CN102416050B - 一种用于治疗大肠杆菌病的兽药制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于治疗大肠杆菌病的兽药制剂及其制备方法，属于兽药领域，是中药白头翁、龙胆和黄连经有效成分提取、浓缩、沉淀、过滤制成的液体制剂；制备方法为：（1）有效成分提取：第一次醇提取龙胆和黄连有效成分；第二次醇提取龙胆和黄连有效成分；第一次水提取白头翁、龙胆和黄连有效成分；第二次水提取白头翁、龙胆和黄连有效成分；（2）浓缩：将提取液浓缩；（3）沉淀；（4）过滤。本发明是纯中药制剂，药残少，不易产生耐药性，无污染，无休药期，使用成本低，无毒，便于畜禽使用，适用于大肠杆菌病的预防和治疗，提取方式上采用水提和醇提相结合的方式，提高了有效成分含量。

Description

一种用于治疗大肠杆菌病的兽药制剂及其制备方法

技术领域

    本发明涉及一种用于治疗大肠杆菌病的兽药制剂及其制备方法，属于兽药领域。

背景技术

兽药白龙散的药品成分为白头翁、黄连和龙胆。现代中药药理学研究表明白头翁鲜汁、煎剂对多种细菌有显著的抑制作用，对各种痢疾杆菌等肠道致病菌均有显著的抑制功效，其抗菌有效成分为原白头翁素和白头翁素。白头翁素的抗菌活性与链霉素有协同作用。黄连具有抗溃疡、抑制胃酸分泌作用，强度与西咪替丁相当， 保护胃粘膜、抗炎镇痛、抑菌等作用，其主要成分小檗碱抗菌谱广与青霉素、链霉素无交叉耐药性。龙胆具有保肝利胆、抗菌消炎、免疫调节等作用，可明显促进炎症细胞的吞噬功能，促进腹腔巨噬细胞的吞噬功能和淋巴细胞的转化。因此兽药白龙散主要用于抗菌、消炎和止泻，对常见的鸡大肠杆菌病，效果明显。但是散剂在实际使用过程中不容易喂食，另一方面，由于鸡的肠道短，有效成分还未溶出，就随散剂排出体外，容易造成药品的浪费，延误畜禽的病情，带来不必要的经济损失。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种用于治疗大肠杆菌病的兽药制剂及其制备方法，属于兽药领域，本发明为纯中药液体制剂，药残少，不易产生耐药性，无污染，无休药期，使用成本低，无毒，便于畜禽使用，适用于大肠杆菌病的预防和治疗；提取方式上采用水提和醇提相结合的方式，提高了有效成分含量。

本发明所采取的技术方案是：一种用于治疗大肠杆菌病的兽药制剂，是中药白头翁、龙胆和黄连经有效成分提取、浓缩、沉淀、过滤制成的液体制剂；

中药白头翁、龙胆和黄连的重量比为20～90：10～70：5～14；

龙胆和黄连以乙醇提取两次后，分离出的药渣与白头翁用纯化水提取两次。

优选的中药白头翁、龙胆和黄连的重量比为6：3：1。

一种用于治疗大肠杆菌病的兽药制剂的制备方法，包括以下步骤：

（1）有效成分提取

第一次提取龙胆和黄连有效成分：将10～70重量份的龙胆和5～14重量份的黄连放入醇提罐中，加入乙醇浸泡2～24小时，乙醇的重量是龙胆和黄连重量之和的2～8倍，乙醇的浓度为60～80%（V/V），浸泡完成后将龙胆和黄连药渣分离出来，得到第一次龙胆和黄连的醇提取液；

第二次提取龙胆和黄连有效成分：对分离出来的龙胆和黄连药渣进行有效成分提取，所用乙醇的浓度和重量及浸泡时间与第一次提取龙胆和黄连有效成分时相同，完成后将龙胆和黄连药渣分离出来，得到第二次龙胆和黄连的醇提取液；

第一次水提取白头翁、龙胆和黄连有效成分：将20～90重量份的白头翁和第二次提取龙胆和黄连有效成分后分离出来的龙胆和黄连药渣混合，加入三种药材重量之和2～8倍的纯化水，浸泡2～24小时，浸泡完成后加热至沸腾并煎煮，从沸腾时开始计时共煎煮1～2小时，煎煮完成后过滤，得到第一次白头翁、龙胆和黄连的水提取液；

