CN104770303A - 一种有机添加物诱导多叶斑叶兰植株再生及高效繁殖方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于濒危野生植物中重要植物材料的快速繁殖方法，特别是涉及野生兰花的组织培养方法。本发明目的是提供一种有机添加物诱导多叶斑叶兰植株再生及高效繁殖方法，该方法包括材料选取与消毒、诱导培养、增殖培养、诱导生根和移栽。其中涉及芽诱导培养基、增殖培养基和生根培养基。本发明的培养基配方，增殖系数高、生根率高，植物生长需求时间短，栽培后适应性强，苗木健壮挺拔，长势良好，整齐一致，大大缩短了苗木培养过程，节约了大量成本。为多叶斑叶兰的保护，以及规模化、产业化生产推广应用提供技术支持。

Description

一种有机添加物诱导多叶斑叶兰植株再生及高效繁殖方法

技术领域

本发明属于濒危野生植物中重要植物材料的快速繁殖方法，特别是涉及野生兰花的组织培养方法。

背景技术

多叶斑叶兰（Goodyera foliosa (Lindley) Benth.）属于兰科斑叶兰属，是植物中被列入濒危野生动植物种国际贸易公约的物种之一，属国家二级保护植物，分布：中国的福建、广东、广西、四川、台湾、西藏、云南，以及不丹、印度、日本、朝鲜半岛、缅甸、尼泊尔、越南。为解决现有技术中自然繁衍能力、传播扩散能力不强，自然更新困难、优良种苗稀缺等问题。本发明采用组织培养技术快速繁殖大量优质种苗，有助于解决资源匮乏、缓解野生资源遭受严重破坏的压力，有效地保护有限的野生，为规模化、产业化提供技术支持。有关多叶斑叶兰植株再生及快速繁殖技术未见报道。

发明内容

本发明目的是提供一种有机添加物诱导多叶斑叶兰植株再生及高效繁殖方法，为规模化、产业化提供技术支持。

本发明的方法是以如下方式实现的：

一种有机添加物诱导多叶斑叶兰植株再生及高效繁殖方法，具体步骤如下：

1）材料选取与消毒：将采集的野生植株用流水洗净植物表面沙土，用手术剪剪去植株上叶片三分之二后置于饱和漂白粉上清液中浸泡10min，并用软毛刷刷洗，清洗干净后，自来水下冲滴15～30 min，双蒸水冲洗2～3次，置超净工作台内用75%酒精消毒30s，加入0.1%升汞处理8～13min，无菌水冲荡3～4遍，用消毒滤纸吸干表面水分后进行接种；

2） 诱导培养：将经消毒处理后的材料，切成带1-2个节点、长1-2cm的茎段平放接种于经高温、高压灭菌的芽诱导培养基中；培养条件：培养室温度为23±2℃，光照时间10h/d，光照强度1000～1500lx，培养时间15-20d；

3） 增殖培养：将经步骤2）诱导培养，所得到的生长良好的丛生芽切开并剪成长度为1.5-2.5 cm，接种在增殖培养基中，光照时间10h/d，光照强度1300～1800lx,，增殖培养时间20-30d；

4） 诱导生根：将经步骤3）增殖培养的带有叶2～3片，株高4～5cm的无根幼苗单株切下，转移到生根培养基中；光照时间11h/d，光照强度1500～2000lx，诱导生根时间20-25d；

5） 移栽：当诱导生根培养试管苗生长至高5-6 cm，根3～5条，叶5片，叶长2～3cm时，将试管苗放在自然光下炼苗4～6天，再打开瓶盖炼苗1-2天，然后用从培养瓶中取出，洗去附着在根系上的培养基，移入蛭石和腐殖土质量比为1:2的混合基质中，温度控制在15～35℃，湿度保持在75％～85％，避免阳光直射。

上述方法涉及的培养基配制如下：

（1）芽诱导培养基：MS+1.5 mg/L^-1  6-BA +0.5 mg/L^-1  KT+0.3mg/L^-1 NAA+ 1g·L^-1蛋白胨+20g/L 蔗糖+6.5g/L^-1  Agar+1.5 g·L^-1活性炭+30 g·L^-1 香蕉+50 g·L^-1土豆；

