80％)或低(>85％)代谢，则在活体内经由其他代谢及消除路径高清除率仍为可能的。
这些分析的剩余百分比结果预测活体内化合物清除率，此假设CYP介导的代谢为主要消除路径。在不同微粒体种类中，结果范围为大概如表3中所显示。
表3
代谢稳定性结果解释指南
下表4列出了在人类和小鼠代谢稳定性试验中测量的化合物A和化合物B的CYP介导的代谢稳定性。表4中的结果四舍五入至2位数。在肝脏微粒体试验中，0％剩余的数值表示测试化合物的全部的CYP介导的代谢，100％的数值表示没有检测到测试化合物的CYP介导的代谢。化合物A和B在人类肝脏微粒体(HLM)中分别具有97％和88％剩余的代谢稳定性数值；以及在小鼠肝脏微粒体(MsLM)中分别具有91％和86％剩余。
表4
方法及材料
利用肝微粒体的培育
以存于100％DMSO中的3.5mM储备溶液形式接受测试化合物。稀释该测试化合物以产生含有1.4％DMSO的50μM乙腈(ACN)溶液，然后作为100×储备溶液用于利用微粒体的培育。在代谢稳定性-人类、大鼠及小鼠成套分析中，在三个物种中的每一者中单独地以一式两份测试每一化合物，或在代谢稳定性-狗或代谢稳定性-猴成套分析中的个别物种中以一式两份测试每一化合物。在3个步骤中将化合物、NADPH及肝微粒体溶液合并用于培育：
1.在37℃下，使152μl的肝微粒体悬浮液(蛋白质浓度为存于100mM NaPi中1.1mg/ml，pH 7.4，5mM MgCl2缓冲液)预升温。
2.将1.7μl的50μM化合物(98.6％ACN,1.4％DMSO)添加至同一管中，并在37℃下预培育5分钟。
3.藉由添加17μl存于100mM NaPi中的经预升温10mM NADPH溶液(pH 7.4)来起始该反应。
将这些反应组份充分混合，且将75μl的反应混合物立即转移至150μl淬灭/停止溶液中(0时间点，T0)。在37℃下将反应培育10分钟，且然后将另一75μl等份试样转移至150μl淬灭溶液中。使用含有乙腈的100μM DMN(用于注射质量控制的UV标准物)作为终止代谢反应的淬灭溶液。
在X-12离心机(SX4750转子，Beckman Coulter公司，Fullerton，CA)中以1500rpm(约500×g)对经淬灭混合物离心15分钟，以使变性微粒体沉淀。然后将90μl的体积的上清液萃取物(含有母体化合物与其代谢物的混合物)转移至单独96孔板用于UV-LC/MS-MS分析，以测定该混合物中所剩余的母体化合物百分比。
表5
代谢稳定性分析-反应组份
反应组份 代谢稳定性分析中的最终浓度
化合物(受质) 0.5μM
NaPi缓冲液，pH 7.4 100mM
DMSO 0.014％
乙腈 0.986％
微粒体(人类、大鼠、小鼠)(BD/Gentest) 1mg/ml蛋白质
NADPH 1.0mM
MgCl2 5.0mM
37℃培育时间 0分钟和10分钟
淬灭/停止溶液(ACN+100μM DMN) 150μl
反应样品 75μl
变性微粒体的沉降 15分钟
上清液的UV-LC/MS分析 0.17μM
样品分析-仪器
HPLC：泵-Thermo Surveyor；自动取样器-CTC/LEAP HTS；UV检测器-Thermo Surveyor PDA plus；管柱-具有0.5μm直列式滤器的C18，3μm，2×20mm；用于结构完整性预分析的流动相：(A)98％水，2％乙腈，具有10mM乙酸铵；(B)10％水，90％乙腈，具有10mM乙酸铵；用于反应样品分析的流动相：(A)98％水，2％乙腈，具有0.1％甲酸；(B)2％水，98％乙腈，具有0.1％甲酸；(C)存于水中的0.1％氢氧化铵；(D)存于乙腈中的0.1％氢氧化铵。
质谱仪：ThermoUltra三重四极柱质谱仪；
样品分析-结构完整性预分析
使用代谢稳定性结构完整性预分析来评估所分析化合物的纯度。化合物为以57μl的3.5mM DMSO溶液形式接受于96孔板中。利用含有相等体积的乙腈、异丙醇及MilliQ-H2O的溶液将3.5mM化合物DMSO储备溶液稀释至1/18。藉由LC-UV/MS于Thermo LCQ Deca XPPlus ion trap质谱仪上使用具有Waters Sentry 2.1mm保护管柱的Waters XBridge C18管柱(5μm,2×50mm)及下表中所阐述的LC条件(其中5μl注射及1ml/min的流速)针对结构完整性分析所得溶液(200μM)。所获得数据藉由220nm下的UV吸亮度反映纯度。仅报告那些具有大于50％的纯度的化合物的结果。
