CN104706656B - 一种用于防治痴呆的天麻提取物或组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种天麻提取物或组合物在制备防治痴呆疾病的药物中的用途。本提取物或组合物由中药天麻分离制备而得，主要含有两类活性成分，派立辛类和核苷类，其中派立辛类为主要成分，核苷类为微量调节剂，两者比例为400:1‑50:1时有较好的抗痴呆作用。本申请的核苷类均为中药天麻中分离制备而得，发明的提取物或组合物为纯植物提取物。派立辛类和核苷类成分的比例也以天麻中天然存在的派立辛类和核苷类原始比例为基础进行优化，接受度及安全性较高。

Description

一种用于防治痴呆的天麻提取物或组合物

技术领域

本发明属于天然药物领域。具体涉及一种由中药天麻中制备分离的两个活性组分组成的天麻提取物或组合物，在制备增强记忆、益智药物或防治老年痴呆等疾病药物中的用途。

背景技术

老年性痴呆是老龄社会的常见病、多发病，严重威胁患者的生活质量和生命安全，也给社会造成了沉重的负担。由于其病因病机复杂，目前尚无特效药，常用西药有脑代谢激活剂、胆碱能药物等，多对症治疗，整体预后较差，且具有肝毒、头疼等副作用。而中药具有多组分、多靶点的作用特点，针对痴呆病程长、成因复杂具有独特的优势，益智类中药也一直具有治疗痴呆的传统，从中开发疗效独特的现代中药具有坚实的理论及应用基础。

天麻为治疗脑血管疾病的常用中药，从中开发的多种制剂有良好的抗痴呆作用，如天麻醒脑胶囊和天智颗粒，但这些制剂多为大复方，药效物质基础不甚清楚。近年来石建功、张建军等研究组从中药天麻中发现一活性部位-派立辛（parishin）类，其含量在25%以上（优选50%-95%）具有较好的抗痴呆作用（中国专利200510128785.1）；派立辛含量大于35%有较好的抗血管痴呆作用（中国专利200810132404.0）；其含量大于50%有较好的脑保护作用（中国专利201210230669.0）。N6-羟苄腺苷为从天麻中发现的一个活性化合物，文献报道该成分具有较好的神经保护作用（J.Nat.Prod.,2007,70,571-574）和镇静催眠活性（中国专利200810114594.3；PCT专利200980162826.5），但该类衍生物均为化学合成品，且缺少直接和痴呆相关的药效学数据。我们通过东莨菪碱致痴呆模型及大鼠前脑脑缺血再灌注模型，初步证实了N6-羟苄腺苷具有较好的抗痴呆作用。

从以上研究结果可知，天麻中的派立辛类和N6-羟苄腺苷为天麻中近年来发现的抗痴呆活性组分，如果将二者组合起来将有望产生协同治疗作用，获得疗效更好的抗痴呆活性组分。鉴于以上思路，我们对天麻药效物质进行了较系统研究，研究结果发现，中药天麻中高含量的派立辛类化合物包括派立辛A、B、C、E、G（王莉，中国科学院大连化学物理研究所博士论文，2007），其余为微量派立辛类；天麻中发现的天然N6-羟苄腺苷类似物除N6-羟苄腺苷外，还包括腺苷、鸟苷、尿苷、腺苷葡萄糖苷、N2-对羟苄基鸟苷（J.Sep.Sci.,2007,30:1488-1495）等，但含量均较低；药效学结果表明以上诸成分均有不同程度的抗痴呆作用。从新药研发角度，本课题组通过工艺优化系统研究（另文发表），成功制备一系列天麻提取物或组合物，该提取物或组合物与文献报道的已有天麻派立辛类提取物明显不同，该组合物涵盖派立辛类和核苷类两类有效组分，且研究结果发现二者在一定比例配伍药效最显著。

发明内容

本发明提供了一种制备防治痴呆疾病的药物的天麻提取物或组合物，由中药天麻分离制备而得，主要含有两类活性成分，派立辛类和核苷类，其中派立辛类为主要成分，核苷类为微量调节剂，两者比例为400:1-50:1时有较好的抗痴呆作用。

