CN101011456A - 减少皮质激素皮肤副作用的外用抗炎抗敏药剂芪松霜 - Google Patents

Abstract

本发明公开了由糖皮质激素与黄芪或黄芪提取物黄芪多糖或黄芪总苷组成的疗效高副作用少的糖皮质激素类供外用的药物组合物。糖皮质激素是防治皮肤病的重要药物，但糖皮质激素长期大剂量使用可造成一系列严重皮肤的不良反应，本发明发现黄芪或黄芪提取物黄芪多糖或黄芪总苷与糖皮质激素组成复方后能增强糖皮质激素的抗炎作用，减轻其不良反应，可用于防治各种相关的皮肤疾病。

Description

减少皮质激素皮肤副作用的外用抗炎抗敏药剂芪松霜

技术领域  糖皮质激素类外用药剂是临床治疗皮肤病的常用药物，但这些外用药均有较大皮肤副作用。本发明涉及一组疗效高，同时可减少皮质激素皮肤副作用的外用抗炎抗敏药剂芪松霜，该霜剂是由糖皮质激素与黄芪组成的外用药剂。

背景技术  糖皮质激素外用制剂应用于临床已有四十余年，是医学界解决皮肤顽症痼疾的重要药物。但它的皮肤副作用和全身副作用均较大，不少病人甚至迫于它的副作用而停药。糖皮质激素可引起类肾上腺皮质机能亢进症、诱发及加重感染、溃疡、骨质疏松并发骨折、神经精神系统并发症、肌病等。糖皮质激素外用于皮肤所引起的不良反应主要表现为，痤疮、色素沉着、多毛症、紫癜、皮肤萎缩、萎缩纹、毛细血管扩张、毛周角化症、结节性脂膜炎、速发型过敏反应(如荨麻疹)等。在临床上，一些患者如银屑病人，局部皮肤长期使用糖皮质激素外用制剂后，可出现皮肤萎缩、毛细血管扩张、萎缩纹。此类不良反应的发生，一方面与药物的药理活性有关，另一方面与临床上的不适当使用及滥用有关。如何提高糖皮质激素外用制剂的治疗效果，防治其不良反应的发生是近十多年来世界各国科学工作者研究的重点领域之一。国外学者早在二十世纪七十年代末期就开始了如何防治糖皮质激素外用于皮肤所产生的不良反应的研究。他们所使用的动物模型有无毛小鼠，墨西哥无毛狗。学者们研究的最多的药物是维甲酸类药物，他们发现维甲酸类药物不但能够抑制糖皮质激素引起的皮肤萎缩，而且并没有减弱其抗炎效应。关于维甲酸类药物的作用机理，有关研究发现，局部外用维甲酸类药物能够减少皮肤中胶原蛋白的丢失，并且能够促进新的胶原蛋白的合成。另有研究发现，糖皮质激素外用制剂与5-环氧和酶抑制剂类药物局部外用于皮肤，既有协同抗炎效应，又不会导致皮肤萎缩。近年来，国外学者发现甲状腺激素类药物能够刺激皮肤中胶原蛋白的合成，可用来防治糖皮质激素所导致的皮肤萎缩。国内学者也进行着一系列的对糖皮质激素外用制剂的毒性的研究。本课题组曾报道，黄芪对大鼠骨质疏松症具有防治作用。本课题组还发现，还发现黄芪，黄芪多糖可有效防治泼尼松所诱致的大鼠骨质疏松。为了寻找能增加糖皮质激素的疗效，减少其不良反应的药物组合物，我们做了大量的探讨与研究，发现黄芪与糖皮质激素组成外用制剂局部外用于皮肤，既有协同抗炎效应，又不会导致皮肤萎缩，为我们开发糖皮质激素组成外用制剂提供了很好的选择。

发明内容  糖皮质激素外用制剂是临床上治疗皮肤病的重要药物，已知可用于防治皮肤疾病的糖皮质激素类药物有醋酸泼尼松，醋酸泼尼松龙，醋酸氢化可的松，醋酸可的松，甲泼尼松，曲安西龙，地塞米松，倍他米松，氟氢可的松，氯泼尼醇，地夫可特，氟米龙，曲安奈德，布丁奈德，莫米松，氯倍他索，氟氢松，丁氯倍他松，倍氯米松，氯氟轻松，阿氯米松，卤米松，甲羟松，去羟米松，氟氢缩松，二氟可龙；这些药物不少也已经配成外用的药膏如软膏剂、乳膏剂；霜剂；膜剂，凝胶剂。但糖皮质激素外用制剂长期大剂量使用可造成一系列严重的不良反应，这是公知的技术。本发明发现在糖皮质激素外用制剂加入黄芪或黄芪多糖，与糖皮质激素组成复方后能增强糖皮质激素的抗炎作用，减轻其不良反应，可用于防治各种糖皮质激素外用制剂适应症。

