CN104686518B - 一种含有间‑甲氧基苯甲酸和氨基寡糖素的生物复配制剂及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种含有间‑甲氧基苯甲酸和氨基寡糖素的生物复配制剂及其应用，其目的是为了提供一种最大限度的发挥间‑甲氧基苯甲酸和氨基寡糖素各自的药效，并在防治植物细菌病害方面能够产生明显的协同增效效果，减少用药量，降低使用成本。本发明由浓度为1000mg/L的间‑甲氧基苯甲酸母液和浓度为1000mg/L的氨基寡糖素母液按体积比1∶5～5∶1复配而成，优选比例为1∶1。

Description

一种含有间-甲氧基苯甲酸和氨基寡糖素的生物复配制剂及 其应用

技术领域

本发明涉及一种生物复配制剂及其应用，具体涉及一种防治植物病原细菌并且含有间-甲氧基苯甲酸和氨基寡糖素的生物复配制剂及其应用。

背景技术

薇甘菊属菊科假泽兰属，是一种生长极快的多年生匍匐杂草，目前已遍布我国云南、广东、海南、广西、香港、台湾等省，严重破坏了入侵地的生物多样性和生态环境，同时造成巨大的经济损失。然而在其原产地，薇甘菊被作为是治疗伤口感染、皮癣、足癣等多种皮肤病和蛇蝎毒的抗生素和抗炎剂。薇甘菊提取的内酯类活性物质已有许多文献报道。本发明所述的间-甲氧基苯甲酸是本人从薇甘菊中提取得到的一种对植物病原细菌具有良好活性的化合物。

细菌是生物的主要类群之一，是所有生物中数量最多的一类，其个体非常小，大多数细菌只能在显微镜下看到它们。细菌一般是单细胞，细胞结构简单，缺乏细胞核、细胞骨架以及膜状胞器，例如粒线体和叶绿体。基于这些特征，细菌属于原核生物。细菌的形状相当多样，主要有球状、杆状，以及螺旋状。细菌广泛分布于土壤和水中，或著与其他生物共生。由细菌侵染植物后引起的病害称为植物细菌病，反之，这些入侵的细菌被称为植物病原细菌。植物病原细菌感染植物后，会打乱植物细胞的正常代谢活动，使植物生长和发育受到影响，导致农作物产量和品质的下降。细菌性病害症状表现为萎蔫、腐烂、穿孔等，发病后期遇潮湿天气，在病害部位溢出细菌粘液，是细菌病害的特征。病原细菌可在种子或其他繁殖材料、病残体、土壤、粪肥、杂草寄主或昆虫体内越冬或越夏，成为下一个生长季的初侵染源，多数细菌病害都能发生再侵染。可通过自然孔口(气孔、皮孔、水孔等)和伤口侵入，借流水、雨水、昆虫等传播，在高温、高湿条件下容易发病。植物细菌性病害是一类重要的植物病害，每年都造成重大的农作物减产和经济损失。

间-甲氧基苯甲酸，是本人从外来入侵植物薇甘菊中提取得到的一种对植物病原细菌具有良好活性的化合物，化学名称：间-甲氧基苯甲酸，分子式：C₈H₈O₃，相对分子量：152.15， 结构式：

氨基寡糖素，又名几丁寡糖，氨基寡糖素，化学名称为β-1，4-寡聚-D-氨基葡萄糖，分子式为(C6H11NO4)n，CAS RN.：9012-76-4，由几丁质降解得壳聚糖后再降解制得，或由微生物发酵提取的低毒杀菌剂，是一种生物农药，安全、无毒、无残留，对病菌的繁殖产生抑制作用，影响真菌孢子萌发，诱发菌丝形态发生变异、孢内生化发生改变等；在植物与病原菌互作中，病原菌分泌的细胞壁降解酶通过水解植物细胞壁而释放出的寡糖信号分子，并以极低浓度传达给植物受侵染的信息，诱导植物编码植保素和其他防御化合物合成酶基因的表达，启动植物细胞的防御反应。这两种生物农药对植物细菌性病害来说具有较好的防治结果，但从生产实践上讲，还是期望有更高防治效果并且使用成本较低、用量较少的药剂出现。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种防治植物病原细菌效果更好，用量较少，并且使用成本较低的生物复配制剂，及其在植物病原细菌防治上的应用。

本发明是一种防治植物病原细菌的生物复配制剂，以间-甲氧基苯甲酸和氨基寡糖素为有效成份，分别以浓度为1000mg/L的间-甲氧基苯甲酸母液和1000mg/L的氨基寡糖素母液按体积比1∶5～5∶1复配而成，其中间-甲氧基苯甲酸母液是将间-甲氧基苯甲酸用1％的二甲亚砜的水溶液稀释制得，氨基寡糖素是将氨基寡糖素含量为3％的氨基寡糖素母药用0.1％的吐温-80水溶液稀释制得。