为实现上述用途，本发明所述的有效组分包括：

1）派立辛类化合物包括单糖取代、二糖取代及苯环取代派立辛类化合物，其结构通式为：

其中，R1，R2，R3各自独立地选择：H,

Glc为β-D-吡喃葡萄糖基；两个Glc之间的链接方式为1-2,1-3,1-4,1-5或1-6连接；

2）所述核苷类化合物包括简单核苷及羟苄基取代的核苷类化合物：

其中羟苄基取代的核苷为优选化合物；

再优选，羟苄基取代的核苷类化合物为N6-羟苄腺苷。

派立辛类和核苷类的比例优选300:1-50:1。

其中单糖取代的派立辛类化合物的结构主要包括派立辛A、B、C、E、G；

其中单糖取代的派立辛类化合物为派立辛A、B、C。

其中核苷类化合物为羟苄基取代的核苷。

其中羟苄基取代的核苷类化合物为N6-羟苄腺苷。

派立辛类和核苷类的比例300:1-50:1。

以本发明所制备的天麻组合物相较文献具有如下优点和进步：

1）本发明涵盖两类有效组分，药效物质明确，且协同配伍作用较好

本发明制备的天麻组合物，涵盖派立辛类和核苷类，其中派立辛类为主要成分，具体为派立辛A、B、C、E、G；核苷类为微量成分，具体为简单核苷类如鸟苷、鸟苷、腺苷；以及羟苄基取代的核苷如N6-羟苄腺苷和N2-羟苄鸟苷。该组合物药效物质非常明确。同时，该组合物以派立辛和核苷配伍后其有效剂量大大降低且起效天数缩短，起效剂量为0.23-18mg/kg/日（大鼠、小鼠），小鼠连续给药10天即显示明显的抗痴呆作用。

2）本发明所制备的天麻提取物或组合物均为植物提取物或天然成分配伍所得

文献报道的N6衍生物合成品众多，本文报道的核苷类均为中药天麻中分离制备而得，发明的提取物或组合物为纯植物提取物。派立辛类和核苷类成分的比例也以天麻中天然存在的派立辛类和核苷类原始比例为基础进行优化，接受度及安全性较高。

具体实施方式

现结合实施例对本发明做进一步详细说明，实施例仅限于说明本发明，而非对本发明的限定。

实施例1

1、天麻提取物对前脑脑缺血再灌注损伤大鼠学习记忆的影响

动物模型：大鼠前脑脑缺血再灌注损伤模型

造模方法：大鼠腹腔注射10％水合氯醛（按0.35ml/100g体重）麻醉,颈前术区脱毛、消毒。颈部正中切口长约3cm，逐层分离，暴露并分离双侧颈总动脉（CCA）。注意勿损伤迷走神经。并在双侧颈总动脉下各置一段5cm长的丝线，用血管钳钳夹丝线两端使两动脉同时夹闭，40min后同时松开丝线，使血液重新灌流，术区局部使用青霉素粉少许，逐层缝合切口。

动物分组：按照随机的原则，将清洁级雄性SD大鼠分成正常组、模型组、治疗组和阳性药对照组。

给药方式：造模后3天开始给药，给药组动物灌服不同的天麻组分，其中P1-P3代表派立辛组分；N1-N2代表核苷类；阳性对照组灌服多奈哌齐2.5mg/kg/日；正常组和模型组给予纯净水灌服。

检测指标：实验程序包括：（1）定位航行实验（place navigation），用于测量小鼠对水迷宫学习和记忆的获取能力。实验历时4天，上、下午各训练1次，共计8次。实验观察和记录小鼠寻找并爬上平台的路线图及所需时间，即记录其潜伏期和游泳速度。（2）空间搜索实验（spatial probe test），用于测量学会寻找平台后，对平台空间位置记忆的保持能力。定位航行实验结束后，撤去平台，从同一个入水点放入水中，测其第一次到达原平台位置的时间、穿越原平台次数。

