CN104706713B - 一种治疗糖尿病溃疡的中药组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗糖尿病溃疡的中药组合物及其制备方法。该中药组合物为外用中药组合物，是由中药原料当归、白芷、紫草和甘草依一定比例配比，经过提取精制，加制剂辅料按常规方法制成。实验证明，本发明所提供的中药组合物可显著提高糖尿病大鼠溃疡的愈合率，明显改善糖尿病大鼠溃疡病理结构，其机制与提高溃疡处新生肉芽组织中胰岛素样生长因子‑1受体、表皮细胞生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的表达量相关。本发明为糖尿病溃疡的治疗提供了一种有效的外用治疗药物。

Description

一种治疗糖尿病溃疡的中药组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及医学领域，特别涉及一种治疗糖尿病溃疡的中药组合物及其制备方法。

背景技术

随着社会生活方式的迅速转变，以2型糖尿病(T2DM)为主体的糖尿病发病率急剧攀升，我国1976年糖尿病发病率为1.0％，1989年为2.0％，1996年为3.2％，而《新英格兰医学杂志》更载文指出，在我国20岁以上的人群中，总体糖尿病患病率为9.7％，由此，推算出全国糖尿病总患病人数约为9200万人，成为全球糖尿病患者增长最快的国家之一。

糖尿病难治性溃疡是导致糖尿病病人截肢致残的主要原因。随着全球性糖尿病患病人数的增加，糖尿病人均寿命的延长以及老龄化的趋势，因糖尿病溃疡而需要截肢的患者也在增加。预计到2025年，全球糖尿病患者将达到2.5亿以上，而大约15％的糖尿病患者将发生溃疡或坏疽。据国际糖尿病足工作组报道，糖尿病初步治愈的耗费估计在7000～10000美元，糖尿病下肢溃疡及相关的截肢直接费用估计达到30000～60000美元，对社会将造成巨大的负担。

糖尿病溃疡的发病机制非常复杂，预后较差。目前对其发生机制和发展过程尚不十分清楚，一般认为与神经、血管、免疫、代谢等糖尿病内源性改变和感染、创伤、压力等外源性因素及相互影响有关，尚无有效治疗手段。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何治疗糖尿病溃疡。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了一种治疗糖尿病溃疡的中药组合物。