表6
代谢稳定性-结构完整性梯度
梯度时间(min) A％ B％
0.00 100 0
4.00 0 100
5.00 0 100
5.10 100 0
梯度时间(min) A％ B％
6.00 100 0
样品分析-所培育的样品
于配备有加热电喷雾(H-ESI)来源的Thermo TSQ三重四极柱质谱仪上藉由自动化输注实施MS/MS条件优化，以获得SRM跃迁及其相应的碰撞能量值。以90μL/min的流速输注浓度为存于1:1甲醇:水中20μM的化合物溶液，然后与流速为50μL/min的流动相合并，然后引入该来源中。先使用流动相A及B(50％A及50％B)且若需要则使用流动相C及D(亦为50:50组成)使所有化合物优化。将经优化参数(包括极性、SRM跃迁及碰撞能量)储存于MICROSOFT数据库中。
使用自动化输注获得的质谱条件来分析来自代谢稳定性分析的培育样品。注射体积为5μl，且流速为0.8ml/min。所使用梯度为显示于下表中。以该梯度先使用流动相A及B注射所有样品。若需要(例如，出于层析的原因)，则以相同梯度、但使用流动相C及D再注射样品。在原始数据文文件中以电子方式捕获所有LC-MS/MS分析参数。
表7
代谢稳定性-样品分析梯度
梯度时间(min) A％(或C％) B％(或D％)
0.00 95 5
0.20 95 5
0.30 0 100
1.05 0 100
1.10 95 5
1.50 95 5
数据分析
利用软件实施峰整合。对于每一化合物，藉由比较来自T10min样品的LC-MS/MS峰面积与来自T0min样品的峰面积来实施剩余百分比计算。
质量控制
于每一分析板中测试一组3种化合物以及测试化合物。仅在这些对照化合物属于下文所显示的预期范围内时，才接受并上传数据。
表8
代谢稳定性分析-藉由微粒体种类得到的对照化合物值
SD＝标准偏差
代谢稳定性半衰期组
使用活体外所测定于人类或动物肝微粒体中的代谢速率及半衰期来测定化合物的固有清除率(CLint)及肝清除率(CLh,b)。这些参数可用于预测活体内人类清除率，该清除率界定活体内药物暴露含量(Obach等人，1997、1999)。
代谢稳定性半衰期分析组评价CYP介导的(NADPH依赖性)代谢在活体外于人类、大鼠、小鼠、狗及猴微粒体中的时程及速率。该时程贯穿45分钟培育，且包括0分钟、5分钟、10分钟、15分钟、30分钟及45分钟时间点，在每一时间点处测量混合物中所剩余的测试化合物的量。
结果解释指南
代谢稳定性半衰期分析的结果为表示为半衰期(T1/2,min)。一般而言，这些结果应用于仅评价测试化合物的CYP介导或NADPH依赖性代谢的程度。当该化合物明显代谢(T1/2<14分钟)时，此指示由CYP介导的代谢导致的活体内高清除率。然而，若该化合物在这些活体外分析中展示中等(14分钟至70分钟)或低(>70分钟)代谢，则在活体内经由其他代谢及消除路径高清除率仍为可能的。
这些分析的结果预测活体内化合物清除率，此假设CYP介导的代谢为主要消除路径。在人类微粒体中，结果范围为大概如下表中所显示：
表9
代谢稳定性半衰期-结果解释指南
方法及材料
肝微粒体系购自BD-Biosciences(Woburn,MA)，且NADPH购自AppliChem Inc；所有其他试剂为获得自Sigma。
利用肝微粒体的培育
以存于100％DMSO中的3.5mM储备溶液形式接受测试化合物。稀释该测试化合物以产生含有1.4％DMSO的50μM乙腈(ACN)溶液，然后作为100倍储备溶液用于利用微粒体的培育。于人类、大鼠、小鼠、狗及猴肝微粒体中测试每一化合物。在3个步骤中将化合物、NADPH及肝微粒体溶液合并用于培育：
1.在37℃下，使450μl的肝微粒体悬浮液(蛋白质浓度为存于100mM NaPi中1.1mg/ml，pH 7.4，5mM MgCl2缓冲液)预升温。
2.将5μl的50μM化合物(98.6％ACN,1.4％DMSO)添加至同一管中，并在37℃下预培育5分钟。
3.藉由添加50μl存于100mM NaPi中的经预升温10mM NADPH溶液(pH 7.4)来起始该反应。
