CN102657235B - 含厚孢轮枝菌和淡紫拟青霉的杀线虫组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种含厚孢轮枝菌和淡紫拟青霉的杀线虫组合物及其制备方法，由厚孢轮枝菌和淡紫拟青霉组成，所述的杀虫组合物，还含有溶溶/助剂和稳定剂，其中各种组分的重量百分比为：厚孢轮枝菌0.1-20％，淡紫拟青霉0.1-20％，稳定剂1-15％，溶剂5-15％，助剂1-10％和载体60-90％。本发明将厚孢轮枝菌和淡紫拟青霉组合使用，两种菌起到增效作用，杀线虫效果更好；厚孢轮枝菌和淡紫拟青霉都为线虫的寄生菌，本发明使用生防技术，环保安全，并克服了线虫对农药产生抗性及新药研发周期长等问题；厚孢轮枝菌和淡紫拟青霉还能促进植物的生长，达到增产增值的效果。

Description

含厚孢轮枝菌和淡紫拟青霉的杀线虫组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及杀线虫组合物，尤其涉及用线虫寄生菌来杀线虫的组合物及其制备方法。

背景技术

根结线虫主要为害各种蔬菜的根部，表现为侧根和须根较正常增多，并在幼根的须根上形成球形或圆锥形大小不等的白色根瘤，有的呈念珠状。被害株地上部生长矮小、缓慢、叶色异常，结果少，产量低，甚至造成植株提早死亡。目前已知为害蔬菜的线虫主要有高弓根结线虫、花生根结线虫、北方根结线虫及南方根结线虫。线虫寄主范围广泛，常为害瓜类、茄果类、豆类及萝卜、葫萝卜、莴苣、白菜等30多种蔬菜，还能传播一些真菌和细菌性病害。

厚孢轮枝菌（Verticillium chlamydosporium sp.）属于内寄生性真菌，是一些植物寄生线虫的重要天敌，能够寄生于卵，侵染幼虫和雌虫，可明显减轻多种作物根结线虫、胞囊线虫、茎线虫等植物线虫病的危害。广泛应用于烟草、花生、豆类、番茄、黄瓜、西瓜、茄子、生姜、香蕉、甘蔗等农作物根结线虫、胞囊线虫的防治，也可用于园林植物、花卉根结线虫的防治。

淡紫拟青霉（Penicillium lilacinum），是南方根结线虫与白色胞囊线虫卵的有效寄生菌，对南方根结线虫的卵寄生率高达60％～70％。对多种线虫都有防治效果，是防治根结线虫最有前途的生防制剂。菲律宾亚州技术中心已将此菌商品化，以BIOCON出售这种真菌制剂。在国内，华远丰农（北京）生物科技有限公司以100亿/克活孢子制剂推出100g/瓶瓶装制剂，已经上市。

农业生产上由于长期、单一使用或滥用杀虫剂，害虫对杀虫药剂产生了抗药性，甚至发展为交叉抗性和多抗性，使得许多农药品种失去效用。而新农药的研制开发周期长，往往又接济不上，这是农业保产的重大障碍。

发明内容

有鉴于此，有必要针对上述问题，提供一种有效的杀线虫组合物。

为了解决上述问题，本发明采用如下技术方案：

一种含厚孢轮枝菌和淡紫拟青霉的杀线虫组合物，含有厚孢轮枝菌和淡紫拟青霉。

所述的杀虫组合物，还含有稳定剂、溶剂和助剂，其中各种组分的重量百分比为：

所述的杀虫组合物，优选各种组分的重量百分比为：

所述的杀虫组合物，优选各种组分的重量百分比为：

所述的稳定剂是蓖麻油、大豆油、环氧大豆油、丙二醇、异丙醇、BHT和BHA之中的一种或两种。

所述溶剂是甲氧基苯、矿物油、异丙醇、正丁醇、二甲基亚砜中的任意一种或几种。

所述助剂是轻钙、拉开粉、缩甲基纤维素中的任意一种或几种。

所述载体是海泡石、凹凸棒、高岭土、硅藻土中的一种。

一种含厚孢轮枝菌和淡紫拟青霉组合的杀线虫组合物的制备方法，包含以下步骤：

（1）将厚孢轮枝菌母粉和淡紫拟青霉母粉在装有溶剂和助剂的均化器中均匀分散，得到粘度均一的厚孢轮枝菌和淡紫拟青霉混合菌液；

（2）制得的混合菌液转移到高位容器中；

（3）将载体投放到搅拌器中；

（4）开动搅拌器，开启高位容器的放液阀，加入混合好的菌液，直至菌液加完；

（5）检查吸附法造颗粒剂的效果，及检验产品的各项技术指标。

与现有技术相比，本发明将厚孢轮枝菌和淡紫拟青霉组合使用，两种菌起到增效作用，杀线虫效果更好。厚孢轮枝菌和淡紫拟青霉都为线虫的寄生菌，本发明使用生防技术，环保安全，并克服了线虫对农药产生抗性及新药研发周期长等问题。同时，厚孢轮枝菌和淡紫拟青霉还能促进植物的生长，达到增产增值的效果。