具体实施方式：本发明方案是设计了下述研究处方进行实验

一、芪松涂剂

1.芪松涂剂：取70ml无水乙醇先把实验用量的曲安缩松溶解，充分溶解，另取黄芪生药材粗粉碎后，用100ml 60％乙醇渗泡48小时，过滤，滤液浓缩至30ml，再与上述曲安缩松溶液混合，即可。实验用量的曲安缩松是指每100毫升的溶液中含曲安缩松0.05～0.5克，黄芪用量为每100毫升的溶液中含5～25克。

2.曲安缩松黄芪多糖涂剂：取70ml无水乙醇先把实验用量的曲安缩松溶解，充分溶解后，加入黄芪多糖，充分溶解后，再加入30ml蒸馏水，即可。实验用量的曲安缩松是指每100毫升的溶液中含曲安缩松0.05～0.5克，黄芪多糖用量为，每100毫升的溶液中含0.1～0.5克。

二芪松霜

芪松霜：取曲安缩松0.05～0.5克，乳膏基质(硬脂酸100克，液状石腊160克，白凡士林50克，单硬脂酸甘油酯50克，三乙醇胺2克，十二烷基硫酸钠2克，甘油125克，10％羟苯乙酯溶液10毫升)，另取黄芪粗粉碎后，用100ml 60％乙醇渗泡48小时，过滤，滤液浓缩至30ml，加蒸馏水至470毫升，按乳膏的生产工艺制备成1000克乳剂，供研究及临床应用。本复方曲安缩松可在0.05～0.5克，蛇床子药材50～250克之间调整。

根据研究或临床应用需要，上述涂剂和霜剂中的曲安缩松，可采用地塞米松，醋酸氢化可的松，醋酸可的松，甲泼尼松，曲安缩松，氟氢可的松，莫米松，氯倍他索，氟氢松，倍氯米松，氯氟轻松来替代。

实施例一

为了观察外用曲安缩松诱发皮肤萎缩的小鼠皮肤组织病理学特征、皮肤相关的生化指标以及免疫器官的变化；同时，观察芪松霜对糖皮质激素皮肤不良反应的防治作用，我们开展了下述实验：

1.实验方法

1.1材料

1.1.1实验动物及饲养条件

初始体重20±2g的三月龄清洁级昆明种小鼠30只，雌雄各半(广东医学院实验动物中心提供)。饲养条件：饲养室内温度保持24℃～28℃，湿度在50％～60％。分笼普通喂养。每笼10只，自由摄食摄水，专室饲养，专人负责，实验前及每周称体重一次。动物饲养3周。

1.1.2主要仪器

SHH.W21.600三用电热恒温水浴箱  天津市华北实验仪器有限公司

华凌电冰箱                      BCD-205WE广东

752型紫外分光光度计             上海第三分析仪器厂

内切式组织匀浆机                浙西机械厂

55p-72超速离心机                日本HITACHT

AE-240型电子分析天平            Mettle-Toledo仪器(上海)有限公司

半自动图像数字化分析仪：包括

光镜和荧光显微镜                Nikon日本

计算机                          Macintosh IICi，美国苹果公司产品

数字化板                        SummaSketch II plus

KSS Image Analysis(version2.0)  KSS Scientific consultants，UT USA

KSS Stereologe(version2.0)      KSS Scientific consultants，UT USA

LEICA MPS30荧光-光学显微镜及显微照相机    德国LEICA公司

1.1.3主要试剂

考马司亮兰G250                  南京建成生物科技公司

羟脯氨酸试剂盒                  南京建成生物科技公司

SOD试剂盒                       南京建成生物科技公司

MDA试剂盒                       南京建成生物科技公司

1.1.4研究药物及配制方法

(1)各组所涂用的药物：1组空白对照组，取70ml无水乙醇，加蒸馏水至100ml即可；2组曲安缩松模型组，用70ml无水乙醇把0.2g曲安缩松溶解，加入30ml蒸馏水，配制浓度为0.2g/100ml溶液；3组复方曲安缩松蛇床子涂剂组。