所述中药组合物的活性成分可由中药材制成，所述中药材可由当归、白芷、紫草和甘草组成。

所述中药材中的各种中药材可独立包装，也可混合包装。

所述中药组合物中，所述中药材的组成可为：当归30～80质量份、白芷30～80质量份、紫草50～100质量份和甘草50质量份。

所述中药组合物中，所述中药材的组成可为：当归30～50质量份、白芷30～80质量份、紫草50～100质量份和甘草50质量份。

所述中药组合物中，所述中药材的组成可为：当归30～50质量份、白芷30～50质量份、紫草50～100质量份和甘草50质量份。

所述中药组合物中，所述中药材的组成可为：当归30～50质量份、白芷30～50质量份、紫草80～100质量份和甘草50质量份。

所述中药组合物中，所述中药材的组成可为：当归50～80质量份、白芷30～80质量份、紫草50～100质量份和甘草50质量份。

所述中药组合物中，所述中药材的组成可为：当归50～80质量份、白芷30～50质量份、紫草50～100质量份和甘草50质量份。

所述中药组合物中，所述中药材的组成可为：当归50～80质量份、白芷30～50质量份、紫草80～100质量份和甘草50质量份。

所述中药组合物中，所述中药材的组成可为：当归50质量份、白芷50质量份、紫草100质量份和甘草50质量份。

所述中药组合物中的所述活性成分可为利用油脂从所述中药材中提取出的脂溶性物质；所述油脂可为植物油；所述植物油具体可为芝麻油。

所述中药组合物中，所述中药材提取时所述油脂和所述中药材的质量比可为1.56～1.72:1，如1.56:1或1.72:1。

所述中药组合物由所述活性成分和辅料组成，所述辅料可为白蜡。

所述中药组合物，所述活性成分和辅料的质量比为2:1。

所述中药组合物可为外用中药组合物。

所述中药组合物的剂型可为搽剂、软膏剂、硬膏剂、糊剂或贴剂。

本发明还提供了所述中药组合物的制备方法，包括用所述油脂浸提所述中药材，收集浸提液，将所述浸提液和所述白蜡混合，即制成所述中药组合物。

所述制备方法中所述油脂可为植物油；所述植物油具体可为芝麻油。

所述制备方法中，所述中药材浸提时所述油脂和所述中药材的质量比可为1.56～1.72:1，，如1.56:1或1.72:1。

所述制备方法中，所述活性成分和辅料的质量比为2:1。

上述制备方法中，所述浸提的时间可为12～36小时；本发明的一个实施例中具体可为芝麻油浸提24小时。

本发明所提供的所述中药组合物在制备如下1)—6)中至少一种产品中的应用也属于本发明的保护范围：

1)治疗糖尿病溃疡的产品；

2)提高糖尿病溃疡愈合率的产品；

3)改善糖尿病溃疡处新生肉芽组织的结构的产品；

4)提高糖尿病溃疡处新生肉芽组织中胰岛素样生长因子-1受体的mRNA表达量的产品；

5)提高糖尿病溃疡处新生肉芽组织中表皮细胞生长因子的表达量的产品；

6)提高糖尿病溃疡处新生肉芽组织中碱性成纤维细胞生长因子的表达量的产品。

上述应用中，所述产品可为药物；所述药物的剂型可为搽剂、软膏剂、硬膏剂、糊剂或贴剂。

本发明实验证明，与外敷凡士林和生理盐水相比，在糖尿病大鼠溃疡创面处外敷本发明所提供的中药组合物21天后，明显提高了溃疡的创面愈合率，创面愈合率比外敷凡士林和生理盐水的两组分别提高了26％和36％。进一步对溃疡病理结构观察的结果表明，外敷本发明所提供的中药组合物3—21天后，可改善溃疡处新生肉芽组织的结构；进一步对溃疡处新生肉芽组织进行实时荧光定量PCR检测的结果表明，外敷本发明所提供的中药组合物3—21天后，可明显提高溃疡处新生肉芽组织的胰岛素样生长因子-1受体的表达量；进一步对溃疡处新生肉芽组织进行免疫组化检测的结果表明，外敷本发明所提供的中药组合物21天后，可明显提高溃疡处新生肉芽组织中表皮细胞生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的表达量。

本发明为糖尿病溃疡的治疗提供了一种有效的外用治疗药物，具有制备方法简单、使用方便、效果明显等优点。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

下述实施例中的中药材：当归、白芷、紫草和甘草均购自天津中医药大学第一附属医院，均符合中国药典(2010年版)一部正文各药材项下的有关规定。

实施例1、中药组合物的制备

按照表1的配比，将当归、白芷、紫草和甘草混合后用芝麻油浸提，收集浸提液，向所述浸提液中加入白蜡混合，制成中药组合物，具体操作如下：

按照表1的配比，将当归、白芷、紫草和甘草混合后用芝麻油浸泡24小时，中文火慢煎，至药呈枯黄后，用纱布过滤，收集滤液，向所述滤液中加入白蜡，混合，获得中药组合物A、中药组合物B和中药组合物C。

表1、不同中药组合物的原料组成(单位：g)

实施例2、中药组合物A、中药组合物B和中药组合物C在治疗糖尿病溃疡中的效果

本实施例以下实验的对象均为无特定病原体级(SPF级，specific pathogen-free)的雄性Wistar大鼠(购自北京维通利华实验动物技术有限公司)，如无特别说明均饲喂标准饲料，饲养条件为环境温度为22-25℃,湿度为55±5％，每天12小时光照12小时黑暗循环(光照时间每天7:00-19:00)，自由获取食物和饮水，饲养地点为中国医学科学院放射医学研究所实验动物中心SPF级动物饲养房。

