CN104694415A - 一种降胆固醇副干酪乳杆菌益生菌巧克力的制作方法 - Google Patents

一种降胆固醇副干酪乳杆菌益生菌巧克力的制作方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种降胆固醇副干酪乳杆菌KL1-Liu益生菌巧克力的制作方法，适用于糖果制品中益生菌巧克力的生产。本发明配方是由副干酪乳杆菌KL1-Liu菌粉、半甜黑巧克力浆、白巧克力浆、芝麻、抹茶粉、草莓粉、杏仁碎、葡萄干碎组成。本发明利用副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)KL1-Liu CGMCC No.7029，经高密度发酵、离心浓缩、微胶囊处理及冷冻干燥等工序制备微胶囊菌粉；将原料经过精磨、精炼、调温、加入微胶囊菌粉、冷却、脱模及包装后制备成益生菌巧克力。本发明制作的益生菌巧克力具有良好的贮藏稳定性。本发明制作的巧克力原料来源方便，工艺简单，制作周期短，适于工业化生产。

Description

一种降胆固醇副干酪乳杆菌益生菌巧克力的制作方法
技术领域
本发明涉及一种降胆固醇的副干酪乳杆菌益生菌巧克力制作方法，适用于糖果制品中降胆固醇益生菌巧克力的制作和生产。
背景技术
益生菌(Probiotics)因其能改善肠道微生物生态平衡并控制肠道感染、降低血清胆固醇水平、改善乳糖不耐症和刺激特异性或非特异性免疫反应，以及增强免疫力等作用而被越来越多的研究者和消费大众推崇。但目前食品中的益生菌制品主要集中在功能性酸奶和益生菌奶片方面。
巧克力是一种美味时尚的食品，随着人们对生活水平要求的提高，其在国内的消费量日益增加。但巧克力产品因具有高糖与高脂肪的特点使得很多注重健康的消费者严谨控制自己的食用量，甚至将其拒之门外。本发明将可可的营养作用和益生菌保健功效巧妙结合，使人们在尽情享受美味丝滑的巧克力产品的同时又达到了降低血清胆固醇、调节肠道菌群平衡等效果。
将副干酪乳杆菌KL1-Liu制成的发酵剂用于动物实验，实验表明其具有显著的降血清胆固醇的功效。试验数据显示，该菌对高胆固醇血症大鼠血清的TC、TG、LDL-C含量分别有极显著(P＜0.01)和显著(P＜0.05)降低功效，而对高胆固醇血症大鼠血清的HDL-C含量有一定程度升高作用，说明了副干酪乳酸菌发酵剂对实验型高胆固醇血症大鼠血清有显著的降胆固醇作用。
进入人体的益生菌必须具有较高的活菌数量和定植能力，确保经过消化道后能大量存活而发挥其益生菌的作用。为此将具有降胆固醇作用与耐受胃肠道逆环境的副干酪乳杆菌KL1-Liu采用特殊的微胶囊化技术，处理后的微胶囊菌粉能耐受巧克力基料和夹心馅料的制作温度，并在常温下保持活力。检测结果表明：该产品益生菌活菌数量≥108CFU/g，菌落总数、大肠菌群、可可含量均合格。
目前国内关于巧克力的专利主要集中在制作方法和外形及包装设计方面。天津市食品加工工程中心申请的“一种含益生菌夹心的巧克力”(公开号：CN104068187A)，将益生菌加入到夹心馅料中，但专利中没有涉及益生菌活菌检测试验。润盈生物工程(上海)有限公司公开了专利“一种含益生菌的巧克力及其制作方法和用途”(公开号：CN101518294A)，该发明虽然涉及到将菌体进行冻干或经微胶囊处理，但其气体悬浮微胶囊技术的设备投资较大，且专利中提及的益生菌为较普遍的双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌。但是关于具有降胆固醇功效的益生菌巧克力的制作方法国内尚未见专利和文献报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种利用产胆盐水解酶并具有降低血清胆固醇功效的副干酪乳杆菌KL1-Liu制备降胆固醇益生菌巧克力的制作方法。
