CN104744723B - 壳聚糖医用材料及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明首先以高分子量的壳聚糖作为主要材料，制得一种止血材料。多个出血模型显示本发明获得的止血材料具有非常好的止血性能。本发明的一大创新之处在于，将凝血促进物质引入到止血材料中，起到了更好的止血作用。新型壳聚糖止血材料安全有效，制作简单，生物相容性好，同时又具有保护创面，快速止血，促伤口愈合等生物学功效，是一种非常理想的外用生物创伤敷料，符合临床医学的要求和发展趋势。

Description

壳聚糖医用材料及其制备方法和用途

技术领域

本发明属于生物医用材料领域，具体涉及一种壳聚糖医用材料及其制备方法和用途。

背景技术

止血是紧急医疗救治的一个重要步骤，病人手术治疗、日常生活中出现突发性创伤时，均需进行快速止血。在恶劣的战争环境和复杂突发事件中的战、创伤急救治疗时，实现快速有效的止血尤为重要。目前，根据临床需要，已应用了多种局部止血材料，这些止血材料主要包括胶原蛋白及明胶类，纤维蛋白胶类，海藻酸盐类等。

甲壳素是一种分布极广，易于提取的高分子聚合物，存在于虾、蟹等甲壳动物的甲壳以及细菌、昆虫藻类和高等植物的细胞壁中。壳聚糖是甲壳素脱乙酰度在60％以上的产物，是一种线性、半晶体状多糖。由于壳聚糖本身的止血作用有限，对于广泛出血创面的止血效果不是很理想。尤其是目前已有的壳聚糖制备的材料由于结构上的缺陷，比如海绵材料孔隙大小不在100-200微米这一范围内，制备的止血材料不是十分理想。

针对单纯壳聚糖止血材料存在韧性差和止血效果不显著的问题，我们通过将其与其他材料复合，从而改善材料的机械性能，缩短止血时间。因此，我们把活性物质引入到新型壳聚糖止血海绵的中，以改善材料的结构，进一步提升壳聚糖止血海绵的止血作用。

本发明的目的是研制出一种制作工艺相对简单的壳聚糖止血材料，在提高止血性能，保证生物安全性的同时，降低生产成本，避免制备过程中消耗和浪费大量的资源。

发明内容

本发明首先以高分子量的壳聚糖作为主要材料，用一定比例的戊二醛作 为交联剂，反应获得壳聚糖凝胶。在壳聚糖凝胶中加入一定量的活性物质，以改善最终产品的结构、增加其止血性能，再采用冷冻干燥技术，制得一种止血材料。理化性质测试和表征数据显示本发明提供的壳聚糖止血材料具有独特的结构和性能。

兔耳缘静脉、肝脏创面、股动脉等多个出血模型显示本发明获得的止血材料具有非常好的止血性能。

本发明的一大创新之处在于，本发明提供的壳聚糖止血材料所具有的独特结构和性能使得本发明材料的止血性能不可比拟。而使得壳聚糖止血材料所具有的独特结构和性能的原因是在材料中复合了谷氨酸钠和多聚磷酸钠。

新型壳聚糖止血材料安全有效，制作简单，生物相容性好，同时又具有保护创面，快速止血，促伤口愈合等生物学功效，是一种非常理想的外用生物创伤敷料，符合临床医学的要求和发展趋势。

附图说明

图1实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵扫描电镜图

图2加入不同材料之后新鲜全血凝固时间

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步描述：

实施例1新型壳聚糖止血海绵的制备

材料 壳聚糖(粉末状，分子量20万，脱乙酰度85％),戊二醛，氢氧化钠，冰醋酸，谷氨酸钠(MSG)，多聚磷酸钠(polyP)

