CN104736519B

CN104736519B - 吲哚啉类

Info

Publication number: CN104736519B
Application number: CN201380052826.6A
Authority: CN
Inventors: J·H·霍格; S·雷米斯泽维斯基; W·云
Original assignee: F Hoffmann La Roche AG
Current assignee: F Hoffmann La Roche AG
Priority date: 2012-10-11
Filing date: 2013-10-01
Publication date: 2018-12-04
Anticipated expiration: 2033-10-01
Also published as: RU2015113959A; MX2015004465A; EP2906535B1; JP2015534567A; US20150246882A1; HK1211025A1; US9403768B2; CN104736519A; EP2906535A1; KR20150065718A; CA2884708A1; WO2014056755A1; JP6333825B2

Abstract

本发明公开了式I化合物或其药学上可接受的盐，其中W，Y，Z，R¹，R²，R³和R⁴如本申请中所述，以及在癌症治疗中使用所述化合物的方法。

Description

吲哚啉类

发明领域

本发明涉及用作结合凋亡蛋白抑制剂(IAP)的SMAC蛋白的抑制剂，和/或结合IAP的活化胱天蛋白酶(caspase)的抑制剂的吲哚啉类。这些分子有用于改善、治疗或控制癌症，特别是实体瘤。

这些化合物结合IAP蛋白(包括XIAP和cIAP)的BIR2和/或BIR3域，导致活化或再活化胱天蛋白酶联级系统，并以此用于治疗增殖性疾病，包括癌症。

发明背景

癌症是引起肿瘤局部扩张以及潜在的远端转移的非受控细胞生长的疾病。癌症细胞赖以生长的一种机制是通过避免凋亡或程序性细胞死亡。已将凋亡途径改变与癌细胞抵抗标准疗法，例如化学疗法或辐射，以及癌症的出现和进展相关联。参见，例如，E.Dean等人.，“X-linked inhibitor of apoptosis protein as a therapeutic target,”ExpertOpin.Ther.Targets(2007)11(11):1459-1471

凋亡细胞死亡的两种基本途径是内源性途径和外源性途径。内源性凋亡途径的启动可通过各种机制，包括细胞压力和药物诱导的DNA损伤。外源性途径的启动可通过由趋化因子活化死亡受体。任一途径的启动导致称作胱天蛋白酶的一类蛋白酶家族的活化。一旦活化，胱天蛋白酶可用于裂开各种底物，产生导致效应器胱天蛋白酶3和7活化以及最终的细胞死亡的联级事件。IAP蛋白家族可结合并抑制胱天蛋白酶的活性，从而抑制凋亡。参见，例如Dean，supra，1460。

IAP可含有称作杆状病毒IAP重复(BIR)域的至多三个同源结构域副本，BIR1、BIR2和BIR3。原型IAP，cIAP和XIAP的BIR3域，可结合并抑制活化胱天蛋白酶9。相比之下，BIR2域结合并抑制胱天蛋白酶3和7。促凋亡蛋白Smac(还称作DIABLO)可阻断IAP的BIR2和BIR3域与活化胱天蛋白酶竞争，导致活化胱天蛋白酶从所述IAP释放并完成凋亡程序。参见，例如S.Wang，“Design of Small-Molecule Smac Mimetics as IAP Antagonists,”CurrentTopics in Microbiology and Immunology 348，DOI10.1007/82_2010_111，pp.89-113。

已报道肽和小分子结合XIAP和cIAP的BIR3域，模仿Smac蛋白的作用并释放活化胱天蛋白酶。参见，例如Dean，supra；以及M.Gyrd-Hanse等人.，“IAPs:From caspaseinhibitors to modulators of NF-κB，inflammation and cancer,”Nature Review/Cancer，2010年8月，Vol 10:561-574。

发明概述

本发明的一方面是式I化合物

或其药学上可接受的盐，其中W，Y，Z，R¹，R²，R³和R⁴如本申请中所述。

本发明还涉及药物组合物，其包含本发明的一或多种化合物，或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体或赋形剂。

本发明进一步涉及改善、控制或治疗癌症的方法，所述癌症特别包括实体瘤，例如哺乳动物(特别是人)中的肺、胰腺、结肠、乳腺、骨和前列腺癌，其包括给予所述哺乳动物治疗有效量的根据本发明的化合物或其药学上可接受的盐。

发明详述

定义

除非另有定义，本发明使用的所有技术和科学术语具有如本发明所属领域中普通技术人员通常理解的相同含义。

如本发明使用的，以下术语应具有以下定义。

“烷基”是指1-12个碳原子的单价直链或支链饱和烃。在特别实施方式中，烷基具有1-6个碳原子，且在更特别实施方式中具有1-4个碳原子。如本发明使用的，“低级烷基”表示具有1-6个碳原子的烷基(“C_1-6-烷基”)。烷基的实例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基(还称作正丁基)、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基等。烷基可任选富氘，例如-CD₃、-CD₂CD₃等。

“芳基”是指包含6-19个碳环原子的单价芳香碳环单-、双-或三环环系。芳基部分的实例包括但不限于，苯基、萘基(naphthyl)(还称作“naphthalenyl”)、甲苯基、甲苄基、吡啶基、喹啉基、嘧啶基、咪唑基、噻唑基、蒽基、四唑基和芴基。

“苯甲酰基”是指–C(＝O)-苯基。

“苄基”是指–CH₂-苯基。

“卤素”或“卤”是指选自F、Cl、Br或I的原子。在特别实施方式中，卤素是指F和Cl。

“IC₅₀”是指特定化合物抑制50％的特定测量活性所需的浓度。IC₅₀的测量尤其可如实施例13中后续所述。

“药学上可接受的”，例如药学上可接受的载体、赋形剂等，是指药理学上可接受的并对于给药特定化合物的受试者实质上无毒的。

“药学上可接受的盐”是指保持本发明化合物的生物有效性和特性并形成自适当的无毒有机或无机酸或者有机或无机碱的常规酸加成盐或碱加成盐。样本酸加成盐包括衍生自无机酸例如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸和硝酸的那些，以及衍生自有机酸例如对甲苯磺酸、水杨酸、甲基磺酸、草酸、琥珀酸、柠檬酸、苹果酸、乳酸、富马酸、三氟乙酸等的那些。样本碱加成盐包括衍生自氢氧化铵、钾、钠和季铵，例如，氢氧化四甲铵的那些。将药物化合物(即药物)化学修饰为盐是药物化学家众所周知的为获得改善的化合物物理和化学稳定性、吸湿性、流动性和溶解性的技术。参见，例如，Ansel等人，PharmaceuticalDosage Forms and Drug Delivery Systems(1995)，456-457页。

如取代的烷基或芳基中的“取代的”是指取代(即，替代一个氢原子)可发生在一或多个位点，并且，除非另外指明，各取代位点的取代基独立选自指定选项。术语"任选取代的"是指化学基团(具有一或多个氢原子)的一或多个氢原子可以但非必须被另一取代基取代的事实。

