CN104664152A - 一种从桑叶中提取多糖与类黄酮的方法及在饲料中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明从桑叶中同时提取多糖、类黄酮的方法所需设备少，反应条件温和，成本低，生产安全可靠，产品纯度高，产率高，较好的保留了桑叶中多糖和类黄酮成分的生理和药理活性，具有较大的应用价值。本发明将从桑叶中提取多糖、类黄酮和山梨糖醇、β-胡萝卜素、焦磷酸二钠等联合使用作为饲料添加剂，可使得猪肉肌纤维直径变细，肌纤维密度变大，肉质更嫩。对饲料中霉菌的抑制作用强，可显著减少饲料霉变，保护饲料中的营养物质不被破坏。

Description

一种从桑叶中提取多糖与类黄酮的方法及在饲料中的应用

技术领域

本发明涉及一种提取多糖与类黄酮的方法及在饲料中的应用，尤其涉及一种从桑叶中提取多糖与类黄酮的方法及在饲料中的应用。

背景技术

现代科学研究表明，桑叶中多酚能够清除人体自由基和提高免疫力，具有抗氧化、抗衰老、抗辐射、抗癌变等医疗保健功能，并已成功地应用于医药、保健品、油脂和食品行业。桑叶中多糖可用于防治心脑血管病、高脂血症、糖尿病、肥胖症和抗衰老。从桑叶中提取类黄酮的方法，据国内外专利文献检索，目前可归纳为三类：即溶剂提取法、树脂吸附法和超临界二氧化碳流体萃取法，上述方法目前都存在着不同程度的缺点：溶剂萃取法的产品存在着有机溶剂的残留；树脂吸附法工艺繁琐，成本也高，难以规模化生产，超临界二氧化碳流体萃取方法目前尚缺乏技术的成熟性和可靠性，有待于进一步的深度研究。

目前市场上为了更快的创造效益，造就了现在家禽畜牧业的质量存在很大的隐患，肉质太腻（如快速饲养的鸡，鸭完全口感不如从前）或者太精（如猪吃了瘦肉精），现在人们越来越重视食品的安全，绿色，安全，成了大众的需求，去农村买饲养的家禽畜牧一来花费时间，二来成本比较高，同时现在农村的家禽畜牧业不怎么发达，达不到目前市场的需求。

CN1620899A的中国专利公开了一种植物多糖、类黄酮提取物肉质风味改良饲料添加剂，是从黄芪、栀子、茶叶等14种中草药植物中提取的多糖、类黄酮用于改善猪肉品质，提高生长速度。但该专利所用中草药植物多达14种，且工艺较复杂，生产成本较高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从桑叶中同时提取多糖、类黄酮的方法，该方法所需设备少，反应条件温和，成本低，生产安全可靠，产品纯度高，产率高。同时将提取的多糖和类黄酮用于饲料添加剂，可起到改善畜禽肉质和风味的作用。

本发明从桑叶中同时提取多糖、类黄酮的方法如下：

（1）取3g干燥桑叶与pH=9的氢氧化钠溶液以1g∶15ml的比例充分混合均匀，65℃在超声波下浸提10分钟，超声浸提功率为150W,提取完成后用400目纱布趁热过滤，分别收集滤液a和滤渣a；

（2）对滤渣a重复步骤（1）的超声波浸提操作，分别收集滤液b和滤渣b，合并滤液a和滤液b得到滤液c；

（3）将滤液c用盐酸调节pH至7.5，然后减压浓缩到15ml，再倒入100ml烧杯中，加入无水乙醇60ml，静置12-24小时，过滤，得到滤液d和滤渣d，将滤渣d在真空干燥箱50℃干燥4小时后得到多糖固体；滤液d旋转蒸发浓缩到15ml，回收乙醇，浓缩液倒入到50ml烧杯中，加盐酸调节pH至4.0，静置24-30小时，浓缩，冷冻干燥后得到类黄酮固体。