第二次水提取白头翁、龙胆和黄连有效成分：对第一次水提取白头翁、龙胆和黄连有效成分后过滤得到的药渣进行有效成分提取，加入纯化水的重量、浸泡时间与第一次水提取白头翁、龙胆和黄连有效成分时相同，煎煮1～2小时，煎煮完成后过滤得到第二次白头翁、龙胆和黄连的水提取液；

（2）浓缩

将第一次龙胆和黄连的醇提取液和第二次龙胆和黄连的醇提取液混合均匀，回收乙醇，得到浓缩的龙胆和黄连的醇提取液，浓缩的龙胆和黄连的醇提取液重量与第一次提取龙胆和黄连有效成分时加入的龙胆和黄连重量之和相同；

将第一次白头翁、龙胆和黄连的水提取液和第二次白头翁、龙胆和黄连的水提取液混合均匀进行减压浓缩，浓缩至相对密度不低于1.02，得到浓缩的白头翁、龙胆和黄连的水提取液；

（3）沉淀

将浓缩的龙胆和黄连的醇提取液和浓缩的白头翁、龙胆和黄连的水提取液混合均匀得到混合提取液，将混合提取液自然沉淀2～24小时；

（4）过滤

将沉淀后的混合提取液过滤。

优选的一种用于治疗大肠杆菌病的兽药制剂的制备方法，包括以下步骤：

（1）有效成分提取

第一次提取龙胆和黄连有效成分：将3重量份的龙胆和1重量份的黄连放入醇提罐中，加入乙醇浸泡12小时，乙醇的重量是龙胆和黄连重量之和的4倍，乙醇的浓度为70%（V/V），浸泡完成后将龙胆和黄连药渣分离出来，得到第一次龙胆和黄连的醇提取液；

第二次提取龙胆和黄连有效成分：对分离出来的龙胆和黄连药渣进行有效成分提取，所用乙醇的浓度和重量及浸泡时间与第一次提取龙胆和黄连有效成分时相同，完成后将龙胆和黄连药渣分离出来，得到第二次龙胆和黄连的醇提取液；

第一次水提取白头翁、龙胆和黄连有效成分：将6重量份的白头翁和第二次提取龙胆和黄连有效成分后分离出来的龙胆和黄连药渣混合，加入三种药材重量之和4倍的纯化水，浸泡12小时，浸泡完成后加热至沸腾并煎煮，从沸腾时开始计时共煎煮1.5小时，煎煮完成后过滤，得到第一次白头翁、龙胆和黄连的水提取液；

第二次水提取白头翁、龙胆和黄连有效成分：对第一次水提取白头翁、龙胆和黄连有效成分后过滤得到的药渣进行有效成分提取，加入纯化水的重量、浸泡时间与第一次水提取白头翁、龙胆和黄连有效成分时相同，煎煮1小时，煎煮完成后过滤得到第二次白头翁、龙胆和黄连的水提取液；

（2）浓缩

将第一次龙胆和黄连的醇提取液和第二次龙胆和黄连的醇提取液混合均匀，回收乙醇，得到浓缩的龙胆和黄连的醇提取液，浓缩的龙胆和黄连的醇提取液重量与第一次提取龙胆和黄连有效成分时加入的龙胆和黄连重量之和相同；

将第一次白头翁、龙胆和黄连的水提取液和第二次白头翁、龙胆和黄连的水提取液混合均匀进行减压浓缩，浓缩至相对密度不低于1.02，得到浓缩的白头翁、龙胆和黄连的水提取液；

（3）沉淀

将浓缩的龙胆和黄连的醇提取液和浓缩的白头翁、龙胆和黄连的水提取液混合均匀得到混合提取液，将混合提取液自然沉淀12小时；

（4）过滤

将沉淀后的混合提取液过滤。

采用上述技术方案所产生的有益效果在于：本发明为中药方剂白龙散的改良制剂，是纯中药制剂，药残少，不易产生耐药性，无污染，无休药期，使用成本低，无毒，适用于大肠杆菌病的预防和治疗，避免了散剂在实际使用过程中不容易喂食而造成的有效成分损失，容易造成药品的浪费，延误畜禽的病情，带来不必要的经济损失。提取方式上采用水提和醇提相结合的方式，黄连和龙胆使用乙醇提取，其主要成分盐酸黄连小檗碱的含量比使用水提提高了8～9倍，白头翁使用纯化水提取，提高了生产效率，降低了生产费用。本发明兽药制剂在唐山、秦皇岛、廊坊等肉鸡生产基地进行了防治肉鸡大肠杆菌病的推广应用，在推广应用期间，各示范区域为养殖户取得了客观的经济效益，具有广阔的市场前景。

