CN104758503B - 一种促进骨折愈合的组合物及其水煎液的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种促进骨折愈合的组合物及其水煎液的制备方法，所述组合物由如下重量份的原料药组成：川芎0.8~1.3份，白芷0.8~1.3份，桔梗1.2~1.6份，桂枝1.2~1.6份，杜仲3~6份，牛膝1~4份，红花0.3~0.8份，归尾1.7~2.2份，没药0.8~1.3份，续断3~6份，骨碎补3~6份，千年健3~6份，白芍1.7~2.2份，白术1.7~2.2份，柴胡1.2~1.6份，细辛1~4份；经临床应用证实本发明组合物对骨折骨伤有确切的疗效，消肿止痛作用明显，并能加快骨痂生长，缩短骨折愈合时间。同时本发明水煎液制备方法步骤简便，生产成本低，便于工业化生产和应用。

Description

一种促进骨折愈合的组合物及其水煎液的制备方法

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种促进骨折愈合的组合物及其水煎液的制备方法。

背景技术

骨折是临床上的常见病多发病，需要很长时间才能治愈，骨折后导致的机体局部淤肿、疼痛、畸形、活动障碍等，严重影响了人们的日常生活。目前，治疗骨伤的主要方法是对骨折病人的患处固定，靠自然愈合。西医尚未出现治疗骨折的药物，在治疗方面常采用复位、打石膏、超关节固定、手术下钢钉、抗菌消炎、预防感染的方案。病人痛苦大，疗程长，治疗费用大。

现有的中医治疗方案采用复位、内服中药加外敷膏药的方法，其缺陷是疗效慢，效果差；外敷膏药中含有有毒物质铅，易造成皮肤过敏和人体伤害。骨折患者急需一种治疗效果好，能促进骨折快速愈合的药物。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种促进骨折愈合的组合物，所述组合物对骨折骨伤有确切的疗效，能加快骨痂生长，缩短骨折愈合时间。

本发明的另一个目的在于提供一种促进骨折愈合的组合物水煎液的制备方法。

本发明的上述目的通过如下技术方案予以实现：

一种促进骨折愈合的组合物，由如下重量份的原料药组成：川芎0.8～1.3份，白芷0.8～1.3份，桔梗1.2～1.6份，桂枝1.2～1.6份，杜仲3～6份，牛膝1～4份，红花0.3～0.8份，归尾1.7～2.2份，没药0.8～1.3份，续断3～6份，骨碎补3～6份，千年健3～6份，白芍1.7～2.2份，白术1.7～2.2份，柴胡1.2～1.6份，细辛1～4份。

作为一种优选方案，所述组合物由如下重量份的原料药组成：川芎1份，白芷1份，桔梗1.5份，桂枝1.5份，杜仲5份，牛膝2份，红花0.5份，归尾2份，没药1份，续断5份，骨碎补5份，千年健5份，白芍2份，白术2份，柴胡1.5份，细辛3份。

上述组合物的水煎液的制备方法，具体步骤如下：

S1. 称取上述组合物，加入10倍体积的水浸泡，煎煮40～60min后过滤；

S2. 将步骤S1得到的药渣再加入10倍体积的水，煎煮30～40min后过滤；

S3. 将步骤S1和S2的滤液合并、离心、滤液浓缩即得水煎液。

上述制备步骤中，两次煎煮至规定时间后，为了避免某些成分在水煎液冷却后析出而损失，作为一种优选方案，步骤S1或S2中所述过滤为趁热过滤。

作为一种优选方案，步骤S1或S2中所述煎煮为先采用大火加热煮沸，然后采用文火慢煎，使溶液保持微沸状态，既可以减少水分的挥发，防止溶液煎干、焦糊，又可以促进药材中有效成分的煎出。

