CN104693123A - 一种1h-吲唑-3-氨基联苯类化合物及其制备方法和应用 - Google Patents

一种1h-吲唑-3-氨基联苯类化合物及其制备方法和应用 Download PDF

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CN104693123A CN201510106799.7A CN201510106799A CN104693123A CN 104693123 A CN104693123 A CN 104693123A CN 201510106799 A CN201510106799 A CN 201510106799A CN 104693123 A CN104693123 A CN 104693123A
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贺浪冲
张�杰
董金云
潘晓艳
张涛
卢闻
王嗣岑
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Abstract

本发明提供一种1H-吲唑-3-氨基联苯类化合物及其制备方法和应用，该化合物以1H-吲唑-3-氨基联苯为骨架，其结构式为其中苯环上为单取代或双取代，R为卤素、烷基或烷氧基，R1为链状或环状的脂肪族二胺基。通过五个步骤的有机合成反应即可制得该化合物，具有反应过程操作简单、原料易得、反应条件温和、所用试剂便宜等优点，适于制药企业的大规模生产制造。该化合物对Bcr-Abl激酶有很好的抑制活性，并且能够抑制肿瘤细胞的增殖活性，可用于抗肿瘤药物及抑制Bcr-Abl激酶活性药物的制备，具有良好的应用前景和科研价值。

Description

一种1H-吲唑-3-氨基联苯类化合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，涉及一种抗白血病的化合物，特别涉及一种具有Bcr-Abl抑制活性的1H-吲唑-3-氨基联苯类化合物及其制备方法和应用。
背景技术
慢性粒细胞白血病是一种发生于血液系统恶性肿瘤，发生率较高，占成年人白血病的20％。第一代小分子靶向激酶抑制剂Imatinib的临床应用，使得慢性粒细胞白血病的治疗取得了突破性进展。然而，加速期和急变期出现的耐药性的问题，主要是Bcr-Abl激酶域发生了突变，使得药物疗效下降，影响病人生活质量和寿命。
开发新的药物来克服耐药性突变的问题，尤其是临床上比较常见的T315突变，减少慢性粒细胞白血病人复发，提高其生活质量是药学工作者面临的重要课题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种1H-吲唑-3-氨基联苯类化合物及其制备方法和应用，该化合物在体外体现出很好的Bcr-Abl激酶抑制活性和白血病细胞抑制活性，能够应用于抗肿瘤药物的制备。
为达到上述目的，本发明采用的技术方案为：
一种1H-吲唑-3-氨基联苯类化合物，其结构式如下：
其中苯环上为单取代或双取代，R为卤素、烷基或烷氧基，R1为链状或环状的脂肪族二胺基。
所述的R1为乙二胺或哌嗪基。
1H-吲唑-3-氨基联苯类化合物的制备方法，包括以下步骤：
1)水合肼与2-氟-6-碘苯甲腈在碱性环境下回流反应，制得4-碘-1H-吲唑-3-胺；
2)对溴甲苯依次经格氏反应、酯化、水解、氧化反应制得对羧基苯硼酸；
3)取代的苯甲酸与哌嗪经缩合反应制得单酰胺化的哌嗪；
或者取代的苯甲酸与乙二胺经缩合反应制得单酰胺化的乙二胺；
4)对羧基苯硼酸与单酰胺化的哌嗪在缩合剂的作用下制得双酰胺化的哌嗪；
或者对羧基苯硼酸与单酰胺化的乙二胺在缩合剂的作用下制得双酰胺化的乙二胺；
5)4-碘-1H-吲唑-3-胺与双酰胺化的哌嗪经Suzuki偶联反应，得到1H-吲唑-3-氨基联苯类化合物；
或者4-碘-1H-吲唑-3-胺与双酰胺化的乙二胺经Suzuki偶联反应，得到1H-吲唑-3-氨基联苯类化合物。
1H-吲唑-3-氨基联苯类化合物在制备Bcr-Abl激酶抑制剂中的应用。
1H-吲唑-3-氨基联苯类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
所述的抗肿瘤药物是以Bcr-Abl激酶为靶点的药物。
所述的抗肿瘤药物是抑制Bcr-Abl激酶活性的药物。
所述的抗肿瘤药物是用于治疗白血病的药物。
所述的抗肿瘤药物为抑制肿瘤细胞增殖活性的药物。
