CN104693312B - 紫珠草中多种有效成分同时提取的方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明从紫珠草中同时提取多糖、类黄酮和缩合鞣质的方法所需设备少，反应条件温和，成本低，生产安全可靠，产品纯度高，产率高，较好的保留了桑叶中多糖和类黄酮和缩合鞣质成分的生理和药理活性，具有较大的应用价值。本发明将从紫珠草中提取多糖、类黄酮、缩合鞣质和白藜芦醇、甜菊糖、香兰素、氯化钾、β‑环糊精、硬脂酸钙等原料联合使用作为饲料添加剂，可增加猪肉中鲜味氨基酸的含量，使猪肉的口感更好；且可减少饲料中脂肪的氧化变性，减少饲料中营养成分的损失。
Description
技术领域
本发明涉及一种紫珠草中多种有效成分同时提取的方法及应用，尤其涉及一种从紫珠草中同时提取类黄酮和缩合鞣质以及多糖的方法及在饲料中的应用。
背景技术
现代科学研究表明，紫珠草中黄酮类物质比较丰富，黄酮的功效是多方面的，它是一种很强的抗氧性，可有效清除体内的氧自由基，这种抗氧化作用可以阻止细胞的退化、衰老，也可阻止癌症的发生。黄酮可以改善血液循环，可以降低胆固醇，这些作用大大降低了心脑血管疾病的发病率，也可改善心脑血管疾病的症状。但更重要的是它对稳定胶原质的作用，因此它对糖尿病引起的视网膜病及毛细血管脆化有很好的作用。黄酮可以抑制炎性生物酶的渗出，可以增进伤口愈合和止痛，栎素由于具有强抗组织胺性，可以用于各类敏感症。紫珠草中缩合鞣质具有很好的止血作用，且紫珠草的药理作用主要体现在该物质上。多糖类作为附带产物，从紫珠草中提取黄酮和缩合鞣质的方法，据国内外专利文献检索，紫珠草有有效成分的提取方法目前可归纳为四类：即溶剂浸提法、索式提取、树脂吸附法和超临界二氧化碳流体萃取法，上述方法目前都存在着不同程度的缺点：如溶剂浸提法要不得率低，要不就是纯度不够高，要不就是相应成本高；索式提取是溶剂浸提法中的一种但其能源消耗大并且浸提时间比较长；树脂吸附法工艺繁琐，成本也高，难以规模化生产，超临界二氧化碳流体萃取方法目前尚缺乏技术的成熟性和可靠性，有待于进一步的深度研究。
发明内容
本发明的目的在于提供一种从紫珠草中同时提取类黄酮和缩合鞣质以及多糖的方法，该方法所需设备少，反应条件温和，成本低，生产安全可靠，产品纯度高，产率高。同时将提取的黄酮和缩合鞣质以及多糖用于饲料添加剂，可增加猪肉中鲜味氨基酸的含量，使猪肉的口感更好；且可减少饲料中脂肪的氧化变性，减少饲料中营养成分的损失。
本发明从紫珠草中同时提取多糖、类黄酮以及缩合鞣质的方法如下：
（1）取5g干燥紫珠草叶与pH=9的氢氧化钠溶液以1g∶15ml的比例充分混合均匀，65℃在超声波下浸提10分钟，超声浸提功率为150W,提取完成后用400目纱布趁热过滤，过滤，分别收集滤液和滤渣；对滤渣再进行一次超声波浸提操作，过滤，合并两次过滤操作得到的滤液；
（2）将滤液用盐酸调节pH至7.5，然后减压浓缩到20ml，再倒入100ml烧杯中，加入无水乙醇60ml，静置12-24小时，过滤，得到滤液和滤渣，将滤渣在真空干燥箱50℃干燥4小时后得到多糖固体；滤液旋转蒸发浓缩到15ml，回收乙醇，浓缩液倒入到50ml烧杯中，加盐酸调节pH至4.0，静置24-30小时，浓缩，冷冻干燥后得到固体粉末。
