CN104666295B - 土木香内酯在制备抗微小隐孢子虫药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了土木香内酯在制备抗微小隐孢子虫药物中的应用,土木香内酯与可接受的辅料,制成散剂,添加至饲料中,混匀,按日常饲料量喂食小鼠;或将土木香内酯制成土木香内酯水溶性粉剂,溶于水中,按日常饮水量喂食小鼠。通过动物感染实验证实土木香内酯可使微小隐孢子虫感染后的排卵囊数减少75%以上,具有较好的抗微小隐孢子虫作用。
Description
技术领域
本发明涉及一种化合物的新应用,特别涉及土木香内酯在制备抗微小隐孢子虫药物中的应用。
背景技术
微小隐孢子虫( Cryptosporidium parvum) 引起人和动物发生严重水样腹泻的人兽共患寄生性原虫之一。呈世界性分布,由其引起的隐孢子虫病已被列入世界最常见的6种腹泻病之内。 对婴幼儿及免疫缺陷病人有极大的生命威胁。
隐孢子虫病的主要传染源是人或动物排出的含大量卵囊的粪便和呕吐物, 卵囊排出周期可持续几天至几周。卵囊通过生活污水的排放和降水的地表径流,被带入生活水水源,使隐孢子虫成为一种重要的水源性病原体。微小隐孢子虫感染性卵囊对于公共饮用水源所用的氯化物类消毒剂都具备很强的抵抗能力,在最严重的一次由于饮水污染隐孢子虫卵囊而爆发的病例中,40多万人受感染而且死亡100人。在我国江苏、浙江、安徽、福建、内蒙古、云南、四川及山东等省均已证实有该病存在。
尽管隐孢子虫病给任何动物的健康所带来的危害已经达成全球共识, 但目前尚未发现对其完全有效的药物。文献报道大蒜素、巴龙霉素治疗,有一定疗效。
土木香内酯(化学名为:3a,5,6,7,8,8a,9,9a-八氢-5,8a-二甲基-3-亚甲基萘并[2,3-b]呋喃-2(3H)-酮,Helenine),该化合物的分子式是C15H20O2,分子量232.32,CAS登录号:546-43-0,其化学结构如式为。
土木香内酯天然存在于菊科植物木香根中,木香水提液、挥发油和总生物碱对小鼠离体小肠先有轻度兴奋作用,随后紧张性与节律性明显降低。对乙酰胆碱、组胺与氯化钡所致肠肌痉挛有对抗作用。小剂量煎剂对离体小肠的作用无一定规律性,大剂量则呈抑制作用。挥发油亦可抑制离体兔小肠运动,使其节律变慢,收缩不规则。近年来有研究显示其具有抗菌、抗病毒和杀虫等生物活性,越来越受到人们的重视。其挥发油1:3000浓度能抑制链球菌、金黄色与白色葡萄的生长。
目前为止尚未有土木香内酯具有抗微小隐孢子虫作用的报导,通过土木香内脂已知的性质无法推断其是否具有抗微小隐孢子虫的作用。
发明内容
本发明的目的在于提供土木香内酯在制备抗微小隐孢子虫药物的应用。
发明人通过将土木香内酯与可接受的辅料,制成散剂,添加至饲料中,混匀,按日常饲料量喂食小白鼠,土木香内酯的添加量为每100kg饲料中添加3.8g土木香内酯;或将土木香内酯制成土木香内酯水溶性粉剂,溶于水中,按日常饮水量喂食小白鼠,土木香内酯的添加量为每100kg水中溶于1.9g土木香内酯。通过动物感染实验证实添加土木香内酯可使微小隐孢子虫排卵囊量降低75%以上,具有较好的抗隐孢子虫作用。
具体实施方式
下面结合具体的实施例及实验对本说明作进一步的说明,但并不局限如此。
实施例1
土木香内酯散剂的制备:取3.8g 土木香内酯(含量不低于98%)和96.2g淀粉混匀,即可。土木香内酯购自上海纯优生物技术有限公司,货号:P0182。