所述的抗肿瘤药物为抑制人白血病细胞K562增殖活性的药物。
相对于现有技术，本发明的有益效果为：
本发明提供的1H-吲唑-3-氨基联苯类化合物，是一种经化学合成得到的新型的具有抗肿瘤活性的化合物，其对Bcr-Abl激酶有很好的抑制活性，并且能够抑制肿瘤细胞的增殖活性。科学研究已发现BCR-ABL激酶在癌细胞的信号转导和转化中发挥重要作用，而其在正常细胞中不表达，所以它是治疗癌症的理想药物靶标。本发明提供的1H-吲唑-3-氨基联苯类化合物通过抑制Bcr-Abl激酶的活性，阻断其诱导的信号通路，从而能够抑制肿瘤细胞的增生和迁移，因此本发明提供的1H-吲唑-3-氨基联苯类化合物可用于抗肿瘤药物及抑制Bcr-Abl激酶活性药物的制备，具有良好的应用前景和科研价值。
本发明提供的1H-吲唑-3-氨基联苯类化合物的制备方法，通过五个步骤的常规有机合成反应即可制得目标化合物，具有反应过程操作简单、原料易得、反应条件温和、所用试剂便宜等优点，适于制药企业的大规模生产制造。
另外，本发明提供的具有Bcr-Abl激酶抑制活性的1H-吲唑-3-氨基联苯类化合物，能够较好地抑制包括白血病细胞(K562细胞)在内的肿瘤细胞的增殖活性，可应用于抗肿瘤药物的制备。
附图说明
图1为本发明提供的1H-吲唑-3-氨基联苯类化合物的合成路线图；
其中化合物1为2-氟-6-碘苯甲腈，化合物2为4-碘-1H-吲唑-3-胺，化合物3为对溴甲苯，化合物4为对甲基溴化镁，化合物5为对甲基苯硼酸，化合物6为对羧基苯硼酸，7化合物为取代的苯甲酸，化合物8为哌嗪，化合物8’为乙二胺，化合物9为单酰胺化的哌嗪，化合物9’为单酰胺化的乙二胺，化合物10为双酰胺化的哌嗪，化合物10’为双酰胺化的乙二胺，化合物11和11’分别对应被酰化部分为哌嗪和乙二胺的1H-吲唑-3-氨基联苯类化合物。
图中标注的具体为：a：NH2NH2·H2O,NaHCO3,EtOH,reflux；b：Mg,I2,THF,reflux,N2；c：B(OMe)3,THF,90℃,HCl；d：NaOH(1M),KMnO4,TBAB,H2O；e：CDI,THF,NaCl(20％),r.t.；f：pyBOP,TEA,DMF；g：Pd(Pph3)4,Cs2CO3，CH3CN：H2O(V:V＝1:1),90℃.
具体实施方式
本发明提供一种具有Bcr-Abl抑制活性的1H-吲唑-3-氨基联苯类化合物，该类化合物在体外体现出良好的抑制白血病细胞增殖活性和Bcr-Abl激酶活性，能够应用于抗白血病药物的制备。
下面结合附图和实施例对本发明做详细的说明，所述是对本发明的解释而不是限定。
本发明提供的具有Bcr-Abl抑制活性的1H-吲唑-3-氨基联苯类化合物，其化学结构式为：
其中R为单取代或双取代，取代基R为卤素、烷基、烷氧基中的一种或两种，R1为链状或环状的脂肪族二胺，如乙二胺、哌嗪等。
下面结合图1中所示的合成路线和具体的合成实施例来详细说明本发明提供的具有Bcr-Abl抑制活性的1H-吲唑-3-氨基联苯类化合物的制备方法和活性筛选方法。
实施例1
该化合物的结构式中，R1是哌嗪基，R为三氟甲基，处于间位，通过以下步骤制备(参见图1)：
1)水合肼与2-氟-6-碘苯甲腈(化合物1)在碱性环境下回流反应，制得4-碘-1H-吲唑-3-胺(化合物2)；
称取2-氟-6-碘苯甲腈(化合物1)5g(20.2mmol)，碳酸氢钠2.6g(31mmol)，水合肼5g(99.9mmol)溶于无水乙醇25ml。加热回流反应8h后监测反应。反应完全后，冷却至室温，加水50ml，室温搅拌2h，抽滤，滤饼干燥，即得4-碘-1H-吲唑-3-胺(化合物2)粗品4.8g，产率92％；
2)对溴甲苯(化合物3)经格氏反应、酯化、水解、氧化反应制备对羧基苯硼酸(化合物6)；
将镁条3.6g(150mmol)用饱和氯化铵溶液浸泡10分钟，水洗5次除去表面的氧化镁和无机盐，无水四氢呋喃冲洗两遍后放在红外快速干燥箱内烘干，放入两颈烧瓶中，加热并不断抽取反应体系内的氧气，待反应体系冷却至室温，迅速向两颈烧瓶内加入3粒碘粒，抽真空，微热至镁条表面变为棕黄色后迅速升高温度，通过注射器向体系内缓慢注入对溴甲苯(化合物3)17.1g(100mmol)的四氢呋喃溶液50ml引发反应，加热回流反应6小时后将反应体系冷却至室温，置于-30摄氏度低温恒温搅拌反应浴，缓慢注入硼酸三甲酯14.1g(150mmol)的四氢呋喃溶液50ml反应过夜。加入2mol/L盐酸100ml水解5小时、乙酸乙酯萃取三遍、合并有机相，用无水硫酸钠干燥、抽滤、蒸干除去乙酸乙酯、重结晶(重结晶所用溶剂：水)、热抽滤、滤液置于4℃冰箱析出白色固体抽滤、干燥得到对甲基苯硼酸(化合物5)7.3g，产率55％。
