CN104684551A - 诸如nps89636的钙/阳离子感应受体(casr)拮抗剂在治疗炎性肺病(哮喘或copd)中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用于治疗炎性肺病的钙/阳离子感应受体(CaSR)拮抗剂，特别是NPS89636；涉及所述拮抗剂的治疗方法；包含所述拮抗剂和至少一种其他试剂的组合治疗剂；以及含有以上的喷雾器或吸入器。

Description

诸如NPS89636的钙/阳离子感应受体(CASR)拮抗剂在治疗炎性肺病(哮喘或COPD)中的应用
本发明涉及用于治疗炎性肺病的治疗剂，炎性肺病特别是哮喘或慢性阻塞性肺病(COPD)，但不限于此；涉及所述治疗剂的治疗方法；包含所述治疗剂和至少一种其他试剂的组合治疗剂；以及含有以上的喷雾器或吸入器。本发明在医学和兽医领域具有应用。
发明介绍
炎性肺病通常具有慢性性质，它们增加发病率，并且可以最终导致死亡。炎性肺病包括一系列疾病，包括但不限于，哮喘、支气管炎和慢性阻塞性肺病(COPD)。
在这类疾病中，哮喘影响了英国人口中的十二分之一，其中540万人目前正在接受治疗。英国是欧州青壮年哮喘发病率最高的国家之一，且在过去的30年中，报告哮喘症状的儿童数量增加了六倍。据估计，每天有三人死于哮喘。哮喘耗费NHS(英国国家医疗服务体系)每年大约十亿英镑，并因哮喘导致每年至少一百万工作日的丧失。
此外，虽然目前的哮喘药物疗法对很多患者来说足以控制这个疾病，但是很大一部分患者反应并不好，而且继续忍受症状和已有治疗的不希望的作用。事实上，哮喘治疗费用中的很大一部分针对即使利用现有治疗手段过度治疗但症状很难被控制的患者(接近总数的百分之十)。
因此，迫切需要更好的了解致病的过程，进而能够研制出瞄准新鉴定的分子机制的新的治疗试剂，进而提高患者的生活质量并降低哮喘治疗成本。
哮喘的特征是由于支气管痉挛、支气管高反应性(BHR)、炎症和气道重建导致的过度的气道狭窄。BHR表现为哮喘的气道平滑肌对多种特异性和非特异性刺激反应过度，是基本的病理生理学特征。尽管BHR主要特征的详细状态已存在，但潜在原因却依然不被充分理解。在哮喘中，多聚阳离子的血浆浓度显著增加。事实上，诸如多聚精氨酸、多聚L-赖氨酸、精胺、嗜曙红细胞衍生的阳离子蛋白(ECP)的多聚阳离子为哮喘严重程度的标志物，并有证据表明，它们可能直接贡献于该疾病的发病机制。哮喘气道粘膜中多聚阳离子的增加与哮喘中BHR/气道重建之间的关联长时间依赖就清楚了，并且已被判断为归因于它们的正电荷，但是将多聚阳离子增加与BHR关联起来的确切分子机制依然未得到解释。
但是在本文中，我们第一次证实：细胞外钙/阳离子感应受体(CaSR)提供了多聚阳离子和哮喘中BHR/气道重建之间的关联，因此是用于哮喘治疗的一个关键的新的分子靶点。
CaSR是一个多向性的G蛋白偶联受体，在矿物离子代谢发挥基础作用(参考近期综述(1))。虽然细胞外Ca2+(Ca2+o)是该受体的生理配体，但是CaSR仍然可以被多种多聚阳离子激活，包括与哮喘有关的那些多聚阳离子，例如但不限于，多聚L-精氨酸，多聚L-赖氨酸和精胺(2)。CaSR信号转导主要导致细胞内Ca2+(Ca2+i)动员，这在对于气道平滑肌细胞的情况下，会进而调控细胞对收缩刺激的整体收缩反应，但也同时会影响到这些细胞的寿命、移动性和分泌性。
在本文中，我们证实：CaSR表达于人类和小鼠的气道平滑肌(ASM)细胞，在气道平滑肌细胞中，CaSR能够被多聚阳离子(包括ECP)激活，并且这样的效果可被拮抗剂阻断，拮抗剂例如但不仅限于，CaSR的负性变构调节剂，称为“calcilytic”。Calcilytic阻止由多聚阳离子诱发的支气管缩窄，并在小鼠小叶内支气管能作为温和的支气管扩张剂。此外，我们证实：在清醒的小鼠体内实验中，雾化calcilytic可缓解由多聚阳离子诱发的BHR或接下来的卵清蛋白敏感化作用(哮喘的常见实验模型)。最后，calcilytic可在两种哺乳类物种中降低哮喘和COPD中炎症细胞浸润，即，卵清蛋白敏感化的/卵清蛋白激发的小鼠和脂多糖处理过的天竺鼠。综上数据显示，CaSR代表炎性肺病、特别是特殊哮喘和COPD的新的靶点。
值得注意的是，calcilytic对人类使用安全，并已经在治疗骨质疏松上已处于二期临床实验。
基于近期的研究，由于它们能够降低多聚阳离子诱发的气道高反应性并作为支气管扩张剂，我们在此教导，局部递送的calcilytic可以用于抑制或反转炎性肺病、特别是哮喘和COPD中的气道平滑肌的功能异常。
发明描述
根据本发明的第一方面，提供了钙/阳离子感应受体(CaSR)拮抗剂在治疗炎性肺病中的用途。
根据本发明的第二方面，提供了钙/阳离子感应受体(CaSR)拮抗剂在制备用于治疗炎性肺病的药物中的用途。
本文提及的术语拮抗剂包括能结合所述CaRS从而抑制其活性的分子，例如能可逆或不可逆地结合所述CaSR的活性位点的试剂，或能结合所述CaSR并通过可逆或不可逆地结合到所述CaSR的变构位点而抑制CaSR活性的分子。本文所用的拮抗剂可以是小分子或拮抗型抗体，只要其具有对于CaSR的必要抑制活性。
在本发明优选的实施方案中，所述拮抗剂是所述CaSR的负性变构调节剂，称为“calcilytic”。
Calcilytic是本领域技术人员熟知的，它们是能抑制、阻断或降低钙感应受体(CaRS)活性的化合物。例如，calcilytic可以部分或全部地、可逆或不可逆地阻断CaSR的Ca2+ i动员能力；增加形成肌醇-1,4,5-三磷酸盐的能力；或减少形成环AMP的能力；或增强MAPK激活的能力；或增强PI3激酶激活的能力；或增强Rho激酶激活的能力。本发明所用的calcilytic化合物可以为小分子或拮抗剂抗体，只要其对CaRS具有必要的抑制活性。
本发明可用的calcilytic化合物包括如下：
NPS89636(S)-4'-氰基-3'-3-[2-(4-乙基-2-氟苯基)-1,1-二甲基氨基]-2-羟基-丙氧基-联苯-4-羧酸，以及结构不相关的calcilytic，NPS2143(称为SB262470并可市售)，以及公开在US7829594中的那些化合物，即，
3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-茚满-2-基-1,1-二甲基-乙胺基)-丙氧基]-苯基}-丙酸乙酯；
3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-茚满-2-基-1,1-二甲基-乙胺基)-丙氧基]-苯基}-丙酸；
3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-茚满-2-基-1,1-二甲基-乙胺基)-丙氧基]-苯基}-丙酸异丙酯；
3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-茚满-2-基-1,1-二甲基-乙胺基)-丙氧基]-苯基}-丙酸2-乙氧基乙酯；
3{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-茚满-2-基-二甲基-乙胺基)-丙氧基]-苯基}-丙酸2-甲基-1-甲基-乙酯；
3-(4-氰基-3-{(R)-3-[1,1-二甲基-2-(5,6,7,8-四氢-萘-2-基)-乙胺基]-2-羟基-丙氧基}-苯基)-丙酸；
3-(4-氰基-3-{(R)-3-[1,1-二甲基-2-(5,6,7,8-四氢-萘-2-基-乙胺基]-2-羟基-丙氧基}-苯基)-丙酸乙酯；
3-(3-氰基-4-{(R)-3-[1,1-二甲基-2-(5,6,7,8-四氢-萘-2-基)-乙胺基]-2-羟基-丙氧基}-苯基)-丙酸；
3-(3-氰基-4-{(R)-3-[1,1-二甲基-2-(5,6,7,8-四氢-萘-2-基)-乙胺基]-2-羟基-丙氧基}-苯基)-丙酸乙酯；
3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-茚满-5-基-1,1-二甲基-乙胺基)-丙氧基]-苯基}-丙酸；和