本发明是通过以下技术方案实现的：
为达到上述目的，本发明的益生菌巧克力配方组成(W/W，质量分数)：配方1(芝麻夹心口味)：副干酪乳杆菌KL1-Liu微胶囊菌粉0.1％～1.0％[益生菌活菌数为(1.0～5.0)×1011CFU/g]，半甜黑巧克力浆60％～70％，白巧克力浆30％～38％，芝麻2～4％；配方2(抹茶口味)：副干酪乳杆菌KL1-Liu微胶囊菌粉0.1％～1.0％[益生菌活菌数为(1.0～5.0)×1011CFU/g]，白巧克力浆95％～97％，抹茶粉3％～5％；配方3(草莓口味)：副干酪乳杆菌KL1-Liu微胶囊菌粉0.1％～1.0％[益生菌活菌数为(1.0～5.0)×1011CFU/g]，半甜黑巧克力浆90％～95％，草莓粉5％～10％；配方4(果仁口味)：半甜黑巧克力浆60％～70％，白巧克力浆20％～25％，杏仁碎8％～12％，葡萄干碎3％～5％。
上述配方中的半甜黑巧克力浆由一定比例的可可液块、可可脂、白砂糖、食盐、卵磷脂以及香料混合在44℃～48℃下融化后制备得到。
上述配方中的白巧克力浆由一定比例的可可脂、淡奶油、全脂奶粉以及白砂糖混合在44℃～48℃下融化后制备得到。
所述方法中，副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)KL1-Liu分离筛选自吉林、呼和浩特市普通家庭的藏灵菇(又称开菲尔粒)，并已于2012年12月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位地址：北京市朝阳区大屯路，其保藏号为：CGMCC No.7029(菌株KL1-Liu)。在含有碳酸钙和纳他霉素的MRS选择性培养基上，副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)KL1-Liu菌株的菌落大小2～3mm，菌落有较高黏性，表面粗糙如雪花状，边缘不规则，无光泽，扁平，灰白色，半透明；个体形态呈杆状，长短不等，短链状排列，G+无芽孢杆菌。
所述方法中，副干酪乳杆菌KL1-Liu微胶囊菌粉为副干酪乳杆菌KL1-Liu微胶囊处理后的菌粉与冻干保护剂的混合物。
所述方法中，副干酪乳杆菌KL1-Liu微胶囊菌粉的制备步骤如下：
(1)采用立式高速冷冻离心机将经过扩大培养与高密度发酵的副干酪乳杆菌KL1-Liu发酵液于4℃条件下，6000r/min离心10～20min，弃上清液，收集得到菌泥。
(2)将收集的菌泥经过微胶囊化处理，按离心前发酵液1/10体积的量，加入含有11％～16％脱脂奶粉(伊利牌高蛋白高钙脱脂奶粉)冻干保护剂的冻干机中，混合均匀后，得到微胶囊化浓缩活菌制剂。
(3)将微胶囊化浓缩活菌制剂于-40℃低温冰箱中预冻10h至完全冻结状态，得到预冻微胶囊活菌制剂。
(4)利用6L LABCONCO真空冷冻干燥机(美国)将预冻活菌制剂于冻干温 度-55℃、真空度0.14mBar的条件下，冻干48h至完全干燥状态，得到冻干微胶囊活菌制剂。
所述方法中，益生菌巧克力中的主要菌种为藏灵菇源副干酪乳杆菌KL1-Liu益生菌。该菌株具有良好的降低血清胆固醇功效，并有整肠作用，可在肠道内建立一个有利于健康长寿的微生态平衡系统，促进消化吸收，并有改善便秘作用，可以预防消费者的心血管疾病、胃肠道疾病等病症。