(3)脱毛剂：硫化钠购自广州化学试剂厂。配制方法：称取硫化钠25g，加水50ml，加温溶解，然后加入聚乙烯10m，充分混合即可。

(4)三氯化铁：广东省台山市化工厂。配制方法：三氯化铁29g，蒸馏水加至100ml。

(5)碱性品红：上海化学试剂公司。

(6)间苯二酚：上海山浦化工有限公司。

(7)Weigert溶液：配制方法：碱性品红2g，间苯二酚4g，三氯化铁25ml，浓盐酸4ml，蒸馏水200ml。

(8)苏木素：上海化学试剂公司。

(9)Weigert铁苏木素液：

配制方法：

A液：苏木素1g；无水酒精100ml。

B液：30％三氯化铁4ml，蒸馏水100ml，纯盐酸1ml。

A、B两液需分瓶盛放，临用前A液B液等量混合。

(10)Van Gieson染液

配制方法：

A液：1％酸性品红水溶液，

B液：苦味酸饱和水溶液(约1.22％)。

A、B两液需分瓶盛放，临用前取A液1份B液9份混合后使用。

(11)1％盐酸酒精液：

配制方法：70％酒精99ml，纯盐酸1ml，充分混合即可。

2.2方法

2.2.1实验设计分组

根据实验所需，分为空白对照组、曲安缩松模型组、芪松霜组。每组10只小鼠。

2.2.2动物背部脱毛及涂药

实验前，用脱毛剂在背部尾上1cm处始，向头颈方向沿背部正中线两侧对称脱毛面积约4cm2，成一矩形，并用清水冲洗小鼠背部，避免脱毛剂的残留。各组以对应的药物外涂于背部，每次涂0.01ml/cm2，每天两次，共三周，实验前及实验开始后每周称重一次。

2.2.3取材

所有小鼠用药三周后，眼球取血处死。取背部正中皮肤，取一1cm×1cm大小皮肤迅速放入10％中性甲醛液中固定，拟作组织切片进行组织病理形态学观察及定量分析；另取余背部皮肤迅速冰冻保存，拟作皮肤组织匀浆测皮肤羟脯氨酸、SOD及MDA含量。取小鼠胸腺、脾，称湿重，观察其变化。

2.2.4皮肤生化指标的检测

(1)10％皮肤组织匀浆的制备：

①取脱毛后的皮肤组织块0.5g左右，经冷生理盐水漂洗，除去皮下脂肪和其它结缔组织，滤纸拭干，称重，放入10ml的小烧杯中。

②用量筒取该组织块重量9倍的预冷的生理盐水，取2/3倒入装有组织块的烧杯中，用眼科小剪尽快剪碎组织块，然后倒入匀浆管中将剩余的1/3生理盐水冲洗残留在烧杯中的组织块，一起倒入匀浆管，用内切式组织匀浆机搅拌制成10％组织匀浆(匀浆时间10次/秒，间歇3秒，连续7～10次，在冰水中进行)。

③取少量组织匀浆直接涂片，在显微镜下观察细胞的破碎情况，若破碎不全，则反复冻溶三次，使其完全破碎，使胞内容物完全游离在液相中。

(2)皮肤组织羟脯氨酸、SOD及MDA含量测定：

参照南京建成生物工程公司试剂盒说明方法测定羟脯氨酸，以微克/毫克蛋白(μg/mgprot)为单位；SOD，每毫克组织蛋白在1ml反应液中SOD抑制率达50％时所对应的SOD量为一个SOD活力单位(U)，以活力单位/毫克蛋白(U/mgprot)表示；MDA，以纳摩尔/毫克蛋白(nmol/mgprot)为单位。皮肤组织蛋白含量的测定，按照考马斯亮兰蛋白测定试剂盒说明书进行。

2.2.5组织切片染色及镜下观测内容

(1)弹力纤维染色：采用Weigert间苯二酚-碱性品红染色法

操作方法：

①石蜡切片，脱蜡至水，蒸馏水洗。

②0.25％高锰酸钾氧化10分钟。

③0.5％草酸漂白为止。

④蒸馏水洗后95％酒精洗一次。

⑤直接浸入Weigert溶液20～60分钟。

⑥0.5％盐酸酒精分化，观察背景无色弹力纤维清楚为好。

⑦水洗，快洗后进二甲苯透明，中性树胶封固。

(结果：弹力纤维呈黑蓝色。)