（3）称量2g步骤（2）得到的固体粉末用纱布包裹，将包裹后的固体粉末放入恒压滤斗中，在250ml圆底烧瓶中加入100ml无水乙醇或95%乙醇，用真空泵接管连在螺型冷凝管出口处保持真空度为0.002MPa，减压可以起到搅拌的作用，同时也可以促进酒精的回流，在75℃下回流2h，在减压时要把恒压滤斗活塞关掉，当回流液达到恒压滤斗2/3时关掉真空泵，打开恒压滤斗活塞使其回流到圆底烧瓶中，收集圆底烧瓶里的溶液，旋转蒸发收集得到的固体物质，即为类黄酮和缩合鞣质的混合物。
从紫珠草中提取的多糖、类黄酮和缩合鞣质用于饲料添加剂的方法如下：
所述的饲料添加剂的重量组成为：
多糖400-500份、类黄酮和缩合鞣质混合物0-50份、白藜芦醇5-9份、甜菊糖150-200份、香兰素20-50份、氯化钾1-3份、β-环糊精1-5份、硬脂酸钙3-8份、赤藓糖醇10-15份、牡丹酚10-15份、异甘草素5-10份，将这些原料混合后粉碎至200-400目，即得饲料添加剂，每1000kg饲料中使用该饲料添加剂0.8-2kg。
本发明从紫珠草中同时提取多糖、类黄酮和缩合鞣质的方法中，利用类黄酮化合物易溶于碱性溶液，同时在稀碱下对多糖与缩合鞣质提取影响不大的特点，较好的保留了紫珠草中多糖和类黄酮成分的生理和药理活性。在稀碱条件下可防止叶绿素释放酸性物质不利于多糖的提取，相对于用有机溶剂浸提减少了脂溶性杂质，如叶绿素等。蒸发溶剂使用的是旋转蒸发，在低压甚至真空的状态下，在较低的温度下去除大部分溶剂，得到浓缩液，便于后续处理，溶剂也能够得到重复使用。滤液得到固体产物的方法是真空干燥，能够有效去除有机溶剂。
本发明从紫珠草中同时提取多糖、类黄酮和缩合鞣质的方法所需设备少，反应条件温和，成本低，生产安全可靠，产品纯度高，产率高，较好的保留了桑叶中多糖和类黄酮和缩合鞣质成分的生理和药理活性，具有较大的应用价值。
氨基酸是蛋白质的构件分子，它的数量、种类和比例是评价猪肉中蛋白质及猪肉品质的重要指标。自从Batzer等人认为氨基酸中的丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、丙氨酸和天门冬氨酸是肉香味的必需前体氨基酸以来，鲜味氨基酸也受到很多人的关注。研究已表明，谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸和天门冬氨酸是猪肉中的主要鲜味物质，猪肉呈现的鲜美滋味在一定程度上就取决于这些鲜味氨基酸含量的高低。
本发明将从紫珠草中提取多糖、类黄酮、缩合鞣质和白藜芦醇、甜菊糖、香兰素、氯化钾、β-环糊精、硬脂酸钙等原料联合使用作为饲料添加剂，可增加猪肉中鲜味氨基酸的含量，使猪肉的口感更好；且可减少饲料中脂肪的氧化变性，减少饲料中营养成分的损失。
具体实施例
实施例1：一种从紫珠草中同时提取多糖、类黄酮以及缩合鞣质的方法如下：
（1）取5g干燥紫珠草叶与pH=9的氢氧化钠溶液以1g∶15ml的比例充分混合均匀，65℃在超声波下浸提10分钟，超声浸提功率为150W,提取完成后用400目纱布趁热过滤，过滤，分别收集滤液和滤渣；对滤渣再进行一次超声波浸提操作，过滤，合并两次过滤操作得到的滤液；