上述方法得到降胆固醇的副干酪乳杆菌KL1-Liu益生菌巧克力制作配方及其产品，以及专用生产菌株属于本发明保护范围。
附图说明
图1为应用副干酪乳杆菌KL1-Liu生产降胆固醇芝麻夹心口味益生菌巧克力的流程图，说明如下：
(1)半甜黑巧克力浆制备：将可可液块35％～40％(W/W，质量分数，以下相同)，可可脂20％～25％，白砂糖35％～40％以及食盐0.05％～0.1％等原料按比例经过混合，将上述混合物投入精磨机进行精磨，控制合适的温度，进行适当时间的精炼，在精炼快结束时加入卵磷脂0.3％～0.5％，香料0.05％～0.1％，精炼结束后由于巧克力浆温度较高，需在保温缸中调温，然后制备得到半甜黑巧克力浆。
(2)外壳制备：在30℃条件下将半甜黑巧克力浆浇注到事先经过清洗、干燥的半球形硅胶模具中适量注模，制备得到巧克力外壳。
(3)白巧克力浆制备：将可可脂65％～70％，淡奶油8％～10％，白砂糖10％～15％，全脂奶粉10％～15％等原料经过混合、精磨、精炼以及调温后制备得到白巧克力浆。
(4)夹心制备：将炒熟并研磨的芝麻粉和副干酪乳杆菌KL1-Liu微胶囊菌粉与白巧克力浆混匀，经冷却后成型，制备得到芝麻夹心球。
(5)封顶：将步骤(4)中制得的芝麻夹心球投入步骤(2)制备得到的巧克力外壳中，然后浇注半甜黑巧克力浆至模具顶部。
(6)冷却：将带巧克力的模具先置于8～10℃的冷藏室内，静置25～30min左右，料温降至12～15℃，取出备用。
(7)脱模：轻轻挤压模具，将巧克力从中取出，尽量保持巧克力的完整形态。
(8)包装：选用铝箔纸对巧克力进行包装，制备得到半球形芝麻夹心口味益生菌巧克力。
图2为应用副干酪乳杆菌KL1-Liu生产降胆固醇抹茶(或草莓)口味益生菌巧克力的流程图，说明如下：
(1)巧克力浆制备：抹茶口味巧克力浆制备同芝麻夹心口味益生菌巧克力制备流程图中步骤(3)白巧克力浆制备中所述；草莓口味巧克力浆制备同芝麻夹心口味益生菌巧克力制备流程图中步骤(1)半甜黑巧克力浆制备中所述。
(2)注模：将巧克力浆调温到30℃，然后加入副干酪乳杆菌KL1-Liu微胶囊菌粉和抹茶粉(或草莓粉)，混匀，适量注模，模具与芝麻夹心口味相同。
后续制备流程同芝麻夹心口味益生菌巧克力工艺中步骤(6)-(8)所述，经过冷却成型、脱模以及包装，制备得到半球形抹茶(或草莓)口味益生菌巧克力。
图3为应用副干酪乳杆菌KL1-Liu生产降胆固醇果仁口味益生菌巧克力的流程图，说明如下：
(1)黑巧克力层制备：半甜黑巧克力浆的制备同芝麻夹心口味益生菌巧克力工艺中步骤(1)所述，然后加入副干酪乳杆菌KL1-Liu微胶囊菌粉、葡萄干碎和杏仁碎，混合均匀后适量注入心形模具。
(2)白巧克力层制备：白巧克力浆的制备同芝麻夹心口味益生菌巧克力工艺中步骤(3)所述，然后二次注模，即将白巧克力浆注入冷却到40℃左右的黑巧克力层上，注意注入过早会导致交界处明显融合，过晚容易导致黑白两层结合不佳，黑巧克力层与白巧克力层高度比例约为3∶1。
后续制备流程同芝麻夹心口味益生菌巧克力工艺中步骤(6)-(8)所述，经过进一步冷却成型、脱模以及包装，制备得到心形果仁口味益生菌巧克力。
本发明制作的益生菌巧克力原料来源方便，工艺简单，制作周期短，操作简单，对设备要求较低，成品益生菌活菌数量明显高于同类产品，适于工业化生产。
具体实施方式
下述实施例对本发明作进一步说明而不限制本发明的保护范围。