将对甲基苯硼酸(化合物5)7.3g(53.67mmol)溶于1mol/L氢氧化钠溶液161ml，在冰浴条件下，通过恒压滴液漏斗缓慢加入高锰酸钾25.44g(161mmol)、四丁基溴化铵0.54g(1.67mmol)的水溶液537ml，滴加完毕，撤去冰浴，室温搅拌反应过夜，用20ml乙醇淬灭反应体系1小时，抽滤，滤液用浓盐酸调pH至2，析出白色固体，抽滤，滤饼干燥即为对羧基苯硼酸(化合物6)粗品7.0g,产率80％；
3)间三氟甲基苯甲酸(化合物7)与哌嗪(化合物8)经缩合反应制备1-[3-(三氟甲基)苯甲酰基]哌嗪(化合物9)；
将浓盐酸100g(12mol/L)置于250ml的圆底烧瓶，在冰浴的条件下，缓慢加入40g无水哌嗪(化合物8)。加完后，撤去冰浴，室温反应过夜，抽滤，滤饼置于烘箱内干燥，所得白色固体即为哌嗪二盐酸盐。称取间三氟甲基苯甲酸(化合物7)9.5g(0.05mol)溶于20ml干燥的四氢呋喃，缓慢加入CDI 8.9g(0.055mol)，室温下反应4h后将反应液通过恒压滴液漏斗滴加到溶有哌嗪二盐酸盐20g(0.125mol)、无水哌嗪10g(0.125mol)、氯化钠14g的60ml水溶液中，室温反应5小时。反应完全后抽滤，滤液蒸干除去THF，10ml乙酸乙酯萃取一遍，NaOH饱和溶液调pH至10，乙酸乙酯萃取3遍后合并有机相，无水硫酸钠干燥过夜，抽滤，旋干乙酸乙酯，所得的白色晶体即为1-[3-(三氟甲基)苯甲酰基]哌嗪(化合物9)粗品6.5g，产率50％；
4)对羧基苯硼酸(化合物6)与1-[3-(三氟甲基)苯甲酰基]哌嗪(化合物9)在缩合剂的作用下制备[4-({4-[3-(三氟甲基)苯甲酰基]哌嗪-1-基}羰基)苯基]硼酸(化合物10)；
称取对羧基苯硼酸(化合物6)0.83g(5mmol)、pyBOP缩合剂2.8g(5.5mmol)溶于干燥的DMF 10ml，滴入干燥三乙胺1.5ml，室温搅拌反应半小时后，加入1-[3-(三氟甲基)苯甲酰基]哌嗪(化合物9)1.8g(7.5mmol)室温反应过夜，TLC监测。反应完全后，大量水洗及乙酸乙酯萃取三遍，最后有机相用饱和氯化钠溶液洗两遍。有机相用无水硫酸钠干燥过夜。柱色谱(洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝1:5)分离纯化后得到所需的[4-({4-[3-(三氟甲基)苯甲酰基]哌嗪-1-基}羰基)苯基]硼酸(化合物10)0.6g，产率30％；
5)4-碘-1H-吲唑-3-胺(化合物2)与[4-({4-[3-(三氟甲基)苯甲酰基]哌嗪-1-基}羰基)苯基]硼酸(化合物10)经Suzuki偶联反应，得到4-[4-({4-[3-(三氟甲基)苯甲酰基]哌嗪-1-基}羰基)苯基]-1H-吲唑-3-胺(化合物11)。
将4-碘-1H-吲唑-3-胺(化合物2)0.52g(2mmol)、[4-({4-[3-(三氟甲基)苯甲酰基]哌嗪-1-基}羰基)苯基]硼酸(化合物10)0.98g(2.4mmol)、碳酸铯2g(6mmol)、四三苯基磷钯0.12g(0.1mmol)置于100ml圆底烧瓶内，加入乙腈和水各10ml，氮气保护，90摄氏度恒温反应24小时。反应完全后加入水150ml，乙酸乙酯萃取三遍、有机层用饱和氯化钠洗两遍后无水硫酸钠干燥过夜，柱色谱(洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝1:3)分离纯化后得到最终的目标化合物4-[4-({4-[3-(三氟甲基)苯甲酰基]哌嗪-1-基}羰基)苯基]-1H吲唑-3-胺(化合物11)0.54g，产率55％。
所得化合物结构如下式所示:
理化性质：m.p＝239～240℃；ESI-MS(m/z):492.20(M-H)+；
氢谱核磁共振数据：1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.83(s,1H),7.85(d,J＝7.3Hz,1H),7.81(s,1H),7.77(d,J＝7.1Hz,1H),7.72(d,J＝7.5Hz,1H),7.63–7.49(m,4H),7.35–7.27(m,2H),6.85(s,1H),4.36(s,2H),3.96–3.37(m,8H).