将反应组份充分混合，且将65μl立即转移至130μl淬灭/停止溶液中(0时间点，T0)。在37℃下，将反应培育5分钟、10分钟、15分钟、30分钟及45分钟，且在每一时间点处将65μl等份试样转移至130μl的淬灭溶液中。使用含有乙腈的内标准物(100ng/ml)作为终止代谢反应的淬灭溶液。
在X-12离心机(SX4750转子，Beckman Coulter公司，Fullerton，CA)中以1500rpm(约500×g)对经淬灭混合物离心15分钟，以使变性微粒体沉淀。然后将90μl的体积的上清液萃取物(含有母体化合物与其代谢物的混合物)转移至单独96孔板用于LC/MS-MS分析，以测定该混合物中所剩余的母体化合物百分比。
表10
代谢稳定性半衰期分析-反应组份
反应组份 代谢稳定性分析中的最终浓度
化合物(底物) 0.5μM
NaPi缓冲液，pH 7.4 100mM
DMSO 0.014％
乙腈 0.986％
微粒体(人类、大鼠、小鼠)(BD/Gentest) 1mg/ml蛋白质
NADPH 1.0mM
MgCl2 5.0mM
反应组份 代谢稳定性分析中的最终浓度
37℃培育时间 0、5、10、15、30和45分钟
淬灭/停止溶液(ACN+100μM DMN) 130μl
反应样品 65μl
变性微粒体的沉降 15分钟
样品分析-仪器
HPLC：泵-Shimadzu LC-20 AD系列二元泵；自动取样器-CTC/LEAP HTS。
小鼠中的人类肿瘤异种移植模型
所有啮齿动物为获得自Harlan Sprague Dawley公司(Indianapolis,Indiana)，且于无氨水环境中维持于经界定且无病原体群落中。在用于肿瘤传播及药物效力测试前大约1周对所有小鼠进行隔离。给小鼠随意饲喂食物及水。百时美施贵宝药品研究所(Bristol-Myers SquibbPharmaceutical Research Institute)的动物照护计划经美国实验动物照护评鉴协会(American Association for Accreditation of LaboratoryAnimal Care，AAALAC)完全认可。依照百时美施贵宝(Bristol-MyersSquibb，BMS)动物测试方法及指南实施所有实验。
使肿瘤异种移植物生长，并经皮下(SC)维持于免疫受损的balb/cnu/nu裸或NOD-SCID小鼠(Harlan Sprague Dawley)中。使用自供体小鼠获得的肿瘤片段以皮下移植物形式于适当小鼠品为(表11)中传播肿瘤。
表11
用于各种人类肿瘤异种移植物于小鼠中的繁殖的组织学类型及宿主小鼠品为/性别要求
肿瘤类型 组织学 小鼠品系 性别
TALL-1 T-ALL NOD-SCID 雌性
MDA-MB-468 乳腺癌 NOD-SCID 雌性
MDA-MB-157 乳腺癌 NOD-SCID 雌性
PAT-70 胰腺癌 NOD-SCID 雌性
PAT-78 非小细胞肺癌 NOD-SCID 雌性
临床前化学疗法试验
在实验开始时将需要检测有意义反应的所需数量的动物集合在一起，且利用13号套管针向每一者给予肿瘤片段(约20mg)的皮下植入物。使肿瘤生长至预定大小窗口(排除该范围外面的肿瘤)，且将动物均匀分布至各种治疗及对照群组。通常每个治疗及对照群组有8只小鼠。每一动物的治疗为基于个别体重。每天检查经治疗动物的治疗相关的毒性/死亡率。在起始治疗之前(Wt1)且然后在最后一次治疗剂量之后再次(Wt2)对每组动物称重。体重的差异(Wt2-Wt1)提供治疗相关的毒性的量度。
肿瘤反应为藉由每周两次利用卡尺测量肿瘤来测定，直至肿瘤达到预定0.5gm或1gm(取决于肿瘤类型)的“目标”大小为止。自下式估计肿瘤重量(mg)：
肿瘤重量＝(长度×宽度2)÷2
用肿瘤生长抑制(％TGI)表示肿瘤反应标准。肿瘤生长延迟为定义为经治疗肿瘤(T)达到预定目标大小所需要的时间(天)与对照群组(C)的时间相比的差异。出于此目的，一群组的肿瘤重量为表示为中等肿瘤重量(MTW)。
肿瘤生长抑制为如以下计算：
其中，
Ct＝治疗结束时的对照肿瘤大小中值
C0＝治疗起始时的对照肿瘤大小中值
Tt＝治疗结束时治疗群组的肿瘤大小中值
T0＝治疗起始时治疗群组的肿瘤大小中值