如本申请中使用的，若公式或基团似乎缺失取代基，其化合价看似不完全，则推定缺失的取代基是H。

在本发明所示结构式中，断键(broken bond)(a)表示取代基在纸平面以下而楔形键(wedged bond)(b)表示取代基在纸平面以上。

在一个实施方式中，本发明涉及式I化合物

其中

W选自以下基团

a)任选包含1-3个氘原子的低级烷基，

b)任选可被SO₂R⁵和OR⁵取代的低级烷基

Y是低级烷基；

Z是CH；

R¹选自以下基团

a)低级烷基，和

b)芳基；

R²是CONHR⁶；

R³和R⁴可相同或不同并各自独立选自以下基团

a)H，和

b)低级烷基；

R⁵选自以下基团

a)低级烷基，和

b)芳基；

R⁶选自以下基团

a)H

b)任选可被低级烷基、OR⁵、卤素、芳基、和C(O)R⁷取代的芳基，和

c)任选可被芳基取代的低级烷基，所述芳基任选可被低级烷基和卤素取

R⁷选自以下基团

a)低级烷基，和

b)芳基；

或其药学上可接受的盐。

在一个实施方式中，本发明涉及式I化合物，其中

W选自以下基团

a)任选包含1-3个氘原子的C_1-6-烷基，

b)任选可被SO₂R⁵和OR⁵取代的C_1-6-烷基

Y是C_1-6-烷基；

Z是CH；

R¹选自以下基团

a)C_1-6-烷基，和

b)芳基；

R²是CONHR⁶；

R³和R⁴可相同或不同并各自独立选自以下基团

a)H，和

b)C_1-6-烷基；

R⁵选自以下基团

a)C_1-6-烷基，和

b)芳基；

R⁶选自以下基团

a)H

b)任选可被C_1-6-烷基、OR⁵、卤素、芳基、和C(O)R⁷取代的芳基，和

c)任选可被芳基取代的C_1-6-烷基，所述芳基任选可被C_1-6-烷基和卤素取

R⁷选自以下基团

a)C_1-6-烷基，和

b)芳基；

或其药学上可接受的盐。

在一个实施方式中，本发明涉及式I化合物，其中

W是C_1-6-烷基，

Y是C_1-6-烷基；

Z是CH；

R¹是C_1-6-烷基，

R³和R⁴可相同或不同并各自独立选自以下基团

a)H，和

b)C_1-6-烷基；

R⁶选自以下基团

a)H

b)任选可被C_1-6-烷基、O-C_1-6-烷基、卤素、芳基、和C(O)-芳基取代的芳基，和

c)任选可被芳基取代的C_1-6-烷基，所述芳基任选可被C_1-6-烷基和卤素取代；

或其药学上可接受的盐。

在一个实施方式中，本发明涉及式I化合物，其中

W是甲基，

Y是甲基；

Z是CH；

R¹是异丙基，

R³和R⁴是H，

R⁶选自以下基团

a)H

或其药学上可接受的盐。

在一个实施方式中，本发明涉及式I化合物，其中

W是甲基，

Y是甲基；

Z是CH；

R¹是异丙基，

R³和R⁴是H，

R⁶选自以下基团

a)H

b)任选可被F、甲基、甲氧基、苯基和C(O)-苯基取代的苯基，和

c)CH₂-苯基，其中苯基任选可被甲基和F取代；

或其药学上可接受的盐。

在一个实施方式中，本发明涉及式I化合物，其中W是甲基，Y是甲基，Z是CH，R¹是异丙基，R³和R⁴是H且R⁶选自以下基团：H、二氟苯基、苄基、5-氟-2-甲基-苄基、苯甲酰-苯基、苯基、联苯和甲氧基-苯基。

或其药学上可接受的盐。

在一个实施方式中，本发明涉及式I化合物，其中W和Y均为C_1-6-烷基，或其药学上可接受的盐，或其药学上可接受的盐。

在一个实施方式中，本发明涉及式I化合物，其中W和Y均为甲基，或其药学上可接受的盐。

在一个实施方式中，本发明涉及式I化合物，其中R¹是C_1-6-烷基，或其药学上可接受的盐。

在一个实施方式中，本发明涉及式I化合物，其中R¹是丙基(propanyl)，或其药学上可接受的盐。

在一个实施方式中，本发明涉及式I化合物，其中R¹是芳基，或其药学上可接受的盐。

在一个实施方式中，本发明涉及式I化合物，其中R¹是苯基，或其药学上可接受的盐。

在一个实施方式中，本发明涉及式I化合物，其中R³和R⁴是H，或其药学上可接受的盐。

在一个实施方式中，本发明涉及式I化合物，其中R³和R⁴中的一者或两者是C_1-6-烷基。

在一个实施方式中，本发明涉及式I化合物，其中R⁵是C_1-6-烷基，或其药学上可接受的盐。

在一个实施方式中，本发明涉及式I化合物，其中R⁵是甲基，或其药学上可接受的盐。

在一个实施方式中，本发明涉及式I化合物，其中R⁵是芳基，或其药学上可接受的盐，或其药学上可接受的盐。

在一个实施方式中，本发明涉及式I化合物，其中R⁵是苯基，或其药学上可接受的盐。

在一个实施方式中，本发明涉及式I化合物，其中R⁶是任选可被OR⁵、卤素和芳基取代的芳基，或其药学上可接受的盐。

在一个实施方式中，本发明涉及式I化合物，其中R⁶是任选可被苯基取代的C_1-6-烷基，所述苯基任选可被C_1-6-烷基和卤素取代，或其药学上可接受的盐。

在一个实施方式中，本发明涉及式I化合物，其中W、Y和R¹是C_1-6-烷基，R²是CONHR⁶，且R⁶是任选可被芳基、C_1-6-烷基、和OR⁵取代的芳基，或其药学上可接受的盐。

在一个实施方式中，本发明涉及式I化合物，其中W、Y和R¹是C_1-6-烷基，R²是CONHR⁶，且R⁶是H，或其药学上可接受的盐。

在一个实施方式中，本发明涉及式I化合物，其中W、Y和R¹是C_1-6-烷基，R²是CONHR⁶，且R⁶是任选可被苯基取代的C_1-6-烷基，所述苯基任选可被卤素取代，或其药学上可接受的盐。

在一个实施方式中，本发明涉及式I化合物，其中W、Y是C_1-6-烷基，R¹是芳基，R²是CONHR⁶，且R⁶是任选可被芳基、C_1-6-烷基、卤素和OR⁵取代的芳基，或其药学上可接受的盐。

在一个实施方式中，本发明涉及式I化合物，其中R⁶是任选可被苯基和OR⁵取代的苯基，或其药学上可接受的盐。

在一个实施方式中，本发明涉及式I化合物，其中W、Y是C_1-6-烷基，R¹是芳基，R²是CONHR⁶，且R⁶是任选可被芳基取代的C_1-6-烷基，所述芳基任选可被卤素取代，或其药学上可接受的盐。

在一个实施方式中，本发明涉及式I化合物，其中W、Y是C_1-6-烷基，R¹是芳基，R²是CONHR⁶，且R⁶是H，或其药学上可接受的盐。

在一个实施方式中，本发明涉及式I化合物，其选自由以下构成的组：

(S)-3,3-二甲基-1-[(S)-3-甲基-2-((S)-2-甲氨基-丙酰氨基)-丁酰基]-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸(2,6-二氟-苯基)-酰胺；

(S)-1-[(S)-3-甲基-2-((S)-2-甲氨基-丙酰氨基)-丁酰基]-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸酰胺盐酸盐；