本实施例所述的饲料如下：

标准饲料：购自北京维通利华实验动物技术有限公司。

高脂饲料：10％猪油、20％蔗糖、1％胆酸钠、2.5％胆固醇、66.5％上述标准饲料。

本实施例所用的生理盐水为质量百分含量为9g/L的氯化钠水溶液。

实验一、中药组合物A、中药组合物B和中药组合物C在治疗对糖尿病大鼠溃疡创面愈合率的影响

1、建模

取180只无特定病原体级(SPF级，specific pathogen-free)的4周龄雄性Wistar大鼠，用标准饲料进行适应性喂养1周后；随机分成正常对照组和造模组；正常对照组共30只，用标准饲料喂养；造模组共150只，用高脂饲料喂养。

8周后，将造模组大鼠进行尾静脉注射1％链脲佐菌素(STZ)30mg/kg体重，1周后检测血糖，随机血糖≥16.7mmol/L，视为糖尿病造模成功，将150只造模成功的大鼠按照血糖和体重随机均分为糖尿病对照组、凡士林组、中药组合物组A、中药组合物组B、中药组合物组C；并以正常对照组的30只大鼠作为空白组。

将糖尿病对照组、凡士林组、中药组合物组A、中药组合物组B、中药组合物组C、空白组共6组大鼠均以水合氯醛腹腔麻醉后，背部剃毛，常规消毒，用打孔器于大鼠背部脊柱左侧打直径为2cm的孔，溃疡深及筋膜层，止血后以无菌纱布包扎，自由饮水与喂食。三天后溃疡创面有肉芽组织开始生长，溃疡模型制备成功。

2、给药

将步骤1溃疡模型制备成功的各组大鼠分别单笼喂养，自由饮水、进食，并在每组大鼠溃疡创面处用涂抹不同药物的纱条外敷，再用无菌纱布包扎，固定。每日换药一次，祛除创面上硬痂，常规消毒，用生理盐水冲洗创面，然后外敷药物，各组外敷的药物具体如下：

糖尿病对照组：生理盐水；

凡士林组：凡士林；

中药组合物组A：实施例1的中药组合物A；

中药组合物组B：实施例1的中药组合物B；

中药组合物组C：实施例1的中药组合物C；

空白组：生理盐水。

各组的单位面积创面的外敷药物体积相同。

3、溃疡愈合率统计

步骤2给药21天后，用透明膜覆盖大鼠溃疡创面，描摹创面形状，沿描摩的创面形状剪下透明膜，称取剪下的透明膜质量并换算成面积即得到每个大鼠的治疗后创面面积，再计算创面愈合率。采用SPSS16.0软件作统计分析,实验数据计量资料以均数±标准差表示，服从正态分布的两组间均数比较用t检验进行统计，同批次多组间比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA)，两两比较采用最小显著差法(LSD)，计数资料比较采用卡方检验，P<0.05为差异有统计学意义。结果如表2所示。

创面愈合率＝(治疗前创面面积-治疗后创面面积)/治疗前创面面积×100％。

透明膜质量并换算成面积的方法如下：随机取面积10cm²的透明膜，分析天平称取透明膜质量，计算其平均质量为30.0mg，则每1mg透明膜的面积为1/3cm²。

表2、给药21天后各组大鼠溃疡创面愈合率统计结果(％)

空白组	糖尿病对照组	凡士林组	中药组合物组A	中药组合物组B	中药组合物组C
						93.21±22.34	54.31±10.29<sup>#</sup>	58.57±15.45	73.64±13.49<sup>*</sup>	61.35±16.31<sup>△</sup>	65.78±13.32<sup>*△</sup>

注：#表示糖尿病对照组与空白组相比，P<0.05；*表示与糖尿病对照组相比，P<0.05；△表示中药组合物各组与中药组合物组A相比，P<0.05。

上述实验一的结果表明，在糖尿病大鼠溃疡创面处分别外敷实施例1的中药组合物组A、中药组合物组B和中药组合物组C21天后，经过完整的治疗过程，与外敷凡士林和生理盐水相比，中药组合物组A和中药组合物组C组明显提高了溃疡的创面愈合率(即溃疡愈合率)，其中中药组合物组A与中药组合物组B、中药组合物组C组比较，其差异具有统计学意义。说明实施例1的中药组合物具有治疗糖尿病溃疡的功能，而其中中药组合物组A明显提高了溃疡的创面愈合率，创面愈合率比外敷凡士林和生理盐水的两组分别提高了26％和36％，具有较好的治疗效果。