附图说明

下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。

图1是本发明实施例1所制备的兽药制剂对肉鸡大肠杆菌的药敏试验的抑菌效果直观图；

图2是本发明是本发明实施例1所制备的兽药制剂对肉鸡大肠杆菌的药敏试验的抑菌效果图。

具体实施方式

实施例1

一种用于治疗大肠杆菌病的兽药制剂，原料中白头翁、龙胆和黄连的重量比为6：3：1。

制备方法包括以下步骤：

（1）有效成分提取

第一次提取龙胆和黄连有效成分：将3重量份的龙胆和1重量份的黄连放入醇提罐中，加入乙醇浸泡12小时，乙醇的重量是龙胆和黄连重量之和的4倍，乙醇的浓度为70%（V/V），浸泡完成后将龙胆和黄连药渣分离出来，得到第一次龙胆和黄连的醇提取液；

第二次提取龙胆和黄连有效成分：对分离出来的龙胆和黄连药渣进行有效成分提取，所用乙醇的浓度和重量及浸泡时间与第一次提取龙胆和黄连有效成分时相同，完成后将龙胆和黄连药渣分离出来，得到第二次龙胆和黄连的醇提取液；

第一次水提取白头翁、龙胆和黄连有效成分：将6重量份的白头翁和第二次提取龙胆和黄连有效成分后分离出来的龙胆和黄连药渣混合，加入三种药材重量之和4倍的纯化水，浸泡12小时，浸泡完成后加热至沸腾并煎煮，从沸腾时开始计时共煎煮1.5小时，煎煮完成后过滤，得到第一次白头翁、龙胆和黄连的水提取液；

第二次水提取白头翁、龙胆和黄连有效成分：对第一次水提取白头翁、龙胆和黄连有效成分后过滤得到的药渣进行有效成分提取，加入纯化水的重量、浸泡时间与第一次水提取白头翁、龙胆和黄连有效成分时相同，煎煮1小时，煎煮完成后过滤得到第二次白头翁、龙胆和黄连的水提取液；

（2）浓缩

将第一次龙胆和黄连的醇提取液和第二次龙胆和黄连的醇提取液混合均匀，回收乙醇，得到浓缩的龙胆和黄连的醇提取液，浓缩的龙胆和黄连的醇提取液重量与第一次提取龙胆和黄连有效成分时加入的龙胆和黄连重量之和相同；

将第一次白头翁、龙胆和黄连的水提取液和第二次白头翁、龙胆和黄连的水提取液混合均匀进行减压浓缩，一效温度控制在85℃、真空压力控制在0.04Mpa；二效温度控制在65℃，真空压力控制在0.08Mpa，浓缩至相对密度不低于1.02，得到浓缩的白头翁、龙胆和黄连的水提取液；

（3）沉淀

将浓缩的龙胆和黄连的醇提取液和浓缩的白头翁、龙胆和黄连的水提取液混合均匀得到混合提取液，将混合提取液自然沉淀12小时；

（4）过滤

将沉淀后的混合提取液过滤；

（5）添加防腐剂

在过滤后得到的滤液中加入防腐剂，搅拌均匀，防腐剂的用量为每100kg滤液需要0.2kg防腐剂；

（6）封装。

1、实施例1制备的兽药制剂对大白鼠的急性毒性试验

1 材料与方法

1.1动物： 大白鼠  Wister系  河北北方学院实验动物中心提供体重180-200g。

1.2 药品：本实施例1所制备的兽药制剂 每1ml药液相当于原生药材1g

1.3 方法：取大白鼠60只，随机分成6组，每组10只，雌雄各半，实验前在恒定条件下饲养一周，健康状况良好。本兽药制剂口服液按不同给药剂量分组r≈1.3，每日一次灌胃内服，连续观察7天。

2 结果

大白鼠内服本兽药制剂后，在7天的观察期间，饮水和采食均正常，不出现任何临床中毒症状和死亡，

剂量（mg/kg）	口服液（ml）	动物数	死亡数	死亡率（%）	存活率（%）
						2105.26	0.4	10	0	0	100%
2736.84	0.52	10	0	0	100%
						3578.95	0.68	10	0	0	100%
4631.57	0.88	10	0	0	100%
						5526.32	1.05	10	0	0	100%
7210.53	1.37	10	0	0	100%

见上表。

 [0016] 3 结论：

在大白鼠口服本制剂剂量达7210.53mg/kg时，仍不出现中毒症状和死亡，按毒理学评价标准，可不必测定半数致死量（LD50），即本制剂对大白鼠经口LD50大于5000mg/kg。根据《急性毒性试验技术规范》结果评定标准认为本制剂属于无毒物质。