(S)-1-[(S)-3-甲基-2-((S)-2-甲氨基-丙酰氨基)-丁酰基]-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸苄基酰胺；

(S)-1-[(S)-3-甲基-2-((S)-2-甲氨基-丙酰氨基)-丁酰基]-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸5-氟-2-甲基-苄基酰胺；

(S)-1-[(S)-3-甲基-2-((S)-2-甲氨基-丙酰氨基)-丁酰基]-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸(2-苯甲酰基-苯基)-酰胺；

(S)-1-[(S)-2-((S)-2-甲氨基-丙酰氨基)-2-苯基-乙酰基]-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸5-氟-2-甲基-苄基酰胺盐酸盐；

(S)-1-[(S)-2-((S)-2-甲氨基-丙酰氨基)-2-苯基-乙酰基]-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸酰胺盐酸盐；

(S)-1-[(S)-2-((S)-2-甲氨基-丙酰氨基)-2-苯基-乙酰基]-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸苯基酰胺盐酸盐；

(S)-1-[(S)-2-((S)-2-甲氨基-丙酰氨基)-2-苯基-乙酰基]-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸联苯-2-基酰胺盐酸盐；

(S)-1-[(S)-2-((S)-2-甲氨基-丙酰氨基)-2-苯基-乙酰基]-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸(2-甲氧基-苯基)-酰胺盐酸盐；

(S)-1-[(S)-2-((S)-2-甲氨基-丙酰氨基)-2-苯基-乙酰基]-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸5-氟-2-甲基-苄基酰胺盐酸盐；和

(S)-1-[(S)-3-甲基-2-((S)-2-甲氨基-丙酰氨基)-丁酰基]-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸(2,6-二氟-苯基)-酰胺；或任意前述化合物的药学上可接受的盐。

在一个实施方式中，本发明涉及式I化合物，其选自

(S)-3,3-二甲基-1-[(S)-3-甲基-2-((S)-2-甲氨基-丙酰氨基)-丁酰基]-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸(2,6-二氟-苯基)-酰胺；和

(S)-1-[(S)-3-甲基-2-((S)-2-甲氨基-丙酰氨基)-丁酰基]-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸(2,6-二氟-苯基)-酰胺；或任一前述化合物的药学上可接受的盐。

在一个实施方式中，本发明涉及药物组合物，其包含作为活性成分的如本发明所述任意化合物，或其药学上可接受的盐，连同药学上可接受的载体或赋形剂。

在一个实施方式中，本发明涉及用作治疗活性物质的式I化合物。

在一个实施方式中，本发明涉及用于癌症的治疗性处置和/或预防性处置(therapeutic and/or prophylactic treatment of cancer)的式I化合物。

在一个实施方式中，本发明涉及如本发明所述化合物，或其药学上可接受的盐的用途，用于制造用于治疗性处置和/或预防性处置癌症的药物。

在一个实施方式中，本发明涉及治疗或改善癌症的方法，其包括给予有此治疗需求的受试者治疗有效量的如本发明所述化合物。

本发明的一个实施方式涉及式I化合物，其中W和Y均为低级烷基。

在一个特别实施方式中，W和Y均为甲基。

本发明的另一实施方式涉及式I化合物，其中I其中R¹是低级烷基，或其药学上可接受的盐。在一个特别实施方式中，R¹是丙基(propanyl)，或其药学上可接受的盐。

本发明的另一实施方式涉及式I化合物，其中R¹是芳基，或其药学上可接受的盐。在一个特别实施方式中R¹是苯基，或其药学上可接受的盐。

本发明的另一实施方式涉及式I化合物，其中R³和R⁴是H，或其药学上可接受的盐。

本发明的另一实施方式涉及式I化合物，其中R³和R⁴中的一者或两者是低级烷基，或其药学上可接受的盐。

本发明的另一实施方式涉及式I化合物，其中R⁵是低级烷基，或其药学上可接受的盐。在一个特别实施方式中R⁵是甲基。

本发明的另一实施方式涉及式I化合物，其中R⁵是芳基，或其药学上可接受的盐。在一个特别实施方式中R⁵是苯基。

本发明的另一实施方式涉及式I化合物，其中R⁶是任选可被OR⁵、卤素、和芳基取代的芳基，或其药学上可接受的盐。

本发明的另一实施方式涉及式I化合物，其中R⁶是任选可被苯基取代的低级烷基，所述苯基任选可被低级烷基和卤素取代，或其药学上可接受的盐。

本发明的另一实施方式涉及式I化合物，其中W、Y和R¹是低级烷基，R²是CONHR⁶且R⁶是任选可被芳基、低级烷基、和OR⁵取代的芳基，或其药学上可接受的盐。

本发明的另一实施方式涉及式I化合物，其中W、Y和R¹是低级烷基，R²是CONHR⁶且R⁶是H，或其药学上可接受的盐。

本发明的另一实施方式涉及式I化合物，其中W、Y和R¹是低级烷基，R²是CONHR⁶且R⁶是任选可被苯基取代的低级烷基，所述苯基任选可被卤素取代，或其药学上可接受的盐。

本发明的另一实施方式涉及式I化合物，其中W、Y是低级烷基，R¹是芳基，R²是CONHR⁶且R⁶是任选可被芳基、低级烷基、卤素和OR⁵取代的芳基，或其药学上可接受的盐。

本发明的另一实施方式涉及式I化合物，其中W、Y是低级烷基，R¹是芳基，R²是CONHR⁶且R⁶是任选可被芳基取代的低级烷基，所述芳基任选可被卤素取代，或其药学上可接受的盐。

本发明的另一实施方式涉及式I化合物，其中W、Y是低级烷基，R¹是芳基，R²是CONHR⁶且R⁶是H，或其药学上可接受的盐。

本发明的另一实施方式涉及式I化合物，其中W、Y是低级烷基，R¹是芳基，R²是CONHR⁶且R⁶是任选可被苯基和OR⁵取代的苯基，或其药学上可接受的盐。

根据本发明的其中R⁶是H的化合物：

(S)-1-[(S)-3-甲基-2-((S)-2-甲氨基-丙酰氨基)-丁酰基]-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸酰胺盐酸盐(实施例2)；和

(S)-1-[(S)-2-((S)-2-甲氨基-丙酰氨基)-2-苯基-乙酰基]-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸酰胺盐酸盐(实施例7)；

或任意前述化合物的药学上可接受的盐。

根据本发明的其中R⁶是芳基的化合物包括：

(S)-3,3-二甲基-1-[(S)-3-甲基-2-((S)-2-甲氨基-丙酰氨基)-丁酰基]-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸(2,6-二氟-苯基)-酰胺(实施例1)

(S)-1-[(S)-3-甲基-2-((S)-2-甲氨基-丙酰氨基)-丁酰基]-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸(2-苯甲酰基-苯基)-酰胺(实施例5)；

(S)-1-[(S)-2-((S)-2-甲氨基-丙酰氨基)-2-苯基-乙酰基]-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸苯基酰胺盐酸盐(实施例8)；

(S)-1-[(S)-2-((S)-2-甲氨基-丙酰氨基)-2-苯基-乙酰基]-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸联苯-2-基酰胺盐酸盐(实施例9)；

(S)-1-[(S)-2-((S)-2-甲氨基-丙酰氨基)-2-苯基-乙酰基]-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸(2-甲氧基-苯基)-酰胺盐酸盐(实施例10)；和