基于这一研究结论，下面以疗效最佳的中药组合物组A为干预药物，进一步观察上述中药组合物的作用机制。

实验二、中药组合物A对糖尿病大鼠溃疡病理结构的影响

1、建模

除不设中药组合物组B、中药组合物组C两组，其余与实验一的建模步骤相同。

2、给药：除不设中药组合物组B、中药组合物组C两组，其余与实验一的给药步骤相同。

3、溃疡的病理结构观察

分别于步骤2给药3、7、14和21天后，从每组中随机取大鼠3只，于同一深度、同一方向取溃疡创面的新生肉芽组织进行外观观察及切片电镜观察。切片制备方法如下：

取大鼠溃疡肉芽组织，立即固定于2.5％(体积分数)戊二醛溶液中，再用1％(体积分数)锇酸固定后，做石蜡切片并进行苏木精-伊红染色，再用JBVI-1230型透射电镜观察。

所述石蜡切片并进行苏木精-伊红染色的方法具体如下：

1)新生肉芽组织固定后，梯度酒精脱水(75％酒精1小时→80％酒精1小时→90％酒精1小时→95％酒精1小时→100％酒精1小时→100％酒精1小时→二甲苯45分钟→二甲苯45分钟)，最后浸蜡包埋成蜡块。

2)载玻片处理：新购载玻片经洗浸泡24-48小时，流水冲洗2-3小时，蒸馏水浸泡1小时，60℃烤箱烤干，浸泡于新配制的铬酸明胶液，浸湿后捞出，自然干燥备用。

3)在石蜡切片机上将蜡块切成4微米厚的切片，将组织片移入40℃的恒温热水容器中，待组织片完全展开后，附于载玻片上，平放在展片器上，裱好的切片56℃恒温箱过夜，取出备用。

4)石蜡切脱蜡至水，蒸馏水冲洗5分钟，切片入Harris苏木素15分钟，流水冲洗5分钟，0.5％盐酸酒精分化30秒，流水冲洗10分钟，伊红染色10分钟，梯度酒精脱水，二甲苯Ⅰ、Ⅱ透明封片。

实验二结果如下：

A：空白组：

A1：给药3天后：肉芽组织明显、新生毛细血管及成纤维细胞多。电镜示：组织水肿，细胞核呈低密度，成纤维细胞可见核仁、核膜，可见线粒体，血管内皮细胞结构不清，腔内血细胞坏死。

A2：给药7天后：新生毛细血管及成纤维细胞减少，纤维细胞增多。电镜示：纤维增多，细胞成分多，其中以成纤维细胞为主，胞核结构不清楚，核膜及核仁不易见。

A3：给药14天后：小动静脉形成，纤维细胞增多、可见胶原纤维形成。电镜示：纤维多，成纤维细胞较少，部分细胞核呈锯齿状，胞质内质网丰富，可见线粒体呈空泡状。

A4：给药21天后：纤维细胞及胶原纤维多。电镜示：纤维多，成纤维细胞结构清晰，细胞器少可见肥大细胞。

B：糖尿病对照组：

B1：给药3天后：肉芽组织增生不明显，创面水肿及炎性细胞浸润明显。电镜示：纤维少，细胞乱，成纤维细胞核浅，核膜不清，胞质少，细胞器不清楚，粒细胞质呈空泡状，间质水肿；

B2：给药7天后：肉芽组织增生，成纤维细胞较多，炎性细胞浸润明显。电镜示:纤维少、有水肿液，成纤维细胞内质网及线粒体较清楚，核仁不易见到；血管淤血，血管内皮细胞结构不清楚；

B3：给药14天后：肉芽组织旺盛呈早中期，新生的毛细血管及成纤维细胞仍明显。电镜示:纤维少，成纤维细胞结构不清或可见细胞器(内质网、线粒体)，可见血管但内皮细胞结构不清晰；