3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-茚满-5-基-1,1-二甲基-乙胺基)-丙氧基]-苯基}-丙酸乙酯；以及它们的药学上可接受的盐及复合物；和并且还包括公开于例如以下文献中的化合物：欧洲专利和公开637,237，724,561，901,459，973,730，1,258,471，1,466,888，1,509,518；国际公开WO 97/37967，WO 99/51569，WO 01/08673，WO 04/017908，WO 04/041755，WO04/047751，WO 05/030746，WO 05/030749；WO05077886，WO05077892，WO05108376，WO06041968，WO06042007，WO06066070，WO07062370，WO07044796，WO09114098，美国专利6,395,919，6,432,656，6,521,667，6,750,255，6,818,660，6,864,267，6,908,935，6,916,956，6,939,895；7,084,167；7,109,238；7,157,498；7,202,261；7,205,322；7,211,685；7,265,145，和美国专利申请公开2002/0099220，2004/0009980，2004/0014723，2004/0192741和2005/0032850。
特别优选的calcilytic为：
NPS89636或NPS2143和SB-751689(罗卡那瑞)(GSK)；ATF936(诺华公司)；SB-423562及其口服生物可利用前体SB-423557(GSK)；和NPSP790和NPSP795，NPS R-568，JTT-305，Calhex 231(氯代苯基甲酰胺，被称为化合物7n，在N1-芳基磺酰-N2-[1-(1-萘基)乙基]-反式-1,2-环己二胺的N1位取代的衍生物，化合物7d，7e，7e，7m)，NPS53574(以及取代的3H-喹唑啉-4-酮，化合物5a，b，d-k，m-t)，ATF936和AXT914(诺华公司)。
具体而言，我们在本文中证实：CaSR表达于人类和小鼠的气道平滑肌(ASM)细胞，在气道平滑肌细胞中，CaSR能够被多聚阳离子(包括ECP)激活，并且这样的效果可被CaSR的负性变构调节剂所阻断，称为“calcilytic”。
此外，我们证实：在清醒的小鼠中，雾化calcilytic可缓解由多聚阳离子诱发的BHR或接下来的卵清蛋白敏感化作用(哮喘研究的公认实验模型)，表明CaSR为哮喘治疗提供了一个新的靶点。
因此，在本发明优选的实施方案中，所述钙/阳离子感应受体(CaSR)拮抗剂配制为作为气雾剂或喷雾给药，并且理想是与喷雾器或吸入器一起使用，特别是剂量计量式吸入器或干粉吸入器，但不限于此。
Calcilytic，单独或与其他治疗剂组合，可以不同方式通过吸入给药，例如加压剂量计量式吸入器，干粉吸入器，用喷雾器或小体积液体吸入器来递送液体溶液，或用适于吸入的汽化制剂。尽管calcilytic已被用于口服给药来治疗其他疾病，但对于常规抗哮喘治疗，局部施用可能带来最理想的益处/风险率。
包含单独的calcilytic或calcilytic与其他治疗剂的组合以及例如推进剂的加压剂量计量式吸入器(pMDI)可配制为在推进剂(如HFA 134a或HFA227)中包含calcilytic溶液或分散液，其可以单独地或与赋形剂组合来改善气雾剂性能，如助溶剂(例如，乙醇、甘油、聚乙二醇、丙二醇)，表面活性剂(例如，油酸)或其他赋形剂，如稳定剂和pH调节剂(例如，抗坏血酸，乙二胺四乙酸钠，盐酸)。当calcilytic以分散液存在于pMDI中时，可以使用适当的物理和/或化学方法以确保在雾化后的空气动力学颗粒大小适于递送到呼吸气道，一般小于10μm，优选小于5μm。
包含单独的calcilytic或calcilytic与其他治疗剂的组合的干粉吸入器(DPI)例如可配制为包含小颗粒的calcilytic，其可以单独地或与载体颗粒(如乳糖或蔗糖)组合来帮助雾化。可以使用适当的物理和/或化学方法以确保在从DPI雾化后的空气动力学颗粒大小适于递送到呼吸气道，一般小于10μm，优选小于5μm。
包含单独的calcilytic或calcilytic与其他治疗剂的组合制剂的喷雾器和小体积液体吸入器例如可配制为在水性介质中包含calcilytic溶液或分散液，其可以单独或与赋形剂组合来改善气雾剂性能，如助溶剂(例如，乙醇、甘油、聚乙二醇、丙二醇)，表面活性剂(例如，油酸)或其他赋形剂，如稳定剂和pH调节剂(例如，抗坏血酸，乙二胺四乙酸钠，盐酸)。但calcilytic单独或与其他治疗剂组合以喷雾器和小体积液体吸入器中的分散液存在时，可以使用适当的物理和/或化学方法以确保在雾化后的空气动力学颗粒大小适于递送到呼吸气道，一般小于10μm，优选小于5μm。
单独或与其他治疗剂组合的calcilytic的适于吸入的汽化制剂例如可通过以下方式配制：短时间加热calcilytic到高温，通常少于1秒，calcilytic可以单独地或与赋形剂组合来更改气雾剂性能(例如，丙二醇，乙醇)。所用的方法可以确保在雾化后的空气动力学颗粒大小适于递送到呼吸气道，一般小于10μm，优选小于5μm。
如上文所述，更优选的是，所述拮抗剂单独或与治疗剂组合可能通过经鼻给药、支气管给药或颊给药用于呼吸道治疗，例如，通过使用气雾剂或喷雾剂，这样能够使calcilytic以粉末形式或溶液或悬液滴的形式分散。除有效成分外，具有粉末分散性质的药物组合物通常包含沸点低于室温的液体推进剂，并且有需要时还包含辅剂，如液体或固体的非离子或阴离子表面活性剂和/或稀释剂。药学有效成分处于溶液中的药物组合物，除有效成分外，包含适当的推进剂，此外有需要时还包含其他溶剂和/或稳定剂。也可使用压缩气体代替推进剂，根据需要，通过适当的压缩和膨胀装置可以将其实现。
可以通过以下方式制备本发明的药物组合物：使本发明的calcilytic单独与载体结合，或者将本发明的calcilytic和其他治疗剂的组合与载体结合。一般而言，通过使单独的calcilytic或calcilytic与其他治疗剂组合与液体载体或细化固体载体或两者均匀地且密切地结合来制备制剂。
然而，在本发明进一步优选的实施方案中，所述钙/阳离子感应受体(CaSR)拮抗剂配制为口服给药。
本发明中的口服给药制剂可以提供为：独立单元，如胶囊、药袋和片剂，每个包含预定量的calcilytic；粉末或颗粒；溶液或于活性剂在水性或非水性液体中的悬浮液；或水包油的液体乳剂或油包水的液体乳剂；或药丸等。
对于口服给药组合物(例如，片剂和胶囊)，术语“可接受的载体”包括以下介质，如常见赋形剂，例如，结合剂，如糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、黄芪胶、聚乙烯吡咯烷酮(聚维酮)、甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素、蔗糖和淀粉；填充剂和载体，例如玉米淀粉、明胶、乳糖、蔗糖、微晶纤维素、高岭土、甘露醇、磷酸氢钙、氯化钠和藻酸；以及润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸钠以及其他金属硬脂酸盐、硬脂酸甘油酯、硬脂酸、硅酮液、滑石蜡、油类和胶体二氧化硅。也可使用如薄荷、冬青油、樱桃香料等的调味剂。加入调色剂使得剂型容易辨识也是可取的。片剂可通过本领域公知的方法进行包被。
可通过压缩或制模制造片剂，任选地使用一种或多种辅助成分。可通过以下方式来制备压缩片剂：在合适的机器中，以自由流动的形式(如粉末或颗粒)压缩活性剂，任选地与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、表面活性或分散剂混合。可通过以下方式来制备模制片剂：在合适的机器中，将用惰性液体稀释剂润湿的粉末化合物的混合物进行制模。任选地，可以对片剂进行包被或刻痕，并且可将其制备成能缓慢释放或受控释放活性剂。
其他适合口服给药的制剂包括：包含在调味基质(通常为蔗糖和阿拉伯树胶或黄芪胶)中的单独的calcilytic或calcilytic与其它治疗剂组合的糖锭；包含在惰性基质(例如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯树胶)中的calcilytic的软锭剂；包含在合适的液体载体中的calcilytic的漱口水。
可通过使本发明的calcilytic与载体结合来制备口服组合物。一般而言，通过使calcilytic与液体载体或细化固体载体或两者均匀地且密切地结合来制备制剂，并且必要时对产品进行成型。本发明延伸到下述包含calcilytic的药物组合物，其中calcilytic与药学上或兽医学上可接受的口服给药载体或介质组合或结合。