(S)-1-[(S)-3-甲基-2-((S)-2-甲氨基-丙酰氨基)-丁酰基]-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸(2,6-二氟-苯基)-酰胺(实施例12)；

或任意前述化合物的药学上可接受的盐。

根据本发明的其中R⁶是低级烷基的化合物包括：

(S)-1-[(S)-3-甲基-2-((S)-2-甲氨基-丙酰氨基)-丁酰基]-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸苄基酰胺(实施例3)；

(S)-1-[(S)-3-甲基-2-((S)-2-甲氨基-丙酰氨基)-丁酰基]-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸5-氟-2-甲基-苄基酰胺(实施例4)；

(S)-1-[(S)-2-((S)-2-甲氨基-丙酰氨基)-2-苯基-乙酰基]-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸5-氟-2-甲基-苄基酰胺盐酸盐(实施例6)；和

(S)-1-[(S)-2-((S)-2-甲氨基-丙酰氨基)-2-苯基-乙酰基]-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸5-氟-2-甲基-苄基酰胺盐酸盐(实施例11)；或任意前述化合物的药学上可接受的盐。

一个特别实施方式涉及以下化合物：

(S)-3,3-二甲基-1-[(S)-3-甲基-2-((S)-2-甲氨基-丙酰氨基)-丁酰基]-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸(2,6-二氟-苯基)-酰胺(实施例1)；和

或任一前述化合物的药学上可接受的盐。

式I化合物以及它们的盐具有至少一个不对称碳原子且因此可呈现为不同立体异构体的混合物。各种异构体的分离可通过已知分离方法，例如，层析。

本发明公开的以及被式I涵盖的化合物可呈现互变异构或结构异构。本发明意图涵盖这些化合物的任意互变异构或结构异构形式，或这些形式的混合物，且不受限于上式中描述的任意一种互变异构或结构异构形式。

剂量

本发明化合物优先结合IAP的BIR域，防止IAP结合其它蛋白。Bir结合蛋白的实例包括但不限于，胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶7、胱天蛋白酶9、Smac等。IAP的实例包括但不限于，XIAP、cIAP1、cIAP2或NAIP。在一方面中，本发明化合物结合XIAP、cIAP1和/或cIAP2的BIR2和/或BIR3域。在另一方面中，本发明化合物结合XIAP、cIAP1和/或cIAP2的BIR2域。

本发明化合物有用于诱导细胞中，特别是癌细胞中的凋亡或使细胞，特别是癌细胞对于凋亡信号敏感。癌细胞中凋亡信号的诱导可通过例如，放射疗法或抗肿瘤化疗。或者，癌细胞中凋亡信号的诱导可通过由死亡受体激动剂活化死亡受体。死亡受体激动剂可为天然生成的，例如，肿瘤坏死因子α(TNF-α)或非天然生成的，例如，合成抗体例如DR4或DR5抗体。

本发明化合物因此有用于改善、控制或治疗细胞增生性病症，例如，特别是肿瘤病症。预期这些化合物以及含有所述化合物的制剂有用于治疗或控制血液癌症，例如急性髓性白血病，或者实体瘤，例如乳腺、结肠、肺和前列腺肿瘤。

根据本发明的化合物的“治疗有效量”或“有效量”是指有效预防、减缓或改善疾病症状或延长经治疗受试者存活的化合物量。测定治疗有效量是在本领域技术范围内。

根据本发明的化合物的治疗有效量或剂量可在宽限内改变并可以本领域已知的方式测定。此剂量在各具体情况中将按个体需求调节，所述情况包括给药的特定化合物、给药途径、经治疗的状况、以及经治疗的患者。通常，在口服或肠胃外给药至称重约70Kg的成年人的情况下，约10mg至约10,000mg，优选约200mg至约1,000mg的日剂量应为适当的，但当指明时可超出上限。日剂量可给药为单剂量或为分剂量的形式，或者对于肠胃外给药，其可以一或多次推注或连续输注给予。

用于实践本发明(即，包含本发明化合物)的药物制剂可为内部给药，例如口服(例如片剂、包衣片、糖衣丸、硬和软胶囊、溶液、乳液或混悬液的形式)、经鼻(例如鼻用喷雾的形式)或直肠给药(例如栓剂的形式)。然而，给药还可肠胃外实现，例如肌内或静脉给药(例如注射溶液的形式)。此外，给药还可局部实现(例如软膏、乳膏或油的形式)。

组合物/制剂

在一个替代实施方式中，本发明包括药物组合物，其包含至少一种式I化合物，或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的赋形剂和/或载体。

这些药物组合物可适用于口服、经鼻、局部(包括口腔和舌下)、直肠、阴道和/或肠胃外给药。这些制剂可方便地呈现在单位剂型中并可通过药学领域众所周知的任何方法制备。可与载体材料联合以产生单一剂型的活性成分的量将根据治疗主体、以及给药的特定模式而改变。可与载体材料联合以产生单一剂型的活性成分的量将通常为产生治疗效果的式I化合物的量。通常，100％中，此量范围将从约1％至约99％活性成分，优选约5％至约70％，最优选约10％至约30％。

制备这些制剂或组合物的方法包括将本发明化合物与载体以及任选的一种或多种辅助成分相联合的步骤。通常，制剂的制备是通过均匀和紧密联合本发明化合物以及液体载体、或细分固体载体或二者，然后，如果需要的话，成形产物。

可用药学惰性的、无机或有机佐剂加工式I化合物以及它们的药学上可接受的盐和酯，用于生产片剂、包衣片、糖衣丸和硬胶囊。可使用乳糖、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙甲纤维素、羟丙基纤维素、微晶纤维素、玉米淀粉或其衍生物、滑石、硬脂酸或其盐等，例如，以其作为片剂、糖衣丸和硬胶囊的佐剂。

用于软胶胶囊的适当佐剂为，例如，植物油、蜡、脂肪、半固体物质和液体多元醇等。用于制造溶液和糖浆剂的适当佐剂为，例如，H₂O、多元醇、蔗糖、转化糖、葡萄糖等。用于注射溶液的适当佐剂为，例如，H₂O、醇、多元醇、甘油、植物油等。用于栓剂的适当佐剂为，例如，天然或硬化油、蜡、脂肪、半固体或液体多元醇等。用于局部制剂的适当佐剂为甘油酯、半合成和合成甘油酯、氢化油、液体蜡、液体石蜡、液体脂肪醇、固醇、聚乙二醇和纤维素衍生物。

此外，药物制剂可含有防腐剂、增溶剂、粘度增加物质、稳定剂、润湿剂、乳化剂、甜味剂、着色剂、调味剂、用于改变渗透压的盐类、缓冲剂、掩蔽剂或抗氧化剂。它们还可含有其它治疗物质。

本发明中化合物(通式I化合物)可使用以下方案中列出的通用反应方案进行制备。

方案1

可移除通用结构2的适当保护的吲哚啉的胺保护基PG2以得到通式3化合物。可用通式4化合物酰化通式3化合物以得到通式5化合物。该酰化方法包括但不限于，酰基卤化物、酰基叠氮化物、以及标准肽偶联试剂。可移除通式5化合物中的胺保护基PG3以得到通式6化合物。可用通式7化合物酰化通式6化合物以得到通式8化合物。该酰化方法包括但不限于，标准肽偶联试剂。可移除通用结构8化合物的羧酸保护基PG1以形成通用结构9化合物。可用酰化试剂以及适当的通用结构10的胺处理通式9化合物以提供通式11化合物。可移除胺保护基PG4以得到通式1化合物。