活性为定义为达成50％或更大的持久肿瘤生长抑制(即，TGI≥50％)或0.5或更大的细胞对数杀灭(LCK≥0.5)并持续相当于至少1个肿瘤体积倍增时间的时期，且药物治疗必须持续相当于至少2个肿瘤体积倍增时间的时期。
亦用肿瘤生长延迟(TGD值)表示肿瘤反应，肿瘤生长延迟为定义为经治疗肿瘤(T)达到预定目标大小所需要的时间(天)与对照群组(C)的时间相比的差异。
只要可能时，在高达最大耐受剂量(MTD)的剂量值范围内测定抗肿瘤活性，该最大耐受剂量为定义为刚刚高于发生过高毒性(即，超过一个死亡)的剂量值。当发生死亡时，记录死亡的日期。认为在肿瘤达到目标大小之前死亡的经治疗小鼠死于药物毒性。死亡对照小鼠所携带肿瘤皆不小于目标大小。认为具有超过一个由药物毒性引起的死亡的治疗群组已进行过高毒性治疗，且其数据不包括于化合物的抗肿瘤效力的评价中。
影响治疗耐受性的潜在药物毒性相互作用在组合化学疗法试验中为重要考虑因素。组合治疗结果的解释必须基于对同等耐受剂量的单一药剂与该组合的最佳可能反应的抗肿瘤活性的比较。因此，治疗协同作用为定义为利用超过在单一疗法的任一耐受剂量下达成的最佳效应的组合药剂的耐受方案达成的治疗效应。使用格翰氏广义威尔卡森检定(Gehan's generalized Wilcoxon test)实施数据的统计学评价。在P<0.05下宣布统计显著性。
药物给药
在活体外研究中，将所有药剂溶解于100％DMSO中，并连续稀释于培养基/10％胎牛血清中。使用以下两种不同的赋形剂来向啮齿动物给药Notch抑制剂：[1]94％Labrafil/5％ETOH/1％TW80或[2]ETOH/TPGS/PEG300(10:10:80)。通常根据QD×15、10天给药-2天停药的时间表经口给药Notch抑制剂，但亦评价其他时间表，且显示为有效的。例如，显示由QD×12、4天给药-3天停药组成的给药方案与QD×15、10天给药-2天停药同样有效。
活体内抗肿瘤活性
化合物A在针对小鼠中的人类肿瘤异种移植物的宽阵列中显示了宽谱的抗肿瘤活性。在包括以下的16个人类肿瘤异种移植物中显示抗肿瘤活性：人类T细胞急性淋巴胚细胞白血病、乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、结肠癌、骨肉瘤和神经母细胞瘤(表12)。
表12
a所有治疗为PO，QDx15，10天给药-2天停药，剂量范围为5-10mg/kg/给药。
表13
细胞增殖IC50(nM) 化合物A
TALL-1白血病 3.9
MDA-MB-468乳腺癌 3.8
热力学平衡水溶解性实验
标准制样：校准标准通过在5ml甲醇中来制备精确称量0.5-0.7mg的样品。如果物质不完全溶解于甲醇中，可以使用其他如DMSO或混合溶剂。
测试样品制备：过量的粉末前药以1mL的缓冲液(50mM磷酸钾,pH 6.5，和50mM乙酸钠，pH 4.0)于2mL玻璃小瓶中平衡。对溶液进行超声处理并涡旋振荡～30秒。小瓶300rpm于室温振荡24小时。特定前药的萃取物温育时间基于先前的水溶液稳定性数据。如果化合物在缓冲液中稳定直到24小时，然后于24小时后测量溶解性，否则报道运动溶解性数据(kinetic solubility data)。最终的饱和溶液然后转移至1.5mL Eppendorf管并以10000rpms离心～2min.。将来自饱和溶液的上清液转移至玻璃HPLC小瓶并且溶解性通过HPLC使用四点校正曲线进行分析。
表14
实施例1至22的溶解性数据
溶液稳定性试验
乙腈储备溶液：前药的乙腈储备溶液通过将1.5-2.0mg的称重化合物溶解在5.0mL的乙腈(在5mL容量瓶中)制备。
pH 6.5缓冲液工作溶液：前药的pH 6.5缓冲液工作溶液通过将1.5mL的乙腈储备溶液添加至3.5mL的稳定性缓冲液(50mM磷酸钾,pH 6.5)(在10mL小瓶中)并混合而制备。使用3mL注射器抽回～3mL的溶液并且使用Gelman 0.45μm注射器滤器过滤进入干净的1.5mLLC小瓶中。该过滤溶液将用来评价整个研究期间的前药降解。目标浓度：90-120μg/mL(70％水：30％乙腈)
