CN104788291B - 闹羊花分离的二萜类化合物的抗肿瘤药物及方法用途 - Google Patents

闹羊花分离的二萜类化合物的抗肿瘤药物及方法用途 Download PDF

Info

Publication number
CN104788291B
CN104788291B CN201510131759.8A CN201510131759A CN104788291B CN 104788291 B CN104788291 B CN 104788291B CN 201510131759 A CN201510131759 A CN 201510131759A CN 104788291 B CN104788291 B CN 104788291B
Authority
CN
China
Prior art keywords
diterpene
cancer cell
compound
kind compound
ethyl acetate
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN201510131759.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN104788291A (zh
Inventor
张军要
朱宝安
时冉冉
陈娇
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Luohe Medical College
Original Assignee
Luohe Medical College
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Luohe Medical College filed Critical Luohe Medical College
Priority to CN201510131759.8A priority Critical patent/CN104788291B/zh
Publication of CN104788291A publication Critical patent/CN104788291A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN104788291B publication Critical patent/CN104788291B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C29/00—Preparation of compounds having hydroxy or O-metal groups bound to a carbon atom not belonging to a six-membered aromatic ring
    • C07C29/74—Separation; Purification; Use of additives, e.g. for stabilisation
    • C07C29/76—Separation; Purification; Use of additives, e.g. for stabilisation by physical treatment
    • C07C29/86—Separation; Purification; Use of additives, e.g. for stabilisation by physical treatment by liquid-liquid treatment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C29/00—Preparation of compounds having hydroxy or O-metal groups bound to a carbon atom not belonging to a six-membered aromatic ring
    • C07C29/74—Separation; Purification; Use of additives, e.g. for stabilisation
    • C07C29/76—Separation; Purification; Use of additives, e.g. for stabilisation by physical treatment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C35/00—Compounds having at least one hydroxy or O-metal group bound to a carbon atom of a ring other than a six-membered aromatic ring
    • C07C35/22—Compounds having at least one hydroxy or O-metal group bound to a carbon atom of a ring other than a six-membered aromatic ring polycyclic, at least one hydroxy group bound to a condensed ring system
    • C07C35/44—Compounds having at least one hydroxy or O-metal group bound to a carbon atom of a ring other than a six-membered aromatic ring polycyclic, at least one hydroxy group bound to a condensed ring system with a hydroxy group on a condensed ring system having more than three rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2603/00—Systems containing at least three condensed rings
    • C07C2603/02—Ortho- or ortho- and peri-condensed systems
    • C07C2603/40—Ortho- or ortho- and peri-condensed systems containing four condensed rings

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

本发明公开了一种闹羊花中分离的二萜类化合物，所述二萜类化合物为kalmanol型二萜化合物，化学结构上为rhodomollein XXIV 5位羟基和1位氢脱水产物。本发明二萜类化合物对结肠癌细胞(HT‑29、HCT‑8)、肝癌细胞(Bcl‑7402)、非小细胞肺癌(A549)和/或乳腺癌(MCF‑7)具有很强的抑制作用，其中对结肠癌细胞(HT‑29、HCT‑8)、肝癌细胞(Bcl‑7402)和乳腺癌(MCF‑7)的抑制作用强于阳性药对照；另一方面，化合物I对正常细胞(人脐静脉内皮细胞VEC)的抑制作用要弱于阳性药，表明本发明化合物I具有抗肿瘤作用，且具有一定的选择性。