可改变步骤顺序，如方案2和方案3中所示。

方案2

方案3

基于本申请公开内容，进行上述反应和步骤的方法对于本领域技术人员而言将是显而易见的，或可由实施例类比推导。起始原料是市售的或可通过类似于以下实施例中所述那些的方法制得。

晶体形式

当本发明化合物是固体时，本领域技术人员将理解这些化合物以及它们的盐，可以不同结晶或多晶型形式存在，意图将所有形式包含在本发明以及指定公式(式，结构式)的范围内。

实施例

本发明化合物的合成可根据已知工艺。提供以下实施例和参照以帮助理解本发明。然而，所述实施例无意于限制本发明，其真实范围在所附权利要求书中提出。实施例中最终产物名称的生成是使用AutoNom 2000Add-in v4.0SP2(ISIS Draw、Elsevier/MDL中的功能)、或者AutoNom 2000TT v4.01.305(Elsevier/MDL)、或者ChemDraw Pro Control11.0.2(CambridgeSoft Corp.)中的可用功能、或者电子笔记本的结构＝名称特征。

实施例1

(S)-3,3-二甲基-1-[(S)-3-甲基-2-((S)-2-甲氨基-丙酰氨基)-丁酰基]-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸(2,6-二氟-苯基)-酰胺

步骤1：往3,3-二甲基吲哚啉-2-甲酸乙酯(制备是根据C.Rose等人US6403561)(0.2g，912μmol，Eq:1.00)在DCM(2mL)中的溶液中加入Boc-酸酐(0.32g，340μL，1.47mmol，Eq:1.61)，并在室温(rt)下搅拌所得溶液72h。将粗反应混合物直接应用至硅胶柱并通过急骤层析(flash chromatography)纯化(硅胶，24g，己烷中的0％至100％EtOAc)以得到无色油状的3,3-二甲基吲哚啉-1,2-二甲酸1-叔丁基2-乙基酯(240mg)，m/z＝320(M+H)。

步骤2：往3,3-二甲基吲哚啉-1,2-二甲酸1-叔丁基2-乙基酯(0.25g，783μmol，Eq:1.00)在THF(3.2mL)/MeOH(1.8mL)中的溶液中加入溶于水(1mL)中的氢氧化锂(126mg，5.26mmol，Eq:6.72)，并在50℃加热所得混悬液36h。真空浓缩反应混合物并接着将残留物加入水中并用乙醚洗涤。然后用1M HCl水溶液细心酸化水层至pH～3并用EtOAc萃取。真空浓缩经合并有机层以得到白色泡沫状的1-(叔丁氧羰基)-3,3-二甲基吲哚啉-2-甲酸(220mg)，m/z＝292(M+H)。

步骤3：将氧氯化磷(phosphorus oxychloride)(74.0mg，0.045mL，483μmol，Eq:2.2)滴加至1-(叔丁氧羰基)-3,3-二甲基吲哚啉-2-甲酸(64mg，220μmol，Eq:1.00)和2,6-二氟苯胺(54.0mg，0.045mL，418μmol，Eq:1.9)在吡啶(1mL)中的溶液中并在室温下搅拌所得深黄色混悬液过夜。用水(10mL)稀释反应混合物并用EtOAc(2x 10mL)萃取。用水(10mL)、0.1M HCl水溶液(10mL)和盐水(5mL)洗涤经合并有机层并真空浓缩以得到白色固体状的2-(2,6-二氟苯基氨基甲酰基)-3,3-二甲基吲哚啉-1-甲酸叔丁酯(42mg)。

步骤4：将TFA(1mL，13.0mmol，Eq:124)加至2-(2,6-二氟苯基氨基甲酰基)-3,3-二甲基吲哚啉-1-甲酸叔丁酯(42mg，104μmol，Eq:1.00)在DCM(1mL)中的混悬液中并在室温下搅拌所得黄色溶液1h。然后真空浓缩该溶液并用饱和NaHCO₃水溶液(5mL)处理残留物，并用EtOAc萃取。经Na₂SO₄干燥经合并有机层并真空浓缩。未经进一步纯化而使用所获固体(32mg)。

步骤5：将(S)-(9H-芴-9-基)甲基1-氯-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸酯((S)-(9H-fluoren-9-yl)methyl 1-chloro-3-methyl-1-oxobutan-2-ylcarbamate)(0.11g，307μmol，Eq:3.1)加至N-(2,6-二氟苯基)-3,3-二甲基吲哚啉-2-甲酰胺(30mg，99.2μmol，Eq:1.00)和吡啶(40μL，496μmol，Eq:5)在DCM(1mL)中的溶液中并在室温下搅拌所得溶液3h。用EtOAc(20mL)稀释反应混合物并用1M HCl水溶液(10mL)、1M NaOH水溶液(10mL)和盐水(10mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥并真空浓缩。通过急骤层析(硅胶，4g，己烷中的0％至30％EtOAc)纯化粗料以得到粘性油状的(S)-(9H-芴-9-基)甲基1-(2-(2,6-二氟苯基氨基甲酰基)-3,3-二甲基吲哚啉-1-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸酯(71mg)。

步骤6：将哌啶(0.1mL，1.01mmol，Eq:9.86)加至S)-(9H-芴-9-基)甲基1-(2-(2,6-二氟苯基氨基甲酰基)-3,3-二甲基吲哚啉-1-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸酯(71mg，102μmol，Eq:1.00)在DCM(2mL)中的溶液中并在室温下搅拌所得溶液3h。真空浓缩反应混合物并通过急骤层析(硅胶，4g，DCM中的0％至10％MeOH)纯化残留物以得到(S)-1-(2-氨基-3-甲基丁酰基)-N-(2,6-二氟苯基)-3,3-二甲基吲哚啉-2-甲酰胺(32mg)。

步骤7：将HATU(45mg，118μmol，Eq:1.48)加至(S)-1-(2-氨基-3-甲基丁酰基)-N-(2,6-二氟苯基)-3,3-二甲基吲哚啉-2-甲酰胺(32mg，79.7μmol，Eq:1.00)、(S)-2-(叔丁氧羰基(甲基)氨基)丙酸(20mg，98.4μmol，Eq:1.23)和二异丙基乙胺(50μl，286μmol，Eq:3.59)在DMF(1mL)中的溶液中并在室温下搅拌所得黄色溶液1h。用EtOAc(10mL)稀释反应混合物并用0.1M NaOH水溶液、0.1M HCl水溶液和盐水洗涤，并接着真空浓缩。通过急骤层析(硅胶，4g，己烷中的0％至50％EtOAc)纯化粗料以得到((S)-1-{(S)-1-[(R)-2-(2,6-二氟-苯基氨基甲酰基)-3,3-二甲基-2,3-二氢-吲哚-1-羰基]-2-甲基-丙基氨基甲酰基}-乙基)-甲基-氨基甲酸叔丁酯(较高R_f，15mg)和((S)-1-{(S)-1-[(S)-2-(2,6-二氟-苯基氨基甲酰基)-3,3-二甲基-2,3-二氢-吲哚-1-羰基]-2-甲基-丙基氨基甲酰基}-乙基)-甲基-氨基甲酸叔丁酯(较低R_f，15mg)，连同一些混合级份。