仪器 恒温摇床，磁力搅拌器，真空冷冻干燥机，低温冰箱，3.5K透析袋，硅胶模具

实验步骤

1)溶解：100mg壳聚糖粉末溶于10mL 1％的冰醋酸水溶液中，混匀后，静置8h待其完全脱泡。

2)中和：向静置之后的溶液加入0.1M的NaOH溶液，使得PH值为5.6，充分震荡混匀后，静置8h。

3)交联：加入交联剂戊二醛溶液(质量为壳聚糖质量的3％，换算成50％的戊二醛溶液体积为5.4μL)，充分震荡混匀后，放入恒温摇床12h。

4)透析：将交联后形成的壳聚糖胶状物放入3.5K的透析袋中，放入装满去离子水的大烧杯中，在磁力搅拌器上透析至少48h，每隔4小时换一次水。彻底去除残余的戊二醛和冰醋酸等杂质。

5)添加化合物：取出透析后的胶状物，加入约11.17mg的谷氨酸钠(占最终产品总质量的10％)，以及约0.56mg的多聚磷酸钠(占最终产品总质量的0.5％)，充分搅拌，震荡混匀后，平均等分成2份，倒入正方体的硅胶模具中。

6)冰冻：放入-20度冰箱冰冻24h。

7)冻干：移到真空冻干机上干燥24h，即得到最终的新型壳聚糖止血海绵成品。

结果与结论

经过上述步骤，我们得到了质地柔软，结构均一的新型壳聚糖止血海绵，颜色呈淡黄色，疏松多孔，具有一定的韧性。

实施例2普通壳聚糖复合材料(不含谷氨酸钠和多聚磷酸钠)的制备

材料 壳聚糖(粉末状，分子量20万，脱乙酰度85％),戊二醛，氢氧化钠，冰醋酸

仪器 恒温摇床，磁力搅拌器，真空冷冻干燥机，低温冰箱，3.5K透析袋，硅胶模具

实验步骤

1)溶解：100mg壳聚糖粉末溶于10mL 1％的冰醋酸水溶液中，混匀后，静置8h待其完全脱泡。

2)中和：向静置之后的溶液加入0.1M的NaOH溶液，使得PH值为5.6，充分震荡混匀后，静置8h。

3)交联：加入交联剂戊二醛溶液(质量为壳聚糖质量的3％，换算成50％的戊二醛溶液体积为5.4μL)，充分震荡混匀后，放入恒温摇床12h。

4)透析：将交联后形成的壳聚糖胶状物放入3.5K的透析袋中，放入装满去离子水的大烧杯中，在磁力搅拌器上透析至少48h，每隔4小时换一次水。彻底去除残余的戊二醛和冰醋酸等杂质，倒入正方体的硅胶模具中。

5)冰冻：放入-20度冰箱冰冻24h。

6)冻干：移到真空冻干机上干燥24h，即得到最终的普通壳聚糖材料成品。

实施例3实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵理化性质实验

1.结构观察

1.1 材料

实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵

1.2 仪器

扫描电子显微镜

1.3 方法

将干燥的实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵放在镀膜室内进行离子溅射镀膜，然后观察，在不同放大倍数下拍照并保存。

1.4 结果与结论

如图1所示，经过扫描电镜的观察，可见海绵为网状结构，表面呈现开放性的孔洞，孔径大小在100-200μm，在空间上分布均匀。临床止血证明，止血材料合适的孔径对于止血的影响很大。如果海绵的孔径太大，则机械强度差，不能抗击血液的冲击，容易形成二次出血。如果孔径太小，则影响吸收创面的初次渗血。所以，100-200μm孔径大小的材料是最佳的材料。但是壳聚糖材料并不是那么容易控制孔径，也没有规律可循。目前壳聚糖止血材料在这方面往往存在不足。因此，本发明能够将孔径控制在100-200μm是具有非常强的创造性的，而使得实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵具有这一独特性能的原因是在材料中复合了谷氨酸钠和多聚磷酸钠。

2 孔隙率测定

2.1 材料

实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵(矩形)

实施例2制备的普通壳聚糖材料(矩形)

无水乙醇

2.2 仪器

电子分析天平

游标卡尺

2.3 方法

取干燥的实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵准确称重W₁，然后用游标卡尺测量海绵的长、宽和厚度，计算得到海绵的体积V，将海绵完全浸没在装满无水乙醇的烧杯中，浸泡30min后，取出海绵后，将海绵准确称重W₂，利用公式计算孔隙率：P＝(W₂—W₁)/(V*ρ_乙醇)，测三个样品，取平均值。(见表1)

