CN109939138A

CN109939138A - 一种抗鸡球虫的中草药微生态制剂及其应用

Info

Publication number: CN109939138A
Application number: CN201910287808.5A
Authority: CN
Inventors: 金梅林; 雷振宇; 康超; 钟鸣; 王杨波; 杨欢欢; 员红奎; 肖婉君
Original assignee: Wuhan Ke Yuan Biological Development Ltd
Current assignee: Wuhan Ke Yuan Biological Development Ltd
Priority date: 2019-04-11
Filing date: 2019-04-11
Publication date: 2019-06-28
Anticipated expiration: 2039-04-11
Also published as: CN109939138B

Abstract

本发明属于动物免疫领域，公开了一种抗鸡球虫作用的中草药微生态制剂及其应用。所述的制剂包括解淀粉芽孢杆菌、屎肠球菌、常山和苦参。本发明将中草药和益生菌结合使用，达到了互相促进，增效的效果，减少了用药量，能够明显提高鸡体内IFN‑γ和IL‑2的含量，增强鸡体的细胞免疫应答，从而达到明显的抗球虫效果；同时能够改善肠道损伤，对肠道损伤具有一定的修复作用，提高鸡体的增重，适合大规模使用推广。

Description

一种抗鸡球虫的中草药微生态制剂及其应用

技术领域

本发明属于动物免疫领域，特别涉及的是一种抗鸡球虫作用的中草药微生态制剂及其应用。

背景技术

鸡球虫病是一种由顶复门、孢子虫纲、真球虫目、艾美耳属的单细胞原虫引起，寄生于鸡肠道上皮细胞的寄生虫病。鸡球虫分布广泛，可以感染各个品种的鸡只，且15～50日龄的雏鸡发病率和致死率较成年鸡高，是一种重要的禽病。目前世界上所公认的鸡球虫共有7 种，临床上，这7种艾美耳球虫的寄生部位、致病力、卵囊大小等不尽相同。随着现代养鸡生产规模的扩大，养殖密度的增加，球虫病呈现出新的流行趋势，该病几乎一年四季均有发生，并且由雏鸡的多发病逐渐发展到成鸡或种鸡也经常发生此病。

对于球虫病的防治，主要还是使用化学合成的药物，由于抗生素的滥用已经导致球虫的耐药性日趋严重，随着人们对食品安关注，鸡体药物残留问题也开始备受关注。因此，大家都在探寻一种全新有效，更加安全的传统化学药物替代品。抗球虫疫苗虽然能有效控制鸡球虫病的爆发，但活疫苗也会给鸡带来不良反应，影响鸡的性能，另外一种疫苗株并不能对所以地理区域都具有高效性，不能广泛使用。

近年来，基于微生态制剂毒副作用小、无残留而受到越来越多的关注。微生态制剂可防止病原菌在胃肠道定植，调整胃肠道微生态平衡和微环境，有利于改善机体代谢，增强机体对营养物质的消化吸收，从而提高胃肠道系统的抗应激能力，进而刺激免疫系统，提高免疫力从而起到防治疾病、促进健康及提高生产性能。目前国内外广泛应用的益生菌有乳酸杆菌、双歧杆菌、芽孢杆菌、屎肠球菌和酵母菌等，但乳酸杆菌和双歧杆菌的抗逆性差，而芽孢杆菌具有抗逆性强、耐高温高压、易贮藏等独特优点。王政发现，在日粮中添加芽孢杆菌后，明显提高鸡的采食量，显著增加盲肠食糜中乳酸杆菌数量，减少大肠杆菌数量，有助于改善肠道微生物区系，促进丁酸和总挥发性脂肪酸的生成。屎肠球菌是乳酸菌中抗逆性较强的一类，肠道黏附能力好，代谢过程中产生乳酸、细菌素和过氧化氢等物质，可以产生维生素、促生长因子等多种营养物质，参与新陈代谢、促进动物生长，诱导机体产生细胞因子、干扰素、白细胞介素，增强机体非特异性免疫、降低炎症反应，可以达到抗球虫效果。

一直以来，中草药因疗效好、无残留、无副作用及增强机体免疫力等特点被广泛用于治疗各种疾病，近年来，有很多学者发现某些中草药在防治鸡球虫方面也有明显的作用。常山具有抗疟疾、抗癌、催吐、解热、杀虫等功效，现已证实，常山中富含的喹诺酮类生物碱是抗球虫的主要活性成分，张德福发现，溴氢酸常山酮能作用于球虫第一代裂殖体发育成为裂殖子的过程，从而达到抗球虫效果。王婕然发现，复方苦参能够提高感染柔嫩艾美耳球虫病雏鸡抗氧化能力，使雏鸡血清和组织中的CAT、NOS、SOD、GSH-Px活性增强，NO、MDA 含量降低。因此，中草药与微生态制剂配合研制出高效、健康、安全、绿色的抗球虫组合，可以作为一种新兴的产业用于防治鸡球虫病。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗鸡球虫的中草药微生态制剂，所述的制剂包括解淀粉芽孢杆菌、屎肠球菌、常山和苦参。

本发明的另一个目的在于提供一种抗鸡球虫的中草药微生态制剂的应用，该微生态制剂可用于制备成促进鸡生长、提高鸡抗球虫能力或是修复鸡肠道的药物。

为了达到上述目的，本发明采取以下技术措施：

一种抗鸡球虫的中草药微生态制剂，所述的制剂包括解淀粉芽孢杆菌、屎肠球菌、常山和苦参。

以上所述的中草药微生态制剂，优选的，所述的解淀粉芽孢杆菌、屎肠球菌、常山和苦参按照重量比1～2：1～2：1～2：1～2进行混合。

以上所述的中草药微生态制剂，优选的，所述的解淀粉芽孢杆菌、屎肠球菌、常山和苦参按照重量比1：1：1：1进行混合，所述的解淀粉芽孢杆菌和屎肠球菌的有效菌浓度为1×10⁹cfu/g，市售的解淀粉芽孢杆菌和屎肠球菌均可用于本发明。

以上所述的中草药微生态制剂，优选的，所述的解淀粉芽孢杆菌的保藏编号为：CCTCC NO：M2013249；屎肠球菌的保藏编号为：CCTCC NO：M 2014060。

一种抗鸡球虫的中草药微生态制剂的应用，包括利用该制剂制备成抗鸡球虫病的药物；或是制备成鸡肠道修复药物，或是制备成促进鸡生长的药物。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：

1.通过动物试验，本发明中的菌株和中草药能够明显提高鸡体内IFN-γ和IL-2的含量，增强鸡体的细胞免疫应答，从而达到明显的抗球虫效果；

2.通过动物试验，本发明中的菌株和中草药能够明显提高鸡体采食量，从而提高鸡体的增重；

3.通过动物试验，本发明中的菌株和中草药能够改善肠道损伤，对肠道损伤具有一定的修复作用。

4.本发明将中草药和益生菌结合使用，达到了互相促进，增效的效果，减少了用药量，适合大规模使用推广。

附图说明

图1为第一次动物试验IFN-γ含量变化示意图。

图2为第一次动物试验IL-2含量变化示意图。

图3第一次动物试验IgG含量变化示意图。

图4第一次动物试验SIgA含量变化示意图。

图5为鸡肠道不同部分病理切片示意图；

其中：A-C为盲肠部位病理切片观察示意图，A:不感染不用药组B:感染不用药组C:持续用益生菌组；D-F为十二指肠部位病理切片观察示意图，D:不感染不用药组E:感染不用药组F:持续用益生菌组；G-I为空肠部位病理切片观察示意图，G:不感染不用药组H:感染不用药组I:持续用益生菌组。

图6为第二次动物试验IFN-γ含量变化示意图。

图7第二次动物试验IL-2含量变化示意图。

图8第二次动物试验SIgA含量变化示意图。

图9第一次动物试验体重变化示意图。

图10第二次动物试验体重变化示意图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步说明。本发明所述技术方案，如未特别说明，均来源于商业渠道，所述试剂或材料，如未特别说明，均来源于商业渠道。

实施例1：

一种抗鸡球虫的中草药微生态制剂，包括将解淀粉芽孢杆菌、屎肠球菌、常山和苦参按重量比1:1:1:1的比例进行混合；

以上所述解淀粉芽孢杆菌和屎肠球菌的有效浓度均为1×10⁹cfu/g，以下同；

解淀粉芽孢杆菌为：解淀粉芽孢杆菌H6，保藏编号为CCTCC NO：M2013249；

屎肠球菌为：屎肠球菌为S13，保藏编号为CCTCC NO：M 2014060。

以上所述的各组分均为粉剂，以下同。

本实施例制备的成品称为中草药微生态制剂A。

实施例2：

制剂B：包括将解淀粉芽孢杆菌、屎肠球菌和常山按照重量比1:1:1进行混合。

实施例3：

制剂C:包括将解淀粉芽孢杆菌、屎肠球菌按照重量比1:1进行混合。

实施例4：

制剂D:包括将解淀粉芽孢杆菌、屎肠球菌和苦参按照重量比1:1:1进行混合。

实施例5：

制剂E：解淀粉芽孢杆菌粉剂。

实施例6：

制剂F：包括将解淀粉芽孢杆菌、常山和苦参按照重量比1:1:1进行混合。

实施例7：

抗球虫中草药微生态制剂第一次动物试验

1.试验材料

球虫虫株：试验感染的鸡球虫来自华中地区野外分离株。

试验动物：购自荆州市正康家禽孵化场0日龄白羽肉鸡。

2.试验方法

在无球虫的环境中饲养的1日龄白羽肉鸡200只，随机分组，称重并适当调整各组的平均体重使之接近，淘汰体重过重或过轻的鸡只；

给药方式：按照各产品的使用说明进行给药，混饲或混水饲喂；本发明制剂的给药方式为1g/kg拌料饲喂，持续使用20d，感染球虫之后，再持续使用8d。

球虫感染剂量：5×10⁴个孢子化的柔嫩艾美耳球虫，用灭菌枪头经口腔注射孢子化卵囊。空白对照组不做任何处理，再次称重，作为初始体重；

接种后每日观察鸡只的死亡情况、精神状态、饮水欲和粪便性状，并记录；

接种后第8天称重，作为终末体重，计算平均体重增加值。人为处死后，剖检所有试验鸡，收取全部肠道，进行道病变记分；

收集接种后第6、7、8天的粪便，根据血细胞计数板法进行卵囊计数；

抗球虫效果判定：抗球虫指数(ACI)是包括存活率、增重、病变记分、相对卵囊产量等多项参数指标判定球虫抗药性或药物效力的综合药效指标。

ACI＝(相对增重率+存活率)－(病变分值+卵囊值)

A.相对增重率(％)＝感染用药组的品均增重/不感染不用药的平均增重×100％

B.存活率(％)＝试验结束时鸡只数/试验开始时鸡只数×100％

C.卵囊值，按角田清OPG值的方法进行

D.病变分值＝平均盲肠病变积分(0～4)×10

E.相对卵囊产量(ROP)＝(感染用药组卵囊产量/感染不用药组卵囊产量)×100％

敏感性评价标准：抗球虫指数ACI大于或等于180，判为高效药物；ACI为160-179，判为有效药物；ACI为120-160，判为部分有效药物；ACI小于120，判为无效药物。

3.试验分组表

表1第一次动物试验分组及组成成分

1.试验结果

4.1抗球虫指数

试验结果表明，本发明中的抗球虫指数达到181.51，具有良好的抗球虫效果。与感染不给药组相比，试验组1-5组5个试验组对鸡球虫病均有疗效，且试验组1-3组使用益生菌与中草药组合的3个试验组的抗球虫效果明显优于临床中常用的磺胺药和地克珠利组。

表2第一次动物试验抗球虫指数统计表

4.2细胞因子含量变化

试验结果表明，在持续用本发明中的微生态制剂后，在鸡感染鸡球虫后，可以明显提高鸡体内IFN-γ、IL-2、IL-10、SIgA等细胞因子的含量，从而增强鸡体的免疫应答反应。

4.2.1 IFN-γ含量变化(P<0.0001)，每组3个重复(以下同)，图1所示，单位：pg/ml

组别	微生态制剂A	磺胺	地克珠利	感染不用药	不感染不用药
						样品1	75.36	55.47	52.47	39.36	25.04
样品2	70.86	52.16	57.45	37.34	29.74
						样品3	73.89	52.09	60.25	31.75	27.25

4.2.2 IL-2含量变化(P＝0.0004)，图2所示，单位：ng/ml

组别	微生态制剂A	磺胺	地克珠利	感染不用药	不感染不用药
						样品1	110.89	90.75	89.14	85.73	65.49
样品2	102.45	92.85	85.76	75.64	66.79
						样品3	99.41	97.14	76.92	73.15	78.46

4.2.3 IL-10含量变化(P＝0.0069)，图3所示，单位：pg/ml

组别	微生态制剂A	磺胺	地克珠利	感染不用药	不感染不用药
						样品1	40.74	43.54	34.75	31.75	40.91
样品2	42.21	39.06	37.49	35.72	39.74
						样品3	46.14	38.16	38.07	33.58	36.64

4.2.3 SIgA含量变化(P＝0.0049)，图4所示，单位：ug/ml

组别	微生态制剂A	磺胺	地克珠利	感染不用药	不感染不用药
						样品1	4.04	3.69	3.77	3.02	4.72
样品2	4.33	3.77	3.41	3.57	3.95
						样品3	4.97	3.64	3.57	3.44	4.51

4.3病理切片观察

所示，结果表明，图5中A、D、H为持续用益生菌组，B、E、I为感染不用药组，C、 F、G为不感染不用药组，从病理切片中可以明显的看到持续用本发明的益生菌组和不感染不用药组鸡肠道结构正常，肠腺和黏膜结构完整，肠绒毛排列井然有序，未见明显的异常变化，持续用本发明的益生菌组仅见到少量球虫卵囊，而感染不用药组鸡肠道结构严重受损，肠黏膜脱落，肠腔内充满脱落的肠黏膜，随处可见散在的球虫卵囊。

4.3.4肠绒毛高度与隐窝深度比值(十二指肠):

结果如图5中D-F所示，表明，持续用益生菌组V/C值明显高于空白组和感染不用药组，且明显降低了十二指肠隐窝深度，因此本发明的微生态制剂具有良好的肠道修复和发育作用。

表3肠绒毛高度与隐窝深度比值(十二指肠)

实施例8：

抗球虫中草药微生态制剂第二次动物试验

试验材料和试验方法同实施例7。

1.试验分组

表4第二次动物试验分组及组成成分

2.试验结果

2.1抗球虫效指数

试验结果表明，本发明中的抗球虫指数达到173.94，具有良好的抗球虫效果。与感染不给药组相比，试验组1-5组5个试验组对鸡球虫病均有疗效，且试验组组1使用益生菌与中草药组合的抗球虫效果明显优于其它几组益生菌与中草药组合，且优于临床中常用的磺胺药组。

表5第二次动物试验抗球虫指数统计表

2.2血清中细胞因子指标

实验结果表明，在持续用本发明中的微生态制剂后，在鸡感染鸡球虫后，可以明显提高鸡体内IFN-γ、IL-2、SIgA等细胞因子的含量，从而增强鸡体的免疫应答反应。

2.2.1 IFN-γ含量变化(P＝0.0003)，图6所示，单位：pg/ml

组别	微生态制剂A组	磺胺药组	感染不用药组	不感染不用药组
					样品1	121.913	81.9779	54.2958	52.3043
样品2	91.1876	81.2274	31.2218	49.4055
					样品3	104.3829	100.606	39.8332	42.4725

2.2.2 IL-2含量变化(P＝0.0063)，图7所示，单位：ng/ml

组别	微生态制剂A	磺胺药组	感染不用药组	不感染不用药组
					样品1	180.7878	161.2512	150.0258	100.7836
样品2	164.7925	134.7745	136.1456	112.5878
					样品3	136.0098	147.7741	139.2536	98.7836

2.2.3 SIgA含量变化(P＝0.0037)，图8所示，单位：ug/ml

组别	微生态制剂A组	磺胺药组	感染不用药组	不感染不用药组
					样品1	9.7823	7.7896	7.2358	6.9902
样品2	9.0258	8.2536	8.7765	5.1478
					样品3	10.0145	9.0147	8.0932	6.5874

实施例9：

微生态制剂对体重的变化

两次动物试验采用不同组分的微生态制剂A-F，持续在饲料中日常添加，观察体重变化。结果表明，在持续饲喂微生态制剂后，本发明的微生态制剂A能够明显高于空白组的体重。结果如图9-10所示。

Claims

1.一种抗鸡球虫的中草药微生态制剂，所述的制剂包括解淀粉芽孢杆菌、屎肠球菌、常山和苦参。

2.根据权利要求1所述的中草药微生态制剂，所述的解淀粉芽孢杆菌、屎肠球菌、常山和苦参按照重量比1~2：1~2：1~2：1~2进行混合。

3.根据权利要求1所述的中草药微生态制剂，所述的解淀粉芽孢杆菌、屎肠球菌、常山和苦参按照重量比1：1：1：1进行混合，所述的解淀粉芽孢杆菌和屎肠球菌的有效菌浓度为1×10⁹cfu/g。

4.根据权利要求1所述的中草药微生态制剂，所述的解淀粉芽孢杆菌的保藏编号为：CCTCC NO：M2013249；屎肠球菌的保藏编号为：CCTCC NO：M 2014060。

5.权利要求1所述的中草药微生态制剂在制备抗鸡球虫病的药物中的应用。

6.权利要求1所述的中草药微生态制剂在制备成鸡肠道修复药物中的应用。

7.权利要求1所述的中草药微生态制剂在制备成促进鸡生长的药物中的应用。

8.权利要求1所述的中草药微生态制剂在制备成同时抗鸡球虫病、修复鸡肠道、促进鸡生长的药物中的应用。