作为一种优选方案，步骤S2中所述水为60～80℃的热水，目的在于避免热的药渣在加入冷水时，药材表面形成凝固膜，从而不利于第二次煎煮有效成分的充分煎出。

作为一种优选方案，所述滤液浓缩至滤液浓度为0.2g/ml（即每1ml浓缩液中含有0.2g药物的煎煮产物），从而利于控制后续用药体积及发挥较佳的药效。

本发明的另一个目的在于提供上述促进骨折愈合的组合物在制备促进成骨细胞碱性磷酸酶活性的药物中的应用。

本发明的另一个目的在于提供上述促进骨折愈合的组合物在制备促进成骨细胞矿化的药物中的应用。

本发明的另一个目的在于提供上述促进骨折愈合的组合物在制备促进成骨细胞成骨功能指标基因OPN或COL-Ⅰ表达的药物中的应用。

本发明的另一个目的在于提供上述促进骨折愈合的组合物在制备促进骨折对位良好或骨折对位差的骨折愈合的药物中的应用。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

本发明公开了一种促进骨折愈合的组合物及其水煎液的制备方法，经临床应用证实本发明组合物对骨折骨伤有确切的疗效，消肿止痛作用明显，并能加快骨痂生长，缩短骨折愈合时间。同时本发明水煎液制备方法步骤简便，生产成本低，便于工业化生产和应用。

附图说明

图1为病例1的X光影像结果图；

图2为病例2的X光影像结果图；

图3为病例3的X光影像结果图；

图4为病例4的X光影像结果图；

图5为病例5的X光影像结果图；

图6为本发明组合物对成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响结果图；

图7为本发明组合物对成骨细胞矿化功能的影响结果图；

图8为本发明组合物对成骨细胞成骨功能指标基因（OPN与COL-Ⅰ）表达的影响结果；

图9为本发明组合物对大鼠开放性骨折对位良好模型术后愈合情况结果图；

图10为本发明组合物对大鼠开放性骨折对位不良模型术后愈合情况结果图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的解释说明，但具体实施例并不对本发明作任何限定。除非特别说明，实施例中所涉及的试剂、方法均为本领域常用的试剂和方法。

实施例1 一种促进骨折愈合的组合物

配方为：川芎10g，白芷10g，桔梗15g，桂枝15g，杜仲50g，牛膝20g，红花5g，归尾20g，没药10g，续断50g，骨碎补50g，千年健50g，白芍20g，白术20g，柴胡15g，细辛30g。

实施例2 一种促进骨折愈合的组合物

配方为：川芎8g，白芷8g，桔梗12g，桂枝12g，杜仲30g，牛膝10g，红花3g，归尾17g，没药8g，续断30g，骨碎补30g，千年健30g，白芍17g，白术17g，柴胡12g，细辛10g。

实施例3 一种促进骨折愈合的组合物

配方为：川芎13g，白芷13g，桔梗16g，桂枝16g，杜仲60g，牛膝40g，红花8g，归尾22g，没药13g，续断60g，骨碎补60g，千年健60g，白芍22g，白术22g，柴胡16g，细辛40g。

实施例1～3中的促进骨折愈合的组合物水煎液的制备方法为：

S1. 在组合物药粉中加入10倍体积70℃的水浸泡1h，煎煮50min后趁热过滤；

S2. 将步骤S1得到的药渣再加入10倍体积70℃的水，煎煮35min后趁热过滤；

S3. 将步骤S1和S2的滤液合并、离心、滤液浓缩至浓度为0.2g/ml。

其中，步骤S1或S2中所述煎煮为先采用大火加热煮沸，然后采用文火慢煎。

为表面本发明的组合物水煎液的治疗效果，本发明对实施例1制备得到的促进骨折愈合的组合物水煎液进行了下列临床测试、中药血清药理学体外实验和动物实验。

实施例4 临床病例

病例1：李某某，女，4岁，X光影像表现为右肱骨内髁骨折，经服用促进骨折愈合的组合物水煎液2周后局部明显消肿、止痛；服药4周后复查，X光影像表现见折口周围有骨痂生长，骨折线模糊（X光影像结果如图1所示）。

