CN106243184B - 一种楝苦素类四降三萜化合物和该化合物的提取分离方法以及应用 - Google Patents
一种楝苦素类四降三萜化合物和该化合物的提取分离方法以及应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106243184B CN106243184B CN201610604625.8A CN201610604625A CN106243184B CN 106243184 B CN106243184 B CN 106243184B CN 201610604625 A CN201610604625 A CN 201610604625A CN 106243184 B CN106243184 B CN 106243184B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- methanol
- chinaberry
- triterpenoid
- ethyl acetate
- bitter principle
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 240000000233 Melia azedarach Species 0.000 title claims abstract description 56
- XBZYWSMVVKYHQN-MYPRUECHSA-N (4as,6as,6br,8ar,9r,10s,12ar,12br,14bs)-10-hydroxy-2,2,6a,6b,9,12a-hexamethyl-9-[(sulfooxy)methyl]-1,2,3,4,4a,5,6,6a,6b,7,8,8a,9,10,11,12,12a,12b,13,14b-icosahydropicene-4a-carboxylic acid Chemical compound C1C[C@H](O)[C@@](C)(COS(O)(=O)=O)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@@]5(C(O)=O)CCC(C)(C)C[C@H]5C4=CC[C@@H]3[C@]21C XBZYWSMVVKYHQN-MYPRUECHSA-N 0.000 title claims abstract description 43
- 238000000605 extraction Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 238000000926 separation method Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title abstract description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 10
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 claims abstract description 9
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims abstract description 4
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 108
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 48
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 34
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 32
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims description 27
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 27
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 26
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims description 20
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 claims description 15
- 239000002024 ethyl acetate extract Substances 0.000 claims description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 10
- SRCZQMGIVIYBBJ-UHFFFAOYSA-N ethoxyethane;ethyl acetate Chemical compound CCOCC.CCOC(C)=O SRCZQMGIVIYBBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- QBKSWRVVCFFDOT-UHFFFAOYSA-N gossypol Chemical compound CC(C)C1=C(O)C(O)=C(C=O)C2=C(O)C(C=3C(O)=C4C(C=O)=C(O)C(O)=C(C4=CC=3C)C(C)C)=C(C)C=C21 QBKSWRVVCFFDOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 claims description 10