Description

闹羊花分离的二萜类化合物的抗肿瘤药物及方法用途
技术领域
本发明涉及天然提取物药物化学技术领域，特别涉及一种闹羊花分离的二萜类化合物的抗肿瘤药物及方法用途。
背景技术
羊踯躅(Rhododendron molle G.Don)为杜鹃花科植物，分布于我国长江流域至南部各地，生长于山坡、灌丛或草丛中。羊踯躅的花、果实和根等均可供药用。花一般称闹羊花，味辛，温，有大毒，入肝经；具有定痛、驱风和除湿等功效，用于风湿顽痹，伤折疼痛，皮肤顽癣。果实一般称六轴子或八里麻，味苦，温，有大毒，入肺、脾经；具有搜风止痛、止咳平喘等功效，用于风寒湿痹，跌打损伤，咳喘。根味辛，温，有毒，入脾经；具有祛风、止咳、散瘀和止痛等功效，用于风寒湿痹，跌打损伤，痔漏，癣疮。化学研究表明，二萜和黄酮类化合物是羊踯躅花、果实和根等的主要成分，其中二萜类成分既是主要有效成分，也是其毒性成分。
目前从羊踯躅的花、果实和根中分离得到并经结构确证的二萜类成分根据母核主要分为两大类：grayanane型和kalmanol型。Grayanane型代表性化合物包括：rhodomolleinXVI、rhodomollein XVII、rhodomollein XVIII、rhodoj aponin III、rhodoj aponin VI(Diterpenoids from the Fruits of Rhododendron molle，J.Nat.Prod.2000，63，1214-1217)；rhodomoside A和rhodomoside B(Diterpenoid and Phenolic Glycosides fromthe roots of Rhododendron molle)；rhodomollein IX、rhodomollein X、rhodomolleinXI、rhodomollein XII和rhodomollein XIII(Diterpenoids from the Flowers ofRhododendron molle，J.Nat.Prod.2004，67，1903-1906)；rhodomolin A和rhodomolin B(Grayanane Diterpenoids from the Flowers of Rhododendron molle with CytotoxicActivity against a Spodoptera frugiperda Cell Line，J.Nat.Prod.2005，68，924-926)；seco-rhodomollone(Diterpenoids from the Flowers of Rhododendron molle，J.Nat.Prod.2014，77，1185-1192)。Kalmanol型代表性化合物包括：rhodomollein XV、kalmanol(Diterpenoids from the Fruits of Rhododendron molle，J.Nat.Prod.2000，63，1214-1217)和rhodomollein XIV(Diterpenoids from the Flowers of Rhododendronmolle，J.Nat.Prod.2004，67，1903-1906)。代表性Grayanane型和kalmanol型二萜化合物结构分别如图1和图2所示。
闹羊花为羊踯躅的干燥花，具有祛风除湿、散瘀定痛之功效，可用于风湿痹痛、偏正头痛、跌扑肿痛、顽癣[中华人民共和国药典(一部)[S]，2010版]。其化学成分研究始于二十世纪八十年代，研究内容主要集中于其二萜类化学成分。Grayanane型和kalmanol型二萜类化合物主要通过液液萃取和不同类型填料的柱色谱法分离纯化得到。典型的方法为：第一步，不同浓度的醇溶液提取；第二步，提取物分散于水中，分别用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，分成不同极性段；第三步，取二萜类化合物集中的乙酸乙酯萃取物用正相硅胶柱色谱、反相硅胶柱色谱、MCI微孔树脂柱色谱或者凝胶柱色谱细分纯化。