B4：给药21天后：肉芽组织中炎性细胞较多。电镜示:纤维密集，成纤维细胞可见核仁及胞质，内质网不发达。

C：凡士林组：

C1：给药3天后：肉芽组织明显，新生毛细血管及成纤维细胞较多。电镜示：组织水肿，纤维少，有游离红细胞，成纤维细胞可见核仁、核膜，细胞器可见线粒体及少量扩张内质网。

C2：给药7天后：新生毛细血管较少，成纤维细胞减少，纤维细胞增多。电镜示：纤维较丰富，成纤维细胞多见，核仁易见，染色质异常，胞质有空泡内质网可见，可见肥大细胞；

C3：给药14天后：晚期肉芽组织、纤维细胞增多、胶原纤维可见。电镜示：纤维中等或较少，成纤维细胞核清楚，可见核仁，内质网较丰富；可见粒细胞，但功能不佳；

C4：给药21天后：晚期肉芽组织，见纤维细胞及胶原纤维。电镜示：纤维中等，成纤维细胞内质网不发达，淋巴细胞和小血管较多见，血管内皮细胞可见线粒体等细胞器。

D：中药组合物组A：

D1：给药3天后：肉芽组织明显，新生毛细血管及成纤维细胞、巨噬细胞多。电镜示:纤维和细胞乱，仍有少量水肿液，成纤维细胞核低密度，胞质结构不清，见少量内质网，结构模糊。

D2：给药7天后：新生毛细血管及成纤维细胞减少，纤维细胞增多，新生小动、静脉形成。电镜示:细胞成分多，纤维相对少一些，成纤维细胞中内质网、线粒体多，胞核结构清楚，核仁大；新生血管多。

D3：给药14天后：呈晚期肉芽组织，毛细血管减少、纤维细胞增多、胶原纤维形成。电镜示：纤维中等量，成纤维细胞线粒体、内质网中等，血管丰富，淋巴细胞较多，功能活跃，核清晰，细胞器丰富；

D4：给药21天后：晚期肉芽组织，见纤维细胞及胶原纤维。电镜示：纤维中等，成纤维核仁明显，细胞器丰富，淋巴细胞多见，微绒毛多，细胞器可见；血管多，血管内皮细胞细胞器丰富。

实验二结果表明：与外敷凡士林和生理盐水相比，在糖尿病大鼠溃疡创面处外敷实施例1的中药组合物A3—21天后，可改善溃疡处新生肉芽组织的结构。

实验三、药物对糖尿病大鼠溃疡肉芽组织的胰岛素样生长因子-1受体表达的影响

1、建模

除不设中药组合物组B、中药组合物组C两组，其余与实验一的建模步骤相同。

2、给药：除不设中药组合物组B、中药组合物组C两组，其余与实验一的给药步骤相同。

3、胰岛素样生长因子-1受体(简称：IGF-1R)的mRNA表达检测

分别于步骤2给药1、7、14和21天后，从每组中随机取大鼠6只处死，从每只大鼠的溃疡处取新生肉芽组织，于液氮保存后，提取总RNA，反转录为cDNA，再以该cDNA为模板，用引物IGF-1R-FP和IGF-1R-RP实时荧光定量PCR检测IGF-1R，以β-actin为内参基因，以β-actin-FP和β-actin-RP为检测引物，实时荧光定量PCR在GeneAmp 5700荧光定量PCR仪上进行，一次平行试验设3次重复。利用Livak KJ和Schmittgen TD(2001)报道的方法，即2^-ΔΔCT计算相对表达量。