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 7
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims description 6
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 6
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 claims description 6
- QHOPXUFELLHKAS-UHFFFAOYSA-N Thespesin Natural products CC(C)c1c(O)c(O)c2C(O)Oc3c(c(C)cc1c23)-c1c2OC(O)c3c(O)c(O)c(C(C)C)c(cc1C)c23 QHOPXUFELLHKAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 5
- 229930000755 gossypol Natural products 0.000 claims description 5
- 229950005277 gossypol Drugs 0.000 claims description 5
- YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N octadecylsilane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[SiH3] YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 claims description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 claims 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 claims 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 claims 1
- 238000002386 leaching Methods 0.000 claims 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 abstract description 9
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 abstract description 6
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 abstract description 6
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 abstract description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 4
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 abstract description 2
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 abstract description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 33
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 18
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 11
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 8
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 7
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 6
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 3
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 3
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 description 3
- -1 chlorins compound Chemical class 0.000 description 3
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 241000158723 Melia Species 0.000 description 2
- 241000158728 Meliaceae Species 0.000 description 2
- 206010033661 Pancytopenia Diseases 0.000 description 2
- NAHTXVIXCMUDLF-DUJPAFNYSA-N Toosendanin Natural products O=C(O[C@H]1C(=O)[C@H]2[C@@](C)([C@H](O)C[C@H]3[C@@]4(C)[C@H](O)OC[C@@]23[C@@H](O)C[C@H]4OC(=O)C)[C@@]23[C@]1(C)[C@H](c1cocc1)C[C@H]2O3)C NAHTXVIXCMUDLF-DUJPAFNYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 2