（2）将滤液用盐酸调节pH至7.5，然后减压浓缩到20ml，再倒入100ml烧杯中，加入无水乙醇60ml，静置12-24小时，过滤，得到滤液和滤渣，将滤渣在真空干燥箱50℃干燥4小时后得到多糖固体；滤液旋转蒸发浓缩到15ml，回收乙醇，浓缩液倒入到50ml烧杯中，加盐酸调节pH至4.0，静置24-30小时，浓缩，冷冻干燥后得到固体粉末。
（3）称量2g步骤（2）得到的固体粉末用纱布包裹，将包裹后的固体粉末放入恒压滤斗中，在250ml圆底烧瓶中加入100ml无水乙醇或95%乙醇，用真空泵接管连在螺型冷凝管出口处保持真空度为0.002MPa，减压可以起到搅拌的作用，同时也可以促进酒精的回流，在75℃下回流2h，在减压时要把恒压滤斗活塞关掉，当回流液达到恒压滤斗2/3时关掉真空泵，打开恒压滤斗活塞使其回流到圆底烧瓶中，收集圆底烧瓶里的溶液，旋转蒸发收集得到的固体物质，即为类黄酮和缩合鞣质的混合物。
实施例2：从紫珠草中提取的多糖、类黄酮和缩合鞣质用于饲料添加剂的方法如下：所述的饲料添加剂的重量组成为：
多糖400份、白藜芦醇5份、甜菊糖150份、香兰素20份、氯化钾1份、β-环糊精1份、硬脂酸钙3份、赤藓糖醇10份、牡丹酚10份、异甘草素5份，将这些原料混合后粉碎至200目，即得饲料添加剂，每1000kg饲料中使用该饲料添加剂0.8 kg。
实施例3：从紫珠草中提取的多糖、类黄酮和缩合鞣质用于饲料添加剂的方法如下：所述的饲料添加剂的重量组成为：
多糖500份、类黄酮和缩合鞣质混合物50份、白藜芦醇9份、甜菊糖200份、香兰素50份、氯化钾3份、β-环糊精5份、硬脂酸钙8份、赤藓糖醇15份、牡丹酚15份、异甘草素10份，将这些原料混合后粉碎至400目，即得饲料添加剂，每1000kg饲料中使用该饲料添加剂2kg。
实施例4：从紫珠草中提取的多糖、类黄酮和缩合鞣质用于饲料添加剂的方法如下：所述的饲料添加剂的重量组成为：
多糖450份、类黄酮和缩合鞣质混合物25份、白藜芦醇7份、甜菊糖180份、香兰素35份、氯化钾2份、β-环糊精3份、硬脂酸钙5份、赤藓糖醇12份、牡丹酚13份、异甘草素8份，将这些原料混合后粉碎至400目，即得饲料添加剂，每1000kg饲料中使用该饲料添加剂1.5 kg。
实施例5：从紫珠草中提取的多糖、类黄酮和缩合鞣质用于饲料添加剂的方法如下：所述的饲料添加剂的重量组成为：
多糖380份、类黄酮和缩合鞣质混合物55份、白藜芦醇4份、甜菊糖210份、香兰素18份、氯化钾4份、β-环糊精6份、硬脂酸钙2份、赤藓糖醇8份、牡丹酚16份、异甘草素11份，将这些原料混合后粉碎至200目，即得饲料添加剂，每1000kg饲料中使用该饲料添加剂2.2 kg。
试验例1：随机选取体重约30kg的健康长白猪200头，分成5组，每组40头，公母各半，其中4组作为试验组，分别给予实施例2-5制得的饲料添加剂，实施例2-5制得的饲料添加剂的添加量按各实施例中的说明进行，将其混入生猪的日粮中进行饲喂。剩余1组为空白对照组，不给予实施例2-5制得的任一产品。生猪按常规进行免疫和驱虫，饲喂至98-102kg时出栏。然后每个试验组随机选取8头进行屠宰，然后参照GB/T 14965-94的方法，采用氨基酸自动分析仪对鲜味氨基酸含量进行测定，结果见表2。
表1 猪肉中鲜味氨基酸含量的比较
从表1中可以看出，实施例2-4（各项参数均在发明方案的范围内）对应的实验组中，其鲜味氨基酸总含量均显著高于空白对照组和实施例5对应的实验组，尤以实施例4对应的实验组的效果最佳，其肉质也最为鲜美。