2、实施例1制备的兽药制剂对肉鸡大肠杆菌的药敏试验

采用临床发病确诊的大肠杆菌病的病料，以氟苯尼考原粉、硫酸粘菌素原粉、硫酸新霉素原粉和强力霉素原粉为对照药物，开展了药物敏感试验。试验情况如下：

1试验材料

1.1试验药物：

 实施例1制备的兽药制剂

氟苯尼考溶液：用氟苯尼考原粉（浙江润康药业有限公司批号20100906湿品含量97%）制成10%溶液；

硫酸粘菌素溶液：用硫酸粘菌素原粉（浙江普洛康裕生物制药有限公司批号1007052干品含量19000IU/mg）制成10%硫酸粘菌素溶液；

硫酸新霉素溶液：用硫酸新霉素原粉（石家庄华曙制药集团企宁药业有限公司批号10099114湿品含量680IU/mg）制成20%硫酸新霉素溶液；

盐酸强力霉素溶液：用盐酸强力霉素原粉（河北久鹏制药有限公司批号B20100902含量92%）制成10%盐酸强力霉素溶液。

1.2  药敏纸片

1.2.1纸片制作：用定量滤纸打成直径6mm的圆纸片，每瓶按100片分装在西林瓶内高压灭菌后，60℃下烘干。

1.2.2抗菌药物的浓度：实施例1制备的兽药制剂1mL；10%氟苯尼考溶液1ml、10%硫酸粘菌素溶液1ml、20%硫酸新霉素溶液1ml、10%盐酸强力霉素溶液1ml。

药物名称 本制剂  氟苯尼考  硫酸粘菌素 硫酸新霉素 盐酸强力霉素
	药敏片编号 1         2           3          4            5

1.2.3用无菌操作法将配制好浓度的试验药物分别加入装有100片纸片的西林瓶内混均，浸泡1-2h，放在恒温箱内37℃自然干燥备用。 

1.3 试验菌种    采自河南、内蒙、天津临床症状和病理剖检确诊为大肠杆菌病的3肉鸡群，天津病料来自用氟苯尼考治疗效果不明显的鸡群；河南病料来自用过多种抗菌药治疗仍不见好转的鸡群，内蒙病料来自刚发病没用药治疗过的鸡群。分别无菌采集鸡群中10只病死鸡的肝脏以备细菌培养和药敏试验用。

1.4培养基制做  配制普通营养琼脂液装在三角烧瓶中，15磅高温灭菌20min，调pH7.4后铺在90mm培养皿内备用。

2试验方法                      

2.1大肠杆菌培养及药敏试验 无菌工作条件下取一培养皿，加入一定量的生理盐水，无菌采肝脏组织在培养皿中与加入的生理盐水混均，转动培养皿，使混合液盖在培养基上，然后按顺序放入药敏纸片，每个药敏纸片间隔2cm，做好标记，放入37℃恒温箱培养，注意2h左右将培养皿倒置放置继续培养至24h。

2.2试验分组：天津、河南、内蒙分别为A、B、C组，每只鸡病料接种一个平皿，然后依次加实施例1制备的兽药制剂、氟苯尼考、硫酸粘菌素、硫酸新霉素、强力霉素药敏片。

病原地        天津               河南           内蒙
	分组编号 A B C

2.3抑菌效果观察及判定  观察、测量抑菌环的大小，根据每组抑菌圈直径加权平均值确定抑菌效果。抑菌效果判定标准：抑菌环直径大于20mm的判定为高敏，抑菌环直径小于20mm大于15mm的判定为中敏，抑菌环直径小于15mm的判定为低敏和耐药。

3 试验结果

药物敏感试验结果                      单位：mm

药物             1        2       3           4       5

A组抑菌环直径  22.1     10.7     7.3         20.3     4.8

B组抑菌环直径  23.4     14.2     3.9         18.7     2.9  

C组抑菌环直径  22.5     16.8     8.5         14.2     8.0

图1是本发明实施例1所制备的兽药制剂对肉鸡大肠杆菌的药敏试验的抑菌效果直观图；

图2是本发明是本发明实施例1所制备的兽药制剂对肉鸡大肠杆菌的药敏试验的抑菌效果图。

3.1 试验结果分析从药物敏感试验结果表中可以看出，在A组鸡群中，氟苯尼考、硫酸粘菌素和盐酸强力霉素均不敏感。因此，用氟苯尼考治疗效果不明显。B组鸡群用过多种药物，因此，除本制剂外其他药物均不敏感。C组鸡群刚发病未用药，每种药物均敏感，本制剂、氟苯尼考和硫酸新霉素表现出高敏，硫酸粘菌素和盐酸强力霉素中敏。来自不同地域三组鸡群的菌株无论是否用药治疗过，对本制剂均敏感。

