CN104730253B - 一种基于点击化学的检测试纸条、检测方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种基于点击化学的检测试纸条、检测方法和应用，所述检测试纸条的检测线T线包被带有非八元环炔基的蛋白，所述检测试纸条的质控线C线包被带有八元环炔基的蛋白。本发明提供的检测试纸检测更加简单，使用起来更加方便、快捷、灵敏度高、特异性好，能够特异性的识别铜离子及以铜离子作为读出信号的其他金属离子、小分子、生物大分子、细胞以及病原体的检测；且该试纸条制作简单，成本较低，利于推广使用。

Description

一种基于点击化学的检测试纸条、检测方法和应用
技术领域
本发明属于检测分析领域，尤其涉及一种基于点击化学的检测试纸条、检测方法和应用。
背景技术
铜作为一种不可缺少的微量元素，添加适量能够促生长，改善生长性能。同时，铜还可充当酶和其他蛋白质的辅因子和/或结构组成部分，在生理过程起着非常重要的作用，与血液、生殖系统和骨骼的发育都密切相关。然而，铜作为一种重金属元素，能抑制很多酶的活性，铜的过量摄取也会在生物体内积累并对生物体造成严重的损害。随着生活水平不断提高工业的不断发展，铜被广泛的应用到工业的各个方面，造成环境污染的同时也威胁人类及其他生物体的健康。
点击化学(Click chemistry)，是由化学家巴里·夏普莱斯(K B Sharpless)在2001年引入的一个合成概念，主旨是通过小单元的拼接，来快速可靠地完成形形色色分子的化学合成。它尤其强调开辟以碳-杂原子键(C-X-C)合成为基础的组合化学新方法，并借助这些反应(点击反应)来简单高效地获得分子多样性。点击化学的代表反应为铜催化的叠氮-炔基Husigen环加成反应(Copper-Catalyzed Azide–Alkyne Cycloaddition)。
金属离子快速检测方法主要包括试纸法、酶分析法、免疫分析法及生物化学传感器等几种类型。CN 102156125 A公开了一种检测饮用水中铜的试纸条及其制备方法，该试纸条利用吡咯烷二硫代甲酸与铜络合显色来检测铜离子。试纸法利用固定在试纸上的有机物与金属离子发生络合反应，产生颜色变化来检测金属离子的存在，但灵敏度达不到检测要求。酶分析法利用金属离子影响酶的活性，使酶催化底物反应的效率降低，读出信号变化。但它的弱点在于影响酶活性的干扰因素很多，体系的选择性差。免疫分析法需要被检金属离子的特异抗体，而金属离子单克隆抗体的制备非常困难，而较容易制备的多克隆抗体又难以满足对金属离子的特异性要求。CN 103163130 A公开了一种基于点击化学的便携式检测铜离子的方法，该方法先通过铜催化加成反应，再通过酶催化反应，测量酶解溶液检测铜离子浓度。该方法步骤多，容易出现偏差。用于离子检测的生物化学传感器制作工艺困难，成本相对较高，鲜有商品问世。上述方法技术均存在应用局限。因而寻找一种灵敏度高、方便、快捷而直观等特点的检测方法具有重要的意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种方便，快捷，灵敏度高，特异性好的铜离子快速检测方法，并且该方法还可用于所有通过检测铜离子作为读出信号的其他金属离子、小分子、生物大分子、细胞以及病原体的检测。
为达此目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供了一种基于点击化学的检测试纸条，所述的检测线T线包被带有非八元环炔基的蛋白，所述的质控线C线包被带有八元环炔基的蛋白。
本发明中，所述的非八元环炔基为除了八元环炔基的所有炔基。
优选地，所述质控线C线包被的蛋白包含化学式I所示的八元环炔基：
其中，R独立地选自氢原子、卤素、氨基、取代/未取代烷基、取代/未取代烷氧基、取代/未取代氧烷基或取代/未取代芳香基团中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，所述R基选自-(CH2)nCH3、-(CH2)nO-、-O(CH2)nCH3、 中的任意一种或至少两种的混合，其中n为1-30的自然数。
优选地，所述质控线C线包被的蛋白与八元环炔基的连接位置可以在取代基R上或是八元环上。