病例2：梁某某，男，59岁，X光影像表现为右侧第7肋骨见骨折透亮线，经服用促进骨折愈合的组合物水煎液2周后胸部疼痛明显减少；服药5周后复查，X光影像表现见骨折处有骨痂生长（X光影像结果如图2所示）。

病例3：梁某某，男，70岁，X光影像表现为右肱骨骨折，经服用促进骨折愈合的组合物水煎液2周后局部明显消肿、止痛；服药8周后复查，X光影像表现见折口周围有骨痂生长（X光影像结果如图3所示）。

病例4：唐某某，女，72岁，X光影像表现为右三髁骨折，经服用促进骨折愈合的组合物水煎液2周后局部明显消肿、止痛；服药5周后复查，X光影像表现见折口周围有骨痂生长，骨折端对位对线良好，骨折线变模糊（X光影像结果如图4所示）。

病例5：谭某某，男，22岁，X光影像表现为左手第三掌故斜行骨折合并基底部骨折，经服用促进骨折愈合的组合物水煎液2周后局部明显消肿、止痛；服药3周后复查，X光影像表现见折口周围有骨痂生长，骨折端对位对线良好，骨折线变模糊（X光影像结果如图5所示）。

实施例5 中药血清药理学体外实验

采用血清药理学方法从细胞、分子水平初步评价了促进骨折愈合的组合物水煎液的药效：以不同浓度含药血清处理成骨细胞，观察其对成骨细胞碱性磷酸酶活性及矿化功能的影响；并通过检测药物血清对成骨功能指标基因表达的影响，初步探讨组方药效的分子作用机理。研究结果表明：促进骨折愈合的组合物水煎液能显著增加成骨细胞碱性磷酸酶活性及其矿化功能，同时能上调某些成骨功能相关基因的表达。

1、促进骨折愈合的组合物水煎液对成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响结果如图6所示，其中中药组为：取2月龄SD大鼠，按体重比例（0.135g/100g体重）以0.2g/ml中药灌胃5天，每天2次；对照组以生理盐水灌胃。然后将中药组与对照组的小鼠麻醉后心脏取血，分离血清后备用。血清灭活后分别以5%，10%及20%的比例加入到DMEM高糖培养基中，P₂代成骨细胞经不同含血清培养基培养48 h，采用碱性磷酸酶（AKP）测定试剂盒测定细胞分化情况。

从图6可以看出：各浓度中药血清组与相应空白血清组相比，均能显著促进细胞碱性磷酸酶活性，且随着血清浓度增加，促进作用明显增强。碱性磷酸酶是成骨细胞分化成熟的特异性标志，表明本发明组合物能显著促进成骨细胞分化。（图中*：P<0.05，** P<0.01，中药组与相同血清浓度空白组相比）

2、促进骨折愈合的组合物水煎液对成骨细胞矿化功能的影响结果如图7所示，其中空白组与中药组血清处理同上，阳性对照药物为伤科接骨片，按临床正常用量折算后按体重比例（0.135g/100g体重）灌胃5天，每天2次。所得血清灭活后按5%，10%及15%的比例加入DMEM高糖培养基中，P₂代成骨细胞经不同含血清培养基培养21天，采用茜素红染色测定细胞矿化情况。

从图7可以看出：各浓度中药血清组与相应空白血清组相比，均能明显促进成骨细胞钙化结节生成，而阳性对照组在含血清10%及15%时能增强成骨细胞矿化功能，但其促进作用明显低于同浓度的中药血清组。表明本发明组合物能显著促进成骨细胞矿化功能，且明显优于阳性对照药物。

3、促进骨折愈合的组合物水煎液对成骨细胞成骨功能指标基因（OPN与COL-Ⅰ）表达的影响结果如图8所示，其中阳性对照药物为伤科接骨片，血清处理同上，灭活后按10%的比例加入DMEM高糖培养基中，P₂代成骨细胞经不同含血清培养基培养48h，提取总RNA，荧光定量PT-PCR测定成骨细胞中OPN与COL-1基因及管家基因β-actin的表达水平。