试验例2：选取生猪基础饲料5000g，平均分成5组，其中4组为实验组，1组为空白对照组，每组4个重复，每个重复250g。实验分别加入实施例2-5制得的饲料添加剂，添加量按实施例中的说明进行，剩余一组作为空白对照组。将各组饲料置于试验箱中,于温度25～30℃、相对湿度60-70%左右的条件下放置。实验前分别测定预混料中的脂肪含量，作为初始含量，30天后将预混料从试验箱中取出，再次测定其中脂肪含量，作为终含量。
其中：损耗率（%）=（各组初始含量-各组终含量）／各组初始含量×100%
表2 脂肪含量变化情况
从表2中可以看出，实施例2-4对应的实验组中，脂肪损耗率较小，其中实施例4对应的实验组脂肪损耗率最小，饲料中脂肪的氧化变性较少，饲料中营养成分保留较好。
Claims (2)
1.紫珠草中多种有效成分在饲料添加剂中的应用方法，其特征在于：所述的饲料添加剂的重量组成为：多糖400-500份、类黄酮和缩合鞣质混合物0-50份、白藜芦醇5-9份、甜菊糖150-200份、香兰素20-50份、氯化钾1-3份、β-环糊精1-5份、硬脂酸钙3-8份、赤藓糖醇10-15份、牡丹酚10-15份、异甘草素5-10份，将这些原料混合后粉碎至200-400目，即得饲料添加剂，每1000kg饲料中使用该饲料添加剂0.8-2kg；
所述多糖、类黄酮和缩合鞣质混合物的制备方法为：
(1)取5g干燥紫珠草叶与pH＝9的氢氧化钠溶液以1g∶15mL的比例充分混合均匀，65℃在超声波下浸提10分钟，超声浸提功率为150W,提取完成后用400目纱布趁热过滤，分别收集滤液和滤渣；对滤渣再进行一次超声波浸提操作，过滤，合并两次过滤操作得到的滤液；
(2)将滤液用盐酸调节pH至7.5，然后减压浓缩到20mL，再倒入100mL烧杯中，加入无水乙醇60mL，静置12-24小时，过滤，得到滤液和滤渣，将滤渣在真空干燥箱50℃干燥4小时后得到多糖固体；滤液旋转蒸发浓缩到15mL，回收乙醇，浓缩液倒入到50mL烧杯中，加盐酸调节pH至4.0，静置24-30小时，浓缩，冷冻干燥后得到固体粉末；
(3)称量2g步骤(2)得到的固体粉末用纱布包裹，将包裹后的固体粉末放入恒压滤斗中，在250mL圆底烧瓶中加入100mL无水乙醇或95％乙醇，用真空泵接管连在螺型冷凝管出口处保持真空度为0.002MPa，减压可以起到搅拌的作用，同时也可以促进酒精的回流，在75℃下回流2h，在减压时要把恒压滤斗活塞关掉，当回流液达到恒压滤斗2/3时关掉真空泵，打开恒压滤斗活塞使其回流到圆底烧瓶中，收集圆底烧瓶里的溶液，旋转蒸发收集得到的固体物质，即为类黄酮和缩合鞣质的混合物。
2.如权利要求1所述的紫珠草中多种有效成分在饲料添加剂中的应用方法，其特征在于：所述的饲料添加剂的重量组成为：多糖450份、类黄酮和缩合鞣质混合物25份、白藜芦醇7份、甜菊糖180份、香兰素35份、氯化钾2份、β-环糊精3份、硬脂酸钙5份、赤藓糖醇12份、牡丹酚13份、异甘草素8份，将这些原料混合后粉碎至400目，即得饲料添加剂，每1000kg饲料中使用该饲料添加剂1.5kg。
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