闹羊花中二萜类成分药理活性筛选的报道较少，细胞毒活性研究更少。2005年，Zhong等报道了闹羊花中两个Grayanane型化合物rhodomolins A 和rhodomolins B对斜纹夜蛾细胞系Sf-9的细胞毒作用，IC50值在12-80μg/mL(Grayanane Diterpenoids from theFlowers of Rhododendron molle with Cytotoxic Activity against a Spodopterafrugiperda Cell Line，J.Nat.Prod.2005，68，924-926)。目前尚未见闹羊花中kalmanol型二萜成分的活性报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于，在针对闹羊花有效成分研究中，从乙酸乙酯萃取物中分离鉴定了一个新的kalmanol型二萜化合物，化学结构上为rhodomollein XXIV 5位羟基和1位氢脱水产物，为首次报道，命名为kalmanene。细胞毒试验表明，该化合物对肿瘤细胞具有显著的细胞毒作用，对正常细胞细胞毒作用相对较弱，可以作为制备抗肿瘤药物的活性成分。
为解决上述技术问题，本发明提供了一种闹羊花中分离的二萜类化合物，所述二萜类化合物为kalmanol型二萜化合物，化学结构上为rhodomollein XXIV 5位羟基和1位氢脱水产物。
为解决上述技术问题，本发明还提供了一种闹羊花中分离的二萜类化合物，所述二萜类化合物的制备方法包括：
取闹羊花，用二氯甲烷提取三次脱脂，过滤，收集滤渣；
将滤渣用乙醇溶液提取三次，过滤，收集滤液，减压浓缩得乙醇提取物；
将乙醇提取物加水制成提取物水悬液，以石油醚萃取三次再次脱脂后，以乙酸乙酯萃取三次，获得的乙酸乙酯萃取液浓缩，再以饱和碳酸氢钠水溶液萃取三次，取乙酸乙酯相蒸干，获得乙酸乙酯萃取物粗品；
将粗品在硅胶上进行柱层析，用乙酸乙酯-乙醇梯度洗脱，获得乙酸乙酯-乙醇洗脱物，浓缩得浸膏E1；
取浸膏E1再次进行硅胶柱层析，用二氯甲烷-甲醇等度洗脱，收集6-8柱体积洗脱部位，浓缩得浸膏E2；
取浸膏E2进行反相硅胶柱层析，用水-甲醇等度洗脱，收集4-5柱体积洗脱部位，浓缩得浸膏E3；
取浸膏E3用制备型高效液相色谱分离，用水-甲醇梯度洗脱，从水-甲醇洗脱部位得到所述二萜类化合物。
所述将滤渣用乙醇溶液提取三次，优选为95％乙醇溶液；
所述用乙酸乙酯-乙醇梯度洗脱，优选为体积比30∶1乙酸乙酯-乙醇；
所述二氯甲烷-甲醇等度洗脱，优选为体积比15∶1二氯甲烷-甲醇；
所述取浸膏E2进行反相硅胶柱层析，用水-甲醇等度洗脱，优选为体积比55∶45水-甲醇；
所述取浸膏E3用制备型高效液相色谱分离，用水-甲醇梯度洗脱，优选为体积比60∶40水-甲醇。
为解决上述技术问题，本发明又提供了一种从闹羊花中提取二萜类化合物的方法，所述方法包括：
取闹羊花，用二氯甲烷提取三次脱脂，过滤，收集滤渣；
将滤渣用乙醇溶液提取三次，过滤，收集滤液，减压浓缩得乙醇提取物；
将乙醇提取物加水制成提取物水悬液，以石油醚萃取三次再次脱脂后，以乙酸乙酯萃取三次，获得的乙酸乙酯萃取液浓缩，再以饱和碳酸氢钠水溶液萃取三次，取乙酸乙酯相蒸干，获得乙酸乙酯萃取物粗品；
将粗品在硅胶上进行柱层析，用乙酸乙酯-乙醇梯度洗脱，获得乙酸乙酯-乙醇洗脱物，浓缩得浸膏E1；
取浸膏E1再次进行硅胶柱层析，用二氯甲烷-甲醇等度洗脱，收集6-8柱体积洗脱部位，浓缩得浸膏E2；
取浸膏E2进行反相硅胶柱层析，用水-甲醇等度洗脱，收集4-5柱体积洗脱部位，浓缩得浸膏E3；
取浸膏E3用制备型高效液相色谱分离，用水-甲醇梯度洗脱，从水-甲醇洗脱部位得到所述二萜类化合物。
为解决上述技术问题，本发明再提供了一种如前述任一项所述二萜类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
所述的肿瘤可以为结肠癌细胞株HT-29、结肠癌细胞株HCT-8、肝癌细胞株Bcl-7402、非小细胞肺癌细胞株A549和/或乳腺癌细胞株MCF-7。
为解决上述技术问题，本发明另提供了一种如前述任一项所述二萜类化合物在检测抗肿瘤药物的活性中的应用。
所述的肿瘤可以为结肠癌细胞株HT-29、结肠癌细胞株HCT-8、肝癌细胞株Bcl-7402、非小细胞肺癌细胞株A549和/或乳腺癌细胞株MCF-7。
为解决上述技术问题，本发明还提供了一种如前述任一项所述二萜类化合物在筛选抗肿瘤药物中的应用。