实施例2
该化合物的结构式中，R1是哌嗪基，R为双取代的氯原子，处于邻位和对位，通过以下步骤制备(参见图1)：
步骤1)～2)与实施例1中步骤1)～2)相同，即由2-氟-6-碘苯甲腈(化合物1)制备4-碘-1H-吲唑-3-胺(化合物2)，由对溴甲苯(化合物3)制备对羧基苯硼酸(化合物6)；
3)2,4-二氯苯甲酸(化合物7)与哌嗪(化合物8)经缩合反应制备1-(2,4-二氯苯甲酰基)哌嗪(化合物9)；
将100g浓盐酸(12mol/L)置于250ml的圆底烧瓶，在冰浴的条件下，缓慢加入40g无水哌嗪(化合物8)。加完后，撤去冰浴，室温反应过夜，抽滤，滤饼置于烘箱内干燥，所得白色固体即为哌嗪二盐酸盐。称取2,4-二氯苯甲酸(化合物7)9.6g(0.05mol)溶于20ml干燥的四氢呋喃，缓慢加入CDI 8.9g(0.055mol)，室温下反应4h后将反应液通过恒压滴液漏斗滴加到溶有哌嗪二盐酸盐20g(0.125mol)，无水哌嗪(化合物8)10g(0.125mol)，氯化钠14g的60ml水溶液中，室温反应5小时。反应完全后抽滤，滤液蒸干除去THF，10ml乙酸乙酯萃取一遍，NaOH饱和溶液调pH至10，乙酸乙酯萃取3遍后合并有机相，无水硫酸钠干燥过夜，抽滤，旋干乙酸乙酯，得到的白色晶体即为1-(2,4-二氯苯甲酰基)哌嗪(化合物9)粗品5.8g，产率45％；
4)对羧基苯硼酸(化合物6)与1-(2,4-二氯苯甲酰基)哌嗪(化合物9)在缩合剂的作用下制备(4-{[4-(2,4-二氯苯甲酸)哌嗪-1-基]羰基}苯基)硼酸(化合物10)；
称取对羧基苯硼酸(化合物6)0.83g(5mmol)、pyBOP缩合剂2.8g(5.5mmol)溶于干燥的DMF 10ml，滴入干燥三乙胺1.5ml，室温搅拌反应半小时后，加入1-(2,4-二氯苯甲酰基)哌嗪(化合物9)1.9g(7.5mmol)室温反应过夜，TLC监测。反应完全后，大量水洗及乙酸乙酯萃取三遍，最后有机相用饱和氯化钠溶液洗两遍。有机相用无水硫酸钠干燥过夜。柱色谱(洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝1:5)分离纯化后得到所需的(4-{[4-(2,4-二氯苯甲酸)哌嗪-1-基]羰基}苯基)硼酸(化合物10)0.6g，产率30％；
5)4-碘-1H-吲唑-3-胺(化合物2)与(4-{[4-(2,4-二氯苯甲酸)哌嗪-1-基]羰基}苯基)硼酸(化合物10)经Suzuki偶联反应，得到最终目标化合物4-(4-{[4-(2,4-二氯苯甲酸)哌嗪-1-基]羰基}苯基)-1H-吲唑-3-胺(化合物11)。
将4-碘-1H-吲唑-3-胺(化合物2)0.52g(2mmol),(4-{[4-(2,4-二氯苯甲酸)哌嗪-1-基]羰基}苯基)硼酸(化合物10)1.0g(2.4mmol)，碳酸铯2g(6mmol)，四三苯基磷钯0.12g(0.1mmol)置于100ml圆底烧瓶内，加入乙腈和水各10ml，氮气保护，90摄氏度恒温反应24小时。反应完全后加入水150ml，乙酸乙酯萃取三遍、有机相用饱和氯化钠洗两遍后无水硫酸钠干燥过夜，柱色谱(洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝1:3)分离纯化后得到最终的目标化合物4-(4-{[4-(2,4-二氯苯甲酸)哌嗪-1-基]羰基}苯基)-1H-吲唑-3-胺(化合物11)0.6g，产率61％。
所得化合物结构如下式所示:
理化性质：m.p＝180～181℃；ESI-MS(m/z):494.10(M+H)+；
氢谱核磁共振数据：1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.83(s,1H),7.76(s,1H),7.66–7.52(m,5H),7.51–7.42(m,1H),7.40–7.25(m,2H),6.85(s,1H),4.35(s,2H),3.82–3.41(m,6H),3.30–3.15(m,2H).
