CN104651433A - 甘露聚糖肽原料药的制备工艺及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种甘露聚糖肽原料药的制备工艺及其应用，涉及药物领域。本发明的技术方案是：甘露聚糖肽原料药的制备工艺及其应用，以a-溶血链球菌为生产菌种，通过发酵、高温灭活、离心过滤、滤液浓缩，以及提纯精制、真空干燥和粉碎这些工艺步骤，制备出甘露聚糖肽原料药。本发明的制备工艺控制简单，提纯精制效率高，产量高，安全可靠，适合工业化生产。

Description

甘露聚糖肽原料药的制备工艺及其应用

技术领域

本发明涉及药物领域，具体涉及甘露聚糖肽原料药的制备工艺及其应用。

背景技术

甘露聚糖肽，曾用名多抗甲素，是由链长有所差异的甘露聚糖肽分子构成的混合物，结构中含有39：1的甘露糖与葡萄糖，蛋白质的含量在4.5%~6.2%之间，游离的氨基酸和小分子糖均不存在于甘露聚糖肽分子中。蛋白质中存在的主要氨基酸成分为天门冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸等。甘露聚糖肽是无定形的粉末，颜色为微黄色或类白色，化学性质稳定，易溶于水而不溶于有机溶剂。

目前，市场上出售的甘露聚糖肽产品是α~溶血性链球菌33#菌株经深层培养，提取精制所获得的，其中，α~溶血性链球菌33#菌株来自于健康人的口腔，化学成分分析为a~甘露聚糖肽。

通常情况下，α~溶血性链球菌的发酵产物中甘露聚糖肽是重均分子量在1~100万的甘露聚糖肽混合物，经研究者发现，通过截流法得到的重均分子量为1~20万的甘露聚糖肽的药理活性比原有重均分子量的甘露聚糖肽高，成分更加清楚且疗效较好。因此，采用截流法制备甘露聚糖肽。其制备方法主要包括发酵、提取、分离及干燥等步骤，例如：CN101186941B公开了一种高纯度甘露聚糖肽的制备方法，包括如下步骤：制备发酵产物，提取及粗品的制备，大分子甘露聚糖肽的分离，大分子甘露聚糖肽的水解。该发明经过超滤、水解步骤，制备的甘露聚糖肽纯度高，可达90~98％。CN1172952C公开了一种甘露聚糖肽组合物及其制备工艺和用途。甘露聚糖肽组合物为α~溶血性链球菌的发酵产物，主要由甘露聚糖肽组成，重均分子量1~20万；其制备方法包括下列步骤：以α~溶血性链球菌为生产菌种进行发酵；从发酵液提取甘露聚糖肽；进一步分离得到重均分子量1~20万，分子量分布系数在4.0以下的甘露聚糖肽。

α~甘露聚糖肽以甘露聚糖、碱性多肽及甘露寡糖的形式产生生理作用。

(1)甘露聚糖的功能

a、甘露聚糖可以吸附病原菌。低聚甘露糖和沙门氏菌一起培养能够出现凝集现象，阻断病原菌的致病过程。寡聚糖与病原菌产生凝集素结合具有特异性。这一结论是相关研究者研究甘露聚糖肽对肉鸡沙门氏菌感染能力的影响时发现的。b、可以为有益菌提供营养。有益菌能够特别好的与甘露寡糖中的α~1，4糖苷键结合，使得有益菌快速大量的繁殖；甘露寡糖中的α~1，4糖苷键不能被有害菌利用，有害菌因此无法生长繁殖而死亡。c、可以调节免疫功能。研究表明，甘露聚糖发挥免疫调节作用是由于其分子中的磷酸成分，磷酸成分在免疫调节功能中可以起到重要作用。肿瘤坏死因子具有抑制肿瘤细胞的作用，白细胞介素具有免疫活性，肿瘤细胞可以被一氧化氮直接杀死，而上述三种因素可以在低聚甘露糖的影响下而被刺激增多。低聚甘露糖中的磷酸成分很高时，血清中的溶菌酶水平也同时有所提高。d、结合霉菌毒素能极大降低动物营养成分，而酯代葡甘露聚糖是一种较好的霉菌毒素结合剂。试验证明，甘露聚糖可以减少霉菌素对人及动物的毒副作用，使霉菌素的免疫抑制作用有所降低。e、在较低pH值的环境下，不利于肠道中的有害菌的生长繁殖。但甘露寡糖通过发酵生成的短链脂肪酸会降低消化道的酸碱值，所以，有害菌不能生长。甘露寡糖产生的短链脂肪酸同时可以增强消化道的蠕动，使营养物质能够充分被消化利用。