所述的肿瘤可以为结肠癌细胞株HT-29、结肠癌细胞株HCT-8、肝癌细胞株Bcl-7402、非小细胞肺癌细胞株A549和/或乳腺癌细胞株MCF-7。
本发明有益的技术效果在于，本发明二萜类化合物对结肠癌细胞(HT-29、HCT-8)、肝癌细胞(Bcl-7402)、非小细胞肺癌(A549)和/或乳腺癌(MCF-7)具有很强的抑制作用，其中对结肠癌细胞(HT-29、HCT-8)、肝癌细胞(Bcl-7402)和乳腺癌(MCF-7)的抑制作用强于阳性药对照；另一方面，化合物I对正常细胞(人脐静脉内皮细胞VEC)的抑制作用要弱于阳性药，表明本发明化合物I具有抗肿瘤作用，且具有一定的选择性。
附图说明
图1为现有技术中代表性Grayanane型二萜化合物结构图；
图2为现有技术中代表性kalmanol型二萜化合物结构图；
图3为本发明实施例所述化合物1的化学结构式。
具体实施方式
以下将结合实施例来详细说明本发明的实施方式，借此对本发明如何应用技术手段来解决技术问题，并达成技术效果的实现过程能充分理解并据以实施。
本发明的一个实施例提供一种从闹羊花中分离纯化出的具有抗肿瘤作用的新化合物I。
本发明的另一实施例提供了一种从闹羊花中分离纯化化合物I的制备方法。
本发明的再一实施例提供了化合物I在制备抗肿瘤药物中的应用。
本发明又一实施例提供了一种闹羊花中分离的二萜类化合物，所述二萜类化合物为kalmanol型二萜化合物，化学结构上为rhodomollein XXIV 5位羟基和1位氢脱水产物。
本发明再一实施例还提供了一种闹羊花中分离的二萜类化合物，所述二萜类化合物的制备方法包括：
取闹羊花，用二氯甲烷提取三次脱脂，过滤，收集滤渣；
将滤渣用乙醇溶液提取三次，过滤，收集滤液，减压浓缩得乙醇提取物；
将乙醇提取物加水制成提取物水悬液，以石油醚萃取三次再次脱脂后，以乙酸乙酯萃取三次，获得的乙酸乙酯萃取液浓缩，再以饱和碳酸氢钠水溶液萃取三次，取乙酸乙酯相蒸干，获得乙酸乙酯萃取物粗品；
将粗品在硅胶上进行柱层析，用乙酸乙酯-乙醇梯度洗脱，获得乙酸乙酯-乙醇洗脱物，浓缩得浸膏E1；
取浸膏E1再次进行硅胶柱层析，用二氯甲烷-甲醇等度洗脱，收集6-8柱体积洗脱部位，浓缩得浸膏E2；
取浸膏E2进行反相硅胶柱层析，用水-甲醇等度洗脱，收集4-5柱体积洗脱部位，浓缩得浸膏E3；
取浸膏E3用制备型高效液相色谱分离，用水-甲醇梯度洗脱，从水-甲醇洗脱部位得到所述二萜类化合物。
所述将滤渣用乙醇溶液提取三次，优选为95％乙醇溶液；
所述用乙酸乙酯-乙醇梯度洗脱，优选为体积比30∶1乙酸乙酯-乙醇；
所述二氯甲烷-甲醇等度洗脱，优选为体积比15∶1二氯甲烷-甲醇；
所述取浸膏E2进行反相硅胶柱层析，用水-甲醇等度洗脱，优选为体积比55∶45水-甲醇；
所述取浸膏E3用制备型高效液相色谱分离，用水-甲醇梯度洗脱，优选为体积比60∶40水-甲醇。
本发明另一实施例提供了一种从闹羊花中提取二萜类化合物的方法，所述方法包括：
取闹羊花，用二氯甲烷提取三次脱脂，过滤，收集滤渣；
将滤渣用乙醇溶液提取三次，过滤，收集滤液，减压浓缩得乙醇提取物；
将乙醇提取物加水制成提取物水悬液，以石油醚萃取三次再次脱脂后，以乙酸乙酯萃取三次，获得的乙酸乙酯萃取液浓缩，再以饱和碳酸氢钠水溶液萃取三次，取乙酸乙酯相蒸干，获得乙酸乙酯萃取物粗品；
将粗品在硅胶上进行柱层析，用乙酸乙酯-乙醇梯度洗脱，获得乙酸乙酯-乙醇洗脱物，浓缩得浸膏E1；
取浸膏E1再次进行硅胶柱层析，用二氯甲烷-甲醇等度洗脱，收集6-8柱体积洗脱部位，浓缩得浸膏E2；
取浸膏E2进行反相硅胶柱层析，用水-甲醇等度洗脱，收集4-5柱体积洗脱部位，浓缩得浸膏E3；
取浸膏E3用制备型高效液相色谱分离，用水-甲醇梯度洗脱，从水-甲醇洗脱部位得到所述二萜类化合物。
本发明另一实施例提供了一种如前述任一项所述二萜类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
所述的肿瘤可以为结肠癌细胞株HT-29、结肠癌细胞株HCT-8、肝癌细胞株Bcl-7402、非小细胞肺癌细胞株A549和/或乳腺癌细胞株MCF-7。
本发明另提供了一种如前述任一项所述二萜类化合物在检测抗肿瘤药物的活性中的应用。
所述的肿瘤可以为结肠癌细胞株HT-29、结肠癌细胞株HCT-8、肝癌细胞株Bcl-7402、非小细胞肺癌细胞株A549和/或乳腺癌细胞株MCF-7。
本发明还提供了一种如前述任一项所述二萜类化合物在筛选抗肿瘤药物中的应用。