pH 4.0酸性工作溶液：药物的pH 4.0工作溶液通过将1.5mL的乙腈储备溶液添加至3.5mL的稳定性缓冲液(50mM乙酸钠,pH 4.0)(在10mL小瓶中)并混合而制备。使使用3mL注射器抽回～3mL的溶液并且使用Gelman 0.45μm注射器滤器过滤进入干净的1.5mL LC小瓶中。该过滤溶液将用来评价整个研究期间的前药降解。目标浓度：90-120μg/mL(70％水：30％乙腈)
试验方法：根据上文描述的样品制备例方法，为各个pH条件制备单个样品(n＝1)。然后将样品置于保持于37℃的HPLC自动采样器中并且经24小时期间分析样品。基于初始峰面积(t＝0h)报道剩余前药(％)。在转化为母体的半衰期可以计算的各情况中，生成t1/2。通过LCMS和HPLC分析最终时刻的样品得到从前药转化成母药的证实。
典型的LC参数如下所示：
HPLC系统：HP1100系列，Hewlett Packard.，加热的自动采样器
分析柱:Synergi 4u Hydro C18,4.6mm x 5.0cm,
柱温度：40℃
自动采样器温度:37℃
流速:1.0mL/min
注射体积:10μL
移动相:A：乙腈
B：0.1％磷酸/水
运行时间:14.0分钟
典型的LCMS参数如下所示:
LC-MS系统：Surveyor HPLC系统,ThermoFinnigan LCQ Deca XPMax(Ion trap)
分析柱:Synergi 4u Hydro C18,4.6mm x 5.0cm,
柱温度：40℃
自动采样器温度:22℃
流速：1.0mL/min
注射体积：5μL
移动相：A：95％乙腈/5％20mM乙酸铵
B：5％乙腈/95％20mM乙酸铵
LCQ参数:
护套流速：81.64
Aux/Sweep流速：19.01
电流(uA)：10.89
电压(kV)：5.00
毛细管(C)：348.10
毛细管电压(V)：30.44
表15
实施例1至22的水溶液稳定性数据
前药评价：大鼠中的单一剂量药物动力学
使用雄性SPRAGUE Dawley大鼠(250g至300g)用于药物动力学研究。在给药前使大鼠禁食过夜，并在给药后4小时饲喂。在每一研究中，各组动物(N＝2至3)经由颈静脉以静脉内(IV)输注(经10min)接受测试化合物。在给药后0.5h、1h、3h、5h、7h及24h将血液样品(约0.3mL)自颈静脉收集至含K2EDTA管中。将藉由在4℃下离心(1500×g至2000×g)获得的血浆样品储存于-20℃下，直至藉由LC/MS/MS分析为止。
用于药物动力学分析的数据分析
藉由血浆浓度(藉由LC/MS/MS测定)与时间数据的非隔室分析(ThermoKinetica软件4.4.1版)获得药物动力学参数。自实验观测直接记录峰浓度(Cmax)及针对Cmax的时间(Tmax)。使用线性及对数梯形求和的组合计算自时间0至最后取样时间(AUC0-t)的曲线下面积。在IV给药后估计总血浆清除率(CLTp)、稳定状态分布体积(Vss)、表观消除半衰期(t1/2)及平均保留时间(MRT)。使用最少3个时间点利用可量化浓度进行t1/2的估计。绝对经口生物可用度F为估计为经口及IV剂量后的剂量正规化的AUC值的比率。将前药给药后化合物A或化合物B的血浆暴露(AUC0-24h或AUC0-7h)与母体化合物A或B给药后的暴露相比较。估计前药与化合物A或B的相对生物可用度(表16-17)。
表16
向大鼠给药前药实施例化合物：化合物B的血浆水平
*AUC0-7h
表17
向大鼠给药前药实施例化合物：化合物A的血浆水平
评价实施例12和化合物A针对TALL1人类T-细胞急性淋巴胚细胞白血病的体内效力。实施例12为化合物A的前药。如图1所示，化合物A和实施例12由肿瘤生长抑制(TGI)确定为活性的。

Claims (12)

1.式(I)化合物和/或其盐：
其中：
a)R1为H或-CH3且R2为Ry；或
b)R1为Rx且R2为H；
Rx为：-CH2OC(O)-(CH2)n-(CRaRb)n-X；
X为-NReRf、-OP(＝O)(OH)2、
Ra和Rb独立地为H和/或C1-3烷基，或与它们连接的碳原子一起形成C3-5环烷基环；
各n独立地为零和/或1；
Ry为Z或-S-Z；
Z为以-NRcRd和/或-CO2Rg取代的C1-6烷基；
Rc和Rd独立地为H和/或C1-4烷基，或与它们连接的氮一起形成含1至2个氮原子的杂环，其中所述杂环取代以零至2个独立地选自以下的取代基：-OH、C1-4烷基和/或NReRf；