本发明所述的间-甲氧基苯甲酸是本人从薇甘菊中提取得到的一种对植物病原细菌具有良好活性的化合物。氨基寡糖素母药由北京三浦百草绿色植物制剂有限公司生产。

本发明的生物复配制剂可用于防治植物细菌性病害。

上述生物复配制剂在防治植物细菌性病害中的应用，优选在防治青枯病、丁香假单胞杆菌、番茄溃疡病、番茄疮痂病或瓜类果斑病上的应用。

本发明的有益效果：通过将浓度为1000mg/L的间-甲氧基苯甲酸母液和1000mg/L的氨基寡糖素母液按不同体积比进行复配，得到一种生物复配制剂，该制剂可最大限度的发挥间-甲氧基苯甲酸和氨基寡糖素各自的药效，使药剂的活性有了很大提高，扩大了防治谱，并使药剂的使用量和使用成本有了很大降低。比这两种母药单独使用更有效地防治植物细菌性病害的发生，特别是在青枯病、细菌性角斑病、番茄溃疡病、番茄疮痂病或瓜类果斑病的防治上有更好的防治效果。

具体实施方式

下面结合实施例对发明涉及的技术方案进行进一步说明，以便有助于本发明的理解，但不作为对技术方案的限制。

实施例一：本发明对青枯病病原劳尔氏菌的抑制效果试验。

步骤1：药液的配制

母液的制备：间-甲氧基苯甲酸和3％的氨基寡糖素母药分别以1％的DMSO和0.1％的吐温-80水溶液稀释，分别配制成1000mg/L的单剂母液，再分别以体积比5∶1、3∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶3、1∶5的比例复配成7组复配剂母液，备用。

浓度的设定：根据药剂活性分别将间-甲氧基苯甲酸和氨基寡糖素单剂母液、7组复配剂母液分别配置成500mg/L，250mg/L，125mg/L，62.5mg/L，31.25mg/L 5个系列浓度的药液，每个浓度的药液设置3个重复试验。

步骤2：供试靶标为青枯病病原菌茄科劳尔氏菌(Ralstoniasolanacearum)

步骤3：采用96孔板培养法测定防治效果

MIC板制备：无菌操作，将倍比稀释后不同浓度的复配剂分别加到灭菌的96孔聚苯乙烯板中，第1至第5孔加药液，第6孔不加药作为生长对照。

接种物制备：将用生长法或直接菌悬液法制备的浓度相当于0.5麦氏比浊标准的菌悬液，经MH肉汤1∶1000稀释后，向每孔中加100μl，密封后置33℃恒温培养箱中，孵育30h判断抑制效果。

步骤4：结果判断。培养板用酶标仪测定600nm波长下的各孔数值并记录，将吸光值代入菌浓-吸光值标准曲线，计算菌量并通过与对照组对比计算各处理对病原菌的抑制率。抑制 率按公式(1)计算。

抑制率％＝100×(对照组病原菌数量-药剂处理组病原菌数量)/对照组病原菌数量。.....................(1)

统计分析：使用DPS数据处理系统软件进行分析，根据各药剂浓度对数值及对应的抑制率的几率值做回归分析，计算各药剂的EC₅₀值及其95％置信限。对药剂混剂联合毒力测定，采用孙云沛法计算混剂的共毒系数(CTC)，评价混剂的联合作用类型。

当CTC≤80时，则组合物的表现为拮抗，当80＜CTC＜120时，组合物表现为相加作用，当CTC≥120时，组合物表现为增效作用。共毒系数按式(2)(3)(4)计算：

实测毒力指数(ATI)＝(标准药剂的EC₅₀/供试药剂的EC₅₀)×100.....................(2)

理论毒力指数(TTI)＝A药剂的毒力指数×混剂中A的百分含量+B药剂的毒力指数×混剂中B的百分含量................(3)

共毒系数(CTC)＝(混合药剂实测的毒力指数ATI/混合药剂理论毒力指数TTI)×100............(4)

表1本发明所述生物复配制剂对青枯病病原茄科劳尔氏菌的室内毒力测定结果

从表1可以看出，间-甲氧基苯甲酸与氨基寡糖素的体积比在5∶1～1∶5之间共毒系数为88.53～168.47，其中比例为1∶1、3∶1、5∶1时对劳尔氏菌增效作用明显，共毒系数(CTC)最高的是间-甲氧基苯甲酸和氨基寡糖素(5∶1)组合，共毒系数高达168.47。

实施例二：本发明对瓜类果斑病病原嗜酸菌属西瓜种(Acidovoraxcitrulli)的抑制效果试验。

本试验步骤与实施例一基本相同，不同之处在于供试靶标为瓜类果斑病病原菌：嗜酸菌属西瓜种。

步骤4中，根据测定结果，计算试验药剂的杀菌效果、毒力回归方程，结果见表2。

表2本发明所述生物复配制剂对瓜类果斑病病原嗜酸菌属西瓜种的室内毒力测定结果

从表2可以看出间-甲氧基苯甲酸与氨基寡糖素的体积比在5∶1～1∶5之间共毒系数为56.86～178.16，其中比例为2∶1、1∶1、1∶3、1∶5时对嗜酸菌属西瓜种增效作用明显，共毒系数(CTC)最高的是间-甲氧基苯甲酸和氨基寡糖素(2∶1)组合，共毒系数高达178.16。