所述的肿瘤可以为结肠癌细胞株HT-29、结肠癌细胞株HCT-8、肝癌细胞株Bcl-7402、非小细胞肺癌细胞株A549和/或乳腺癌细胞株MCF-7。
根据本发明的再一实施例，提供具有下列化学结构式I的化合物：
根据本发明的另一实施例提供一种从闹羊花中分离纯化化合物I的制备方法，其制备步骤包括：
A.将闹羊花用二氯甲烷提取一次或多次脱脂，过滤，收集滤渣；
B.将闹羊花用醇或醇溶液提取一次或多次，过滤，收集滤液，再减压浓缩干燥，获得醇提取物；
C.将醇提取物加水，以石油醚萃取再次脱脂后，以乙酸乙酯萃取，获得的乙酸乙酯萃取液再以饱和碳酸氢钠水溶液萃取，取乙酸乙酯相蒸干，获得乙酸乙酯萃取物(粗品)；
D.将获得的粗品进行柱色谱分离纯化，得到纯的化合物I。
上述步骤D的详细步骤包括如下：①将粗品在硅胶上进行柱层析，用乙酸乙酯-乙醇梯度洗脱，获得乙酸乙酯-乙醇(体积比30∶1)洗脱物；②取乙酸乙酯-乙醇(体积比30∶1)洗脱物再进行硅胶柱层析，用二氯甲烷-甲醇(15∶1)等度洗脱，收集6-8柱体积洗脱部位，浓缩；③取步骤②浓缩物进行反相硅胶柱层析，用水-甲醇(55∶45)等度洗脱，收集4-5柱体积洗脱部位，浓缩；④取步骤③浓缩物用制备型高效液相色谱分离，水-甲醇梯度洗脱，从水-甲醇(体积比60∶40)洗脱部位得到纯的化合物I。
上述步骤D的详细步骤包括如下：①将粗品在硅胶上进行柱层析，用乙酸乙酯-乙醇梯度洗脱，获得乙酸乙酯-乙醇(体积比30∶1)洗脱物；②取乙酸乙酯-乙醇(体积比30∶1)洗脱物再进行硅胶柱层析，用二氯甲烷-甲醇(15∶1)等度洗脱，收集6-8柱体积洗脱部位，浓缩；③取步骤②浓缩物进行反相硅胶柱层析，用水-甲醇(55∶45)等度洗脱，收集4-5柱体积洗脱部位，浓缩；④取步骤③浓缩物用制备型高效液相色谱分离，水-甲醇梯度洗脱，从水-甲醇(体积比60∶40)洗脱部位得到纯的化合物I。
根据本发明的再一实施例，提供本发明化合物I在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明化合物I活性以标准药理学检验规程进行评价，结果表明本发明化合物I对肿瘤细胞具有显著细胞毒作用，对多数肿瘤细胞的抑制效果强于阳性药或与阳性药相当；对正常细胞细胞毒作用较弱，抑制效果低于阳性药。基于所述标准药理学检验程序评价中所显示的活性，本发明化合物I因而可以用于抗肿瘤领域，优选结肠癌、肝癌和乳腺癌。
下面是本发明化合物I的药理学试验方法及活性数据。
体外抗人结肠癌细胞(HT-29、HCT-8)、肝癌细胞(Bcl-7402)、非小细胞肺癌(A549)、乳腺癌细胞(MCF-7)和人脐静脉内皮细胞(VEC)的活性测定：
平板打孔法测定KB和细胞株抑制活性，试验方法如下：取对数生长期细胞培养于96孔培养板内，每孔100μL(含1000-1200个肿瘤细胞)，次日，给药组加入含有不同浓度化合物，每药设4个剂量组，每组设3个平行板。对照组加入与化合物等体积的溶剂，置5％CO2温箱中于37℃培养，4d后弃去培养液，每孔加入200μL 0.2％MTT溶液，37℃保温4h，弃去上清液，每孔加入DMSO 150μL溶解甲簪颗粒，轻度震荡后，用酶标仪，在参考波长450nm，检测波长570nm条件下测定光密度(OD)。以溶剂对照处理的细胞株为对照组，以紫杉醇作为阳性对照药品。测量结果用以下公式计算药物对肿瘤细胞和正常细胞的抑制率：
由所得细胞抑制率使用LOGIT法进而计算化合物IC50数值。
试验结果表明，本发明化合物I对结肠癌细胞(HT-29、HCT-8)、肝癌细胞(Bcl-7402)、非小细胞肺癌(A549)和乳腺癌(MCF-7)具有很强的抑制作用，其中对结肠癌细胞(HT-29、HCT-8)、肝癌细胞(Bcl-7402)和乳腺癌(MCF-7)的抑制作用强于阳性药对照；另一方面，化合物I对正常细胞(人脐静脉内皮细胞VEC)的抑制作用要弱于阳性药，表明本发明化合物I具有抗肿瘤作用，且具有一定的选择性。试验结果见表1。
表1本发明化合物I对肿瘤细胞和正常细胞的抑制作用(IC50(μM))
实施例1
取闹羊花(产地湖北)，用二氯甲烷提取三次脱脂，过滤，收集滤渣。将滤渣用95％乙醇溶液提取三次，过滤，收集滤液，减压浓缩得乙醇提取物。将乙醇提取物加水制成提取物水悬液，以石油醚萃取三次再次脱脂后，以乙酸乙酯萃取三次，获得的乙酸乙酯萃取液浓缩，再以饱和碳酸氢钠水溶液萃取三次，取乙酸乙酯相蒸干，获得乙酸乙酯萃取物粗品。