本发明中，优选羧基或氨基修饰八元环或R基，使其带上羧基或氨基。
本发明中，修饰后的带有羧基或氨基的八元环或R基与质控线C线包被的蛋白上的氨基或者羧基发生酰胺化反应，即将八元环炔和质控线C线包被的蛋白相连。
优选地，所述检测线T线包被的蛋白包含如化学式II所示的非八元环炔基：
其中，R1和R2独立选自氢原子、卤素、氨基、取代/未取代烷基、取代/未取代烷氧基、取代/未取代氧烷基或取代/未取代芳香基团。
优选地，所述R1和R2独立选自-(CH2)nCH3、-(CH2)nO-、-O(CH2)nCH3、 HC≡CCH2CH2CH2CN中的任意一种或至少两种的混合物，其中n为1-30的自然数。
优选地，所述检测线T线包被的蛋白与非八元环炔基的连接位置可以在取代基R1或取代基R2上。
本发明中，优选羧基或氨基修饰取代基R1或取代基R2，使其带上羧基或氨基。
本发明中，修饰后的带有羧基或氨基的取代基R1或取代基R2与检测线T线包被的蛋白上的氨基或者羧基发生酰胺化反应，即将非八元环炔和检测线T线上的蛋白相连。
本发明通过在检测线T线上包被带有非八元环炔基的蛋白，在质控线C线包被带有八元环炔基的蛋白，上样后，叠氮基团探针与普通炔基反应需要铜催化，而与八元炔基反应不需要铜催化，根据检测线T线和质控线C线上条带的显色，来实现样本铜离子的检测。
本发明中的检测试纸条包括条形底板以及在条形底板上顺次搭接粘贴的样品垫、结合垫、硝酸纤维膜和吸水垫，硝酸纤维膜上设置有检测线T线和质控线C线。
优选地，所述检测线T线包被的蛋白的浓度为0.1-3mg/mL，例如可以是0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.5mg/mL、0.6mg/mL、0.8mg/mL、1mg/mL、1.2mg/mL、1.4mg/mL、1.5mg/mL、1.6mg/mL、1.8mg/mL、2mg/mL、2.2mg/mL、2.4mg/mL、2.5mg/mL、2.6mg/mL、2.8mg/mL或3mg/mL，优选为0.2-1mg/mL，进一步优选为0.5mg/mL。
优选地，所述检测线T线包被的蛋白的包被参数为0.5-3μL/cm，例如可以是0.5μL/cm、0.6μL/cm、0.8μL/cm、0.9μL/cm、1μL/cm、1.2μL/cm、1.4μL/cm、1.5μL/cm、1.6μL/cm、1.8μL/cm、2μL/cm、2.2μL/cm、2.4μL/cm、2.5μL/cm、2.6μL/cm、2.8μL/cm、2.9μL/cm或3μL/cm，优选为0.6-2.5μL/cm，进一步优选为1μL/cm。
优选地，所述质控线C线包被的蛋白的浓度为0.5-5mg/mL，例如可以是0.5mg/mL、0.6mg/mL、0.8mg/mL、1mg/mL、1.2mg/mL、1.4mg/mL、1.5mg/mL、1.6mg/mL、1.8mg/mL、2mg/mL、2.2mg/mL、2.4mg/mL、2.5mg/mL、2.6mg/mL、2.8mg/mL、3mg/mL、3.5mg/mL、4mg/mL、4.5mg/mL或5mg/mL，优选为0.5-3mg/mL，进一步优选为1mg/mL。
优选地，所述质控线C线包被的蛋白的包被参数为0.5-3μL/cm，例如可以是0.5μL/cm、0.6μL/cm、0.8μL/cm、0.9μL/cm、1μL/cm、1.2μL/cm、1.4μL/cm、1.5μL/cm、1.6μL/cm、1.8μL/cm、2μL/cm、2.2μL/cm、2.4μL/cm、2.5μL/cm、2.6μL/cm、2.8μL/cm、2.9μL/cm或3μL/cm，优选为0.6-2.5μL/cm，优选为0.6-2.5μL/cm，进一步优选为1μL/cm。
优选地，所述试纸条的检测线T线与质控线C线之间的距离为2-8mm，例如可以是2mm、3mm、4mm、5mm、6mm、7mm或8mm，优选为3-7mm，进一步优选为4mm。
优选地，所述的玻璃纤维结合垫涂覆有叠氮基团探针。
优选地，所述的叠氮基团探针为修饰有叠氮基团的金、银、铜、铁、铂、钯、硒、碳、硼、镁、铝、钙、钛、钴、锰、钼、锌或铬纳米材料中的任意一种或至少两种组合。
第二方面，本发明提供了一种基于点击化学的检测试纸条的检测方法，采用如第一方面所述的试纸条，所述检测方法包括如下步骤：