实施例3
该化合物的结构式中，R1是乙二胺基，R为甲基，处于邻位，通过以下步骤制备(参见图1)：
步骤1)～2)与实施例1中步骤1)～2)相同，即由2-氟-6-碘苯甲腈(化合物1)制备4-碘-1H-吲唑-3-胺(化合物2)，由对溴甲苯(化合物3)制备对羧基苯硼酸(化合物6)；
3)邻甲基苯甲酸(化合物7)与乙二胺(化合物8’)经缩合反应制备N-(2-氨基乙基)-2-甲基苯甲酰胺(化合物9’)；
将60g浓盐酸(12mol/L)置于250ml的圆底烧瓶，在冰浴的条件下，缓慢加入40g无水乙二胺(化合物8’)。加完后，撤去冰浴，室温反应过夜，抽滤，滤饼置于烘箱内干燥，所得白色固体即为乙二胺二盐酸盐。称取邻甲基苯甲酸(化合物7)3.4g(0.025mol)溶于15ml干燥的四氢呋喃，缓慢加入CDI 4.5g(0.0275mol)，室温下反应4h后将反应液通过恒压滴液漏斗滴加到溶有乙二胺二盐酸盐8.3g(0.0625mol)，无水乙二胺(化合物8’)3.8g(0.0625mol)，氯化钠7g的30ml水溶液中，室温反应5小时。反应完全后抽滤，滤液蒸干除去THF，10ml乙酸乙酯萃取一遍，NaOH饱和溶液调pH至10，乙酸乙酯萃取3遍后合并有机相，无水硫酸钠干燥过夜，抽滤，旋干乙酸乙酯，得到的白色晶体即为N-(2-氨基乙基)-2-甲基苯甲酰胺(化合物9’)粗品2.1g，产率48％；
4)对羧基苯硼酸(化合物6)与N-(2-氨基乙基)-2-甲基苯甲酰胺(化合物9’)在缩合剂的作用下制备{4-[({2-[(2-甲基苯甲酰基)氨基]乙基}氨基)羰基]苯基}硼酸(化合物10’)；
称取对羧基苯硼酸(化合物6)0.83g(5mmol),pyBOP缩合剂2.8g(5.5mmol)溶于干燥的DMF 10ml，滴入干燥三乙胺1.5ml，室温搅拌反应半小时后，加入N-(2-氨基乙基)-2-甲基苯甲酰胺(化合物9’)1.3g(7.5mmol)室温反应过夜，TLC监测。反应完全后，大量水洗及乙酸乙酯萃取三遍，最后有机相用饱和氯化钠溶液洗两遍。有机相用无水硫酸钠干燥过夜。柱色谱(洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝1:5)分离纯化后得到所需的{4-[({2-[(2-甲基苯甲酰基)氨基]乙基}氨基)羰基]苯基}硼酸(化合物10’)0.54g，产率33％；
5)4-碘-1H-吲唑-3-胺(化合物2)与{4-[({2-[(2-甲基苯甲酰基)氨基]乙基}氨基)羰基]苯基}硼酸(化合物10’)经Suzuki偶联反应，得到N-(2-{[4-(3-氨基-1H-吲唑-4-基)苯甲酰基]氨基}乙基)-2-甲基苯甲酰胺(化合物11’)。
将4-碘-1H-吲唑-3-胺(化合物2)0.52g(2mmol),{4-[({2-[(2-甲基苯甲酰基)氨基]乙基}氨基)羰基]苯基}硼酸(化合物10’)0.8g(2.4mmol)，碳酸铯2g(6mmol)，四三苯基磷钯0.12g(0.1mmol)置于100ml圆底烧瓶内，加入乙腈和水各10ml，氮气保护，90摄氏度恒温反应24小时。反应完全后加入水150ml，乙酸乙酯萃取三遍、有机相用饱和氯化钠洗两遍后无水硫酸钠干燥过夜，柱色谱(洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝1:3)分离纯化后得到最终的目标化合物N-(2-{[4-(3-氨基-1H-吲唑-4-基)苯甲酰基]氨基}乙基)-2-甲基苯甲酰胺(化合物11’)0.52g，产率63％。
所得化合物结构如下式所示:
理化性质：m.p＝218～219℃；ESI-MS(m/z):412.15(M-H)+；