2.4 结果与结论

经过测量计算，实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵的平均孔隙率为75.09±2.27％，而实施例2制备的普通复合材料的孔隙率为56.77±5.49％。高孔隙率的材料可以提供足够的空间来吸收创面最初的渗血，并且具有较高的表面积粘附在创面上。所以，足够高的孔隙率对海绵类止血材料来说非常重要。目前壳聚糖止血材料在孔隙率方面往往存在不足。实施例1提供的技术方案能够非常完美的满足这一要求，而使得实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵具有这一独特性能的原因是在材料中复合了谷氨酸钠和多聚磷酸钠。

3.吸水率测定

3.1 材料

实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵(矩形)

实施例2制备的普通壳聚糖材料(矩形)

去离子水

3.2 仪器

电子分析天平

3.3 方法

取干燥的实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵准确称重W₁，完全浸入去离子水中30min，充分吸水后，用镊子轻轻夹住一角，提出水面，停留30s后，再次称重W₂，根据计算公式吸水率＝(W₂—W₁)/W₁，求得吸水率。测量5个样品，取平均值(见表2)。

3.4 结果与结论

实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵的平均吸水率为3811±549％，实施例2制备的普通壳聚糖材料的平均吸水率为2133±357％。

实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵具有很高的吸水率，为获得较好的止血效果奠定了基础，在创面的止血过程中，迅速地吸收最初的渗血，是非常重要的。因此良好的吸水率从另一个方面反应了海绵的预期止血效果，是优质止 血海绵性能的一个重要指标。目前壳聚糖止血材料在吸水率方面往往存在不足。实施例1提供的技术方案能够非常完美的满足这一要求，而使得实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵具有这一独特性能的原因是在材料中复合了谷氨酸钠和多聚磷酸钠。

4.生理盐水耐受试验

4.1 材料

实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵

实施例2制备的普通壳聚糖材料(矩形)

生理盐水

4.2 仪器

一次性培养皿

恒温培养箱

超净工作台

4.3 方法

在超净台里无菌操作将实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵放入装有无菌生理盐水的一次性培养皿中，盖好皿盖密封好后，放入培养箱中，恒温37℃。分别在一周，两周，四周，八周时观察海绵是否破损分解。

4.4 结果与结论

实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵在8周的时间内均能维持完整的形态，不破损，不溶解，不分散。实验结果说明其具有良好的生理盐水耐受性。而实施例2制备的普通壳聚糖材料在第四周时开始出现破损。

止血海绵的生理盐水耐受性从另外一个方面说明了海绵的质量，对于某些难度比较大的止血，因为表面敷压止血材料以后，血管内的压力时刻存在，会 对创面造成一定的冲击，如果材料容易破损的话，很可能会冲破材料，造成二次出血。目前壳聚糖止血材料在这方面往往存在不足。实施例1提供的技术方案能够非常完美的满足这一要求，而使得实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵具有这一独特性能的原因是在材料中复合了谷氨酸钠和多聚磷酸钠。

5.拉伸强度和断裂伸长率的测试

材料

实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵

实施例2制备的普通壳聚糖材料(矩形)

仪器

Instron万能材料试验机

方法

将材料裁剪成相同的规格(长：25mm，宽：2.5mm，厚：2mm)，放在万能试验机上进行测试，并记录拉伸强度和断裂伸长率的数据，测试5个样品，并进行统计学分析。

表1止血海绵的拉伸强度和断裂伸长率

结果与结论

通过表1结果可知，实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵其拉伸强度和断裂伸长率都符合止血的高要求。

机械强度大的止血材料具有良好的韧性，不易破损，能较好地抵挡住创面出血对止血材料的冲击，有效地起到止血的作用，是评价止血海绵性能的重要 指标

之一。目前壳聚糖止血材料在这方面往往存在不足。实施例1提供的技术方案能够非常完美的满足这一要求，而使得实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵具有这一独特性能的原因是在材料中复合了谷氨酸钠和多聚磷酸钠。