4.讨论：

现代中药药理学研究表明白头翁鲜汁、煎剂对多种细菌有显著的抑制作用，对各种痢疾杆菌等肠道致病菌均有显著的抑制功效，其抗菌有效成分为原白头翁素和白头翁素。白头翁素的抗菌活性与链霉素有协同作用。黄连具有抗溃疡、抑制胃酸分泌作用，强度与西咪替丁相当， 保护胃粘膜、抗炎镇痛、抑菌等作用。其主要成分小檗碱抗菌谱广与青霉素、链霉素无交叉耐药性。龙胆具有保肝利胆、抗菌消炎、免疫调节等作用，可明显促进炎症细胞的吞噬功能，促进腹腔巨噬细胞的吞噬功能和淋巴细胞的转化。基于上述原因，以及药敏试验显示结果可以将本发明制剂作为治疗肉鸡大肠病的首选药物。

3、实施例1制备的兽药制剂对人工感染肉鸡大肠杆菌病的临床疗效试验如下：

1 试验材料

1.1试验药物

实施例1所制备的兽药制剂，规格：200ml/瓶。用法及用量：混饮或混饲，鸡（10日龄）1～2ml。

氟苯尼考可溶性粉（20080301），经河北康利动物药业有限公司化验室检验合格。用法及用量：每100g加入100kg水中全天混饮。作为对照品。

1.2 试验动物分组及处理

1日龄肉鸡300只，购自河北工程学院实验牧场。试验前按常规饲养，喂全价配合饲料，不含抗菌药物，自由采食及饮水，同时进行临床观察。饲养至7日龄，再经2～3d的预备期观察后，随机分为6组，每组50只，10日龄开始试验。

1.3 试验菌种

采用河南、天津临床症状和病理剖检确诊为大肠杆菌病的肉鸡群。采用病灶组织在培养基中涂板。

1.4 大肠杆菌培养

配制营养琼脂培养基，121℃高压灭菌20 min，倾倒在平板培养皿内。利用平板划线法将病灶组织中培养的菌株接种至平板内，37℃，培养24 h后，挑取单个大肠杆菌的菌落，转种至液体培养基中，振荡培养12 h。此为菌悬液。

取培养12 h的菌悬液100 μL，加至液体培养基中，37℃恒温箱，震荡，扩增培养。

2 试验方法

2.1人工感染

在10日龄时，除空白对照组外，其他5组每只鸡经口接种0.5ml大肠杆菌。

2.2动物饲养及给药

感染大肠杆菌后，不同剂量本制剂组和对照药物组按试验设计剂量给药，连用5天。试验分组及处理情况见表1。

表1试验分组及处理

组号	组别	数量	处理
				A	本制剂低剂量组	50	感染，0.5mL/只，每日分两次引用
B	本制剂中剂量组	50	感染，1mL/只，每日分两次引用
				C	本制剂高剂量组	50	感染，2mL/只，每日分两次引用
D	药物对照组	50	感染，每1g加入1kg水中全天混饮
				E	感染对照	50	感染，不给药
F	空白对照	50	不感染，不给药

2.3观察与记录

每天观察和记录试验鸡精神、食欲、采食量、饮水量等状况。第4d开始检查粪便，每天记录各组的粪便变化。

3 试验结果

3.1致病试验结果

试验过程感染对照组50只雏鸡中有23只死亡。主要临床症状表现为：精神沉郁，食欲、饮欲下降或废绝，羽毛蓬乱，两翼下垂，头颈缩入，闭眼昏睡，不愿走动，离群呆立，排血粪，严重者卧地不起。

3.2 治疗试验结果

与感染对照组比较各治疗组鸡临床症状均较轻。试验结果见表2。

表2本制剂对肉鸡大肠杆菌的疗效

组数	鸡数	平均重量（g）	成活率（%）	采食量（g）
					A组	50	380.8±2.0	94	49
B组	50	390.4±1.4	96	57
					C组	50	384.5±1.2	96	56
D组	50	346.5±1.1	92	53
					E组	50	79.4±2.2	54	38
F组	50	451.6±1.0	100	55