(1)将待测样品混合抗坏血酸钠，添加到试纸条加样区，层析反应10-30min；
(2)观察检测线T线和质控线C线的条带颜色。
作为优选技术方案，步骤(1)所述的抗坏血酸钠的终浓度为1-30μmol，例如可以是1μmol、2μmol、3μmol、5μmol、8μmol、10μmol、12μmol、15μmol、16μmol、18μmol、20μmol、22μmol、25μmol、26μmol、28μmol或30μmol，优选为3-20μmol，进一步优选为10μmol。
优选地，步骤(2)所述的条带颜色为检测线T线和质控线C线同时显示红色，样品为阳性。
优选地，步骤(2)所述的条带颜色为检测线T线无色，质控线C线显示红色，样品为阴性。
优选地，步骤(2)所述的条带颜色为检测线T线和质控线C线同时显示无色，试纸条无效。
第三方面，本发明提供了如第一方面所述的试纸条在检测生物大分子和/或小分子中的应用。
优选地，所述的试纸条在检测细胞以及病原体中的应用。
优选地，所述的试纸条在检测细胞或病原体中的金属离子中的应用。
本发明中，所述的在金属离子、小分子、生物大分子、细胞以及病原体的检测均为需要通过检测铜离子作为读出信号。铜和三价铁离子反应生成二价铜离子，二价铜离子溶液在还原剂存在的情况下加到试纸条样品垫上可使试纸条T线显色，通过检测二价铜离子即可检测三价铁离子的存在。检测小分子生物素，将亲和素修饰在96孔板上，接着加含有生物素的样品，然后加入生物素修饰的铜颗粒，没有生物素的样品铜颗粒吸附在板子上的多，反之少，通过酸释放铜颗粒的铜离子，将其加到试纸条上，T线明显的生物素含量少，反之生物素含量高。检测蛋白A，将含A的样品孵育在96孔板上，然后将修饰有A抗体的铜颗粒加入，通过酸释放铜颗粒的铜离子，A含量高连在板子上的铜颗粒多，铜离子浓度也高。检测细胞或细菌，将细胞或细菌加在板子上生长，然后加入修饰有和细胞或细菌相互作用分子(如抗体等)的铜颗粒，通过酸释放铜颗粒的铜离子，细胞或细菌浓度高连在板子上的铜颗粒也就多，铜离子浓度也高。
对于本领域技术人员来说，即使不明了本发明的检测原理，同样能够实施、再现本发明，即本发明的检测原理是否清楚明了，都不影响本发明的实施和再现。本发明的一种基于点击化学的检测试纸条，其检测原理在于：
该检测试纸包被有检测线和质控线，其中，检测线上包被了带有普通炔基的蛋白，质控线上包被了带有八元环炔基的蛋白，玻璃纤维结合垫上涂覆了修饰有叠氮基团探针的纳米材料，样本层析时，叠氮基团探针与带有普通炔基的蛋白反应需要铜催化，而与带有八元炔基的蛋白反应不需要铜催化，若样品中含有铜离子则检测线与质控线都会显红色，若样品中不含有铜离子则检测线不显色，质控线显红色，若检测线与质控线都不显色则检测试纸条无效。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明提供的检测试纸检测更加简单，使用起来更加方便、快捷，检测只需10分钟便能得出检测结果；且灵敏度高、特异性好，能够特异性的识别铜离子及以铜离子作为读出信号的其他金属离子、小分子、生物大分子、细胞以及病原体的检测；且该试纸条制作简单，成本较低，与现有技术相比，测量更精确，方便。
附图说明
图1是本发明基于click反应的检测试纸条示意图。
图2是本发明有铜离子，无铜离子样品加到金标试纸条样品垫后结果图及无效试纸条结果图。
图3是本发明有铜离子，无铜离子样品加到磁珠标记试纸条样品垫后结果图及无效试纸条结果图。
图4是本发明含有不同浓度铜离子样品加到试纸条样品垫后结果图。
图5是本发明通过检测铜离子的存在间接检测对应的金属离子、小分子、生物大分子、细胞以及病原体的结果图。
具体实施方式
为更进一步阐述本发明所采取的技术手段及其效果，以下结合附图并通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案，但本发明并非局限在实施例范围内。
实施例1：金纳米颗粒试纸条的制备
(1)制备金纳米颗粒：采用柠檬酸钠还原氯金酸法制备胶体金，将所用的玻璃仪器事先用洗液过夜浸泡，然后冲洗干净。将烧杯中加入1000mL三蒸水，然后加入15mL 1％的柠檬酸钠溶液，加热至沸腾后，再加入10mL 1％的氯金酸溶液，煮沸15min后至冷却，置于4℃保存，颗粒直径大约为30nm；