实施例4实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵的止血效果研究

1.止血海绵对兔耳部创面的止血效果试验

1.1 材料

健康成年新西兰大白兔16只(雄性，体重2.5kg)

实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵

壳聚糖基可吸收止血非织布若干块(商品名：术益纱)

医用纱布若干块

陆眠宁和氟哌利多注射剂

一次性注射器

1.2 仪器

不锈钢兔解剖台

各种手术器械

高压灭菌锅

1.3 方法

首先将新西兰大白兔固定在解剖台上，缓慢肌肉注射1.5ml陆眠宁和氟哌利多的混合液，待兔子麻醉后准备实验。在兔子耳缘静脉处酒精消毒，然后用手术刀作一约0.5cm的切口，切断耳缘静脉。血液涌出时，先用灭过菌的医用纱布吸去，然后将1cm×1cm×0.2cm大小的各种止血材料敷压于切口，敷压时以灭过菌的医用纱布为辅助，按压止血，每隔约10s观察一次切口，直至完全止血，记录止血时间。每种材料分别做8个样。实验数据见表2，结果采用软件SPSS进行统 计学分析，组间差异采用单因素方差分析，P<0.05具有统计学意义，P<0.01具有显著统计学意义。

表2 各种止血材料对兔耳创面的止血时间

1.4 结果与结论

实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵和术益纱相比较，无统计学差异(P>0.05)。实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵和医用纱布相比较，存在显著的统计学差异(P<0.01)。

实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵与市面上的一种已经用于临床的止血非织布(术益纱)相比，在兔子耳缘静脉止血试验中，都具有极好的止血效果。而且，我们自制的止血海绵，在只有部分血液渗入海绵的情况下即完全止血，而术益纱则是血液完全渗透材料后，才能完全止血。因此如果出血量大，在同样起到止血作用的情况下，实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵需要的量将远远小于术益纱，更加节约材料，而使得实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵具有这一独特性能的原因是在材料中复合了谷氨酸钠和多聚磷酸钠。

2.止血海绵对兔肝脏创面的止血效果试验

2.1 材料

健康成年新西兰大白兔16只(雄性，体重2.5kg)

实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵

壳聚糖基可吸收止血非织布若干块(商品名：术益纱)

陆眠宁和氟哌利多注射剂

一次性注射器

2.2 仪器

不锈钢兔解剖台

各种手术器械

高压灭菌锅

2.3 方法

首先将新西兰大白兔固定在解剖台上，缓慢肌肉注射1.5ml陆眠宁和氟哌利多的混合液，待兔子麻醉后准备实验。逐层开腹，暴露肝脏，用手术刀在肝叶上做1×1cm的十字切口，待创面出现渗血后，先用无菌纱布吸取，然后将准备好的1.5cm×1.5cm×0.2cm大小的各种止血材料敷压于伤口，敷压时以灭过菌的医用纱布为辅助，按压止血，每隔约15s观察一次伤口，直至完全止血，记录止血时间。每种材料分别做8个样。实验数据见表3，结果采用软件SPSS进行统计学分析，组间差异采用单因素方差分析，P<0.05具有统计学意义，P<0.01具有显著统计学意义。

表3 各种止血材料对兔肝脏创面的止血时间

2.4 结果与结论

实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵和术益纱相比较，无统计学差异(P>0.05)。实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵与医用纱布相比较，存在显著的统计学差异(P<0.01)。

肝脏是哺乳动物所有脏器中血管最为丰富的器官。在创伤或者肝脏手术时，创面的广泛渗血，因为血管多而隐蔽，止血措施的选择成为我们的主要难题，因此选择动物肝脏创面进行止血效果对比具有较强的说服力。目前的壳聚糖止血在肝脏创面止血方面效果不理想，止血材料即使在其他出血状况时能够止血，但是在肝脏创面止血方面不一定有效，因为肝脏创面止血对材料结构和性能的要求非常高。