实施例2

一种用于治疗大肠杆菌病的兽药制剂，原料中白头翁、龙胆和黄连的重量比为90：65：14。

制备方法包括以下步骤：

（1）有效成分提取

第一次提取龙胆和黄连有效成分：将65重量份的龙胆和14重量份的黄连放入醇提罐中，加入乙醇浸泡24小时，乙醇的重量是龙胆和黄连重量之和的2倍，乙醇的浓度为80%（V/V），浸泡完成后将龙胆和黄连药渣分离出来，得到第一次龙胆和黄连的醇提取液；

第二次提取龙胆和黄连有效成分：对分离出来的龙胆和黄连药渣进行有效成分提取，所用乙醇的浓度和重量及浸泡时间与第一次提取龙胆和黄连有效成分时相同，完成后将龙胆和黄连药渣分离出来，得到第二次龙胆和黄连的醇提取液；

第一次水提取白头翁、龙胆和黄连有效成分：将90重量份的白头翁和第二次提取龙胆和黄连有效成分后分离出来的龙胆和黄连药渣混合，加入三种药材重量之和8倍的纯化水，浸泡24小时，浸泡完成后加热至沸腾并煎煮，从沸腾时开始计时共煎煮2小时，煎煮完成后过滤，得到第一次白头翁、龙胆和黄连的水提取液；

第二次水提取白头翁、龙胆和黄连有效成分：对第一次水提取白头翁、龙胆和黄连有效成分后过滤得到的药渣进行有效成分提取，加入纯化水的重量、浸泡时间与第一次水提取白头翁、龙胆和黄连有效成分时相同，煎煮1小时，煎煮完成后过滤得到第二次白头翁、龙胆和黄连的水提取液；

（2）浓缩

将第一次龙胆和黄连的醇提取液和第二次龙胆和黄连的醇提取液混合均匀，回收乙醇，得到浓缩的龙胆和黄连的醇提取液，浓缩的龙胆和黄连的醇提取液重量与第一次提取龙胆和黄连有效成分时加入的龙胆和黄连重量之和相同；

将第一次白头翁、龙胆和黄连的水提取液和第二次白头翁、龙胆和黄连的水提取液混合均匀进行减压浓缩，一效温度控制在85℃、真空压力控制在0.04Mpa；二效温度控制在65℃，真空压力控制在0.08Mpa，浓缩至相对密度不低于1.02，得到浓缩的白头翁、龙胆和黄连的水提取液；

（3）沉淀

将浓缩的龙胆和黄连的醇提取液和浓缩的白头翁、龙胆和黄连的水提取液混合均匀得到混合提取液，将混合提取液自然沉淀24小时；

（4）过滤

将沉淀后的混合提取液过滤；

（5）添加防腐剂

在过滤后得到的滤液中加入防腐剂，搅拌均匀，防腐剂的用量为每100kg滤液需要0.1kg防腐剂；

（6）封装。

实施例3

一种用于治疗大肠杆菌病的兽药制剂，原料中白头翁、龙胆和黄连的重量比为13：4：1。

制备方法包括以下步骤：

（1）有效成分提取

第一次提取龙胆和黄连有效成分：将4重量份的龙胆和1重量份的黄连放入醇提罐中，加入乙醇浸泡2小时，乙醇的重量是龙胆和黄连重量之和的6倍，乙醇的浓度为60%（V/V），浸泡完成后将龙胆和黄连药渣分离出来，得到第一次龙胆和黄连的醇提取液；

第二次提取龙胆和黄连有效成分：对分离出来的龙胆和黄连药渣进行有效成分提取，所用乙醇的浓度和重量及浸泡时间与第一次提取龙胆和黄连有效成分时相同，完成后将龙胆和黄连药渣分离出来，得到第二次龙胆和黄连的醇提取液；

第一次水提取白头翁、龙胆和黄连有效成分：将13重量份的白头翁和第二次提取龙胆和黄连有效成分后分离出来的龙胆和黄连药渣混合，加入三种药材重量之和2倍的纯化水，浸泡2小时，浸泡完成后加热至沸腾并煎煮，从沸腾时开始计时共煎煮2小时，煎煮完成后过滤，得到第一次白头翁、龙胆和黄连的水提取液；

第二次水提取白头翁、龙胆和黄连有效成分：对第一次水提取白头翁、龙胆和黄连有效成分后过滤得到的药渣进行有效成分提取，加入纯化水的重量、浸泡时间与第一次水提取白头翁、龙胆和黄连有效成分时相同，煎煮2小时，煎煮完成后过滤得到第二次白头翁、龙胆和黄连的水提取液；