(2)制备叠氮修饰的金纳米颗粒结合物垫：将50μg带叠氮的蛋白修饰金纳米颗粒10mL，室温反应2小时，然后用1％的BSA进行封闭，然后离心两次，弃去上清液，将金标叠氮的结合物用1％的BSA、0.5％的蔗糖和0.5％的酪蛋白钠溶液进行重悬，然后涂覆在100cm2的玻璃纤维上，进行冷冻干燥；
(3)在PVC胶板上一端顺次相互搭接地贴附样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜，另一端贴附有吸水纸；
(4)通过三维平面划膜仪在硝酸纤维素膜上包被检测线T线和质控线C线，T线为带有(炔丙基醇)的蛋白，C线为带有的蛋白，包被浓度分别为0.5mg/ml和1mg/ml，仪器包被参数为1μl/cm，C线与T线之间的间隔为4mm宽；
(5)将PVC胶板及贴附的材料切成4mm宽度的试纸条，在干燥、避光环境下保存，备用。
(6)取已经制备的好的试纸条平放在实验台上，将含有Cu2+的溶液和不含Cu2+溶液与10μmol的抗坏血酸钠混合，再滴加各100μl到试纸条上，10min之后读取检测结果。
结果如图2所示，若C线和T线同时显示红色条带，证明该样本为阳性(含有Cu2+)，若只有C线显示红色条带，T线不显示红色条带，则该样本为阴性(不含有Cu2+)，若C线不显示红色条带，无论T线显色与否，那么该检测试纸条无效，需要重新进行检测。
实施例2：金纳米颗粒试纸条的制备
步骤(1)-(3)同实施例1，其余步骤如下：
(4)通过三维平面划膜仪在硝酸纤维素膜上包被检测线T线和质控线C线，T线为带有(炔丙基胺)的蛋白，C线为带有的蛋白，包被浓度分别为1mg/ml和2mg/ml，仪器包被参数为1.2μl/cm，C线与T线之间的间隔为8mm宽；
(5)将PVC胶板及贴附的材料切成4mm宽度的试纸条，在干燥、避光环境下保存，备用。
(6)取已经制备的好的试纸条平放在实验台上，将含有Cu2+的溶液和不含Cu2+溶液与8μmol的抗坏血酸钠混合，再滴加各100μl到试纸条上，12min之后读取检测结果。
检测结果同实施例1。
实施例3：金纳米颗粒试纸条的制备
步骤(1)-(3)同实施例1，其余步骤如下：
(4)通过三维平面划膜仪在硝酸纤维素膜上包被检测线T线和质控线C线，T线为带有(1-炔丙基-1H-苯并三唑)的蛋白，C线为带有的蛋白，包被浓度分别为2mg/ml和3mg/ml，仪器包被参数为1.5μl/cm，C线与T线之间的间隔为2mm宽；
(5)将PVC胶板及贴附的材料切成4mm宽度的试纸条，在干燥、避光环境下保存，备用。
(6)取已经制备的好的试纸条平放在实验台上，将含有Cu2+的溶液和不含Cu2+溶液与15μmol的抗坏血酸钠混合，再滴加各100μl到试纸条上，18min之后读取检测结果。
检测结果同实施例1。
实施例4：金纳米颗粒试纸条的制备
步骤(1)-(3)同实施例1，其余步骤如下：
(4)通过三维平面划膜仪在硝酸纤维素膜上包被检测线T线和质控线C线，T线为带有(丙炔酸乙酯)的蛋白，C线为带有的蛋白，包被浓度分别为3mg/ml和5mg/ml，仪器包被参数为2μl/cm，C线与T线之间的间隔为2mm宽；
(5)将PVC胶板及贴附的材料切成4mm宽度的试纸条，在干燥、避光环境下保存，备用。
(6)取已经制备的好的试纸条平放在实验台上，将含有Cu2+的溶液和不含Cu2+溶液与15μmol的抗坏血酸钠混合，再滴加各100μl到试纸条上，15min之后读取检测结果。
检测结果同实施例1。
实施例5：氧化铁纳米颗粒试纸条的制备
(1)以羧基修饰的100nm左右的磁珠作为免疫标记物；
(2)制备叠氮修饰的磁珠结合物：将50μg带叠氮基团的蛋白修饰磁珠颗粒，室温反应2小时，然后用1％的BSA进行封闭，然后离心两次，弃去上清液，将磁珠标记的叠氮的结合物用1％的BSA、0.5％的蔗糖和0.5％的酪蛋白钠溶液进行重悬，然后涂覆在100cm2的玻璃纤维上，进行冷冻干燥；
(3)在PVC胶板上一端顺次相互搭接地贴附样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜，另一端贴附有吸水纸；