从图8可以看出：与空白血清组相比，中药血清组能显著促进OPN与COL-Ⅰ基因的表达水平，且其促进作用明显优于阳性对照组；表明本发明组合物能上调成骨细胞中相关成骨功能基因的表达，从而促进成骨细胞的成骨功能。而阳性对照组能明显上调OPN基因的表达，但对COL-Ⅰ基因的表达没有显著作用。

实施例6 动物实验

1、大鼠给药量的计算

参考徐叔云教授主编的药理实验方法学一书的记载，采用标准动物的等效剂量折算系数法，可以折算出大鼠的给药量。其计算方法为：大鼠的剂量（mg/kg）=人的临床剂量（mg/kg）×70kg×0.018/0.2kg=6.3×人的临床剂量（mg/kg）。其中0.018为折算系数；人体重按70kg计算，大鼠体重按0.2kg计算。临床一日用量为：15g，最终折算出大鼠的计量为1.35g/kg，即0.27g/200g，所以200g大鼠服药量为0.27g。

2、实验分组：4周龄SD大鼠60只，行股骨开放性骨折手术后，随机分为3组，术后第二天灌胃给药，每天一次，给药时间为中午12点～13点，连续灌胃9周。灌胃量为：1.35ml/200g(具体按大鼠体重折算)。

本发明组合物对大鼠开放性骨折愈合的作用结果如图9、图10所示，其中阴性对照组为生理盐水，阳性对照组为伤科接骨片，中药组为促进骨折愈合的组合物水煎液；图9为行股骨开放性骨折手术后骨折对位良好的愈合效果图，图10为行股骨开放性骨折手术后骨折对位差的愈合效果图。

由图9、图10可以看出，在大鼠手术后骨折对位良好与骨折对位差的两种情况下，本发明组合物均能显著促进骨折愈合。

Claims (10)

1.一种促进骨折愈合的组合物，其特征在于，由如下重量份的原料药组成：川芎0.8～1.3份，白芷0.8～1.3份，桔梗1.2～1.6份，桂枝1.2～1.6份，杜仲3～6份，牛膝1～4份，红花0.3～0.8份，归尾1.7～2.2份，没药0.8～1.3份，续断3～6份，骨碎补3～6份，千年健3～6份，白芍1.7～2.2份，白术1.7～2.2份，柴胡1.2～1.6份，细辛1～4份。

2.根据权利要求1所述组合物，其特征在于，所述组合物由如下重量份的原料药组成：川芎1份，白芷1份，桔梗1.5份，桂枝1.5份，杜仲5份，牛膝2份，红花0.5份，归尾2份，没药1份，续断5份，骨碎补5份，千年健5份，白芍2份，白术2份，柴胡1.5份，细辛3份。

3.权利要求1所述组合物的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：

S1. 称取上述组合物，加入10倍体积的水浸泡，煎煮40～60min后过滤；

S2. 将步骤S1得到的药渣再加入10倍体积的水，煎煮30～40min后过滤；

S3. 将步骤S1和S2的滤液合并、离心、滤液浓缩即得水煎液。

4.根据权利要求3所述制备方法，其特征在于，步骤S1或S2中所述过滤为趁热过滤。

5.根据权利要求3所述制备方法，其特征在于，步骤S2中所述水为60～80℃的热水。

6.根据权利要求3所述制备方法，其特征在于，步骤S1或S2中所述煎煮为先采用大火加热煮沸，然后采用文火慢煎。

7.权利要求1或2所述的促进骨折愈合的组合物在制备促进成骨细胞碱性磷酸酶活性的药物中的应用。

8.权利要求1或2所述的促进骨折愈合的组合物在制备促进成骨细胞矿化的药物中的应用。

9.权利要求1或2所述的促进骨折愈合的组合物在制备促进成骨细胞成骨功能指标基因OPN或COL-Ⅰ表达的药物中的应用。

10.权利要求1或2所述的促进骨折愈合的组合物在制备促进骨折对位良好或骨折对位差的骨折愈合的药物中的应用。