散剂的用法用量:将上述100g散剂拌入100 kg饲料中,按日常食量喂食。
实施例2
土木香内酯水溶性粉剂的制备:取1.9 g土木香内酯(含量不低于98%)和98.1g葡萄糖混匀,即可。
水溶性粉剂的用法用量:将上述100g粉剂溶于100升水中,按正常饮水量喂食。
下面结合具体的实验说明土木香内酯的抗微小隐孢子虫实验。
实验材料:
对照药物:文献报道的具有抗微小隐孢子虫效果的巴龙霉素(98%,上海抚生生物技术有限公司,批号001010),使用量为5mg/kg体重。
土木香内酯:实施例1的土木香内酯散剂,实施例2的土木香内酯水溶性粉剂。
微小隐孢子虫卵囊:微小隐孢子虫(C.parvum)广东株卵囊,由广东省农业科学院动物卫生研究所保存,使用前在SPF级昆明鼠体内复壮(SPF鼠购于南方医科大学实验动物中心,品种:BALB/c-SPF鼠)。
小鼠:清洁级昆明鼠,6周龄,雄性;由南方医科大学实验动物中心提供,饲养于已消毒的专用动物房内;鼠笼和所用器皿均严格消毒,自由采食和饮用纯净水。试验前观察小鼠有无临床症状及连续2d检查粪便有无隐孢子虫卵囊,备用。
饲料:由南方医科大学实验动物中心提供专用鼠料,不含任何抗隐孢子虫药物。
实验方法:
分组:按试验分组及处理将50只SPF级昆明鼠,随机分成5组,每组10只,并适当调整使每组小鼠总体重大致相等。
处理:除第I(空白对照)组外,其余各组小鼠均经口灌服微小隐孢子虫卵囊l×105个/只;除第I组和第Ⅱ(阳性对照)组外,其余各组小鼠均于感染后立即饲喂或饮用含抗隐孢子虫药物的饲料或水,第Ⅲ组饲喂含巴龙霉素的饲料,第Ⅳ组饲喂实施例1的土木香内酯散剂与饲料制成的土木香内酯拌料,第Ⅴ组饮用实施例2的土木香内酯水溶性粉剂与饮水制成的土木香内酯饮水,各组饮水和饲料的用量均相同。试验小鼠的分组情况见表1。
表1 试验小鼠分组
。
每天观察并记录小鼠的精神状况、粪便情况等;对死亡小鼠称重,剖检。
药效判定方法主要依据感染后卵囊减少率;如下进行:感染后第3天开始每日收集粪便,连续监测15天。每日取粪便淘洗,260目筛过滤,滤液经3000r/min离心10min,弃上清加15mL饱和蔗糖溶液,摇匀,1200/min离心10min;离心后立即小心沾取上层清夜20uL于红细胞计数板上,显微镜(10×40倍)观察卵囊并计数。
实验结果:
临床症状观察:
接种微小隐孢子虫卵囊的对照组第3天,小鼠出现精神沉郁,被毛粗乱,第5天起腹泻症状明显,期间未见小鼠死亡。
分别计算各组的平均每只小鼠排卵囊数及卵囊减少率,结果见表2所示。
表2 各组抗隐孢子虫效果
由表2可知,第Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组的平均每只小鼠排卵囊数均低于第Ⅱ组,第Ⅳ、Ⅴ组的平均每只小鼠排卵囊数明显低于第Ⅲ组,故实验证实土木香内酯可使微小隐孢子虫感染后的卵囊数减75%以上,饮水组效果好于饲料添加组,具有较好的抗微小隐孢子虫作用,且明显优于巴龙霉素。
土木香内酯在体内可形成其类似物,同样具有较好的抗微小隐孢子虫作用。的药用盐(如钾、钙、钠、镁、铝、铁、锌盐)、药用酯(如C2~C4的酯)在体内可以转化为,同样具有较好的抗微小隐孢子虫作用。
Claims (1)
1.土木香内酯在制备抗微小隐孢子虫药物或饲料添加剂中的应用。
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