在本发明进一步优选的实施方案中，所述钙/阳离子感应受体(CaSR)拮抗剂用于治疗选自包含以下的组的疾病：炎性肺病、哮喘、支气管炎和慢性阻塞性肺病(COPD)。
最优选地，所述钙/阳离子感应受体(CaSR)拮抗剂，单独或与其他治疗剂组合，用于治疗哮喘和/或COPD。
在本发明其他优选方面，提供了治疗炎性肺病的方法，包括给予个体所述钙/阳离子感应受体(CaSR)拮抗剂。
在本发明的方法中，优选地，将所述钙/阳离子感应受体(CaSR)拮抗剂，单独或与其他治疗剂组合，制备成以气雾剂或喷雾给药，理想地与喷雾器或吸入器一起使用。
在本发明进一步优选的方法中，所述钙/阳离子感应受体(CaSR)拮抗剂用以治疗选自包含以下的组的疾病：炎性肺病、哮喘、支气管炎和慢性阻塞性肺病(COPD)。
最优选地，所述钙/阳离子感应受体(CaSR)拮抗剂，单独或与其他治疗剂组合，用于治疗哮喘和/或COPD。
根据本发明其他的优选方面，提供了包含本文描述的钙/阳离子感应受体(CaSR)拮抗剂和至少一种其它治疗剂的用于治疗炎性肺病的组合治疗剂。
在优选的实施方案中，所述至少一种其它治疗剂为用于治疗炎性肺病的药剂，并且理想地为抗哮喘和/或抗COPD药剂。
根据本发明其他的优选方面，提供了包含至少一种用于治疗炎性肺病的治疗剂的喷雾器或吸入器，其中所述治疗剂为本文描述的钙/阳离子感应受体(CaSR)拮抗剂。
在优选实施方案中，所述所述喷雾器或吸入器包括本文描述的组合治疗剂。
更优选地，所述喷雾器或吸入器用于治疗选自包含以下的组的炎性肺病：哮喘、气管炎和慢性阻塞性肺病(COPD)。理想地，所述喷雾器或吸入器用于治疗哮喘和/或COPD。
本文描述的本发明被用于哺乳动物，尤其是人类，但是本发明也可应用于兽医学，并因此可涉及马类、猪类、犬类、猫类、有蹄类、灵长类动物，或实际上任何会发展出炎性肺病的动物。
在本说明书和权利要求的全文中，词语“包含(comprise)”和“含有”以及它们的变形词，如“包含(comprising)”和“包含(comprises)”意为“包括但不仅限于”并且不排除其他部分、添加物、组分、整数或步骤。在本说明书和权利要求的全文中，单数形式包含复数形式，除非上下文语境另作要求。尤其是，当使用不定冠词时，说明书应被理解为考虑到复数和单数，除非上下文语境另作要求。
本文说明中引用的所有参考文献，包括任何专利和专利申请，都通过引用并入本文。没有承认任何参考文献构成现有技术。而且，没有承认任何现有技术构成本领域部分普通常识的一部分。
本发明各方面的优选特征与其他方面相关联地进行描述。
从以下的实施例中，本发明的其他特征会变得更清楚。一般而言，本发明延伸到本说明书中(包括附随的权利要求和附图)公开的特征的任何新的一个或新的组合。因此，结合本发明的某一方面、实施方案或实施例描述的特征、整数、特性、化合物或化学部分应被理解为适用于本文描述的任何其他方面、实施方案或实施例，除非与其不相容。
此外，除非另有说明，本文公开的所有特征可被承担相同或类似目的可选特征所替代。
现仅以举例说明的方式参考以下的附图和表格描述本发明。
图1.i)多聚阳离子引发细胞内Ca2+的CaSR依赖性的增加；ii)ECP为人CaSR的新型激动剂；iii)两种结构不相关的calcilytic，NPS89636和NPS2143，阻止多聚阳离子依赖性的CaSR活化作用。将稳定表达人CaSR(HEK-CaSR)或空载体转染(HEK-0)的HEK293细胞加载4μM fura-2AM，在存在或不存在100nM calcilytic NPS89636的情况下，暴露于300nM多聚L-精氨酸(Poly-L-Arg，A)，1mM精胺(B)或10μg/ml嗜曙红细胞阳离子蛋白(ECP，C)。结构不相关的calcilytic NPS2143也阻止精胺诱导的CaSR活化作用(D)。模拟转染的细胞(HEK-0)中的反应是最低的，并与激动剂诱发的反应差异显著。被三种激动剂诱发的Ca2+ i释放(测量峰值/基线荧光发射比，F/F0)被NPS89636显著降低。值得注意的是，哮喘个体中的ECP血清浓度据信为～30μg/ml。n＝121-487个细胞，3-9次实验。数据为平均值±标准误。显著差异在柱子上方显示。
图2.人和小鼠气道中CaSR免疫定位。A.用CaSR多克隆抗体(浅影)染色的人气道活检冷冻切片在平滑肌(箭头)和上皮细胞中表现免疫反应性。L＝气道腔；标尺＝50mm。B，C：切开的小鼠小叶外支气管中的CaSR免疫染色(C)与钙调蛋白共定位(B)。D.发射光图像显示小叶间支气管外植体和从其迁移开的平滑肌细胞。E.气道平滑肌(ASM)细胞的示例性视野显示CaSR免疫反应性(浅影)。细胞培养10天，多聚甲醛固定并用针对钙调蛋白引发的抗体鉴别平滑肌。F.用平滑肌细胞标志物(平滑肌肌动蛋白)和抗CaSR抗体对人气道平滑肌细胞(HASMC)染色。放大倍数：20。
图3.人气道平滑肌中的CaSR可被Ca2+ o和多聚阳离子激活。加载Fura-2AM的人ASM细胞，当暴露于增加的[Ca2+]o(A，n＝7)或精胺(B，n＝35；平均值±标准误)时，[Ca2+]i(F/F0)升高。图C显示被10μg/ml ECP和1μM缓激肽(BK)激发的[Ca2+]i升高的示例性轨迹。在5mM[Ca2+]o(CaSR饱和，见A)的存在下，对ECP的应答消失，而对BK的应答不消失，这符合CaSR被ECP激活。D.“负显性”CaSR(CaSR DN)的转染在人ASM细胞中阻止精胺依赖性的[Ca2+]i增加，该效果在模拟转染细胞中未能观察到。
图4.精胺增强从野生型小鼠中分离的小鼠小叶内支气管的ACh诱发的收缩，但不诱发从平滑肌细胞中靶向性缺失CaSR的小鼠的小叶内支气管的收缩。A.从野生型C57/Bl6小鼠(3-4个月龄)切除小叶内支气管，在含有1mM Ca2+ o的细胞外溶液的存在下，固定于线肌动描记器并输送95％O2/5％CO2。之后，在存在(预先处理15分钟)或不存在300μM精胺的情况下，把它们暴露于增加浓度的乙酰胆碱(ACh)。数据为平均值±标准误，n＝3。B.从野生型(sm22α-Cre-/-/floxed-CaSR+/+)和CaSR敲除(sm22α-Cre+/+/floxed-CaSR+/+)小鼠切除小叶内支气管，并如(A)中所述固定于线肌动描记器。支气管预先收缩至最大张度的～50％，接着将增加浓度的精胺加入体系。收缩(从松弛曲线的零值向上偏转)或松弛(从松弛曲线的零值向下偏转)的百分数通过张力数据来计算。数据为平均值±标准误，每个基因型n＝3。
图5.Calcilytic阻止乙酰甲胆碱处理的小鼠中多聚阳离子诱发的BHR。在体积描计室中，将清醒的未限制的BalbC小鼠适应30分钟，之后用雾化NPS89636(3μM，三角)或载体(配制于盐水的0.3％DMSO，菱形)预处理30分钟，之后用雾化多聚L-精氨酸(3μM，正方形)处理或多聚L-精氨酸和NPS89636(三角)共处理1小时。处理之后，动物置于体积描计室(Buxco,USA)，允许适应10分钟，之后用乙酰甲胆碱(MCh，0.1-10mg/ml)处理。没有受到任何处理的动物对乙酰甲胆碱的反应显示为黑色标记。根据我们之前的估计，～1-5％雾化药物会到达肺上皮。数据显示为Penh平均变化±标准误，n＝3-6。*与空白相比差异显著(p<0.05)。
图6.Ca2+ o激活CaSR，该作用可被calcilytic NPS89636阻止。
将稳定表达人CaSR(HEK-CaSR)或空载体转染(HEK-0)的HEK293细胞加载4μM fura-2AM，并在存在或不存在calcilytic NPS89636(100nM)的情况下，暴露于5mM Ca2+ o。数据获自>3个实验和121-386个细胞。显著差异在柱子上方显示。
图7.CaSR激动剂Ca2+ o引起野生型小鼠中初级气道平滑肌细胞(MASMC)中[Ca2+]i增加，但在从这些细胞中靶向性缺失CaRS的小鼠的MASMC中未观察到该现象。在分离于小鼠小叶间支气管(第2-6代)并加载4μM fura-2AM的单细胞上实施细胞内钙成像。WT＝通过将sm22αCre-小鼠与LoxP+/+CaSR小鼠繁育获得的表达CaSR的细胞；KO＝通过将sm22αCre+小鼠与LoxP+/+CaSR小鼠繁育实现MASMCs细胞中敲除CaSR的细胞。结果表示为对阳性对照乙酰胆碱(3μM ACh)应答的百分数(％)。WT:6-11个细胞，来自5个实验；KO:2-11个细胞，来自4个实验。这个图显示，在敲除的细胞中功能性CaSR的删除，因此该小鼠模型适用于下图描述的研究。