下述实施例中的实验方法，如无特别说明，均为常规方法。
下述实施例中的百分含量，如无特别说明，均为质量体积比浓度(W/V)。
实施例1、降胆固醇的副干酪乳杆菌KL1-Liu益生菌巧克力制作方法
(1)副干酪乳杆菌KL1-Liu菌株的活化、扩大培养与高密度发酵
将活化好的副干酪乳杆菌KL1-Liu菌株经改良MRS培养基扩大培养与高密度发酵，得到活菌数为(1.0～5.0)×1010CFU/mL的发酵液。
(2)副干酪乳杆菌KL1-Liu菌株的离心浓缩与冷冻干燥
将发酵液于4℃条件下，6000r/min离心10～20min，弃上清液，收集得到菌泥；将收集的菌泥经过微胶囊化处理，在灭菌冻干瓶中，按离心前发酵液1/10体积的量，加入到盛有200mL的11％～16％脱脂奶粉(伊利牌高蛋白高钙脱脂奶粉)作为冻干保护剂的冻干机中，混合均匀后，得到微胶囊化浓缩活菌制剂。将浓缩活菌制剂于-40℃低温冰箱中预冻10h至完全冻结状态，得到预冻微胶囊活菌制剂。利用美国6L LABCONCO真空冷冻干燥机将预冻发酵剂于-55℃、真空度0.14mBar的条件下，冻干48h至完全干燥状态，得到副干酪乳杆菌KL1-Liu益生菌微胶囊菌粉。
(3)副干酪乳杆菌KL1-Liu微胶囊菌粉活菌数量的检测
称取25g微胶囊菌粉放入含有225mL灭菌生理盐水中，采用拍击式匀质器以8 000～10 000r/min的速度处理1min，充分振荡后，制成10-1的均匀稀释液；再以9mL灭菌生理盐水做10倍递增稀释至10-11；取10-9～10-11的稀释液各1mL置于无菌平皿中，倒入溶化并冷却至46℃的改良MRS培养基约15mL，迅速轻轻旋动平皿，使培养基与菌液充分混匀，每个稀释度3次重复。同时将改良MRS培养基注入加有1mL无菌生理盐水的灭菌平皿内作空白对照。待培养基凝固后，翻转平板，置(36±1)℃温箱中培养(48±2)h，待菌落长出后即可计数。其平板菌落计数结果显示，每1g微胶囊菌粉中副干酪乳杆菌KL1-Liu的活菌数量为(1.0～5.0)×1011CFU。
(4)益生菌巧克力的制作工艺
1)芝麻夹心口味制作工艺：先将可可液块35％～40％(W/W，质量分数，以下相同)，可可脂20％～25％，白砂糖35％～40％以及食盐0.05～0.1％等原料按比例混合，然后投入精磨机进行精磨、精炼，在精炼快结束时加入卵磷脂0.3％～0.5％和香料0.05％～0.1％，经过混匀调温制备得到半甜黑巧克力浆，在30℃条件下将半甜黑巧克力浆浇注到模具中，制备得到巧克力外壳，将可可脂65％～70％，淡奶油8％～10％，白砂糖10％～15％，全脂奶粉10％～15％经过混合、精磨、精炼以及调温后制备得到白巧克力浆，将炒熟并研磨的芝麻粉和副干酪乳杆菌KL1-Liu微胶囊菌粉与白巧克力浆混匀，经冷却后成型，制备得到芝麻夹心球，将芝麻夹心球投入巧克力外壳中，浇注半甜黑巧克力浆至模具顶部，将巧克力置于8～10℃的冷藏室内冷却25～30min，后轻轻挤压模具，将巧克力脱模取出，选用铝箔纸对巧克力进行包装，制备得到芝麻夹心口味益生菌巧克力。
2)抹茶(或草莓)口味益生菌巧克力制作工艺：首先参照芝麻夹心口味制作工艺中巧克力浆制作方法制备白巧克力浆(抹茶味)或半甜黑巧克力浆(草莓味)，然后将巧克力浆调温到30℃，然后加入副干酪乳杆菌KL1-Liu微胶囊菌粉和抹茶粉(或草莓粉)，混匀，适量注模，经过冷却成型、脱模、包装，制备得到抹茶(或草莓)口味益生菌巧克力。