实验结果如下表所示：

表1水迷宫实验结果

*P<0.05,**P<0.01；N=10。

由以上结果可知，天麻提取物中的派立辛和核苷类其搜寻平台的距离及搜寻时间均显著小于模型组，且P1、P2、N1效果优于阳性药多奈哌齐。

实施例2：天麻提取物对前脑脑缺血再灌注损伤大鼠学习记忆的影响

动物模型：大鼠前脑脑缺血再灌注损伤模型

造模方法、动物分组、给药方式及水迷宫检测指标同实施例1，其中P4-P6代表派立辛组分；N3-N4代表核苷类。水迷宫实验结果如表2所示。

水迷宫检测结束后，断头取脑，冰块上分离皮层脑组织，匀浆后测试以下指标：

脑组织中测定脂质过氧化产物MDA含量（南京建成）和自由基清除有关的SOD，与乙酰胆碱代谢有关的指标乙酰胆碱酯酶和乙酰胆碱转移酶。结果如表3所示。

表2水迷宫实验结果

*P<0.05,**P<0.01；N=10。

水迷宫实验结果表明，天麻提取物中的派立辛和核苷类其搜寻平台的距离均显著小于模型组，且N4效果优于阳性药多奈哌齐。

表3生化指标结果

*P<0.05,**P<0.01；N=10。

生化指标检测结果表明：派立辛类中的P4和核苷中的N3能显著降低脂质过氧化产物MDA含量并增强TChE和ChAT活力，提示它们均可从不同途径改善缺血所致痴呆的病理状态。

实施例3：天麻提取物或组合物对东莨菪碱致小鼠学习记忆障碍的影响

动物模型：东莨菪碱致小鼠学习记忆障碍模型

造模、给药、分组：取雄性KM小鼠56只，按体重随机分为7组：空白对照组、模型组、多奈哌齐组、天麻PN1-PN6组，每组8只。给药组连续10天分别灌胃给予多奈哌齐2.5mg/kg（用2%Tween80+0.5%CMC-Na溶解）及天麻提取物PN1-PN6（给药剂量如表4所示）。空白对照组与模型组灌胃给予等体积的蒸馏水。

检测指标：第6-10天进行Morris水迷宫实验，第6-9天给药40min后，除空白对照组外，其余组腹腔注射东莨菪碱0.5mg/kg，空白组腹腔注射等体积的生理盐水，20min后进行Morris水迷宫定位航行实验训练，第10天给药1h后进行Morris水迷宫空间探索实验。

其中PN1-PN6代表不同比例的天麻提取物或组合物，其中派立辛和核苷类的比例及实验结果如表4所示：

表4水迷宫实验结果

***P<0.001，**p<0.01与空白组比较；#P<0.05，与模型组比较；N=8。

结果表明：派立辛类和核苷类的比例为400:1-50:1时其搜寻平台距离及时间显著小于模型组。

Claims (6)

1.一种用于防治痴呆的天麻提取物或组合物，其特征在于：由中药天麻中制备分离得到的两类活性成分组成，派立辛类和核苷类，其中派立辛类为主要成分，核苷类为微量调节剂，两者比例为400:1-50:1时有较好的抗痴呆作用；

所述派立辛类化合物包括单糖取代、二糖取代及苯环取代派立辛类化合物，结构通式为：

其中，R1，R2，R3各自独立地选择：H,

Glc为β-D-吡喃葡萄糖基；两个Glc之间的链接方式为1-2,1-3,1-4,1-5或1-6连接；

所述核苷类化合物包括简单核苷及羟苄基取代的核苷类化合物：

2.根据权利要求1所述的天麻提取物或组合物，其特征在于：其中单糖取代的派立辛类化合物的结构主要包括派立辛A、B、C、E、G；

3.根据权利要求2所述的天麻提取物或组合物，其特征在于：其中单糖取代的派立辛类化合物为派立辛A、B、C。

4.根据权利要求1所述的天麻提取物或组合物，其特征在于：其中核苷类化合物为羟苄基取代的核苷。

5.根据权利要求4所述的天麻提取物或组合物，其特征在于：其中羟苄基取代的核苷类化合物为N6-羟苄腺苷。

6.根据权利要求1所述的天麻提取物或组合物，其特征在于：派立辛类和核苷类的比例300:1-50:1。