氢谱核磁共振数据：1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.83(s,1H),8.70–8.64(m,1H),8.41–8.34(m,1H),7.99(d,J＝8.3Hz,2H),7.58(d,J＝8.2Hz,2H),7.40–7.35(m,1H),7.35–7.28(m,3H),7.24(s,1H),7.23–7.19(m,1H),6.85(dd,J＝5.5,2.3Hz,1H),4.32(s,2H),3.51–3.42(m,4H),2.33(s,3H).
实施例4
该化合物的结构式中，R1是乙二胺基，R为溴原子，处于邻位，通过以下步骤制备(参见图1)：
步骤1)～2)与实施例1中步骤1)～2)相同，即由2-氟-6-碘苯甲腈(化合物1)制备4-碘-1H-吲唑-3-胺(化合物2)，由对溴甲苯(化合物3)制备对羧基苯硼酸(化合物6)；
3)邻溴苯甲酸(化合物7)与乙二胺(化合物8’)经缩合反应制备N-(2-氨基乙基)-2-溴代苯甲酰胺(化合物9’)；
将60g浓盐酸(12mol/L)置于250ml的圆底烧瓶，在冰浴的条件下，缓慢加入40g无水乙二胺(化合物8’)。加完后，撤去冰浴，室温反应过夜，抽滤，滤饼置于烘箱内干燥，所得白色固体即为乙二胺二盐酸盐。称取邻溴苯甲酸(化合物7)5.0g(0.025mol)溶于15ml干燥的四氢呋喃，缓慢加入CDI 4.5g(0.0275mol)，室温下反应4h后将反应液通过恒压滴液漏斗滴加到溶有乙二胺二盐酸盐8.3g(0.0625mol)，无水乙二胺(化合物8’)3.8g(0.0625mol)，氯化钠7g的30ml水溶液中，室温反应5小时。反应完全后抽滤，滤液蒸干除去THF，10ml乙酸乙酯萃取一遍，NaOH饱和溶液调pH至10，乙酸乙酯萃取3遍后合并有机相，无水硫酸钠干燥过夜，抽滤，旋干乙酸乙酯，得到的白色晶体即为N-(2-氨基乙基)-2-溴代苯甲酰胺(化合物9’)粗品3.1g，产率51％；
4)对羧基苯硼酸(化合物6)与N-(2-氨基乙基)-2-溴代苯甲酰胺(化合物9’)在缩合剂的作用下制备{4-[({2-[(2-溴苯甲酰基)氨基]乙基}氨基)羰基]苯基}硼酸(化合物10’)；
称取对羧基苯硼酸(化合物6)0.83g(5mmol),pyBOP缩合剂2.8g(5.5mmol)溶于干燥的DMF 10ml，滴入干燥三乙胺1.5ml，室温搅拌反应半小时后，加入N-(2-氨基乙基)-2-溴代苯甲酰胺(化合物9’)1.8g(7.5mmol)室温反应过夜，TLC监测。反应完全后，大量水洗及乙酸乙酯萃取三遍，最后有机相用饱和氯化钠溶液洗两遍。有机相用无水硫酸钠干燥过夜。柱色谱(洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝1:5)分离纯化后得到所需的{4-[({2-[(2-溴苯甲酰基)氨基]乙基}氨基)羰基]苯基}硼酸(化合物10’)0.77g，产率39％；
5)4-碘-1H-吲唑-3-胺(化合物2)与{4-[({2-[(2-溴苯甲酰基)氨基]乙基}氨基)羰基]苯基}硼酸(化合物10’)经Suzuki偶联反应，得到N-(2-{[4-(3-氨基-1H-吲唑-4-基)苯甲酰基]氨基}乙基)-2-溴苯甲酰胺(化合物11’)。
将4-碘-1H-吲唑-3-胺(化合物2)0.52g(2mmol),{4-[({2-[(2-溴苯甲酰基)氨基]乙基}氨基)羰基]苯基}硼酸(化合物10’)0.94g(2.4mmol)，碳酸铯2g(6mmol)，四三苯基磷钯0.12g(0.1mmol)置于100ml圆底烧瓶内，加入乙腈和水各10ml，氮气保护，90摄氏度恒温反应24小时。反应完全后加入水150ml，乙酸乙酯萃取三遍、有机相用饱和氯化钠洗两遍后无水硫酸钠干燥过夜，柱色谱(洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝1:3)分离纯化后得到最终的目标化合物N-(2-{[4-(3-氨基-1H-吲唑-4-基)苯甲酰基]氨基}乙基)-2-溴苯甲酰胺(化合物6)0.68g，产率71％。