3)果仁口味益生菌巧克力制作工艺：参照芝麻夹心口味制作工艺中巧克力浆制作方法制备半甜黑巧克力浆，然后加入副干酪乳杆菌KL1-Liu微胶囊菌粉、葡萄干碎和杏仁碎，混合均匀后适量注模，适当冷却后注入白巧克力浆，其中黑巧克力层与白巧克力层高度比例约为3∶1，经过进一步冷却成型、脱模以及包装，制备得到果仁口味益生菌巧克力。
(5)益生菌巧克力的感官评价
评定小组为专业的评价人员所构成(即由受过专业感官评价培训的人员组成)，共有16人，采用描述性的检测方法分别对样品的外观、色泽、风味、口感、 质地进行细致的描述，以感官评价的结果作为益生菌巧克力主要配料的单因素多水平试验的评定标准。益生菌巧克力的感官评定标准及评价指标见表1。
根据表1感官评定标准作为评价益生菌巧克力感官品质的试验指标，通过正交试验确定了副干酪乳杆菌KL1-Liu益生菌巧克力的较优组合配方，以较优组合配方制作的益生菌巧克力产品，其外形完整，表面光滑，薄厚均匀，边缘整齐均匀一致，有光泽，不发花或发白，巧克力滋味纯正，香气适中，无不良气味，口感细腻润滑无粗糙感或糊口，巧克力剖面紧密，无明显气孔，质地均匀，内质结构细密均匀且断面组织紧密，其感官评定分数最高。
表1 益生菌巧克力感官评定标准
(6)益生菌巧克力中副干酪乳杆菌KL1-Liu活菌数量的检测
称取25g益生菌巧克力放入含有225mL灭菌生理盐水中，采用拍击式匀质器以8 000～10 000r/min的速度处理1min，充分振荡后，制成10-1的均匀稀释液。再以9mL灭菌生理盐水做10倍递增稀释至10-11，取10-9～10-11的稀释液各1mL置于无菌平皿中，倒入溶化并冷却至46℃的改良MRS培养基约15mL，迅速轻轻旋动平皿，使培养基与菌液充分混匀，每个稀释度3次重复。同。同时将改良MRS培养基注入加有1mL无菌生理盐水的灭菌平皿内作空白对照。待培养基凝固后，翻转平板，置(36±1)℃温箱中培养(48±2)h，待菌落长出后即可计数。其平板菌落计数结果显示，每1g益生菌巧克力中副干酪乳杆菌KL1-Liu的活菌数量为(1.0～5.0)×109CFU，见表2所示。
(7)益生菌巧克力中副干酪乳杆菌KL1-Liu活菌保质期试验
将副干酪乳杆菌KL1-Liu益生菌巧克力置于常温下，每隔2个月采用平板菌落计数法检测益生菌巧克力中副干酪乳杆菌KL1-Liu的活菌数量，检测方法同上述(6)的操作步骤。其平板菌落计数结果见表2。
表2 益生菌巧克力中副干酪乳杆菌KL1-Liu活菌保质期结果
由表2可见，益生菌巧克力中副干酪乳杆菌KL1-Liu的活菌数检测结果为4.75×109CFU/g，符合益生菌产品的活菌数量大于106CFU/g的标准。在常温下放置一年后，在相同方法条件下测得益生菌巧克力的活菌数为3.6×108CFU/g，显示该产品的活菌数量仍然显著大于106CFU/g的标准，益生菌的活菌数量明显高于同类产品。说明本发明制作的副干酪乳杆菌KL1-Liu益生菌巧克力的活菌保期至少1年以上，表明该益生菌巧克力具有良好的贮藏稳定性。
采用上述发酵生产技术、冻干工艺和益生菌巧克力制备工艺所得到的产胆盐水解酶副干酪乳杆菌KL1-Liu益生菌巧克力的活菌数量均可达到109CFU/g以上，常温贮藏1年的副干酪乳杆菌KL1-Liu的活菌数量达到108CFU/g以上，远大于106CFU/g的标准，仍可发挥降低血清胆固醇的保健功效。本发明制作的益生菌巧克力工艺简单，制作周期短，操作简单，对设备要求较低，尤其是发酵培养基的原料和冻干保护剂及益生菌巧克力的辅料成本均较低，适于工业化生产。利用产胆盐水解酶副干酪乳杆菌KL1-Liu菌株开发益生菌巧克力、益生菌片、益生菌酸奶等功能性食品具有广阔的市场前景。