步骤8：将TFA(0.5mL，6.49mmol，Eq:254)加至((S)-1-{(S)-1-[(S)-2-(2,6-二氟-苯基氨基甲酰基)-3,3-二甲基-2,3-二氢-吲哚-1-羰基]-2-甲基-丙基氨基甲酰基}-乙基)-甲基-氨基甲酸叔丁酯(15mg，25.6μmol，Eq:1.00)在DCM(0.5mL)中的溶液中并在室温下搅拌所得溶液3h。真空浓缩反应物，用饱和NaHCO₃水溶液(2mL)处理残留物并将产物萃取入EtOAc中。有机层经Na₂SO₄干燥并真空浓缩。用乙醚/己烷处理残留物得到白色粉末状的(S)-3,3-二甲基-1-[(S)-3-甲基-2-((S)-2-甲氨基-丙酰氨基)-丁酰基]-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸(2,6-二氟-苯基)-酰胺(10mg)，m/z＝487(M+H)。

实施例2

(S)-1-[(S)-2-((S)-2-甲氨基-丙酰氨基)-2-苯基-乙酰基]-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸酰胺

步骤1：往(S)-2-(叔丁氧羰基(甲基)氨基)丙酸(4.06g，20.0mmol，Eq:1)、HOAT(4.08g，30.0mmol，Eq:1.5)和EDC(5.74g，30.0mmol，Eq:1.5)在DCM(200mL)中的溶液中加入(S)-2-氨基-3-甲基丁酸苄酯盐酸盐((S)-benzyl2-amino-3-methylbutanoatehydrochloride)(5.35g，22.0mmol，Eq:1.1)和N-甲基吗啉(4.45g，4.83mL，43.9mmol，Eq:2.2)在50mL DCM中的溶液。23℃搅拌反应混合物3h。真空浓缩清黄色溶液。将残留物加入EtOAc中并用饱和NaHCO₃水溶液(1x 300mL)、5％KHSO水溶液和盐水(1x300mL)洗涤。有机层经Na₂SO₄干燥并真空浓缩。通过急骤层析(硅胶，己烷中的0％至80％EtOAc)纯化粗料以得到无色油状的(S)-2-[(S)-2-(叔丁氧羰基-甲基-氨基)-丙酰氨基]-3-甲基-丁酸苄酯(7.02g)，m/z＝393(M+H)。

步骤2：将(S)-2-[(S)-2-(叔丁氧羰基-甲基-氨基)-丙酰氨基]-3-甲基-丁酸苄酯(7g，18mmol)和1M氢氧化锂水溶液(40mL，40mmol)加至THF/MeOH/H₂O(3:1:1；200mL)以得到黄色溶液。室温下搅拌反应混合物过夜并接着真空浓缩。将残留物溶于水中并接着使用先是6M然后是1M HCl水溶液将其酸化至pH2。用EtOAc萃取该混合物。经Na₂SO₄干燥有机层并真空浓缩以得到粗的(S)-2-[(S)-2-(叔丁氧羰基-甲基-氨基)-丙酰氨基]-3-甲基-丁酸(5.7g)，其未经进一步纯化而直接用于下一步骤中，m/z＝303(M+H)。

步骤3：将氰尿酰氟(3.25g，2.08mL，24.1mmol)加至(S)-2-[(S)-2-(叔丁氧羰基-甲基-氨基)-丙酰氨基]-3-甲基-丁酸(5.4g，17.9mmol)和吡啶(1.95mL，24.1mmol)在CH₂Cl₂(100mL)中的溶液中。23℃搅拌反应混合物2.5h。滤除所得沉淀并浓缩母液。将残留物溶于EtOAc(250mL)中，并用饱和NaHCO₃、0.5M柠檬酸和盐水洗涤该溶液。有机层经Na₂SO₄干燥、过滤、浓缩并真空干燥。将所得黄色油状物加入CH₂Cl₂(35mL)中并在干冰-MeOH浴中冷却。往此溶液中加入(S)-吲哚啉-2-甲酸乙酯(2.3g，12.0mmol)和2,6-二叔丁基吡啶(4.6g，5.31mL，24.1mmol)在25mL CH₂Cl₂中的溶液。室温下搅拌所得混合物过夜。通过急骤层析(硅胶，己烷中的0％至70％EtOAc)纯化粗料以得到(S)-1-{(S)-2-[(S)-2-(叔丁氧羰基-甲基-氨基)-丙酰氨基]-3-甲基-丁酰基}-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(2.93g)，m/z＝476(M+H)。

步骤4：往(S)-1-{(S)-2-[(S)-2-(叔丁氧羰基-甲基-氨基)-丙酰氨基]-3-甲基-丁酰基}-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(2.93g，6.16mmol)在THF/水/甲醇(3:1:1；60mL)中的溶液中加入1M氢氧化锂水溶液(18.5mL，18.5mmol)。23℃搅拌反应混合物2.5h并接着真空浓缩。用水稀释残留物并用6M然后是1M HCl水溶液将其酸化至pH～2。用EtOAc萃取该混合物，有机层经Na₂SO₄干燥并真空浓缩以得到灰白色泡沫状的(S)-1-{(S)-2-[(S)-2-(叔丁氧羰基-甲基-氨基)-丙酰氨基]-3-甲基-丁酰基}-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸(2.70g)，m/z＝470(M+Na)。

步骤5：将(S)-1-{(S)-2-[(S)-2-(叔丁氧羰基-甲基-氨基)-丙酰氨基]-3-甲基-丁酰基}-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸(60mg，134μmol，Eq:1)和EDC(77.1mg，402μmol，Eq:3)和HOAT(54.7mg，402μmol，Eq:3)在DMF(6mL)中搅拌10分钟以得到淡黄色溶液。往此溶液中加入2mL DMF中的氯化铵(71.7mg，1.34mmol，Eq:10)和二异丙基乙胺(0.47μL，2.68mmol，Eq:20)。室温下搅拌该混合物过夜，并接着真空浓缩。将反应混合物倾入饱和NaHCO₃水溶液(30mL)中并用DCM(2x 20mL)萃取。用0.5M柠檬酸水溶液和盐水洗涤有机层，并接着真空浓缩。通过急骤层析(硅胶，己烷中的0％至90％EtOAc)纯化粗料以得到灰白色粉末状的{(S)-1-[(S)-1-((S)-2-氨基甲酰基-2,3-二氢-吲哚-1-羰基)-2-甲基-丙基氨基甲酰基]-乙基}-甲基-氨基甲酸叔丁酯(39mg)，m/z＝447(M+H)。

步骤6：将{(S)-1-[(S)-1-((S)-2-氨基甲酰基-2,3-二氢-吲哚-1-羰基)-2-甲基-丙基氨基甲酰基]-乙基}-甲基-氨基甲酸叔丁酯(39mg)混悬在二氧杂环己烷中的4M HCl以及DCM的1:1混合物中并在室温下搅拌1h。减压下移除溶剂并将固体溶于CH₃CN和水(3:1)中，冻干以得到白色粉末状的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-甲氨基-丙酰氨基)-2-苯基-乙酰基]-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸酰胺盐酸盐(33mg)，m/z＝347(M+H)。