将粗品在硅胶上进行柱层析，用乙酸乙酯-乙醇梯度洗脱，获得乙酸乙酯-乙醇(体积比30∶1)洗脱物，浓缩得浸膏E1。取浸膏E1再次进行硅胶柱层析，用二氯甲烷-甲醇(15∶1)等度洗脱，收集6-8柱体积洗脱部位，浓缩得浸膏E2。取浸膏E2进行反相硅胶柱层析，用水-甲醇(55∶45)等度洗脱，收集4-5柱体积洗脱部位，浓缩得浸膏E3。取浸膏E3用制备型高效液相色谱分离，水-甲醇梯度洗脱，从水-甲醇(体积比60∶40)洗脱部位得到纯的化合物I。
实施例2
取闹羊花20Kg(产地湖北)，用二氯甲烷提取三次脱脂(60L×3)，过滤，收集滤渣。将滤渣用95％乙醇溶液提取三次(60L×3)，过滤，收集滤液，减压浓缩得乙醇提取物(1.2Kg)。将乙醇提取物加水10L制成提取物水悬液，以石油醚萃取三次再次脱脂后(10L×3)，以乙酸乙酯萃取三次(10L×3)，获得的乙酸乙酯萃取液浓缩至约10L再以饱和碳酸氢钠水溶液萃取三次(10L×3)，取乙酸乙酯相蒸干，获得乙酸乙酯萃取物(粗品，约200g)。
将粗品(约200g)在硅胶(600g)上进行柱层析，用乙酸乙酯-乙醇梯度洗脱，获得乙酸乙酯-乙醇(体积比30∶1)洗脱物，浓缩得浸膏E1。取浸膏E1再次进行硅胶柱层析，用二氯甲烷-甲醇(15∶1)等度洗脱，收集6-8柱体积洗脱部位，浓缩得浸膏E2。取浸膏E2进行反相硅胶柱层析，用水-甲醇(55∶45)等度洗脱，收集4-5柱体积洗脱部位，浓缩得浸膏E3。取浸膏E3用制备型高效液相色谱分离，水-甲醇梯度洗脱，从水-甲醇(体积比60∶40)洗脱部位得到纯的化合物I(110mg)。
实施例3
取闹羊花20Kg(产地湖北)，用二氯甲烷提取三次脱脂(60L×3)，过滤，收集滤渣。将滤渣用95％乙醇溶液提取三次(60L×3)，过滤，收集滤液，减压浓缩得乙醇提取物(1.0～1.4Kg)。将乙醇提取物加水10L制成提取物水悬液，以石油醚萃取三次再次脱脂后(10L×3)，以乙酸乙酯萃取三次(10L×3)，获得的乙酸乙酯萃取液浓缩至约10L再以饱和碳酸氢钠水溶液萃取三次(10L×3)，取乙酸乙酯相蒸干，获得乙酸乙酯萃取物(粗品，180～220g)。
将粗品(180～220g)在硅胶(600g)上进行柱层析，用乙酸乙酯-乙醇梯度洗脱，获得乙酸乙酯-乙醇(体积比30∶1)洗脱物，浓缩得浸膏E1。取浸膏E1再次进行硅胶柱层析，用二氯甲烷-甲醇(15∶1)等度洗脱，收集6-8柱体积洗脱部位，浓缩得浸膏E2。取浸膏E2进行反相硅胶柱层析，用水-甲醇(55∶45)等度洗脱，收集4-5柱体积洗脱部位，浓缩得浸膏E3。取浸膏E3用制备型高效液相色谱分离，水-甲醇梯度洗脱，从水-甲醇(体积比60∶40)洗脱部位得到纯的化合物I(105～115mg)。
上述3个实施例制备的化合物I结构鉴定：
无定形粉末，易溶于甲醇。HRESIMS显示[M+Na]+为m/z 357.2044，结合13C-NMR谱可确定该化合物分子式为C20H30O4，不饱和度为6。红外(IR)提示羟基存在(3417cm-1)。1H-NMR谱提示有三个甲基存在(δH 1.22，1.12，1.12)，与季碳相连；两个连氧次甲基(δH 3.85，4.21)；两个烯氢(δH 5.08，5.11)。13C-NMR谱和DEPT谱提示20个碳由3个甲基、6个亚甲基(1个烯碳，δC 103.8)、5个次甲基(2个连氧，δC 84.8，64.9)和6个季碳(3个烯碳，δC 126.9，157.3，154.6；两个连氧，δC 86.9，81.9)组成。四个烯碳证明存在两个双键，去掉两个不饱和度，还剩4个不饱和度。比较化合物I与rhodomollein XXIV1H-NMR谱和13C-NMR谱，并结合以上分析可推测化合物I为rhodomollein XXIV进一步脱水结构。根据HMBC谱可知，脱水位置在C1和C5问。通过ROESY谱确定了化合物I的空间构型，最终确证化合物I为rhodomolleinXXIV 5位羟基和1位氢脱水产物。
1H-NMR和13C-NMR谱图数据见表2。
表2核磁共振信号归属数据
所有上述的首要实施这一知识产权，并没有设定限制其他形式的实施这种新产品和/或新方法。本领域技术人员将利用这一重要信息，上述内容修改，以实现类似的执行情况。但是，所有修改或改造基于本发明新产品属于保留的权利。

