CN104693320B - 一种从海蜇中提取透明质酸的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种以海蜇为原料提取透明质酸的方法，包括原料处理、高压微射流超微粉碎处理、发酵、提取、醇沉、干燥，采用本发明的方法得到的透明质酸，具有如下性状：白色无定形粉末,无臭无味，易吸湿，含量在97％以上。
Description
技术领域
本发明涉及一种透明质酸的制备方法，具体涉及一种从海蜇中提取透明质酸的方法。
背景技术
海蜇是一种大型的食用水母，在我国有着广泛的分布，具有很高的经济价值和营养价值。据测定，每百克海蜇含蛋白质12.3克，碳水化合物4克，钙182毫克，碘132微克以及多种维生素及胶原蛋白。胶原蛋白含亲水性的天然保湿因子，且三螺旋结构能强劲锁住水分，对皮肤的渗透性强，可透过角质层与皮肤上皮细胞结合，参与和改善皮肤细胞的代谢，使皮肤中的胶原蛋白活性加强，它能保持角质层水分及纤维结构的完整性，改善皮肤细胞生存环境和促进皮肤组织的新陈代谢，增强血液循环，达到滋润皮肤的目的。皮肤的光泽取决于含水量，胶原蛋白良好的保水能力使皮肤水润亮泽，散发健康的光彩。当胶原蛋白被皮肤吸收后，填充在皮肤真皮之间，增加皮肤紧密度，产生皮肤张力，缩小毛孔，使皮肤紧绷而富有弹性。真皮中丰满的胶原蛋白层将皮肤细胞撑起，结合保湿和抑制皱纹的作用，共同达到舒展粗纹、淡化细纹的功效。活性胶原蛋白本身具有消炎和更新肌肤的作用，能直接渗入肌肤用于填充深的皱纹、皮肤损伤造成的缺损(如青春痘疤)和修补脸形的缺陷等。
海蜇体内含有保湿因子，保湿因子的典型代表物透明质酸(HA)，HA是目前世界公认的性能优越的保湿因子，其分子中的羧基和其他极性基因可与水形成氢键而结合大量的水，当含量低于0.1％时，HA可结合其质量1000倍的水，这种天然保湿因子可使皮肤含水量增加，表皮角质层柔软，改善皮肤表面的血液循环，增强皮肤弹性，阻止表皮细胞纤维化，从而起到护肤作用。但是HA与蛋白质是以结合状态存在，不易提取和纯化。随着人们生活水平的日益提高，越来越多的人更注重健康与美容，而纯天然提取制成的美容化妆品将更受青睐，市场前景潜力很大。
发明内容
本发明提供了一种工艺简单、效率高的以海蜇为原料提取透明质酸的方法。
本发明是通过如下技术方案实现的:
一种从海蜇中提取透明质酸的方法，包括下述步骤:
1)原料处理：取新鲜的海蜇，剪碎，阴凉处晾干；
2)高压微射流超微粉碎处理：将晾干后的海蜇，按照1:2-3的重量比加入纯净水，用高速剪切乳化机处理10-20min，转速为8000-12000r/min，然后用高压微射流超微粉碎设备于25℃进行处理，处理压力为80-120MPa，处理次数为2-3次，得到膏状浆液；
3)发酵：将步骤2)得到的膏状浆液经过超高温瞬时灭菌，然后调整pH6.5-7.0，按体积百分比为10-15％接入培养成熟的乳酸菌液体菌种，放入发酵罐中发酵，发酵温度在35-37℃，发酵时间3-4h；
4)提取：将步骤3)得到的发酵液经过超高温瞬时灭菌，加3-5重量份0.5M醋酸加热回流提取6-8h，过滤，收集滤液，向滤液中加入等体积的Seavg试剂(氯仿、正丁醇混合液(氯仿：正丁醇＝4：1))，搅拌均匀，静置；
5)醇沉：待静置分层后取上清液加入2重量份95％(v/v)乙醇搅拌均匀，静置使分层，过滤；
6)取滤液，重复步骤5)一次；
7)干燥：将上步骤两次醇沉后得到的滤液，进行真空干燥，真空度维持在0.1MPa，分两个阶段干燥，第一阶段保持温度85℃，时间维持1小时，然后升温，第二阶段温度115℃，时间维持3小时，即得成品。