(4)通过三维平面划膜仪在硝酸纤维素膜上包被检测线T线和质控线C线，T线为带有(丙炔酸)的蛋白，C线为带有的蛋白，包被浓度分别为0.5mg/ml和1mg/ml，仪器包被参数为1μl/cm，C线与T线之间的间隔为5mm宽；
(5)将PVC胶板及贴附的材料切成4mm宽度的试纸条，在干燥、避光环境下保存，备用。
(6)取已经制备的好的试纸条平放在实验台上，将含有Cu2+的溶液和不含Cu2+溶液与15μmol的抗坏血酸钠混合，再滴加各100μl到试纸条上，10min之后读取检测结果。
结果如图3所示，若C线和T线同时显示棕色条带，证明该样本为阳性(含有Cu2+)，若只有C线显示棕色条带，T线不显示棕色条带，则该样本为阴性(不含有Cu2+)，若C线不显示棕色条带，无论T线显色与否，那么该检测试纸条无效，需要重新进行检测。
实施例6：不同浓度铜离子的检测
制备试纸条方法如实施例1，制备好试纸条后，取若干试纸条平放在实验台上，分别在样品垫上加入不同浓度的铜离子溶液，同时混有终浓度为10μmol的抗坏血酸钠，等10分钟观察结果。
结果如图4所示，铜离子浓度越高，T线越明显。
实施例7：其他物质的检测结果图
制备试纸条方法如实施例1，制备好试纸条后，取若干试纸条平放在实验台上，分别在样品垫上加入不同样本溶液，同时混有终浓度为10μmol的抗坏血酸钠，等10分钟观察结果。
结果如图5所示，铜和三价铁离子反应生成二价铜离子，二价铜离子溶液在还原剂存在的情况下加到试纸条样品垫上可使试纸条T线显色，通过检测二价铜离子即可检测三价铁离子的存在。检测小分子生物素，首先将亲和素修饰在96孔板上，接着加含有生物素的样品，然后加入生物素修饰的铜颗粒，没有生物素的样品铜颗粒吸附在板子上的多，反之少，通过酸释放铜颗粒的铜离子，将其加到试纸条上，T线明显的生物素含量少，反之生物素含量高。检测蛋白A，首先将含A的样品孵育在96孔板上，然后将修饰有A抗体的铜颗粒加入，通过酸释放铜颗粒的铜离子，A含量高连在板子上的铜颗粒多，铜离子浓度也高，加到试纸条上，T线也越明显。检测细胞或细菌，首先将细胞或细菌加在板子上生长，然后加入修饰有和细胞或细菌相互作用分子(如抗体等)的铜颗粒，通过酸释放铜颗粒的铜离子，细胞或细菌浓度高连在板子上的铜颗粒也就多，铜离子浓度也高，加到试纸条上，T线也越明显。
综合实施例1-5，当样本中含有检测的离子，则C线和T线都显色，若样本中不含有检测的离子，则C线显色，而T线无色；随着样本中检测离子浓度的增大，T线颜色越深。
综上所述，本发明检测试纸条对铜离子的检测特异性好，检测方便，只需10分钟就能准备的得出检测结果，探针的材料不仅可用金还可用银、铜、铁、铂、钯、硒、碳、硼、镁、铝、钙、钛、钴、锰、钼、锌或铬等材料代替，制备试纸条工艺简单，成本低；不仅如此，该检测试纸条能特异性的识别铜离子，还能通过检测铜离子作为读出信号的金属离子、小分子、生物大分子、细胞以及病原体等物质的检测，适用范围广。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细方法，但本发明并不局限于上述详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (27)

1.一种基于点击化学的检测试纸条，其特征在于，所述的检测线T线包被带有非八元环炔基的蛋白，所述的质控线C线包被带有八元环炔基的蛋白，玻璃纤维结合垫涂覆有叠氮基团探针，所述的叠氮基团探针为修饰有叠氮基团的金、银、铜、铁、铂、钯、硒、碳、硼、镁、铝、钙、钛、钴、锰、钼、锌或铬纳米材料中的任意一种或至少两种组合。
2.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述质控线C线包被的带有八元环炔基的蛋白为利用以下化合物与蛋白上的氨基发生酰胺化反应而连接在蛋白上形成的带有八元环炔基的蛋白：或
3.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述检测线T线包被的带有非八元环炔基的蛋白为利用以下化合物与蛋白上的氨基或羧基发生酰胺化反应而连接在蛋白上形成的带有八元环炔基的蛋白： 中的任意一种或至少两种。