图8.在WT的小叶内支气管中，CaSR激动剂精胺增强ACh诱导气道收缩，但在KO小鼠中未观察到该现象。从WT或KO小鼠左肺叶切除第二/第三级小叶内支气管，用不锈钢丝(d＝40μm)固定于小的血管线肌动描记器，并保持在灌充95％O2/5％CO2的Krebs溶液中。将支气管于37℃静置30分钟，然后被逐渐拉伸而达到2mN被动张力。经过30分钟平衡，通过在体系中加入40mM KCl来测量支气管的反应性。将支气管与精胺孵育15分钟，然后，在体系中逐渐加入支气管收缩剂乙酰胆碱(ACh,1nM-30μM)。数据显示为以对照中最大收缩标准化的收缩百分数的平均值±标准误。星号表示显著差异(*p<0.05)。
本图和下图展示CaSR激动剂精胺和Ca(下图)在缺乏它们靶标的细胞中不再能增强气道高反应性。
图9.在WT的小叶内支气管中，CaSR激动剂Ca2+ o增强ACh-诱导的气道收缩，但在KO小鼠中未观察到该现象。从WT或CaSR KO小鼠左肺叶切除第二/第三级小叶内支气管，用不锈钢丝(d＝40μm)固定于小的血管线肌动描记器，并保持在灌充95％O2/5％CO2的Krebs溶液中。将支气管于37℃静置30分钟，然后被逐渐拉伸而达到2mN被动张力。经过30分钟平衡，通过在体系中加入40mM KCl来测量支气管的反应性。将支气管与2.5mM Ca2+ o孵育15分钟，然后，在体系中逐渐加入乙酰胆碱(ACh,1nM-30μM)。星号表示显著差异(*p<0.05；**p<0.01)。
图10.在WT的乙酰甲胆碱预收缩的小叶内支气管中，CaSR激动剂精胺增强支气管收缩，但在KO小鼠中未观察到该现象。从WT或CaSRKO小鼠左肺叶切除第二/第三级小叶内支气管，用不锈钢丝(d＝40μm)固定于小的血管线肌动描记器，并保持在灌充95％O2/5％CO2的Krebs溶液中。将支气管于37℃静置30分钟，然后被逐渐拉伸而达到2mN被动张力。经过30分钟平衡，通过在体系中加入40mM KCl来测量支气管的反应性。用ACh(1μM)预处理支气管而达到最大张度的约50％，接着逐渐增加浓度的精胺(10μM-3mM)被逐渐加入体系中。数据显示为从基线的改变百分比的平均值±标准误，其中从零值向上偏转代表收缩，而从松弛曲线零值向下偏转代表松弛。
图11.Calcilytic NPS89636在WT小鼠中乙酰胆碱预收缩的小叶内支气管引起温和的松弛。从WT或CaSR KO小鼠左肺叶切除第二/第三级小叶内支气管，固定于小的血管肌动描记器。将支气管逐渐拉伸而达到2mN被动张力。经过30分钟平衡，通过在体系中加入40mM KCl来测量支气管的反应性。用ACh(1μM)使支气管预收缩而达到最大张度的约50％，接着在体系中加入NPS89636(300nM或3μM)。数据显示为从基线的改变百分比的平均值±标准误。
图12.Calcilytic NPS89636阻止乙酰甲胆碱处理的小鼠中多聚L-精氨酸诱导的BHR。
在实施实验前一个星期，从Harlan购买雄性BalbC小鼠(～25g)。在实验前五天，每天将小鼠放置于体积描记系统(Buxco,USA)中40分钟，使小鼠适应该系统。实验当天，记录每只小鼠的体重，并且在记录前允许小鼠有至少10分钟时间适应仪器室。之后，记录呼吸活动5分钟，以建立Penh的基线值。随后，小鼠暴露于增加浓度的雾化乙酰甲胆碱(氯化乙酰‐β‐甲基胆碱(MCh)，按照0.1-100mg/ml配制于盐水中)的盐水溶液。在每次给予气雾剂之后，记录数据3分钟。将每个MCh浓度下的Penh值平均，并表示为Penh基线比例(处理前Penh)。
第二天，使用雾化多聚L-精氨酸(PLA,3μM)、NPS89636(3μM)、多聚L-精氨酸+NPS89636(均为3μM)或载体(0.3％DMSO)处理小鼠1小时，然后测量肺功能，随后按照上文重复乙酰甲胆碱处理。将每个MCh浓度下的Penh值平均，并表示为该天Penh基线比例(处理后Penh)。数据提供为每个处理引起的Penh的变化百分比(ΔPenh，％)(＝处理后Penh–处理前Penh x 100)。MCh:乙酰甲胆碱。N＝每个条件下5只小鼠。与载体对照的统计学差异为*p<0.05或**p<0.01，与多聚L-精氨酸处理的差异为#p<0.05或###p<0.001(利用Bonferroni后检验的双因素ANOVA)。
图13.Calcilytic NPS89636阻止乙酰甲胆碱处理的小鼠中卵清蛋白诱导的BHR。在0和5天，通过腹腔注射配制于PBS中的卵清蛋白(OVA)(100mg/小鼠)和氢氧化铝(50mg/小鼠)使小鼠敏感化。最后一次注射后14天，通过吸入配制于PBS中的0.5％OVA气雾剂的处理小鼠，同一天处理两次，间隔4小时。在最后一次OVA暴露前一小时和后三小时，使用雾化NPS89636(3μM)或载体(0.3％DMSO)来处理小鼠。在最后一次OVA吸入处理前24小时和后24小时，通过体积描记法来测量乙酰甲胆碱处理后的BHR。
如上文所述，在乙酰甲胆碱处理过程中通过体积描记法记录Penh(处理前Penh)。24小时后，在吸入或不吸入雾化NPS89636(或0.3％DMSO载体)的情况下，用0.5％雾化OVA(配制于PBS(w/v))处理小鼠。该处理的时间方案包括：
第24小时：OVA，持续1小时；
第27小时：NPS89636(3μM)、DMSO(0.3％)或PBS(对照)之一，持续1小时；
第28小时：OVA，持续1小时；
第31小时：NPS89636(3μM)、DMSO(0.3％)或PBS(对照)之一，持续1小时；
第32小时：如上文所述，于乙酰甲胆碱处理中实施体积描记法(处理后Penh)。
数据提供为每个处理引起的Pehn的变化百分比(ΔPenh,％)(＝处理后Penh–处理前Penh x 100)。N＝每个条件下6只小鼠。与载体对照的统计学差异为*p<0.05。
图14.Calcilytic NPS89636降低OVA敏感化的小鼠的支气管肺泡灌洗液(BALF)中检测的炎症细胞浸润。在图13中详细描述的OVA敏感化作用和存在NPS89636(3μM)或载体(0.3％DMSO)的雾化方案之后24小时，将小鼠处死，通过灌洗来收集BALF。在当天通过血细胞计数器对BALF中的细胞进行计数。为了有差异的细胞计数，通过10次离心来浓缩BALF，将100μL最终溶液施加于Cytospin 3Shandon细胞涂片系统。之后，将载玻片浸入1.5％Leisman甲醇染色液6分钟，之后在水中简单洗涤两次，干燥过夜，使用100倍油镜计数细胞。数据为平均值±标准误。标出载体和calcilytic间的显著差异，p<0.05，n＝11。
图15.Calcilytic NPS89636降低具有LPS诱导的COPD的豚鼠的支气管肺泡灌洗液(BALF)中检测的炎症细胞浸润。雄性Dunkin-Hartley豚鼠(500-550g)暴露于配制于盐水中的30μg/ml雾化糖多脂(LPS)，每隔一天暴露1小时，共暴露9次。动物接受雾化3μM NPS89636(或0.3％DMSO载体)处理9天，在暴露5后开始接受处理30分钟，然后每隔一天在LPS暴露之前接受处理30分钟。于第九次暴露后处死动物(1.5mL EuthatalIP)，收集BALF，如图14中描述当天计数细胞。数据展示为平均值±标准误。载体和calcilytic间显著性差异表示为p<0.05n＝6。
表1.雾化calcilytic处理后1h、4h或24h，Balbc小鼠中血浆电离Ca2+测量值没有受到显著影响。BalbC小鼠中血浆电离Ca2+的参考值为～0.8-0.9mM
(http://www.jimmunol.org/content/175/2/917.long#F6)
本表显示，雾化calcilytic处理没有影响系统钙水平。
表2.雾化calcilytic处理后24h，豚鼠中血浆电离Ca2+测量值没有受到显著影响。
Calcilytic实例的化学结构
NPS 89636
化学名称：(S)-4'-氰基-3'-3-[2-(4-乙基-2-氟苯基)-1,1-二甲基乙基氨基]-2-羟基-丙氧基-联苯-4-羧酸氢氯化物
批号：PWR-B-039
物理外观：白色固体
结构：
NPS 2143
化学名称：2-氯-6-[(2R)-3-[[1,1-二甲基-2-(2-萘基)乙基]氨基-2-羟基丙氧基]氰苯氢氯化物
FW:445.38
分子式：C24H25ClNO2.HCl
材料和方法