(2)碱性多肽的功能

碱性多肽的功能肽生理学作用颇多。肽聚糖是细菌的细胞壁成分，细胞壁中的聚糖链是通过N~乙酰葡胺与N~乙酰胞壁酸连接的。当碱性多肽和肽聚糖发生作用之后，聚糖链的连接键会被切断，被切断后细菌被裂解而死亡。碱性多肽可以使淋巴细胞、脾细胞增殖能力增强，巨噬细胞的吞噬能力增强，从而使机体的免疫作用提高。

基于其优异的生理功能，甘露聚糖肽在治疗恶性肿瘤、皮肤疾病、呼吸道感染及白细胞减少症等临床应用领域也取得了显著的发展和进步，而且临床需求不断扩大，这也为甘露聚糖肽的提取分离工艺提出了更高的要求，这就需要从各方面进行研究，包括方法创新、育种技术和发酵工艺的改进等。

目前，甘露聚糖肽制剂主要有口服液、片剂、小针剂。然而由于甘露聚糖肽的现有剂型中主药含量较小，并且现有注射用甘露聚糖肽在临床使用时容易造成二次污染，易发生输液反应，有时也会发生差错而产生医疗事故，所以存在对大剂量、并且能够避免二次污染的甘露聚糖肽新剂型的需要。专利CN100413510C提供了一种甘露聚糖肽注射剂，它是由甘露聚糖肽为活性成分，加上药学上可接受的注射用附加剂制备而成的注射剂，其中，每1mg注射剂中含有毒素量应小于30EU，同时还提供了甘露聚糖肽注射剂的制备方法。专利CN1429558A提供了一种甘露聚糖肽注射液，其中含有甘露聚糖肽，等渗物质，其余为水，其中，所含甘露聚糖肽的浓度在注射液中为1mg/L~2000mg/L，并且每支或者每瓶中所装所述注射液的体积为50~1000ml，含有的甘露聚糖肽的有效量为1~500mg，同时还提供了甘露聚糖肽注射液的制备方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，针对现有技术的不足，提供一种控制简单，提纯精制效率高的甘露聚糖肽原料药的制备工艺及其产品应用。