（2）浓缩

将第一次龙胆和黄连的醇提取液和第二次龙胆和黄连的醇提取液混合均匀，回收乙醇，得到浓缩的龙胆和黄连的醇提取液，浓缩的龙胆和黄连的醇提取液重量与第一次提取龙胆和黄连有效成分时加入的龙胆和黄连重量之和相同；

将第一次白头翁、龙胆和黄连的水提取液和第二次白头翁、龙胆和黄连的水提取液混合均匀进行减压浓缩，一效温度控制在85℃、真空压力控制在0.04Mpa；二效温度控制在65℃，真空压力控制在0.08Mpa，浓缩至相对密度不低于1.02，得到浓缩的白头翁、龙胆和黄连的水提取液；

（3）沉淀

将浓缩的龙胆和黄连的醇提取液和浓缩的白头翁、龙胆和黄连的水提取液混合均匀得到混合提取液，将混合提取液自然沉淀2小时；

（4）过滤

将沉淀后的混合提取液过滤；

（5）添加防腐剂

在过滤后得到的滤液中加入防腐剂，搅拌均匀，防腐剂的用量为每100kg滤液需要0.5kg防腐剂；

（6）封装。

实施例4

一种用于治疗大肠杆菌病的兽药制剂，原料中白头翁、龙胆和黄连的重量比为20：15：6。

制备方法包括以下步骤：

（1）有效成分提取

第一次提取龙胆和黄连有效成分：将15重量份的龙胆和6重量份的黄连放入醇提罐中，加入乙醇浸泡10小时，乙醇的重量是龙胆和黄连重量之和的5倍，乙醇的浓度为70%（V/V），浸泡完成后将龙胆和黄连药渣分离出来，得到第一次龙胆和黄连的醇提取液；

第二次提取龙胆和黄连有效成分：对分离出来的龙胆和黄连药渣进行有效成分提取，所用乙醇的浓度和重量及浸泡时间与第一次提取龙胆和黄连有效成分时相同，完成后将龙胆和黄连药渣分离出来，得到第二次龙胆和黄连的醇提取液；

第一次水提取白头翁、龙胆和黄连有效成分：将20重量份的白头翁和第二次提取龙胆和黄连有效成分后分离出来的龙胆和黄连药渣混合，加入三种药材重量之和4倍的纯化水，浸泡15小时，浸泡完成后加热至沸腾并煎煮，从沸腾时开始计时共煎煮1.5小时，煎煮完成后过滤，得到第一次白头翁、龙胆和黄连的水提取液；

第二次水提取白头翁、龙胆和黄连有效成分：对第一次水提取白头翁、龙胆和黄连有效成分后过滤得到的药渣进行有效成分提取，加入纯化水的重量、浸泡时间与第一次水提取白头翁、龙胆和黄连有效成分时相同，煎煮1小时，煎煮完成后过滤得到第二次白头翁、龙胆和黄连的水提取液；

（2）浓缩

将第一次龙胆和黄连的醇提取液和第二次龙胆和黄连的醇提取液混合均匀，回收乙醇，得到浓缩的龙胆和黄连的醇提取液，浓缩的龙胆和黄连的醇提取液重量与第一次提取龙胆和黄连有效成分时加入的龙胆和黄连重量之和相同；

将第一次白头翁、龙胆和黄连的水提取液和第二次白头翁、龙胆和黄连的水提取液混合均匀进行减压浓缩，一效温度控制在85℃、真空压力控制在0.04Mpa；二效温度控制在65℃，真空压力控制在0.08Mpa，浓缩至相对密度不低于1.02，得到浓缩的白头翁、龙胆和黄连的水提取液；

（3）沉淀

将浓缩的龙胆和黄连的醇提取液和浓缩的白头翁、龙胆和黄连的水提取液混合均匀得到混合提取液，将混合提取液自然沉淀12小时；

（4）过滤

将沉淀后的混合提取液过滤；

（5）添加防腐剂

在过滤后得到的滤液中加入防腐剂，搅拌均匀，防腐剂的用量为每100kg滤液需要0.2kg防腐剂；

（6）封装。

Claims (2)

1.一种用于治疗大肠杆菌病的兽药制剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）有效成分提取

第一次提取龙胆和黄连有效成分：将10～70重量份的龙胆和5～14重量份的黄连放入醇提罐中，加入乙醇浸泡2～24小时，乙醇的重量是龙胆和黄连重量之和的2～8倍，乙醇的浓度为60～80%（V/V），浸泡完成后将龙胆和黄连药渣分离出来，得到第一次龙胆和黄连的醇提取液；