本发明步骤3)中乳酸菌为保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、乳脂链球菌、两歧双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌。
采用本发明的方法得到的透明质酸，具有如下性状：白色无定形粉末,无臭无味，易吸湿，含量在97％以上。
采用本发明的方法以海蜇为原料提取透明质酸，与现有技术相比，本发明的优点：
1、本发明通过使用高压微射流超微粉碎技术处理海蜇原料，利用高压微射流超微粉碎设备产生挤压力、剪切力、冲击力，经过液-液、液-固之间的高速撞击、高剪切、空穴作用等，使物料的分子结构发生变化。高压微射流超微粉碎设备可以做到纳米分散，细化效果可达0.lum甚至以下，压力高达100-200MPa，得到的溶液颗粒粒径分布均匀，具有操作简单、无污染、可在线清洁消毒、可高效率进行细胞破壁等诸多优点。
2、本发明通过乳酸菌来处理海蜇，具有促进蛋白质的分解，在接下来的提取步骤中，加强了提取效果，得到的产品含量高。
具体实施方式
下面以实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。
实施例1：
一种从海蜇中提取透明质酸的方法，包括下述步骤:
1)原料处理：取新鲜的海蜇，剪碎，阴凉处晾干；
2)高压微射流超微粉碎处理：将晾干后的海蜇，加2重量份纯净水，用高速剪切乳化机处理10min，转速为12000r/min，然后用高压微射流超微粉碎设备于25℃进行处理，处理压力为80MPa，处理次数为3次，得到膏状浆液；
3)发酵：将步骤2)得到的膏状浆液经过超高温瞬时灭菌，然后调整pH6.5，按体积百分比为15％接入培养成熟的保加利亚乳杆菌液体菌种，放入发酵罐中发酵，发酵温度在35-37℃，发酵时间4h；
4)提取：将步骤3)得到的发酵液经过超高温瞬时灭菌，加5重量份0.5M醋酸加热回流提取8h，过滤，收集滤液，向滤液中加入等体积的Seavg试剂(氯仿、正丁醇混合液(氯仿：正丁醇＝4：1))，搅拌均匀，静置；
5)醇沉：待静置分层后取上清液加入2重量份95％(v/v)乙醇搅拌均匀，静置使分层，过滤；
6)取滤液，重复步骤5)一次；
7)干燥：将上步骤两次醇沉后得到的滤液，进行真空干燥，真空度维持在0.1MPa，分两个阶段干燥，第一阶段保持温度85℃，时间维持1小时，然后升温，第二阶段温度115℃，时间维持3小时，即得成品。
实施例2：
一种从海蜇中提取透明质酸的方法，包括下述步骤:
1)原料处理：取新鲜的海蜇，剪碎，阴凉处晾干；
2)高压微射流超微粉碎处理：将晾干后的海蜇，加3重量份纯净水，用高速剪切乳化机处理15min，转速为10000r/min，然后用高压微射流超微粉碎设备于25℃进行处理，处理压力为100MPa，处理次数为2次，得到膏状浆液；
3)发酵：将步骤2)得到的膏状浆液经过超高温瞬时灭菌，然后调整pH7.0，按体积百分比为10％接入培养成熟的嗜酸乳杆菌液体菌种，放入发酵罐中发酵，发酵温度在35-37℃，发酵时间3h；
4)提取：将步骤3)得到的发酵液经过超高温瞬时灭菌，加3重量份0.5M醋酸加热回流提取6h，过滤，收集滤液，向滤液中加入等体积的Seavg试剂(氯仿、正丁醇混合液(氯仿：正丁醇＝4：1))，搅拌均匀，静置；
5)醇沉：待静置分层后取上清液加入2重量份95％(v/v)乙醇搅拌均匀，静置使分层，过滤；
6)取滤液，重复步骤5)一次；