(2)胶原纤维染色：采用Van Gieson染色法

操作方法：

①组织固定10％福尔马林液，常规脱水包埋。

②切片脱蜡至蒸馏水。

③用Weigert铁苏木素液染10～20分钟。

④流水稍冲洗。

⑤1％盐酸酒精迅速分化。

⑥流水冲洗后蒸馏水冲洗。

⑦用Van Gieson液染3～5分钟。

⑧倾去染液，直接用95％酒精分化和脱水。

⑨无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

(结果：胶原纤维呈红色，肌纤维、胞质及红细胞呈黄色，细胞核呈蓝褐色。)

(3)表皮细胞染色：采用HE染色法染色。操作方法略。

(4)镜下观察皮肤表皮，真皮胶原纤维、弹力纤维变化情况：

主要观察皮肤表皮厚度，细胞层数，基底层细胞排列分布及形态；观察真皮层胶原纤维、弹力纤维的形态及数量。

(5)表皮厚度，弹力纤维面积的测量：

采用LEICA MPS30荧光-光学显微镜下摄影，应用相应计算机以KSS Image Analysis图像分析软件，在每组随机选择4-6个高倍镜视野，测量皮肤表皮厚度及真皮弹力纤维面积平均值。

2.3统计学分析

运用SAS软件进行单因素分析，先采用SAS中的UNIVARIATE过程检验方差齐性，若方差相等采用方差分析，组间比较再采用SNK-q检验；若方差不齐则采用Kruskal-Wallis秩和检验，再用Nemenyi检验比较两组间差别。

3.实验结果

(1)各组表皮形态学观察及计算机图像定量分析

实验结果可见曲安缩松模型组小鼠表皮厚度明显变薄，细胞层数减少，基底细胞排列散乱，细胞大小不一。正常对照组小鼠表皮厚度较厚，由3～5层细胞组成，可见明显的角质层，棘细胞散在分布，基底细胞呈立方形，排列整齐。与曲安缩松模型组相比，芪松霜组小鼠表皮表皮较曲安缩松组增厚，细胞层数增多，排列有序，胞间基质丰富，基底细胞胞体大，排列规整。各用药组小鼠表皮厚度计算机图像定量分析见表3.1

表3.1：小鼠表皮厚度计算机图像分析系统定量分析结果

组别	例数(只)	表皮厚度(μm)	变化比例1	变化比例2
					正常对照组曲安缩松模型组	1010	27.2±1.4916.5±1.35	-39.5％
芪松霜组	10	25.8±1.50*	-5.4％	56.3％

注：(1)与曲安缩松模型组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.05；(2)变化比例1与正常对照组比较，变化比例2与曲安缩松模型组比较。

从表3.1可见，曲安缩松模型组小鼠表皮厚度较正常对照组减少了39.5％，差异有统计学意义(P＜0.05)。芪松霜组表皮厚度比曲安缩松模型组增加了56.3％差异有统计学意义(P＜0.05)。

(2)各组真皮弹力纤维形态学观察及计算机图像定量分析

实验结果可见曲安缩松模型组小鼠弹力纤维变短、减少，散在性分布。正常对照组小鼠弹力纤维细长，有轻微弯曲度，分布广泛，排列相对有序。与曲安缩松模型组相比，芪松霜组小鼠弹力纤维较曲安缩松组增多，弹力纤维细长，致密。各用药组小鼠真皮弹力纤维面积计算机图像定量分析见表3.2：

表3.2：小鼠皮肤弹力纤维面积计算机图像分析系统定量分析结果

组别

例数(只)

弹力纤维总面积(μm2)

变化比例1

变化比例2

正常对照组曲安缩松模型组	1010	880.3±31.5644.8±26.8	-26.8％
					芪松霜组	10	1026.3±22.4*	16.6％	59.2％

注：(1)与曲安缩松模型组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.05：(2)变化比例1与正常对照组比较，变化比例2与曲安缩松模型组比较。

从表3.2可见，曲安缩松模型组小鼠弹力纤维面积较正常对照组减少了26.8％，差异有统计学的意义(P＜0.05)。芪松霜组弹力纤维面积比曲安缩松模型组增加了59.2％差异有统计学意义(P＜0.05)。