Claims (4)

1.一种闹羊花中分离的二萜类化合物，其特征在于，所述二萜类化合物为kalmanol型二萜化合物，化学结构上为rhodomollein XXIV 5位羟基和1位氢脱水产物。
2.一种如权利要求1所述二萜类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，所述的肿瘤为结肠癌细胞株HT-29、结肠癌细胞株HCT-8、肝癌细胞株Bcl-7402、非小细胞肺癌细胞株A549和/或乳腺癌细胞株MCF-7。
3.一种如权利要求1所述二萜类化合物在检测抗肿瘤药物的活性中的应用，所述的肿瘤为结肠癌细胞株HT-29、结肠癌细胞株HCT-8、肝癌细胞株Bcl-7402、非小细胞肺癌细胞株A549和/或乳腺癌细胞株MCF-7。
4.一种如权利要求1所述二萜类化合物在筛选抗肿瘤药物中的应用，所述的肿瘤为结肠癌细胞株HT-29、结肠癌细胞株HCT-8、肝癌细胞株Bcl-7402、非小细胞肺癌细胞株A549和/或乳腺癌细胞株MCF-7。
CN201510131759.8A 2015-03-25 2015-03-25 闹羊花分离的二萜类化合物的抗肿瘤药物及方法用途 Expired - Fee Related CN104788291B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510131759.8A CN104788291B (zh) 2015-03-25 2015-03-25 闹羊花分离的二萜类化合物的抗肿瘤药物及方法用途