（2）增殖培养基：MS+3.0mg/L^-1  6-BA  +0.5 mg/L^-1  KT+ 0.5mg/L^-1 NAA +20/L 蔗糖+6.5g/L ^-1 Agar +1.5 g·L^-1活性炭+ 2g·L^-1蛋白胨+30 g·L^-1 香蕉+50 g·L^-1土豆；

（3）生根培养基：1/2MS+1.0 mg/L^-1  IBA+0.1 mg/L^-1  NAA+1 g·L^-1花宝2 号+20g/L 蔗糖+6.5g/L^-1  Agar +1.5 g·L^-1活性炭。

本发明的显著优点：

一：通过本发明方法可以最大限度地应用现有资源，通过生物技术手段在短时间内解决稀缺资源的应用需求；

二：有助于解决资源匮乏、缓解野生资源遭受严重破坏的压力，有效地保护有限的野生，为规模化、产业化提供技术支持。

三：有关有机添加物诱导多叶斑叶兰植株再生及高效繁殖方法未见报道。

四：有机添加物诱导多叶斑叶兰配方，增殖系数高、生根率高，植物生长需求时间短，栽培后适应性强，苗木健壮挺拔，长势良好，整齐一致，大大缩短了苗木培养过程，节约了大量成本。为多叶斑叶兰的保护，以及规模化、产业化生产推广应用提供技术支持。

五：总结出一套可供生产单位应用的多叶斑叶兰高效繁殖技术，通过应用该技术建立多叶斑叶兰生产基地。因此，多叶斑叶兰繁育的广泛应用可直接提高珍稀品种人工林地产量、质量和园林绿化水平，实现资源高效培育，具有十分广阔的产业化发展前景。本发明创新性强，技术含量高，公益性强，项目的实施对于促进珍稀兰花品种的研究、利用，有着良好前景和及其重要意义，为开发利用该种资源提供了理论依据和技术支持。

附图说明

图1为诱导培养。

图2为增殖培养。

图3为诱导生根。

图4为试管苗移栽。

图5为试管苗移栽。

具体实施方式

实施例1

一种诱导多叶斑叶兰植株再生及快速繁殖的方法，具体步骤如下：

1）材料选取与消毒：将采集的野生植株用流水冲洗干净，剪去植株上的叶片后置于饱和漂白粉上清液中浸泡10min，并用软毛刷刷洗，冲洗干净后，自来水下冲滴20min，再用双蒸水冲洗2次，置超净工作台内用75%酒精消毒30s，加入0.1%升汞处理10min，再用无菌水冲3遍，用消毒滤纸吸干表面水分后进行接种；

2） 诱导培养：将经消毒处理后的材料，切成带1个节点、长1cm的茎段平放接种于经高温、高压灭菌的芽诱导培养基中；培养条件：培养室温度为23℃，光照时间10h/d，光照强度1800lx，培养时间18d；

3） 增殖培养：将经步骤2）诱导培养，所得到的生长良好的丛生芽切开并剪成长度为2cm，接种在增殖培养基中，光照时间10h/d，光照强度1500lx,，增殖培养时间25d；

4） 诱导生根：将经步骤3）增殖培养的带有叶2片，株高4cm的无根幼苗单株切下，转移到生根培养基中；光照时间11h/d，光照强度1800lx，诱导生根时间23d；

5） 移栽：当诱导生根培养试管苗生长至高5cm，根4条，叶5片，叶长约2cm时，将试管苗放在自然光下炼苗5天，再打开瓶盖炼苗1天左右以增强试管苗对室外环境的适应能力；，然后用摄子从培养瓶中取出，洗去附着在根系上的培养基，移入蛭石和腐殖土质量比为1:2的混合基质中，保湿遮阴（温度控制在25℃，湿度应保持在80％左右，避免阳光直射，成活率可达96%以上。1-2周后植株适应能力逐渐增强，获得生长健壮的完整再生植株。