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 2
- 208000025113 myeloid leukemia Diseases 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 125000004079 stearyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- NAHTXVIXCMUDLF-RFNFAWMESA-N toosendanin Chemical compound C=1([C@H]2[C@]3(C)[C@@H](OC(C)=O)C(=O)[C@H]4[C@@]([C@@]53O[C@@H]5C2)(C)[C@H](O)C[C@H]2[C@@]3(C)[C@H](O)OC[C@]24[C@@H](O)C[C@H]3OC(=O)C)C=COC=1 NAHTXVIXCMUDLF-RFNFAWMESA-N 0.000 description 2
- 239000008488 toosendanin Substances 0.000 description 2
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 238000005033 Fourier transform infrared spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 208000028018 Lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 241000130764 Tinea Species 0.000 description 1
- 208000002474 Tinea Diseases 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000078 anti-malarial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 239000003430 antimalarial agent Substances 0.000 description 1
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 1
- 201000008275 breast carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 229940000406 drug candidate Drugs 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- 238000002451 electron ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 239000003777 experimental drug Substances 0.000 description 1
- 229930003935 flavonoid Chemical class 0.000 description 1
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 description 1
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 1
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 1
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 1
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 208000003747 lymphoid leukemia Diseases 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- GHBKQPVRPCGRAQ-UHFFFAOYSA-N octylsilicon Chemical group CCCCCCCC[Si] GHBKQPVRPCGRAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 1
- 150000007965 phenolic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003648 triterpenes Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J71/00—Steroids in which the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton is condensed with a heterocyclic ring
- C07J71/0005—Oxygen-containing hetero ring
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Abstract