表达重组人CaSR的HEK293细胞中由多聚阳离子诱发的细胞内Ca2+(Ca2+ i)测量以及calcilytic对其的影响
将稳定表达人CaSR(HEK-CaSR)或转染空载体(HEK-0)的HEK293细胞加载4μM fura-2AM，在存在或不存在100nM calcilytic NPS89636的情况下，暴露于300nM多聚L-精氨酸(Poly-L-Arg)、300mM-1mM精胺、10μg/ml嗜曙红细胞阳离子蛋白(ECP)或5mM Ca2+ o。还测试了结构不相关的calcilytic NPS2143(1-10μM)在HEK-CaSR中精胺诱导的Ca2+ i动员的能力。值得注意的是，哮喘个体中ECP血清浓度随疾病严重程度增加，据信能达到～30μg/ml。
人和小鼠气道中CaSR的表达
对于人气道，新鲜分离的、多聚甲醛固定的支气管活检组织被用于检测CaSR在不同细胞类型中的表达。使用我们验证的抗CaSR抗体(3)进行免疫组织化学分析(图2A)。将来自C57Bl6小鼠的小鼠小叶间支气管分开，并用多聚甲醛固定30分钟。使用市售抗体检测CaSR和钙蛋白酶(ASM细胞标志物)的免疫反应性。使用奥林巴斯BX40显微镜获取图像。从完整小鼠肺切割的小鼠小叶间支气管碎块外植小鼠ASM细胞(每个外植体～2mm)。将细胞用2％多聚甲醛固定30分钟，随后对钙蛋白酶(ASM细胞标志物，未示出)进行免疫染色，对于CaSR使用市售抗体(4)。来自正常和哮喘病志愿者(准入标准如(5)所定义)的人ASM细胞是根据我们实验室建立的标准实验程序(6,7)，从健康和哮喘病志愿者的光导纤维支气管镜检获得的支气管活检组织外植而来的。在必要时，将培养的细胞扩增，并保存用于在前几代中使用(1-5)。
多聚阳离子对人ASM细胞的体外影响
使用上文描述的实验程序，当原代人气道平滑肌细胞的细胞培养物实现80-90％融合时，通过将细胞暴露于病理生理相关浓度的ECP(1-10μg/ml)，精胺(0.1-3mM)和Ca2+ o(1-5mM)来激活内源CaSR，从而确定对细胞内Ca2+ i信号转导的影响(使用Ca2+敏感荧光染料，Fura-2)。在人ASM细胞中，通过使用Amaxa Nucleofector(8)，用“显性负性”CaRSR185Q转染细胞，内源CaSR功能被下调。
Ca2+ o对具有平滑肌细胞靶向性CaSR的从小鼠分离的ASM的影响
我们实验室通过将sm22αCre重组酶小鼠和LoxP CaSR(其Lox P位点位于CaSR外显子7的侧翼)(9)繁育，获得平滑肌中CaSR靶向性基因敲除的小鼠。平滑肌22α(sm22α)启动子驱动Cre重组酶几乎仅表达于内脏和血管平滑肌，并一些表达可能发生在颅骨缝和胎儿心脏(10)。这些小鼠从2010年1月已经位于卡迪夫。我们的繁育过程中，使用sm22α-Cre+/+/floxed-CaSR+/+(平滑肌中缺乏CaSR)作为敲除(KO)小鼠，sm22α-Cre-/-/floxed-CaSR+/+(平滑肌中表达全长CaSR)作为野生型(WT)对照小鼠。WT和KO小鼠都是可生育的、有活力的并具有正常寿命。从WT或KO完整小鼠肺切开的小鼠小叶间支气管碎块外植小鼠ASM细胞(每个外植体～2mm)。将第2-4代细胞加载fura-2AM，Ca2+ o(1-5mM)诱导的Ca2+ i浓度增加表示为对阳性对照乙酰胆碱(ACh)的最大响应的％。WT:6-11个细胞，来自5个实验；KO:2-11个细胞，来自4个实验。
CaSR激活剂精胺或Ca2+ o对小鼠小叶内支气管中乙酰胆碱依赖性收缩反应的离体影响。
如以前所述(11)，从5-6月龄的野生型(sm22α-Cre-/-/floxed-CaSR+/+)和CaSR敲除(sm22α-Cre+/+/floxed-CaSR+/+)小鼠的左肺叶切除第二/第三级小叶内支气管(长约2mm)，用不锈钢丝(d＝40μm)固定于小的血管线肌动描记器(Danish Myotech)，将其保持在含1mM Ca2+ o并灌充95％O2/5％CO2的改良Krebs溶液中。将支气管于37℃静置30分钟，然后被逐渐拉伸而达到2mN被动张力。经过30分钟平衡，通过在体系中加入40mMKCl来测量支气管的反应性。然后，将环在存在(预处理15分钟)或不存在300μM精胺的情况下暴露于增加浓度的乙酰胆碱(ACh)，或暴露于逐渐的2.5mM Ca2+ o。
多聚阳离子、精胺对WT小鼠和平滑肌中靶向性CaSR敲除的小鼠的支气管小叶内收缩的影响
如以前所述(12)，从野生型(sm22α-Cre-/-/floxed-CaSR+/+)和CaSR敲除(sm22α-Cre+/+/floxed-CaSR+/+)小鼠切除小叶内支气管，并固定于线肌动描记器。在体系中加入增加浓度的精胺(10μM-3mM)，通过张力数据来计算收缩(从零值向上偏转)和松弛(零值向下偏转)。WT:n＝6；KO:n＝7。*p<0.05；**p<0.01。
Calcilytic NPS89636对小鼠小叶内支气管的影响
从WT或CaSR KO小鼠左肺叶切除第二/第三级小叶内支气管，用不锈钢丝(d＝40μm)固定于小的血管肌动描记器，并保持在灌充95％O2/5％CO2的Krebs溶液中。将支气管于37℃静置30分钟，然后被逐渐拉伸而达到2mN被动张力。经过30分钟平衡，通过在体系中加入40mM KCl来测量支气管的反应性。用ACh(1μM)使支气管预收缩而达到最大张度的约50％，接着在体系中加入NPS 89636(300nM或3μM)。
多聚阳离子和calcilytic NPS89636对不受限制的、清醒的小鼠的支气管高反应性的体内影响
通过体积描记法测量基线呼吸道高反应性。雄性BalbC小鼠(～25g)被饲养于Perspex室，在存在或不存在calcilyticNPS89636的情况下，将CaSR激活剂(多聚L-精氨酸)的气雾剂通过Pulmostar喷雾器递送。在不受限制的、清醒的小鼠中，在乙酰甲胆碱处理前(基线)和处理后，通过气压体积描记法(Buxco Research Systems)实施肺功能的非侵袭性测量。每个实验前，在实验前5天每天将动物置于体积描记法室内40min，使动物熟悉仪器来降低紧张度。增强呼吸间歇(Penh)(12,13)作为呼吸道功能对吸入乙酰甲胆碱(1-30mg/ml)的反应的指标被测量，用以研究气道高反应性(我们近期发现其能反映乙酰甲胆碱诱发的支气管收缩(14))。所有的药物都在空白小鼠中检测其影响乙酰甲胆碱处理的能力。实验当天，每只小鼠的体重均被记录，并且记录前允许小鼠有至少10分钟时间适应仪器室。之后，记录5分钟呼吸活动以建立Penh的基线值。随后，小鼠被暴露于增加浓度的雾化乙酰甲胆碱(MCh，以0.1-100mg/ml配制于盐水中)。在气雾剂给药之后的3分钟记录数据。第二天，在肺功能测量前，使用雾化多聚L-精氨酸(PLA,3μM)、NPS89636(3μM)、多聚L-精氨酸+NPS89636(均为3μM)或载体(0.3％DMSO)处理小鼠1小时，随后按以上重复乙酰甲胆碱处理。我们之前估计，雾化药物中<10％会实际到达肺的上皮(事实上，我们认为是1-5％)。因此我们认为，在雾化室使用的药物浓度应高于我们所期望在肺上皮达到的有效浓度约10-100倍。
将每个MCh浓度下的Penh值平均化，并表示为该天基线Penh的比例(处理后％Penh)。数据提供为每个处理引起的Penh的变化百分比(ΔPenh，％)(＝处理后Penh–处理前Penh)。N＝每个条件下5只小鼠。
Calcilytic NPS89636在卵清蛋白敏感化的、卵清蛋白处理的未受限制的、清醒小鼠哮喘模型中对支气管高反应性的体内影响
在实验前，从Harlan购买雄性BalbC小鼠(～25g)，允许其适应一个星期。然后，在第0和5天，通过腹腔注射配制于PBS的卵清蛋白(OVA)(100μg/小鼠)和氢氧化铝(50mg/小鼠)使小鼠敏感化。最后一次注射后13天，如上所述，通过体积描记法在乙酰甲胆碱处理过程中记录Penh(处理前Penh)。第二天，通过吸入0.5％雾化OVA(配制于PBS，w/v)和雾化NPS89636(或0.03％DMSO载体)来处理小鼠。该处理的时间方案包括：
第0小时:OVA，持续1小时；
第4小时:NPS89636(3μM)、DMSO(0.03％)或PBS(对照)之一，持续1小时；
第5小时:OVA，持续1小时；
第9小时:NPS89636(3μM)、DMSO(0.03％)或PBS(对照)之一，持续1小时；
第29小时:如上所述，在乙酰甲胆碱处理中实施体积描记法(处理后Penh)。.