上述方法涉及的培养基配制如下：

（1）芽诱导培养基：MS+1.5 mg/L^-1  6-BA +0.5 mg/L^-1  KT+0.3mg/L^-1 NAA+ 1g·L^-1蛋白胨+20g/L 蔗糖+6.5g/L^-1  Agar+1.5 g·L^-1活性炭+30 g·L^-1 香蕉+50 g·L^-1土豆；

（2）增殖培养基：MS+3.0mg/L^-1  6-BA  +0.5 mg/L^-1  KT+ 0.5mg/L^-1 NAA +20/L 蔗糖+6.5g/L ^-1 Agar +1.5 g·L^-1活性炭+ 2g·L^-1蛋白胨+30 g·L^-1 香蕉+50 g·L^-1土豆；

（3）生根培养基：1/2MS+1.0 mg/L^-1  IBA+0.1 mg/L^-1  NAA+1 g·L^-1花宝2 号+20g/L 蔗糖+6.5g/L^-1  Agar +1.5 g·L^-1活性炭。

Claims (1)

1.一种有机添加物诱导多叶斑叶兰植株再生及高效繁殖方法，其特征在于：所述方法的具体步骤如下：

1）材料选取与消毒：将采集的野生植株用流水洗净植物表面沙土，用手术剪剪去植株上叶片三分之二后置于饱和漂白粉上清液中浸泡10min，并用软毛刷刷洗，清洗干净后，自来水下冲滴15～30 min，双蒸水冲洗2～3次，置超净工作台内用75%酒精消毒30s，加入0.1%升汞处理8～13min，无菌水冲荡3～4遍，用消毒滤纸吸干表面水分后进行接种；

2） 诱导培养：将经消毒处理后的材料，切成带1-2个节点、长1-2cm的茎段平放接种于经高温、高压灭菌的芽诱导培养基中；培养条件：培养室温度为23±2℃，光照时间10h/d，光照强度1000～1500lx，培养时间15-20d；

3） 增殖培养：将经步骤2）诱导培养，所得到的生长良好的丛生芽切开并剪成长度为1.5-2.5 cm，接种在增殖培养基中，光照时间10h/d，光照强度1300～1800lx,，增殖培养时间20-30d；

4） 诱导生根：将经步骤3）增殖培养的带有叶2～3片，株高4～5cm的无根幼苗单株切下，转移到生根培养基中；光照时间11h/d，光照强度1500～2000lx，诱导生根时间20-25d；

5） 移栽：当诱导生根培养试管苗生长至高5-6 cm，根3～5条，叶5片，叶长2～3cm时，将试管苗放在自然光下炼苗4～6天，再打开瓶盖炼苗1-2天，然后用从培养瓶中取出，洗去附着在根系上的培养基，移入蛭石和腐殖土质量比为1:2的混合基质中，温度控制在15～35℃，湿度保持在75％～85％，避免阳光直射；

上述方法涉及的培养基配制如下：

（1）芽诱导培养基：MS+1.5 mg/L^-1  6-BA +0.5 mg/L^-1  KT+0.3mg/L^-1 NAA+ 1g·L^-1蛋白胨+20g/L 蔗糖+6.5g/L^-1  Agar+1.5 g·L^-1活性炭+30 g·L^-1 香蕉+50 g·L^-1土豆；

（2）增殖培养基：MS+3.0mg/L^-1  6-BA  +0.5 mg/L^-1  KT+ 0.5mg/L^-1 NAA +20/L 蔗糖+6.5g/L ^-1 Agar +1.5 g·L^-1活性炭+ 2g·L^-1蛋白胨+30 g·L^-1 香蕉+50 g·L^-1土豆；

（3）生根培养基：1/2MS+1.0 mg/L^-1  IBA+0.1 mg/L^-1  NAA+1 g·L^-1花宝2 号+20g/L 蔗糖+6.5g/L^-1  Agar +1.5 g·L^-1活性炭。