4.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述试纸条包括条形底板以及在条形底板上顺次搭接粘贴的样品垫、结合垫、硝酸纤维膜和吸水垫，硝酸纤维膜上设置有检测线T线和质控线C线。
5.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述检测线T线包被的蛋白的浓度为0.1-3mg/mL。
6.根据权利要求5所述的试纸条，其特征在于，所述检测线T线包被的蛋白的浓度为0.2-1mg/mL。
7.根据权利要求6所述的试纸条，其特征在于，所述检测线T线包被的蛋白的浓度为0.5mg/mL。
8.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述检测线T线包被的蛋白的包被参数为0.5-3μL/cm。
9.根据权利要求8所述的试纸条，其特征在于，所述检测线T线包被的蛋白的包被参数为0.6-2.5μL/cm。
10.根据权利要求9所述的试纸条，其特征在于，所述检测线T线包被的蛋白的包被参数为1μL/cm。
11.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述质控线C线包被的蛋白的浓度为0.5-5mg/mL。
12.根据权利要求11所述的试纸条，其特征在于，所述质控线C线包被的蛋白的浓度为0.5-3mg/mL。
13.根据权利要求12所述的试纸条，其特征在于，所述质控线C线包被的蛋白的浓度为1mg/mL。
14.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述质控线C线包被的蛋白的包被参数为0.5-3μL/cm。
15.根据权利要求14所述的试纸条，其特征在于，所述质控线C线包被的蛋白的包被参数为0.6-2.5μL/cm。
16.根据权利要求15所述的试纸条，其特征在于，所述质控线C线包被的蛋白的包被参数为1μL/cm。
17.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述试纸条的检测线T线与质控线C线之间的距离为2-8mm。
18.根据权利要求17所述的试纸条，其特征在于，所述试纸条的检测线T线与质控线C线之间的距离为3-7mm。
19.根据权利要求18所述的试纸条，其特征在于，所述试纸条的检测线T线与质控线C线之间的距离为4mm。
20.一种基于点击化学的检测试纸条的检测方法，其特征在于，采用如权利要求1-19中任一项所述的试纸条，所述检测方法包括如下步骤：
(1)将待测样品混合抗坏血酸钠，添加到试纸条加样区，层析反应10-30min；
(2)观察检测线T线和质控线C线的条带颜色。
21.根据权利要求20所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)所述的抗坏血酸钠的终浓度为1-30μmol。
22.根据权利要求21所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)所述的抗坏血酸钠的终浓度为3-20μmol。
23.根据权利要求22所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)所述的抗坏血酸钠的终浓度为进一步优选为10μmol。
24.根据权利要求20所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)所述的条带颜色为检测线T线和质控线C线同时显示红色，样品为阳性。
25.根据权利要求20所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)所述的条带颜色为检测线T线无色，质控线C线显示红色，样品为阴性。
26.根据权利要求20所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)所述的条带颜色为检测线T线和质控线C线同时显示无色，试纸条无效。
27.根据权利要求1-19中任一项所述的试纸条在检测生物大分子和/或小分子中的应用。
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