第二次提取龙胆和黄连有效成分：对分离出来的龙胆和黄连药渣进行有效成分提取，所用乙醇的浓度和重量及浸泡时间与第一次提取龙胆和黄连有效成分时相同，完成后将龙胆和黄连药渣分离出来，得到第二次龙胆和黄连的醇提取液；

第一次水提取白头翁、龙胆和黄连有效成分：将20～90重量份的白头翁和第二次提取龙胆和黄连有效成分后分离出来的龙胆和黄连药渣混合，加入2～8倍重量的纯化水，浸泡2～24小时，浸泡完成后加热至沸腾并煎煮，从沸腾时开始计时共煎煮1～2小时，煎煮完成后过滤，得到第一次白头翁、龙胆和黄连的水提取液；

第二次水提取白头翁、龙胆和黄连有效成分：对第一次水提取白头翁、龙胆和黄连有效成分后过滤得到的药渣进行有效成分提取，加入纯化水的重量、浸泡时间与第一次水提取白头翁、龙胆和黄连有效成分时相同，煎煮1～2小时，煎煮完成后过滤得到第二次白头翁、龙胆和黄连的水提取液；

（2）浓缩

将第一次龙胆和黄连的醇提取液和第二次龙胆和黄连的醇提取液混合均匀，回收乙醇，得到浓缩的龙胆和黄连的醇提取液，浓缩的龙胆和黄连的醇提取液重量与第一次提取龙胆和黄连有效成分时加入的龙胆和黄连重量之和相同；

将第一次白头翁、龙胆和黄连的水提取液和第二次白头翁、龙胆和黄连的水提取液混合均匀进行减压浓缩，浓缩至相对密度不低于1.02，得到浓缩的白头翁、龙胆和黄连的水提取液；

（3）沉淀

将浓缩的龙胆和黄连的醇提取液和浓缩的白头翁、龙胆和黄连的水提取液混合均匀得到混合提取液，将混合提取液自然沉淀2～24小时；

（4）过滤

将沉淀后的混合提取液过滤。

2.如权利要求1所述一种用于治疗大肠杆菌病的兽药制剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）有效成分提取

第一次提取龙胆和黄连有效成分：将3重量份的龙胆和1重量份的黄连放入醇提罐中，加入乙醇浸泡12小时，乙醇的重量是龙胆和黄连重量之和的4倍，乙醇的浓度为70%（V/V），浸泡完成后将龙胆和黄连药渣分离出来，得到第一次龙胆和黄连的醇提取液；

第二次提取龙胆和黄连有效成分：对分离出来的龙胆和黄连药渣进行有效成分提取，所用乙醇的浓度和重量及浸泡时间与第一次提取龙胆和黄连有效成分时相同，完成后将龙胆和黄连药渣分离出来，得到第二次龙胆和黄连的醇提取液；

第一次水提取白头翁、龙胆和黄连有效成分：将6重量份的白头翁和第二次提取龙胆和黄连有效成分后分离出来的龙胆和黄连药渣混合，加入4倍重量的纯化水，浸泡12小时，浸泡完成后加热至沸腾并煎煮，从沸腾时开始计时共煎煮1.5小时，煎煮完成后过滤，得到第一次白头翁、龙胆和黄连的水提取液；

第二次水提取白头翁、龙胆和黄连有效成分：对第一次水提取白头翁、龙胆和黄连有效成分后过滤得到的药渣进行有效成分提取，加入纯化水的重量、浸泡时间与第一次水提取白头翁、龙胆和黄连有效成分时相同，煎煮1小时，煎煮完成后过滤得到第二次白头翁、龙胆和黄连的水提取液；

（2）浓缩

将第一次龙胆和黄连的醇提取液和第二次龙胆和黄连的醇提取液混合均匀，回收乙醇，得到浓缩的龙胆和黄连的醇提取液，浓缩的龙胆和黄连的醇提取液重量与第一次提取龙胆和黄连有效成分时加入的龙胆和黄连重量之和相同；

将第一次白头翁、龙胆和黄连的水提取液和第二次白头翁、龙胆和黄连的水提取液混合均匀进行减压浓缩，浓缩至相对密度不低于1.02，得到浓缩的白头翁、龙胆和黄连的水提取液；

（3）沉淀

将浓缩的龙胆和黄连的醇提取液和浓缩的白头翁、龙胆和黄连的水提取液混合均匀得到混合提取液，将混合提取液自然沉淀12小时；

（4）过滤

将沉淀后的混合提取液过滤。

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