具体实施方式

为了更好的理解本发明，下面结合实施例作进一步说明。

一种含厚孢轮枝菌和淡紫拟青霉的杀线虫组合物，由厚孢轮枝菌和淡紫拟青霉组成。厚孢轮枝菌为市购云南陆良酶制剂有限责任公司25亿个孢子/克的母粉；淡紫拟青霉为购自福建凯立生物制品有限公司200亿活孢子/克的母粉。

所述的杀虫组合物，还含有稳定剂、溶剂和助剂，其中各种组分的重量百分比为：

所述的杀虫组合物，优选各种组分的重量百分比为：

所述的杀虫组合物，优选各种组分的重量百分比为：

所述的稳定剂是蓖麻油、大豆油、环氧大豆油、丙二醇、异丙醇、BHT和BHA之中的一种或两种。

所述溶剂是甲氧基苯、矿物油、异丙醇、正丁醇、二甲基亚砜中的任意一种或几种。

所述助剂是轻钙、拉开粉和缩甲基纤维素的任意一种或几种。

所述载体是海泡石、凹凸棒、高岭土、硅藻土中的一种。

一种含厚孢轮枝菌和淡紫拟青霉组合的杀线虫组合物的制备方法，包含以下步骤：

（1）将厚孢轮枝菌母粉和淡紫拟青霉母粉在装有溶剂和助剂的均化器中均匀分散，得到粘度均一的厚孢轮枝菌和淡紫拟青霉混合菌液；

（2）制得的混合菌液转移到高位容器中；

（3）将载体投放到搅拌器中；

（4）开动搅拌器，开启高位容器的放液阀，加入混合好的菌液，直至菌液加完；

（5）检查吸附法造颗粒剂的效果，及检验产品的各项技术指标。

实施例1增效作用的研究

为克服和延缓害虫的抗药性，延长老的农药品种的使用寿命，我们以厚孢轮枝菌与淡紫拟青霉进行农药复配，研究对南方根结线虫的增效作用。

挑取人工接种南方根结线虫的番茄根，用组织捣碎机打碎，依次过200目、325目、500目线虫标准筛，用无菌水冲洗500目筛上的虫卵，配制成卵悬浮液(100个卵/mL)。另置部分卵于无菌水中孵化，取第2天孵化出的活幼虫(2龄幼虫)供测试。将新鲜的淡紫拟青霉发酵液配制成一定浓度的母液，然后与厚孢轮枝菌按（6∶1、4∶1、2∶1、1∶1和1∶2）配比，测试对线虫幼虫或卵悬浮(100头线虫/mL，或100个卵/mL，在相对湿度80％～90％，温度24～26℃条件下培养，以清水为对照，每个处理3次重复)的毒力。其共毒系数按序分别为136.30、186.99、244.43、147.31、122.52。根据CTC≥120表现为增效作用，从以上结果可知，淡紫拟青霉与厚孢轮枝菌复配，对线虫均具有明显的增效作用，其中淡紫拟青霉和厚孢轮枝菌的配比以为2：1时增效作用最明显。根据试验结果，结合生产实际和农民的用药习惯，以淡紫拟青霉+厚孢轮枝菌=5亿/克+2.5亿/克，配制成淡紫拟青霉厚孢轮枝菌复合菌型。

实施例2组合物的制备

本发明提供了一种含厚孢轮枝菌和淡紫拟青霉组合的杀线虫颗粒剂及其制备方法的案例：

颗粒剂中各组分及含量，可按1）含25亿/克厚孢轮枝菌活母粉50克，含200亿/克淡紫拟青霉的母粉50克，稳定剂大豆油50克，溶剂矿物油100克，载体高岭土750克。2）含25亿/克厚孢轮枝菌活母粉50克，含200亿/克淡紫拟青霉的母粉50克，溶剂油酸甲酯50克，稳定剂蓖麻油50克，载体高岭土约800克。

