CN104770340B - 一种利用简易装置测定桔小实蝇胃毒毒力的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于害虫抗药性监测技术领域，公开了一种利用简易装置测定桔小实蝇胃毒毒力的方法。该方法包括步骤：在塑料杯的底部开6个1.5～3.5mm直径的小孔，并在杯壁用解剖针扎若干个小孔；将目标药剂用溶剂或饵剂稀释成不同浓度的工作液；将饥饿24h处理的桔小实蝇成虫吸入准备好的塑料杯中，用纱布封住塑料杯的开口，将塑料杯倒置；向6个移液器吸头中加入工作液然后尖头向下分别插入塑料杯底部的小孔中，在每个移液器吸头的上端开口处塞上棉球减少蒸发并在适宜的条件中饲养，再根据目标药剂的作用时间选择不同时间记录死虫数。整个过程操作简单，并能准确测出胃毒作用毒力。本发明也可以用于其他舐吸式口器昆虫胃毒毒力作用的测定。
Description
技术领域
本发明属于害虫抗药性监测技术领域，特别涉及一种利用简易装置测定桔小实蝇胃毒毒力的方法。
背景技术
桔小实蝇Bactrocera dorsalis Hendel是东南亚地区最具毁灭性的农业害虫之一，广泛分布于我国南方广东、福建、广西等地区，危害番石榴、杨桃、芒果、柑橘等250多种植物，造成巨大的经济损失。而在防治上国内目前主要手段还是以化学农药防治，同时配合使用性诱剂、食物诱剂、释放寄生蜂以及套袋、清园等手段进行防治。正是由于大量的使用化学农药来进行防治，导致了桔小实蝇的抗药性的产生。研究表明在广东、福建、海南、广西、云南等多个地区均监测到桔小实蝇不同程度抗药性的发生。同时随着食物诱剂结合杀虫剂的使用胃毒作用的农药抗性也随之产生。而当前进行抗药性监测的主要还是利用药膜法和点滴法来对桔小实蝇成虫的抗药性进行测定。这两种方法只针对药剂的触杀作用进行测定。而当前缺少有效准确的对舐吸式口器昆虫的胃毒毒力测定方法，因此探索并研究出能准确测定方法是十分必要的。
发明内容
为了解决上述现有技术中存在的不足之处，本发明的目的在于提供一种利用简易装置测定桔小实蝇胃毒毒力的方法。
本发明的目的通过下述技术方案来实现：
一种利用简易装置测定桔小实蝇胃毒毒力的方法，包括以下操作步骤：在 塑料杯的底部开6个1.5～3.5mm直径的小孔，并在杯壁用解剖针扎若干个小孔用于透气；根据目标药剂，选用合适的溶剂或饵剂将目标药剂稀释成不同浓度的工作液，以不加目标药剂的溶剂或饵剂作为空白对照液；将饥饿24h处理的桔小实蝇成虫吸入准备好的塑料杯中，并且用纱布封住塑料杯的开口，将塑料杯倒置，开口向下，置于台面；向6个移液器吸头中加入工作液，再将6个移液器吸头的尖头向下分别插入塑料杯底部的小孔中，然后在每个移液器吸头的上端开口处塞上棉球减少蒸发；然后在温度27±1℃、湿度50～70％、光照10D:14L的条件中饲养，再根据目标药剂的作用时间选择24h～72h不同时间记录死虫数。
所述塑料杯为一次塑料杯，其体积为200mL。
所述若干个小孔的数量为4～8个。
所述桔小实蝇成虫是羽化后3～5天的成虫。
所述纱布的面积大小为15cm×15cm。
所述移液器吸头的规格为200μL或20μL；当移液器吸头的规格为200μL，吸入20μL工作液，塑料杯的底部开孔直径为1.5～2.0mm；当移液器吸头的规格为20μL，吸入10μL工作液，塑料杯的底部开孔直径为2.0～3.5mm。
所述向移液器吸头中均加入工作液是通过另一个移液器吸头将工作液加入到插入塑料杯底部的小孔中的6个移液器吸头中。
所述目标药剂为敌百虫、多杀霉素、阿维菌素、甲维盐或拟除虫菊酯类杀虫剂；所述溶剂为水、质量分数10～20％的蜂蜜水、质量分数10～20％的糖水或果汁；所述饵剂为液体蛋白饵剂。
鉴于以上问题，本发明利用简易装置测定桔小实蝇胃毒毒力作用，能准确测定胃毒毒力作用，将具有重要有实际应用价值。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及有益效果：(1)装置制作简单、实用，整个操作过程简单，能最大限度避免触杀作用的影响；(2)此方法还能用于其它舐吸式口器昆虫的胃毒毒力测定。
附图说明
图1为本发明利用简易装置测定桔小实蝇胃毒毒力的方法图，其中1为棉球，2为移液器吸头，3为药剂，4为放置吸头的小孔，5为用于增加透气的小红，6为200ml一次性塑料杯，7为纱布。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