ΔΔC_T＝(C_T.Target－C_T.Actin)_{Time x}－(C_T.Target－C_T.Actin)_{Time 0}

Time x表示任意时间点，Time₀表示经β-actin校正后1倍量的目标基因表达。

上述引物的序列如下：

IGF-1R-FP:5’-CGA TGT GTG AGA AGA CCA CCA-3’；

IGF-1R-RP:5’-ACA TTT TCT GGC AGC GGT TT-3’；

β-actin-FP:5’-GAG ACC TTC AAC ACC CCA GCC-3’；

β-actin-RP:5’-AAT GTC ACG CAC GAT TTC CC-3’。

记录各组大鼠溃疡处肉芽组织的胰岛素样生长因子-1受体的相对表达量结果，采用SPSS16.0软件作统计分析,实验数据计量资料以均数±标准差表示，服从正态分布的两组间均数比较用t检验进行统计，同批次多组间比较采用单因素方差分析(One-wayANOVA)，两两比较采用最小显著差法(LSD)，计数资料比较采用卡方检验，P<0.05为差异有统计学意义。结果如表3所示。

表3、各组IGF-1R结果(N＝10)

组别	第1天	第7天	第14天	第21天
					空白组	0.91±0.17	0.96±0.21	0.91±0.11	0.89±0.09
糖尿病对照组	0.88±0.21	0.66±0.18#	0.33±0.08#	0.27±0.07#
					中药组合物组A	0.89±0.09	0.84±0.16*	0.71±0.09*	0.57±0.14*

凡士林组

0.91±0.13

0.69±0.23

0.34±0.11

0.29±0.11

注：#表示与空白组的结果相比在P<0.05差异显著；*表示与糖尿病对照组的结果相比在P<0.05差异显著。

结果表明：在糖尿病大鼠溃疡创面处分别外敷实施例1的中药组合物A 7天—21天后，与外敷凡士林和生理盐水相比，明显提高了溃疡处新生肉芽组织的胰岛素样生长因子-1受体的表达量。外敷实施例1的中药组合物A 7天，胰岛素样生长因子-1受体的表达量分别为外敷凡士林和生理盐水7天的胰岛素样生长因子-1受体的表达量的1.22倍和1.28倍；外敷实施例1的中药组合物A 14天，胰岛素样生长因子-1受体的表达量分别为外敷凡士林和生理盐水14天的胰岛素样生长因子-1受体的表达量的2.09倍和2.16倍；。外敷实施例1的中药组合物A 21天，胰岛素样生长因子-1受体的表达量分别为外敷凡士林和生理盐水21天的胰岛素样生长因子-1受体的表达量的1.97倍和2.11倍。

实验四、药物对2型糖尿病大鼠溃疡肉芽组织表皮细胞生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响

1、建模

除不设中药组合物组B、中药组合物组C两组，其余与实验一的建模步骤相同。

2、给药：除不设中药组合物组B、中药组合物组C两组，其余与实验一的给药步骤相同。

3、表皮细胞生长因子(EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达检测

于步骤2给药21天后，从每组中随机取大鼠6只处死，从每只大鼠的溃疡处取新生肉芽组织，固定包埋切片，分别以表皮细胞生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的抗体染色，并进行图像分析处理，具体方法如下：

1)取新鲜肉芽组织立即固定于2.5％(体积分数)戊二醛溶液中，再用1％(体积分数)锇酸固定后，梯度酒精脱水(75％酒精1小时→80％酒精1小时→90％酒精1小时→95％酒精1小时→100％酒精1小时→100％酒精1小时→二甲苯45分钟→二甲苯45分钟)，最后浸蜡包埋成蜡块。

2)在石蜡切片机上将步骤1)的蜡块切成4微米厚的切片，将组织片移入40℃的恒温热水容器中，待组织片完全展开后，附于载玻片上，平放在展片器上，裱好的切片56℃恒温箱过夜，取出备用。

3)免疫组化染色：将经步骤2)处理过的切片脱蜡，水化组织切片，蒸馏水漂洗，滴加0.3％H₂O₂阻断内源性过氧化物酶，孵育15分钟；蒸馏水漂洗，置于PBS(溶剂为蒸馏水；溶质及其浓度为8g/L NaCl，0.2g/L KCl，1.44g/L Na₂HPO4，0.24g/L KH₂PO4；pH值7.4)中5min共3次；加入表皮细胞生长因子的抗体(购自ABCAM公司，产品目录该编号为AB77851)或碱性成纤维细胞生长因子的抗体(购自ABCAM公司，产品目录该编号为AB8880)，4℃过夜；PBS洗3次各5min；滴加Ⅱ抗40～50μl，37℃1小时；PBS洗3次各5分钟；DAB显色5～10分钟；PBS冲洗10分钟；苏木素复染2分钟，盐酸酒精分化；自来水冲洗10～15分钟；脱水、透明、封片。显微镜下观察结果。细胞胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性(即含有所述抗体的抗原)。