本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种楝苦素类四降三萜化合物和该化合物的提取分离方法以及应用，所述楝苦素类四降三萜化合物，其它的分子式为C35H42O8，它是从苦楝(Melia azedarach L.)植物的果实中提取分离出来的，经实验研究表明，该楝苦素类四降三萜化合物对多种人体肿瘤细胞具有良好的抑制活性，因此，可以用于制备抗肿瘤药物，特别是在用于制备治疗乳腺癌、结肠癌、胃癌和肝癌药物中的应用。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种楝苦素类四降三萜化合物和该化合物的提取分离方法以及应用。
背景技术
苦楝(Melia azedarach L.)为楝科(Meliaceae)楝属(Melia)植物，较常见，生于低海拔旷野、路旁或疏林中，广泛分布于东半球的热带和亚热带地区。苦楝全株有毒，果实毒性最大，苦楝子味苦，性寒，具有杀虫治癣、理气止痛的效能；亦可做杀蛔虫药，民间也用作土农药，在中华药典中已有收载。苦楝的化学成分种类丰富，目前，国内外研究者所报道的化合物共有十几种，主要成分有三萜类、甾体类、黄酮类、酚酸类、糖苷类等。大量动物实验表明，楝苦素类化合物具有抗癌、抗菌、抗疟、抗病毒、杀虫和一些其他对人体的药理作用。近年来，我国学者对川楝素的抗肿瘤作用进行了广泛的研究，发现川楝素具有诱导细胞分化抑制多种肿瘤细胞增生和凋亡作用，具有广谱抗肿瘤效果，是一个有希望的抗癌候选药物。
发明内容
本发明的目的在于提供一种楝苦素类四降三萜化合物和该化合物的提取分离方法以及应用，所述的楝苦素类四降三萜化合物具有较强的肿瘤细胞毒活性，该化合物的提取分离方法简单、易操作且提取分离效果好。
发明的目的通过如下技术方案实现：一种楝苦素类四降三萜化合物，其它的分子式为C35H42O8，其结构式为：
所述的楝苦素类四降三萜化合物的提取分离方法，它包括以下步骤：
1)提取：苦楝果实经干燥、粉碎后，用甲醇提取，所得提取液浓缩后得粗浸膏；将该粗浸膏溶于水，混合均匀后用乙酸乙酯萃取，所得萃取液浓缩后得到乙酸乙酯浸膏；
2)分离：将步骤1)所得的乙酸乙酯浸膏进行硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱；其中，石油醚与乙酸乙酯体积比为60:40的洗脱液浓缩后进一步经MCI柱层析，以甲醇-水梯度洗脱；其中，甲醇与水体积比为80:20的洗脱液浓缩后经Sephadex LH-20凝胶柱层析，以氯仿与甲醇的混合溶剂进行洗脱，其中，氯仿与甲醇的体积比为2:1-1:1，收集洗脱液并将洗脱液浓缩后再经反相色谱柱层析，以甲醇-水梯度洗脱，其中甲醇与水体积比为80:20的洗脱液浓缩后经氯仿重结晶得到所述的楝苦素类四降三萜化合物。
在进行步骤2)中的Sephadex LH-20凝胶柱层析时，本发明的发明人发现以氯仿与甲醇体积比1:1洗脱时的分离效果最佳；另外，对于步骤2)的分离过程，当在进行硅胶柱层析、MCI柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析以及反相色谱柱层析时，发明人对每一次柱层析均尝试了多种洗脱剂，结构发现采取本发明相应的洗脱剂能够达到很好的分离效果。
本发明步骤1)中提取的具体方法为：将苦楝果实经干燥、粉碎后，用1.5-2.5L甲醇于室温下反复渗漉提取2-4次，合并提取液，所得的提取液浓缩后得粗浸膏；将粗浸膏溶于水，混合均匀后用乙酸乙酯萃取2-4次，所得萃取液于50℃-70℃条件下减压浓缩成乙酸乙酯浸膏。
步骤2)中，硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱时，石油醚与乙酸乙酯体积比依次为：80:20、60:40、50:50、30:70、0:100。
步骤2)中，MCI柱层析，以甲醇-水梯度洗脱时，甲醇与水体积比依次为：50:50、70:30、80:20、100:0。
步骤2)中，反相色谱柱层析，以甲醇-水梯度洗脱时，甲醇与水体积比依次为：30:70、50:50、80:20、100:0。
步骤2)中，反相色谱柱层析，所使用的反相色谱柱的填料为反相十八烷基键合硅胶。
在进行反相色谱柱层析时，本发明的发明人还尝试了其他一些填料，如辛烷基硅烷键合硅胶，结果发现利用辛烷基硅烷键合硅胶进行分离时的分离效果不及反相十八烷基键合硅胶。
所述的楝苦素类四降三萜化合物的应用，在制备治疗乳腺癌、结肠癌、胃癌和肝癌药物中的应用。
较之现有技术而言，本发明的优点在于：本发明的楝苦素类四降三萜化合物是从植物中分离纯化得到的，具有原料来源广泛的优点，通过本发明的提取分离方法拓宽了该楝苦素类四降三萜化合物作为药用活性成分的来源，也有助于揭示药用植物的作用机制，本发明还通过实验证明了该楝苦素类四降三萜化合物具有较强的肿瘤细胞毒活性，可应用于制备治疗乳腺癌、结肠癌、胃癌和肝癌药物中。
附图说明
图1是本发明的楝苦素类四降三萜化合物的化学结构式。
具体实施方式
下面结合说明书附图和实施例对本发明内容进行详细说明：
在以下实施例中，所述的楝苦素类四降三萜化合物的结构式(结构式中的阿拉伯数字是化学结构中碳原子的标位)如下：
所用试剂均为分析纯，其中甲醇为色谱纯。薄层层析所用硅胶板为预制硅胶HSGF254(烟台江支硅胶开发有限公司)，硅胶200-300目(青岛海洋化工有限公司)，MCI为CHP-20P(75-150μm)(日本三菱化学公司)，凝胶为Sephadex LH-20(AmershamBiosciences),液相为岛津LC-20A，紫外检测器为SPD-M20A，检测波长为210nm，色谱柱为沃特世半制备柱XBridge@prep C18柱(205mm×9.4mm，微粒大小5μm)。NMR由Bruker DRX600测定得到。EI-MS由HP-5988质谱仪测得，IR由Nicolet170SX FT-IR红外仪测得。
实施例一：楝苦素类四降三萜化合物的提取分离——a