使用与实施例2中相似的步骤制备表1中的以下实施例，其中标出了反应物改变：

表1

实施例6

(S)-1-[(S)-2-((S)-2-甲氨基-丙酰氨基)-2-苯基-乙酰基]-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸5-氟-2-甲基-苄基酰胺

步骤1：往(S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-2-苯基乙酸(5.26g，20.9mmol，Eq:2)和吡啶(2.8mL，34.5mmol，Eq:3.3)在DCM(60mL)中的溶液中加入氰尿酰氟(4.66g，2.99mL，34.5mmol，Eq:3.3)。23℃搅拌反应混合物2h。滤除所得沉淀并将母液真空浓缩。将残留物加入EtOAc中，并用饱和NaHCO₃水溶液、0.5M柠檬酸水溶液和盐水洗涤，并且真空浓缩。将浅褐色油状物加入DCM(20mL)中并在冰浴中冷却。往此酸性氟化物溶液中加入(S)-吲哚啉-2-甲酸乙酯(2g，10.5mmol，Eq:1)和2,6-二叔丁基吡啶(4.00g，4.62mL，20.9mmol，Eq:2)在DCM(20mL)中的溶液。室温下搅拌所得混合物过夜。真空浓缩反应物并通过急骤层析(硅胶，己烷中的5％至20％EtOAc)纯化粗料以得到淡黄色泡沫状的(S)-1-((S)-2-叔丁氧羰基氨基-2-苯基-乙酰基)-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(2.78g)，m/z＝425(M+H)。

步骤2：往(S)-1-((S)-2-叔丁氧羰基氨基-2-苯基-乙酰基)-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(2.78g，6.55mmol，Eq:1)中加入二氧杂环己烷中的4M HCl(16.4mL，65.5mmol，Eq:10)。室温下搅拌混合物2h。真空移除溶剂。真空干燥后，获得灰白色固体状的(S)-1-((S)-2-氨基-2-苯基-乙酰基)-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸乙酯盐酸盐，其未经进一步纯化而用于下一步骤。

步骤3：在50mL圆底烧瓶中，合并(S)-2-(叔丁氧羰基(甲基)氨基)丙酸(1.52g，7.48mmol，Eq:1.5)和HATU(1.9g，5mmol，Eq:1)以及DCM(20mL)以得到淡黄色混悬液。加入(S)-1-((S)-2-氨基-2-苯基-乙酰基)-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸乙酯盐酸盐(1.8g，5mmol，Eq:1)，然后是二异丙基乙胺(7mL，40mmol，Eq:8)。室温下搅拌反应过夜。真空浓缩粗反应混合物，然后将其溶于EtOAc(75mL)中。用水和盐水洗涤该溶液、干燥并真空浓缩。通过急骤层析(己烷中的10％至30％EtOAc)纯化粗料以得到白色泡沫状的(S)-1-{(S)-2-[(S)-2-(叔丁氧羰基-甲基-氨基)-丙酰氨基]-2-苯基-乙酰基}-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(2.3g)，m/z＝510(M+H)。

步骤4：往(S)-1-{(S)-2-[(S)-2-(叔丁氧羰基-甲基-氨基)-丙酰氨基]-2-苯基-乙酰基}-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(2.28g，4.47mmol，Eq:1)在60mL THF/水/MeOH(3:1:1)中的溶液中加入1M氢氧化锂水溶液(13.4mL，13.4mmol，Eq:3)。23℃搅拌反应混合物2.5h。真空浓缩反应物并将残留物加入水中，用6M然后是1M HCl水溶液将其酸化至pH～2。用EtOAc(2x 50mL)萃取该混合物并合并有机层，经Na₂SO₄干燥并真空浓缩以得到白色泡沫状的(S)-1-{(S)-2-[(S)-2-(叔丁氧羰基-甲基-氨基)-丙酰氨基]-2-苯基-乙酰基}-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸(2.04g)，m/z＝482(M+H)。

步骤5：往冷却至0℃的(S)-1-{(S)-2-[(S)-2-(叔丁氧羰基-甲基-氨基)-丙酰氨基]-2-苯基-乙酰基}-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸(50mg，104μmol，Eq:1)和(5-氟-2-甲苯基)甲胺(28.9mg，208μmol，Eq:2)在DCM(3mL)中的溶液中加入2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧三磷酸-2,4,6-三氧化物(2,4,6-tripropyl-1,3,5,2,4,6-trioxatriphosphorinane-2,4,6-trioxide)(EtOAc中的50重量％溶液，加入体积：150μL，Eq:2,)和二异丙基乙胺(54μL，Eq:3)。0℃搅拌反应混合物20分钟，然后在23℃搅拌1h。用饱和NaHCO₃水溶液淬灭反应至pH＝8。分离两相并用DCM再萃取水相。合并有机层并真空浓缩。通过急骤层析(硅胶，己烷中的0％至70％EtOAc)纯化该混合物以得到白色粉末状的((S)-1-{(S)-2-[(S)-2-(5-氟-2-甲基-苄基氨基甲酰基)-2,3-二氢-吲哚-1-基]-2-氧代-1-苯基-乙基氨基甲酰基}-乙基)-甲基-氨基甲酸叔丁酯(49mg)，m/z＝603(M+H)。

步骤6：将((S)-1-{(S)-2-[(S)-2-(5-氟-2-甲基-苄基氨基甲酰基)-2,3-二氢-吲哚-1-基]-2-氧代-1-苯基-乙基氨基甲酰基}-乙基)-甲基-氨基甲酸叔丁酯(48mg)混悬在二氧杂环己烷中的4M HCl以及DCM的1:1混合物中并在室温下搅拌1h。真空除溶剂并将所得固体溶于CH₃CN和水(3:1)中，冻干以得到白色粉末状的(S)-1-[(S)-2-((S)-2-甲氨基-丙酰氨基)-2-苯基-乙酰基]-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸5-氟-2-甲基-苄基酰胺盐酸盐(44mg)，m/z＝503(M+H)。

使用与实施例6中相似的步骤制备表2中的以下实施例，其中标出了反应物改变。

表2

实施例12

(S)-1-[(S)-3-甲基-2-((S)-2-甲氨基-丙酰氨基)-丁酰基]-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸(2,6-二氟-苯基)-酰胺

步骤1：将N,N,N’,N’-四甲基氟代甲脒六氟磷酸盐(N,N,N’,N’-tetramethylfluoroformamidinium hexafluorophosphate)(1.1g，4.18mmol，Eq:1.6)加至(S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(738mg，3.4mmol，Eq:1.3)和二异丙基乙胺(1.4mL，7.84mmol，Eq:3)在DCM(10mL)中的溶液中并在室温下搅拌所得溶液1h。加入(S)-吲哚啉-2-甲酸乙酯(0.5g，2.61mmol，Eq:1.00)并接着在室温下搅拌反应混合物整个周末。用EtOAc(50mL)稀释反应混合物并用0.1M HCl水溶液(50mL)、0.1M NaOH水溶液(50mL)和盐水(25mL)洗涤。通过急骤层析(硅胶，24g，己烷中的0％至20％EtOAc)纯化粗料以得到(S)-1-((S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-甲基丁酰基)吲哚啉-2-甲酸乙酯(0.58g)，m/z＝391(M+H)。