本专利所属项目1：科技部国家科技重大专项“抗病转基因羊新品种培育”子课题“抗病转基因羊扩繁体系的建立/抗病转基因羊抗病、生产性能及安全评价”
项目编号：2013ZX08008-005
项目起止时间：2013.01-2013.12
项目负责人：刘慧
本专利所属项目2：“十二五”农村领域国家科技计划课题“动物源食品HACCP体系建设及致病菌高通量检测技术”
项目编号：2012BAD28B02-01
项目起止时间：2012.01-2015.12
项目负责人：孔保华
本专利所属项目3：科技部农业科技成果转化资金项目“利用藏灵菇源产胆盐水解酶乳酸菌生产功能性酸奶技术转化”
项目编号：2013GB2A000006
项目起止时间：2013.09-2015.08
项目负责人：白永强
本专利所属项目3：北京市教育委员会科技计划面上项目“豆酱发酵过程中有害微生物多样性分析及安全性评价”
项目编号：KM201310020010
项目起止时间：2013.01-2015.12
项目负责人：高秀芝

Claims (5)

1.副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)KL1-Liu CGMCC No.7029。
2.一种利用产胆盐水解酶的副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)KL1-Liu CGMCC No.7029制备芝麻夹心口味益生菌巧克力的方法，其特征在于：(1)益生菌巧克力配方组成：副干酪乳杆菌KL1-Liu微胶囊菌粉0.1％～1.0％，半甜黑巧克力浆60％～70％，白巧克力浆30％～38％，芝麻2％～4％；(2)KL1-Liu益生菌微胶囊菌粉的制备：将经过扩大培养与高密度发酵的副干酪乳杆菌KL1-Liu发酵液于4℃条件下，6000r/min离心10～20min，弃上清液，收集得到菌泥；将收集的菌泥经过微胶囊化处理，按离心前发酵液1/10体积的量，加入含有11％～16％脱脂奶粉冻干保护剂的冻干机中，混合均匀后，得到微胶囊化浓缩活菌制剂；将浓缩活菌制剂于-40℃低温冰箱中预冻10h至完全冻结状态，得到预冻微胶囊活菌制剂；利用美国6L LABCONCO真空冷冻干燥机将预冻发酵剂于-55℃、真空度0.14mBar的条件下，冻干48h至完全干燥状态，得到副干酪乳杆菌KL1-Liu益生菌微胶囊菌粉；(3)芝麻夹心口味益生菌巧克力的制备：将经过精磨、精炼、调温得到的半甜黑巧克力浆制备得到巧克力外壳；将经过精磨、精炼、调温得到的白巧克力浆与益生菌微胶囊菌粉和芝麻粉混合制成芝麻夹心；将芝麻夹心球投入巧克力外壳中，经封顶、冷却、脱模、包装后制备成芝麻夹心口味益生菌巧克力。
3.一种利用产胆盐水解酶的副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)KL1-LiuCGMCC