实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵与市面上的术益纱止血材料相比，都能在肝脏创面上止血，但是实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵能够与创面粘附紧密，对创口形成封闭作用，创面立即止血，出血量较少，而使得实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵具有这一独特性能的原因是在材料中复合了谷氨酸钠和多聚磷酸钠。

3.止血海绵对兔股动脉的止血效果试验

3.1 材料

健康成年新西兰大白兔9只(雄性，体重2.5kg)

实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵若干块

壳聚糖基可吸收止血非织布若干块(商品名：术益纱)

医用纱布若干块

陆眠宁和氟哌利多注射剂

一次性注射器

3.2 仪器

不锈钢兔解剖台

各种手术器械

高压灭菌锅

3.3 方法

首先将新西兰大白兔固定在解剖台上，缓慢肌肉注射1.5ml陆眠宁和氟哌利多的混合液，待兔子麻醉后准备实验。在大腿根部股动脉搏动最明显处，逐层解剖，钝性分离出股动脉，用手术刀将股动脉切断，血液涌出，立即用无菌纱布吸取按压，然后将准备好的3cm×3cm×0.2cm大小的各种止血材料若干块敷压于股动脉切断处，敷压时以灭过菌的医用纱布为辅助，按压止血，每隔约30s观察一次切口，直至完全止血，记录止血时间。每种材料分别做6个样。实验数据见表4，结果采用软件SPSS进行统计学分析，P<0.05具有统计学意义，P<0.01具有显著统计学意义。

表4各种止血材料对兔股动脉的止血时间

3.4 结果与结论

统计学分析显示，实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵和术益纱相比较，无统计学差异(P>0.05)。而医用纱布在股动脉大出血中，没有止血的作用，兔子最后因失血过多而死亡。

与耳缘静脉的小出血和肝脏的渗血不同，股动脉离断后的大出血对止血材料的要求更高，需要材料能有效抵挡住血液的冲击，并能快速有效地止血，防止因为失血过多而死亡。而通过实验结果，我们发现，实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵和术益纱都能在较短时间内止住大动脉出血，兔子的存活率是100％。虽然在止血时间上，两者无统计学差异。不过面对大出血，实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵只需要2-3块就能完成止血，而术益纱则需要相同大小的4-5块 才能完成止血。因此，实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵在大出血的过程中，更能抵挡住血液的冲击，有效吸收更多的血液，从而达到快速止血的目的，而使得实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵具有这一独特性能的原因是在材料中复合了谷氨酸钠和多聚磷酸钠。

4.新鲜全血凝固时间测定

4.1 材料

实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵

术益纱

5ml圆底离心管

液氮

4.2 仪器

研钵

电热鼓风干燥箱

4.3 方法

将材料放入研钵中，倒入液氮，将海绵研磨成粉末状，立即放入烘箱中，干燥20min后，取出存于离心管中备用。在装有10mg粉末的离心管中，加入2ml刚采集的人新鲜全血(来自鼓楼医院肝胆外科凝血功能正常的患者)，立即混匀，每隔大约10s倾斜一次离心管，发现血液凝固立即记录时间。分别做实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵组，术益纱组，以及空白对照组。每组重复5次。并对实验数据做统计学分析。

4.4 结果与结论

使用新鲜血液与止血材料混合，比较其凝血时间是直观的体现止血材料效果的另外一种方式。如图2所示，实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵组和术益纱组与空白对照组相比，均存在显著统计学差异(P<0.01)，凝血时间明显缩短。但是 这两组之间相互比较，并无统计学差异(P>0.05)，都表现出了优良的体外凝血效果。

实施例5实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵的皮肤创伤促愈合作用

1.材料

实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵

医用纱布、绷带

健康成年新西兰大白兔3只(雄性，体重2.5kg)