干燥桑叶与氢氧化钠溶液混合时，先用10ml氢氧化钠溶液浸湿干燥桑叶，搅拌至糊状，再分2-3次次加入氢氧化钠溶液进行混合，如果一次性加入氢氧化钠溶液会使得桑叶在氢氧化钠溶液中结成块状物质，氢氧化钠溶液不能进入干燥桑叶内部，达不到完全浸湿的效果。

从桑叶中提取的多糖和类黄酮用于饲料添加剂的方法如下：

按重量比为多糖：类黄酮：山梨糖醇：β-胡萝卜素：焦磷酸二钠：三氧化二铝：氯化胆碱=（100-120）：（30-40）：（1-3）：（10-15）：（1-5）：（1-3）：（0.5-2）将多糖、类黄酮、山梨糖醇、β-胡萝卜素、焦磷酸二钠、三氧化二铝、氯化胆碱混合均匀，即得饲料添加剂，每1000kg饲料中使用该饲料添加剂1-2kg。

本发明从桑叶中同时提取多糖、类黄酮的方法中，利用类黄酮化合物易溶于碱性溶液，同时在稀碱下对多糖提取影响不大的特点，较好的保留了桑叶中多糖和类黄酮成分的生理和药理活性。在稀碱条件下可防止叶绿素释放酸性物质不利于多糖的提取，相对于用有机溶剂浸提减少了脂溶性杂质，如叶绿素等。蒸发溶剂使用的是旋转蒸发，在低压甚至真空的状态下，在较低的温度下去除大部分溶剂，得到浓缩液，便于后续处理，溶剂也能够得到重复使用。滤液得到固体产物的方法是真空干燥，能够有效去除有机溶剂。

本发明从桑叶中同时提取多糖、类黄酮的方法所需设备少，反应条件温和，成本低，生产安全可靠，产品纯度高，产率高，较好的保留了桑叶中多糖和类黄酮成分的生理和药理活性，具有较大的应用价值。

本发明将从桑叶中提取多糖、类黄酮和山梨糖醇、β-胡萝卜素、焦磷酸二钠、三氧化二铝、氯化胆碱联合使用作为饲料添加剂，可使得猪肉肌纤维直径变细，肌纤维密度变大，肉质更嫩；且对饲料中霉菌的的抑制作用强，可显著减少饲料霉变，保护饲料中的营养物质不被破坏。

具体实施例

实施例1：一种从桑叶中同时提取多糖、类黄酮的方法如下：

（1）取3g干燥桑叶与pH=9的氢氧化钠溶液以1g∶15ml的比例充分混合均匀，65℃在超声波下浸提10分钟，超声浸提功率为150W,提取完成后用400目纱布趁热过滤，分别收集滤液a和滤渣a；

（2）对滤渣a重复步骤（1）的超声波浸提操作，分别收集滤液b和滤渣b，合并滤液a和滤液b得到滤液c；

（3）将滤液c用盐酸调节pH至7.5，然后减压浓缩到15ml，再倒入100ml烧杯中，加入无水乙醇60ml，静置12-24小时，过滤，得到滤液d和滤渣d，将滤渣d在真空干燥箱50℃干燥4小时后得到多糖固体；滤液d旋转蒸发浓缩到15ml，回收乙醇，浓缩液倒入到50ml烧杯中，加盐酸调节pH至4.0，静置24-30小时，浓缩，冷冻干燥后得到类黄酮固体。

实施例2：从桑叶中提取的多糖和类黄酮用于饲料添加剂的方法如下：按重量比为多糖：类黄酮：山梨糖醇：β-胡萝卜素：焦磷酸二钠：三氧化二铝：氯化胆碱=100：30：1：10：1：1：0.5将多糖、类黄酮、山梨糖醇、β-胡萝卜素、焦磷酸二钠、三氧化二铝、氯化胆碱混合均匀，即得饲料添加剂，每1000kg饲料中使用该饲料添加剂1kg。