No.7029制备抹茶口味益生菌巧克力的方法，其特征在于：(1)益生菌巧克力配方组成：副干酪乳杆菌KL1-Liu微胶囊菌粉0.1％～1.0％，白巧克力浆95％～97％，抹茶粉3％～5％；(2)KL1-Liu益生菌微胶囊菌粉的制备：将经过扩大培养与高密度发酵的副干酪乳杆菌KL1-Liu发酵液于4℃条件下，6000r/min离心10～20min，弃上清液，收集得到菌泥；将收集的菌泥经过微胶囊化处理，按离心前发酵液1/10体积的量，加入含有11％～16％脱脂奶粉冻干保护剂的冻干机中，混合均匀后，得到微胶囊化浓缩活菌制剂；将浓缩活菌制剂于-40℃低温冰箱中预冻10h至完全冻结状态，得到预冻微胶囊活菌制剂；利用美国6LLABCONCO真空冷冻干燥机将预冻发酵剂于-55℃、真空度0.14mBar的条件下，冻干48h至完全干燥状态，得到副干酪乳杆菌KL1-Liu益生菌微胶囊菌粉；(3)抹茶口味益生菌巧克力的制备：将经过精磨、精炼、调温得到的白巧克力浆与抹茶粉混匀，经注模、冷却、脱模、包装后制备成抹茶口味益生菌巧克力。
4.一种利用产胆盐水解酶的副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)KL1-LiuCGMCC No.7029制备草莓口味益生菌巧克力的方法，其特征在于：(1)益生菌巧克力配方组成：副干酪乳杆菌KL1-Liu微胶囊菌粉0.1％～1.0％，半甜黑巧克力浆90％～95％，草莓粉5％～10％；(2)KL1-Liu益生菌微胶囊菌粉的制备：将经过扩大培养与高密度发酵的副干酪乳杆菌KL1-Liu发酵液于4℃条件下，6000r/min离心10～20min，弃上清液，收集得到菌泥；将收集的菌泥经过微胶囊化处理，按离心前发酵液1/10体积的量，加入含有11％～16％脱脂奶粉冻干保护剂的冻干机中，混合均匀后，得到微胶囊化浓缩活菌制剂；将浓缩活菌制剂于-40℃低温冰箱中预冻10h至完全冻结状态，得到预冻微胶囊活菌制剂；利用美国6L LABCONCO真空冷冻干燥机将预冻发酵剂于-55℃、真空度0.14mBar的条件下，冻干48h至完全干燥状态，得到副干酪乳杆菌KL1-Liu益生菌微胶囊菌粉；(3)草莓口味益生菌巧克力的制备：将经过精磨、精炼、调温得到的半甜黑巧克力浆与草莓粉混匀，经注模、冷却、脱模、包装后制备成草莓口味益生菌巧克力。
5.一种利用产胆盐水解酶的副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)KL1-LiuCGMCC No.7029制备果仁口味益生菌巧克力的方法，其特征在于：(1)益生菌巧克力配方组成：半甜黑巧克力浆60％～70％，白巧克力浆20％～25％，杏仁碎8％～12％，葡萄干碎3％～5％；(2)KL1-Liu益生菌微胶囊菌粉的制备：将经过扩大培养与高密度发酵的副干酪乳杆菌KL1-Liu发酵液于4℃条件下，6000r/min离心10～20min，弃上清液，收集得到菌泥；将收集的菌泥经过微胶囊化处理，按离心前发酵液1/10体积的量，加入含有11％～16％脱脂奶粉冻干保护剂的冻干机中，混合均匀后，得到微胶囊化浓缩活菌制剂；将浓缩活菌制剂于-40℃低温冰箱中预冻10h至完全冻结状态，得到预冻微胶囊活菌制剂；利用美国6L LABCONCO真空冷冻干燥机将预冻发酵剂于-55℃、真空度0.14mBar的条件下，冻干48h至完全干燥状态，得到副干酪乳杆菌KL1-Liu益生菌微胶囊菌粉；(3)果仁口味益生菌巧克力的制备：将经过精磨、精炼、调温得到的半甜黑巧克力浆与副干酪乳杆菌KL1-Liu微胶囊菌粉、葡萄干碎和杏仁碎混合均匀后注模制成黑巧克力层；将经过精磨、精炼、调温得到的白巧克力浆注模至冷却到40℃左右的黑巧克力层上，黑巧克力层与白巧克力层高度比例约为3∶1，经过进一步冷却成型、脱模及包装，制备得到果仁口味益生菌巧克力。
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