Re和Rf独立地为H和/或C1-4烷基；和
Rg为H或C1-4烷基。
2.根据权利要求1的化合物和/或其盐，其中：
Rx为：-CH2OC(O)C(CH3)2NH2、-CH2OC(O)CH(CH3)NH2、-CH2OC(O)CH(CH(CH3)2)NH2、 和
Ry为：-SCH2CH2NH2、-SCH2CH2N(CH3)2、-SCH2CH(NH2)C(O)OH、-SCH2CH(NH2)C(O)OCH3、-CH2NHCH2CH(CH3)2、
3.根据权利要求2的化合物和/或其盐，其中R1为H且R2为Ry。
4.根据权利要求3的化合物和/或其盐，其中Ry为-SCH2CH2NH2、-SCH2CH(NH2)C(O)OH或
5.根据权利要求2的化合物和/或其盐，其中R1为-CH3且R2为Ry。
6.根据权利要求5的化合物和/或其盐，其中Ry为-CH2NHCH2CH(CH3)2、-SCH2CH2NH2、-SCH2CH2N(CH3)2、-SCH2CH(NH2)C(O)OH、-SCH2CH(NH2)C(O)OCH3、 或
7.根据权利要求5的化合物和/或其盐根据权利要求1的化合物和/或其盐，其中R1为Rx且R2为H。
8.权利要求1的化合物，其选自：
(4-(膦酰基氧基)苯基)乙酸((3S)-3-(((2R,3S)-3-氨基甲酰基-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰基)氨基)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲酯(1)；
4-((膦酰基氧基)甲基)苯甲酸((3S)-3-(((2R,3S)-3-氨基甲酰基-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰基)氨基)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯(2)；
3-(2,4-二甲基-6-(膦酰基氧基)苯基)-3-甲基丁酸(3-(((2R,3S)-3-氨基甲酰基-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰基)氨基)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯(3)；
2-甲基丙氨酸((3S)-3-(((2R,3S)-3-氨基甲酰基-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰基)氨基)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯(4)；
L-丙氨酸((3S)-3-(((2R,3S)-3-氨基甲酰基-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰基)氨基)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯(5)；
L-缬氨酸((3S)-3-(((2R,3S)-3-氨基甲酰基-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰基)氨基)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯(6)；
1-氨基环丙烷甲酸((3S)-3-(((2R,3S)-3-氨基甲酰基-6,6,6-三氟-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰基)氨基)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-1-基)甲基酯(7)；
(2S,3R)-N-((2-氨基乙基)硫基)-N′-((3S)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(8)；