本发明的实施例：(1)装置制作：在200mL的一次性塑料杯底部均匀的开6个直径1.5mm～3.5mm的小孔用于放置移液器吸头，同时用解剖针在杯壁扎上4～8个小孔用于透气，裁剪出15cm×15cm大小的纱布用于封口；(2)毒力测定：①将桔小实蝇实验室敏感品系和敌百虫高抗品系羽化后3～5天的成虫进行24h饥饿处理，期间仅提供必要的水；②用配制10％的蜂蜜水，用其与敌百虫原药配制成测试药剂的母液，然后根据测定所需浓度稀释成5～6个工作浓度，以10％蜂蜜水为空白对照；③试验设置6个浓度梯度，1个空白对照，每个处理3个重复，每个重复7～12头虫；④将饥饿24h的成虫吸到制作好的杯中，并且用纱布封住塑料杯的开口，将塑料杯倒置，开口向下，置于台面；然后用移液器从上方向6个200μL的移液器吸头中加入50μL的药剂，再将6个移液器吸头的尖头向下分别插入塑料杯底部的小孔中，然后在每个移液器吸头的上端开口处塞上棉球减少蒸发；在温度27±1℃、湿度50～70％、光照10D:14L的条件中饲养；⑤根据农药的不同作用时间，选择24h或者48h后记录每个处理的死虫数；⑥利用SPSS等统计软件计算该虫的致死中浓度(LC50)，95％置信区间(95％CI)回归方程和相关系数(r)。
实例试验结果：
桔小实蝇敏感品系结果如表1所示，表明在处理24h后20～5mg.L-1的浓度下死亡率较高均在50％以上，而0.25～0.625mg.L-1的浓度下死亡率均低于50％， 对照组死亡率为0。表明致死中浓度在5～0.25mg.L-1的浓度之间。处理48h后10mg.L-1全部重复死亡率均达到100％，5mg.L-1只有一个重复的死亡率没有达到100％，而0.25mg.L-1也有一个重复死亡率提高到62.5％，而对照组死亡率依然为0。根据记录结果可知随着处理时间的延长，各处理的死亡率会随之提高。
表1桔小实蝇敏感品系处理24h、48h数据记录
桔小实蝇高抗品系结果如表2所示，表明在处理24h后800～400mg.L-1的浓度下死亡率均达到100％，200mg.L-1的死亡率则接近50％，而100～25mg.L-1的浓度下死亡率均低于50％，甚至为0％，对照组死亡率为0。表明致死中浓度在200～100mg.L-1的浓度之间。处理48h后200mg.L-1全部重复死亡率均接近或达到100％，100mg.L-1各重复的死亡率则均高于50％，而50mg.L-1也有一个重复死亡率提高到10％，而对照组死亡率依然为0。根据记录结果可知随着处理时 间的延长，各处理的死亡率会随之提高。
表2桔小实蝇高抗品系24h、48h数据记录
通过SPSS软件分析可得到的两品系毒力测定结果如表3所示，可知，处理24h敏感品系LC50为1.943mg.L-1，高抗品系LC50为183.419mg.L-1，处理48h敏感品系LC50为0.594mg.L-1，高抗品系LC50为99.607mg.L-1，表明随着处理时间的延长，对应品系的致死中浓度也会降低，48h的降低到接近24h的一半。结果显示处理24h或48h均符合毒力测定要求。
表3桔小实蝇敏感与高抗品系毒力测定结果
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (2)
1.一种利用简易装置测定桔小实蝇胃毒毒力的方法，其特征在于包括以下操作步骤：在体积为200mL的一次性塑料杯的底部开6个1.5～3.5mm直径的小孔，并在杯壁用解剖针扎4～8个小孔用于透气；根据目标药剂，选用合适的溶剂或饵剂将目标药剂稀释成不同浓度的工作液，以不加目标药剂的溶剂或饵剂作为空白对照液；将饥饿24h处理的桔小实蝇成虫吸入准备好的塑料杯中，并且用纱布封住塑料杯的开口，将塑料杯倒置，开口向下，置于台面；向6个移液器吸头中加入工作液，再将6个移液器吸头的尖头向下分别插入塑料杯底部的小孔中，然后在每个移液器吸头的上端开口处塞上棉球减少蒸发；然后在温度27±1℃、湿度50～70％、光照10D:14L的条件中饲养，再根据目标药剂的作用时间选择24h～72h不同时间记录死虫数；所述桔小实蝇成虫是羽化后3～5天的成虫；
所述目标药剂为敌百虫、多杀霉素、阿维菌素、甲维盐或拟除虫菊酯类杀虫剂；所述溶剂为水、质量分数10～20％的蜂蜜水、质量分数10～20％的糖水或果汁；所述饵剂为液体蛋白饵剂；
所述移液器吸头的规格为200μL或20μL；当移液器吸头的规格为200μL，吸入20μL工作液，塑料杯的底部开孔直径为1.5～2.0mm；当移液器吸头的规格为20μL，吸入10μL工作液，塑料杯的底部开孔直径为2.0～3.5mm；
所述向6个移液器吸头中加入工作液是通过另一个移液器吸头将工作液加入到插入塑料杯底部的小孔中的6个移液器吸头中。
2.根据权利要求1所述的一种利用简易装置测定桔小实蝇胃毒毒力的方法，其特征在于：所述纱布的面积大小为15cm×15cm。
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