(3)各组真皮胶原纤维形态学观察

实验结果可见曲安缩松模型组真皮胶原层厚度变薄，胶原束断裂甚至破碎，排列疏松且紊。正常对照组胶原纤维丰富，排列紧密，呈束状排列，走向与皮面平行，呈波纹状。与曲安缩松模型组相比，芪松霜组小鼠胶原纤维明显增多，胶原纤维增厚，胶原束排列规整、致密、规则，呈波浪状，与皮面平行。

(4)各用药组皮肤生化指标的检测

①各用药组小鼠羟脯氨酸含量的检测见表3.3：

表3.3：大鼠皮肤组织羟脯氨酸含量检测结果

组别	例数(只)	羟脯氨酸(ug/mg)	变化比例1	变化比例2
					正常对照组曲安缩松模型组	1010	0.872±0.0760.601±0.057	-31.1％
芪松霜组	10	1.02±0.17*	17.0％	70.0％

注：(1)与曲安缩松模型组比较，^*P＜0.05，^**P.05.05：(2)变化比例1与正常对照组比较，变化比例2与曲安缩松模型组比较。

从表3.3可见，曲安缩松模型组羟脯氨酸含量较正常对照组降低了31.1％，差异有统计学的意义(P＜0.05)。芪松霜组羟脯氨酸含量比曲安缩松模型组增加了70.0％，差异有统计学意义(P＜0.05)。

②各用药组小鼠SOD活力的检测见表3.4：

表3.4：小鼠皮肤组织中SOD活力

组别	例数(只)	SOD(U/mg)	变化比例1	变化比例2
					正常对照组曲安缩松模型组	1010	69.45±4.3347.91±5.55	-31.0％
芪松霜组	10	78.67±7.16*	13.3％	64.2％

注：(1)与曲安缩松模型组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.05；(2)变化比例1与正常对照组比较，变化比例2与曲安缩松模型组比较。

从表3.4可见，曲安缩松模型组SOD活力较正常对照组降低了31.0％，差异有统计学的意义(P＜0.05)。芪松霜组SOD活力比曲安缩松模型组增加了64.2％，差异有统计学意义(P＜0.05)。

③曲安缩松模型组小鼠MDA含量的检测见表3.5：

表3.5：小鼠皮肤组织中MDA含量

组别	例数(只)	MDA(nmol/mg)	变化比例1	变化比例2
					正常对照组曲安缩松模型组	1010	6.87±0.679.40±0.77	36.9％
芪松霜组	10	5.70±0.68*	-17.0％	-39.4％

注：(1)与曲安缩松模型组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.05；(2)变化比例1与正常对照组比较，变化比例2与曲安缩松模型组比较。

由表3.5可见，曲安缩松模型组MDA含量较正常对照组增加了36.9％，差异有统计学的意义(P＜0.05)。芪松霜组MDA含量比曲安缩松模型组减少了39.4％，差异有统计学意义(P＜0.05)。

讨论

4.1局部外用糖皮质激素可引起小鼠皮肤萎缩

20世纪50年代以来，糖皮质激素局部外用治疗某些皮肤病取得了良好的效果。但自70年代以后，由于不适当地外用及滥用，局部副作用尤其是致皮肤萎缩逐渐增多，这给糖皮质激素的临床外用带来了困难。如何能够尽量减少及治疗这一副作用成为日益关注的焦点。