7)干燥：将上步骤两次醇沉后得到的滤液，进行真空干燥，真空度维持在0.1MPa，分两个阶段干燥，第一阶段保持温度85℃，时间维持1小时，然后升温，第二阶段温度115℃，时间维持3小时，即得成品。
实施例3：
一种从海蜇中提取透明质酸的方法，包括下述步骤:
1)原料处理：取新鲜的海蜇，剪碎，阴凉处晾干；
2)高压微射流超微粉碎处理：将晾干后的海蜇，加2重量份纯净水，用高速剪切乳化机处理20min，转速为8000r/min，然后用高压微射流超微粉碎设备于25℃进行处理，处理压力为120MPa，处理次数为2次，得到膏状浆液；
3)发酵：将步骤2)得到的膏状浆液经过超高温瞬时灭菌，然后调整pH6.5，按体积百分比为12％接入培养成熟的乳脂链球菌液体菌种，放入发酵罐中发酵，发酵温度在35-37℃，发酵时间4h；
4)提取：将步骤3)得到的发酵液经过超高温瞬时灭菌，加5重量份0.5M醋酸加热回流提取6h，过滤，收集滤液，向滤液中加入等体积的Seavg试剂(氯仿、正丁醇混合液(氯仿：正丁醇＝4：1))，搅拌均匀，静置；
5)醇沉：待静置分层后取上清液加入2重量份95％(v/v)乙醇搅拌均匀，静置使分层，过滤；
6)取滤液，重复步骤5)一次；
7)干燥：将上步骤两次醇沉后得到的滤液，进行真空干燥，真空度维持在0.1MPa，分两个阶段干燥，第一阶段保持温度85℃，时间维持1小时，然后升温，第二阶段温度115℃，时间维持3小时，即得成品。
实施例4：
将实施例1所得到的产品，用红外分光光度计法进行鉴定。
检测仪器：红外光谱仪；
波长范围：4000～400cm-1,扫描速度64次/s，样品制备采用溴化钾压片法。
按红外分光光谱法操作方法进行操作，扫描出的图谱与标准HA的图谱对比，保留时间一致即可。
Claims (2)
1.一种从海蜇中提取透明质酸的方法，其特征在于，包括下述步骤:
1)原料处理：取新鲜的海蜇，剪碎，阴凉处晾干；
2)高压微射流超微粉碎处理：将晾干后的海蜇，按照1:2-3的重量比加入纯净水，用高速剪切乳化机处理10-20min，转速为8000-12000r/min，然后用高压微射流超微粉碎设备于25℃进行处理，处理压力为80-120MPa，处理次数为2-3次，得到膏状浆液；
3)发酵：将步骤2)得到的膏状浆液经过超高温瞬时灭菌，然后调整pH6.5-7.0，按体积百分比为10-15％接入培养成熟的乳酸菌液体菌种，放入发酵罐中发酵，发酵温度在35-37℃，发酵时间3-4h；
4)提取：将步骤3)得到的发酵液经过超高温瞬时灭菌，加3-5重量份0.5M醋酸加热回流提取6-8h，过滤，收集滤液，向滤液中加入等体积的Seavg试剂，搅拌均匀，静置；
5)醇沉：待静置分层后取上清液加入2重量份95％乙醇搅拌均匀，静置使分层，过滤；
6)取滤液，重复步骤5)一次；
7)干燥：将上步骤两次醇沉后得到的滤液，进行真空干燥，真空度维持在0.1MPa，分两个阶段干燥，第一阶段保持温度85℃，时间维持1小时，然后升温，第二阶段温度115℃，时间维持3小时，即得成品。
2.根据权利要求1所述的一种从海蜇中提取透明质酸的方法，其特征在于：步骤3)中乳酸菌为保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、乳脂链球菌、两歧双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌中的一种。
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