1)提取：将苦楝果实(采自福建省)10kg经干燥、粉碎后，用1.5L甲醇于室温下反复渗漉提取3次，合并提取液，将所得的提取液浓缩后得粗浸膏；将粗浸膏溶于水，混合均匀后用乙酸乙酯萃取3次，所得萃取液于60℃条件下减压浓缩成乙酸乙酯浸膏。
2)分离：将步骤1)所得的乙酸乙酯浸膏进行硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱；其中，石油醚与乙酸乙酯体积比为60:40的洗脱液浓缩后进一步经MCI柱层析，以甲醇-水梯度洗脱；其中，甲醇与水体积比为80:20的洗脱液浓缩后经Sephadex LH-20凝胶柱层析，以氯仿与甲醇体积比1:1洗脱，收集洗脱液并将洗脱液浓缩后再经反相色谱柱层析，以甲醇-水梯度洗脱，其中甲醇与水体积比为80:20的洗脱液浓缩后经氯仿重结晶得到所述的楝苦素类四降三萜化合物15.56mg。
其中，步骤2)中，硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱时，石油醚与乙酸乙酯体积比依次为：80:20、60:40、50:50、30:70、0:100；MCI柱层析，以甲醇-水梯度洗脱时，甲醇与水体积比依次为：50:50、70:30、80:20、100:0；反相色谱柱层析，以甲醇-水梯度洗脱时，甲醇与水体积比依次为：30:70、50:50、80:20、100:0；反相色谱柱层析，所使用的反相色谱柱的填料为反相十八烷基键合硅胶。
分离纯化得到的本发明的楝苦素类四降三萜化合物为白色粉末，1H及13C数据如下表1所示：
表1楝苦素类四降三萜化合物的1H及13C NMR(ppm,CDCl3)
楝苦素类四降三萜化合物：C35H42O9；UVλmax nm:225和207；IR(KBr)νmax cm-1:3500-3250,1735,1710,1600和1580。ESI-MS m/z 591.3395[M+H]+。
实施例二：楝苦素类四降三萜化合物的提取分离——b
1)提取：将苦楝果实(采自福建省)10kg经干燥、粉碎后，用2L甲醇于室温下反复渗漉提取2次，合并提取液，将所得的提取液浓缩后得粗浸膏；将粗浸膏溶于水，混合均匀后用乙酸乙酯萃取2次，所得萃取液于50℃条件下减压浓缩成乙酸乙酯浸膏。
2)分离：将步骤1)所得的乙酸乙酯浸膏进行硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱；其中，石油醚与乙酸乙酯体积比为60:40的洗脱液浓缩后进一步经MCI柱层析，以甲醇-水梯度洗脱；其中，甲醇与水体积比为80:20的洗脱液浓缩后经Sephadex LH-20凝胶柱层析，以氯仿与甲醇体积比1.5:1洗脱，收集洗脱液并将洗脱液浓缩后再经反相色谱柱层析，以甲醇-水梯度洗脱，其中甲醇与水体积比为80:20的洗脱液浓缩后经氯仿重结晶得到所述的楝苦素类四降三萜化合物14.39mg。
其中，步骤2)中，硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱时，石油醚与乙酸乙酯体积比依次为：80:20、60:40、50:50、30:70、0:100；MCI柱层析，以甲醇-水梯度洗脱时，甲醇与水体积比依次为：50:50、70:30、80:20、100:0；反相色谱柱层析，以甲醇-水梯度洗脱时，甲醇与水体积比依次为：30:70、50:50、80:20、100:0；反相色谱柱层析，所使用的反相色谱柱的填料为反相十八烷基键合硅胶。
实施例三：楝苦素类四降三萜化合物的提取分离——c
1)提取：将苦楝果实(采自福建省)10kg经干燥、粉碎后，用2.5L甲醇于室温下反复渗漉提取4次，合并提取液，将所得的提取液浓缩后得粗浸膏；将粗浸膏溶于水，混合均匀后用乙酸乙酯萃取4次，所得萃取液于70℃条件下减压浓缩成乙酸乙酯浸膏。
2)分离：将步骤1)所得的乙酸乙酯浸膏进行硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱；其中，石油醚与乙酸乙酯体积比为60:40的洗脱液浓缩后进一步经MCI柱层析，以甲醇-水梯度洗脱；其中，甲醇与水体积比为80:20的洗脱液浓缩后经Sephadex LH-20凝胶柱层析，以氯仿与甲醇体积比2:1洗脱，收集洗脱液并将洗脱液浓缩后再经反相色谱柱层析，以甲醇-水梯度洗脱，其中甲醇与水体积比为80:20的洗脱液浓缩后经氯仿重结晶得到所述的楝苦素类四降三萜化合物15.43mg。
其中，步骤2)中，硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱时，石油醚与乙酸乙酯体积比依次为：80:20、60:40、50:50、30:70、0:100；MCI柱层析，以甲醇-水梯度洗脱时，甲醇与水体积比依次为：50:50、70:30、80:20、100:0；反相色谱柱层析，以甲醇-水梯度洗脱时，甲醇与水体积比依次为：30:70、50:50、80:20、100:0；反相色谱柱层析，所使用的反相色谱柱的填料为反相十八烷基键合硅胶。
本发明实施例二和实施例三分离所得的楝苦素类四降三萜化合物液为白色粉末，且1H及13C数据与实施例一的一致。
实施例四：本发明所述的楝苦素类四降三萜化合物的抗肿瘤活性实验：
一、实验细胞
人胃癌细胞系SGC7901、人肝癌细胞系HepG2、人肺癌细胞系A549、人皮肤癌细胞系A431、人乳腺癌细胞系MCF-7、人结肠癌细胞系SW1116、人急性T淋巴细胞白血病细胞系MOLT4、人急性髓细胞白血病细胞系HL60、人慢髓细胞白血病细胞系K562。
二、实验药物
本发明所述的楝苦素类四降三萜化合物。以培养基配制浓度为20mg/mL,再倍比稀释设置6个药物浓度。
抗癌细胞活性测定：
1、楝苦素类四降三萜化合物对人实体肿瘤细胞系的增殖抑制作用：