步骤2：将水(4.5mL)中的氢氧化锂一水合物(187mg，4.46mmol，Eq:3)加至冰浴冷却的(S)-1-((S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-甲基丁酰基)吲哚啉-2-甲酸乙酯(0.58g，1.49mmol，Eq:1.00)在THF(13.5mL)和MeOH(4.5mL)中的溶液中。移除冷却浴并在室温下搅拌反应1h。将0.1M KHSO₄水溶液(50mL)加至反应混合物并用DCM(2x 50mL)萃取所得混合物。用1M HCl水溶液(～5mL)进一步酸化水层并用DCM(2x 50mL)再次萃取。合并有机层，经Na₂SO₄干燥并真空浓缩。用己烷共沸残留物以得到(S)-1-((S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-甲基丁酰基)吲哚啉-2-甲酸(0.56g)，m/z＝363(M+H)。

步骤3：将氧氯化磷(164mg，0.1mL，1.07mmol，Eq:2.16)滴加至2,6-二氟苯胺(264mg，0.22mL，2.04mmol，Eq:4.12)和(S)-1-((S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-甲基丁酰基)吲哚啉-2-甲酸(0.18g，497μmol，Eq:1.00)在吡啶(4mL)中的经冷却(冰浴)溶液中。移除冷却浴并在室温下搅拌反应。1h后用甲苯(10mL)稀释反应混合物并真空浓缩。用水(10mL)处理残留物并用EtOAc(2x 10mL)萃取。用0.1M HCl水溶液(10mL)和盐水(10mL)洗涤经合并有机层并接着真空浓缩。通过急骤层析(硅胶，12g，己烷中的0％至30％EtOAc)纯化粗料以得到(S)-1-((S)-2-(2,6-二氟苯基氨基甲酰基)吲哚啉-1-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸叔丁酯(0.21g)，m/z＝474(M+H)。

步骤4：将TFA(2mL，26.0mmol，Eq:76.8)加至(S)-1-((S)-2-(2,6-二氟苯基氨基甲酰基)吲哚啉-1-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸叔丁酯(0.16g，338μmol，Eq:1.00)在DCM(2mL)中的溶液中并在室温下搅拌所得溶液1h。真空浓缩反应混合物并用正庚烷(20mL)共沸残留物以得到粘稠油状物(0.16g)，其未经进一步纯化而直接使用。将HATU(0.21g，552μmol，Eq:1.68)加至(S)-1-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰基)-N-(2,6-二氟苯基)吲哚啉-2-甲酰胺2,2,2-三氟醋酸酯(0.16g，328μmol，Eq:1.00)、(S)-2-(叔丁氧羰基(甲基)氨基)丙酸(0.1g，492μmol，Eq:1.5)和二异丙基乙胺(0.29mL，1.66mmol，Eq:5.06)在DMF(2mL)中的溶液中并在室温下搅拌反应30分钟。用EtOAc(20mL)稀释反应混合物并用0.1M NaOH水溶液(10mL)和0.1M HCl水溶液(10mL)洗涤。将己烷(20mL)加至有机层并用水(3x 10mL)和盐水洗涤。真空浓缩有机层并通过急骤层析(硅胶，12g，己烷中的0％至50％EtOAc)纯化所得粗料以得到(S)-1-((S)-1-((S)-2-(2,6-二氟苯基氨基甲酰基)吲哚啉-1-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基)-1-氧代丙-2-基(甲基)氨基甲酸叔丁酯(0.15g)，m/z＝559(M+H)。

步骤5：将TFA(2mL，26.0mmol，Eq:96.7)加至(S)-1-((S)-1-((S)-2-(2,6-二氟苯基氨基甲酰基)吲哚啉-1-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基)-1-氧代丙-2-基(甲基)氨基甲酸叔丁酯(0.15g，269μmol，Eq:1.00)在DCM(2mL)中的溶液中并在室温下搅拌所得溶液1小时。真空浓缩反应混合物并用最低量乙醚/己烷处理以得到白色固体状的(S)-1-[(S)-3-甲基-2-((S)-2-甲氨基-丙酰氨基)-丁酰基]-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸(2,6-二氟-苯基)-酰胺(0.11g)，m/z＝459(M+H)。

实施例13

生化分析

BIR2和BIR3的TR-FRET分析

测试化合物抑制XIAP蛋白的BIR2和/或BIR3域结合肽A(一种下述SMAC-衍生肽)的能力显示测试化合物用作SMAC-拟物，导致细胞凋亡途径的再活化。

通过筛选抗基于由Sweeny等人报道的序列(Biochemistry，2006，45，1474014748)而合成的一组29肽的XIAP的6x组氨酸-标记BIR2域和BIR3域，确认肽AVPIAQKSEK-(ε-生物素)-OH 1:2TFA(“肽A”)是用于TR-FRET分析的底物。用荧光标记FITC或TAMRA标记所述肽并通过荧光偏振分析测定Kd值。确认序列AVPIAQKSEK是用于分析使用最为理想的。用生物素衍生化肽序列以提供AVPIAQKSEK-(ε-生物素)-OH 1:2TFA作为用于TR-FRET分析的底物。

XIAP蛋白序列获得自SWISS-PROT蛋白序列数据库且BIR2和BIR3域由其得到。用于TR-FRET分析的BIR2域的序列为MRHHHHHHRDHFALDRPSETHADYLLRTGQVVDISDTIYPRNPAMYSEEARLKSFQNWPDYAHLTPRELASAGLYYTGIGDQVQCFACGGKLKNWEPGDRAWSEHRRHFPNCFFVLGRNLNIRSE。

用于TR-FRET分析的BIR3域序列为MRHHHHHHRSDAVSSDRNFPNSTNLPRNPSMADYEARIFTFGTWIYSVNK

EQLARAGFYALGEGDKVKCFHCGGGLTDWKPSEDPWEQHAKWYPGCKYLL

EQKGQEYINNIHLTHSLEECLVRTT。

在存在50mM Tris-Cl，pH 7.5，100mM NaCl，1mM二硫苏糖醇(DTT)和0.1mg/mL牛血清白蛋白(BSA)的情况下，将10纳摩尔的6x组氨酸-标记BIR2域(对应于XIAP的氨基酸124-240)、或BIR3域(对应于XIAP的氨基酸241-356)与20nM的肽AVPIAQKSEK-(ε-生物素)-OH 1:2TFA相混合。37℃温育45分钟后，加入结合抗-组氨酸抗体的铕-链霉亲和素和别藻蓝素至最终浓度分别为1.5nM和15nM。1小时后在室温下测量时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)信号。在10连续稀释浓度下评估测试化合物效价。测定各浓度下的抑制百分数以生成各测试化合物的IC₅₀值。

这些值在下表3中列出。

表3

Claims

1.化合物，其选自由以下构成的组：

(S)-1-[(S)-2-((S)-2-甲氨基-丙酰氨基)-2-苯基-乙酰基]-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸(2-甲氧基-苯基)-酰胺盐酸盐；和

或任意前述化合物的药学上可接受的盐。

2.一种药物组合物，其包含作为活性成分的根据权利要求1的化合物，或其药学上可接受的盐，连同药学上可接受的载体或赋形剂。

3.根据权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗性处置和/或预防性处置癌症的药物中的用途。