所得化合物结构如下式所示:
理化性质：m.p＝179～281℃；ESI-MS(m/z):479.05(M+H)+；
氢谱核磁共振数据：1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.86(s,1H),8.65-8.61(m,1H),8.60–8.55(m,1H),7.99(d,J＝8.1Hz,2H),7.84(dd,J＝21.6,8.0Hz,1H),7.65(dd,J＝7.8,3.5Hz,1H),7.58(d,J＝8.1Hz,2H),7.47–7.43(m,2H),7.38–7.34(m,1H),7.34–7.32(m,1H),6.90–6.82(m,1H),4.35(s,2H),3.50–3.43(m,4H).
下面对本发明提供的1H-吲唑-3-氨基联苯类化合物进行抗肿瘤活性实验。
1、1H-吲唑-3-氨基联苯类化合物抗细胞活性筛选：采用MTT法检验1H-吲唑-3-氨基联苯类化合物对K562细胞的生长抑制活性。
本发明提供的1H-吲唑-3-氨基联苯类化合物具有抗肿瘤作用，对肿瘤细胞有体外抑制增殖活性，在人白血病细胞(K562)细胞系中具有抑制肿瘤细胞的增殖活性，可以用于对癌症的治疗。
取对数生长期的人白血病细胞(K562)，用RPMI1640培养基稀释成104个/mL的细胞溶液，平行接种于96孔培养板中(2000个/孔)，每孔接种体积为200μL，37℃、5％CO2培养箱中培养24h；每孔加入不同浓度的待测化合物20μL，使孔中化合物的终浓度为：1.5×10-7mol/L、1.5×10-6mol/L、1.5×10-5mol/L、1.5×10-4mol/L，每个浓度设3个复孔，阴性对照加细胞不加化合物，设6个复孔，伊马替尼(Imatinib)为阳性对照，继续培养48h；每孔加入MTT(5mg/mL)20μL，使孔中MTT的终浓度0.5mg/mL，37℃、5％CO2培养箱孵育4h，吸弃上清，每孔加DMSO 150μL，振荡15min，酶联免疫检测仪测量各孔490nm处的紫外吸收值(OD值)，然后计算细胞抑制率，并根据抑制率求出IC50值。
细胞抑制率的计算公式为：
抑制率％＝(对照孔平均OD值-用药组平均OD值)/对照孔平均OD值×100％；
检测结果显示：本发明提供的1H-吲唑-3-氨基联苯类化合物对K562细胞具有比较良好的体外抑制作用，具体结果如表1所示。
表1.1H-吲唑-3-氨基联苯类化合物对K562细胞的抑制活性结果(IC50)
结果显示本发明提供的部分1H-吲唑-3-氨基联苯类化合物对肿瘤细胞(人白血病细胞K562)的增殖抑制效果比较明显，能够在制备抗肿瘤药物中应用。
2、测定1H-吲唑-3-氨基联苯类化合物对Bcr-Abl激酶的抑制活性，测定方法具体如下：
Bcr-Abl激酶和底物Abltide购自Signal-Chem公司，选用Promega公司的ADP-GlobTM Kinase Assays检测试剂盒检测目标化合物的抑酶活性，操作方法按照试剂盒说明进行。
将ATP(1mM)用buffer(2×)(Tris 80mM,MgCl220mM,BSA 0.2mg/mL,DTT2mM)稀释80倍配制成ATP(125μM)的buffer(2×)溶液；将125μM的ATP溶液和Abltide溶液体积1:1混合配制成ATP(62.5μM)-Abltide(0.5μg/μl)的混合溶液备用；ABL1激酶溶液用buffer(1×)(Tris 40mM,MgCl210mM,BSA 0.1mg/mL,DTT1mM)稀释100倍配制成ABL1(10ng/μl)的buffer(1×)溶液备用；将目标化合物和阳性对照药(Imatinib)用buffer(1×)分别配制成1.5×10-5mol/L、1.5×10-6mol/L、1.5×10-7mol/L、1.5×10-8mol/L、1.5×10-9mol/L、1.5×10-10mol/L浓度梯度的样品溶液，于384孔板上每孔依次加入2μL