不适当使用糖皮质激素可导致一系列皮肤及系统性副作用。皮肤表现可有：皮肤萎缩、萎缩纹、毛细血管扩张、色素沉着等。系统性副作用可有：肌肉萎缩、骨质疏松、无菌性关节坏死、诱发精神症状、青光眼、白内障等。在我们的研究中发现外用糖皮质激素可导致可造成小鼠皮肤SOD活力降低、羟脯氨酸含量减少、MDA含量增加，表皮层厚度变薄，弹力纤维减少。研究发现外用糖皮质激素可致皮肤萎缩。Schwartz E等在局部外用维甲酸治疗无毛鼠类固醇性萎缩研究中发现糖皮质激素如0.05％丙酸氯倍他索局部外用无毛鼠3周即可导致皮肤萎缩，而维甲酸有防治无毛鼠皮肤萎缩的作用。糖皮质激素局部外用致皮肤萎缩的相关表现有如下几点：(1)病理切片观察显示皮肤严重萎缩，仅有2层(正常为3-4层)上皮细胞和一层薄的肌膜，脂肪细胞缺乏。(2)葡糖胺聚糖定量研究显示经糖皮质激素局部外用3周后引起局部葡糖胺聚糖极其显著的降低。(3)胶原和非胶原蛋白定量研究显示糖皮质激素局部外用3周能明显降低局部胶原和非胶原蛋白含量。其中皮肤组织形态学改变与我们实验结论一致，而本实验的生化指标的改变也间接提示了胶原的降低。现认为外用糖皮质激素致皮肤萎缩一方面使皮肤成纤维细胞中的mRNA下调从而抑制成纤维细胞增殖及合成胶原、细胞外基质的能力。另一方面使胶原酶分解胶原能力增强。结果是抑制胶原产生与堆积，而胶原分解加强，从而导致皮肤萎缩，这可能是糖皮质激素通过与成纤维细胞表面糖皮质激素受体结合后通过抑制proalpha1和proalpha2及其他基因的转录，或通过受体后效应影响mRNA的稳定性的结果，另一方面可能是通过使某些基因的转录活性增强使胶原酶合成增加进而使胶原分解加速的结果。本实验通过给小鼠外用曲安缩松，在一定程度上模拟糖皮质激素在人体外用中致皮肤萎缩的作用，并观察相应的改变是否与以往的动物模型相同。外用曲安缩松小鼠皮肤组织中表皮变薄，弹力纤维面积减少，皮肤羟脯氨酸含量降低。皮肤SOD活性下降、MDA含量增加、羟脯氨酸含量降低，说明外用曲安缩松可导致小鼠皮肤萎缩。

4.2外用糖皮质激素引起的小鼠皮肤萎缩与SOD活性、MDA含量、羟脯氨酸含量变化有关

外用糖皮质激素小鼠皮肤组织中表皮变薄，弹力纤维面积减少，皮肤羟脯氨酸含量降低，皮肤SOD活性下降、MDA含量增加、羟脯氨酸含量降低，提示了外用糖皮质激素引起的小鼠皮肤萎缩与SOD活性、MDA含量、羟脯氨酸含量变化有关。检测外用糖皮质激素引起的小鼠皮肤萎缩的主要生化指标有SOD、MDA、羟脯氨酸等。我们对各组小鼠这些参数作了检测，发现外用糖皮质激素组小鼠皮肤SOD活性下降、MDA含量增加、羟脯氨酸含量降低；外用糖皮质激素组小鼠皮肤组织中表皮变薄，弹力纤维面积减少。本实验外用糖皮质激素组小鼠SOD活力降低，可能是外用糖皮质激素诱发产生过量自由基，自由基产生与清除失衡，过多自由基堆积引起的氧化应激导致SOD活性降低。超氧化阴离子O^2-对细胞损伤作用最为广泛，因其能启动自由基的连锁反应，产生其它自由基。进而导致成纤维细胞功能下降，胶原合成能力降低。而SOD催化超氧化阴离子O2-成为基态氧，阻止了由O^2-启动的自由基的连锁反应，降低自由基代谢产物(MDA)的生成，所以SOD是机体清除自由基的最重要的抗氧化物酶，能调整成纤维细胞功能。羟脯氨酸是胶原纤维与胶原蛋白中的一种主要又相对恒定的氨基酸，而胶原纤维是皮肤的主要组成成分，羟脯氨酸含量降低引起胶原纤维减少萎缩皮肤萎缩变薄。羟脯氨酸是真皮内含量丰富而且比较稳定的氨基酸，它是胶原蛋白特有的氨基酸之一，它的含量可以间接反映出真皮内胶原蛋白含量的变化。外用糖皮质激素组小鼠皮肤羟脯氨酸含量降低可能是外用糖皮质激素通过与其受体结合产生一系列的效应，引起脯氨酸羟化作用减弱，导致羟脯氨酸含量减少，进而影响胶原蛋白的合成。糖皮质激素组小鼠皮肤MDA含量增加，可能是外用糖皮质激素所致诱发产生大量自由基，导致了细胞膜不饱和脂肪酸的脂质过氧化作用增强，从而MDA含量增加。MDA是自由基对不饱和脂肪酸引发的脂质过氧化作用的最终产物，而细胞膜富含不饱和脂肪酸，最易受到氧自由基的攻击，MDA的含量能直接反应细胞膜被氧化的程度。这说明成纤维细胞合成胶原的能力下降进而导致皮肤萎缩。外用糖皮质激素引起的SOD活性、MDA含量、羟脯氨酸含量变化是糖皮质激素外用小鼠皮肤萎缩的表现。