实验的最后，通过开放颈动脉收集血液。允许血液凝集2-3小时，于4℃、3000g离心10分钟。收集的样品用于测量Ca2+ o(由威尔斯大学附属医院生物化学部完成)。
使用3次1ml PBS完成支气管肺泡灌洗，收集BALF用于炎症细胞定量。用4％中性福尔马林缓冲液灌注固定左肺24小时，右肺留作RNA/蛋白分析。数据提供为每个处理(＝处理后Penh–处理前Penh)引起的Pehn的变化百分比(ΔPenh,％)。
calcilytic NPS89636在LPS处理的豚鼠COPD模型中对炎症细胞浸润的影响
雄性Dunkin-Hartley豚鼠每隔一天暴露于配制于盐水中的30μg/ml雾化糖多脂(LPS)1小时，共9次。动物暴露5后开始接受药物/载体，共9天：3μM NPS89636(或0.3％DMSO载体)，持续30分钟，在每隔一天的LPS暴露之前30分钟。在第九次暴露后24小时处死动物(1.5mLEuthatal，腹腔注射)，收集支气管肺泡灌洗液，如下文所述，用于测定总体和差异性细胞计数。
Calcilytic NPS 89636对OVA敏感化小鼠和LPS处理的豚鼠的BALF中的炎症细胞浸润的影响。
对于哮喘模型，通过致死过量的戊巴比妥钠(Euthatal)来处死OVA敏感化的小鼠，之后使用插管将1ml PBS通过气管切口注入肺。该过程重复3次，将获得的3ml支气管肺泡灌洗液离心并重悬于300μL PBS。100μL被用于总细胞计数，100μL用于细胞涂片以进行差异性细胞计数。对于COPD模型，通过致死过量的戊巴比妥钠来处死豚鼠。在颈部制造切口。随后，使用静脉内聚丙烯插管进行气管插管。将PBS(1ml/100g豚鼠体重)通过插管注入肺部，3分钟后回收。重复这个过程，并将回收的灌洗液合并。将BALF于PBS中稀释10倍，100μL最终溶液用于差异性细胞计数。
对于总细胞计数，来自OVA敏感化的小鼠的100μL浓缩BALF或来自豚鼠的100μL稀释的BALF被施加于Cytospin 3Shandon细胞涂片系统(使用来自Thermo Scientific的玻璃载玻片(BS7011/2；0.8-1mm，76x26mm)和来自Thermo Scientific的滤纸(5991022；Shandon滤卡)，在1000rt/min下运行共7分钟。之后，将载玻片浸入1.5％Leisman甲醇染色液6分钟，之后在水中简单洗涤两次。允许载玻片干燥过夜，使用100倍油镜计数细胞。
血浆电离Ca2+的测量
我们证实：在雾化calcilytic处理后，在Balbc小鼠(表1)或豚鼠(表2)中的血浆电离Ca2+的水平没有受到显著的影响。因此，该处理不会对哺乳动物有害。
统计分析
除非另作说明，数据提供为平均值±标准误。使用非配对t检验或Bonferroni后检验单因素方差分析进行统计分析，p<0.05代表差异显著。
结果
CaSR是多向性G蛋白偶联受体，在矿物离子代谢发挥基础作用(参考近期综述(1))。虽然细胞外钙离子(Ca2+o)是该受体的生理配体，但是CaSR仍然可以被多种多聚阳离子激活，包括与哮喘有关的多聚阳离子，例如多聚L-精氨酸、多聚L-赖氨酸和精胺(1)。在此，我们证实，于HEK293细胞中异源表达的人重组CaSR不仅仅对Ca2+ o响应(图6)，也对多聚阳离子多聚L-精氨酸(图1A)和精胺(图1B)响应。并且我们第一次提供了证据证实，ECP为CaSR的激动剂(图1C)。这些反应的特异性通过两种方式证实：第一，稳定转染空载体(HEK-0，阴性对照)的HEK293细胞对激动剂无响应，第二，对所有多聚阳离子的响应完全被calcilytic化合物NPS89636的处理消除(图1A-C)。此外，结构不相关的calcilytic化合物NPS2143阻止CaSR被精胺激活(图1D)。总之，这些结果表明：多聚阳离子(包括ECP)能够激活CaSR，从而动员Ca2+ i。这些结果同时也表明：calcilytic能够阻止多聚阳离子对CaSR激活的效应。作为这些实验的阳性对照，稳定表达于HEK293细胞的CaSR通过产生增加的Ca2+ i对5mM Ca2+ o响应，该效应在模拟转染的细胞中缺乏并被NPS89636阻断(图6)。
多聚阳离子、特别是ECP多年来被认为对哮喘中的BHR和呼吸道重建的病理生理学贡献巨大。我们考虑到它们造成此现象的机制取决于ASM和/或支气管上皮细胞中CaSR的功能性表达。
我们在本文中证实：CaSR功能性表达于小鼠和人的气道。在来源于人类志愿者的支气管活组织检查中，CaSR免疫反应性定位在平滑肌层，还表达于气道上皮细胞(图2A)。在针对CaSR和钙调蛋白免疫染色的小鼠小叶外支气管切开图像中，得到了类似的结果(图2B和C)。在从外植的小鼠小叶间支气管迁移的细胞中(图2D)，CaSR免疫反应性也存在(图2E)所示，并与钙调蛋白共定位(未示出)，这表明CaSR蛋白在小鼠ASM细胞中表达。此外，CaSR表达于人初级ASM中(图2F)，因此，CaSR存在于人和小鼠气道中，平滑肌和上皮细胞中均存在。
CaSR的激活主要导致细胞内Ca2+(Ca2+ i)动员，但CaSR介导的下游信号转导事件还能控制细胞的寿命、移动性和分泌性。与哮喘和COPD相关的是涉及PI3K、MAPK、Rho激酶激活和cAMP产生抑制的通路。重要的是，ASM细胞中Ca2+ i动员导致改变哮喘中其异常功能特征：BHR、增殖、迁移和炎症和重建细胞因子的分泌。
值得注意的是，尽管CaSR表达于ASM细胞，我们最初的观察显示，它也表达于呼吸道上皮细胞(图2)。在哮喘中，上皮细胞损伤是病症特殊性的，多胺的存在能直接激活上皮细胞CaSR；因此可能的是，人气道上皮细胞中CaSR的过度激活在哮喘发病机制起到直接作用，尤其是关于气道重建和上皮通透性。
在功能水平上，人ASM细胞表达CaSR，显示为被Ca2+ o、精胺和ECP激活(图3)。事实上，Ca2+ o(图3A)、多聚阳离子精胺(图3B)和ECP(图3C)都能引起人ASM细胞中Ca2+ i增加。CaSR参与这些反应的事实被以下结果证明：i)在Ca2+ o浓度存在的浓度低于CaSR活化阈值(即，0.5mM)的情况下，能检测到人ASM细胞中CaSR被ECP激活，但当Ca2+ o浓度完全饱和CaSR时(即，5mM，图3C)；ii)，该激活无法观察到；ii)高水平Ca2+ o导致的效应并不能阻止其他Ca2+ i动员剂缓激肽激起Ca2+ i的能力，因此提供证据证实Ca2+ i储存是可行的；iii)在人ASM细胞中转染“显性负性”的CaSR阻止被多聚阳离子精胺和ECP诱发的、CaSR介导的Ca2+ i动员(图3D)。总之，这些观察结果强有力地提示：CaSR在人ASM细胞中功能性表达，其对增加浓度的多聚阳离子响应而诱导Ca2+ i释放。
在实施于分离的小鼠小叶内支气管的肌动描记器实验中，精胺增强乙酰胆碱介导的收缩反应(图4A)，显示该多聚阳离子对CaSR的激活导致生理收缩反应的敏感化。重要的是，从平滑肌中靶向性缺失CaSR在离体情况下完全消除了小鼠小叶内支气管中精胺诱导的收缩反应(图4B)。总之，这些观察结果显示，多聚阳离子对CaSR的激活导致支气管收缩，因此可能直接贡献于哮喘症状。
该结论进一步被图7-11中的数据支持。图7中显示，在分离于野生型小鼠的气道平滑肌细胞中，使用CaSR激动剂Ca2+ o能增加Ca2+ i浓度，并且没有在分离于平滑肌靶向性缺失CaSR的小鼠的细胞中观察到该效应。类似地，CaSR激动剂精胺(图8)和Ca2+ o(图9)在野生型小鼠小叶内支气管中增强ACh诱发的收缩(图8A和9A)，但并没有在分离自CaSR敲除的小鼠的支气管中观察到该效应(图8B和9B)。图10显示，CaSR激动剂精胺在野生型小鼠小叶内支气管中直接引发支气管收缩，但在敲除小鼠的小叶内支气管不能引发支气管收缩，表明精胺诱导的支气管收缩起因于CaSR激活。最后，当使用CaSR拮抗剂或calcilytic时，在野生型小鼠中可观察到小叶内支气管松弛(图11)。因此，这些数据支持如下假设：多聚阳离子引起的CaSR激活导致支气管收缩，甚至表明CaSR促成强直性气道紧张，因为使用calcilytics阻断CaSR能引发温和的支气管扩张。
为了直接检验多聚阳离子通过激活气道CaSR诱导BHR的假设，我们通过全身体积描记法在清醒的、不受限制的小鼠中测量支气管收缩。我们的数据显示，雾化多聚L-精氨酸显著增强了支气管收缩剂乙酰甲胆碱急性给药的反应(图5)。为了提供关于CaSR参与介导多聚阳离子诱导的BHR的决定性证据，我们检测了雾化calcilytics给药对多聚L-精氨酸诱导的BHR的效应。非常值得注意的是，我们的结果显示，在用乙酰甲胆碱急性处理过的小鼠中，多聚L-精氨酸诱导的气道反应性增加被NPS89636完全阻止(图5)。
该结论被图12中的数据支持，该图显示，在乙酰甲胆碱处理过的小鼠中，calcilytic NP89636阻止多聚阳离子(多聚L-精氨酸)诱导的支气管BHR。
为了检验CaSR激活在炎性气道疾病中的作用，我们采用了两个体内模型。图12显示使用标准的哮喘、OVA敏感化、OVA处理的小鼠的标准啮齿动物模型获取的数据。利用这个模型，我们证实，NPS89636完全消除乙酰甲胆碱诱导的BHR(最高并包括30mg/ml)。重要的是，NPS89636还减少OVA诱导的向小鼠肺部的炎性细胞浸润(图14)。作为第二个炎性肺病的哺乳类动物模型，我们采用已建立的COPD模型，即，LPS处理的豚鼠。当使用calcilytic NP89636处理豚鼠时，我们在这第二哺乳动物种类中，观察到炎性细胞浸润减少，尤其是淋巴细胞和中性粒细胞。这些数据因此支持以下假设：特征为支气管肺泡灌洗液中细胞的炎性反应能通过CaSR拮抗剂治疗而改善。进一步值得注意的是，在类固醇之外独立作用的药剂能减少哮喘/COPD的炎性是非常有益的。
结论
这些数据证实：1)CaSR表达于人、小鼠和豚鼠(即，哺乳动物)气道(平滑肌和支气管上皮细胞)；2)在哺乳动物体外表达体系和人ASM细胞体外实验中，ECP和其他多聚阳离子通过激活CaSR而诱发[Ca2+]i增加，并且该效应可被calcilytics阻止；3)在野生型小鼠中，精胺和Ca2+ o增强离体小叶内支气管对乙酰胆碱的收缩反应，但在平滑肌中靶向性缺失CaSR的小鼠中没有该现象；4)calcilytic NPS89636在小鼠小叶内细支气管中产生温和的支气管扩张；5)在乙酰甲胆碱急性处理的小鼠中，多聚L-精氨酸体内增加气道高反应性，该效应被雾化calcilytics阻止；6)在小鼠哮喘模型中(OVA敏感化、OVA-处理)，calcilytic NPS89636减少乙酰甲胆碱诱导的BHR和炎性细胞浸润入肺，并且7)在豚鼠COPD模型中(LPS处理)，calcilytic NPS89636也能减少炎性细胞入肺的数量，尤其是淋巴细胞和中性粒细胞。
综合起来，这些观察结果表明，在哮喘患者、COPD患者和患炎性肺病的哺乳动物的气道中，多聚阳离子对CaSR不适当的激活诱发BHR和气道重建，因此CaSR成为炎性肺病(包括哮喘和COPD)治疗的新靶点。
本课题提供使用药物calcilytics的科学依据，calcilytics已经在人类中被鉴定为安全，其可作为备选疗法或与目前的疗法组合，以缓和肺病(如哮喘和/或COPD)的症状。此外，我们的新疗法反映出哮喘患者/COPD的临床状态，其中气道平滑肌对多种药学上的和刺激性的刺激物产生高反应性。使用calcilytics治疗哮喘和COPD不仅作为支气管扩张剂提供了现有药物的备选方案/额外方案，并且还靶向于气道高反应性，改善疾病的稳定性，并从长远看来可能减少入院、气道炎症和重建。
参考文献
1.D.Riccardi,P.J.Kemp,The calcium-sensing receptor beyond extracellular calciumhomeostasis:conception,development,adult physiology,and disease.Annu RevPhysiol 74,271(2012).
2.E.M.Brown,R.J.Macleod,Extracellular calcium sensing and extracellular calciumsignaling.Physiol Rev.81,239(2001).