方法1：采用SRB法。分别取对数生长期的人实体肿瘤细胞系(人胃癌细胞系SGC7901、人肝癌细胞系HepG2、人肺癌细胞系A549、人皮肤癌细胞系A431、人乳腺癌细胞系MCF-7、人结肠癌细胞系SW1116)细胞接种于96孔培养板上，每孔接种量分别为5000/150μL、3000/150μL、3500/150μL和6000/150μL。实验设药物实验组、阴性对照组和空白对照孔。药物实验组每孔加不同浓度的本发明所述的楝苦素类四降三萜化合物溶液100μL(化合物母液用营养液稀释)，每个浓度做3个复孔；阴性对照组每孔加营养液100μL，共设6个复孔；空白对照孔只加营养液200μL，用于仪器调零。在常规培养条件下，作用72h后取出，弃上清液控干水分，每孔加100μl 4℃预冷的10％三氯醋酸溶液，静置5min后于4℃处避光保存1h以上；取出培养板用双蒸水洗涤5遍，控干水分；每孔加入0.4％的SRB溶液100μl，静置染色15min；用1％醋酸溶液洗涤5遍，控干水分；每孔加入100μl 10mmol﹒L-1Tris溶液，于振荡器上振荡5min使之完全溶解。用酶标仪在492nm波长处测定吸光度值(A)。按以下公式测得存在不同药物浓度时细胞的增殖抑制率：抑制率(％)＝(1-药物干预组A492/空白对照组A492)×100％，取各复孔平均值，计算各组的增殖抑制率。用SPSS12.0进行统计学分析，并计算IC50。实验重复两次。结果见表2和表3。
表2楝苦素类四降三萜化合物对肿瘤细胞系的增殖抑制作用(x±SD,n＝3)
表3楝苦素类四降三萜化合物对肿瘤细胞系的半数抑制浓度
方法2：采用MTT法。分别取对数生长期的人白血病细胞系(急性髓系白血病细胞系HL-60、慢性髓系白血病细胞系K562和淋巴细胞白血病细胞系MOLT-4)细胞接种于96孔培养板上，每孔接种量分别为6000/150μL、7000/150μL和13000/150μL。实验设药物实验组、阴性对照组和空白对照孔。药物实验组每孔加不同浓度的本发明所述的楝苦素类四降三萜化合物溶液100μL(化合物母液用营养液稀释)，每个浓度做3个复孔；阴性对照组每孔加营养液100μL，共设6个复孔；空白对照孔只加营养液200μL，用于仪器调零。在常规培养条件下，作用72h后，每孔加入20μL MTT溶液(浓度为5mg/mL，用PBS配制，pH＝7.4)，继续培养4h，离心弃上清，每孔加二甲基亚砜(DMSO)150μL，震荡5min，待结晶完全溶解后，用酶标仪(BIO-RAD产品)在570nm波长处测定每个小孔的吸光度值(A570)，各组取平均值，计算抑制率：IR＝(1－实验组A570/对照组A570)×100％。用SPSS12.0进行统计学分析，并计算IC50。实验重复两次。
结果见表4和表5。
表4楝苦素类四降三萜化合物对肿瘤细胞系的增殖抑制作用(x±SD,n＝3)
表5楝苦素类四降三萜化合物对肿瘤细胞系的半数抑制浓度
上述实验结果表明，楝苦素类四降三萜化合物对多种人实体肿瘤(人胃癌细胞系SGC7901、人肝癌细胞系HepG2、人肺癌细胞系A549、人皮肤癌细胞系A431、人乳腺癌细胞系MCF-7和人结肠癌细胞系SW1116)和白血病细胞系(人急性T淋巴细胞白血病细胞系MOLT4、人急性髓细胞白血病细胞系HL60和人慢髓细胞白血病细胞系K562)均具有显著的增殖抑制作用，并呈剂量依赖性，作用72h的IC50分别为4.10、4.10、8.00、8.00、2.41、2.49、11.68、14.00和9.74mg/L，说明本发明的楝苦素类四降三萜化合物具有抗肿瘤活性。因此，本发明所述的楝苦素类四降三萜化合物可用于制备抗肿瘤药物。
Claims (3)
1.一种楝苦素类四降三萜化合物的提取分离方法，其特征在于：
所述楝苦素类四降三萜化合物的分子式为C35H42O8，其结构式为：
所述楝苦素类四降三萜化合物的提取分离方法包括以下步骤：
1)提取：苦楝果实经干燥、粉碎后，用甲醇提取，所得提取液浓缩后得粗浸膏；将该粗浸膏溶于水，混合均匀后用乙酸乙酯萃取，所得萃取液浓缩后得到乙酸乙酯浸膏；
2)分离：将步骤1)所得的乙酸乙酯浸膏进行硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱；其中，石油醚与乙酸乙酯体积比为60:40的洗脱液浓缩后进一步经MCI柱层析，以甲醇-水梯度洗脱；其中，甲醇与水体积比为80:20的洗脱液浓缩后经Sephadex LH-20凝胶柱层析，以氯仿与甲醇的混合溶剂进行洗脱，其中，氯仿与甲醇的体积比为2:1-1:1，收集洗脱液并将洗脱液浓缩后再经反相色谱柱层析，以甲醇-水梯度洗脱，其中甲醇与水体积比为80:20的洗脱液浓缩后经氯仿重结晶得到所述的楝苦素类四降三萜化合物；
步骤1)中提取的具体方法为：将苦楝果实经干燥、粉碎后，用1.5-2.5L甲醇于室温下反复渗漉提取2-4次，合并提取液，所得的提取液浓缩后得粗浸膏；将粗浸膏溶于水，混合均匀后用乙酸乙酯萃取2-4次，所得萃取液于50℃-70℃条件下减压浓缩成乙酸乙酯浸膏；
步骤2)中，硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱时，石油醚与乙酸乙酯体积比依次为：80:20、60:40、50:50、30:70、0:100；
步骤2)中，MCI柱层析，以甲醇-水梯度洗脱时，甲醇与水体积比依次为：50:50、70:30、80:20、100:0；
步骤2)中，反相色谱柱层析，以甲醇-水梯度洗脱时，甲醇与水体积比依次为：30:70、50:50、80:20、100:0。
2.根据权利要求1所述的楝苦素类四降三萜化合物的提取分离方法，其特征在于：步骤2)中，反相色谱柱层析，所使用的反相色谱柱的填料为反相十八烷基键合硅胶。