4.3芪松霜外用引起的小鼠皮肤萎缩的防治作用

芪松霜组小鼠皮肤SOD活性增强、MDA含量下降、羟脯氨酸含量增加；芪松霜组小鼠皮肤组织中表皮增厚，弹力纤维面积增加。外用糖皮质激素致皮肤萎缩皮肤病理表现皮为肤严重萎缩，仅有2层(正常为3-4层)上皮细胞和一层薄的肌膜，脂肪细胞缺乏。黄芪是传统的补气中药之一，现代研究发现其有多种药理作用。黄芪主要含有甙类、多糖、氨基酸及微量元素富。黄芪总甙为黄芪提取物，能显著提高慢性乙型病毒性肝炎患者的细胞免疫功能，对乙肝表面抗原阳性转阴有一定的作用。对病毒感染心肌细胞的作用黄芪治疗病毒性心肌炎疗效肯定。黄芪总甙具有保护受病毒感染心肌细胞的作用，降低病毒性心肌炎小鼠死亡率，减轻心肌坏死和炎症等病理改变。黄芪总甙(AST)对体外激活肝星状细胞(hepatic stellate cell，HSC)的增殖和胶原产生有明显抑制作用，提示AST可能具有抗肝纤维化的作用。

芪松霜外用后SOD活性增强、MDA含量减少、羟脯氨酸含量增加：小鼠皮肤组织中表皮增厚，弹力纤维面积增加。可能与其所含的有效成分能通过皮肤被吸收，使皮肤中轻脯氨酸含量升高，增加皮肤中胶原蛋白的含量有关。

5.总结

1.正常小鼠外用曲安缩松可造成小鼠皮肤表皮层厚度变薄，弹力纤维减少等皮肤萎缩的皮肤形态学改变，这些改变与皮肤的SOD活力降低、羟脯氨酸含量减少、MDA含量增加有关。说明了外用曲安缩松可导致小鼠皮肤呈出现萎缩的典型改变。

2.外用芪松霜后小鼠皮肤的SOD活力增强、羟脯氨酸含量增加、MDA含量减少；小鼠皮肤表皮层厚度增厚、弹力纤维增加；说明芪松霜对外用曲安缩松导致的皮肤萎缩有防治作用。

另一项研究证明，黄芪多糖，黄芪总甙也有同样的作用，用黄芪多糖或黄芪总甙配制的含曲安缩松的外用制剂，也有增强疗效，降低不良反应的作用。

研究还证明，用醋酸泼尼松，醋酸泼尼松龙，醋酸氢化可的松，醋酸可的松，甲泼尼松，曲安西龙，地塞米松，倍他米松，氟氢可的松，氯泼尼醇，地夫可特，氟米龙，曲安奈德，布丁奈德，莫米松，氯倍他索，氟氢松，丁氯倍他松，倍氯米松，氯氟轻松，阿氯米松，卤米松，甲羟松，去羟米松，氟氢缩松，二氟可龙制备外用制剂时，可以加黄芪，黄芪多糖或黄芪总甙，以达到增加疗效，减轻不良反应的作用。

Claims (4)

1、一种疗效高副作用少的含糖皮质激素的供外用外用抗炎抗敏药剂，其特征是该药物组合物是它同时含有曲安缩松和黄芪。

2、如权利要求1所述的一种疗效高副作用少的含糖皮质激素的供外用外用抗炎抗敏药剂，其特征是该药物组合物中黄芪可以是黄芪的提取物黄芪多糖或黄芪总苷。

3、如权利要求1所述的一种疗效高副作用少的含糖皮质激素的供外用外用抗炎抗敏药剂，其特征是该药物组合物中曲安缩松可以用其他可供外用的糖皮质激素，如醋酸泼尼松，醋酸泼尼松龙，醋酸氢化可的松，醋酸可的松，甲泼尼松，曲安西龙，地塞米松，倍他米松，氟氢可的松，氯泼尼醇，地夫可特，氟米龙，曲安奈德，布丁奈德，莫米松，氯倍他索，氟氢松，丁氯倍他松，倍氯米松，氯氟轻松，阿氯米松，卤米松，甲羟松，去羟米松，氟氢缩松，二氟可龙替代。

4、如权利要求1所述的一种疗效高副作用少的含糖皮质激素的供外用抗炎抗敏药剂，该药物组合物可制成供皮肤外用的制剂。