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510131759.8A CN104788291B (zh) 2015-03-25 2015-03-25 闹羊花分离的二萜类化合物的抗肿瘤药物及方法用途

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN104788291A CN104788291A (zh) 2015-07-22
CN104788291B true CN104788291B (zh) 2017-04-05

Family

ID=53553540

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510131759.8A Expired - Fee Related CN104788291B (zh) 2015-03-25 2015-03-25 闹羊花分离的二萜类化合物的抗肿瘤药物及方法用途

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104788291B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104817432A (zh) * 2015-03-25 2015-08-05 青岛华仁技术孵化器有限公司 一种二萜类化合物的抗肿瘤药物及其方法用途

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111195277A (zh) * 2018-11-19 2020-05-26 上海张江中药现代制剂技术工程研究中心 一种羊踯躅二萜有效部位及其制备工艺方法和用途

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS57212185A (en) * 1981-06-23 1982-12-27 Taiho Yakuhin Kogyo Kk Diterpenoid
CN103183586B (zh) * 2011-12-29 2016-08-03 上海张江中药现代制剂技术工程研究中心 一种从羊踯躅提取物中制备闹羊花素vi的方法
CN104817432B (zh) * 2015-03-25 2018-02-13 谢蕊 一种二萜类化合物的抗肿瘤用途

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104817432A (zh) * 2015-03-25 2015-08-05 青岛华仁技术孵化器有限公司 一种二萜类化合物的抗肿瘤药物及其方法用途
CN104817432B (zh) * 2015-03-25 2018-02-13 谢蕊 一种二萜类化合物的抗肿瘤用途

Also Published As

Publication number Publication date
CN104788291A (zh) 2015-07-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104817432B (zh) 一种二萜类化合物的抗肿瘤用途
CN101190258A (zh) 富含小白菊内酯的总倍半萜内酯提取物及其制备方法和应用
CN102940687B (zh) 一种川楝子提取物及其用途
CN105503786B (zh) 裂木脂素类化合物—荨麻裂环木脂素苷e及其制备方法
CN108003214A (zh) 一种从土贝母中提取的皂苷化合物及其方法和应用
CN101899082B (zh) 三萜皂苷类化合物、用途及制备方法
CN104892713B (zh) 葫芦素c及其类似物的制备方法与应用
CN104788291B (zh) 闹羊花分离的二萜类化合物的抗肿瘤药物及方法用途
CN103088083A (zh) 抗炎、抗肿瘤活性倍半萜内酯类化合物的制备方法
CN104873570B (zh) 一种夏枯草总黄酮的提取纯化方法及其应用
CN102526150A (zh) 一种土木香总倍半萜内酯提取物的制备方法
CN105175252B (zh) 一种二萜类化合物及其制备方法与应用
CN105198951B (zh) 一种四环二萜类化合物及其制备方法与应用
CN101190259A (zh) 一种广玉兰总内酯提取物及其制备方法和应用
CN104892714B (zh) 一种新的灵芝三萜及其制备方法和医药用途
CN101823964A (zh) 鸡树条荚蒾叶中绿原酸的制备工艺
CN110302232A (zh) 一种提取分离紫草根有效成分的方法及其提取物在制备抑制结肠癌细胞生长药物中的应用
CN105079011A (zh) 一种具有抗肿瘤作用的药物的制备和应用
CN104557958A (zh) 一种大花还亮草生物碱甲和大花还亮草生物碱乙的制备工艺及其对肿瘤细胞的细胞毒作用
CN109180632B (zh) 一种从雷公藤中分离出的化合物的制备方法
CN103027932A (zh) 一种香加皮抗肿瘤有效组分提取物及其制法和用途
CN105037470A (zh) 一种新的三萜类化合物及其制备方法和医药用途
CN106317155A (zh) 一种还原性葫芦烷型三萜及其制法和用途
CN106243184B (zh) 一种楝苦素类四降三萜化合物和该化合物的提取分离方法以及应用
CN105777839B (zh) 一种抗肿瘤化合物、其提取方法及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
EXSB Decision made by sipo to initiate substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C41 Transfer of patent application or patent right or utility model
CB03 Change of inventor or designer information

Inventor after: Zhang Junyao

Inventor after: Zhu Baoan

Inventor after: Shi Ranran

Inventor after: Chen Jiao

Inventor before: The inventor has waived the right to be mentioned

COR Change of bibliographic data
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20170301

Address after: Luohe City, Henan province 462000 University Yuanhui District Road No. 148

Applicant after: Luohe Medical College

Address before: 266071 Shandong city of Qingdao province Hongkong City Road No. 32 Minmetals building room 801-A

Applicant before: Qingdao Huaren Technology Incubator Co., Ltd.

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20170405

Termination date: 20180325

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee