CN104688726A - 异黄酮类化合物在制备抗微小隐孢子虫药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了异黄酮类化合物及其衍生物在制备抗微小隐孢子虫药物或饲料添加剂中的应用，异黄酮类化合物的结构通式为

Description

异黄酮类化合物在制备抗微小隐孢子虫药物中的应用

技术领域

本发明涉及一类化合物的新应用，特别涉及异黄酮类化合物在制备抗微小隐孢子虫药物中的应用。

背景技术

隐孢子虫(Cryptosporidium)呈世界性分布。感染人和大多数哺乳动物的为微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)。隐孢子虫是一种重要的引起人和动物腹泻的机会性致病原虫。严重感染者，小肠绒毛表面可出现凹陷、萎缩，变短变粗，或融合、移位和脱落；可导致消化吸收障碍和腹泻。

免疫功能正常者感染本虫后，常表自限性腹泻，粪便呈水样，量大，可有腹部痉挛性疼痛，恶心、厌食、发热和全身不适等症状。免疫功能异常的病人，疾病的发作多为渐进性，但腹泻的程度往往更为严重，粪便量可达5-10L。如果患者的免疫缺陷状况得不到纠正，感染便不能够清除。腹泻可长期甚或终生持续下去。继而导致营养吸收障碍，甚至出现肠道外组织器官，如肺脏和胆道系统感染。隐孢子虫是艾滋病人合并肠道感染的常见病原体，感染后常常危及患者的生命。

目前，对于本病的治疗尚无理想的有效药物。文献报道大蒜素、巴龙霉素治疗，有一定疗效。

异黄酮，是植物苯丙氨酸代谢过程中，由肉桂酰辅酶A侧链延长后环化形成以苯色酮环为基础的酚类化合物，其3-苯基衍生物即为异黄酮，属植物次生代谢产物。类黄酮属，是一种芳香族含氧杂环化合物，黄酮的异构体。精制的异黄酮呈片状或针状结晶。一般无色，但随着羟基的增加，可呈黄至深黄色。为广泛分布于高等植物的色素。有些异黄酮是植保素，有些可用于心血管病的治疗。

刺芒柄花素 (化学名为：7-羟基-4’-甲氧基异黄酮，Formononetin)，该化合物的分子式是C₁₆H₁₂O₄，分子量268.26，CAS登录号：207-623-9，其化学结构如式下所示：

刺芒柄花素是从豆科植物红车轴草的花序及带花枝叶，刺芒柄花全草中提取的一种天然化合物。

刺芒柄花素具有抗癌作用，可防治乳腺癌、前列腺癌以及结肠癌。雌激素作用，能增加小鼠等动物子宫的重量，但作用不及同类的异黄酮染料木素(金雀异黄素)，大豆黄素.本品的雌激素作用是很弱的。此外，对 Triton WR-1339引起的雄性白化病大鼠高血脂有降血脂作用，临床用作利尿剂。

目前，未有异黄酮类化合物，特别是刺芒柄花素具有抗微小隐孢子虫作用的报导。

发明内容

本发明的目的在于提供异黄酮类化合物在制备抗微小隐孢子虫药物中的应用。

发明人通过将刺芒柄花素与可接受的辅料，制成散剂，添加至饲料中，混匀，按日常饲料量喂食小白鼠，刺芒柄花素的添加量为每100kg饲料中添加5g刺芒柄花素；或将刺芒柄花素制成刺芒柄花素水溶性粉剂，溶于水中，按日常饮水量喂食小白鼠，刺芒柄花素的添加量为每100kg 水中溶于2.5g刺芒柄花素。通过动物感染实验证实添加刺芒柄花素可使微小隐孢子虫排卵囊量降低70%以上，具有较好的抗隐孢子虫作用。

同时，刺芒柄花素易于制备，提取成本相对较低，易于开发为低成本的抗微小隐孢子虫药物或饲料添加剂。

具体实施方式

异黄酮类化合物及其衍生物在制备抗微小隐孢子虫药物或饲料添加剂中的应用，异黄酮类化合物的结构通式为：

式中，R₁为H、C1～C4的烷烃基，其衍生物为其药学上可接受的酯或醚。

R₁为H，其衍生物为其酯或醚。

异黄酮类化合物的酯或醚为其C1～C4的酯或醚，异黄酮类化合物的酯或醚为其C1或C2的酯或醚。

药物或饲料添加剂的剂型为口服制剂。

下面结合具体的实施例对本说明作进一步的说明，但并不局限如此。

实施例1

刺芒柄花素散剂的制备：取5g 刺芒柄花素（含量不低于99%）和95g淀粉混匀，即可。

散剂的用法用量：将上述100g散剂拌入100 kg饲料中，按日常食量喂食。

实施例2

刺芒柄花素水溶性粉剂的制备： 取2.5 g刺芒柄花素（含量不低于99%）和97.5g葡萄糖混匀，即可。

水溶性粉剂的用法用量：将上述100g粉剂溶于100升水中，按正常饮水量喂食。

下面结合具体的实验说明刺芒柄花素的抗微小隐孢子虫实验。

实验材料：

对照药物：文献报道的具有抗微小隐孢子虫效果的巴龙霉素（98%，上海抚生生物技术有限公司，批号001010），使用量为5mg/kg体重。

刺芒柄花素：实施例1的刺芒柄花素散剂，实施例2的刺芒柄花素水溶性粉剂。

微小隐孢子虫卵囊：微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)广东株卵囊，由广东省农业科学院动物卫生研究所保存，使用前在SPF级昆明鼠体内复壮。

小鼠：SPF级昆明鼠，6周龄，雄性；由南方医科大学实验动物中心提供，饲养于SPF动物舍内；自由采食和饮用纯净水；试验前观察小鼠有无隐孢子虫病临床症状及连续2d检查粪便有无隐孢子虫卵囊，备用。

饲料：由南方医科大学实验动物中心提供。

实验方法：

分组：按试验分组及处理将50只SPF级昆明鼠，随机分成5组，每组10只，并适当调整使每组小鼠总体重大致相等。

处理：除第I (空白对照)组外，其余各组小鼠均经口灌服微小隐孢子虫卵囊l×10⁵个／只；除第I组和第Ⅱ(阳性对照)组外，其余各组小鼠均于感染后立即饲喂或饮用含抗隐孢子虫药物的饲料或水，第Ⅲ组饲喂含巴龙霉素的饲料，第Ⅳ组饲喂实施例1的刺芒柄花素散剂与饲料制成的刺芒柄花素拌料，第Ⅴ组饮用实施例2的刺芒柄花素水溶性粉剂与饮水制成的刺芒柄花素饮水，各组饮水和饲料的用量均相同。试验小鼠的分组情况见表1。 

表1 试验小鼠分组

每天观察并记录小鼠的精神状况、粪便情况等；对死亡小鼠称重，剖检。

药效判定方法主要依据感染后卵囊减少率；如下进行：感染后第3天开始每日收集粪便，连续监测15天。每日取粪便淘洗，260目筛过滤，滤液经3000r/min离心10min，弃上清加15mL饱和蔗糖溶液，摇匀，1200/min离心10min；离心后立即小心沾取上层清夜20uL于红细胞计数板上，显微镜（10×40倍）观察卵囊并计数。

实验结果：

临床症状观察：

接种微小隐孢子虫卵囊的对照组第3天，小鼠出现精神沉郁，被毛粗乱，第4天起腹泻症状明显，期间未见小鼠死亡。

分别计算各组的平均每只小鼠排卵囊数及卵囊减少率，结果见表2所示。

表2 各组抗隐孢子虫效果

由表2可知，第Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组的平均每只小鼠排卵囊数均低于第Ⅱ组，第Ⅳ、Ⅴ组的平均每只小鼠排卵囊数明显低于第Ⅲ组，故实验证实刺芒柄花素可使微小隐孢子虫感染后的卵囊数减少89%以上，饮水组效果好于饲料添加组，具有较好的抗微小隐孢子虫作用，且明显优于巴龙霉素。

通过对刺芒柄花素苯环上的OH进行修饰，使其成酯或醚，优选为C1～C4的酯或醚，更佳为C1或酯或醚，C2的可以提高其保存时的稳定性，同时不影响其在体内的活性。

Claims (5)

1.异黄酮类化合物及其衍生物在制备抗微小隐孢子虫药物或饲料添加剂中的应用，其特征在于：所述异黄酮类化合物的结构通式为：

式中，R₁为H、C1～C4的烷烃基，其衍生物为其药学上可接受的酯或醚。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：R₁为H，其衍生物为其酯或醚。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：异黄酮类化合物的酯或醚为其C1～C4的酯或醚。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：异黄酮类化合物的酯或醚为其C1或C2的酯或醚。

5.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述药物或饲料添加剂的剂型为口服制剂。