厚孢轮枝菌和淡紫拟青霉杀线虫颗粒剂通过以下步骤制取：（1）将厚孢轮枝菌母粉和淡紫拟青霉母粉在装有大豆油和矿物油的均化器中均匀分散；匀化一定时间后，得到外观有一定粘度、均一的厚孢轮枝菌和淡紫拟青霉混合药液；（2）制得的混合菌液转移到可定量的高位容器中；（3）将制造颗粒剂的载体定量投放到搅拌器中；（4）开动搅拌器，开启高位容器的放液阀，定量加入混合好的菌液，直至菌液加完；（5）检查吸附法造颗粒剂的效果，及检验产品的各项技术指标。检测下述指标的方法采用的都是国家标准或行业标准，在此不再详述。

表1复合菌剂颗粒剂控制项目指标

项目	指标
		菌剂的有效质量分数	符合目标要求
pH值范围	5.0～9.0
		水分质量分数/%	≤5.0
脱落率/%	≤5.0
		热贮稳定性	合格

菌剂的检测采用常规的稀释涂平板方法；

脱落率的测定方法如下：称取试样100g，精确至0.1g，置于料罐中，调整平型回转球磨机的转速为75r/min，球磨15min，将全部物料（包括粉末）取出，过0.5mm筛，筛下试样称量；脱落率按式（1）计算：

其他指标的测定都采用国家标准，pH值测定依据GB/T 1601-1993；水分的测定依据GB/T 1600-2001；热贮稳定性依据GB/T 19136-2003。

实施例3药效试验

采用本发明产品，作黄瓜根结线虫田间药效试验，每处理重复三次，每小区一个重复，采用随机区组排列，小区面积20m²。于播种前整地施药浅混，随即播种。分别于药后20天、40天调查根结线虫数量。采用对角线取样法，每点取样3株，调查病情指数及发病率根结线虫危害的记载标准，根据根结着生的多少将病情分为五级：

0级    无根结；

1级    根结占全根系的1％～25％；

2级    根结占全根系的26％～50％；

3级    根结占全根系的51％～75％；

4级    根结占全根系的76％～100％。

按式（2）和（3）计算番茄根结线虫的病情指数：

试验结果见表2。

表245天后不同药剂对黄瓜根结线虫的防治效果

大田试验结果表明：本品相对福气多，对黄瓜根结线虫有同样好的防治效果，比本实施例中其他药剂的防治效果大有提高。

本发明具有设备投资少，工艺易控制，产品质量稳定，能够连续生产，适合于工业化生产，收率高于99％。本方法生产的厚孢轮枝菌和淡紫拟青霉颗粒剂不但解决了厚孢轮枝菌、淡紫拟青霉与土壤结合影响药效的问题，起到了缓释作用，延长药效有效期，同时通过两种物质的组合，对线虫的防治起了增效作用，减少用量，强化防治效果，加速了防治效率，节省了防治成本，而且不易使农药被大气，阳光和雨水破坏及流失，有效控制对地下水的污染，防治生态环境的改变。

更有前景的是，淡紫拟青霉和厚孢轮枝菌不仅能明显抑制线虫侵染，而且能促进植株营养器官的生长，同时对种子的萌发与生长也有促进作用；能产生丰富的几丁质酶，提高拟青霉菌对线虫的寄生率；对其它线虫拮抗菌达到20％～40％；据文献资料，淡紫拟青霉可寄生半翅目的荔枝蝽蟓、稻黑蝽；同翅目的叶蝉、褐飞虱；等翅目的白蚁；鞘翅目的甘薯象鼻虫以及鳞翅目的茶蚕、灯蛾等；对植物病原菌，如玉米小斑病、小麦赤霉病、黄瓜炭疽病菌、棉花枯萎病和水稻恶菌病都有很高的拮抗效能；同类研究还表明，拟青霉还能促进许多化学聚合物（如农药，制革废水等）的分解，具有一定的环保效应。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (1)

1.一种含厚孢轮枝菌和淡紫拟青霉的杀线虫组合物，其特征在于：含有厚孢轮枝菌、淡紫拟青霉、稳定剂、溶剂、助剂和载体，其中各种组分的重量百分比为：

所述助剂为拉开粉、羧甲基纤维素中的任意一种或两种；所述载体为海泡石、凹凸棒、高岭土、硅藻土中的任意一种；所述的稳定剂是蓖麻油、大豆油、环氧大豆油、丙二醇、异丙醇、BHT和BHA之中的一种或两种；所述溶剂为甲氧基苯、矿物油、异丙醇、正丁醇、二甲基亚砜中的任意一种或几种。