实施例3：从桑叶中提取的多糖和类黄酮用于饲料添加剂的方法如下：按重量比为多糖：类黄酮：山梨糖醇：β-胡萝卜素：焦磷酸二钠：三氧化二铝：氯化胆碱=120：40：3：15：5：3：2将多糖、类黄酮、山梨糖醇、β-胡萝卜素、焦磷酸二钠、三氧化二铝、氯化胆碱混合均匀，即得饲料添加剂，每1000kg饲料中使用该饲料添加剂2kg。

实施例4：从桑叶中提取的多糖和类黄酮用于饲料添加剂的方法如下：按重量比为多糖：类黄酮：山梨糖醇：β-胡萝卜素：焦磷酸二钠：三氧化二铝：氯化胆碱=110：35：2：12：3：1.5：1.2将多糖、类黄酮、山梨糖醇、β-胡萝卜素、焦磷酸二钠、三氧化二铝、氯化胆碱混合均匀，即得饲料添加剂，每1000kg饲料中使用该饲料添加剂1.5kg。

实施例5：从桑叶中提取的多糖和类黄酮用于饲料添加剂的方法如下：按重量比为多糖：类黄酮：山梨糖醇：β-胡萝卜素：焦磷酸二钠：三氧化二铝：氯化胆碱=130：25：4：8：7：0.8：2.2将多糖、类黄酮、山梨糖醇、β-胡萝卜素、焦磷酸二钠、三氧化二铝、氯化胆碱混合均匀，即得饲料添加剂，每1000kg饲料中使用该饲料添加剂2.2kg。

对比例1：CN1620899A的中国专利公开了一种植物多糖、类黄酮提取物肉质风味改良饲料添加剂，其配方中各原料百分比例为：黄芪1-5%；金银花1-5%；石斛3-10%；栀子5-20%；红曲5-20%；茶叶15-50%；桑叶15-50%；杜仲15-50%；迷迭香1-5%；党参1-3%；太子参1-5%；炒白术1-5%；茯苓1-5%；玄参1-3%；上述原料经过筛选原料、清洗处理、蒸气分篱、回流提取、水煎煮提取、乙醇提取、醇提物黄酮、甙类(湿)、和沉淀物喷雾干燥、干提取物(多糖、寡糖)、天然植物粉碎、配混即成。

试验例1：食用不同添加剂的生猪的肌纤维直径和密度的比较

肌肉的基本组成单位是肌纤维，肌纤维与肌肉本身嫩度有着相当密切的关系，直径小且密度大的肌纤维是肌肉肉质细嫩的特征。肌纤维直径和密度的测定方法如下：

（1）取样及制片

在屠宰后的热胴体眼肌胸段部位割取约2cm³(长/高/宽为2cm×1cm×1cm)的肉样，肉样放在10%的甲醛溶液中(甲醛:蒸馏水=1m1: 9m1)浸泡、固定后制片；按照脱水、石蜡包埋的顺序处理后，用传统的手摇切片机将包埋的石蜡切出一系列的薄片；切片完成后，用伊红苏木素(HE)对其染色，用明胶进行封片后便能在电镜下检测和度量。

（2）肌纤维直径的测量

将备好的样本放在高倍镜(10×25)下缓慢移动，对已测的石蜡切片随机选取3个视野进行面积统计。每个视野约100根肌纤维，面积记为S，肌纤维直径的计算公式便可表示为S/100。

（3）肌纤维密度的测量

通过步骤（2）算出肌纤维横截面积记为S1,，再算出肉样的横截面积记为S2，肌纤维密度计算公式则为S2/S1。

选用选用健康、胎次相同、出生日龄、体重、公母比例相近的平均体重约40kg的杜长大健康猪288，随机分成6组，每组6个重复,每个重复8头，公母各半，其中包括一个空白对照组和5个实验组。实验组生猪日粮中添加实施例2-5和对比例1制得的添加剂，实施例2-5制得的添加剂的添加量按实施例所述进行添加，对比例1制得的添加剂的添加量为生猪日粮1%，空白对照组不添加饲料添加剂，其余同实验组；生猪自由采食和饮水，按常规进行免疫及驱虫，待生猪体重为100kg左右时，每组随机选取4头试验猪，共计24头进行屠宰，按上述方法对不同实验组猪肉肌纤维直径和密度进行测定，结果见表1。