实施例三：本发明对细菌性角斑病病原丁香假单胞菌番茄致病变种(Pseudomonassyringaepv.tomato)的抑制效果试验。

本试验步骤与实施例一基本相同，不同之处在于供试靶标为细菌性角斑病病原：丁香假单胞菌番茄致病变种。

步骤4中，根据测定结果，计算试验药剂的杀菌效果、毒力回归方程，结果见表3。

表3本发明所述生物复配制剂对细菌性角斑病病原丁香假单胞菌番茄致病变种的室内毒力测定结果

从表3可以看出间-甲氧基苯甲酸与氨基寡糖素的体积比在5∶1～1∶5之间共毒系数为84.74～185.83，其中比例为1∶1、3∶1时对丁香假单胞菌番茄致病变种增效作用明显，共毒系数(CTC)最高的是间-甲氧基苯甲酸和氨基寡糖素(1∶1)组合，共毒系数高达185.53。

实施例四：本发明对番茄溃疡病病原密执安棒状杆菌(Lavibactermichiganensissubspmichiganensis)的抑制效果试验。

本试验步骤与实施例一基本相同，不同之处在于供试靶标为番茄溃疡病病原：密执安棒状杆菌。

步骤4中，根据测定结果，计算试验药剂的杀菌效果、毒力回归方程，结果见表4。

表4本发明所述生物复配制剂对番茄溃疡病病原密执安棒状杆菌的室内毒力测定结果

从表4可以看出间-甲氧基苯甲酸与氨基寡糖素的体积比在5∶1～1∶5之间共毒系数为106.12～154.71，其中比例为1∶5、1∶3、1∶2、2∶1、3∶1、5∶1时对密执安棒状杆菌增效作用明显，共毒系数(CTC)最高的是间-甲氧基苯甲酸和氨基寡糖素(3∶1)组合，共毒系数高达154.71。

实施例五：本发明对番茄疮痂病病原黄单胞杆菌(Xanthomonascampetrispv.Vesicatoria(Doidge)Dowson)的抑制效果试验。

本试验步骤与实施例一基本相同，不同之处在于供试靶标为番茄疮痂病病原：黄单胞杆菌。

步骤4中，根据测定结果，计算试验药剂的杀菌效果、毒力回归方程，结果见表5。

表5本发明所述生物复配制剂对番茄疮痂病病原黄单胞杆菌的室内毒力测定结果

从表5可以看出间-甲氧基苯甲酸与氨基寡糖素的体积比在5∶1～1∶5之间共毒系数为99.81～138.32，其中比例为1∶5、1∶3、1∶2、2∶1、1∶1时对黄单胞杆菌增效作用明显，共毒系数(CTC)最高的是间-甲氧基苯甲酸和氨基寡糖素(1∶5)组合，共毒系数达到138.32。

以上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims (5)

1.一种防治植物病原细菌的生物复配制剂，其特征在于：以间-甲氧基苯甲酸和氨基寡糖素为有效成份，分别以浓度为1000mg/L的间-甲氧基苯甲酸母液和1000mg/L的氨基寡糖素母液按体积比1∶5～5∶1复配而成，其中间-甲氧基苯甲酸母液是将间-甲氧基苯甲酸用体积分数为1％的二甲亚砜的水溶液稀释制得，氨基寡糖素是将含量为3％的氨基寡糖素母药用体积分数为0.1％的吐温-80水溶液稀释制得。

2.根据权利要求1所述的含间-甲氧基苯甲酸和氨基寡糖素的生物复配制剂，其特征在于：以间-甲氧基苯甲酸和氨基寡糖素为有效成份，分别以浓度为1000mg/L的间-甲氧基苯甲酸母液和1000mg/L的氨基寡糖素母液按体积比1∶5～5∶1复配而成。

3.根据权利要求1所述的含间-甲氧基苯甲酸和氨基寡糖素的生物复配制剂，其特征在于：以间-甲氧基苯甲酸和氨基寡糖素为有效成份，分别以浓度为1000mg/L的间-甲氧基苯甲酸母液和1000mg/L的氨基寡糖素母液按体积比1∶1复配而成。

4.如权利要求1所述的含氨基寡糖素和间-甲氧基苯甲酸的生物复配制剂在防治植物病原细菌中的应用。

5.如权利要求1所述的含氨基寡糖素和间-甲氧基苯甲酸的生物复配制剂在防治青枯病、细菌性角斑病、番茄溃疡病、番茄疮痂病或瓜类果斑病的应用。