为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：甘露聚糖肽原料药的制备工艺，包括以下步骤：

第一步，制备发酵产物：以a-溶血链球菌为生产菌种，经发酵、高温灭活、离心过滤、滤液浓缩，得到含有甘露聚糖肽发酵产物的浓缩液；

第二步，提纯精制：

A、在第一步所得浓缩液中，加入体积量为浓缩液1~3倍的95%的乙醇，充分搅拌，降温，保持温度≤10℃，静置18~22小时进行沉淀，离心，收集沉淀物；

B、加入体积量为沉淀物2~4倍量的纯化水，搅拌溶解，并升温至45~50℃，停止搅拌，静置10~14小时，离心，弃去沉淀物，收集清液；

C、将清液加盐酸溶液调PH值至1.5~1.7，降温，保持温度为3~5℃，静置10~14小时，离心，弃去沉淀物，收集清液；

D、将步骤C所得清液按照步骤A、B、C反复操作数次至中间检测合格为止，得到甘露聚糖肽清液；

E、加入体积量为步骤D所得清液1~3倍的95%的乙醇，充分搅拌，降温，保持温度≤10℃，静置18~22小时进行沉淀，离心，收集沉淀物，即得甘露聚糖肽湿品；

第三步，真空干燥：将第二步所得甘露聚糖肽湿品进行真空干燥，即得甘露聚糖肽干品；

第四步，粉碎：将第三步所得甘露聚糖肽干品加入粉碎机中进行粉碎，即得甘露聚糖肽原料药。

所述第一步的所述高温灭活为发酵结束后，发酵罐夹层通入蒸汽对发酵罐预热、升温至100±5℃，保温10分钟。

所述第一步的所述滤液浓缩是对离心过滤所得滤液通过双效外循环蒸发器进行浓缩，控制温度为80~90℃，表压力为0.02Mpa~0.04Mpa，真空度为-0.02~-0.08Mpa，浓缩至比重为1.12~1.14。

所述第二步的C步骤中，所述盐酸溶液的质量百分含量为20%。

所述第三步的所述真空干燥的温度为65~70℃，真空度为-0.05~-0.08Mpa，干燥时间为2~3小时，控制水分的质量百分含量≤4.8%。

所述第二步的D步骤中，按照步骤A、B、C反复操作两次，得到甘露聚糖肽清液。

所述甘露聚糖肽原料药用于治疗免疫功能低下，辅助治疗反复呼吸道感染、白细胞减少症、再生障碍性贫血及肿瘤。

所述甘露聚糖肽原料药用于制备甘露聚糖肽口服液。

所述甘露聚糖肽口服液包括有效量的所述甘露聚糖肽原料药和药学上可接受的辅助添加成分。

所述甘露聚糖肽口服液，包括重量份的下述原料，甘露聚糖肽原料药1份、氯化钠4~6份、纯化水1000份、碳酸氢钠适量。

所述甘露聚糖肽口服液的制备工艺，包括以下步骤：

（1）配液：

a、量取纯化水置配制罐中，加入上述重量份的甘露聚糖肽原料药和氯化钠，开启搅拌使其完全溶解，将溶液经板框过滤器过滤至贮罐；

b、经配制罐加纯化水至工艺配制量，开启卫生泵使药液在贮罐中循环30分钟；

c、取样检验，合格后经板框过滤器过滤至中转桶，传至灌封间；

d、若PH值不符合工艺要求，用5%（wt%）的碳酸氢钠溶液调节PH值至工艺要求，再开启卫生泵使药液在贮罐循环30分钟，重复步骤c；所述PH值为5.5-7.5；

（2）灌封轧盖：每支装量10.0~10.5ml；

（3）灭菌：控制温度为115℃，时间30分钟；

（4）灯检、包装：灯检合格后进行包装。

优选的，所述步骤d中的PH值为6.0-7.0。

所述碳酸氢钠的含量根据调节所述配液步骤的PH值所消耗的量进行控制，且最大添加量不超过15g/kg甘露聚糖肽原料药。

本发明的有益效果如下：

①本发明甘露聚糖肽原料药的制备工艺，通过发酵产物的制备、提纯精制、真空干燥及粉碎这些工艺步骤，制备出甘露聚糖肽原料药，所得原料药的产量高，重均分子量在40000~90000之间，分子量分布宽度指数为1.35~1.87，比旋度为+70°~+85°，适用于口服制药，而且工艺控制简单、可靠，适合规模化生产。尤其是提纯精制步骤与现有的提纯和精制步骤相比，一是采用盐酸法去除蛋白质，使用质量百分含量为20%的盐酸溶液，可保持提取的多糖有较高的生物活性，同时有效去除蛋白质，二是，醇沉、水溶解及酸除蛋白阶段采用不同的温度控制，通过不同温度及溶剂的协调配合，经过较少的提取次数，就可以实现较高的提纯效率，而且比现有提纯效率提高10.2~15.7%，产品的纯度达到93.8%-99.2%。所得甘露聚糖肽原料药的质量达到国家标准WS1-XG-053-200-2005的规定。

②本发明所得甘露聚糖肽原料药用于配制甘露聚糖肽口服液，配方中添加氯化钠，同时辅以碳酸钠调节PH，使得所得口服液产品的酸度适中，比现有的胶囊剂吸收效果更好，比现有的注射制剂服用更加方便，不用进行特殊护理，受众更广泛。

③本发明制备甘露聚糖肽口服液的方法，工艺控制简单，安全可靠，质量达到国家WS1-XG-053-2000-2005标准的规定；应用于治疗免疫功能低下，辅助治疗反复呼吸道感染、白细胞减少症、再生障碍性贫血及肿瘤，减轻放、化疗对造血系统的不良反应和胃肠道反应，效果明显。

具体实施方式

为了更详细地进一步阐明而不是限制本发明，给出下列实施例。

实施例一

本发明甘露聚糖肽原料药的制备工艺，可按以下步骤来实施：

第一步，制备发酵产物：以a-溶血链球菌为生产菌种，经发酵、高温灭活、离心过滤、滤液浓缩，得到含有甘露聚糖肽发酵产物的浓缩液，具体过程如下：

所述a-溶血链球菌为a-溶血链球菌H₁S-33号菌（Hemolytic Streptococcus）。

A、发酵过程

（1）菌种培养

1.1、血斜面培养：将种子冷冻管取出，在无菌的条件下取菌种接至血斜面培养基上，于生化培养箱（35~37℃）培养22小时；其中，血斜面培养基由厂家直接购进；

1.2、肉汤管培养：将上述血斜面培养物接入肉汤试管内，于生化培养箱（35~37℃）培养20~24小时，无菌检查和形态鉴定合格备用；

1.3、种子小瓶培养：挑选生长旺盛、活力强、形态特征符合要求的菌种，在无菌条件下以3~5%的接种量，将肉汤试管中的菌种接入种子小瓶，于生化培养箱中培养（35~37℃）22~24小时，备用；

1.4、种子大瓶培养：从种子小瓶中挑选合格菌种，在无菌条件下以10%的接种量接入种子大瓶中，放置生化培养箱（35~37℃）培养22~24小时，备用；

（2）发酵

1.1、一级种子液培养：将种子大瓶培养所得菌种在无菌条件下接种至一级种子罐中，罐压保持在0.02~0.04Mpa，罐温保持在37℃（±1℃），培养18~24小时。

1.2、二级种子液培养：将一级种子罐中的种子液在无菌条件下接种至二级种子罐中，罐温保持在37℃（±1℃），罐压为0.02~0.04Mpa，培养时间为18~24小时。

1.3、三级发酵：将二级种子罐中的种子液在无菌条件下接种至三级发酵罐，罐内温度保持在37℃（±1℃），罐压为0.02-0.04Mpa，培养68-72小时，得到发酵液。

B、高温灭菌：发酵结束后，从发酵罐夹层通入蒸汽对发酵罐预热、升温至100±5℃，保温10分钟，实现对发酵液的高温灭活；

C、离心过滤：利用沉降离心机对高温灭活后的发酵液进行离心过滤，得到滤液；

D、滤液浓缩：对离心过滤所得滤液通过双效外循环蒸发器进行浓缩，控制温度为80℃，表压力为0.02Mpa，真空度为-0.02，浓缩至比重为1.12，得到含有甘露聚糖肽发酵产物的浓缩液。

本实施例一的第一步中，各培养基的重量份配比，如表1所示。

表1各培养基的重量份配比

注释：“-”表示培养基中没有相应的组成。

第二步，提纯精制：

A、在第一步所得浓缩液中，加入体积量为浓缩液2倍的95%的乙醇，充分搅拌30分钟，降温，保持温度≤10℃，静置20小时进行沉淀，离心10分钟，收集沉淀物；

B、加入体积量为沉淀物3倍量的纯化水，搅拌溶解，并升温至45℃，停止搅拌，静置12小时，离心10分钟，弃去沉淀物，收集清液；

C、将清液加20%（wt%）的盐酸溶液调PH值至1.5，开启冰盐水，降温，保持温度为3℃，静置12小时，离心10分钟，弃去沉淀物，收集清液；

D、将步骤C所得清液按照步骤A、B、C反复操作两次至中间检测合格为止，得到甘露聚糖肽清液；

E、加入体积量为步骤D所得清液2倍的95%的乙醇，充分搅拌30分钟，降温，保持温度≤10℃，静置20小时进行沉淀，离心10分钟，收集沉淀物，即得甘露聚糖肽湿品；

第三步，真空干燥：将第二步所得甘露聚糖肽湿品进行真空干燥，温度为65℃，真空度为-0.05Mpa，干燥时间为2.5小时，控制水分的质量百分含量≤4.8%，即得甘露聚糖肽干品；

第四步，粉碎：将第三步所得甘露聚糖肽干品加入粉碎机中进行粉碎，过100目筛，即得甘露聚糖肽原料药。

本实施例所描述的甘露聚糖肽原料药的制备工艺，优选的，还包括将甘露聚糖肽原料药进行内、外双包装，得到甘露聚糖肽原料药的成品；然后密闭，置于阴凉处保存。

成品性状：本品为白色或微黄色无定形粉末；无臭无味。本品在水中易溶，在乙醇、氯仿及丙酮中不溶。

经检验，所得甘露聚糖肽原料药的纯度为99.2%，比旋度均值为+85°，重均分子量为48099，分子量分布宽度指数为1.87，异常毒性及细菌内毒素的检测指标符合中国药典2000年版的相关规定。

本实施例制备的甘露聚糖肽原料药属免疫增强药，用于治疗免疫功能低下，辅助治疗反复呼吸道感染、白细胞减少症、再生障碍性贫血及肿瘤。优选的，所制备的甘露聚糖肽原料药用于制备甘露聚糖肽口服液。具体的，所述甘露聚糖肽口服液，包括重量份的以下原料，甘露聚糖肽原料药1份、氯化钠5份、纯化水1000份、碳酸氢钠适量。

所述甘露聚糖肽口服液的各原辅料质量标准按照表2执行。

表2甘露聚糖肽口服液各原辅料的质量标准

品名	规格	质量标准
			甘露聚糖肽	原料药	国标WS1-XG-053-2000-2005
氯化钠	试剂	《中国药典》2010年版
			5%的碳酸氢钠	试剂	《中国药典》2010年版

制备所述甘露聚糖肽口服液的工艺，可按照以下步骤来实施：

（1）配液：

a、量取纯化水置配制罐中，加入上述重量份的甘露聚糖肽原料药和氯化钠，开启搅拌使其完全溶解，将溶液经板框过滤器过滤至贮罐；

b、经配制罐加纯化水至工艺配制量，开启卫生泵使药液在贮罐中循环30分钟；

c、取样检验，合格后经板框过滤器过滤至中转桶，传至灌封间；

d、若PH值不符合工艺要求，用5%（wt%）的碳酸氢钠溶液调节PH值至工艺要求，再开启卫生泵使药液在贮罐循环30分钟，重复步骤c；所述PH值的工艺要求为6.0~7.0；

（2）灌封轧盖：每支装量10.0~10.5ml；

（3）灭菌：控制温度为115℃，时间30分钟，FO值＞8；

（4）灯检、包装：挑出盖不密封、盖歪斜、下沉点、内有玻璃屑等异物的不合格品，灯检合格后进行包装；包装采用管制口服液瓶及氯化丁基胶垫装；

其中，所述碳酸氢钠的含量根据调节所述配液步骤的PH值消耗的量进行控制，且最大量不超过15g/kg甘露聚糖肽原料药。

上述甘露聚糖肽口服液制备工艺所制备的甘露聚糖肽口服液，性状为几乎无色或微黄色，澄明或轻微浑浊的液体；为辅助用药类非处方药药品；适应症：适用于辅助治疗免疫功能低下，反复呼吸道感染、白细胞减少症、再生障碍性贫血及肿瘤和减轻放、化疗对造血系统的不良反应和胃肠道反应。其用法用量为：口服。成人一日三次，一次10ml（1支），4~6周为一疗程。其贮藏条件为：密闭，在阴凉处保存（不超过20℃）。

实施例二

本实施例所描述的甘露聚糖肽原料药的制备工艺，与实施例一基本相同，所不同的是：

第一步，步骤D、滤液浓缩：对离心过滤所得滤液通过双效外循环蒸发器进行浓缩，控制温度为85℃，表压力为0.03Mpa，真空度为-0.05Mpa，浓缩至比重为1.13，得到含有甘露聚糖肽发酵产物的浓缩液。

第二步，提纯精制：

A、在第一步所得浓缩液中，加入体积量为浓缩液1倍的95%的乙醇，充分搅拌30分钟，降温，保持温度≤10℃，静置18小时进行沉淀，离心10分钟，收集沉淀物；

B、加入体积量为沉淀物2倍量的纯化水，搅拌溶解，并升温至48℃，停止搅拌，静置10小时，离心10分钟，弃去沉淀物，收集清液；

C、将清液加20%（wt%）的盐酸溶液调PH值至1.6，开启冰盐水，降温，保持温度为4℃，静置10小时，离心10分钟，弃去沉淀物，收集清液；

D、将步骤C所得清液按照步骤A、B、C反复操作两次至中间检测合格为止，得到甘露聚糖肽清液；

E、加入体积量为步骤D所得清液1倍的95%的乙醇，充分搅拌30分钟，降温，保持温度≤10℃，静置18小时进行沉淀，离心10分钟，收集沉淀物，即得甘露聚糖肽湿品；

第三步，真空干燥：将第二步所得甘露聚糖肽湿品进行真空干燥，温度为68℃，真空度为-0.06Mpa，干燥时间为2小时，控制水分的质量百分含量≤4.8%，即得甘露聚糖肽干品。

本实施例所描述的甘露聚糖肽原料药的制备工艺，优选的，还包括将甘露聚糖肽原料药进行内、外双包装，得到甘露聚糖肽原料药的成品；然后密闭，置于阴凉处保存。

经检测，甘露聚糖肽原料药的纯度为96.5%，比旋度均值为+78°，重均分子量为68045，分子量分布宽度指数为1.35，异常毒性及细胞内毒素检测指标符合中国药典2000年版的相关规定。

所制备的甘露聚糖肽原料药属免疫增强药，用于治疗免疫功能低下，辅助治疗反复呼吸道感染、白细胞减少症、再生障碍性贫血及肿瘤。优选的，可用于制备甘露聚糖肽口服液。具体的，所述甘露聚糖肽口服液，包括重量份的以下原料，甘露聚糖肽原料药1份、氯化钠4份、纯化水1000份、碳酸氢钠适量。其中，所述碳酸氢钠的含量根据调节所述配液步骤的PH值消耗的量进行控制，且最大量不超过15g/kg甘露聚糖肽原料药。

所述甘露聚糖肽口服液的各原辅料质量标准同实施例一按照表2执行。所述甘露聚糖肽口服液的制备工艺及应用同实施例一，所不同的是，配液步骤中控制PH值为5.5~6.5。

实施例三

本实施例所描述的甘露聚糖肽原料药的制备工艺，与实施例一基本相同，所不同的是：

第一步，步骤D、滤液浓缩：对离心过滤所得滤液通过双效外循环蒸发器进行浓缩，控制温度为90℃，表压力为0.04Mpa，真空度为-0.08Mpa，浓缩至比重为1.14，得到含有甘露聚糖肽发酵产物的浓缩液。

第二步，提纯精制：

A、在第一步所得浓缩液中，加入体积量为浓缩液3倍的95%的乙醇，充分搅拌30分钟，降温，保持温度≤10℃，静置22小时进行沉淀，离心10分钟，收集沉淀物；

B、加入体积量为沉淀物4倍量的纯化水，搅拌溶解，并升温至50℃，停止搅拌，静置14小时，离心10分钟，弃去沉淀物，收集清液；

C、将清液加20%（wt%）的盐酸溶液调PH值至1.7，开启冰盐水，降温，保持温度为5℃，静置14小时，离心10分钟，弃去沉淀物，收集清液；

D、将步骤C所得清液按照步骤A、B、C反复操作两次至中间检测合格为止，得到甘露聚糖肽清液；

E、加入体积量为步骤D所得清液3倍的95%的乙醇，充分搅拌30分钟，降温，保持温度≤10℃，静置22小时进行沉淀，离心10分钟，收集沉淀物，即得甘露聚糖肽湿品；

第三步，真空干燥：将第二步所得甘露聚糖肽湿品进行真空干燥，温度为70℃，真空度为-0.08Mpa，干燥时间为3小时，控制水分的质量百分含量≤4.8%，即得甘露聚糖肽干品。

本实施例所描述的甘露聚糖肽原料药的制备工艺，优选的，还包括将甘露聚糖肽原料药进行内、外双包装，得到甘露聚糖肽原料药的成品；然后密闭，置于阴凉处保存。

经检测，甘露聚糖肽原料药的纯度为93.8%，比旋度均值为+70°，重均分子量为85162，分子量分布宽度指数为1.62，异常毒性及细胞内毒素检测指标符合中国药典2000年版的相关规定。

所制备的甘露聚糖肽原料药属免疫增强药，用于治疗免疫功能低下，辅助治疗反复呼吸道感染、白细胞减少症、再生障碍性贫血及肿瘤。优选的，所制备的甘露聚糖肽原料药可用于制备甘露聚糖肽口服液。具体的，所述甘露聚糖肽口服液，包括重量份的以下原料，甘露聚糖肽原料药1份、氯化钠6份、纯化水1000份、碳酸氢钠适量。其中，所述碳酸氢钠的含量根据调节所述配液步骤的PH值消耗的量进行控制，且最大量不超过15g/kg甘露聚糖肽原料药。

所述甘露聚糖肽口服液的各原辅料质量标准同实施例一按照表2执行。所述甘露聚糖肽口服液的制备工艺及应用同实施例一，所不同的是，配液步骤中控制PH值为6.5~7.5。

本发明所制备的甘露聚糖肽原料药的纯度为93.8%~99.2%，重均分子量在40000~90000之间，分子量分布宽度指数为1.35~1.87，比旋度值为+70°~+85°。

综上所述，本发明甘露聚糖肽原料药的制备工艺及其应用所述及的各项权利要求及技术支撑已经明确，凡依据本发明的技术支撑实质所作的任何修改与变化仍属于本发明技术支撑的范围内。

Claims (12)

1.甘露聚糖肽原料药的制备工艺，其特征在于，包括以下步骤：

第一步，制备发酵产物：以a-溶血链球菌为生产菌种，经发酵、高温灭活、离心过滤、滤液浓缩，得到含有甘露聚糖肽发酵产物的浓缩液；

第二步，提纯精制：

A、在第一步所得浓缩液中，加入体积量为浓缩液1~3倍的95%的乙醇，充分搅拌，降温，保持温度≤10℃，静置18~22小时进行沉淀，离心，收集沉淀物；

B、加入体积量为沉淀物2~4倍量的纯化水，搅拌溶解，并升温至45~50℃，停止搅拌，静置10~14小时，离心，弃去沉淀物，收集清液；

C、将清液加盐酸溶液调PH值至1.5~1.7，降温，保持温度为3~5℃，静置10~14小时，离心，弃去沉淀物，收集清液；

D、将步骤C所得清液按照步骤A、B、C反复操作数次至中间检测合格为止，得到甘露聚糖肽清液；

E、加入体积量为步骤D所得清液1~3倍的95%的乙醇，充分搅拌，降温，保持温度≤10℃，静置18~22小时进行沉淀，离心，收集沉淀物，即得甘露聚糖肽湿品；

第三步，真空干燥：将第二步所得甘露聚糖肽湿品进行真空干燥，即得甘露聚糖肽干品；

第四步，粉碎：将第三步所得甘露聚糖肽干品加入粉碎机中进行粉碎，即得甘露聚糖肽原料药。

2.如权利要求1所述的甘露聚糖肽原料药的制备工艺，其特征在于：所述第一步的所述高温灭活为发酵结束后，发酵罐夹层通入蒸汽对发酵罐预热、升温至100±5℃，保温10分钟。

3.如权利要求1所述的甘露聚糖肽原料药的制备工艺，其特征在于：所述第一步的所述滤液浓缩是对离心过滤所得滤液通过双效外循环蒸发器进行浓缩，控制温度为80~90℃，表压力为0.02Mpa~0.04Mpa，真空度为-0.02~-0.08Mpa，浓缩至比重为1.12~1.14。

4.如权利要求1所述的甘露聚糖肽原料药的制备工艺，其特征在于：所述第二步的C步骤中，所述盐酸溶液的质量百分含量为20%。

5.如权利要求1所述的甘露聚糖肽原料药的制备工艺，其特征在于：所述第三步的所述真空干燥的温度为65~70℃，真空度为-0.05~-0.08Mpa，干燥时间为2~3小时，控制水分的质量百分含量≤4.8%。

6.如权利要求1所述的甘露聚糖肽原料药的制备工艺，其特征在于：所述第二步的D步骤中，按照步骤A、B、C反复操作两次，得到甘露聚糖肽清液。

7.如权利要求1~6任一项所述甘露聚糖肽原料药的制备工艺，其特征在于：所述甘露聚糖肽原料药用于治疗免疫功能低下，辅助治疗反复呼吸道感染、白细胞减少症、再生障碍性贫血及肿瘤。

8.如权利要求1~6任一项所述甘露聚糖肽原料药的制备工艺，其特征在于：所述甘露聚糖肽原料药用于制备甘露聚糖肽口服液。

9.一种使用权利要求1~6任一项所述甘露聚糖肽原料药制备权利要求8所述甘露聚糖肽口服液的工艺，其特征在于：所述甘露聚糖肽口服液，包括重量份的下述原料，甘露聚糖肽原料药1份、氯化钠4~6份、纯化水1000份、碳酸氢钠适量。

10.如权利要求9所述甘露聚糖肽口服液的制备工艺，其特征在于：包括以下步骤：

第一步：配液：

量取纯化水置配制罐中，加入上述重量份的甘露聚糖肽原料药和氯化钠，开启搅拌使其完全溶解，将溶液经板框过滤器过滤至贮罐；

经配制罐加纯化水至工艺配制量，开启卫生泵使药液在贮罐中循环30分钟；

取样检验，合格后经板框过滤器过滤至中转桶，传至灌封间；

若PH值不符合工艺要求，用5%（wt%）的碳酸氢钠溶液调节PH值至工艺要求，再开启卫生泵使药液在贮罐循环30分钟，重复步骤c；所述PH值的工艺要求为5.5~7.5；

第二步：灌封轧盖：每支装量10.0~10.5ml；

第三步：灭菌：控制温度为115℃，时间30分钟；

第四步：灯检、包装：灯检合格后进行包装。

11.如权利要求10所述甘露聚糖肽口服液的制备工艺，其特征在于：所述步骤d中的PH值为6.0-7.0。

12.如权利要求9所述甘露聚糖肽口服液的制备工艺，其特征在于：所述碳酸氢钠的含量根据调节权利要求10所述配液步骤的PH值所消耗的量进行控制，且最大添加量不超过15g/kg甘露聚糖肽原料药。