3.根据权利要求1所述的楝苦素类四降三萜化合物的应用，其特征在于：在制备治疗乳腺癌、结肠癌、胃癌和肝癌药物中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610604625.8A CN106243184B (zh) | 2016-07-28 | 2016-07-28 | 一种楝苦素类四降三萜化合物和该化合物的提取分离方法以及应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610604625.8A CN106243184B (zh) | 2016-07-28 | 2016-07-28 | 一种楝苦素类四降三萜化合物和该化合物的提取分离方法以及应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN106243184A CN106243184A (zh) | 2016-12-21 |
| CN106243184B true CN106243184B (zh) | 2018-10-16 |
Family
ID=57604245
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201610604625.8A Expired - Fee Related CN106243184B (zh) | 2016-07-28 | 2016-07-28 | 一种楝苦素类四降三萜化合物和该化合物的提取分离方法以及应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN106243184B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107383011B (zh) * | 2017-08-01 | 2019-05-10 | 深圳百奥捷生物科技有限公司 | 一种分离自连翘叶黄芩的抗病毒生物碱及其制备方法 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101226660B1 (ko) * | 2009-06-19 | 2013-01-25 | 일동제약주식회사 | 투센다닌 또는 멀구슬나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 치매 예방 또는 치료용 조성물 |
| CN103450324A (zh) * | 2013-09-17 | 2013-12-18 | 南京通泽农业科技有限公司 | 一种从苦楝皮中提取川楝素的方法 |
-
2016
- 2016-07-28 CN CN201610604625.8A patent/CN106243184B/zh not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN106243184A (zh) | 2016-12-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101190258A (zh) | 富含小白菊内酯的总倍半萜内酯提取物及其制备方法和应用 | |
| CN108003214A (zh) | 一种从土贝母中提取的皂苷化合物及其方法和应用 | |
| CN104825500A (zh) | 白肉灵芝提取物、提取方法及其用途 | |
| CN104817432B (zh) | 一种二萜类化合物的抗肿瘤用途 | |
| CN105294623A (zh) | 一种倍半萜内酯类化合物、其制备方法以及应用 | |
| CN104892713B (zh) | 葫芦素c及其类似物的制备方法与应用 | |
| CN102311475B (zh) | 一种从灵芝中分离出的新化合物及其制备方法和医药用途 | |
| CN104844675B (zh) | 白肉灵芝三萜化合物、其药用组合物及其应用 | |
| CN106243184B (zh) | 一种楝苦素类四降三萜化合物和该化合物的提取分离方法以及应用 | |
| CN105859805A (zh) | 核桃青皮中一种新的酚苷化合物的制备方法和用途 | |
| CN105152921B (zh) | 一种三环二萜类化合物及其制备方法与应用 | |
| CN105198951B (zh) | 一种四环二萜类化合物及其制备方法与应用 | |
| CN104387362A (zh) | 一种环烯醚萜酯类化合物、其制备方法以及应用 | |
| CN101190259A (zh) | 一种广玉兰总内酯提取物及其制备方法和应用 | |
| CN105175252A (zh) | 一种二萜类化合物及其制备方法与应用 | |
| CN103191143B (zh) | 一种强心苷化合物的用途 | |
| CN105801634B (zh) | 核桃青皮中一种直链醇苷化合物的制备方法和应用 | |
| CN101537027A (zh) | 暗消藤抗肺癌活性提取物及其化合物的制备工艺 | |
| CN104788291B (zh) | 闹羊花分离的二萜类化合物的抗肿瘤药物及方法用途 | |
| CN103027932A (zh) | 一种香加皮抗肿瘤有效组分提取物及其制法和用途 | |
| CN107320511A (zh) | 微波转化三七茎叶皂苷制备活性组分的方法及应用 | |
| CN106317155A (zh) | 一种还原性葫芦烷型三萜及其制法和用途 | |
| CN103833818B (zh) | 一种油茶皂苷化合物、其制备方法、应用及其制备的抗肿瘤药物 | |
| CN107011357A (zh) | 一种酸浆苦素b的制备方法及其在抗肺部肿瘤制药中的应用 | |
| CN106317157A (zh) | 一种多羟基双酮类葫芦烷型三萜及其制法和用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20181016 |