3.B.A.Finney et al.,Regulation of mouse lung development by the extracellularcalcium-sensing receptor,CaR.J Physiol 586,6007(2008).
4.B.Finney et al.,An exon 5-less splice variant of the extracellular calcium-sensingreceptor rescues absence of the full-length receptor in the developing mouse lung.Exp Lung Res,(Feb 26,2011).
5.K.Mahn et al.,Diminished sarco/endoplasmic reticulum Ca2+ATPase(SERCA)expression contributes to airway remodelling in bronchial asthma.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A 106,10775(2009).
6.S.Ge et al.,GABA regulates synaptic integration of newly generated neurons in theadult brain.Nature 439,589(Feb 2,2006).
7.C.Fang et al.,Resistin-like molecule-beta is a human airway remodelling mediator.Eur Respir J 39,458(Feb,2012).
8.M.U.Alam et al.,Calcification is associated with loss of functional calcium-sensingreceptor in vascular smooth muscle cells.Cardiovasc Res 81,260(Feb 1,2009).
9.W.Chang,C.Tu,T.H.Chen,D.Bikle,D.Shoback,The extracellularcalcium-sensing receptor(CaSR)is a critical modulator of skeletal development.SciSignal 1,ra1(2008).
10.J.J.Lepore et al.,High-efficiency somatic mutagenesis in smooth muscle cells andcardiac myocytes in SM22alpha-Cre transgenic mice.Genesis 41,179(Apr,2005).
11.J.Q.Liu,D.Yang,R.J.Folz,A novel bronchial ring bioassay for the evaluation ofsmall airway smooth muscle function in mice.Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol291,L281(Aug,2006).
12.S.Fernandez-Rodriguez,W.R.Ford,K.J.Broadley,E.J.Kidd,Establishing thephenotype in novel acute and chronic murine models of allergic asthma.IntImmunopharmacol 8,756(May,2008).
13.E.Hamelmann et al.,Noninvasive measurement of airway responsiveness in allergicmice using barometric plethysmography.Am J Respir Crit Care Med 156,766(Sep,1997).
14.S.Fernandez-Rodriguez,K.J.Broadley,W.R.Ford,E.J.Kidd,Increasedmuscarinic receptor activity of airway smooth muscle isolated from a mouse modelof allergic asthma.Pulm Pharmacol Ther 23,300(Aug,2010).
表1.
表2.

Claims (20)

1.钙/阳离子感应受体(CaSR)拮抗剂在治疗炎性肺病中的用途。
2.根据权利要求1的钙/阳离子感应受体(CaSR)拮抗剂在治疗炎性肺病中的用途，其中所述拮抗剂为calcilytic。
3.根据权利要求2的钙/阳离子感应受体(CaSR)拮抗剂在治疗炎性肺病中的用途，其中所述calcilytic的特征在于它能抑制、阻断或降低钙感应受体(CaSR)的活性。
4.根据权利要求2或3的钙/阳离子感应受体(CaSR)拮抗剂在治疗炎性肺病中的用途，其中所述calcilytic是小分子或拮抗型抗体。
5.根据权利要求2-4中任一项的钙/阳离子感应受体(CaSR)拮抗剂在治疗炎性肺病中的用途，其中所述calcilytic选自包含以下的组：NPS89636；NPS2143(也称为SB-262470)；SB-751689(罗卡那瑞)(GSK)；ATF936(诺华公司)；SB-423562和SB-423557(GSK)；NPSP790；NPSP795；NPS R-568；JTT-305；Calhex 231；NPS53574；ATF936和AXT914(诺华公司)。
6.根据权利要求2-4中任一项的钙/阳离子感应受体(CaSR)拮抗剂在治疗炎性肺病中的用途，其中所述calcilytic选自包含以下的组：NPS89636(S)-4'-氰基-3'-3-[2-(4-乙基-2-氟苯基)-1,1-二甲基氨基]-2-羟基-丙氧基-联苯-4-羧酸，NPS2143，3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-茚满-2-基-1,1-二甲基-乙胺基)-丙氧基]-苯基}-丙酸乙酯；3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-茚满-2-基-1,1-二甲基-乙胺基)-丙氧基]-苯基}-丙酸；3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-茚满-2-基-1,1-二甲基-乙胺基)-丙氧基]-苯基}-丙酸异丙酯；3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-茚满-2-基-1,1-二甲基-乙胺基)-丙氧基]-苯基}-丙酸2-乙氧基乙酯；3{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-茚满-2-基-二甲基-乙胺基)-丙氧基]-苯基}-丙酸2-甲基-1-甲基-乙酯；3-(4-氰基-3-{(R)-3-[1,1-二甲基-2-(5,6,7,8-四氢-萘-2-基)-乙胺基]-2-羟基-丙氧基}-苯基)-丙酸；3-(4-氰基-3-{(R)-3-[1,1-二甲基-2-(5,6,7,8-四氢-萘-2-基-乙胺基]-2-羟基-丙氧基}-苯基)-丙酸乙酯；3-(3-氰基-4-{(R)-3-[1,1-二甲基-2-(5,6,7,8-四氢-萘-2-基)-乙胺基]-2-羟基-丙氧基}-苯基)-丙酸；3-(3-氰基-4-{(R)-3-[1,1-二甲基-2-(5,6,7,8-四氢-萘-2-基)-乙胺基]-2-羟基-丙氧基}-苯基)-丙酸乙酯；3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-茚满-5-基-1,1-二甲基-乙胺基)-丙氧基]-苯基}-丙酸；和3-{4-氰基-3-[(R)-2-羟基-3-(2-茚满-5-基-1,1-二甲基-乙胺基)-丙氧基]-苯基}-丙酸乙酯；以及它们的药学上可接受的盐及复合物。
7.根据权利要求1-6中任一项的钙/阳离子感应受体(CaSR)拮抗剂在治疗炎性肺病中的用途，其中所述拮抗剂提供为气雾剂或喷雾。
8.根据权利要求1-6中任一项的钙/阳离子感应受体(CaSR)拮抗剂在治疗炎性肺病中的用途，其中所述拮抗剂提供为口服给药制剂。
9.根据权利要求1-8中任一项的钙/阳离子感应受体(CaSR)拮抗剂在治疗炎性肺病中的用途，其中所述炎性肺病选自包含以下的组：哮喘、支气管炎和慢性阻塞性肺病(COPD)。
10.根据权利要求9的钙/阳离子感应受体(CaSR)拮抗剂在治疗炎性肺病中的用途，其中所述炎性肺病为哮喘或COPD。
11.治疗炎性肺病的方法，包括给予个体根据权利要求1-10中任一项的钙/阳离子感应受体(CaSR)拮抗剂。
12.治疗炎性肺病的组合治疗剂，包含根据权利要求1-10中任一项的钙/阳离子感应受体(CaSR)拮抗剂和至少一种其他治疗剂。
13.根据权利要求12的组合治疗剂，其中所述至少一种其他治疗剂为治疗炎性肺病的试剂。
14.根据权利要求13的组合治疗剂，其中所述至少一种其他治疗剂为抗哮喘和/或抗COPD治疗剂。
15.喷雾器或吸入器，包含至少一种治疗炎性肺病的治疗剂，其中所述治疗剂为根据权利要求1-7中任一项的钙/阳离子感应受体(CaSR)拮抗剂。
16.喷雾器或吸入器，包含根据权利要求12-14中任一项的治疗炎性肺病的组合治疗剂。
17.根据权利要求15或16的喷雾器或吸入器，其中所述炎性肺病选自包括以下的组：哮喘、支气管炎和慢性阻塞性肺病(COPD)。
18.根据权利要求17的喷雾器或吸入器，其中所述炎性肺病为哮喘或COPD。
19.钙/阳离子感应受体(CaSR)拮抗剂在制备用于治疗炎性肺病的药物中的用途。
20.本文中充分描述的根据权利要求1-10和19的用途、根据权利要求11的方法、根据权利要求12-14的组合治疗剂或根据权利要求15-18的喷雾器。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110656088A (zh) * 2018-06-29 2020-01-07 华中科技大学 一种稳定表达人源CaSR基因的细胞模型及其构建方法

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3733938B1 (en) 2018-08-21 2022-09-28 Lg Chem, Ltd. Dispersing apparatus and defoaming apparatus comprising same
EP4192438A1 (en) * 2020-08-04 2023-06-14 Calcilytix Therapeutics, Inc. Formulations of triphenyl calcilytic compounds

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000045816A1 (en) * 1999-02-02 2000-08-10 Smithkline Beecham Corporation Calcilytic compounds
US20040242602A1 (en) * 2003-02-12 2004-12-02 Timur Gungor Novel thiazolidine compounds as calcium sensing receptor modulators
WO2004106296A2 (en) * 2003-05-28 2004-12-09 Bristol-Myers Squibb Company Trisubstituted heteroaromatic compounds as calcium sensing receptor modulators