陆眠宁、氟哌利多、陆醒宁注射剂

一次性注射器

2.仪器

不锈钢兔解剖台

各种手术器械

高压灭菌锅

3.方法

首先将新西兰大白兔固定在解剖台上，缓慢肌肉注射1.5ml陆眠宁和氟哌利多的混合液，待兔子麻醉后准备实验。将兔子背部两侧脱毛，脱毛面积为6×6cm²，右侧作为实验组(实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵覆盖)，左侧作为对照组(医用纱布覆盖)。先用酒精消毒，然后用无菌刀片在背部左侧和右侧脱毛皮肤分别划破，伤口长约2cm，左右侧伤口切开的深度和长度尽量相同，以有少量血渗出为度。将实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵和医用纱布分别贴于背部右侧和左侧伤口处，用胶布固定后，并用绷带包扎。给兔子肌肉注射0.5ml的陆醒宁，使其苏醒，放回笼中。分别于术后第1天，第5天，第10天解开绷带，取下敷料，观察并比较左右侧伤口的流血、红肿、渗血、结痂与脱痂状态，并拍照记录 创口的愈合情况。

4.结果与结论

术后第一天，左右两侧的伤口均未见再出血和渗出液，愈合情况无差异。术后第5天，右侧的实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵实验组伤口已经完全结痂，而左侧的纱布对照组，则未全部结痂。术后第10天，右侧的实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵实验组已经完全脱痂，伤口已基本愈合，未见瘢痕，而左侧的纱布对照组则还处在脱痂阶段，有部分脱痂或者未脱痂，与实验组相比，愈合速度较慢。

壳聚糖具有促进伤口愈合的作用，它们可以在伤口处通过促进肉芽组织及上皮的生成，减少伤口的收缩，从而起到减小疤痕的作用。本实验中，我们用兔背部皮肤切割伤作为伤口模型，以普通纱布作为对照，通过宏观观察愈合情况，发现实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵具有一定的促进创口愈合作用，加速了皮肤修复的速度，并且抑制了瘢痕的增生，而使得实施例1制备的新型壳聚糖止血海绵具有这一独特性能的原因是在材料中复合了谷氨酸钠和多聚磷酸钠。

Claims (6)

1.一种壳聚糖止血海绵，其特征为 ：所述壳聚糖止血海绵的孔径大小在 100-200μm之间，孔隙率大于 70%，吸水率大于 3000%，生理盐水耐受时间为 8 周以上，拉伸强度在0.1 MPa 以上，断裂伸长率在 20% 以上；

所述的壳聚糖止血海绵的制备方法，其特征为步骤如下 ：

溶解：100mg 壳聚糖粉末溶于 10mL 1% 的冰醋酸水溶液中，混匀后，静置 8h 待其完全脱泡；

中和：向静置之后的溶液加入 0.1M 的 NaOH 溶液，使得 pH 值为 5.6，充分震荡混匀后，静置8h ；

交联：加入交联剂戊二醛溶液，戊二醛的质量为壳聚糖质量的 3%，换算成 50% 的戊二醛溶液体积为 5.4μL，充分震荡混匀后，放入恒温摇床 12h ；

透析：将交联后形成的壳聚糖胶状物放入 3.5K 的透析袋中，放入装满去离子水的大烧杯中，在磁力搅拌器上透析至少 48h，每隔 4 小时换一次水，彻底去除残余的戊二醛和冰醋酸杂质 ；

添加化合物 ：取出透析后的胶状物，加入11.17mg的谷氨酸钠，以及0.56mg的多聚磷酸钠，充分搅拌，震荡混匀后，倒入正方体的硅胶模具中 ；

冰冻：放入-20 度冰箱冰冻 24h ；

冻干：移到真空冻干机上干燥 24h，即得到最终的一种壳聚糖止血海绵成品。

2.权利要求1所述的一种壳聚糖止血海绵在制备止血材料中的应用。

3.根据权利要求2所述的一种壳聚糖止血海绵在制备止血材料中的应用，其特征为所述的止血为耳缘静脉止血。

4.根据权利要求2所述的一种壳聚糖止血海绵在制备止血材料中的应用，其特征为所述的止血为肝脏创面的止血。

5.根据权利要求2所述的一种壳聚糖止血海绵在制备止血材料中的应用，其特征为所述的止血为股动脉的止血。

6.权利要求1所述的一种壳聚糖止血海绵在制备促进创伤愈合材料中的应用。