ATP-Abltide的混合溶液，1μL样品溶液，2μL酶溶液；空白孔加3μL缓冲液和2μLATP-Abltide的混合溶液；对照孔加2μL ATP-Abltide的混合溶液，1μL缓冲液，2μL酶溶液，加毕，30℃下孵育60min；加入ADP-Glo试剂5μL，在25℃下孵育40min；加入Kinase detection试剂，在25℃下孵育30min。采用PerkinElmer多功能酶标仪的化学发光模块测定每孔的发光值，计算1H-吲唑-3-氨基联苯类化合物对Bcr-Abl的抑制率和IC50。
不同的1H-吲唑-3-氨基联苯类化合物对Bcr-Abl激酶抑制剂活性的结果具体如表2所示：
表2.1H-吲唑-3-氨基联苯类化合物对Bcr-Abl激酶的抑制活性结果(IC50)
通过表2可以看出本发明提供的1H-吲唑-3-氨基联苯类化合物具有良好的抑制Bcr-Abl激酶的活性，部分化合物对Bcr-Abl激酶的抑制和阳性对照药相当，说明本发明提供的1H-吲唑-3-氨基联苯类化合物可作为Bcr-Abl抑制剂，能够在制备抑制Bcr-Abl激酶活性的药物中应用。
由于Bcr-Abl激酶对肿瘤细胞的作用，以及本发明提供的1H-吲唑-3-氨基联苯类化合物对Bcr-Abl激酶的抑制作用，故本发明提供的具有抗肿瘤活性的1H-吲唑-3-氨基联苯类化合物能够在以Bcr-Abl激酶为靶点的抗肿瘤药物中应用，尤其是能够用于制备抗白血病的药物。

Claims (10)

1.一种1H-吲唑-3-氨基联苯类化合物，其特征在于，其结构式如下：
其中苯环上为单取代或双取代，R为卤素、烷基或烷氧基，R1为链状或环状的脂肪族二胺基。
2.根据权利要求1所述的1H-吲唑-3-氨基联苯类化合物，其特征在于：所述的R1为乙二胺或哌嗪基。
3.权利要求1或2所述的1H-吲唑-3-氨基联苯类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)水合肼与2-氟-6-碘苯甲腈在碱性环境下回流反应，制得4-碘-1H-吲唑-3-胺；
2)对溴甲苯依次经格氏反应、酯化、水解、氧化反应制得对羧基苯硼酸；
3)取代的苯甲酸与哌嗪经缩合反应制得单酰胺化的哌嗪；
或者取代的苯甲酸与乙二胺经缩合反应制得单酰胺化的乙二胺；
4)对羧基苯硼酸与单酰胺化的哌嗪在缩合剂的作用下制得双酰胺化的哌嗪；
或者对羧基苯硼酸与单酰胺化的乙二胺在缩合剂的作用下制得双酰胺化的乙二胺；
5)4-碘-1H-吲唑-3-胺与双酰胺化的哌嗪经Suzuki偶联反应，得到1H-吲唑-3-氨基联苯类化合物；
或者4-碘-1H-吲唑-3-胺与双酰胺化的乙二胺经Suzuki偶联反应，得到1H-吲唑-3-氨基联苯类化合物。
4.权利要求1或2所述的1H-吲唑-3-氨基联苯类化合物在制备Bcr-Abl激酶抑制剂中的应用。
5.权利要求1或2所述的1H-吲唑-3-氨基联苯类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于：所述的抗肿瘤药物是以Bcr-Abl激酶为靶点的药物。
7.如权利要求5所述的应用，其特征在于：所述的抗肿瘤药物是抑制Bcr-Abl激酶活性的药物。
8.如权利要求5所述的应用，其特征在于：所述的抗肿瘤药物是用于治疗白血病的药物。
9.如权利要求5所述的应用，其特征在于：所述的抗肿瘤药物为抑制肿瘤细胞增殖活性的药物。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于：所述的抗肿瘤药物为抑制人白血病细胞K562增殖活性的药物。
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