WO2004106295A3 (en) * 2003-05-28 2005-12-29 Bristol Myers Squibb Co Substituted piperodines and pyrrolidines as calcium sensing receptor modulators and method

Family Cites Families (39)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1466888A1 (en) 1991-08-23 2004-10-13 Nps Pharmaceuticals, Inc. Calcium receptor-active arylalkyl amines
RU2146132C1 (ru) 1993-02-23 2000-03-10 Брихэм энд Уимен З Хоспитал, Инк. Фармацевтическая композиция, активная в отношении рецептора кальция, способ лечения пациента, способ анализа соединения оказывать влияние на активность рецептора неорганического иона, нуклеиновая кислота, кодирующая рецептор, рецептор кальция
US6818660B2 (en) 1996-04-09 2004-11-16 Nps Pharmaceuticals, Inc. Calcilytic compounds
DE69733649T2 (de) 1996-04-09 2006-05-18 NPS Pharmaceuticals, Inc., Salt Lake City Calcylitische verbindungen
EP1258471B1 (en) 1996-05-01 2007-01-24 Nps Pharmaceuticals, Inc. Inorganic ion receptor-active compounds
KR100860655B1 (ko) 1996-07-08 2008-09-26 기린 파마 가부시끼가이샤 칼슘 수용체 활성 화합물
TW483881B (en) 1996-12-03 2002-04-21 Nps Pharma Inc Calcilytic compounds
US7202261B2 (en) 1996-12-03 2007-04-10 Nps Pharmaceuticals, Inc. Calcilytic compounds
UY24949A1 (es) 1997-04-08 2001-04-30 Smithkline Beecham Corp Compuestos calcilíticos
PE20000415A1 (es) 1998-04-08 2000-05-21 Smithkline Beecham Corp Compuestos calciliticos
CO5180628A1 (es) 1999-07-31 2002-07-30 Smithkline Beecham Corp Compuestos calcioliticos
US20020064813A1 (en) 1999-12-01 2002-05-30 Ellis Catherine E. Monkey calcium sensing receptor
US20030018203A1 (en) 2002-07-17 2003-01-23 Largo Maria Amparo Calcilytic compounds
US7176243B2 (en) * 2000-06-02 2007-02-13 The General Hospital Corporation CaR receptor as a mediator of migratory cell chemotaxis and/or chemokinesis
FR2809396B1 (fr) 2000-05-24 2005-10-14 Centre Nat Rech Scient Nouvelles molecules possedant une activite calcimimetique et leur mode de preparation
FR2812875B1 (fr) 2000-08-08 2003-12-12 Centre Nat Rech Scient Nouvelles diamines possedant une activite modulatrice des casr et leur mode de preparation
DE60136187D1 (de) 2000-08-11 2008-11-27 Japan Tobacco Inc Calciumrezeptor-antagonisten
JP2004519428A (ja) 2000-10-25 2004-07-02 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション カルシライティック化合物
AU2002230579A1 (en) 2000-10-25 2002-05-06 Smithkline Beecham Corp Calcilytic compounds
US6864267B2 (en) 2001-07-16 2005-03-08 Smithkline Beecham Corporation Calcilytic compounds
US7176322B2 (en) 2002-05-23 2007-02-13 Amgen Inc. Calcium receptor modulating agents
US6908935B2 (en) 2002-05-23 2005-06-21 Amgen Inc. Calcium receptor modulating agents
CA2494700C (en) 2002-08-26 2011-06-28 Takeda Pharmaceutical Company Limited Calcium receptor modulating compound and use thereof
US20060052345A1 (en) 2002-11-04 2006-03-09 Nps Pharmaceuticals, Inc. Quinazolinone compounds as calcilytics
UY28089A1 (es) 2002-11-26 2004-06-30 Smithkline Beecham Corp Compuestos calciliticos
US20040265238A1 (en) * 2003-06-27 2004-12-30 Imtiaz Chaudry Inhalable formulations for treating pulmonary hypertension and methods of using same
TW200524892A (en) 2003-09-24 2005-08-01 Glaxo Group Ltd Calcilytic compounds
WO2005030746A1 (en) 2003-09-24 2005-04-07 Glaxo Group Limited Calcilytic compounds
WO2005077886A1 (en) 2004-02-06 2005-08-25 Smithkline Beecham Corporation Calcilytic compounds
JP2007523076A (ja) 2004-02-06 2007-08-16 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション カルシウム受容体アンタゴニスト化合物
JP2007536239A (ja) 2004-05-06 2007-12-13 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション カルシウム受容体アンタゴニスト化合物
EP1809611A4 (en) 2004-10-06 2009-11-25 Nps Pharma Inc INVERSE PYRIMIDINONE COMPOUNDS AS CALCILYTICS
WO2006042007A2 (en) 2004-10-06 2006-04-20 Nps Pharmaceuticals, Inc. Chromenone compounds as calcilytics
WO2006066070A2 (en) 2004-12-17 2006-06-22 Nps Pharmaceuticals, Inc. Prodrug constructs of pyrimidinone compounds as calcilytics
DE102005008921A1 (de) * 2005-02-24 2006-08-31 Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co. Kg Neue Arzneimittel zur Behandlung von Atemwegserkrankungen
WO2007044796A2 (en) 2005-10-11 2007-04-19 Nps Pharmaceuticals, Inc. Pyridazinone compounds as calcilytics
AU2006318275A1 (en) 2005-11-22 2007-05-31 Smithkline Beecham Corporation Calcilytic compounds
AU2009223851A1 (en) * 2008-03-03 2009-09-17 Amgen Inc. Methods of treating hyperacidic disorders
CA2740360A1 (en) * 2008-10-14 2010-04-22 Activaero Gmbh Method for treatment of copd and other pulmonary diseases

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000045816A1 (en) * 1999-02-02 2000-08-10 Smithkline Beecham Corporation Calcilytic compounds
US20040242602A1 (en) * 2003-02-12 2004-12-02 Timur Gungor Novel thiazolidine compounds as calcium sensing receptor modulators
WO2004106296A2 (en) * 2003-05-28 2004-12-09 Bristol-Myers Squibb Company Trisubstituted heteroaromatic compounds as calcium sensing receptor modulators
WO2004106295A3 (en) * 2003-05-28 2005-12-29 Bristol Myers Squibb Co Substituted piperodines and pyrrolidines as calcium sensing receptor modulators and method

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110656088A (zh) * 2018-06-29 2020-01-07 华中科技大学 一种稳定表达人源CaSR基因的细胞模型及其构建方法

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