表1     不同实验组肌纤维直径和密度的比较

从表1可以看出，实施例2-4（各项参数均在发明方案的范围内）对应的实验组猪肉中，肌纤维直径小于其他实验组，肌纤维密度大于其他实验组，其中以实施例4对应的实验组效果最佳，说明食用实施例4制得的饲料添加剂的生猪的肉质最好，嫩度最佳。

试验例2：防霉效果试验

试验饲料为市场上购买的常规饲料，称取6组饲料，每组1000g，其中5个为试验组，分别加入实施例2-5和对比例1制得的添加剂，实施例2-5制得的添加剂的添加量按实施例所述进行添加，对比例1制得的添加量为每1000kg饲料中使用该饲料添加剂2kg；混匀后装袋,置试验箱中, 于温度(30±2)℃、相对湿度75±5%的条件下放置，第20天作第一次外观观察，此后每天观察霉菌的生长情况；剩余1组为空白对照组，空白对照组不添加实施例2-5和对比例1中制得的任一产品，其他同实验组。

存放至50d 后取样，严格按“中华人民共和国国家标准G B /T13092-2006 饲料中霉菌总数的测定”测定各处理组饲料中霉菌总数。抽样前将各处理组饲料混匀，结块饲料需粉碎，过0.45mm孔径筛，充分混匀后按“四分法”取样。实验结果见表2。

表2  各处理组存放至50d后的霉菌数量

从表1可以看出，实施例2-4对应的实验组中，饲料中菌落总数小于其他实验组，其中以实施例4对应的实验组效果最佳，说明食用实施例4制得的饲料添加剂的防霉效果最好。

Claims (3)

1.一种从桑叶中同时提取多糖、类黄酮的方法，其特征在于：步骤如下：

（1）取3g干燥桑叶与pH=9的氢氧化钠溶液以1g∶15ml的比例充分混合均匀，65℃在超声波下浸提10分钟，超声浸提功率为150W,提取完成后用400目纱布趁热过滤，分别收集滤液a和滤渣a；

（2）对滤渣a重复步骤（1）的超声波浸提操作，分别收集滤液b和滤渣b，合并滤液a和滤液b得到滤液c；

（3）将滤液c用盐酸调节pH至7.5，然后减压浓缩到15ml，再倒入100ml烧杯中，加入无水乙醇60ml，静置12-24小时，过滤，得到滤液d和滤渣d，将滤渣d在真空干燥箱50℃干燥4小时后得到多糖固体；滤液d旋转蒸发浓缩到15ml，回收乙醇，浓缩液倒入到50ml烧杯中，加盐酸调节pH至4.0，静置24-30小时，浓缩，冷冻干燥后得到类黄酮固体。

2.利用权利要求1的方法提取的多糖和类黄酮用于饲料添加剂的方法，其特征在于：按重量比为多糖：类黄酮：山梨糖醇：β-胡萝卜素：焦磷酸二钠：三氧化二铝：氯化胆碱=（100-120）：（30-40）：（1-3）：（10-15）：（1-5）：（1-3）：（0.5-2）将多糖、类黄酮、山梨糖醇、β-胡萝卜素、焦磷酸二钠、三氧化二铝、氯化胆碱混合均匀，即得饲料添加剂，每1000kg饲料中使用该饲料添加剂1-2kg。

3.如权利要求2所述的一种多糖和类黄酮用于饲料添加剂的方法，其特征在于：按重量比为多糖：类黄酮：山梨糖醇：β-胡萝卜素：焦磷酸二钠：三氧化二铝：氯化胆碱=110：35：2：12：3：1.5：1.2将多糖、类黄酮、山梨糖醇、β-胡萝卜素、焦磷酸二钠、三氧化二铝、氯化胆碱混合均匀，即得饲料添加剂，每1000kg饲料中使用该饲料添加剂1.5kg。