S-(((2S,3R)-6,6,6-三氟-3-(((3S)-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)氨基甲酰基)-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰基)氨基)-L-半胱氨酸(9)；
(2S,3R)-N-((异丁基氨基)甲基)-N′-((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(10)；
(2S,3R)-N-((2-氨基乙基)硫基)-N′-((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(11)；
S-(((2S,3R)-6,6,6-三氟-3-(((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)氨基甲酰基)-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰基)氨基)-L-半胱氨酸(12)；
(2S,3R)-N-((2-(二甲基氨基)乙基)硫基)-N′-((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(13)；
S-(((2S,3R)-6,6,6-三氟-3-(((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)氨基甲酰基)-2-(3,3,3-三氟丙基)己酰基)氨基)-L-半胱氨酸甲基酯(14)；
(2R,3S)-N-((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-N′-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(15)；
(2R,3S)-N-((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-N′-(1-哌啶基甲基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(16)；
(2S,3R)-N-((4-氨基-1-哌啶基)甲基)-N′-((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(17)；
(2S,3R)-N-((4-(二甲基氨基)-1-哌啶基)甲基)-N′-((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(18)；
(2S,3R)-N-((4-羟基-1-哌啶基)甲基)-N′-((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(19)；
(2S,3R)-N-((3-羟基-1-吡咯烷基)甲基)-N′-((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(20)；
(2S,3R)-N-((3-(二甲基氨基)-1-吡咯烷基)甲基)-N′-((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(21)；
(2R,3S)-N-((3S)-1-甲基-2-氧代-5-苯基-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂-3-基)-N′-(1-吡咯烷基甲基)-2,3-二(3,3,3-三氟丙基)琥珀酰胺(22)；
和其盐。
9.药物组合物，其包含权利要求1至8中任一项的化合物和/或其盐以及药学上可接受的载体。
10.权利要求1至9中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗癌症的疗法中。
11.权利要求10的化合物或其药学上可接受的盐，其中该疗法进一步包含一或多种选自达沙替尼、紫杉醇、他莫昔芬、地塞米松及卡铂的额外药剂，供依序或同时给药治疗癌症。
12.权利要求1至9中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，用于制造治疗癌症的药品。
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