4)采用医学图像分析系统分析，每组至少选6只大鼠的8张经步骤4)处理过的切片，每张切片选5个视野，测定每个视野中染色阳性区域的总面积(SUM AREA，代表含有该物质(即抗体所对应的抗原，若步骤4)使用的是表皮细胞生长因子的抗体，则该物质是指表皮细胞生长因子，若步骤4)使用的是碱性成纤维细胞生长因子的抗体，则该物质是指碱性成纤维细胞生长因子)细胞的数量)和该视野的积分光密度(IOD)值，计算该视野的平均光密度(MOD)值＝积分光密度(IOD)/阳性区域的总面积(SUM AREA)，MOD值即代表单位面积细胞该物质的表达量。最后统计各组每只大鼠的MOD值，采用SPSS16.0软件作统计分析,实验数据计量资料以均数±标准差表示，服从正态分布的两组间均数比较用t检验进行统计，同批次多组间比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA)，两两比较采用最小显著差法(LSD)，计数资料比较采用卡方检验，P<0.05为差异有统计学意义。结果如表4所示。

表4、给药21天后各组大鼠溃疡处肉芽组织中的表皮细胞生长因子(EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达量(MOD值)

组别	EGF	bFGF
			空白组	159.33±39.46	121.36±26.54
糖尿病对照组	111.79±38.41<sup>#</sup>	89.57±16.57<sup>#</sup>
			凡士林组	119.71±24.19	92.59±17.49
中药组合物组A	211.59±43.27*	168.59±33.29*

注：#表示与空白组的结果相比在P<0.05差异显著；*表示与糖尿病对照组的结果相比在P<0.05差异显著。

实验四的结果表明，在糖尿病大鼠溃疡处外敷实施例1的中药组合物A 21天后，与外敷凡士林和生理盐水相比，明显提高了溃疡处新生肉芽组织中的表皮细胞生长因子(EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达量。其中，外敷实施例1的中药组合物A 21天，表皮细胞生长因子(EGF)的表达量分别为外敷凡士林和生理盐水21天的表皮细胞生长因子(EGF)的表达量的1.77倍和1.89倍；外敷实施例1的中药组合物A 21天，碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达量分别为外敷凡士林和生理盐水21天的表皮细胞生长因子(EGF)的表达量的1.82倍和1.88倍。

实施例2的研究结果显示，实施例1制备的中药组合物A可显著提高糖尿病大鼠溃疡的愈合率，明显改善糖尿病大鼠溃疡病理结构，其机制与提高溃疡处新生肉芽组织中胰岛素样生长因子-1受体、表皮细胞生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的表达量相关。

Claims (7)

1.一种治疗糖尿病溃疡的中药组合物，其活性成分由中药材制成，所述中药材由当归、白芷、紫草和甘草组成；

其中，当归50质量份、白芷50质量份、紫草100质量份和甘草50质量份；

所述活性成分是利用油脂从所述中药材中提取出的脂溶性物质。

2.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于：所述油脂和所述中药材的质量比为1.56～1.72:1。

3.根据权利要求1或2所述的中药组合物，其特征在于：所述中药组合物由所述活性成分和辅料组成，所述辅料为白蜡。

4.根据权利要求3所述的中药组合物，其特征在于：所述活性成分和辅料的质量比为2:1。

5.根据权利要求1或2所述的中药组合物，其特征在于：所述中药组合物为外用中药组合物。

6.权利要求1-5中任一所述中药组合物的制备方法，包括用所述油脂浸提所述中药材，收集浸提液，将所述浸提液和所述白蜡混合，即制成所述中药组合物。

7.权利要求1-5中任一所述中药组合物在制备治疗糖尿病溃疡的药物中的应用。